JPS59213398A - 抗生物質メガロミシンｃ↓１の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 木発明はノカルディア属に属する抗生物質メガ１コミシ
ンＣＩ　　生産菌を培扁し、その培養物より抗生物ＴＬ
メカロミシンＣｔ　（ｍｅｇａｌｏｍｉｃｉｎ　Ｃ１）
　（Ｊ。

Ａｎｔｉｌ＋１ｏＬｉｃｓＪ、２．　．２３３　〜２１
＜’、　　／　　９１　　タ　）奮採取すること力）ら
なる抗生物質メガロミシンＣ１の製造法に関するもので
ある。

抗生物質メガロミシン０１［−、グラム陽性菌及び陰性
菌に対して広範囲の抗菌力を有する有用な既知の抗生物
質で、その化学格造は次式：で示きれ、ミクロモノスポ
ー２ｅメガロミセア（Ｊ　、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　
　２．２　、．２　Ｊ　３〜．２Ｊ４　。

／り２り）とばクロモノスポ−２・イノシトーラ・Ｍ）
（−４ｔ／株（Ｊ　、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　２７　
、　ＩＩ　９３〜．３０ｔ、／９７１１）によって生産
されることが知られている。本発明省らはこ扛までメガ
ロεシンＣ＋　　ｋ生産することが知られていなかった
ノカルディア属の一菌株が抗生物質メガロミシン自　を
生産することを見い出し、鋭意研究の結果、本発明を児
成するに至った。

以下にその方法を説明する。

本発明に使用されるノカルディア属ＶＣＩｖ４するメガ
ロミシン自　生産−の−例としては、神奈川系三浦半島
の土壌よジ新たに分離されたＳ　Ｆ”−ココ６４−株が
あり１本菌株の菌学的性状はつぎのとおりである。

■形態 基中白糸は最初工〈分枝して伸長するが、後に不規則に
分断する。気菌糸の着生は一般にみられないか極めて貧
弱で、この場合も気菌糸は不規則に分断する。気菌糸の
分枝は単純分枝で先端に＠線状ないしゆるいらせん状を
呈する。

車軸分枝、胞子のう、菌核等の特欠十、な形態は認めら
れない。分断した菌糸は直、径Ｏ，Ｓ〜０．７ミクロン
で、形は不規則であり、；！￥動性は認めら汎ない。

■　各種培地上の生育状態 以下Ｋ”！とめた観察結果は２２℃、／グルコア日間培
養後の結果である。直中〔〕内に示す色の標準はＣｏ１
ｏｒ＼Ｉｉａｒｍｏｎｙ　？ｖｉａｒ＋ｕａｌ　（Ｃｏ
ｎｔａｉｎｅｒＯｏｒｐｏｒｏｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＩＴ
＋ｅｒｉｃａ　　社以）の色の分類に従ったものである
。

■　生理的性質 （１）生育温度範囲：スターチ寒天において２０〜ｙｓ
℃の範囲において生 育し１．２５０〜４．２℃にお いて良好に生育する。

（２）　　ゼラチンの液化二隘仁 （３）　　スターチの加水分解：陽性 （４）脱脂乳のペプトン比＝Ｌ性 脱脂乳の凝固：陰性 （５）　　メラニン様色素の生成：陰性Ｕ　　硝彪塩の
付元：陽性 （７）　　ｉ＠塙性ニア％以下で普通に生７ずし、７０
％でわずかに生育する。

■　炭素源の同ｆヒ性 基礎培地はシリ−トノ・ム・コゝット１ノーブ改変培地
を用い７’ｎ。

同化する　＝Ｄ−グルコース　Ｄ−フラクトース　Ｄ−
マンニトール、Ｄ−アシ ビノース 同化しない＝Ｄ−キシロース、Ｌ−１ラビノース、ｉ−
イノシトール、ラフイノ ース、Ｌ−２ムノース、シュクロ ース Ｖ　維胞壁組成 ペソ力−（Ｂｅｃｋｅｒ　）等の方法（Ａｐｐｌ、へＪ
ｉｃｒ−ｕｌ〕ｉｏ１．　　／２．　’７．２／〜１１
．２３．　／ＹＡｌｌ）、レシエＡリエ（Ｌｅｃｂｅｖ
ａｌｉｅｒ　）の方法（Ｊ。

Ｌａｂ　、　　　ＣＩ　　ｉｎ　、　　　ｉ＼ｉｅｄ、
　　　７　　／　　　、　　　タ　　３’７　〜　？　
　４ｔ　’ｌ。

／ｑｔｇ）によって分析した。

全細胞中の２．ｔ−ジアミノピメリン酸：メン型全細胞
中のね：アラビノース、ガラクトースを含ミ、キシロー
ス、マデュロース 全會壕ない。

以上の性状エフ、ＳＦ−，２Ｊ、４ｊ株は、菌糸が分断
し、全細胞中のコ、乙−ジアミノピメリン酸がメソ現、
籾Ｓにアラビノースを含み、キシロースを含まないこと
′７））らノカルディア属に属すると考えるのが最も妥
当である。したがって本発明者等はＳＦ−２，２１５株
をノカルディア会エスピー・８Ｆ−Ｊ、２Ａｊ（Ｎｏｃ
ａｒｃｌｉａｓｐ、　　ＳＦ−，２２１りと命名した。

本菌株は、工業技術院微生物工業技術研究所に微生物受
託番号微工研菌寄第７０．２．３号として寄託さｎてい
る０ ８Ｆ−，２，２Ａｊ株は、他の放線菌の場合にみらｔす
るようにその性状が変比しやすぐ、飼えば、紫外線、エ
ックス線、高周波、放射線、薬品等を用いる人工的変異
手段で変異しうるものであり、いずれの変異株であって
もメガロミシンＣ１の生産能を有するものはすべて本発
明の方法に使用することができる。さらに、ノカルディ
ア属に属するメツプロミシン０１　　生産菌はすべて本
発明の方法に使用することができる。

したがってメガロミシンＯ，を製造する本発明の方法は
、ノカルディア属に属するメガロミシン０１　　生産菌
を培養し、培養物からメガロミシンＣＬ全採敗すること
を特徴とするものである。

不発明の方法では前記のｍを通常の微生物が利用しうる
栄養物を含有する培地で培公する。栄養源としては従来
放線菌の培養に利用されている公知のものが使用できる
。例えば、炭素源としてグルコース、水あめ、ぬ粉、グ
リセリン、糖蜜、大豆油等を使用しつる。’！−た窒素
源として大豆粉、小麦胚孔゛−１肉エキス、ベズトン、
酵母エキス、コーンスブーイープリカー、硫酸アンモニ
ウム、硫酸すｉ　リウム等を便）＃＃　シ”Ｊｒる。そ
の他必娶に応じて炭￥Ｓカルンウム、ブξｊユバ塩比カ
リウム、ガ、１７酸塩等のス１：（機塩ム１をε、＆加
するほか、菌の発育を助け、メガロミシンＣ１の生産を
促進する有機物あるいは黙（妾（１勿’ｆｆ：　）ｊ’
ｊ　１．’添加することができる。

プも養成としては、一般ジし生物質生産の方法と同じく
叡体培釣法、ｔＦ、Ｊ−に澱部培シ法が最も迫している
。培養は好気的榮件］；で行なわル、培養に適当な温度
（址−二Ｓ〜ゲＯ℃でおるが、通常３０℃刊近で培碇す
る。ｐＴ−１１は中性〜弱アルカリ性が望ましい。敢ト
ド培養で后常−！〜７日同培テｄを行なりと、メガロε
シン０１　　が培養液中に生成啓槍される。

店な数円に生産蓄ａさｎたメガロミシンＣ１に単ｔ’ｊ
ｆｌ　Ｎ゛ｔ’４製するにらたつてに１１、ダイヤイオ
ンＩ−Ｉ　Ｐ　−２０、アンバーライ）ＸＡＤ、−，２
等の合成吸着剤、セファテツクスＬ　Ｈ−，２０等のゲ
ル濾過剤、酢酸エチル等による溶媒抽出法、シリカゲル
によるカラムクロマトゲランイー等が使用されるが、す
、下に述べる採取方法が効率的である。

すなわち培養液よジ菌体その他の固形物を珪藻土等のい
過助剤を用いてＦ別し、次いでＰ液中の有効成分をダイ
ヤイオンＴ４　Ｐ　−，２０に吸着すぜる。

柄脂ｉｂを水洗後、３″０％アセトン水で溶出する。

溶出取中の活性成分２減圧濃４ｉ＋ｊシ、アセトンを留
去する。この緘縮液を苛性ソーダ溶液でｐＨ９，０に調
整後、酢酸エチルで抽出する・この抽出液に水を等址加
え、塩酸にてｐｈ■　　ノ、０に調紐して抽出すると水
に転溶される。こｎ２さらＶＣｐｌＩ９．０にル’ｒＡ
整して酢酸エテルで抽出し、溌縮乾固する。これをさら
にセンアデソクスＬ　ＩＩ−、，２０、シリカゲル等の
カンムクロマトグ２ンイー′ｄ：適宜組み合せることに
エフ高純度のメガロミシン０＋　　ｋ得ることができる
。かくして得られたメガロミシンＣＩの理化学的性状を
メガロミシンＯＩの文献値と比較した結果完全に一致し
、ノカルディア梳に属する放線菌ＳＰ−，２２ｔ、！ｉ
株がメガロミシンＯｓｋ生産していることが明白になっ
た。

以下にメガ口ミシンＯｆ（遊離塩基）の物理ｆヒ学的性
状ヶ示す〇 （１）　　外　観　　白色粉末 （２）　　　融　　点　　　、２３　、ｒ　℃〜−２グ
。℃〔分ル４）（３）　　元素分析値 炭紫ｓｑ、、ｓ／ｚ、水素と、Ｊｇ％、窒素２．１に％
（４）　　紫外［ＩＳ吸収スペクトル λ”””　　　、！７　ｇ　ｎｍ　　（Ｅ／％−ｏ、ｑ
　ｔ　）ｍａｘ　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　／ｌ′ｒｎ（５）　　光外部吸収スペクトル １＜（ｅカリｒ）為針中で測定したメガ口はシンｃ、　
ｃ／）主な吸収は、３３−００．．２’？７０゜／７１
１’０．／’Ｉｔ、０．／３７３．／２’ＡＯ。

／／７０．／／コノ０，０グＯｃｍ　　である。。

（（リ　分子量 質歓分析Ｃ３ｌＩ〜１ｓ）ニジ分子量−１りｔｏである
。

（７）　　核磁気共１１捗スペクトル 重クロロホルム中で測定した／　００　’ｈｉｌ（ｚ　
　水素核核磁気共鳴スペクトルを添付図面に示す。

０ （８）　　比旋光度　〔α〕ＩＪ＝−１０コ０（ｃ／、
コニノノール）（９）　溶汀゛性 アルコール、酢＆エチル、アセトン、クロロホルム等の
有伝浴ム５に可溶、水に倣溶Ｑｔ：１；　　薄層クロマ
トゲランイーのＲｆ値（シリカゲル：メルクＦ２５４） クロロホルム−メタノール（ｓ：／）ｏ、り３酢酸エチ
ル−ベンセン　　（２＝７）ｏ、／。

Ｏυ　呈色反応 Ｉｄ性ニレミュー、　Ｈ２ＳＯ４ 陰性：ニンヒドリン 以下に本発明の方法を笑施例にエフざらに説明する。

実施例 （１）　　培養 ３利培地としてグルコース人０タハスターテ／、０％、
ペズトン０．Ｓ％、イーストエキス０．３％、大豆粉Ｏ
０，２％、ミートエキスｏ０．２夕。′、戻岐カルシウ
ム０．７％を含む培地を用いた。また、生産培地として
グルコースｉ、ｏＸ１グリセリン／、ｔＸ　１大豆粉／
、ｓＣＸ、イーストエキス０．１％、リン酸二カリウム
０．７％、硫酸マグネシラＡＯ０７％、炭酸カルシウム
ｏ４．塩ｆヒコパル）　０．０００１％を含む培地を用
いた。ｐＨは殺―前に全て７．０に調節した０ イーストエキス・スクーチ寒天スラントに充分生育した
ノカルディア働エスピー−８Ｆ−，ｚ、ｚｔ、３−株（
微工研菌寄第７０２３号）を前記殺菌済みのん培地２０
　ｎ１ｅずつを分注した１００−容三角フラスコ２本に
８〜ケ白金耳接槁し１．２ざ℃でダ日間培養し、第一種
培養液とした。

ついで、種培地ｇｏｄずつを分注しｆＣｓｏｏｗ容の三
角ンシスココ本に、前記の第一種培養液弘ｄずつを接種
し１．２ｇ℃で２日間振盪培養し、これケ第二種培養液
とした。

ついで、種培地ｊ−００ｒｔｄ！ずつを分注した２！容
のカブフラスコ２本に、前記の第二種培養液２Ｊ−ずつ
を接種し１．２ｇ℃で７日間振盪培養しこれを第三種培
養液とした。

ついで、この第三種培養液をｘｏＢの殺菌済み生産培地
を含む３０！容のジャーファーメンクー２基に接種し、
ｓｚ”ｃで３日間通気、攪拌培養しｆｃ（通気Ｒ２０１
に７分、回転数、２７０　ｒｐｍ　）。

培養終了後、珪腺土を用いて濾過し、培養Ｐ液／　タ　
！　イヒ・得／と。

（２）　　メガ口ミシンーの精製 上記（１）で得た培養ヂ液／ｑｂ２ダイヤイオンＨＰ　
−２０（三菱化成製）２！の浴に通し、有効物質を吸着
させる。７０！の水で洗浄後、汚０％アセトン水で有効
物質全抽出する。２．ｅ分画でフラクション扁コ〜ｌに
活性画分が得られる。この活性画分を合併し、減圧下で
濃縮してアセトン全除去する。

この濃縮液２！を苛性ソーダ浴液でｐｉ−Ｉ　　７．０
に調整後、２！の酢酸エテル全卵えて有効物質全抽出す
る。ついでこの抽出液に／！の水？加え、塩酸にてｐＨ
２、ＯＫ調整して抽出すると水層に転溶される。この水
転液？ｆ：ｐＨ９，０に調整した後再び酢酸エチルで抽
出すると有効物質は酢酸エチル層に転浴される。この抽
出ＶＣに硫酸ナトリウムと加えて完全に脱水した後、１
縮乾固するとメガロミ／ンＯ１の粗粉末が２乙Ｏｍｇ（
純度的ｓ　ｏ　Ｘ）得られる。

つぎにこの粗粉末１１０〜を、２−のメタノールに溶解
させ、予めメタノールで充填した（・ン７デソクスＴＪ
　Ｈ−，２ｏ　（ファルマシア社製）と００１ｎｌ！の
塔に付し、メタノールで展開すると１ｚｒｎ１分画でン
ラクションノ１．・、２６〜３グに活性フラクションが
イ：Ｊられる。この活性ンラクション金合併し、減圧下
で娠縮乾固するとメガロミシン０．の白色粉末が３ざＱ
　ｒｎｇ　（純度的７０％′）得ら扛る。

つｄにこの粉末、Ｊ’　ｓ　ｏ　ｍｆＩを、２　ｎｒｌ
のクロロホルムンこ溶解させ、予めクロロホルムで充填
したシリカゲル（和光純架製ｃ−，２０ｏ）　、２ｏｏ
−の払・に付し、クロロホルム−メタノール（，３０：
　ｙ　）　、ｓｏ。

ｍｌ　１　；”　”ホルム−メタノール（３ｏ　：　／
　）　ｓｏ。

ｍｅで洗ン了干した後クロロホルム−メタノール（１５
：／）で展開すると１Ｏ１ｎ１分画でフラクションＡ５
−ぶ〜２グに活性フラクションが得られる７５；、シリ
カゲルの薄層クロマトグラフィーで単一スポットケ与え
るフラクションはフラクションｉＬ１．　、、？０〜ダ
乙であった。この活注画分全減圧下で濃縮乾固スルト、
メガロミシンＣ１の純品ケ白色Ａ分末として／／ざ１ｎ
７（遊離塩基）得ること力Ｓできた。

【図面の簡単な説明】

図面は足りロロホルム中で測定したメガロミシンＣ，の
水素核核磁気共鳴スペクＩ□ＩｖＣ１０゜Ｉν１）ｌｚ
　）である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ｌ　ノカルディア属に夙する抗生物質メガロミシン０１
   　　生殖１を培養し、その培養物より抗生物質メガロミ
   シンＯｓ　　ｋ採取することを特徴とする抗生セブ質メ
   ガロミシンＣ１の製造法。 ノ　ノカルディア属に月し、抗生物質λ′ガロミシンＣ
   Ｉ　　生産能を有する菌株がメカルディア・ニス＋！−
   ＊ＳＦ−コ！　２１　ｊ　（Ｎｏｃａｒｄｉａ　ｓｐ。 ＳＦ−，２，２，＜、ｔ）である特許請求の％’ｖ２１
   ｑ　第１項Ｕｉ：　ｒ’、何の師造法。