JPS638337A

JPS638337A - 抗血液凝固剤

Info

Publication number: JPS638337A
Application number: JP61153673A
Authority: JP
Inventors: Shinji Omori; 大森　晋爾
Original assignee: SENJIYU SEIYAKU KK; Senju Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: SENJIYU SEIYAKU KK; Senju Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1986-06-30
Filing date: 1986-06-30
Publication date: 1988-01-14
Also published as: JPH0586931B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は、血液の凝固を効果的に防止するための抗血液
凝固剤に関するものである。

従来の技術検査のための採血、輸血、血液の体外循環、血液の保存
などに際しては、血液の凝固を遅延ないし防止すること
が要求される。また血栓症の予防または治療にあっても
、血液の凝固を防止することが要求される。

抗血液凝固剤としては、ヘパリンがよく知られており、
そのほかアンチトロンビン■低親和性ヘパリン（ｅｆ開
昭５７−１３４４１９号公報）、ニンジンサポニン（特
開昭５７−１１６０１７号公報）、蛭類から得られるポ
リペプチド（特開昭６０−２３３０９８号公報）なども
見出されている。また、エチレンジアミンテトラ酢酸、
シュウ酸、クエン酸などは、凝固に必要なカルシウムと
結合する性質を持っているため、主としてナトリウム塩
またはカリウム塩の形で、赤血球沈降反応、輸血、検査
のための採血などの目的に使われている。

発明が解決しようとする問題点しかしながら、従来よく使用されているヘパリンは、ア
ンチトロンビン■による阻害反応を触媒するものであり
、採血のほか注射による血栓の予防に用いられているが
、アンチトロンビン■自体に直接結合してアンチトロン
ビン■の血中濃度を低下させ、アンチトロンビンｍ低下
症をもたらす結果、強い出血傾向を示すおそれかある。

また市販ヘパリンは、ブタ、ヒツジ、ウシの小腸粘膜、
クジラの肺、腸粘膜などから取得するものであるため純
度のばらつきが大きく、活性か一定しないという欠点も
ある。

アンチトロンヒン■低親和性ヘパリン、ニンジンサポニ
ン、針類から得られるポリペプチドなども入手上の制約
、純度のばらつきなどの問題がある。

エチレンシアミンテトラ酢酸、シュウ酸、クエン酸など
は、主に検査のための採血時に使用されているか、静脈
注射などの生体への適用が制限されるという問題点かあ
る。

本発明者らは、かねてより酵母および動物の肝臓、筋肉
などに広く分布し、生体内酸化還元に重要な役割を果た
すグルタチオンおよびその誘導体に着目し、その薬理効
果について鋭意研究を重ねていたか、以下に述べる特定
のグルタチオン誘導体かすぐれた抗血液凝固作用を有す
ることを見出し、本発明に到達するに至った。

問題点を解決するための手段すなわち、本発明は、ｒＳ−（１，２−ジカルボキシエ
チル）グルタチオンまたはその塩を有効成分とする抗血
液凝固剤。」をその要旨とするものである。

Ｓ−（１，２−ジカルボキシエチル）グルタチオンは、
グルタチオンの構成ＳＦＸ子に１．２−シカルホキシエ
チル基か結合した構造を有する化合物てあり、１分子出
９４個のカルボキシル基と１個のアミノ基を有する。

グルタチオンＮ　１１２　　　　　　　Ｇ　＋１２−　Ｓ　ＨＳ−（
１，２−ジカルボキシエチル）グルタチオン１１００Ｇ−（：Ｈ−ＣＨ２ＣＩ＋２−ＣＯＮ＋１−Ｃ
Ｈ−ＣＯＮＨ−ＣＩｌ□−ＣＯＯＩ＋ＮＨ□　　　　　
　　　　　ＣＨ２−Ｓ　−ＣＨ−ＣＯＯＨＣ）１□−Ｃ
００Ｈ本発明においては、上記Ｓ−（１，２−ジカルボキシエ
チル）グルタチオンとして、遊蕩のものあるいは塩を用
いる。塩としては、４個のカルボキシル基のうちの全て
または一部がナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ
金属塩またはアミン塩となっているもの、アミン基か塩
酩、硫酸、酢酸、マレイン酸などの塩となっているもの
か用いられる。

Ｓ−（１，２−ジカルボキシエチル）グルタチオンは、
酵母、牛水晶体などに存在するのて、そこから適宜の抽
出、精製手段により該成分を単離することかできる。ま
た合成的手法によっても製造することかてきる。後者の
場合は、たとえば、マレイン酸の水溶液にグルタチオン
を加えて加熱反応させればよい。

５−（１，２−ジカルボキシエチル）グルタチオンは、
生体内にも存在するペプチドであり、安全性か高い。

本発明の有効成分であるＳ−（１，２−ジカルボキシエ
チル）グルタチオンは、それ単独で抗血液凝固剤または
抗血栓剤として用いることもできるか、他の公知の抗血
液凝固剤と併用しても差支えない。

本発明の有効成分は、そのままあるいは生理食塩水など
に溶解して血液中に添加する。

生体に投与するときは、必要に応し安定化剤、乳化剤、
等張化剤、保存剤、その他の添加剤を用い、溶液、懸濁
液、乳濁液の形態て静注または皮下性に供される。場合
により、経口投与とすることもてきる。投与量は、注射
の場合て成人について１日当り１０〜８００　ｔｎｇ程
度とすることが多いか、必ずしもこの範囲に限られるも
のてはない。

本発明の抗血液凝固剤は、赤血珠沈降反応検査をはじめ
とする各種血液検査、輸血時または体外循環時の血液凝
固阻止、保存血液の凝固防止などの目的に好適に用いる
ことがてきる。また、血栓性脳軟化症、閉塞性動脈硬化
症、血栓性心内膜炎、血栓性静脈炎、肺栓塞、血小板減
少性紫斑病などの予防剤または治療剤としての応用もて
きる。

作　　　用現在、血液の凝固には血漿中にある１０種以上の血液凝
固因子と呼ばれるものか関与していることか知られてい
る。カルシウムは血液凝固因子の１ってあり、ローマ字
命名法ではカルシウムは■因子と呼ばれている。

前述したシュウ酸やクエン酸あるいはこれらの塩か抗血
液凝固作用を示すのは、上述の血液凝固因子であるカル
シウムと結合して凝固因子を不活性化させるためである
とされており、本発明のＳ−（１，２−ジカルボキシエ
チル）グルタチオンまたはその塩の血液凝固阻止効果も
、この物質が１分子当り４個のカルボキシル基を有して
いることを考えると、シュウ酸やクエン酸あるいはこれ
らの塩と同様の機構（カルシウムの捕捉）によるものと
も考えられる。

しかしなから、本発明の有効成分と類似の化学構造を有
しかつ１分子中に複数のカルボキシル基を持っているグ
ルタチオン、５−（２−カルボキシ−ｎ−プロピル）グ
ルタチオン、５−（１，２−ジカルボキシエチル）−Ｌ
−システィンが抗血液凝固作用を有しないかあるいはそ
の作用か小さいことを考えると、本発明の５−（１，２
−ジカルボキシエチル）グルタチオンまたはその塩は、
カルシウム捕捉に基く機構以外の機構により抗血液凝固
作用を発揮する可能性もある。

実施例次に実施例をあげて本発明をさらに説明する。

〈試料）実施例１〜２次式で示されるＳ−（１，２−ジカルボキシエチル）グ
ルタチオン：下記の方法により、酵母から抽出したもの
（実施例１）および合成法により製造したもの（実施例
２）。

Ｎ　Ｈ２ＣＨ２−Ｓ　−ＣＨ−Ｃ００１１ＣＨ２−Ｃ０
０Ｉ＋（実施例１）酵母をＶｉｂｒｏｇｅｎ　（Ｃｅｌｌ　Ｍｉｌｌ　Ｅｄ
ｍｏｎｄ　Ｒｉ；ｈｌｅｒ。

Ｔｉｂｉｎｇｅｎ）によりガラス玉で膜を破壊した後、
メタノールにより除蛋白および抽出操作を行い、この抽
出液をＤＥＡＥ−３ｅｐｈａｄｅｘ処理することにより
取得した。

（実施例２）マレイン酸１．１４ｇ（９，８２Ｘ　１０−’Ｍ　）の
水溶液３０ｍ１にグルタチオン３ｇ　（９，７６Ｘ　１
０−’Ｍ　）を加え、この水溶液を５０〜６０°Ｃの水
浴上で１０分間加温攪拌後、室温で２４時間撹拌した。

その抜水を留去してオイル性残渣を得た。この残渣にエ
タノール−アセトンを加え、固化した後、エタノール−
アセトンてよく洗浄し、減圧下乾燥して白色固体を得た
。収量は３．８ｇ　（収率９３％）であった。水−エタ
ノールて再結晶して融点１５０−１５２℃（分解）の製
品を得た。

比較例１次式で示されるグルタチオン二市阪品を使用。

Ｎｌｌ□　　　　　　Ｃｌ１２−３Ｒ比較例２次式て示される５−（２−カルボキシ−ｎ−プロピル）
クルタチオン：玉ネギをおろし金でおろし、水を加えホ
モジナイズした後、沸騰水またはメタノール中て除蛋白
および抽出操作を行い、この抽出液をＤｏｗｅｘ　１−
２　（Ｈ”、　ｌｘ８　ｃｍ）に吸着したものを２ＮＮ
Ｈ：ｌで溶出させ、減圧乾固したものを使用。

Ｎ　Ｈ２Ｓ　−Ｃ！Ｉ　２−　Ｃｔｌ　−Ｃ００Ｈミ［
１３比較例３次式で示されるＳ−（１，２−ジカルボキシエチル）−
Ｌ−システインニ市販品を使用。

Ｎｆｌ□−ＣＨ−ＣＯＯＨ１Ｈ・Ｓ　−ＣＩ　−ＣＯＯＨＣＩ□−〇　００　Ｈ比較例４エチレンシアミンテトラ酢酸二ナトリウム二市販品を使
用。

比較例５シュウ酸ナトリウム：市販品を使用。

比較例６クエン酸ナトリウム二市版品を使用。

く血液凝固面間の測定法〉家兎の血液を用い、血液凝固面間をＬ　ｅｅ−Ｗｈｉｔ
ｅ法に従い、次のようにして測定した。

すなわち、（ａ）３７°Ｃの恒温水槽に内径８ｍＩｎ、
長さ１．０　ｃ　ｍの小試験管をセットしておき、（ｂ
）予め実施例および比較例の抗血液凝固剤をそれぞれ５
％グルコース液て希釈して所定の濃度に調整し、２．５
ｍｌ容量のプラスチック製注射器にそれぞれ０．２［１
１１を入れた状態で家兎の耳静脈から血液２１］１１を
採取し、注射器中に血液が入りはしめると同時にストッ
プウォッチを始動し、（ｃ）注射針をはずして２木の小
試験管の壁に沿って泡立たぬように静かに１ｍｌずつ流
し込み、（ｄ）３７℃の温水中に静置し、採血５分後か
ら１本の試験管を１分毎に斜に倒してみて、もはや流動
しなくなった時点からもう１本の試験管を同様に倒しな
がら凝血を観察した。採血より゛第２の試験管の凝血完
了までの時間を血液凝固時間とした。

〈実験結果〉血液凝固時間の測定結果を第１表に示す。

なお正常の家兎の血液凝固時間、および５％グルコース
液のみ添加した場合の血液凝固時間は、いずれも４〜５
分てあった。

第１表　　血液凝固時間（分）第１表から、本発明のＳ−（１，２−ジカルボキシエチ
ル）グルタチオンは、２ｇｍｏｌｅ／ｍｌ血液の添加量
て血液凝固時間が１０分以上になり、抗血液凝固剤とし
てすぐれた薬剤であることかわかる。

これに対し、グルタチオンには抗血液凝固作用は認めら
れず、Ｓ−（２−カルボキシ−ｎ−プロピル）グルタチ
オンは、１０分以上血液を凝固させないためには５０　
ｇｍｏｌｅ／ｍｌ血液と極めて多°量の添加か必要てあ
り、また本発明のＳ−（１，２−ジカルボキシエチル）
グルタチオンと同じＳ−１，２−ジカルボキシエチル基
をもつＳ−（１゜２−ジカルボキシエチル）−Ｌ−シス
ティンは、１０分以上血液を凝固させないためには２０
用ｍｏｌｅ／ｍｌ血液の添加が必要てあり、抗血液凝固
作用ははるかに劣っていた。

また従来抗血液凝固剤として使用されているエチレンジ
アミンテトラ酢酸二ナトリウム、シュウ酸ナトリウムお
よびクエン酸ナトリウム、特に最初の三者は、比較的す
ぐれた抗血液凝固作用を示したか、本発明の５−（１，
２−ジカルボキシエチル）グルタチオンの抗血液凝固作
用はこれらよりもさらにすぐれていることかわかる。

〈安全性試験〉Ｓ−（１，２−ジカルボキシエチル）グルタチオンを体
重１５０〜２００ｇの９９８１０匹に３００　ｍｇ／ｋ
ｇ宛静注し、急性毒性を１０日間にわたって観察したが
、カルシウム低下による強直性痙呈は見られなかった。

発明の効果本発明のＳ−（１，２−ジカルボキシエチル）グルタチ
オンまたはその塩は、一般に抗血液凝固剤として使用さ
れているエチレンジアミンテトラ酢酸、シュウ酸、クエ
ン酸あるいはこれらの塩よりも少ない添加量て血液凝固
を防止するのて、抗血液凝固剤として有用である。

また本発明品のＳ−（１，２−シカルボキシエチル）グ
ルタチオンまたはその塩は、生体内にも存在する毒性の
小さいペプチドであり、従って検査用血液、輸血用血液
、保存用血液の凝固防止の目的だけてなく、血栓症の予
防剤または治療剤としての使用も可能であり、応用範囲
が広い。

Claims

【特許請求の範囲】

１、Ｓ−（１，２−ジカルボキシエチル）グルタチオン
またはその塩を有効成分とする抗血液凝固剤。