JPS5892662A - 抗腫瘍剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗腫瘍性物質およびその化学的製法に関
する。

本発明者郷はストレプトマイセス・リシリエンシスに属
する新菌株たるストレプトマイセス・リシリエンシスＴ
−２３株ｌ工研寄託番号第６１４１号（ｐｍｕＭＰ−６
１４１）　）の醗酵生産物について研究した結果、その
生産物の一つたるｒ−ｚ３−　ＩＩ＃ｌ質が有望な抗膿
瘍活性を有する新規物質であること、そしてかかるＴ−
２３−１物質はこれまた前記醗酵生産物の一つであるＴ
−２５−ｎ物質を酸化条件に付することによって化学的
に容易に得られることを見出した。

本発明の対象たるＴ−２３−１物質およびそれを化学的
に製造するための出発物質たるＴ−２３−ｎ物質のそれ
ぞれの物理化学的性質は次のとおシである。

（１）外観性状　無定形黄色粉末 （２）構造式 ％式％） （） （５）元素分析（Ｃ３６Ｈ４８Ｎ２０ｅとして）ＣＨＮ
Ｏ 理論値：　　６７．９２　７．５５　４．４０　２α１
５実測値：　　６７．７２　７．６８　４．２８　１９
．７４（６）紫外部吸収 ２６２ｎｍ　　　＃−３８５００ ２７２ｎｍ　　　　　　ｓ５−４９６００２８２ｎ　　
　　　　ｓ５−３８８００３８５ｎ　　　ａ−３４００ （７）赤外部吸収（第１図参照） ３３３０α−１１４１０国−１１１００個−１１７３０
ｃｍ−’　　１３７６ｍ−’　　　９９８５−１１６５
０倒−’、、　　１３００ｍ−’　　　８４９ｍ−１１
５３５〜１　１２０２〜−１　　７２０ｃｍ−’（８）
　　”Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２中）−Ｃ−１８＆２，１
８２．５ 暑 −Ｃ−ＮＨ−１７６，６，１６９，４ 曹 −Ｃ−０−１７２，９ ＞ｃ−１４＆４，１５７．９．１２９４χ）（−１！５
９．９，１３五７，１３五６，１５五２゜１３３１．１
，１３１．３，１２９．５，１２２．５゜１１４．５ ′ＡＨ−０７９，２，７５，２，６ａＯ−ＯＣＨ５５６
，６ −Ｃ−ＣＨ−ＮＨ−４ａ　５ −Ｃ−Ｃ）Ｉ−４４，９ 量 −Ｃ−Ｃ）（２−４４，８ ；ＣＨ−３９，９ −ＣＨ２−５五〇　、　２９．４　、２９．４　、２９
．５　、２＆６゜２５．６．２＆５，２Ｓ、５ −ＣＨ３２［Ｌ５，１７．４，９．６ （９）　　ＰＭＲ（ＣＤＣｌ２中） １．４１　５Ｈ，（Ｉ ＪＣＨ５１，８０３Ｈ，ｓ ５−０ＣＨ五２８　５Ｉ（、廖 −ＯＣＨぐ　　　　　　　　　　　４．０２　　１Ｈ，
ａｔ４．７５　１Ｈ，ｂｓ ４．９６　　ｉＨ，ｄａ アロマチックＨ６，５０１Ｈ，＋１ ７．５１　１Ｈ，ｄ ＣＯＮＨａ１８　１）（、＠ 叫　呈色反応 ニンヒドリン　　　（−） ビユレット　　　　（−） アンスロン　　　　（−） フェーリング　　　（十） （１１）溶媒に対する溶解性 メタノール、エタノール、アセトン、クロロホルムおよ
び酢酸エチルに易溶 ベンゼンおよびエーテルに難溶 水、石油エーテルおよびヘキサ／に不溶（１）外観性状
　白色無定形粉末 （２）構造式 ％式％） （） （５）元素分析（Ｃｓ６Ｈ５ｏＮ２０ｅとしで）Ｃチ　
　Ｈ％　　Ｎ　嗟　　　０％ 理論値：　　６７．７２　７．６８　４．２８　２（１
３２実測値：　　６７．９２　７．５５　４．４０　２
α１５（６）紫外部吸収 ２６０　　　　　　−−４０８００ ２７０　　　　ａ−５２り［１０ ２８０＠−４０５００ ５１〇　　　−鴫　５９００ （７）　　光外部吸収（第２図参照） ３５４０（ＮＨ，ＯＨ）、１７５０．１２００（エステ
ル）、１６５０，１５３５（アミド）（８）　　１５Ｃ
−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３中）−ＨＮ−Ｃ−０１７６，９、
１７五３ −０−Ｃ−０１７９，７・・。

”；ｃ−１４９，２，１４１，１，１３７，８，１３２
，７゜１２５．５ χＨ−１３４，９，１３４，４，１５３，９，１２９，
６゜ｋＨ−０−７９，６，７５，８，６ａ７−ｏ−ｃＨ
５５６，６ −Ｃ−ＣＨ−４５，１ −ｃ−ｃＨ２−４５１ ＞ｃＨ−５ｑ、０ −ＣＨ２−３五７　、３１．７　、２９．５　、２９．
４　、２６．７　。

２＆６　、２５．７　、２５．６ −ＣＨ３２０，３，１７，７，９，７ （９）ＰＭＲ（ｄ−ピリジン中） ノＣＨ５１，９８５Ｈ，５ −ＯＣＨ５１２７３Ｈ，ｅ −ｏ−ＣＨく　　　　　　　　４．４９　　　　１Ｈ，
ｄｔ５３９− ５．２８　　１Ｈ，ｂｓ ５．５６　　１）１．　１１（１ ７Ｈ５，５５１Ｈ−” ５．７０　　１Ｂ、　　（１（１ ＆０６１Ｈ，ｍ ６．２３　　１）Ｉ、　　＋１１１ ６．３７　　　ｊＨ，（１（１ ６，５５１Ｈ，ｄａ ６．６４　　１Ｈ，＋１（１ アロマチツクＨ７，１２２Ｈ，ａ ＣＯＮＨａ７８　　１Ｈ，ｂｓ ９．０１　　１Ｂ、＋１ ・　呈′色反応 ニンヒドリン　　（−） ビユレット　　　（−） アンスロン　　　（−） フェーリング　　（＋） １）溶媒に対する溶解性 クロロホルム、メタノール、工Ｉ’／−ル、アセトンお
よび酢酸エチルに易溶 ベンゼン、エーテルに難溶 水、石油エーテルおよびヘキサンに不溶本発明の新規物
質たるＴ−２３−１物質は次に示すような生物活性を示
し、特に抗層瘍剤として有望なものである。

（１）　　酵母およびカビに対する抗菌作用第１表 ＭＩＣ（最小阻止濃度） Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｊａｐｏｎｉｃｕｓ　　　　
　　　１２．５（工ＡＭ　　２０１６） Ｍｕｃｏｒ　ｐｕｓｉｌｌｕｓ　　　　　　　　　　　
　１２．５（工ＡＭ　　６１２２） Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ　　
　　　　８Ｃ１（エムＭ　　７１０６） ８ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　
　　　　　４．０（工ＦＯ０３０４） ８ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｒｏｕｘｉｉ　　、　　
、　　　　　　４．Ｑ（ＩＦＯ０５０５）　　　　　 Ｃａｎｃｌｌａ　ｕｔｉｌｉｓ　　　　　　　　　　　
　　４．０（ｘｙｏ　　０３９６） 供試菌株はすべてグルコース１．０１１およびマルトエ
キスα２−を含有する培地で３０℃において７２時間培
養しセして薗の生育の有無を観察した。

（２）　　Ｔ−２５−１のＬ−５１７８７腫瘍細胞に対
する生育阻害作用（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　） 第２表 ４．０−０．５　　− ２．０　　　　　　α２５　　　± １．０　　　　　　α１２５＋ Ｌ−５１７８ｙ細胞はイーグル・Ｍ１ｅＭ培地にツスイ
製）に馬血清１α０チおよびアスパラギン１００ｗｔ／
―の割合で補添した培養液で３７℃において１２０時間
培養されそして細胞の生育の有無を判定した。Ｔ−２１
１物質はエタノールに溶解させてアッセイ系に加えた。

（３）　　マウスＰ−３８８白血病腫瘍に対する阻害効
果第３表 ２４ｗ１／Ｋｇ／日×２回投与　　　　５６．０１２ｑ
／ｂ／日×２回投与　　　１２５．３６ｑ／ｈ／日×２
回投与　　　１２０．２３ｑ／Ｋｙ／日×２回投与　　
　１０５．７１、５　Ｗｌｌ／Ｅｌ／日×２回投与　　
　１０ｚ５０、７５　＊／１４７日×２回投与　　　１
０５．７０ｑ／Ｗｅ／日×２回投与　　　１００ＣＤＦ
１マウス（２０ｆ±１ｆ♂）１群６凧に、ＣＤＦ１マウ
スを用いて継代したＰ−５８８腹水腫瘍細胞１０６Ｉｌ
を腹腔内に接種し、２４時間後に第１回目そして１２０
時間後に第２回の薬物投与を行った。なお薬物はアラビ
アゴムに懸濁させて０．２−ずつ投与した。延命率は対
照群（アラビアゴム懸濁液のみ投与）に対する投与群の
生存日数の比を以って表わした。

（４）　　急性毒性 ｌＩＤ５ｏ（マウス、ｉｐ）　　５５．９１１Ｆ／’ｆ
本明細書において言及されているストレプトミセス・リ
シリエンシスＴ−２３株は微工研寄託番号第６１４１号
（ｙ１！ｉｕＭｐ　−６，１４１）として微工研に寄託
されており、そしてその儒学的性質は次のとおりである
。

ａ）　ｍ学的形態 栄養菌糸は分断または分節することなく分岐しながら培
地中に長く伸びている。空中菌糸は主軸を長く伸ばし、
胞子形成菌糸（胞子柄）を単軸分校し、その先端にルー
プ状、曲状または螺旋状（コイル状径１５〜２０ｐｍｓ
２〜６回転）を呈し、１０〜５０個以上の長い胞子鎖を
着生する。

胞子の表面構造は平滑（培地によっては粗面状もみられ
る）で径Ｑ、５〜α７μｍ×長さ１〜１．５μｍの卵形
である。菌核、鞭毛胞子、胞子嚢等の特殊形態は観察さ
れない。

ｂ）各種培地における生育状態 次の各種培地における生育状態の観察は工ｎｔｅｒ−ｎ
ａｔｉｏｎａｘ　ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　Ｐｒｏｊ
ｅｃｔｓｌｌｌｒＭｅｔｈｏｄｓＭａｎｕａｌ　１９４
１　Ｊにしたがった。観察結果は要約し次表に示す。

培　地　　　　　集落表面の菌叢色 シュクロース− 硝酸、寒ヵ　　　　空中菌糸形成せず チロシン寒天　　　空中菌糸形成が悪く、後に白色栄　
養　寒　天　　空中菌糸形成せず ”−１ミー“寒　　粉状、灰色系列（５ｆ・〜５ｉｈ−
ｆ）天 （註）かっこ内の色コードはｒ　Ｃｏ１ｏｒ　Ｈａｒｍ
ｏ＋（Ｃｏｎｔａｉｎ＠ｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　
ｏｆ　Ａｍｅｒｊ温 お 淡黄色（２ｃａ）　　　　　な　し 二色（２ｃａ〜２ｏ）　　なし 巳（０〜ｇ）　　なし 淡黄色（２・・〜２ｄｂ）　　淡δばｉや茶Ｃ 義勇 灰色 ｎｙ　Ｍａｎｕａｌ　Ｊ第４版 ’、ｃａ　１９５０発行）によ Ｃ）生理的性質 生育温度範囲　　　　１０〜３７℃ 生育最適温度　　　　２０〜３０℃ ゼラチンの液化　　　　　　　＋（陽性）スターチの加
水分解　　　　　　十 脱脂牛乳の凝固　　　　　　　−（陰性）脱脂牛乳のイ
ブトン化　　　　　十 メラニン様色素の生成 チロシン寒天　　　　十 ・ぜプトン・イースト鉄寒天　　　　十トリプトン・イ
ースト液体培地　　十 ｄ）炭素源の同化性（プリダム・ゴツトリープ寒天培地
） Ｌ−アラビノス　　＋＋（良く生育） Ｄ−キ、。−７＋＋： Ｄ−グルコース　　升 Ｄ−７ラクトース　　＋（弱く生育） シュクロース　　　　　　升 イノシトール　　　　　什 Ｌ−ラムノース　　　　　　丑 ラフィノース　　　　　　廿 Ｄ−マンニット　　　　　　　−（生育せず）観察の結
果、？−２３３１株はストレプトミセス属に含まれる放
線菌で次のように特徴づけられる。すなわち、１）胞子
鎖形態は螺旋状曲状およびループ状であり、２）胞子鎖
の表面構造は平滑、３）菌叢色は灰色系列、４）集落の
裏面色は不鮮明色、５）メラニン様色素の産性は陽性で
あシ、そして６）炭素源としてＤ−マンニットを同化し
ない。これらの６特性を基準にしてｒ　Ｂｅｒｇｅｙ’
ｓＭａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｂａｃｔｅｒｉ、ｏｌＯｇｙ　
Ｊ第８版（１９７４）およびｒ　Ｊ、Ｆｅｒｍｅｎｔ、
Ｔｅｃｈｎｏｌ、　Ｊ第５２巻第２号第７８〜９２］１
ｊ（１９７４）より検索した結果、この菌株の特性はス
トレプトマイセス・リシリエンシス（８，ｒｉｓｈｉｒ
ｉｅｎｓｉｓ　）の特性によく一致する。したがってこ
の菌株はストレプトマイセス・リシリエンシスに包含さ
れる一菌株であると同定シ、ストレプトミセス・リシリ
エンシス↑−２３株（ｓｔｒｅｐｔｍｙｃｅｓ　ｒｉｓ
ｈｉｒｉｅｎｓｉｓ　ＩＩＩＩＬＴ　−２５）と命名し
た。

本菌株の培養には通常の放線菌培養法が適用され、炭素
源としてグルコース、ラクトース、フラクトース等の炭
糖類や澱粉あるいは澱粉加水分解物を単独ないしは混合
した形で用いることができる。特に澱粉、グルコースの
混合物が最適である。窒素源としては肉エキス、ポリは
プトン、大豆粉、コーンスチーフリカーおよび各種無機
窒素源が用いられる。醗酵生産をよシ好適に行わしめる
ために微量の添加物すなわち乾燥酵母、酵母エキス、マ
ルトエキス、その他に各種植物種子エキス、ビタミン、
各種無機塩類を添加してもよい。必要に応じてシリコー
ン、植物油等の消泡剤が添加される。菌株の培養は上記
に示した栄養分を適量配分して得られた培□■ 地でコルベン、ジャ一式醗酵槽あるいはより大型の醗酵
タンクを用いて行うことができる。培養温度は２０〜３
５℃好ましくは２５〜３０℃であシ、深部培養方式がと
られる。醗酵時間は１７〜９６時間でよく、通常２４時
間前後にＴ−２３物質の生産はピークに達する。

Ｔ−２３１物質は主として醗酵菌体内に含まれ若干は上
清中にも存在する醗酵培地を終えた培養物を直ちに冷却
し、遠心分離法あるいは濾過法により菌体および上清に
分ける。菌体より６０〜７０優アセトン水で活性区分を
抽出する。Ｐ液を非イオン性交換樹脂に通してそれに活
性区分を吸着させ、次いでアセトン、低級アルコール等
の有機溶媒もしくはこれらの有機溶媒を含む水溶液で活
性区分を溶出する。あるいはまたＦ液から直接有機溶媒
で活性区分を抽出することも可能である。このようにし
て上清より得られた活性区分を菌体抽出液と合し、得ら
れる混合物のｐＨは５．０〜６．０に調節し、そして存
在する有機溶媒を減圧下に留去する。得られた活性物質
を含む水性相よシそのｔま゛）・あるいは抽出率を高め
るために並塩郷の工業的に利用可能な無機塩の存在下に
クロロホルム、酢酸エチル、イソプロピルアルコール等
の水非混和性溶媒で活性物質を抽出する。得られ九抽出
液は常法通り芒硝を加え、漸時放置後、溶媒中に含まれ
る水分を脱水しそして減圧下に濃縮する。その後、石油
エーテル、ヘキサン等を加えて活性物質を含む区分を沈
殿させる。この活性、物質は？−２３−１物質およびＴ
−２３−１物質からなり、これらは更にシリカゲル、非
イオン性交換樹脂、セファデックスＬＨ−２０等を用い
たクロマトグラフ操作を用いて更に精製される。−例と
してシリカゲルクロマトグラフィーを用いた高純度Ｔ−
２３−■および／ｌたはＴ−２３−ＩＩ動物質調製法を
次に述べる。

シリカゲルをはンゼンを用いてカラムに充填し、Ｔ−２
３−１およびＴ−２５−ＩＩ動物質含む試料を仕込む。

最初にベンゼンを通塔させて溶出される区分を除く。次
いでベンゼン／アセトン（−４：１）よりなる混合溶媒
でＴ−２３−１物質を溶出させる。得られた活性区分を
減圧濃縮しそして石油エーテル、ヘキサン等の非極性溶
媒を加えてＴ−２３−１物質を析出せしめる。得られた
沈殿物は必要があれば更にクロマトグラフィーによる精
製または１再結晶によって高純度のＴ−２３−１物質を
得る。゛次いで同じカラムにベンゼン／アセトン（−７
：３）を通塔させるとＴ−２３１物質が溶出してくる。

同様に後処理して高純度のＴ−２５−Ｉｔ動物質得られ
る。

次に本発明を更に詳細に理解せしめるために実施例を掲
げる。

実施例　１ 可溶性澱粉１．０　％　、酵母エキスＱ、２ＩＩｋおよ
び嘩天１．５慢の組成よりなる試験管斜面培地に継代保
存しであるストレプトミセスチー２３株より１白金耳を
とり、これを可溶性澱粉１．０％、廃糖蜜１．０％、肉
エキス１，０チおよびポリはプトンｔｏｔｓｃｐＨ１ｏ
）の組成よりなる種培地１０〇−を含有する坂ロフラス
コに接種する。３０℃で４８時間振盪培養を行ない、得
られた培養物を種菌として同じ培地を１００耐含有する
坂ロフラスコに０．５−ずつ接種した。３０℃で２４時
間振盪培養を行ないジャ一式醗酵槽による本培養の種菌
とし友。

本培養はグルコース１．０１１　、可溶性澱粉１．５−
１大豆粉１．５　＊、乾燥酵母（Ｌ２１Ｇ、硫安α２嘩
、ＮａＣｔ（Ｌ５チ、沈降性炭）カルシウムα４−およ
び消泡剤（東芝シリコンｙＭ＊６５０９）０．５５チよ
シなる培地（ｐＨ７，・０）を１’５．Ｏｔ含む５０を
容のステンレス製ジャ一式醗酵槽６基を用いて実施した
。すなわち上記した種菌を４．０−の割合で接種しそし
て３０℃で２４時間通気攪拌培養（通気量１５．０ｔ／
分、攪拌回転数２００　ｒｐｍ　）を行なつ九。

培養終了後直ちに培養液を４．ＯＮ硫酸でｐＨ５，８に
調節し念。大型連続遠心分離器によシ菌体をｐ側稜、６
０％アセトン水溶液２Ｕｔにより菌体を浸漬ししばらく
攪拌操作を行つ九抜、３時間放置した。次いで菌体を濾
過して上清液を得た。同じ処理を２回繰返し得られた抽
出液を合わせて４０１の抽出液を得た。次いで抽出液よ
リアセトンを減圧留去して水溶液１１ＬＣ１を得た。

得られた水溶液１ａＯｔに並塩６．５−を加えて溶解さ
せ、酢酸エチル？、　ＯＬで２回抽出を行った。

得られた酢酸エチル溶液に芒硝１．０〜を加え、しばら
く放置して脱水後減圧下に角線し、得られた濃縮液にヘ
キサンを加えて？−２５−１物質およびＴ−２３−１物
質を含む画分を沈殿させた。

ヘキサンで洗浄後、乾燥させ−”ＣＴ−２５−１物質お
よびＴ−２３−１物質の粗混合物４２ｆを得た。

得られた粗粉末をクロロホルム１００−に溶解させ、シ
リカゲルカラム（シリカゲル４００ｔを充＃Ａ）に吸着
させ、最初にベンゼンを通過させ、次いでベンゼン／ア
セトン（４：１）でＴ−２５−！を溶出させ、次にベン
ゼン／アセトン（７：３）でＴ−２３−１物質を溶出さ
せた。得られた１・１１ ？−２３−１および’Ｉ’−２３−Ｉｆ物質を含む各区
分を減圧下に濃縮し、それぞれへキサンを加えて結晶を
析出させＴ−２３−１物質の粉末１．５２およびＴ−２
３−ｕ物質の粉末１１．７１Ｆを得た。

実施例　２ 実施例１で示したように放線’［Ｔ−２３−１株を培養
し、得られた培養物よシ遠心分離によって上清液を得た
。上清液１（ＬＯ４を非イオン性交換樹脂ＨＰ−２０を
詰めたカラムに通過させ、水洗後５０慢アセトン水２．
ＯｔでＴ−２３１物質を含む画分を溶出した。減圧下に
アセトンを留去して水溶液とし、酢酸エチルで２回抽出
し、抽出液を芒硝で脱水後酢酸エチルを減圧留去して黒
褐色油状物質２．Ｏｆを得た。得られた油状物質を１０
−のクロロホルムに溶解し、シリカゲルカラムに吸着さ
せ、最初にベンゼンを通過させ、次いエペンギン／アセ
トン（４：１）でＴ−２３−１物質を溶出′させ、次に
ベンゼン／アセトンＣ７：５）でＴ−２３−１物質を溶
出させた。

得られたＴ−２５−１およびＴ−２３−１１画分をそれ
ぞれ減圧下に濃縮し、ヘキサンを加え、沈殿を集めヘキ
サンで洗浄後減圧乾燥してＴ−２５−夏物質およびＴ−
２３−ＩＩ夏物質粗粉末をそれぞれ４８岬およびＱ、６
５ｆの量で得た。

実施例　３ Ｔ−２５−夏物質１．２５１を予め塩化第２鉄α１ｆを
溶解させであるメタノール１０〇−中に加え、水冷下で
攪拌溶解させそして１５分間放置した。

次いで減圧下にメタノールを留去させ、得られる乾固物
に酢酸エチル１００−を加え、得られる溶液をガラスフ
ィルターで炉遇し、ν液を採取しそして再び減圧下に酢
酸エチルを留去した。

かくして黄色のＴ−２３−夏物質の粉末１．０５　Ｆを
得た。

【図面の簡単な説明】

第１図および第２図はそれぞれＴ−２３−１物質および
？−２３−１１物質の赤外吸収スペクトルである。 特許出願人　日清製粉株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）化学構造式 を有する化合物。 ２）化学構造式 を有する化合物を酸化することを特徴とする、化学構造
   式 の化合物の製造法。