KR0145412B1

KR0145412B1 - 항염증성 조성물, 항알레르기성 조성물 또는 이들 혼합 성질의 조성물

Info

Publication number: KR0145412B1
Application number: KR1019900010716A
Authority: KR
Inventors: 신지 오오모리; 가즈미 오가따; 다까히로 사까우에
Original assignee: 요시다 쇼우지; 센쥬세이야꾸 가부시끼가이샤
Priority date: 1989-07-14
Filing date: 1990-07-14
Publication date: 1998-07-15
Also published as: US5135952A; DE69001722T2; ATE89739T1; DK0408044T3; CA2020474A1; EP0408044A3; EP0408044A2; RU2050156C1; ES2055235T3; JP2815179B2; EP0408044B1; DE69001722D1; JPH0348626A; CA2020474C; KR910002437A

Abstract

내용없음

Description

항염증성 조성물, 항알레르기성 조성물 또는 이들 혼합성질의 조성물

제1도는 S-(디에틸-α,β-디카르복시에틸)글루타티온 나트륨의 적외선 흡수 스펙트럼이다.

제2도는 S-(디-n-부틸-α,β-디카르복시에틸)글루타티온 칼슘의 적외선 흡수 스펙트럼이다.

본 발명은 비스테로이드계의 유용한 항염증성 및/ 또는 항알레르기성 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명은 포유 동물의 체내에서 발견되는 물질인 S-(α,β-디카르복시에틸)글루타티온 또는 그의 에스테르 유도체, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 유효 성분으로 함유하는 유용한 항염증성 및/ 또는 항알레르기성 조성물에 관한 것이다.

스테로이드 및 비스테로이드계의 각종 항염증 및/또는 항알레르기제가 공지되어 있다. 스테로이드류가 강력한 항염증 및 항알레르기 활성을 가지기는 하지만, 장기간에 걸쳐 다량을 반복 투여하면, 감염에 대한 내성이 감소되고, 당뇨병이 악화되어 때로는 생명을 위협할 정도의 심각한 역반응을 일으킨다. 그러므로, 이들 스테로이드계 항염증성 또는 항알레르기성 약제를 장기간에 걸쳐 사용할 경우에는, 임상과정을 지속적으로 지켜보는 등의 세심한 주위를 요한다는 단점이 있다.

한편, 상기 언급된 역 작용을 일으키지 않는 비스테로이드계의 항염증성 또는 항알레르기성 약제를 개발하기 위한 광범위한 연구가 진행되고 있으나, 그러한 비스테로이드계 약제는 궤양과 같이 위장등에 부작용을 일으킬뿐 아니라 스테로이드계 약제에 비해 효능면에서 부적당하다.

이러한 상황하에서, 본 발명자들은 상기 언급된 부작용을 나타내지 않으면서 강력한 항염증 및 항알레르기 활성을 나타내는 각종 화합물에 대해 광범위하게 연구하였으며, 놀랍게도 포유동물의 체내에 존재하는 물질인 S-(α,β-디카르복시에틸)글루타티온과 그의 몇가지 에스테르 유도체가 매우 강력한 항염증 및 항알레르기 활성을 가지며, 지극히 안전한 약제로서 사용될 수 있다는 것을 발견하였다. 상기의 발견들을 근거로 하여 본발명을 예측하였다.

그러므로, 본 발명은 하기의 일반식 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효 성분으로서 함유함을 특징으로 하는 항염증성 및/또는 항알레르기성 조성물에 관한 것이다.

[상기 식 중,

R들은 동일 또는 상이하며, 각각 수소원자 또는 저급 알킬기이다.]

본 발명의 약학적 조성물의 유효 성분인 S-(α,β-디카르복시에틸)글루타티온은 소의 수정체에서 발견되는, 동물 체내에 존재하는 물질이지만[D. H. Calam 및 S. G. Waley(Biochem, J. 86,226. 1963)], 그의 약학적 작용은 거의 밝혀져 있지 않았다. 본 발명자들은 먼저 이 화합물이 항혈구응집 작용과 혈소판 응집 억제 작용을 갖는다는 것을 발견하였다(일본국 특허 공개 공보 제 63-8337/1988 및 1-79956/1989호).

상기 일반식에 있어서, R들은 동일 또는 상이하며, 각각 수소원자 또는 저급 알킬기이다. 저급 알킬기에서 탄소원자수는 1∼10의 범위인 것이 바람직하다. 이러한 알킬기의 탄소 사슬은 직쇄, 측쇄 또는 고리형일 수 있으며, 심지어는 부분 고리형일 수 있다. 그러한 알킬기에는 메틸, 에틸, n-프로필 , i-프로필, n-부틸, t-부틸, 2차-부틸, n-펜틸, 1-에틸 프로필, i-펜틸, 벤질등이 있다.

본 발명 화합물은 유리산 또는 알칼리 금속염(예. 나트륨염, 칼륨염 등) 및 알칼리 토금속염(예. 칼슘염, 마그네슘염 등)과 같은 약학적으로 허용 가능한 염으로서 각종 용도에 사용될 수 있다. 이용 가능한 카르복실기의 전부 또는 일부가 염을 형성하는 활성 화합물은, 필요에 따라서는 본 발명의 약학적 조성물의 제제에 사용될 수 있다.

목적 및 필요에 따라서, 본 발명의 활성 화합물 1종 이상을 배합하여 사용할 수 있다.

본 발명의 활성 화합물은 하기의 방법 및 기타 방법에 의해 수득될 수 있다. S-(α,β-디카르복시에틸)글루타티온은 효모, 소의 수정체 등에 존재하므로, 공지의 기법에 의해 그러한 원(source)으로부터 순수한 형태로 추출 및 분리될 수 있다. 합성적으로는, 등몰량의 글루타티온과 말레산을 고온 또는 주위 온도에서 1∼2일 간 물 또는 수성 알콜에 방치함으로써 S-(α,β-디카르복시에틸)글루타티온을 수득할 수 있다. 이와 유사한 방법으로, 말레산의 상응하는 모노에스테르 또는 디에스테르를 사용함으로써 S-(α,β-디카르복시에틸)글루타티온의 에스테르 유도체를 수득할 수 있다. 이렇게 수득될 수 있는 화합물은 모두 비대칭 탄소를 함유하며, 그에 따라 광학 이성질 현상이 일어난다.

하기 기재된 실시예 1∼3에서도 명백히 알 수 있듯이, 본 발명의 약학적 조성물의 유효 성분으로서 사용되는 화합물은 저 농도에서 높은 항염증 및 항알레르기 활성을 나타낸다. 또한, 본 발명에 따른 화합물은 동물 체내에 존재하는 물질 및 그의 에스테르 유도체이기 때문에, 하기 기재된 실시예 4에 설명되었듯이 독성이 매우 낮고 안전하며, 유용하게는 각종 염증성 또는 알레르기성 질환을 치료 및 예방하는 각종 투여형태로 사용될 수 있다.

당해 조성물로 치료될 수 있는 염증성 질환에는 류머티스 관절염, 변형성 척추증, 골관절염, 요통, 통풍, 급성 중이염, 방광염, 전립선염, 치통, 포도막염, 부비강염 등이 있다. 이 조성물은, 예를들면, 기관지천식, 화분증, 알레르기성 비염, 식이 알레르기성 위염, 알레르기성 설사, 궤양성 대장염, 구내염, 결절성 동맥주위염, 폐색성 동맥 내막염, 심내막염, 담마진, 습진, 접촉 피부염, 수포, 교감성 안염, 알레르기성 결막염 및 알레르기성 각막염과 같은 알레르기성 질환의 치료에도 역시 유용하게 사용될 수 있다.

상기 언급된 염증성 및 알레르기성 질환을 치료함에 있어서, 본 발명의 조성물은 질병의 종류 및 상태에 따라서 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 투여 형태에는 점안제, 점비제, 점이제, 연고제, 크림, 습포제, 살포제, 분무합제, 찰제 및 좌약과 같은 외용제 ; 물약, 분말제, 캡슐, 정제, 미립제 및 입제와 같은 경구제 ; 및 각종 주사제가 있다. 이들 제제는 기지의 약학적 공정에 의해 제조될 수 있다. 이들 제제는 본 화합물 1종 이상을 통상의 결합제, 붕해제, 윤활제, 중점제, 흡수 촉진제, 표면 활성제, 등장제, 안정화제, 방부제, 유화제, pH 조절제 및 기타의 부형제와 혼합함으로써 제조될 수 있다.

유효 성분의 투여량은 환자의 연령, 체중, 투여 형태, 지시 등에 따라 결정된다. 예를들어, 주사시에 성인의 1일 투여용량은 약 1∼100mg/1회이고, 경구 투여시에 성인의 1일 투여용량은 약 10∼1,000mg/수회이다. 외용일 경우에, 필요에 따라서는 약제를 약 0.1∼5(W/W)%의 농도로 1일에 수회 투여할 수 있다.

본 발명의 목적에 위배되지 않는다면, 본 발명의 약학적 조성물은 의약적으로 유효한 성분들 외에도 기타의 항염증 및/또는 항알레르기제를 추가로 함유할 수 있다.

하기의 실시예 및 약제 제조예로써 본 발명을 추가로 설명하겠다.

[실시예 1]

쥐의 카라게난 - 유도 결막 부종에 대한 효과

본 실험에서는 체중이 약 130g인 숫컷 위스타르 쥐를 사용한다. 생리 식염수에 용해시키고, 염산 나트륨을 사용하여 pH를 7로 조정한 S-(α,β-디카르복시에틸)글루타티온(이하에서는 DCE-GS라 칭함)을 미측 정맥을 통해 투여량을 3,10 및 30mg/Kg로 하여 쥐에 투여한다(대조군 : 생리 식염수). DCE-GS 디에틸 에스테르 나트륨, DCE-GS 모노에틸 에스테르 나트륨, DCE-GS 디-n-부틸 에스테르 나트륨, 및 글루타티온(이하에서는 GSH라 칭함)을 각각 30mg/Kg을 투여한다(대조군에는 생리 식염수를 투여한다). 1분 후, 펜토바르비탈로 마취시킨 쥐의 안검 결막 아래측에 1%카라게난 용액 50μ1을 주사한다. 3시간 후, 쥐들을 각각 죽이고, 결막 부종을 분리한 다음, 중량을 측정한다.

결과:

DCE-GS는 쥐의 카라게난- 유도 결막 부종을 투여량 의존적으로 저해하여 높은 항염증 활성을 가지고 있음이 증명되었다. 다른 3종의 DCE-GS 에스테르 유도체도 역시 부종의 중량을 현저하게 역제함으로써 항염증 활성이 입증되었다. 이와는 달리, GSH는 항염증 활성을 나타내지 않는다.

n=10, 생리식염수와의 유의차 :

* p 0.001.

n=10, 생리식염수와의 유의차 :

* p 0.01, ** p 0.001.

[실시예 2]

쥐의 복막 삼출 세포로부터의 히스타민 방출에 대한 저해 효과

(1) 쥐의 복막 세포 현탁액의 제조

체중이 250∼280g인 숫컷 SD쥐를 사용한다. 설리반 일행(Sullivan et al)의 방법에 따라서 쥐의 복막 세포를 수거 및 분리한다. 먼저 쥐의 목을 절단하여 방혈시켜 죽인 직후, 복부의 털을 면도하고, 복부를 수cm 절개한 다음, 겸자로 근육을 잡고 18-G니들을 사용하여 비만세포 배지(MCM) 10ml을 복강내에 주입한 후, 90초간 부드럽게 맛사지해 준다. 이어서 복부를 열어 데루모 주사기로 가능한한 다량의 복수를 수거한다. 본 실험에서는 혈액으로 오염된 복수는 사용하지 않는다. MCM에 용해시킨 40% 피콜로 400(Ficoll 400 : Pharmacia) 2ml을 함유하는 폴리카르보네이트 튜브에 복수를 넣은 다음, 실온에서 30분간 방치하고, 4℃에서 10분간 700rpm으로 원심분리한다. 이어서, 피콜로 400의 상층부 중의 첨강물을 피펫팅하고, MCM 약 7ml로 3회 세척한다. 부르커 - 터크(Bruker-Turk)세포 계수기로 세포의 갯수를 측정하고, MCM을 희석제로 사용하여 약 10cells/ml의 세포 현탁액(쥐의 복막세포 현탁액)을 제조한다. 세포내 과립을 0.05% 톨루이딘 블루로 염색하여 비만 세포를 확인한다.

(2) 비만 세포로부터 히스타민의 방출

쥐의 복막 세포 현탁액 0.8ml을 37℃에서 10분간 미리 항온 처리한 후, 시험 약제 0.1ml를 가한다. 상기 시스템을 5분간 항온처리하고, 생리 식염수중의 10μg/ml 화합물 48/80(Sigma) 0.1ml을 가한다. 10분간 항온처리 후, 반응 혼합물을 빙수에서 10분간 냉각시켜서 반응을 종료시키고, 4℃에서 5분간 700rpm으로 원심분리한다. 이어서, 쇼어 일행(Shore et al)의 방법을 부분적으로 변형시켜서 상층액중의 히스타민을 HPLC로 측정한다.

결과:

대조군에서의 히스타민 방출율은 75.0%이다. DCE-GS는 농도 의존적으로 히스타민의 분비를 저해하였다. 이로써 DCE-GS가 높은 과립 붕해 - 저해 활성을 갖는다는 것이 입증되었다.

평균 ± S. E. (표준오류), n = 3

*비등시켜서 탄단백시킨 대조군의 표본으로부터 방출된 히스타민을 100%로 간주한다.

[실시예 3]

쥐의 등의 수동 아나필락시에 대한 효과

본 실험에서는 체중이 약 130g인 숫컷 위스타르 쥐를 사용한다. 각각의 쥐의 등의 털을 협자로 깍아낸다. 쥐의 등에 쥐의 항혈청을 피내 주사한다. 3일 후, 미측정맥을 통해 DCE-GS를 3,10 및 30mg/Kg의 투여량 만큼 투여하고(대조군에는 생리식염수를 투여한다), 1분 후 항원인 1%오브알부민과 2%에반스 블루의 50 : 50(v/v)혼합물 1ml을 정맥내 투여하여 수동 아나필락시를 유발시킨다. 30분 후, 쥐를 죽이고, 염색된 면적을 측정한다. 적당한 면적을 제거하고, 포름알데히드 20ml로 염료를 추출하여 측정한다.

결과:

DCE-GS는 쥐의 등에서의 염색 면적과 염료의 양을 모두 투여량-의존적으로 저해하였다. 이러한 수동 아나필락시 반응의 저해는 DCE-GS가 높은 항알레르기 활성을 갖는다는 것을 입증한다.

평균 ±S. E. (표준오류), n=4 또는 5, : 억제율(%)

생리식염수와의 유의차:

*p 0.05, **p 0.01, ***p 0.001.

[실시예 4]

정맥내 급성 독성 연구

체중이 약 20g인 숫컷 ddY 생쥐 5마리를 사용하여 DCE-GS의 정맥내 급성 독성을 연구한다. 투여량은 100, 200, 400, 800 및 1,600 mg/Kg(공비:2)이다. 1N 염산 나트륨을 사용하여 주사 용액 모두의 pH를 7로 조정한다. 그 결과, 72시간 후에도 사망 또는 비정상적 상태가 관찰되지 않았다.

[합성예 1]

S-(디에틸-α,β-디카르복시에틸)글루타티온 나트륨

글루타티온 9.2g과 디에틸 말레에이트 5.6g을 30(v/v)% 에탄올 150ml에 용해시키고, 2N-수산화나트륨을 사용하여 용액의 pH를 6으로 조정한다. 용액을 50℃에서 약 5시간동안 교반한 후, 반응 혼합물을 2방울을 취한다. 이 시료에서 0.01N- 요오드 시험 용액 1방울을 가한후, 요오드색이 소멸됨을 확인하고, 황화수소 가스를 도입한 다음, 반응 혼합물 밤새 방치한다. 이어서 반응혼합물을 농축시켜서 황화수소를 제거하고, 잔류물을 물 150ml에 용해시킨후, 아세트산 구리(1 수화물) 6.6g을 용해시키면, 구리염이 서서히 분리 석출되기 시작한다. 이 침전물을 여과시켜 수거하고, 세척하며, 물 150ml에 현탁시킨다. 이어서, 황화 수소 가스를 교반하에 도입하여 황화 구리를 제조한다. 이것을 여과 제거하고, 여과액을 농축시키며, 잔류물을 에탄올 200ml에 용해시킨다. 수산화나트륨-에탄올을 서서히 가하여 용액의 pH를 6으로 조정하면, 백색 결정이 침전된다. 결정을 여과시켜 수거하고, 에탄올로 세척하며, 물에 용해시키고 가능한 정도까지 농축시킨다. 잔류물에 에탄올을 가하여 재결정시키고, 침전된 결정을 여과시켜 수거한 다음 건조시킨다. 상기의 공정 결과, S-(디에틸-α,β-디카르복시에틸)글루타티온 나트륨 8.5g이 수득되었다. TLC(실리카겔) Rf = 0.28(n-부탄올 : 아세트산 : 물 = 4 : 1 : 1). IR스펙트럼을 제 1 도에 나타내었다.

[합성예 2]

S-(디-n-부틸-α,β-디카르복시에틸)글루타티온 나트륨

글루타티온 9.2g과 디-n-부틸 말레에이트 7.5g을 50(v/v)% 에탄올 150ml에 용해시키고, 실시예 1에 기재된 것과 동일한 방법으로 반응을 실시한다. 용매 제거후, 잔류물을 물 150ml에 용해시킨 다음, 3.3%아세트산 구리 수용액 200ml을 가하면, 수-불용성 구리염이 분리 석출된다. 이 침전물을 여과시켜 수거하고, 수세하며, 50(v/v)% 에탄올 300ml에 현탁시키고, 교반하에 황화수소를 용액내로 버블시켜서 황화구리로 전환시킨다. 이 침전물을 여과제거하고, 여과액을 농축시켜 황화수소를 제거한다. 잔류물을 50(v/v)% 에탄올 150ml에 다시 용해시키고, 2N-수산화나트륨을 사용하여 pH을 약 6으로 조정한 다음, 농축시킨다. 농축액에 에탄올, 아세톤 및 이소프로필 에테르를 가하고, 생성된 백색 결정을 여과시켜 수거하며, 아세톤으로 세척한 다음, 건조시킨다. 이러한 공정 결과, 흡습성인 S-(디-n-부틸-α,β-디카르복시에틸)글루타티온 나트륨 9.7g을 수득하였다. TLC(실리카겔) Rf = 0.40(n-부탄올 : 아세트산 : 물 = 4 : 1 : 1).

[합성예 3]

S-(디-n-부틸-α,β-디카르복시에틸)글루타티온 칼슘

2N-수산화나트륨 대신에 탄산칼슘을 사용하는 것을 제외하고는, 합성예 2의 반응공정을 반복한다. 농축잔류물에 아세톤을 가하여 백색 결정을 수득한 다음, 에탄올-아세톤으로 재결정하여 S-(디-n-부틸-α,β-디카르복시에틸)글루타티온 칼슘 7.5g을 회수한다. IR스펙트럼을 제 2도에 나타내었다.

[합성예 4]

S-(모노에틸-α,β-디카르복시에틸)글루타티온 나트륨

글루타티온 9.2g과 모노에틸 말레에이트 4.5g을 물 150ml에 용해시키고, 2N-수산화나트륨을 사용하여 용액의 pH를 6.0으로 조정한다. 합성예 1의 반응공정을 반복한후, 반응 혼합물을 농축하고 에탄올을 가하여 분리석출한 백색 결정을 여과수거하고, 물에 용해시킨 후, 농축시키고, 에탄올로 재결정한다. 수율 8.0g TLC(실리카겔) Rf = 0.17(n-부탄올 : 아세트산 : 물 = 4 : 1 : 1).

[제조예 1]

경구 투여용 정제

DCE-GS 100mg

락토오스 80mg

스타치 17mg

마그네슘 스테아레이트 3mg

상기 성분은 정제 1개당 사용되는 양이며, 기지의 약학적 공정에 의해 경구 정제를 제조한다. 필요에 따라서는 정제를 당의정으로 만들 수 있다.

[제조예 2]

주사용액

DCE-GS 1 g

글루코오스 5 g

탄산나트륨 충분량

주사제용 증류수 100ml

DCE-GS 1g을 주사제용 증류수 약 70ml에 용해시키고, 탄산나트륨을 서서히 가하여 용액의 pH를 6.5로 조정한다. 이어서, 글루코오스를 용해시키고, 용액의 부피를 100ml로 만든다음, 박테리아 필터를 통해 여과시킨다. 여과액을 유리 앰푸울에 2ml씩 살균 충전한 다음, 밀봉하여 주사제를 제조한다.

[제조예 3]

연고제

DCE-GS 디에틸 에스테르 나트륨 20 g

백색 와셀린 250 g

스테아릴 알콜 200g

프로필렌 글리콜 120 g

폴리옥시에틸렌-수소화 피마자유 60 40 g

글리세릴 모노스테아레이트 10 g

메틸 p-히드록시벤조에이트 1 g

프로필 p-히드록시벤조에이트 1 g

순수한 물 충분량

총량 1000 g

[제조예 4]

안약 용액

DCE-GS 1.0(w.v)%

붕산 0.7(w/v)%

아세트산 나트륨 0.2(w/v)%

염화 나트륨 0.5(w/v)%

메틸 p-히드록시벤조에이트 0.02(w/v)%

클로로부탄올 0.3(w/v)%

10(v/v)%수산화 나트륨 충분량

멸균정제수 합량을 100ml로 만들수 있는 양

pH 6.5

상기 성분들을 혼합시키고, 용해시킨 다음, 박테리아 필터를 통해 여과시켜서 안약 용액(용기당 15ml)을 제조한다.

Claims

유효성분으로서 하기 일반식의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 및 약학적으로 허용 가능한 담체로 구성된 항염증성 또는 항알레르기성 조성물:

상기식 중에서, R은 동일 또는 상이하며, 각각 수소 원자 또는 탄소 원자수 1∼10의 저급 알킬기이다.
제 1 항에 있어서, 상기 조성물의 형태가 외용제로서 점안제, 점비제, 점이제, 연고제, 크림, 습포제, 살포제, 분무 합제, 찰제 또는 좌약 ; 경구투여제로서 물약, 분말제, 캡슐, 정제, 미립제 또는 입제 ; 또는 주사제인 조성물.