RU2050156C1

RU2050156C1 - Вещество для лечения воспалительных или аллергических заболеваний

Info

Publication number: RU2050156C1
Application number: SU904830646A
Authority: RU
Inventors: Охмори Синдзи; Огата Казуми; Сакау Такахиро
Original assignee: Сендзю Фармасьютикал Ко. Лтд.
Priority date: 1989-07-14
Filing date: 1990-07-13
Publication date: 1995-12-20
Also published as: EP0408044A3; ES2055235T3; US5135952A; KR910002437A; EP0408044B1; KR0145412B1; DK0408044T3; ATE89739T1; DE69001722T2; CA2020474C; CA2020474A1; DE69001722D1; EP0408044A2; JPH0348626A; JP2815179B2

Abstract

Изобретение относится к области медицины и касается применения вещества для лечения воспалительных или аллергических заболеваний. Вещество представляет собой

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к полезной нестероидной противовоспалительной и/или антиаллергической композиции. Более конкретно изобретение относится к полезной противовоспалительной и/или антиаллергической композиции, содержащей вещество S (α,β-дикарбоксиэтил)глютатион, который найден в теле млекопитающего, или в виде сложноэфирного производного, или в виде фармацевтически приемлемой соли в качестве активного ингредиента.

Известны различные стероидные и нестероидные противовоспалительные агенты. Хотя стероиды обладают мощной противовоспалительной и антиаллергической активностью, повторное введение больших доз в течение длительного времени вызывает снижение устойчивости к инфекции и ухудшение диабета, вызывает серьезные вредные реакции, которые иногда угрожают жизни. Следовательно, эти стероидные противовоспалительные или антиаллергические лекарства обладают тем недостатком, что при хроническом лечении является существенной предельная осторожность при постоянном контроле клинического течения. С другой стороны, обширный поиск направлен на разработку нестероидных противовоспалительных или антиаллергических лекарств, не приводящих к упомянутым вредным последствиям, но такие нестероидные лекарства не только имеют тенденцию вызывать желудочно-кишечные и другие побочные эффекты, такие как язвы, но они не адекватны по эффективности при сравнении со стероидными аналогами.

Между тем, изобретатели провели обширное исследование среди различных соединений, которые должны были обладать сильными противовоспалительными и противоаллергической активностями, но не вызывают упомянутых побочных эффектов, и неожиданно обнаружили, что S (α,β-дикарбоксиэтил)глютатион, который является веществом, присутствующим в теле млекопитающего, и его некоторые сложноэфирные производные, обладают сильной противовоспалительной и антиаллергической активностями и могут быть использованы в качестве лекарства с высокой безопасностью. Изобретение основано на указанных открытиях.

Следовательно, изобретение относится к противоспалительной и/или антиаллергической композиции, отличающейся тем, что она содержит соединение формулы
HOOC-

CH₂CH₂-CONH-

OH (где R являются одинаковыми или различными и каждый означает атом водорода или низший алкил) или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента.

S=(α,β-Дикаробоксиэтил)глютатион, который является активным ингредиентом фармацевтической композиции изобретения, является веществом, присутствующим в организме животного, которое обнаружили в хрусталике глаза быков, но пока его фармацевтические свойства были мало изучены. Ранее обнаружили, что это соединение обладает антигемоглютинирующей активностью и активностью ингибирования агрегации тромбоцитов.

Ссылаясь на приведенную формулу, R являются одинаковыми или различными и каждый означает атом водорода или низший алкил. Количество атомов углерода в этом низшем алкиле предпочтительно равно 1-10. Углеродная цепь этого алкила может быть линейной, разветвленной или циклической и даже частично циклической. Как таковая алкильная группа включает метил, этил, е-пропил, изо-пропил, н-бутил, трет-бутил, втор-бутил, н-пентил, 1-этилпропил, изо-пентил, бензил и т. п. Соединения изобретения могут быть использованы в различных применениях как в виде свободной кислоты, так и в виде фармацевтически приемлемых солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевой, калиевой и т.п. соли, и соли щелочно-земельных металлов, например кальциевой, магниевой и т.п. соли. Активное соединение, в котором все или часть имеющихся карбоксильных групп образовали соли, могут быть использованы, как требуется в рецептуре фармацевтической композиции изобретения.

В зависимости от цели и необходимости может быть использовано одно или более видов активных соединений изобретения в сочетании.

Активные соединения изобретения могут быть получены по следующему или другим способам. Так как S=(α,β-дикарбоксиэтил)глютатион встречается в дрожжах, бычьем хрусталике глаза и т.д. он может быть экстрагирован и выделен в чистом виде из таких источников с помощью известных способов. Синтетически S=(α,β-дикарбоксиэтил)глютатион может быть получен при взаимодействии эквимолекулярных количеств глютатиона и малеиновой кислоты при выдерживании в воде или водном спирте при повышенной или комнатной температуре в течение 1-2 дня. Подобным образом сложноэфирное производное S=(α, β-дикарбоксиэтил)глютатиона может быть получено при использовании соответствующего моноэфира или диэфира малеиновой кислоты. Все полученные таким образом соединения содержат асимметричный углерод и, как таковые, являются субъектом оптической изометрии. Соединения, используемые в качестве активного ингредиента фармацевтической композиции изобретения, показывают высокие противовоспалительную и антиаллергическую активности при низких концентрациях, как можно будет видеть из примеров 1-3. Кроме того, поскольку соединения согласно изобретению является веществом, присутствующим в организме животного и его сложноэфирным производным, они обладают очень низкой токсичностью и безопасны, как показано в примере 4, и могут быть выгодно использованы в различных формах дозы для лечения и профилактики различных воспалительных и аллергических заболеваний.

Воспалительные заболевания, которые могут быть вылечены этой композицией, включают ревматоидный артрит, спондилезные деформации, остеоартрит, люмбаго, приступы подагры, острый отит среднего уха, цистит, простатит, зубную боль, увеит, синусит и т.п. Композиция также может быть выгодно использована для лечения аллергических заболеваний, например бронхиальной астмы, сенной лихорадки, аллергического ринита, диетарного аллергического гастрита, аллергической диарреи, язвенного колита, стоматита, узелкового периартериита, облитерирующего эндартерита, эндокардита, крапивницы, экземы, контактного дерматита, фликтены, симпатической офтальмии, аллергического конъюктивита и аллергического кератита.

При лечении упомянутых воспалительных и аллергических заболеваний композиции изобретения может быть введена орально или иначе в зависимости от типа и вида заболевания. Формы доз включают рецептуры для наружного применения, такие как глазные капли, капли в нос, капли для уха, мази, кремы, припарки, порошки для вдыхания (типа дустов), аэрозоли, линименты и свечи; оральные рецептуры, такие как растворы, порошки, капсулы, таблетки, крупинки и гранулы и различные препараты для инъекций. Эти рецептуры могут быть изготовлены с помощью обычных фармацевтических процедур. Эти препараты могут быть изготовлены путем смешивания одного или более настоящих соединений с традиционными связующими, дезинтеграторами, смазками, загущающими агентами, стимулирующими резорбцию агентами, поверхностно-активными веществами, изотонизирующими агентами, стабилизаторами, консервантами, эмульгаторами, агентами, регулирующими рН, и другими экципиентами. Дозировка активного ингредиента зависит от возраста и массы пациента, формы дозы, показаний и т.п. Например, при инфекции дозировка для взрослых может быть в интервале от примерно 1 до 100 мг/дозу один раз в день, в дозировке для взрослых при оральном введении составляет примерно 10-1000 мг/дозу несколько раз в день. Для наружного применения лекарство может быть введено в концентрации примерно 0,1-5% (мас./мас.) несколько раз в день, как требуется.

Если нет противоречия целям изобретения, фармацевтические композиции изобретения могут, кроме того, содержать другие противовоспалительные и/или антиаллергические агенты, а также другие медицински эффективные ингредиенты.

П р и м е р 1. Влияние на вызванный каррагинином конъюктивальный отек.

В эксперименте используют самцов крыс Вистар массой около 130 г. Растворяют S=(α,β-дикарбоксиэтил)глютатион (далее называемый ДСЕ-GS) в физиологическом солевом растворе и устанавливают рН 7 хлоридом натрия, вводят в дозе 3, 10 и 30 мг/кг массы крысы через хвостовую вену (контрольная группа: физиологический солевой раствор). ДСЕ-GS диэтиловый эфир натрия, ДСЕ-GS моноэтиловый эфир натрия, ДСЕ-GS ди-н-бутиловый эфир натрия и глютатион (далее упоминаемый как GSH) соответственно вводят в дозах 30 мг/кг (контрольной группе физиологический солевой раствор). Минутой позже инжектируют 50 мкл 1% -ного раствора каррагенина под пальпебральную конъюктиву крысы под пентобарбитальной анестезией. Через 3 ч каждую крысу умерщвляют и изолируют и взвешивают конъюктивальную одеому.

Результаты. ДСЕ-GS ингибируют индуцированную каррагинином конъюктивальную одеому в зависимости от дозы, показывая, что это вещество обладает высокой противовоспалительной активностью. Другие три сложноэфирных производных ДСЕ-GS также в значительной мере ингибируют массу одеомы, показывая их противовоспалительную активность. Например, GSH не показывает противовоспалительного действия. Данные приведены в табл. 1-2.

П р и м е р 2. Ингибирующее действие на выделение гистамина из перитонеального эксудата крыс.

1) Приготовление суспензии перитонеальных клеток крыс.

Используют самцом крыс SD массой 250-280 г. Перитонеальные клетки собирают и изолируют по методике Салливана и др. Во-первых, крысам спускают кровь, умерщвляют декаптацией, и немедленно сбривают волосы на животе, разрезают кожу на несколько сантиметров и вводят в брюшную полость 10 мл маст-клеточной среды (МСМ), используя иглу 18G, выщипывая при этом мышцу пинцетом, после 90-секундного осторожного массажа. Затем открывают живот, чтобы собрать по возможности больше асцитов с помощью шприца Терумо. Асциты, загрязненные кровью, в эксперименте не используют. Асциты наслаивают в поликарбонатную пробирку, содержащую 2 мл 40%-ного Фиколла 400 (Фармациз), растворенного в МСМ, оставляют стоять при комнатной температуре на 30 мин и центрифугируют при 700 об/мин при 4^оС в течение 10 мин. Затем отбирают пипеткой осадок в верхнем слое Фиколла 400 и три раза промывают 7 мл МСМ. Клетки подсчитывают на цитометре Буркера-Турка, и, используя МСМ в качестве разбавителя, готовят клеточную суспензию примерно 10⁵ клеток/мл (суспензию перитонеальных клеток крысы). Маст-клетки идентифицируют окрашиванием внутриклеточных гранул, 0,05%-ным толуидиновым голубым.

2). Выделение гистамина из маст-клеток.

После предварительной инкубации 0,8 мл суспензии перитонеальных клеток крысы в течение 10 мин при 37^оС прибавляют 0,1 мл испытуемого лекарства. Систему инкубируют в течение 5 мин, в конце этого времени прибавляют 0,1 мл 10 мкг/мл соединения 48/80 (Сигма) в солевом физиологическом растворе. После 10 мин инкубации реакционную смесь охлаждают в течение 10 мин в ледяной воде, чтобы прекратить реакцию, и центрифугируют 5 мин при 4^оС при 700 об/мин. Затем определяют гистамин в надосадочном слое с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии по методике Шора и др. частично модифицированной. В контрольных группах количество выделившегося гистамина составило 75% Выделение гистамина, ингибированное ДСЕ-GS, является концентрационно зависимым. Это показывает, что ДСЕ-GS обладает высокой активностью ингибирования дегрануляции (см. табл.3).

П р и м е р 3. Влияние на пассивную анафидаксию спины крысы.

В эксперименте использовали самцов крыс Вистер, весящих около 130 г. Волосы на спине каждой крысы были сострижены ножницами. Антисыворотка крысы была инъецирована подкожно в спину крысы. Через три дня ДСЕ-GS вводили в дозах 3, 10 и 30 мг/кг (контрольным животным физиологический солевой раствор) в хвостовую вену, а через 1 мин вводили 1 мл смеси 50:50 (об./об.) антигена 1% яичного альбумина и 2% голубого Эванса внутривенно, чтобы вызвать пассивную анафилаксию. Через 30 мин крыс умерщвляют и определяют окрашенные площади. Удаляют соответствующие площади и экстрагируют краситель 20 мл формальдегида для определения.

Результаты. ДСЕ-GS ингибирует как площадь окраски, так и количество красителя на спине крысы в зависимости от дозы. Такое ингибирование пассивной анафилактической реакции показывает, что ДСЕ-GS обладает высокой антиаллергической активностью (см. табл.4).

П р и м е р 4. Изучение внутривенной острой токсичности.

Изучение внутривенной острой токсичности ДСЕ-GS проводят на самцах мышей, весящих около 20 г, в группах из 5 особей. Использовали дозы 100, 200, 400, 800 и 1600 мг/кг (общее отношение 2). Все инъекционные растворы устанавливают на рН 7 с помощью 1 н.хлорида натрия. В результате наблюдение в течение 72 ч не показано ни смертности, ни аномального поведения.

Пример синтеза 1. S-(Диэтил- α,β-дикаарбоксиэтил)глютатион натрия.

В 150 мл 30% (об./об.) этанола растворяют 9,2 г глютатиона и 5,6 г диэтилмалеата и устанавливают рН 6 2 н.гидроксидом натрия. Раствор перемешивают 5 ч при 50^оС, в конце этого времени отбирают 2 капли реакционной смеси. К этому образцу прибавляют 1 каплю 0,01 н.иодного аналитического раствора и после подтверждения исчезновения окраски иода вводят газообразный сероводород и оставляют реакционную смесь на ночь. Затем концентрируют реакционную смесь, удаляя сероводород, и растворяют остаток в 150 мл воды с последующим растворением 6,6 г моногидрата ацетата меди, в результате чего начинает постепенно выделяться медная соль. Этот осадок отделяют фильтрацией, промывают и суспендируют в 150 мл. Затем вводят газообразный сероводород при перемешивании для получения сульфата меди. Его отфильтровывают и фильтрат концентрируют, остаток растворяют в 200 мл этанола. Устанавливают рН раствора равным 6 при постепенном добавлении гидроксида натрия-этанола, в результате осаждаются белые кристаллы. Кристаллы отфильтровывают, промывают этанолом, растворяют в воде и концентрируют по возможности полно. К остатку прибавляют этанол для перекристаллизации и отфильтровывают выпавшие кристаллы, их сушат. По описанной выше процедуре получают 8,5 г S-(диэтил-α, β-дикарбоксиметил)глютатион натрия. ТСХ (силикагель) Rf 0,28 (н-бутанол-уксусная кислота-вода 4:1:1).

Пример синтеза 2. S-(ди-н-бутил-α,β-дикарбоксиэтил)глютатион натрия.

В 150 мл 50% (об./об.) растворяют 9,2 г глютатиона и 7,5 г ди-н-бутилмалеата, реакцию ведут по методике примера 1. После удаления растворителя остаток растворяют в 150 мл воды, затем прибавляют 100 мл 3,3%-ного водного раствора ацетата меди, в результате выделяется нерастворимая медная соль. Этот осадок отделяют фильтрованием, промывают, суспендируют в 300 мл 50% (об. /об. ) этанола и барботируют в раствор сероводород при перемешивают, чтобы превратить его в сульфид меди. Этот осадок отфильтровывают и концентрируют фильтрат для удаления сероводорода. Остаток повторно растворяют в 150 мл 50% (об. /об.) этанола, устанавливают рН 6 2н.гидроксидом натрия и концентрируют. К концентрату прибавляют этанол, ацетон и изопропиловый эфир, отфильтровывают образовавшиеся белые кристаллы, промывают их ацетоном и сушат. Эта процедура дает 9,7 S-(ди-н-бутил-α,β-дикарбоксиэтил)глютатиона натрия, который является гигроскопичным. ТСХ (силикагель) Rf 0,40 (н-бутанол-уксусная кислота-вода 4:1:1).

Пример синтеза 3. S-(ди-н-бутил-α,β-дикарбоксиэтил)глютатион кальция.

Работают по методике примера синтеза 2, с тем исключением, что используют карбонат кальция вместо 2 н.гидроксида натрия. К концентрированному остатку прибавляют ацетон, получают белые кристаллы, которые затем перекристаллизовывают из этанола-ацетона, получают 7,5 г S-(ди-н-бутил-α, β-дикарбоксиэтил)глютати- она кальция.

Пример синтеза 4. S-(моноэтил-α,β-дикарбоксиэтил)глютатион натрия.

В 150 мл воды растворяют 9,2 г глютатиона и 4,5 г моноэтилмалеата, устанавливают рН раствора равным 6 с помощью 2 н.гидроксида натрия. Затем повторяют процедуру примера синтеза 1, реакционную смесь концентрируют и отфильтровывают белые кристаллы, выпавшие при добавлении этанола, растворяют в воде, концентрируют и перекристаллизовывают из этанола. Выход 8,0 г ТСХ (силикагель) Rf 0,17 (н-бутанол-уксусная кислота-вода 4:1:1).

Пример рецептуры 1.

Таблетки для орального введения, мг:
ДСЕ-GS 100
Лактоза 80
Крахмал 17
Стеарат магния 3
Используя перечисленные ингредиенты для таблеток, производят таблетки по традиционной фармацевтической процедуре. При необходимости таблетки могут быть покрыты сахаром.

Пример рецептуры 2.

Раствор для инъекций, г:
ДСЕ-GS 1
Глюкоза 5
Карбонат натрия до получения
Дистиллированная вода для инъекций 100 мл.

В примерно 70 мл дистиллированной воды для инъекций растворяют 1 г ДСЕ-GS и устанавливают рН раствора равным 6,5 постепенным прибавлением карбоната натрия. Затем растворяют глюкозу и доводят раствор до 100 мл и фильтруют через бактериальный фильтр. Фильтратом аспетически заполняют, разделив на 2 порции, стеклянные ампулы, которые затем запаивают, чтобы получить препараты для инъекций.

Пример рецептуры 3.

Мазь, г:
ДСЕ-GS диэтиловый
эфир натрия 20
Белый петролатум 250
Стеариловый спирт 200
Пропиленгликоль 120
Полиоксиэтиленгидри-
рованное касторовое
масло 60-40
Моностеарат глицерина 10
Метилоксибензоат 1
Пропил-п-оксибензоат 1
Чистая вода до получения
Всего 1000
Пример рецептуры 4.

Офтальмологический раствор, (мас./об.):
ДСЕ-GS 1,0
Борная кислота 0,7
Ацетат натрия 0,2
Хлорид натрия 0,5
Метил-п-оксибензоат 0,02
Хлорбутанол 0,3
10% (мас./об.) гидроксид
натрия до получения
Стерильная очищенная
вода 100 мл с рН 6,5
Указанные ингредиенты смешивают и растворяют, а затем фильтруют через бактериальный фильтр, получают офтальмологический раствор (15 мл на упаковку).

Claims

Применение соединения общей формулы

где R одинаковые или различные и каждый водород или низший алкил с числом атомов углерода от 1 до 10,
или его приемлемой соли в качестве вещества для лечения воспалительных или аллергических заболеваний.