JPS59104325A - ヒト白血病ウイルスの遺伝子ｒｎａに相補性を示すｄｎａ - Google Patents
ヒト白血病ウイルスの遺伝子ｒｎａに相補性を示すｄｎａInfo
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- JPS59104325A JPS59104325A JP57214287A JP21428782A JPS59104325A JP S59104325 A JPS59104325 A JP S59104325A JP 57214287 A JP57214287 A JP 57214287A JP 21428782 A JP21428782 A JP 21428782A JP S59104325 A JPS59104325 A JP S59104325A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
に相補性を示すＤ Ｎ Ａおよび該ＤＮＡを含む組換え
体ＤＮＡに関する。
体ＤＮＡに関する。
ヒト白血病ウィルス、とくに成人Ｔ細胞白血病ウィルス
（以下ＡＴＬＶと略記する）はヒト成人Ｔ細胞白血病の
原因ウィルスとして考えられているレトロウィルスであ
り、白血病患者の腫瘍細胞および細胞株において染色体
中に組込まれて存在することがわかっている（ Ｍ．
Ｙｏｅｈｉｄａθｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．８ｃｉ。ＵＳＡ？９，２０３１。
（以下ＡＴＬＶと略記する）はヒト成人Ｔ細胞白血病の
原因ウィルスとして考えられているレトロウィルスであ
り、白血病患者の腫瘍細胞および細胞株において染色体
中に組込まれて存在することがわかっている（ Ｍ．
Ｙｏｅｈｉｄａθｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．８ｃｉ。ＵＳＡ？９，２０３１。
１９８２）。従ってヒト白血病ウィルスの構造を解明す
ることは、ヒト白血病リンパ腫の診断。
ることは、ヒト白血病リンパ腫の診断。
治療，予防等に大きく貢献すると考えられている。現在
までに、ヒト白血病ウィルスの構造に関しては、Ｇａｌ
ｌＯらの報告（ Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ。
までに、ヒト白血病ウィルスの構造に関しては、Ｇａｌ
ｌＯらの報告（ Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ。
Ｓｃｉ． ＵＳＡ＋ ７ ９，１ ２ ９ １〜１２
９４．１９８２）があるが、との報告では、Ｈ Ｔ Ｔ
Ｊ Ｖと称するヒト白血病ウィルスのうちの２５のアミ
ノ酸配列を解明しているにすぎない。
９４．１９８２）があるが、との報告では、Ｈ Ｔ Ｔ
Ｊ Ｖと称するヒト白血病ウィルスのうちの２５のアミ
ノ酸配列を解明しているにすぎない。
本発明者らは、ヒト白血病ウィルス遺伝子について研究
を重ねた結果、ＡＴＬ’Ｖの遺伝子ＲＮＡを鋳型として
合成したＤＮＡのクローン化ならびに該ＤＮＡの全塩基
配列の解読に成功し、本発明を完成するに至った。
を重ねた結果、ＡＴＬ’Ｖの遺伝子ＲＮＡを鋳型として
合成したＤＮＡのクローン化ならびに該ＤＮＡの全塩基
配列の解読に成功し、本発明を完成するに至った。
以下本発明の詳細な説明する。
本発明はヒト白血病ウィルスの遺伝子Ｒ Ｎ Ａに相補
性を示すＤ Ｎ Ａおよび該Ｄ Ｎ Ａを組込んだ組換
え体Ｄ Ｎ Ａに関する。
性を示すＤ Ｎ Ａおよび該Ｄ Ｎ Ａを組込んだ組換
え体Ｄ Ｎ Ａに関する。
本発明のヒト白血病ウィルスの遺伝子に相補性を示すＤ
ＮＡとしては、成人Ｔ細胞白血病患者の白血病細胞、こ
れらの白血病細胞よシ樹立された細胞株、ヒト白血病ウ
ィルスの感染を受けた細胞またはその培養細胞から抽出
したＤＮＡおよびヒト白血病ウィルスの遺伝子Ｒ Ｎ
Ａを精製し、逆転写酵素などによって合成した二重鎖Ｄ
ＮＡなどがあげられる。具体的に好適な例としては、成
人Ｔ細胞白血病患者の末梢血より得られる成人Ｔ細胞白
血病細胞から抽出して得られ、ＡＴＫ−１と名付けた９
０３２の塩基対からなるＤ １．Ｊ Ａがあげられる。
ＮＡとしては、成人Ｔ細胞白血病患者の白血病細胞、こ
れらの白血病細胞よシ樹立された細胞株、ヒト白血病ウ
ィルスの感染を受けた細胞またはその培養細胞から抽出
したＤＮＡおよびヒト白血病ウィルスの遺伝子Ｒ Ｎ
Ａを精製し、逆転写酵素などによって合成した二重鎖Ｄ
ＮＡなどがあげられる。具体的に好適な例としては、成
人Ｔ細胞白血病患者の末梢血より得られる成人Ｔ細胞白
血病細胞から抽出して得られ、ＡＴＫ−１と名付けた９
０３２の塩基対からなるＤ １．Ｊ Ａがあげられる。
ＡＴＫ−１の制限酵素地図および全塩基配列は第１図お
よび第１表に示すとおりであり、次の５つの重要な部分
からなる。
よび第１表に示すとおりであり、次の５つの重要な部分
からなる。
（＋ｌＬＴＲ：ウイルス遺伝子両端に存在し、ウィルス
の増殖の制御に必須で、かつｉ４ｌ胞の染色体ＤＮＡへ
の組込みにも重要な役割を担っている遺伝子。
の増殖の制御に必須で、かつｉ４ｌ胞の染色体ＤＮＡへ
の組込みにも重要な役割を担っている遺伝子。
この遺伝子は７５４塩基対よりなる。
（２） ｇａｇ蛋白遺伝子：
ウィルス粒子の内部構造を構成する蛋白質の前駆体ポリ
ペプチドをコードする遺伝子で、１２９０塩基対よりな
る。
ペプチドをコードする遺伝子で、１２９０塩基対よりな
る。
（３１ ｐｏｌ遺伝子
逆転写酵素をコードする遺伝子で、２６８８塩基対より
なる。
なる。
（４） ｅｎｖ遺伝子
ウィルスの感染能を規定するウイルス粒子の表面の糖蛋
白質をコードする遺伝子で、１４６４塩基対よりなる。
白質をコードする遺伝子で、１４６４塩基対よりなる。
（５１ ｐＸ−Ｌ ｐＸ−［［＋ ｐＸ−１！［およ
びｐＸ−ＩＶ現在のところ役割不明の遺伝子で、それぞ
れ２９７，２６１，３３３および７３５塩基対よりなる
。
びｐＸ−ＩＶ現在のところ役割不明の遺伝子で、それぞ
れ２９７，２６１，３３３および７３５塩基対よりなる
。
上記５種の塩基配列は、それぞれ下記のごとき用途が期
待される。
待される。
ｉｌｌＬＴＲ：
ウィルスの増殖に必須で、細胞ＤＮＡへの組込みに関与
しているので、このＬＴＲＪ） Ｎ 、Ａを探針（ｐｒ
ｏｂｅ）として、成人Ｔ細胞白血病の診断に用いること
ができる。
しているので、このＬＴＲＪ） Ｎ 、Ａを探針（ｐｒ
ｏｂｅ）として、成人Ｔ細胞白血病の診断に用いること
ができる。
（２１ ｇａｇ蛋白遺伝子：
ウィルス蛋白としては最も大量に作られるので抗体価も
抗原も検出し易く、成人′ｒ細胞白血病の診断に用いる
ことができる。
抗原も検出し易く、成人′ｒ細胞白血病の診断に用いる
ことができる。
（３１ ｐｏｌ遺伝子：
逆転写酵素をコードする遺伝子であるから、この遺伝子
に対する特異的阻害剤を開発すれば、ウィルス感染、拡
散の防止に役立つ。
に対する特異的阻害剤を開発すれば、ウィルス感染、拡
散の防止に役立つ。
１４） ｅｎｖ遺伝子：
ウィルス感染性を決める糖蛋白をコードするので、ウィ
ルス感染の予防、白血病細胞の特異的傷害、ウィルス感
染の診断などに最も期待がもてる。
ルス感染の予防、白血病細胞の特異的傷害、ウィルス感
染の診断などに最も期待がもてる。
第１図に示すように、ＡＴＫ−１は制限酵素Ｐｅｔ ｌ
、 Ｈｌｎｄ ■、 ＸｈＯＩおよびＢａｍ ＨＩ
に対してそれぞれ５．３．１および２個の切断部位を
有する。
、 Ｈｌｎｄ ■、 ＸｈＯＩおよびＢａｍ ＨＩ
に対してそれぞれ５．３．１および２個の切断部位を
有する。
本発明のヒト白血病ウィルス遺伝子に相補性を示すＤＮ
ＡはベクターＤＮＡに組込んだ組換え体ＤＮＡとして採
取することができる。この組換え休Ｄ Ｎ Ａ ｆ：３
供することも本発明の目的の一つである。
ＡはベクターＤＮＡに組込んだ組換え体ＤＮＡとして採
取することができる。この組換え休Ｄ Ｎ Ａ ｆ：３
供することも本発明の目的の一つである。
本発明の組換え体ＤＮＡは、成人Ｔ細胞白血病患者の成
人Ｔ ＃ｌｌＩ胞白血病細胞これらの白血病細胞より樹
立された細胞株、あるいはウィルス感染を受けた細ｊ泡
またはこの細胞の培養細胞からＤ Ｎ Ａを抽出し、制
限酵素によりウィルス遺伝子を切り出し、Ｄ Ｎ Ａ組
換え技術によりベクターＤＮＡに挿入することによって
得ることができる。
人Ｔ ＃ｌｌＩ胞白血病細胞これらの白血病細胞より樹
立された細胞株、あるいはウィルス感染を受けた細ｊ泡
またはこの細胞の培養細胞からＤ Ｎ Ａを抽出し、制
限酵素によりウィルス遺伝子を切り出し、Ｄ Ｎ Ａ組
換え技術によりベクターＤＮＡに挿入することによって
得ることができる。
成人Ｔ細胞白血病細胞は成人ＴＩＶＩＢ胞白血病患者の
末梢血よりフィコールを用いた遠心法により赤血球から
分離して得られる（ Ａ、 Ｂｏｙｕｍ ：５ｃａｎｄ
、’Ｊ、 Ｃ１１ｎ、Ｌａｂ、 Ｉｎｖｅｓｔ、 ２１
９７（１９６８））。
末梢血よりフィコールを用いた遠心法により赤血球から
分離して得られる（ Ａ、 Ｂｏｙｕｍ ：５ｃａｎｄ
、’Ｊ、 Ｃ１１ｎ、Ｌａｂ、 Ｉｎｖｅｓｔ、 ２１
９７（１９６８））。
まフｙヒト白血病ウィルスの遺伝子を持つ細胞株は、成
人Ｔ細胞白血病患者より得られる白血病細胞をＴ細胞増
殖促進因子（ＴＣＧＦ） の存在下長期培養を行うＣ
Ｂ、 Ｊ、 ＰＯｌｆｌｌＳＺ ｅｔａｌ、＋Ｐｒｏｃ
、 ＪＪａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ 、
７７ 、６８１５（１９８０））か、まだは胎児端帯
血のリンパ球と混合培養することにより得られる〔１．
Ｍｉｙｏｓｈｉ ｅｔ ａｈ。
人Ｔ細胞白血病患者より得られる白血病細胞をＴ細胞増
殖促進因子（ＴＣＧＦ） の存在下長期培養を行うＣ
Ｂ、 Ｊ、 ＰＯｌｆｌｌＳＺ ｅｔａｌ、＋Ｐｒｏｃ
、 ＪＪａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ 、
７７ 、６８１５（１９８０））か、まだは胎児端帯
血のリンパ球と混合培養することにより得られる〔１．
Ｍｉｙｏｓｈｉ ｅｔ ａｈ。
Ｎａｔｕｒｅ＋ ２９４７７０（１９８１）〕。またウ
ィルス感染を受けた細胞は、ヒト白血病ウィルスを産生
ずる細胞とヒトリンパ球を混合培養することによっても
得られる［ Ｎ、 Ｙａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ、。
ィルス感染を受けた細胞は、ヒト白血病ウィルスを産生
ずる細胞とヒトリンパ球を混合培養することによっても
得られる［ Ｎ、 Ｙａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ、。
５ｃｉｅｎｃｅ 、 ２１７ 、７３７（１９８２）〕
。
。
上記のようにして得られるヒト白血病ウィルス遺伝子を
有する細胞を破壊し、フェノールなどでＤＮＡとＲＮＡ
を抽出し、ＲＮａｓｅ で処理してＲＮＡを分解除去
し、該ＤＮＡを抽出する。
有する細胞を破壊し、フェノールなどでＤＮＡとＲＮＡ
を抽出し、ＲＮａｓｅ で処理してＲＮＡを分解除去
し、該ＤＮＡを抽出する。
このＤ Ｎ ＡにＦＣＯＲｌなどの制限酵素を作用させ
て切断し、Ｄ Ｎ Ａ断片をフェノール抽出などにより
精製して得る。制限酵素は、例えばＴｒｉｅＨＣＡ （
ｐＨ７，０〜８．５．１０〜５０ ｍＭ）＋ Ｍｆ／Ｃ
１２（５〜ｌＯｍＭ ） 、 ＮａＣ／？（０−１５
０ｍＭ）＋メルカプトエタノール（θ〜１０ ｍＭ ）
などからなる緩衝液などの存在下に反応させる。
て切断し、Ｄ Ｎ Ａ断片をフェノール抽出などにより
精製して得る。制限酵素は、例えばＴｒｉｅＨＣＡ （
ｐＨ７，０〜８．５．１０〜５０ ｍＭ）＋ Ｍｆ／Ｃ
１２（５〜ｌＯｍＭ ） 、 ＮａＣ／？（０−１５
０ｍＭ）＋メルカプトエタノール（θ〜１０ ｍＭ ）
などからなる緩衝液などの存在下に反応させる。
一方、ベクター１） Ｎ Ａとなるλファージ・シャロ
ン４ＡＤＮＡなどのファージＤ Ｎ Ａ ＋ ｐＢＲ
３２２などの大腸菌プラスミドにＥｃｏＲＩ などの
制限酵素を作用させて切断し、Ｄ Ｎ Ａ断片をアガロ
ースゲル電気泳動などによシ分離イ′６製する。
ン４ＡＤＮＡなどのファージＤ Ｎ Ａ ＋ ｐＢＲ
３２２などの大腸菌プラスミドにＥｃｏＲＩ などの
制限酵素を作用させて切断し、Ｄ Ｎ Ａ断片をアガロ
ースゲル電気泳動などによシ分離イ′６製する。
上記のように同種の制限酵素によシ切ｔｆｌｒされた細
胞ＤＮＡ断片とベクターＤＮＡ断片を混合し、両］）
ｌ（Ａ断片を結合させる。結合反応は、例えばＴｒｉｅ
−ＨＣＡ（ｐＨ７，０−８，５，１０−５０ｒｒＭ’）
。
胞ＤＮＡ断片とベクターＤＮＡ断片を混合し、両］）
ｌ（Ａ断片を結合させる。結合反応は、例えばＴｒｉｅ
−ＨＣＡ（ｐＨ７，０−８，５，１０−５０ｒｒＭ’）
。
ＮａＣ１（５０〜１５０＋ｒ＋Ｍ）、 ＭグＣＩ！２（
５−ｔｏｍＭ）、 ＡＴＰ（０，０５〜０．２ ｍＭ
）などからなる緩衝液の存在下Ｔ４ＤＮＡリガーゼ（Ｔ
４ファージ感染大腸菌より採取することかできる）と一
定時間（１０〜４８時間）。
５−ｔｏｍＭ）、 ＡＴＰ（０，０５〜０．２ ｍＭ
）などからなる緩衝液の存在下Ｔ４ＤＮＡリガーゼ（Ｔ
４ファージ感染大腸菌より採取することかできる）と一
定時間（１０〜４８時間）。
一定温度（８〜１５℃）で反応させることによシ行なう
ことができる。
ことができる。
ベクターＤＮＡとしてファージＤＮＡを用いる場合は、
下記のごとくして組換え体ＤＮＡを採取することができ
る。
下記のごとくして組換え体ＤＮＡを採取することができ
る。
上記のように結合したＤＮＡを、例えばＢｌａｔｔｎｅ
ｒらの方法（５ｃｉｅｎｃｅ ＋ ２０２＋ １２７９
＋１９７８）によってλフアージ粒子と再構成する。
ｒらの方法（５ｃｉｅｎｃｅ ＋ ２０２＋ １２７９
＋１９７８）によってλフアージ粒子と再構成する。
この再構成λフアージ粒子をλファージに感受性の大腸
菌例えばＤ Ｐ ５０ Ｆ ［Ｄ、 Ｐｉｅｍｅｉｅｒ
ｅｔａＪ、、 Ｎａｔｕｒｅ、 ２６３．５２６（１
９７６）］に感染させ寒天培地上に培養し、λファージ
の溶菌プラークを形成させる。とのλフアージ溶菌プラ
ークのある寒天培地上にニトロセルロース膜を密着させ
、ファージの一部をニトロセルロース膜上に移し固定化
する。一方、ヒト白血病ウィルス産生細胞より放出され
るウィルス粒子を用いて、例えば吉田らの方法（Ｐｒｏ
ｃ、 Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、、 Ｓｃｉ、＋ＵＳＡ、
７９ｊ ２０３１−２０３５．１９８２）により（”Ｐ
）で標識したウィルスＲＮ Ａに相補的なｃＤＮＡを合
成する。この（３２Ｐ）−ｃＤＮＡを探針として用い、
ニトロセルロース膜上に固定されたファージＤＮＡと水
素結合によシ会合させた後、オートラジオグラフィーに
よυヒト白血病ウィルスＲＮＡと相補的な遺伝子をもっ
λファージ組換え体を同定する。
菌例えばＤ Ｐ ５０ Ｆ ［Ｄ、 Ｐｉｅｍｅｉｅｒ
ｅｔａＪ、、 Ｎａｔｕｒｅ、 ２６３．５２６（１
９７６）］に感染させ寒天培地上に培養し、λファージ
の溶菌プラークを形成させる。とのλフアージ溶菌プラ
ークのある寒天培地上にニトロセルロース膜を密着させ
、ファージの一部をニトロセルロース膜上に移し固定化
する。一方、ヒト白血病ウィルス産生細胞より放出され
るウィルス粒子を用いて、例えば吉田らの方法（Ｐｒｏ
ｃ、 Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、、 Ｓｃｉ、＋ＵＳＡ、
７９ｊ ２０３１−２０３５．１９８２）により（”Ｐ
）で標識したウィルスＲＮ Ａに相補的なｃＤＮＡを合
成する。この（３２Ｐ）−ｃＤＮＡを探針として用い、
ニトロセルロース膜上に固定されたファージＤＮＡと水
素結合によシ会合させた後、オートラジオグラフィーに
よυヒト白血病ウィルスＲＮＡと相補的な遺伝子をもっ
λファージ組換え体を同定する。
ベクターＤ ｔＪ ＡとしてプラスミドＤ Ｎ Ａを用
いる場合は、下記のごとくして組換え体ＤＮＡを採取す
ることができる。
いる場合は、下記のごとくして組換え体ＤＮＡを採取す
ることができる。
上記のごとく結合したＤＮＡを、Ｅｎｏａらの方法（Ｊ
、 Ｍｏ１． Ｂｉｏｌ、 ９６ 、４９５−５０９．
１９７５）によって形質転換可能な大＋Ｓ菌、たとえば
大腸菌Ｘ １７７６（ＡＴＣＣ３１２４４１Ｍｏ１ｅｃ
ｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇｏｆ ＲｅＣ０ｍ’１）ｌｎ
ａｎｊ ＤＮＡ＋ ５ｃｏｔｔｌ ｗ、 Ａ、 ＆ ｗ
ｏｒｎｅｒ。
、 Ｍｏ１． Ｂｉｏｌ、 ９６ 、４９５−５０９．
１９７５）によって形質転換可能な大＋Ｓ菌、たとえば
大腸菌Ｘ １７７６（ＡＴＣＣ３１２４４１Ｍｏ１ｅｃ
ｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇｏｆ ＲｅＣ０ｍ’１）ｌｎ
ａｎｊ ＤＮＡ＋ ５ｃｏｔｔｌ ｗ、 Ａ、 ＆ ｗ
ｏｒｎｅｒ。
Ｒ，＋ ｅｄｉｔｅｄ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ
、＋ ｐ９９−１１４＋ １９７７）＋大腸菌ｃ ６ｏ
Ｏ［Ｒ，Ｋ、 Ａｐｐｌｅｙａｒｄ ｅｔ ａｌ、。
、＋ ｐ９９−１１４＋ １９７７）＋大腸菌ｃ ６ｏ
Ｏ［Ｒ，Ｋ、 Ａｐｐｌｅｙａｒｄ ｅｔ ａｌ、。
Ｇｅｎｅｎｔｊｃｓ ３９＋ ４４０ （１９５４）：
］を形質転換させる。組換えプラスミドには、ベクター
ＤＮＡ。
］を形質転換させる。組換えプラスミドには、ベクター
ＤＮＡ。
例えば大腸菌プラスミドｐＢＲ３２２のもつβ−ラクタ
マーゼ遺伝子が存在し、従って形質転換した大腸菌はア
ンピシリン耐性を示す。このアンピシリン耐性株の中か
らヒト白血病ウィルスの遺伝子ＲＮＡに相補的な遺伝子
をもつ新規な組換え体ＤＮＡを探し出すには、ファージ
の場合に用いたと同様なニトロセルロース膜を用いた（
３２Ｐ ）−ＣＤＮＡとの会合により行う。
マーゼ遺伝子が存在し、従って形質転換した大腸菌はア
ンピシリン耐性を示す。このアンピシリン耐性株の中か
らヒト白血病ウィルスの遺伝子ＲＮＡに相補的な遺伝子
をもつ新規な組換え体ＤＮＡを探し出すには、ファージ
の場合に用いたと同様なニトロセルロース膜を用いた（
３２Ｐ ）−ＣＤＮＡとの会合により行う。
このようにして得られる組換え体ＤＮＡからヒト白血病
ウィルスの遺伝子ＲＮ Ａに相補的なり Ｎ ＡをＭａ
ｎｉａｔｉｓの方法［Ｃｅ１ｌｓ ｒ ＩＬ ６８７＋
（１９７８）〕によって取出し、ＭａｘａｍとＧ１１ｂ
ｅｒｔの方法（Ｍｅｔｈｏａｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ
、、 ６５ ｒ ４９９（１９８０）］に従って、ＤＮ
Ａ塩基配列を決定することができる。
ウィルスの遺伝子ＲＮ Ａに相補的なり Ｎ ＡをＭａ
ｎｉａｔｉｓの方法［Ｃｅ１ｌｓ ｒ ＩＬ ６８７＋
（１９７８）〕によって取出し、ＭａｘａｍとＧ１１ｂ
ｅｒｔの方法（Ｍｅｔｈｏａｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ
、、 ６５ ｒ ４９９（１９８０）］に従って、ＤＮ
Ａ塩基配列を決定することができる。
本発明のＤ Ｎ Ａならびに組換え体ＤＮＡは下記のご
とくヒト白血病の診断、予防、治療に役立つことが期待
され、非常に有用である。
とくヒト白血病の診断、予防、治療に役立つことが期待
され、非常に有用である。
（１１組換え体のすべてまたは一部のＤＮＡを利用して
ヒト白血病リンパ腫およびウィルス感染の診断方法を確
立する。
ヒト白血病リンパ腫およびウィルス感染の診断方法を確
立する。
（２）全塩基配列よりウィルスが作る抗原蛋白のアミノ
酸配列を推定し、すべて棟だけ一部のアミノ酸配列を含
むペプチドまたは蛋白質の合成・量産を可能にする。
酸配列を推定し、すべて棟だけ一部のアミノ酸配列を含
むペプチドまたは蛋白質の合成・量産を可能にする。
（３）組換え体に挿入されメこＤＮＡのすべてまたは一
部を他のベクターＤ Ｎ Ａに再挿入し、細菌まだは真
核イ用胞中で増殖を増巾させることによシ、ウィルス抗
原蛋白の量産を可能にする。
部を他のベクターＤ Ｎ Ａに再挿入し、細菌まだは真
核イ用胞中で増殖を増巾させることによシ、ウィルス抗
原蛋白の量産を可能にする。
（４）２項および３項で産生されるペプチドあるいは蛋
白質を、それ自身あるいはそれらに対して調製した抗体
を利用してヒト白血病の診断、治療、予防を可能にする
。
白質を、それ自身あるいはそれらに対して調製した抗体
を利用してヒト白血病の診断、治療、予防を可能にする
。
以下本発明の実施例を示す。
実施例１
成人Ｔ細胞白血病患者より検査用に採血された末梢血５
ｄに抗凝固剤としてヘパリン注射液０、１ ｒＲｌ ヲ
加えたＬ−（＊ｚのフィコール・コンレイ溶液層（第一
化学社製）の上に静かに積層し、１５００ ｒｐｍ 、
３０分間遠心することにより、赤血球よシ分離された
白血病細胞（約ｌＯ）を分取した。得られた白血病細胞
に１％の５ＤＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）を加えて溶
解し、ブロテイナーゼＫ（メルク社製）２００μｆ／ｍ
ｌを加えて、４５℃、２時間インキュベートする。
ｄに抗凝固剤としてヘパリン注射液０、１ ｒＲｌ ヲ
加えたＬ−（＊ｚのフィコール・コンレイ溶液層（第一
化学社製）の上に静かに積層し、１５００ ｒｐｍ 、
３０分間遠心することにより、赤血球よシ分離された
白血病細胞（約ｌＯ）を分取した。得られた白血病細胞
に１％の５ＤＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）を加えて溶
解し、ブロテイナーゼＫ（メルク社製）２００μｆ／ｍ
ｌを加えて、４５℃、２時間インキュベートする。
続いて３回のフェノール抽出を行い、約０．５ Ｍｆｌ
の高分子ＤＮＡを得た。
の高分子ＤＮＡを得た。
得られたＤＮＡ２５０μＶを１０ｍＭＴｒｉｅ−ＨＣｌ
、 ６ ｍＭ ＭｆＣ１２，５０ｍＭＮａＣｌおよび６
ｍＭメルカプトエタノールからなる緩衝液（ｐＨ７，５
）に溶解し、１００単位のＥＣ０ＲＩ （宝酒造社販売
）を加え、１６時間、３７℃で反応し、２回のフェノー
ル抽出を行い、蛋白を除きＤＮＡ′＠：精製した。得ら
れるＤＮＡを１チのアガロースゲル電気泳動により分離
し、分子の大きさが約１１，０００ ′〜１５
，０００塩基対に相当するＤＮＡ断片を含む両分よシ、
フェノールを用いてＤＮＡを溶出回収し、フェノール抽
出によシネ鈍物を除き、Ｄ Ｎ Ａを精製する。このよ
うにして約２０μＶの細胞ＤＮＡ断片を得た。
、 ６ ｍＭ ＭｆＣ１２，５０ｍＭＮａＣｌおよび６
ｍＭメルカプトエタノールからなる緩衝液（ｐＨ７，５
）に溶解し、１００単位のＥＣ０ＲＩ （宝酒造社販売
）を加え、１６時間、３７℃で反応し、２回のフェノー
ル抽出を行い、蛋白を除きＤＮＡ′＠：精製した。得ら
れるＤＮＡを１チのアガロースゲル電気泳動により分離
し、分子の大きさが約１１，０００ ′〜１５
，０００塩基対に相当するＤＮＡ断片を含む両分よシ、
フェノールを用いてＤＮＡを溶出回収し、フェノール抽
出によシネ鈍物を除き、Ｄ Ｎ Ａを精製する。このよ
うにして約２０μＶの細胞ＤＮＡ断片を得た。
一方５０μＶのλファージ・シャロン４ＡＤ Ｎ Ａ
［Ｆ、 Ｒ，Ｂ１ａｔｔｎｅｒ＋５Ｏ１６ｎＣｅ＋ １
９６ ＋ １６１（１９７７）］を１００μｌの上記緩
衝液に溶解し、断される。これらの断片を１チのアガロ
ースゲル電気泳動により分離し、分子の大きい方から２
本のバンドを切り出し、前記と同様にＤＮＡを回収した
。２本のバンドをあわせて約１５μ２のファージＤＮＡ
Ｉ所片が得られた。
［Ｆ、 Ｒ，Ｂ１ａｔｔｎｅｒ＋５Ｏ１６ｎＣｅ＋ １
９６ ＋ １６１（１９７７）］を１００μｌの上記緩
衝液に溶解し、断される。これらの断片を１チのアガロ
ースゲル電気泳動により分離し、分子の大きい方から２
本のバンドを切り出し、前記と同様にＤＮＡを回収した
。２本のバンドをあわせて約１５μ２のファージＤＮＡ
Ｉ所片が得られた。
上記のごとくして得られた細胞ＤＮＡ１１，１７片約１
μ２とシャロン４Ａ ＤＮＡ断片約２μ２とを５０
ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１０ｍＭＭｆＣ１２、０，１
ＭＮａＣＡ！および０．１ ｍＭ Ａ Ｔ Ｐｄ＝らな
る緩衝液（ｐＨ７，５）４０μ！に加え、さらに３単位
のＴ ４ Ｄ Ｎ Ａリガーゼ（Ｂｅｔｈ、ｅｓｄａ
Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（以下Ｂ
ＲＬという）社製〕を加えて１２°Ｃで１８時間以上反
応させた。
μ２とシャロン４Ａ ＤＮＡ断片約２μ２とを５０
ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１０ｍＭＭｆＣ１２、０，１
ＭＮａＣＡ！および０．１ ｍＭ Ａ Ｔ Ｐｄ＝らな
る緩衝液（ｐＨ７，５）４０μ！に加え、さらに３単位
のＴ ４ Ｄ Ｎ Ａリガーゼ（Ｂｅｔｈ、ｅｓｄａ
Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（以下Ｂ
ＲＬという）社製〕を加えて１２°Ｃで１８時間以上反
応させた。
反応液をＢｌａｔ ｔｎｅｒらの方法によってλフアー
ジ粒子と再構成する。この再構成λファージを指示菌で
ある大腸菌ＤＰ５０Ｆと共に寒天培地（トリプト７１０
９／Ｉ１．ｆミジ７５０ ｍｙ／ｌ ＋ジアミノピメリ
ン酸ｓ ｏ ｍｅ／ｌ 、 ＮａＣＡ！ ２．ｓ ｙ
／ｌ 。
ジ粒子と再構成する。この再構成λファージを指示菌で
ある大腸菌ＤＰ５０Ｆと共に寒天培地（トリプト７１０
９／Ｉ１．ｆミジ７５０ ｍｙ／ｌ ＋ジアミノピメリ
ン酸ｓ ｏ ｍｅ／ｌ 、 ＮａＣＡ！ ２．ｓ ｙ
／ｌ 。
寒天１０□、ｐＨ７，５）上に加え培養した゛。
この寒天培地上にニトロセルロース膜（Ｓ＆Ｓ社販売）
を密着させることにより溶菌プラーク中のファージの一
部をニトロセルロース膜上に移し、加熱（ｓｏ℃、１２
０分）することによりファージＤ Ｎ Ａを固定した。
を密着させることにより溶菌プラーク中のファージの一
部をニトロセルロース膜上に移し、加熱（ｓｏ℃、１２
０分）することによりファージＤ Ｎ Ａを固定した。
一方ヒト白血病細胞ウィルスを産生ずる細胞株Ｍ Ｔ
−２（１，Ｍｉｙｏｓｈｉ、 Ｎａｔｕｒｅ、 ２９４
＋ ７７（ｂ（１９８１））の培養液約５００ｍよ＃）
精製したヒト白血病ウィルス粒子（蛋白量にして約１吟
似）を、５０ ｍＭＴｒｉｓ４（Ｃ／ −１０ＩｎＭＭ
ｆＣｌ ２＋ １ ｍＭレジチオスレイトール １
ｍＭ ｄＡＴＰ ＋ １ｍＭ ａＧ’ｒｐ。
−２（１，Ｍｉｙｏｓｈｉ、 Ｎａｔｕｒｅ、 ２９４
＋ ７７（ｂ（１９８１））の培養液約５００ｍよ＃）
精製したヒト白血病ウィルス粒子（蛋白量にして約１吟
似）を、５０ ｍＭＴｒｉｓ４（Ｃ／ −１０ＩｎＭＭ
ｆＣｌ ２＋ １ ｍＭレジチオスレイトール １
ｍＭ ｄＡＴＰ ＋ １ｍＭ ａＧ’ｒｐ。
１ ｍＭ ｄＴＴＰ、 ５μＭ （３２Ｐ）ｄＣＴＰＩ
５ｏ ｓｒ／ｒｕｌアクチノマイシｙ Ｄ （Ｓｉｇ
ｍａ社製）、０．０２％Ｎ Ｐ ４０ （Ｓｉｇｍａ社
製）および０．５μｆ／ｍｌオリゴ（ｄＴ）からなる反
応液２００μｌに加え、３７℃、１６時間反応させた。
５ｏ ｓｒ／ｒｕｌアクチノマイシｙ Ｄ （Ｓｉｇ
ｍａ社製）、０．０２％Ｎ Ｐ ４０ （Ｓｉｇｍａ社
製）および０．５μｆ／ｍｌオリゴ（ｄＴ）からなる反
応液２００μｌに加え、３７℃、１６時間反応させた。
この反応でヒト白血病ウィルスＲＮＡに相補的なウィル
ス（ｐ）−ｃＤＮＡが合成されるので、アルカリ処理、
フェノール抽出、セファデックスＧ−１００カラムクロ
マトグラフイーによシこの（３”Ｐ）−ＣＤ↑ＪＡ（５
Ｘ １０’ ｃｐｍ）を精製して得だ。この（３乍トＣ
ＤＮＡをニトロセルロース膜上に固定したλフアージＤ
ＮＡに会合させた後、オートラジオグラフィーにより、
ヒト白血病ウィルスの遺伝子ＲＮＡに相補的な遺伝子を
持つ組換え体ファージλＡＴＫ−１を得た。
ス（ｐ）−ｃＤＮＡが合成されるので、アルカリ処理、
フェノール抽出、セファデックスＧ−１００カラムクロ
マトグラフイーによシこの（３”Ｐ）−ＣＤ↑ＪＡ（５
Ｘ １０’ ｃｐｍ）を精製して得だ。この（３乍トＣ
ＤＮＡをニトロセルロース膜上に固定したλフアージＤ
ＮＡに会合させた後、オートラジオグラフィーにより、
ヒト白血病ウィルスの遺伝子ＲＮＡに相補的な遺伝子を
持つ組換え体ファージλＡＴＫ−１を得た。
実施例２
実施例１で得た組換え体ファージλＡＴＫ−１（１０’
ＰＦＷ旬）を１０ｍ／のＮＺＹ培地（Ｎ Ｚアミン１
０ Ｖ／ｌ 、 １１γ母エキス５ ｆ／ｌ 、硫酸マ
グネシウム１ ｆ／ｌ 、ジアミノピメリンｅ ５０
ｎｙ／ｌ ｒチミジン５０ ｍ９／ｌおよびＺＪａＣＡ
ｉ ５ｒ／ｌ ）中で一夜培養した大腸菌ＤＰ５０Ｆと
ともに一夜培養し、この培養上清を組換え体ファージの
ストックとしだ。このストック１０幅を２１のＮ Ｚ
Ｙ培地に加え、３７℃で一夜培養した。増殖しだ組換え
体ファージを通常のｃ、ｃｌ 密度平衡遠心法により精
製し、フェノール抽出することにより約４００μＶの組
換え体ファージＤＮＡを得た。このＤ Ｎ ＡをＥＯＯ
ＲＩ によシ完全分解し、１チアガロースゲル電気泳
動を行うことにより、約１５．０００塩基対よりなる挿
入ＤＮＡ断片約７０μ２得た。
ＰＦＷ旬）を１０ｍ／のＮＺＹ培地（Ｎ Ｚアミン１
０ Ｖ／ｌ 、 １１γ母エキス５ ｆ／ｌ 、硫酸マ
グネシウム１ ｆ／ｌ 、ジアミノピメリンｅ ５０
ｎｙ／ｌ ｒチミジン５０ ｍ９／ｌおよびＺＪａＣＡ
ｉ ５ｒ／ｌ ）中で一夜培養した大腸菌ＤＰ５０Ｆと
ともに一夜培養し、この培養上清を組換え体ファージの
ストックとしだ。このストック１０幅を２１のＮ Ｚ
Ｙ培地に加え、３７℃で一夜培養した。増殖しだ組換え
体ファージを通常のｃ、ｃｌ 密度平衡遠心法により精
製し、フェノール抽出することにより約４００μＶの組
換え体ファージＤＮＡを得た。このＤ Ｎ ＡをＥＯＯ
ＲＩ によシ完全分解し、１チアガロースゲル電気泳
動を行うことにより、約１５．０００塩基対よりなる挿
入ＤＮＡ断片約７０μ２得た。
このＤＮＡ断片をＳａ／ ■、Ｈ１ｎ、ｄ １１ ＋
ＢａｍＨＬＰｅｔ ｌ＋ Ｓｍａ ｌ＋ ５ａｕ３Ａ＋
Ｈｌｎｆ ｌ＋ ）（ｐａ １１などの制限酵素で切
断し、その末端を３２Ｐで標識してはＭａｘａｍとＧ１
１ｂｅｒｔの方法（Ｍｅｔｈｏｄ ｉｎＥｎＺｙｍＯ１
０ｇ７ ＋ ６５ ＋ ４９９ ＋ １９８０ ）によ
り塩基配列を決定することを繰返し、ヒト白血病ウィル
スの遺伝子の全塩基配列を決定した。結果は次表（第１
表）に示すとおりで、ヒト白血病ウィルスは９０３２塩
基対からなることが明らかである。
ＢａｍＨＬＰｅｔ ｌ＋ Ｓｍａ ｌ＋ ５ａｕ３Ａ＋
Ｈｌｎｆ ｌ＋ ）（ｐａ １１などの制限酵素で切
断し、その末端を３２Ｐで標識してはＭａｘａｍとＧ１
１ｂｅｒｔの方法（Ｍｅｔｈｏｄ ｉｎＥｎＺｙｍＯ１
０ｇ７ ＋ ６５ ＋ ４９９ ＋ １９８０ ）によ
り塩基配列を決定することを繰返し、ヒト白血病ウィル
スの遺伝子の全塩基配列を決定した。結果は次表（第１
表）に示すとおりで、ヒト白血病ウィルスは９０３２塩
基対からなることが明らかである。
ＡＴＫ−ＩＤＮＡ約３μ２をＢａｍ Ｈｌ（Ｂ ＲＬ社
製）１０単位で完全消化し、その半−ｉ （１，５μＶ
相当を上記の方法により前もってＢａｍＨｌで処理した
ｐＢＲ３２２ＤＮＡ約０．５μｍと、残りの手厳をＥｃ
ｏＲｌおよびＢａｍＨＩの両酵素で前処理したｐＢＲ３
２２ＤＮＡ約０．５μｍと、それぞれ混合し、Ｔ４ＤＮ
Ａリガーゼによる結合反応を４日間行っだ。反応液を用
い別々に前記の方法により大腸菌０６００を形質転換し
、第１図に示したように）］ａｍＨｌによって生ずる３
つのＤＮＡ断片が各々別個にＴＩＢＲ３２２にクローン
されたプラスミドを得だ。５１側のＤ Ｎ Ａ断片を持
つグラスミドをｐＡＴＫ０３＋中央のＤＮＡ１所片を持
つプラスミドをｐ Ａ Ｔ Ｋ ０６ ＋ ３ ’側の
Ｄ Ｎ Ａ断片を持つプラスミドをｐＡＴＫｏ ８とし
だ。各プラスミドは大腸ｉ４ Ｃ６００菌株に挿入され
て、それぞれ米国Ａ＋ｎｅｒｉｃｅ、ｎ Ｔｙｐｅ Ｃ
ｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎにＡＴＣＣ３９２
４４，３９２４５および３９２４６として寄託しである
。
製）１０単位で完全消化し、その半−ｉ （１，５μＶ
相当を上記の方法により前もってＢａｍＨｌで処理した
ｐＢＲ３２２ＤＮＡ約０．５μｍと、残りの手厳をＥｃ
ｏＲｌおよびＢａｍＨＩの両酵素で前処理したｐＢＲ３
２２ＤＮＡ約０．５μｍと、それぞれ混合し、Ｔ４ＤＮ
Ａリガーゼによる結合反応を４日間行っだ。反応液を用
い別々に前記の方法により大腸菌０６００を形質転換し
、第１図に示したように）］ａｍＨｌによって生ずる３
つのＤＮＡ断片が各々別個にＴＩＢＲ３２２にクローン
されたプラスミドを得だ。５１側のＤ Ｎ Ａ断片を持
つグラスミドをｐＡＴＫ０３＋中央のＤＮＡ１所片を持
つプラスミドをｐ Ａ Ｔ Ｋ ０６ ＋ ３ ’側の
Ｄ Ｎ Ａ断片を持つプラスミドをｐＡＴＫｏ ８とし
だ。各プラスミドは大腸ｉ４ Ｃ６００菌株に挿入され
て、それぞれ米国Ａ＋ｎｅｒｉｃｅ、ｎ Ｔｙｐｅ Ｃ
ｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎにＡＴＣＣ３９２
４４，３９２４５および３９２４６として寄託しである
。
実施例３
ヒト白血病の診断への応用２
白血病患者の末梢血約１ｒＬｔを分取し、１０％ＳＤＳ
を０．５ ｍ加え、赤血球、リンパ球を溶解し、１００
ｍＭ ＥＤＴＡ ０．１５ｍ／およびプロテイナーゼ
に４００μＶを加え４５℃で２時間反応した。反応液の
フェノール抽出を３回繰返し、ＤＮＡを抽出し、高分子
ＤＮＡをガラス棒で巻き取った。
を０．５ ｍ加え、赤血球、リンパ球を溶解し、１００
ｍＭ ＥＤＴＡ ０．１５ｍ／およびプロテイナーゼ
に４００μＶを加え４５℃で２時間反応した。反応液の
フェノール抽出を３回繰返し、ＤＮＡを抽出し、高分子
ＤＮＡをガラス棒で巻き取った。
収量約５０μ２゜このＤＮＡ５μ２を５単位のＥｃｏＲ
ｌ で上述の条件で２時間消化し、１チアガロ一スゲ
ル重気泳動で分離した後、Ｓｏｕ、ｔｈθｒｎの方法（
Ｊ、 Ｍｏ１． Ｂ１０１．．９８ ＋ ５０８ 、（
１９７５）’］によりニトロセルロースにＤＮＡ断片を
固定した。
ｌ で上述の条件で２時間消化し、１チアガロ一スゲ
ル重気泳動で分離した後、Ｓｏｕ、ｔｈθｒｎの方法（
Ｊ、 Ｍｏ１． Ｂ１０１．．９８ ＋ ５０８ 、（
１９７５）’］によりニトロセルロースにＤＮＡ断片を
固定した。
本発明で得られた新規な組換え体ファージＤ Ｎ Ａ
（λＡＴＫ−１）をニックトランスレーションキット（
Ａｍｅｒｓｈａｍ社製）により（３２Ｐ）−ｄＣＴＰの
存在下で標識し、これを探針として先のニトロセルロー
ス膜上の細胞ＤＮＡ断片と会合させ、オートラジオグラ
フィーにより、ヒト白血病ウィルスの遺伝子を検出した
。
（λＡＴＫ−１）をニックトランスレーションキット（
Ａｍｅｒｓｈａｍ社製）により（３２Ｐ）−ｄＣＴＰの
存在下で標識し、これを探針として先のニトロセルロー
ス膜上の細胞ＤＮＡ断片と会合させ、オートラジオグラ
フィーにより、ヒト白血病ウィルスの遺伝子を検出した
。
この方法によシ、病理学的、臨床的に成人工細胞白血病
と診断された患者１８人すべてにヒト白血病ウィルスの
遺伝子が検出された。
と診断された患者１８人すべてにヒト白血病ウィルスの
遺伝子が検出された。
第１図ケよ、本発明で得られるλＡＴＫ−１の制限酵素
地図を示す。 理事長 安 西 、１□：。 ＼５．２．ｊ
地図を示す。 理事長 安 西 、１□：。 ＼５．２．ｊ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ＋１１ ヒト白血病ウィルスの遺伝子ＲＮＡに相補性
を示すＤＮＡ。 （２） ヒト白血病ウィルスが成人Ｔ細胞白血病ウィ
ルス（以下Ａ ’ｒ Ｌ Ｖと略記する）またはその近
縁のウィルスであることを特徴とする特許請求の範囲２
（口項記載のＤＩＪＡｏ（３）約９．０００塩基対から
なり、制限酵素Ｐｅｔ１ ＋ Ｈｌｎｄ Ｉｎ ＋ ）
ＱｔＯｌおよびＢａｍＨＩに対する制限部位数がそれぞ
れ５．八１および２であることを特徴とする特許請求の
範囲第２項記載のＤ Ｎ Ａ 。 （４） 全塩基配列が第１表で示されることを特徴と
する特許請求の範囲第３項記載のＤＮＡ０（５） ヒ
ト白血病ウィルスの遺伝子ＲＮＡに相補性を示すＤＮＡ
を組込んだ新規組換え体ＤＮＡ０（６） ヒト白血病
ウィルスがＡＴＬＶまたはその近縁のウィルスであるこ
とを特徴とする特許請求の範囲第５項記載の組換え体Ｄ
ＮＡ。 （７）該ＤＮＡが約９．０００塩基対からなり、制限酵
素Ｐｓｔ ｌ 、Ｈｌｎｄ ｍｅ Ｘｈｏ ＩおよびＢ
ａｍＨＩに対する制限部位数がそれぞれ５．３．１およ
び２であることを特徴とする特許請求の範囲第５項記載
の組換え体ＤＮＡ０ （８）核組換え体Ｄ Ｎ Ａが大腸菌由来のプラスミド
Ｄ Ｎ Ａに結合したものであることを特徴とする特許
請求の範囲第５項記載の組換え体ＮＡ０ （９）該組換え体ＤＮＡが大腸菌内で増殖するファージ
ＤＮＡに結合したものであることを特徴とする特許請求
の範囲第５項記載の組換え体ＤＮＡ０ Ｈ該組換え体ＤＮＡの制限酵素切断様式が第１図で示さ
れることを特徴とする特許請求の範囲第５項記載の組換
え体ＤＮＡ０
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57214287A JPS59104325A (ja) | 1982-12-07 | 1982-12-07 | ヒト白血病ウイルスの遺伝子ｒｎａに相補性を示すｄｎａ |
| DE8383112261T DE3379469D1 (en) | 1982-12-07 | 1983-12-06 | Dna complementary to rna of human leukemia virus |
| EP83112261A EP0113078B1 (en) | 1982-12-07 | 1983-12-06 | Dna complementary to rna of human leukemia virus |
| DE198383112261T DE113078T1 (de) | 1982-12-07 | 1983-12-06 | Dns komplementaer zum menschlichen leukaemievirus rns. |
| CA000442740A CA1227149A (en) | 1982-12-07 | 1983-12-07 | Dna complementary to rna of human leukemia virus |
| US07/104,545 US4778756A (en) | 1982-12-07 | 1987-10-05 | DNA complementary to RNA of human leukemia virus |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57214287A JPS59104325A (ja) | 1982-12-07 | 1982-12-07 | ヒト白血病ウイルスの遺伝子ｒｎａに相補性を示すｄｎａ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59104325A true JPS59104325A (ja) | 1984-06-16 |
| JPH052311B2 JPH052311B2 (ja) | 1993-01-12 |
Family
ID=16653227
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57214287A Granted JPS59104325A (ja) | 1982-12-07 | 1982-12-07 | ヒト白血病ウイルスの遺伝子ｒｎａに相補性を示すｄｎａ |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4778756A (ja) |
| EP (1) | EP0113078B1 (ja) |
| JP (1) | JPS59104325A (ja) |
| CA (1) | CA1227149A (ja) |
| DE (2) | DE113078T1 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62296889A (ja) * | 1986-05-14 | 1987-12-24 | Fujirebio Inc | Ｈｔｌｖ−ｉ抗原活性を有する蛋白及びその製造法 |
| JPS63124963A (ja) * | 1986-11-14 | 1988-05-28 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 抗成人ｔ細胞白血病ウイルス抗体の検出法 |
| JPH04506301A (ja) * | 1989-10-13 | 1992-11-05 | コノート ラボラトリーズ リミテッド | エイズ及びその他のレトロウイルス病用ワクチンの遺伝子工学による製造 |
| WO1996030522A1 (fr) * | 1995-03-24 | 1996-10-03 | Shionogi & Co., Ltd. | Molecule d'adn relative a la suppression d'une expression genique et nouvelle proteine |
| US6090783A (en) * | 1995-03-24 | 2000-07-18 | Shionogi & Co., Ltd. | DNA molecule relating to suppression of gene expression and novel protein |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8423659D0 (en) | 1984-09-19 | 1984-10-24 | Pasteur Institut | Cloned dna sequences |
| GB8429099D0 (en) | 1984-11-16 | 1984-12-27 | Pasteur Institut | Closed dna sequences |
| US7205102B1 (en) | 1983-09-15 | 2007-04-17 | Institut Pasteur | Cloned DNA sequences related to the genomic RNA of lymphadenopathy-associated virus (LAV) and proteins encoded by said LAV genomic RNA |
| US7232654B1 (en) | 1983-09-15 | 2007-06-19 | Institut Pasteur | DNA sequence of the LTR region of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) |
| JPS6061534A (ja) * | 1983-09-16 | 1985-04-09 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 成人ｔ細胞白血病ウイルス抗原ペプチド |
| US7351412B1 (en) | 1983-12-05 | 2008-04-01 | Institut Pasteur | Cloned DNA sequences related to the genomic RNA of lymphadenopathy-associated-virus (LAV) and proteins encoded by said LAV genomic RNA |
| US5610035A (en) * | 1983-12-05 | 1997-03-11 | Institut Pasteur Centre National De La Recherche Scientific | Methods for the preparation of hybridomas producing lymphadenopathy-associated virus (LAV) GP110-specific monoclonal antibodies and methods for the purification of GP110 employing said monoclonal antibodies |
| US4724258A (en) * | 1984-02-03 | 1988-02-09 | Juridical Foundation, Japanese Foundation For Cancer Research | Adult T cell leukemia virus antigen polypeptide |
| EP0152030A3 (en) * | 1984-02-03 | 1986-08-13 | Juridical Foundation Japanese Foundation for Cancer Research | Adult t cell leukemia virus antigen polypeptide |
| IL76082A (en) * | 1984-08-22 | 1991-07-18 | Us Health | Molecular clones of the genome of htlv-iii and a process for the preparation thereof |
| DE3588248T2 (de) * | 1984-10-18 | 2004-07-01 | Institut Pasteur | LAV-Antigene und -Peptide |
| US5705612A (en) * | 1984-10-18 | 1998-01-06 | Institut Pasteur And Centre National De La Recherche Scientifique | NEF peptide encoded by human immunodefiency virus type 1 (HIV-1) |
| US7045130B1 (en) | 1984-10-18 | 2006-05-16 | Institut Pasteur | Antibodies against antigens of human immunodeficiency virus (HIV-1) |
| NZ213823A (en) * | 1984-10-26 | 1988-05-30 | Us Health | Producing human t-cell leukemia retrovirus envelope protein fragments in bacteria |
| US6894152B1 (en) | 1984-11-16 | 2005-05-17 | Institut Pasteur | Cloned DNA sequences related to the genomic RNA of lymphadenopathy-associated-virus (LAV) and proteins encoded by said LAV genomic RNA |
| US5643714A (en) * | 1986-12-31 | 1997-07-01 | Genelabs Technologies, Inc. | Method and assay for HTLV |
| US6218522B1 (en) * | 1996-03-19 | 2001-04-17 | Shionogi & Co., Ltd. | DNA molecule relating to suppression of gene expression and novel protein |
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Family Cites Families (2)
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