JPS591416A - 坑ウイルス剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、抗腫瘍ないし坑ウィルス剤に関するものであ
る。

若干のアルキルザンセート類（キサントゲン酸アルキル
類）は、すでに公知である。従来、これらは、浮遊助剤
、殺菌剤、除草剤および加硫促進剤として使用されてき
たくウルマンス、エンツイクロベディー、デア、オルガ
ニツシエン、ヘミ−１第３版、第Ｘ■巻第７１８〜７２
８頁）。

本発明の目的は、満足すべき薬理学的特性を有するザン
セート類（キサントゲン酸塩およびキサントゲン酸エス
テル）を提供することにある。

予想に反して、ある種のザンセート類が、有益な抗菌性
、抗ウイルス性および細胞生長に影響する活性を示すこ
とが見出された。

本発明の課題は、一般式Ｉ Ｒ’−０−Ｃ（１） ＼ −Ｒ２ （ただし、式中Ｒ１はアダマンチル、ノルボルニル、ト
リシクロデシル、炭素数３〜２０の直鎖または分岐鎖ア
ルキル、炭素数３〜２０のシクロアルキル、フルフリル
、ピリジルまたはキヌクリジニル（ｑｕｉｎｕｃｌｉｄ
ｉｎｙｌ　）であり（こコニ前記炭素数３〜２０の直鎖
または分岐鎖アルキルはヒドロキシ、炭素数１〜４のア
ルコキシまたはハロゲン原子で置換することができ、ま
た前記炭素数３〜２０のシクロアルキルは同様にヒドロ
キシ、炭素数１〜４のアルコキシまたは炭素数１〜４の
アルキルまたはハロゲン原子で１ｍすることができる。

）、またＲ２は一価または多価金属原子、炭素数１〜６
の直鎖または分岐鎖アルキル（これはヒドロキシ、炭素
数１〜４のアルコキシ、アミノ、炭素数１〜４のアルキ
ルアミノまたは（Ｃ＋〜Ｃ４＝アルキル）月アンモニウ
ム基で置換してもよい。

）またはハロゲン原子であり、あるいは２．３−ジヒド
ロキシプロピルまたはω−ヒドロキシ（Ｃ１〜Ｃ４アル
コキシ）メチル基を表わす。〕を有するザンセート化合
物類（ｘａｎｔｈａｔｅｓ　）である。

Ｒ１が炭素数３〜２０の直鎖または分岐鎖アルキルの場
合には、それは、例えばプロピル、ブチル、ペンデル、
ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウン
デシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、または
ペンタデシル基であり、それは直憤、単または多分岐形
であり、好ましくはｎ−ヘキシル、ｎ−デシル、ｎ−ド
デシルおよびｎ−テトラデシル基である。シクロアルキ
ル基は、好ましくはシクロペンチル、シクロヘキシル、
シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シク
ロデシル、シクロウンデシル、シクロドデシル、シクロ
トリデシル、シフロチ１〜ラデシルおよびシクロペンタ
デシル基である。最も好ましくは、シクロヘキシルおよ
びシクロドデシル基である。ジおよびトリ環状基も同様
に含まれる。

前記ハロゲン原子としては、フッ素、塩素、臭素および
ヨウ素がある。塩素または臭素がハロゲン置換として好
ましく使用される。

Ｒ２が金属原子の場合には、−価金属、例えばす１〜リ
ウムまたはカリウムが好ましい。

本発明による化合物類は、一般式Ｒ１−０−Ｍｅ　　（
ただし、式中、Ｒ１は前記定義のとおりであり、またＭ
ｅはアルカリ金属である。）を有するアルコラードと二
硫化炭素とを反応させるか、あるいは一般式Ｒ’　−０
ｆ−１（ただし、式中、Ｒ１は前記定義のとおりである
。）を有するアルコールと二硫化炭素とを強アルカリの
存在下に反応させることにより製造される。その結果、
一般式■を有する化合物類（ただし、Ｒ２はアルカリ金
属原子であ仝。）を有する化合物類を生成する。一般式
■（ただし、Ｒ２は他の上記定義の一つを表わす。）を
有する化合物類を製造するには、一般式Ｉのアルカリザ
ンセートは活性溶媒中でＲ２基を導入するために適当な
アルキル化剤と反応される。

本発明による医薬は、通常固体または液体担体中で一般
式■を有する前記化合物類の少な（とも１種を含んでい
る。本発明による化合物類は、公知の活物質と併用する
ことができる。本発明による化合物類は、抗菌作用、特
に抗ウィルス作用を特徴とするものである。抗ウィルス
作用範囲は、たとえば庖疹ウィルス、インフルエンザウ
ィルスおよび腫瘍ウィルスを含むものである。さらに、
本発明による化合物類は、腫瘍［ｌ胞の成長に影響を及
ぼす。

種々のウィルス菌株についての斑点減数試験によりイン
ヴイトロ研究は、１〜１００μＣＪ／’ｒｎ（ｔの範囲
の物質濃度で成長の抑制を示した。本発明による物質の
毒性は比較的低い。特に、この物質は、皮膚および庖疹
性感染に対して効果的な予防薬として使用される。病気
の間に成人に対して投与される１日の投与量は、１日当
り約５〜１００アルカリ金ｆｆ１ｇの活物質である。

本発明による化合物類が非経口的、皮下的、静脈的、筋
肉内的および腹腔内的経路で投与される場合には、担体
は水または植物油、動物油または合成油等の油のごとき
無菌液体である。通常、注射溶液用にはグルコース溶液
が使用される。一般に、注射溶液の液体担体は０．５〜
２．５重量％の活物質を含有している。本発明による化
合物類は、また経口的経路でも首尾よく投与でき、また
鼻および咽喉部では蒸気状またはスプレー状でこれらを
用いて肺炎の治療にも好適である。最も好適な軽口的投
与形態は、タブレット、カプセル、粉末、溶液、懸濁液
またはエリキシルである。これらの投与形態では活物質
成分の含量は、組成物の全品に対して少なくとも２重置
％である。

以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。

実施例１ ナトリウムシクロドデシルザンセート（ｓｏｄｉｕｍｃ
ｙｃｌｏｄｏｄｅｃｙｌ　　ｘａｎｔｈａｔｅ＞１００
ｇ　（０，５４モル）のシクロドデカノールを１００℃
に加熱し、２．５（］　　（００，１１モルのナトリウ
ムを添加し、その間混合物の湿度を２２０℃で１時間維
持した。生成物を磁製皿に注入し、冷Ｗ後粉砕し、この
粉末をエーテル（４００ｍｌ）中に懸濁させ、ついで９
Ｇ　　（０，１２モル）の二硫化炭素を滴下した。２０
０　ｍ（ｔの水を添加したのち、水相を分離し、２０ｇ
のＮａ　Ｃ１を添加して、沈澱を濾過し、アルコール（
２０ｍｊりで２回再結晶化した。

収　ｍ　　　１７ｏ（理論値の５６％）融　　点　　　
　２１８〜２１９℃　（分解）元素分析　　　　　。

一■」」Ｌ−−スＪ Ｃ５５，３２５４，４２ Ｈ８，１６８，０８ Ｓ　　　　２２．６９　　　２１．９０同一方法でナト
リウムの代りにカリウムを用いて相当するカリウム塩を
製造した。

実施例２ ナトリウムベンジルザンセート（ｓｏｄｉｕｍ　　ｂｅ
ｎｚｙｌｘａｎｔｈａｔｅ） ４．１　　（０，２モル）のナトリウムを窒素雰囲気下
に１０８ｏ　　（１モル）のベンジルアルコールに添加
した。混合物を、１６０℃で２時間加熱し、ついで磁製
皿に注入して冷却した。半固体生成物をエーテル（４０
０ｍｌ＞中に懸濁させ、１５．２（１（０，２モル）の
二硫化炭素を滴下し、モの混合物を還流下に１時間加熱
した。反応溶液を冷却し、沈澱を濾過し、かつエーテル
で洗浄した。

収　吊　　１６ｇ　（理論値の３６％）融　　点　　　
〉　１８０℃　（分解）元素分析 削算値　　　−え糺Ｅ− Ｃ４２，８６４３，０５（Ｃ，Ｈ，Ｎａ０８ａＸＨ２０
） １１　　　　　　　　　４．０２　　　　　　　　　４
．３１８　　２８．５７　　２６．７８ 同一方法でツートリウムの代りにカリウムを用いて相当
するカリウム塩を製造した。

実施例３ ナトリウムシクロへキシルザンセート（ｓｏｄｉｕｍｃ
ｙｃｌｏｈｅｘｙ　ｘａｎｔｈａｔｅ）３．６ｏ　　（
０，１６モル）のナトリウムを、窒素雰囲気下に１００
ｍｆｆ１　（１モル）のシクロヘキサールに添加し、ナ
トリウムの完全反応が起こるまで還流下に加熱した。そ
の反応溶液を、磁製皿に注入し、冷却後粉砕した。粉末
とエーテル（７Ｉ００＋ｎｎ）中に懸濁し、１５分間加
熱し還流した。

冷却後、１２．Ｂａ　　（０，１７モル）の二硫化炭素
を滴下した。２００ｎＡの水を添加しこのち、水相を分
離し、４０９のＮａＣλを添加した。沈澱を濾過し、エ
ーテルで洗浄し、乾燥した。

収　量　　２５０　〈理論値の７５％）融　　点　　　
＞２００℃　（分解） 元素分析 −１」九−−丸［ Ｃ４２，４２４２，２１ ８５，５５５，５２ Ｓ　　　３２．３２　　３１．８７ 同一方法でナトリウムの代りにカリウムを用（１て相当
するカリウム塩を製造した。また、同一方法でｎ−ヘキ
サールから出発して、相当するナトリウムおよびカリウ
ムｎ−へキシルザンセ−１へを製造し、かつこれが有効
な抗ウィルス剤であることを見出した。

実施例４ シクロヘキシルメチルナンセート（ｃｙｃｌｏｈｅｘｙ
ｌｍｅｔｂｙｌ　ｘａｎｔｈａｔｅ） ３（Ｊ　　（０，０１５モル）のナトリウムシフ［１ヘ
キシルザンセートを５０ｍ１の乾燥メタノール中に溶解
させ、１０．７ａ　　（０，０７５モル）の沃化メチル
とともに１時間加熱速流した。冷却後、反応溶液をロー
タリー蒸発器を用いて蒸発させ、エーテル／水（５０１
５０）中に溶解させ、エーテル層を分離し、かつ硫酸ナ
トリウムで乾燥し、活性炭／漂白土で精製し、ロータリ
ー蒸発器により蒸発さゼた。

収　量　　２Ｎ　　（理論値の７０％）元素分析 二【」１−−１１１− Ｃ５０，５２５０，４７ ト１　　　　　　　　　７．３６　　　　　　　　　７
．２８実施例５ カリウムアダマンヂルザン廿−ト（ｐｏｔａｓｓｔｕｍ
ａｄａｍａｎｔｙｌ　ｘａｎｔｈａｔｅ）１５．２ｇ　
（０，１モル）のアダマンタノールを乾燥テトラヒドロ
フラン中に溶解させ、その溶液中に窒素を導入し、かつ
カリウム（０，０５モル）を添加した。その溶液を還流
下に１０時間加熱した。冷却後、！ｒ成酸物２００７７
ｔ（ｔのニーデルに懸濁させ、１５分間加熱還流した３
、８ｇの二硫化炭素を添加し、その溶液を還流下に再び
４５分間加熱した。冷却後、２００ｍｊ！の水を添加し
た。水相を分離し、２５ｇのＮａ　Ｃ（ｔを添加し、沈
澱を濾過した。

収　量　　２（１＜理論値の８％） ａａ　　　点　　　＞３ｏｏ℃　（分り元素分析 ３−　　二１１組− Ｃ４９，６０４９，８２ ）−１５，６３５，５６ Ｓ　　　２４．０５　　２３．５０ 同一方法でカリウムの代りにナトリウムを用（＼て相当
するナトリウム塩を’ＩＪ　３ｔｉした。

実施例６ カリウム２−エンド−ビシクロ（２，２，１１’　）−
へプチルザンセ−ｔ−（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ　２−　ｅ
ｎｄｏ　−ｂｉｃＶＣＩＯ（２，２，１’、’　）　−
ｈｅｐｔｙｌ　Ｘａｎｔｈａｔｅ　）３４０（１（約３
モル）のエントノボルネオールを窒素雰囲気下に溶融（
１６０℃）し、全量力く１９．５５０　　（０，５モル
）の外皮のな０力１ノウムと少しずつ反応させた。金属
の溶解が完結するまで温度は１６０℃に保持した。つづ
いて、過剰のノボルネオールを留去し、無色の残渣を高
い減圧度で短時間に乾燥させ、５００ｉｊ！の無水テト
ラヒドロフランに溶解させた。冷却して、１５゜雇１無
水エーテル中に溶解した３１ｍｊ！（０，５モル）の二
硫化炭素を、このアルコラードに滴下した。反応混合物
を４０’Ｃで１時間乾燥した。青黄色沈澱として反応中
にすでに分離したザンセートを１１の乾燥エーテルを添
加することにより完全に沈澱させた。沈澱を吸引濾過し
、吸引濾過器上でエーテルで完全に洗浄した。このザン
セートを濃縮したアルコール溶液から結晶化させ、こま
かい青黄色組状物を生成させた。

収　１　　９５ｇ　＜理論値の８３％）融　　点　　　
　２５６〜２５８℃　（分解）元素分析 一肚」Ｌ値−実測値 Ｃ４２，４４４２，４０ １（４，９０４，９２ Ｓ　　　２８．３２　　２７．９０ 同一方法でカリウムの代りにナトリウムを用いて相当す
るナトリウム塩を製造した。

実施例７ カリウム８（９）−１−リシクロ（５，２，１゜０２−
６）デシルザンセート（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ　８　（９
）−ｔｙｃｙｃｌｏ　　（５，２，１，０２）　ｄｅｃ
ｙｌ　ｘａｎｔｈａｔｅ） ４５７（１（約３モル）のトリシクロ（５，２゜１．０
２　　）デカノール−８（９）（ＴＣＤアルコールＡ、
ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフトより販売されてい
る異性体混合物）を、保護ガス（窒素ガス）雰囲気下に
、全量で１９．５５ｇ（０，５モル）の表皮のないカリ
ウムと１５０〜１６０℃で攪拌しながら少しずつ反応さ
せた。混合物の温度は、金属の完全反応が起こるまでこ
のレベルに保った。つづいて、過剰のアルコールを減圧
下に留去し、このアルコールを高い減圧度で乾燥し、５
００ｍ１の無水テトラヒドロフラン中に溶解した。冷却
して、１５０　ｍ　Ａの無水エーテルに溶解し−た３１
ｍ１　（０，５モル）の二硫化炭素をこの反応溶液に徐
々に添加した。この反応混合物を４０℃で１時間攪拌し
、１℃の乾燥エーテルを加えてザンセートを沈澱させ、
吸引濾過し、吸引濾過器上でエーテルで完全に洗浄した
。エタノールで再結晶化したのち、青黄色の結晶が得ら
れた。

収　量　　１０４ｇ　（理論値の７８％）融　　点　　
　２６０℃　（分解） 元素分析 計算値　　　−火」」荀− Ｃ４，９，５８４９，６０ ト１　　　　　　　　　５．６７　　　　　　　　　５
．．６２Ｓ　　　２４．０７　　２４．１９ 同一方法でカリウムの代りにナトリウムを用いて相当す
るナトリウム塩を製造した。

本発明による化合物類は、価値ある薬理学的特性により
特徴づけられ、したがって、ヒトおよび獣用医療に首尾
よく適用できる。

抗ウイルス特性（ｖｉｒｕｓｔａｔｉｃ　ｐｒｏｐｅｒ
ｔｉｅｓ　）は、抑制輪（斑点抑制試験）におけるウィ
ルス抑制のインヴイトロ試験および斑点減数法により立
証された。以下のウィルス株が使用された。

インフルエンザＡ２ 種痘ウィルス ヘルペスウィルス Ａｖ４０タンプの腫瘍ウィルス この斑点抑制試験において、インフルエンザおよび種痘
ウィルス（ヒナ線維芽細胞）、パラインフルエンザ（モ
ンキー腎上皮細胞）およびヘルペスウィルス（ヒト羊膜
細胞）の組織培養は、しっかりと充填されているが個別
に斑点を形成するような方法で感染さ「た。ついで、試
験物質を１％溶液として適用し、抑制輪の直径を測定し
た。結果を次表に示す。

仁＃藪群丹 ２、〜　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８
藝　−ｏ＋＋＋− 甑　　　ト　　　　、 種々のウィルス株上の試験物質の作用も、インヴイトロ
斑点減数試験により測定した。試験物質を適用したのち
、各ウィルスによる感染および培養を行ない、ウィルス
により生じた斑点の数を測定した。対照例と比較して斑
点の数は少なく、試験でこの物質はより有効であった。

試験結果を次表に示す。

（以下余白） 第１表および第２表は、本発明による化合物類の優れた
抗ウィルス作用を示している。

治療法、すなわらウィルスのコントロール杼口的、局所
的または非経口的経路で目的に応じて有効な抗ウィルス
邑の前記一般式Ｉの選ばれたザンセートで、経口的投与
で投与単位当り１０〜１００ｍ（Ｉが、また非軽口的投
与では投与単位当り０．０５〜５蛮９が好ましい量であ
るザンセートを、ウィルス性の感染を受けた患者、宿主
または胎位に投与する段階とよりなる機能不全を受けて
いる宿主の抗ウイルス性治療は、その最も広い概念で本
発明の治療方法の実施態様を構成する。

一般に、ザンセート類の投与は、標準のアミノアダマン
タン塩酸塩抗ウィルス剤の投与とほぼ同じであり、多く
の場合、ザンセート化合物類の増大した抗ウィルス活性
のために、著しく少なくなる。

投与形態 本発明によれば、抗ウィルスまたはその他の用途のため
の単位投与形態は、いかなる適当なおよび／または従来
のタイプのもの、でもよい。軽口投与には、単位投与形
態は、通常は、ザンセートがエステルであろうと塩であ
ろうと、活性成分的１０〜１００ｍｆｌ、好ましくは約
５０ｍｇを含有している。滅菌溶液中の非経口投与には
、単位投与量は通常０．０５〜５荒ｇ１好ましくは約２
．５７７１ｇの活性成分を含有している。既述のように
、選ばれた化合物は、医薬的に許容できる担体とともに
、好ましくはタブレットの形で投与される。

当該技術分野の通常のプラクテイスによれば、活性なザ
ンセート化合物は、一般に固体または液体物質であって
もよい非毒性の医薬的希釈剤または担体と併用できる。

無刺激の担体がある用途には好ましい。この組成物は、
タブレット、粉末、カプセル、溶液、エマルジョンまた
は懸濁液の形態または経口投与に特に有用な他の投与形
態を採ることができる。液状または半液状希釈剤は、水
のようなＩｌｌであってもよい。使用される液状希釈剤
の基本的制限は、適合性および趣好性である。

この組成物は、米スターチ、コーンスターチ、ポテトス
ターチ、ラクトース、υツカロース、タルク、ステアリ
ン酸、ステアリン酸マグネシウム、カルボキシメトルセ
ルロースのような固体希釈剤および／またはタブレット
用アジュバント類、アカシアゴム、トラガカントゴム、
チクル等のゴム、寒天等と選ばれたザンセートとを混合
した形を採ることもできる。液状形態の場合、この組成
物は、滅菌または非滅菌溶液ぐ懸濁液、分散液、エキシ
ル等周知の技術のものでよい。代表的な用途には、この
組成物は、例えば溶液、ローション、軟膏、チンキ剤等
の形にもできる。

実施例８ カリウム　２−エキソ−ビシクロ［２，２，１１・４］
ヘプチル　ザンセート（Ｄ６１１−エキソ−Ｋ）実施例
６と正確に同じ方法で、この化合物を、カリウム、エキ
ソ−ノルボルネオールおよび二硫化炭素から出発して製
造する。分析は、実施例と同じである。融点は、２４９
〜２５２℃（分解）。

坑ウィルスおよび坑腫瘍治性は、化合物Ｄ６１１のもの
と、ＩＣ５ｏ値−を−含めて、本質的に同じである。

このナトリウムおよび他のアルカリ金属塩が、選択され
たアルカリ金属またはアリカリ金属ノルポルネオレート
から本質的に同じ方法で作られ、Ｄ６１１と本質に同じ
抗腫瘍および坑ウィルス活性を有することがわかる。

実施例９ ナトリウム　２−エンド−ビシクロ［２，２，１”Ｊ−
へブチル　ザンセート（Ｄ６１１Ｎａ）実施例６の化合
物のすトリウム塩は、ナトリウム　２−エンド−ビシク
ロ［２，２，１１・４〕−へブチル　ザンセートであり
、その実施例に示される如く製造されるが、エンド−ノ
ルボルネオールとナトリウムから出発する。融点は２４
６〜２４８℃（分解）であり、相当するカリウムｔｌｉ
（Ｄ６１１）と本質的に同じ坑ウィルスおよび坑ｌ！瘍
活性を有することがわかる。

他のアルカリ金属塩類が、選択されたアルカル金属ある
いはアルカリ金属ノルポルネオレートから出発して本質
的に同じ方法で製造され、Ｄ６１１と本質的に同じ坑ウ
ィルス及び坑！瘍活性を有することがわかる。

実施例 カリウム４（またはバラ）−イソボルニル　シクロへキ
ソル　ザンセート（Ｄ６２２）３９ｏ　　（１モル）の
カリウムを、少量ずつ窒素雰囲気下で９４５（＋　　（
４モル）の本質的に純粋な４（また（よ〕（う）−イイ
ソボルニルシフへキサノールへ、１００〜１５０℃で添
加する。カリウムが完全に反応した後に、溶液を４０℃
に冷１１　Ｌ、、１℃の無水テトラヒドロフランで希釈
する。６６．１ＭＬｌ　（１゜１モル）の二硫化炭素を
ゆっくりと添加し、その後反応混合物を４０℃に４時間
保持する。２℃の石油エーテルを添加した後、ザンセー
トを口過し、その後２ａのエタノールで再結晶化する。

収量：　　　６８ｇ　　　（理論値の２０％）融点：　
　２６２℃　（分解） 元素分析　　　　　計　　算　　値　　　　　実　　測
　　値０　　　５８．２４　　５８．２６ ）１　　　７，７６　　　７．７０ ８　　　　　　　　１８．２９　　　　　　　１８．１
４この化合物について、ヘルペス単体ウィルスに対する
斑点抑制検定での１ｉｆ当りのマイクログラム（７）Ｉ
Ｃ５１ｆｕｔ、１．９　（＋−ＩＳＶ−１、特に、菌株
　Ｈ８Ｖ−１−１８０３）ｒ＄る。他方、坑ウィルスお
よび抗腫瘍活性は、化合物Ｄ６０９のものと本質的に同
じであるが、いくらが、それより優れている。Ｄ６２２
に相当するカリウム２（またはオルソ）化合物および相
当するナトリウムおよびそれによるあるいはＤ６２２に
相当するものの他のアルカリ金属塩は、本質的に同Ｃ方
法により、選択されたカリウム２（またはオルソ）−イ
ソボルニルシクロヘキリノエートまたは他の選択された
アルカリ金属またはアルカリ金属イソボルニルシクロヘ
キサノエートから出発して、製、造され、Ｄ６６２と本
質的に同じ坑ウィルスおよび坑＃１瘍活性を有すること
が分る。

本発明化合物の付加的坑ウィルス特性 本発明の化合物類は、斑点減少試験、既に記述したよう
に、坑ウィルス活性および能力を測定するための標準的
テストにおいて活性である。一つのこのような標準的直
接斑点検定は、Ｅ、Ｃ，ヘルマン、ジュニアらによって
。ｐｒｏｃ　、　Ｓｏｃ、　Ｅｘｐｔｌ、　Ｂｉｏｌ　
、　Ｍｅｄ、　■１１．６２５　（１９８０）に説明さ
れたものである。それは、次のようなものである。すな
わち、ｌＩＡ織培養細胞が単−贋物として小さな井の中
で成長せしめられ、適当なウィルス希釈物で感染せしめ
られる。次に、半固体媒体でかぶせられ、ウィルス子孫
のもとの非感染細胞への拡散を防止する。感染細胞から
のみ、二次感染の病巣は、３日以内に展間する。そして
、これらは、周知の手順に従って適切に染色すると、斑
点として可視化できる。化合物の抑ｖＪ効果を測定する
ために、化合物をかぶせの添加の前に、感染細胞上に直
接に投与し、次にウィルス収量を処理されない感染ｍ胞
培養物から収量と比較する。

斑点減少あるいは抑制のパーセントを、抑１ｊされない
標準物から取った１００％斑点形成単位（ＰＦＵ）と比
較して表わす。

次に、正確な斑点減少検出を採用し、感染され、処理さ
れた培養物は、その全数で単純に減少するのではなく、
むしろ、収縮する傾向ものであるという事実による誤り
の可能性をなくした。時々、菌は、消失していない数存
在しているにもかかわらず検出をのがれ得る程度に収縮
し、存在する斑点の数を誤って測定することになり、従
って、斑点の減少の程度を誤まる。正確な方法では、こ
の欠点を生じないものであり、例えば、５ｃｈｉｎａｚ
ｉ　。

Ｒ，Ｆ、およびＮ　ａｈｍｉａｓ、　Ａ　、　Ｊ　、に
よって、Ａｍｅｒｉｃａｎ　　Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｒ
　　ｔｖｌｅｄｉｃｉｎｅ　７３．４０−４８　（１９
８２）に記載された手順に従って、順次の斑点検定での
半固体によるかぶせをし・ないで、処置された培養物か
らのウィルス含有流体を検定することにより、この場合
、正常の大きさの斑点が展開し、従って再現性のある定
量的な退室が容易になるものである。

本発明の化合物は、多数の異なる代表的ウィルス　タイ
プに対して評価された場合効果的な坑ウィルス剤である
ことが見い出された。インフルエンず△２９種痘ウィル
ス、５Ｖ４０１１瘍ウイルス。

コックスサラキー８５およびｖＳＶに加えて、「シイル
ス型は特に次の型のヘルペスウィルスを含んだ：ヘルペ
ス単性ウィルス（トｌ５Ｖ）タイプＩ（菌株ＡＮＧ、ｌ
ＳＯ３，ｌ５Ｏ６及びＷＡを含む）およびヘルペス中性
ウィルス（＋−Ｉ　Ｓ　Ｖ　）タイプ■［菌株ＨＧ５０
　（性器ウィルス）を］。

抑制されない標準と比較すると、本発明の化合物、１ｍ
４当り２０マイクログラムで、斑点減少は次のオーダー
のものであった。

Ｃ以下余い９ 標準１００％と比べた （　／ｌｚ　２１　ａ　　　　　　　　　パーセントＰ
ＦＬＩコークスサツキ−４ ｌ−１ｓＶｉ　　　　　　　　　　　　　２．５Ｈ８Ｖ
−１−１８０３１，０５ １−１ｓＶ　−Ｊ　−ＷＡ　　　　　　　　　　０．９
＋−＋ｓｖ−ｒｒ　　−トＩＧ−５２０，３ｌ−ＩＳＶ
　　Ｊ−ＩＳＯ６０，Ｉ ＶＳＶ　　　　　　　　　　　　　　　０．０５Ｈ８Ｖ
−１−Ａ　　ＮＧ　　　　　　　　Ｏ，１（５，５マイ
クログラム ／１．） 従って、本発明化合物のウィルス活性は、斑点−減少検
定に示されるように、本当に基本的なものである。与え
られたパーセントＰＦＬＩ特徴は、化合物Ｄ６０９につ
いてであるが、本発明の他の化合物、特にＤ６１１．Ｄ
４３５．化合物の混合物、例えばＤ４３５とＤ６１１ま
たはＤ４３５とＤ６０９の混合物等を含む化合物に対す
やテストにおいても同様な特徴が得られる。

上述に概説した正確な手順により、同じｐ１〜１および
他の環境条件で、同じウィルス菌株に対して、テストを
行った場合、本発明の化合物は、次のような、ＩＣｓ（
１ｍｊ！当りマイクログラム）の形で示された定量的結
果を与えた。化合物は、非処理の標準物と比べて、斑点
形式単位（ＰＦＵ）で５０％減少になるに要する最小抑
ｆＩＩＪ１１度として表わされている。

Ｌｌ　　　　　　　　　　　シ　　　−レーーベンジル
　（実施例２）　　　Ｎａ　　　＞３０シクロヘキシル
（実施例３）Ｎａ　　　　　９，５ｎ−ドデシル　　　
　　　　Ｎａ　　　　　７．０１−アダマンチル（Ｄ　
４２４）　Ｋ　　　　＞１０（実施例５） トリシクロデシル（Ｄ　６０９）　Ｋ　　　　　　３，
０（実施例７） １−ノルボルニル（Ｄ　６１１）　ＫｏｒＮａ　　　３
．０（実施例６） シクロドデシル（Ｄ　４３５）　Ｎａ　　　　　　２，
５（実施例１） 従って、本発明の化合物は１５．効能のある坑ウィルス
剤として、斑点減少または抑１１Ｊ検定により確定され
る。

更に、テストを行いウィルス菌株による本発明化合物に
対する耐性進展を測定した。従って、本発明の化合物類
は、この見地より、次の工程成績表（プロトロール）に
従って選択されたヘルペスウィルス類に対してテストさ
れた。：感染されたＩ胞を延長された期間にわたり、テ
スト化合物の最適以下の濃度下に保持し、ウィルス子孫
を同じ条件下で種々流した。その後に、得られたウィル
スブールを、テスト化合物の抑制作用に応答する能力に
関して、野生型のウィルスと比べた。このデス１−手順
の結果として、評価されたウィルス菌株においてテスト
化合物に対する耐性が生じた場合がな（、そして、その
ような条件はなかったことが測定された。代表的には、
耐性の測定は、化合物Ｄ４３５．０６０９．Ｄ６１１お
よび化合物の相合せ、例えば、Ｄ４３５と０６１１また
はＤ４３５と０６０９について、また本発明の他の化合
物についても行なわれた。そして、記述された結果は、
耐性が生じる条件は見い出されなかったことである。

可能性のある耐性についての検定の感受度は、研究に用
にられた実験条件下で誘導されたであろう突然変異を検
出するのに十分であった。この結果の耐性の発生は見ら
れなかったことの重要性は、明らかである。即ち、最初
に効果的坑ウィルス作用を有している坑ウィルス化合物
類が、その処置されたウィルス菌株に耐性を生じしめる
ことがよくあり、従って、潜在的危険になるからである
。

坑つィルス薬アシクロビル（Δｃｙｃｌｏｖｉｒ）に関
する最近刊行された情報（Ｂ　ｕｒｎｓら、７　ｈ６　
　Ｌ　ａｎｃｅｔ、１９８２年２月２０日）は、２人の
免疫抑υノ患者をアシクロビルで処置すると、ヘルペス
ウィルス突然変異体が作られ、最初に認識されたウィル
スよりも、その特定の薬により処置に対して、相当に感
受性が少ないという効果についてである点注目すべきで
ある。耐性の展開酸は発生がないことは、本発明化合物
を坑ウィルス剤として考えた場合に、大きな利点である
ことが明らかである。

本発明化合物の抗腫瘍特性 本発明の化合物類及びそれを含む製薬的組成物は、組織
培養中の種々の実験的に変態された細胞の成長パターン
におよびその形態学的外観に激烈な影響を与え、一方、
同時に正常な細胞培養物のこれらの性質には影響を与え
ない。

コロニーノ　− 正常な細胞は平たい形をしており、隣りの細胞との接触
が確立すると成長を停止する。そして細胞のよく調整さ
れた単一層が保持される（第２図）。これに対して、腫
瘍細胞は妨害成長規定であり、小さい細胞の多層マスよ
りなる密充填のコロニーの形成となる（第１図）。

ヒト脳Ｉ！瘍のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）と接触せし
められると、正常な細胞は、腫瘍細胞に変態するもので
ある。これらのＩＩ瘍細胞を一定時間本発明の化合物に
さらすと、腫瘍細胞は、上記の性質をもつ正常細胞にも
とに還元する。これは、顕微鏡検査によって示され得る
（第２図対第１図低血清テスト 本発明の化合物の影響下の還元過程について証明するこ
とは、変態細胞のものと厳密にある他の性質、即ち、血
清を低濃度（０，５％）含む組織培養媒体中で成長し、
コロニーを形成する腫瘍細胞の能力を評価することによ
って見い出される。

この検定は、詳細には、Ｇ、Ｄ、クラーク（Ｃｌａｒｋ
ｅ　）　、　Ｍ、　Ｇ、　Ｐ、ストーカ−（’Ｓ　ｔｏ
ｋｅｒ　）　。

△５ハトロー（Ｌ　ｔ＋ｄｌｏｗ　）およびＭ、ソーン
トン（Ｔ　ｈｏｒｎｔｏｎ　）によッテネイチｔ　（Ｎ
ａｔｕｒｅ　）　２−２７．７９８　（１’９７０）に
、Ｒ，ドウルベコ（Ｄ　ｕｌｂｅｃｃｏ　）によってネ
イチｖ　（Ｎａｔｕｒｅ　）　２点７，８０２　（１９
７０）に記載されており、腫瘍ｍ胞の変態表現型の検出
のための最も厳重なテストの一つとして以来、腫瘍研究
で用いられてきたものである。

このテストにおいて、ＩＩ織暗培養して霊長類（猿）細
胞を用い、ヒト脳腫瘍（先技神経膠種）遺伝物質（ＤＮ
Ａ）に細胞を接せしめた後に変態表現型を獲得するもの
である。遺伝的に均質である変態組織培養物［分枝系線
（クローン線）］を、テスト化合物４０μＱ／ｍｅｔに
、４日間露出さしめる。平行培養物を処置の間保持する
。テスト化合物特にＤ６０９は、７．２５〜７．８の少
し高いｐｌ−１と比べて、６．８のｐＦｌで最も効果的
にその坑ウィルス活性があるように見えた。

薬に一時的に露出せしめて後、細胞を１０％血清の含有
のあるいは低血清（０，５％）の薬なしの媒体（ｐｉ−
１７，２＞中に懸濁する。後者の条件では、変態表現型
を示ず培養中の子れらの細胞を排他的に明らかにする（
低血清中のコロニー形成）。１０％血清での検定では、
対照的に重要な特徴を示す、即ち細胞は薬に露呈でいい
ても損傷されず、従ってその前の処理にもががねらず、
コロニーをまったく容易に非選択的成長条件下で形成で
きるという特徴を示す。変態細胞をテスト化合物に１）
Ｈ６，８にさらすとほとんど完全に」１表現型がちとに
正常表現型に還元し、その場合、低血清で成長する能力
は、急激に低減された。

本発明の他の種々の代表的化合物類に、同じテストを行
った。例えば、Ｄ４３５．Ｄ６１１等は同種の抗腫瘍特
性を示したが、それらの抗腫瘍効果は、化合物Ｄ６０９
の場合よりも、環境およびｐｌ−１に対して、いくらが
変化しない方であるようだった。

従って、変態（ＩＩｌ瘍）細胞を本発明の化合物にさら
すと、変態表現型（細胞）が、正常表現型（細胞）に、
はとんど完全に還元し、その場合、低血清中で成長する
能力は、急激に低減あるいは消失することが見い出され
た。

１乱 次に、本発明をよりよ（理解するために図面を参照する
。

第１図は、ハムスターの悪性腫瘍から取った「変態細胞
」として知られている小細胞の多層物の顕微鏡写真であ
る。

第２図はハムスターの正常の平らな形の単一層細胞の顕
微鏡写真である。

第３図は、第１図に示される変態表現型細胞の還元を示
すグラフであり、即ち、動物に！Ｉｉｉ瘍を作る変態ハ
ムスター細胞が、第２図に示される型の表現型的に正常
で、即ら、平らな還元細胞になる。

その還元は、相織培ｉ媒体中の悪性細胞を、本発明の化
合物２０マイクログラム／ｍ（ｔにより一時的に処理す
ることによって達成された。この場合、化合物Ｄ６０９
を、三つの経続する紅過時におく、各々経過時の期間は
１週間の間である。グラフにおいて白丸は、非処置の培
養物を示し、一方、黒丸は、変態悪性表現型を示してい
る。処置の期間中に、変態コロニーあるいは細胞が消失
し、表現型的に正常なあるいは平らな還元細胞に変換す
ることが、定量的に評価された。そして、結果は第３図
のグラフに示される。変態表現型の消滅は、ゲノムを生
じる腫；９の変態を永久的になくすることよって達成さ
れ、従って、安定な性質を示している。

従って、本発明の化合物の抗腫瘍効果は、２つの独立で
ｍ盾な検定法或はテストによって立証される。

１１１０【腹１」肩１ １！瘍防止実験において、本発明の化合物は、動物中の
ｍ瘍を防止することが見い出される。代表的な発癌実験
において、皮ふ腫瘍は、Ｇ、Ｆｕｅｒｓｔｅｕｂｅｒｇ
ｅｒ　、　Ｄ、　Ｌ　、３ｅｒｒｙ、　Ｂ、　３ｏｒｇ
およびＦ、Ｍａｒｋｓの”　Ｓ　ｋｉｎ　　　Ｔ　ｕｍ
ｏｒ　　Ｐ　ｒｏｍｏｔｉｏｎ　　ｂｙｐｈｏｒｂｏｌ
　　Ｅｓｔｅｒ、　ａ　　　丁ｗｏ　−３ｔａｇｅ　　
ｐ　ｒｏｃｅｓｓ″′、ｐｒｏｃ　、　Ｎａｔｌ　、　
Ａｃａｄ　、　Ｓｃｉ、　、　ＵＳＡ　　７β−，７７
２２−７７２６（１９８１）の手順に従って、マウス中
に誘導される。再現実験において、ち密に制御された条
件下で、マウスの同じ株により、制ｍ考案中の１８匹の
動物のうち１７匹が、３か月の期間の後に、皮ふ腫瘍を
生じた。処置された群において、１１１ｍの発生は、化
合物Ｄ６０９の適応により、はとんど完全に妨げられた
、この化合物はアセトン溶液の形で３μＱ／ｍｌの濃度
で皮ふに、表皮的に適用した。投与管理は、３か月間週
２回であった。処置された動物の場合、１８匹の動物の
うち１匹が、認識できる皮ふ腫瘍を生じた。

上記実験は、刊行され、確立された手順に従ったもので
あり、化合物０６０９の抗腫瘍活性を示している。本発
明の他の化合物を上記の実験において又、他の生体内抗
腫瘍実験において０６０９に置きかえた時、効果は本質
的に同じであり、本発明の抗腫瘍効果は、その坑ウィル
ス効果と密接に平行でるものである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ハムスターの悪＋１：肚瘍から取った変態細
胞として知られている小細胞の多層物の顕微鏡写真、第
２図はハムスターの正常の平らな形の単一層細胞の顕微
鏡写真であり、また第３図は第１図に示される変態表現
型細胞の還元を示ずグラフである。 特許出願人　メルツ、ラント、コンパニー、ケキルシ１
７フト、ミツト、ベシュレンク テル、ハフランク、ランｌ〜、コンパ 二一

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ＋１ Ｒ１−０−Ｃ−８−Ｒ２ 〔式中、Ｒ１はベンジル；フリル；ピリジル；キヌクリ
   ジニル；ヒドロキシまたはＣｌ−４のアルコキシまたは
   ハロゲンで置換されたあるいは非置換のＣ３−２０のア
   ルキル；またはヒドロキシまたはＣ１−４アルコキシま
   たはハロゲンで置換されたあいは非置換の０３−２０の
   シクロアルキルであり、またＲ２ば一価または多価の金
   属原子；２．３−ジヒドロキシプロピル：ω−ヒドロキ
   シ−（ＣＩ−４のアルコキシ）メチル：またはヒドロ４
   ニジ、Ｃｌ−４のアルコキシ、アミノ、ＣＩ−、アルキ
   ルアミノ。 ジ（ＣＩ−４アルキル）アミノ、トリ（ＣＩ−４アルキ
   ル）アンモニウムまたはハロゲンで置換されたあるいは
   非置換のＣＩ−＋６のアルキルである。）を有する化合
   物を含有してなる坑Ｓ瘍ないし坑ウィルス剤。 （２）Ｒ２がアルカリ金属である特許請求の範囲第１項
   に記載の抗腫瘍ないし坑ウィルス剤。 （３）Ｒ＋がフリル；ピリジル；キヌクリジニル；ヒド
   ロキシ、Ｃ１−４のアルキルあるいはハロゲンで置換さ
   れたあるいは非［挽の０１＋−２ｏのアルキル；または
   ヒドロキシ、Ｃｌ−４のアルキル、Ｃｌ−４のアルコキ
   シあるいはハロゲンで置換されたあるいは非置換の０７
   −２０のシクロアルキルである特許請求の範囲第１項に
   または第２項に記載の抗腫瘍ないし坑ウィルス剤。 （４）Ｒ＋　がノルボルニル、トリシクロデシル。 シクロドデシルまたはノルボルニルシクロヘキシルであ
   る特許請求の範囲第３項に記載の抗腫瘍ないし坑ウィル
   ス剤。 （５）、Ｒ’　がノルボルニル、アダマンデル、トリシ
   クロｒ５．２．０”’］デシル、シクロドデシルまたは
   ノルボルニルシクロヘキシルである持Ｅ’ＦＭ求の範囲
   第４項に記載の抗腫瘍ないし坑ウイルス剤。 （６）該化合物がアリカリ金属ペンジルザンセートまた
   はアルカリ金属シクロへキシルザンセートである特許請
   求の範囲第１項に記載の抗腫瘍ないし坑ウィルス剤。 （７）該アルカリ金属ペンジルザンセートまたはアルカ
   リ金属シクロへキシルザンセートがナトリウムベンジル
   ザンセートまたはナトリウムシクロへキシルザンセート
   である特許請求の範囲第６項に記載の坑ｉ瘍ないし坑ウ
   ィルス剤。 （８）該化合物が低級アルキルシクロへキシルザンセー
   トである特許請求の範囲第１項に記載の抗腫瘍ないし坑
   ウィルス剤。 （９）低級アルキルシクロへキシルザンセートがメチル
   シクロへキシルザンセートである特許請求の範囲第８項
   に記載の抗腫瘍ないし坑ウィルス剤。