JPS58121794A - 抗生物質ｔｔ−５２９９２，その製造法および微生物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規抗生物質ＴＴ−５２９９２、その製造法お
よび微生物に関する。

本発明者らは多種類の土壌などの試料を採取して、それ
らから分離される微生物についてそれら微生物が新規な
抗生物質を生産すること、該微生物ハシュードノカμデ
ィア真に属すること、該微生物を適宜の栄養培地および
培養条件で培養するととにより該抗生物質を培養物中に
蓄積させ得ることを知シ、この新規抗生物質を抗生物質
ＴＴ−５２９９２と称することにした。本発明はかかる
知見にもとすいてさらに研究した結果、完成されたもの
である。

すなわち本発明は、（１）抗生物質ＴＴ−５２９９２゜
（２）Ｖニードツカμダイア属に属する抗生物質ＴＴ−
６２９９２生産菌を培地に培養し、培養物中に抗生物ｊ
ｌｒＴτ−６２９９２を生成蓄積せしめ、これを採取す
ることを特徴とする抗生物質ＴＴ−６２９９２の製造法
、および（ｔＪ）シュークロース・ナイトレート寒天培
地上および酵母エキス・麦芽エキス寒天培地上で白色の
気菌糸を着生し、胞子はその大きさが約０．３−０．４
μｍｘＱ、５〜１．６μｍでその表面は平滑であ夛、生
育温度範囲は約１３〜３９℃で生育至適温度は約２６〜
ａ８℃であシ、スターチの加水分解祉弱い陽性であり、
ゼラチンの液化、脱脂牛乳の凝固および脱脂牛乳のべ１
トン化はそれぞれ陽性であ）、メラニン様色素の生成は
陰性であ夛、かつＬ−アブビノース、Ｄ−キシロース、
Ｄ−７フクトース、シュークロース。

１−イ／Ｖト一μおよびＤ−マンニットのいずれかを単
−灰素源として利用するシュードノカルディア・ラグネ
ンシスである。

本願においては、抗生物質ＴＴ−５２９９２を単にｒＴ
Ｔ−５２９９２Ｊと称することもある。

本発明において、ＴＴ−５２９９２は、シュードツカｙ
ダイア属に属しＴ’！’−５２９９２を生産する能力を
有する微生物を好気的に＠養し、通常一体中にＴＴ−６
２９９２を蓄積させ、これｔ作取するととによって製造
される。

該微生物の例としては゛、本発明者がフグナ湾（Ｌａｇ
ｕｎａ　　ａｅ　Ｂａｙ　）　（フイリツビン）の−土
壌から分離したＴ’Ｉ’−５２９９２株が挙げられ、そ
の菌学的性質は次の通りである。

１）形態学的性質 合成および天然培地において、基生菌糸は尊大中によく
伸長し、ジグザグ状ないし緩かな波状を呈する。また、
各種分類培地上で白色の気−系を着生し、その成熟し九
菌糸を顕微鏡でｍ察すると、不規則な分岐が見られ、そ
の先に平均１０個以上の胞子が直線状に連鎖している。

培養の経時的試料を走査電子顕微鏡で観察したところ、
いわゆるプラストスポア（Ｂｌａｓｔｏｓｐｏｒθ）の
形成段階で見られるアクロベタμ・パッディング（Ａｏ
ｒｏｐθｔａｌｂｕ＋１ｄｉｎｇ）が認められた。胞子
の大きさは０，３〜０．４μｖａ　Ｘ　Ｑ、　５〜１．
６μｍの円柱状であシ、その表面は平滑である。その他
、胞子のり、＃！核等の特異な構造体は認められない。

２）培養性状 ２８℃、１４日間培養後の各種培地上での性状は第１表
に示す通シである。

第１表ＴＴ−５２９９２株の分類培地上での諸性質イ）
　　シュークロース・ナイトレート寒天培地：生育（Ｇ
）：中程度、しわを生ずる。淡黄色（２ｅａ）” 気菌糸（ＡＭ）：中程度、白色 可溶性色素（ＳＰ）：なし 口）　グルコース・アスバフギン寒天培地二Ｇ：中程度
、クリーム色（１！／Ｓｏａ）ＡＭ：貧弱、白色 ＳＰ：なし ハ）　グリセロ−〃・アスバフギン寒天培地：Ｇ：中程
度、淡黄色（２１＆） ＡＭ：中程度、白色 ＳＰ：なし 二）　栄養寒天培地 ※ Ｇ：中程度、ふじ色（９ｏａ　）ないし淡桃色（ａＯａ
） ＡＭ：貧弱、白色 ＳＰ：なし ホ）　カルシウム。マレート寒天検地；Ｇ：中程度、淡
黄色（２ｅａ） ＡＭ：中程度、白色 ＳＰ：なし へ）　酵母エキス・麦芽エキス寒天培地：ＡＭ：中程度
、白色 ｓｐなし ト）　オートミール寒天培地： Ｇ：中程度、無色 ＡＭ’中程度、白色 ＳＰ：なし チ）　無機塩・スターチ寒天培地： Ｇ：中程度、無色 ＡＭ：中程度、白色 ＳＰ：淡紫色（１１Ｑ＆） す）　ペプトン・酵母エキス・鉄寒天培地：Ｇ：中程度
、淡黄色（２＠ａ） ＡＭ：なし ＳＰ＝なし ヌ）　チロシン寒天培地： Ｇ：中程度、淡黄色（ｇｅａ） ＡＭ：中程度、白色 ８Ｐ：なし １１：＊ツーｅハψモニー中マニュ７Ａ’　　第４版（
コンテイナー・コーポレーシミンー第１・アメリカ、１
９５８年発行）による色名記号’Ｉ’Ｔ−５２９９！株
の生理的性質は第２表に示す通シである。

第２表 イ）　生育温度範ｍ：ｌａ”ｃ〜ａｅ℃生育至適温度　
２６℃〜８８℃ 口）　気菌糸着生温度：１７℃〜８７℃ハ）　ゼフチン
液化：陽性 二）　でん粉加水分解：＆Ｉ性（弱い）ホ）　硝酸塩還
元能：陰性 へ）　　Ｈ２Ｓの生育：陰性 ト）　　ミルク・ベプＦン化：陽性 チ）　セルロース分解：陰性 り）　　ミルク・凝固：陽性 ヌ）　カゼイン分解能：ｌＩＩ性 ／Ｌ／）　　メラニン様色素形成：陰性オ）　チロシン
分解能：陽性 ワ）　キサンチン分解能：陽性（弱い）力）　ヒボキサ
ンチン分解能：陽性 Ｍ）　食塩耐性ニア％ り）＊素源の利用性（グリドハム・ボラトリー１寒天培
地） 利用する（＋）： Ｄ−ソμビトール、１−イノシト−Ａ／、Ｄ−マンニド
−Ａ／、Ｄ−年Ｖロース、Ｌ−アフビノース、Ｄ−ガフ
クトース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フフクトース、トリビ
オース。

マ〜トーヌ、シュークローヌ、ラクトース。

トレハロース、マンノース、　可溶性ｍ粉。

グリセロ−〜 利用が疑わしい（±）： 、Ｌ−フムノース、フフィノース、エスクリン。

すりＶン 細胞の化学分析 細胞壁の組成ニ ジアミノピメリン酸はメソ型でグリシンを有せス、アラ
ビノース、ガラクトースを有する。

全曹体糖組成： アフビノース、ガラクトースを有スル。

ｆｉ／Ｖヱパリエ、！ＭＡ’Ｓ／エパリエ〔インターナ
ＶＨすμ・ジャーナ〃・オグ・Ｖステマチイック・バク
テリオロジー（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　　Ｊｏｕ
ｒｎａｌｏｆ　８ｙｓｔｅｍａｔｉａ　　Ｂａｏｚ＠ｒ
１ｏ１ｏｇ７）２Ｑ巻、４８６〜４４８頁、１９７０年
）の分類によると、本願の細胞壁組成はＩＶＷで、全菌
体の糖組成はム型である。又、モμダ／ｌ／スカと４Ａ
／ダＡ／スキー〔ジャーナル・オプ・ジエネヲＡ／−ミ
クロビオロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　　Ｑｅｎ＠
ｒａｌ　　Ｍｉｏｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　）７１巻、７７
−８６頁、１９７２年〕の方法に準拠し、ミコー、ＩＩ
Ｌ／ｇｌｌｌｌ（ＬＣＮ−ム）の検出を試みたが、認め
られなかつ九。以上の化学分析の結果から、零ＭＦＩＶ
ニードツカμディア属、サツカロモノスボフ属、サツカ
ロポリスメツ属、アクチノポリスｌフ属、ミクロポリス
ボッ属のいずれかＫＩＩＩ４するものと考えられる。し
かし、形態的には、基生曹１　　　　　　糸がジグザグ
状を呈し、気菌糸は１０個以上の胞子ｌＩＡを有し、さ
らにグラストスボア様の構造を示すなどの特徴から、本
誌はＶニードノカルディア属〔アμと−フ蜀ピュア・ミ
クロビオロギ−（Ａｒａｈｉｖ　　ｆｉｉｒ　　ｌｉｉ
ｏｒｏｂｉｏｌｏｇｉｅ　）　２５巻。

８７ａ−４１４頁、１９５７年〕Ｋ属する一菌株と考え
るのが妥当である。

シュートノカルダイアに属する公知の菌種としては、シ
ュートノカルダイア・サーモフイーフ（Ｐ、　ｔｈ＊ｒ
ｍｏｐｈｉｌａ）　（アルヒー７　、　ヒュ７−　Ｅク
ロビオロギ−２６巻、２１７ａ−４１４頁−（１９３７
年）、インターナＶ３す！・ジャーナル・オグ・Ｖステ
マテイク・バクテリオリジー２１巻、２９−４３頁（１
９７１年）　）　、　Ｖ：Ｌ　−ドノカμディプ・スビ
ノーサ（Ｐ、　８ｐｉｎ０８ａ）〔インターナＶ！！す
〜・ジャーナ／Ｌ’−オプ・システマテイク台バクテリ
オロジ−２１巻、２９〜４８頁（１９７１年）〕、シュ
ードノカルディア・ファステイデイオーサ（Ｐ、　ｆａ
ｓｔ１４１ｏｓａ）　（米国特許４．Ｏａｌ、２０６（
１９７７年６月２１日）〕。

Ｖニシュートノカルダイアズレア（ｐ、ａｚｕｒｅａ）
〔ジャーナ〜・オプ・アンチビオティクス（ＪＯｕｒｆ
ｉ＆ｌ　　Ｏｆ　　Ａｎｔｉｂｉｏｔｌａａ）　ａ　２
巻、９８５〜９９４頁（１９７９年）〕、Ｖニシュート
ノカルダイアーモスビノーサ（Ｐ、　ｔｈｅｒｍｏｇｐ
ｌｎｏｓａ）〔級生物学報　゛１８巻、８〜１０頁（１
９７ｆｆ４））。

シュートノカルダイア・メタノリグニカ　（Ｐ。

ｕ＋ｅｔｈｓＬｎｏｌｉｇｎｉｏａ）　（公開特許公報
　昭５５−９６０９１（１９８０年７月２１日）〕、Ｖ
ニシュートノカルダイアウコテイス（Ｐ、　ｙｕｋｏｔ
ｅｓ）〔公開特許公報　昭５５−９６０９１（１９８０
年７月２１日）〕の７種が知られている。ＴＴ−５２９
９２株の性質を上記の会知薗種に関する文献記載事実あ
るいは標準菌株と比較すると、シュートノカルダイア・
スビノーサ及びシュートノカルダイア・サーモスピノー
サはそれぞれ胞子の表面構造がとげ状を呈し、明らかに
零曹とは区別される。ｉたＶニードツカ〜ディアＱサー
モフイーフは生育の至適温度が４０〜６０℃で、胞子の
大きさは２．５Ｘ１．６〜１．８μ目であり、本菌株と
は異なる。シュートノカルダイア・ファステイグイオー
サは胞子の大きさが４．５Ｘ１．２μであシ、又、無機
塩・スターチ寒天及びシュークロースψナイトｖ−ト寒
天以外の培地上では気菌糸を着生しないか或いは着生−
しても非常に芝しい。しかしながら、本菌株の胞子の大
きさは０４８〜０．４μｍ　Ｘ　Ｑ、　５〜１．６μｍ
であシ、ペプトン・酵母エキス・鉄寒天培地以外の各種
合成及び複合培地上で中程度ないし時にはや覧貧弱な場
合もあるが、いずれにも気菌糸を着生する。従って、両
者は異なる。またシュートノカルダイア・アズレアはそ
のｘｉ糸の色調が各種寒天培地上で白色から青色を呈し
、明らかに本菌株とは異なる。シュートノカルダイア・
メタノリグニカとシュートノカルダイア・ユウコテイス
はいずれも好湿性の菌種であシ、生育の至適温度はそれ
ぞれ８６〜４ａＣ，８７〜４７℃であり、緘素源の資化
性に於いて両者ともシュークロースの資化能を有せず、
本菌株と明らかに区別される。以上ＯようＫＴＴ−６２
９９！株は公知のＶニードノカルディア属の−ずれの菌
種とも異なる新しい菌種であることが明らかにされたの
で、本菌株をその分離源である土壌の採取地にちなみシ
ュートノカルダイア・ラグネンシス（Ｐａθｕｄｏｎｏ
ｃａｒｄｉａｌａｇｕｎｅｎｓｉａ）と命名し九。

本菌株ＴＴ−５２９９２株は、当初Ｖニードラカルダイ
ア−エスピー（Ｐｓｓｕａｏｎｏａａｒａｉａ　　ｓｐ
、）＆ＴＴ−５２９９２として財団法人発酵研究所に昭
和５６年１１月２４日に工ｒｏ　　１４１ａ４として、
通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所に昭和５６
年１２月２４日にＦＩＲＭ　Ｐ−６２８８としてそれぞ
れ寄託され、その後本菌株はシュードノカルディア―ラ
グネンシス（Ｐｓθｕ４ｏｎｏｏａｒｄｉａｌａｇｕｎ
ｅｎｓｌｓ）　Ｎａ　Ｔ　Ｔ　−５２９９２と命名され
た。

一般に、シュードラカルブイア属菌は、その性状が変化
しやすく、自然的に又変異剤によって変異を起し得る。

九とえばＸ線、ガンマ−線、紫外線等の放射線の照射、
Ｉｉ々の薬剤を含有する培地上での培養、その他の手段
で変異させて得られる多くの変異株、あるいは自然に得
られる突然変異ｉ　　　　　株等であっても抗生物質Ｔ
Ｔ−５２９９２を生産する能力のある微生物はいずれ４
使用することができる。

本発明においては、Ｖニードノカルディア属に属するＴ
Ｔ−５２９９２生産曹が培養されるが、培地としては通
常の微生物が利用し得る栄養物を含有する屯のを使用す
れば良い。すなわち、栄養源としてたとえばグルコース
、スターチ、グリセロール、デキストリン、Ｖニークロ
ース、水飴。

糖蜜などの炭素源、を九窒素源として、友とえは脱脂大
豆粉本しくは生大豆粉、コーン・スチープ・リカー、小
麦胚芽、綿実粉、酵母エキス、＊酸アンモニウム、硝酸
アンモニウムなどの有機または無機窒素化合物がいずれ
も有効に利用される。また必要に応じて羨酸力Ａ／￥ウ
ム、権化ナトリウム。

塩化カリウム、リン酸塩など無機複類を添加しても良い
。また菌の生育を助けＴＴ−５２９９２の生産を促進す
るような適宜の有機物や無機物を添加しても良い。

培養法としては一般の抗生物質生産方法と同様に行なえ
ば良く、液体培養法とくに深部通気培養法が好ましい。

培養に適するｐＨｑ約５〜９、温度は約２４〜３７℃で
あシ、多くの場合約２８℃〜ａＯ℃付近で培養される。

ｔた培養日数は通常約２〜７日間、好ましくは約８〜５
日間である。

本菌株によって生成される抗生物質ＴＴ−５２９９２は
培養の条件によシ異なるが通常は菌体中に生成される。

本物質の力価測定はバチμス・サフチリス（Ｂａｏｉｌ
ｌｕａ　　ｓｕ’ｂｔ１１１ｓ）　ＰＣＩ２１９株を試
験菌と七てＴＴ−５２９９２を標準品として、トリグテ
イケース・ソイ寒天（ＢＢＬ　　パμティモア・バイオ
ロジカル社（ＢａｌｔｉｍｏｒｅＢｊｏｌｏｇｌｏａｌ
ｓ　　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　）＄１）培地を用い
るカップ法またはベーパーディスク法により実施できる
。

このようにして培養された培養物を濾過ｔたは遠心分離
で菌体＆［’ｉ液とに分け、菌体にろ液と同量の５０％
メタノ−μ水を加えて２０〜２５℃１時間攪拌して得喪
抽出液についてそれぞれＢａｃｉｌｌｕｓ　　５ｕｂｔ
ｉｌｉ８　　ＰＣＩ　　２１　ｍを試験菌とする前記の
方法に従って該抗生物質の含量が測定される。

培養物中に産生されたＴＴ−５２９９２を採取するには
本物質が脂溶性であるため、かかる微生物代謝物を採取
するために通常用いられる分離精製の方法が適宜利用さ
れる。たとえば不純物との溶解度の差を利用する手段、
活性度、マクロボーラス非イオン系樹脂、シリカゲル１
アルミナ等各種の吸着剤の吸着親和力の差を利用する手
段、イオン交換樹脂による不純物の除去手段のいずれ屯
がそれでれ単独で、また組合せであるいは反覆して利用
される。前記のようにＴ’ｌ’−５２９９２は通常は菌
体に含まれるので（１）濾過または遠心分離などで分離
した菌体から溶媒抽出するか、あるいは（２）ｉｉ体を
分離しない全培養物から溶媒抽出するかいずれの方法で
も使用しうる。菌体を分離して抽出する場合には以下の
方法で実施するのが有利である。すなわち菌体からの抽
出には水と混合する有機溶媒と水との混合物たとえばメ
タノール。

エタノールなどの低級アμコーｌｖ類と水との混合物、
アセトンまたはメチμエチルケトンのようなケトン類と
水との混合物を使用して抽出するととができるが、通常
７０外〜５０％アセトン水またはメタノール水を用いる
のが有利である。すなわち菌体にその２〜８倍量の７０
％アセトン水を加え室温で８時間攪拌することによって
菌体中のＴＴ−５２９９２は全て抽出される。抽出液中
の溶媒たとえばアセトンを減圧下に留去し、水性抽出液
を抽出に適当な溶媒を用いてＴＴ−５２９９２を溶媒層
に抽出する。溶媒としては水と混じらない有機溶媒でし
かもＴＴ＝５２９９２を抽出し得る有機溶媒、たとえば
ブタノ−μ、イソゲタノールなどのアルコール類が用い
られる。抽出は弱酸性付近で行われ、好ましくはνＨａ
Ｋ調整した水性液からイソブタノ−〃を用いて行なわれ
る。抽出液は水、戻酸水素ナトリウム水、希塩酸水で順
次洗滌後再度水洗した後減圧濃縮斡１．　　エーテル等
を加えて有効成分を析出させ、遠心分離あるいはｐ過に
よ＃）ＴＴ−５２９９２の種物質が得られ、　　　　　
　る。種物質の精製には種々の吸着クロマトグツフィー
が利用出来る。吸着剤としては抗生物質の吸着に一般に
使用される担体が使用でき、たとえば吸着性樹脂、シリ
カゲル、アルミナ等が使用できる。吸着性樹脂からＴＴ
−５２９９２を溶出するにハ低級アｐコー〃類（例、メ
タノール、エタノ−Ａ’、ブタノ−μあるいは低級ケト
ン類（例、アセトン、メチルエチルケトン）などのよう
な水と混合する有機溶剤と水との混合物を使用する。ま
た吸着剤としてシリカゲ〜を用いるときは、非極性溶媒
（例えばハロゲン化羨化水素、クロロホルム等）とメタ
ノ−μのような極性溶媒との混合比を変化させる（極性
溶媒の比率を増加させる）ことによシクロマトグフフイ
ー分離が行なわれる１またここに得られた粉末をさらに
精製するには、同じくシリカゲルを用いて溶媒として脂
肪酸エステμ、例えば酢酸エチルとメタノールとの混合
溶媒を用いるかまたは分子篩的効果を４つセファデック
、ｃ　（９ｓｐｈａａ＠ｒ）　ＬＨ−２０（ファμマＶ
ア社スウェーデン）等を担体としてメタノ−μ等のアル
コ−Ａ／ＩＩを展開溶媒として使用して精製出来る。

後述の実施例２で得られた抗生物質ＴＴ−５２９９２の
結晶の物理化学的性状はつぎの通シである。

（１）元素分析（％）：（五酸化リン上、６０℃。

１６時間減圧乾燥し九もの） Ｃ，６３Ｊ１．　　Ｈ８，６９，Ｍ　　４．７９（２）
分子量：約８４０±４０（Ｃ−ＮＭＲおよび元素分析値
より計算） （３）融点：１９１〜１９８℃（分解）（４）比旋光灰
：〔α）Ｆ　＋　２２６．８°　（Ｑ−０，５゜ジメチ
μホμムアミド） （５）紫外線吸収スペクトｆｉ／： λご／−、ｆｉ／、）弓２７Ｂ（９６，８）　、８５７
（６０８）。

Ｃ８５（９０５）　、ａ９１ｉ（８７０’）（６）赤外
線吸収スペクトｆｉ／＝（臭化カリウム錠。第１図参照
。主要ピークを以下に示す。）１７２０．１６７０．１
１８０．１１０１０（ｃ　）（７）溶剤に対する溶解性
： 可溶ニジメチ〜ホ〃ムアミド、ジメチμスルホキナイド
、ピリジン 難溶：水、メタノ−μ、アセトン 不溶：ジエチμエーテμ９石油エーテ〜（８）呈色反応
： 陽性：ニンヒドリン反応、ベプタイド試薬、過マンガン
酸カリウム試薬 陰性：工−μリツヒ試薬 擬陽性：モーリツＶユ試薬 （９）塩基性、酸性、中性の区別：両性物質顛物質の形
状と色：黄色針状晶 α１抗生物質Ｔ丁−６２９９２の分子式は、Ｃ４３−４
６■６７〜フ３　　’３　　°１２〜１３と推定される
・四薄層りロマトグヲフイー：（メルク社製シリカゲル
を使用） 溶媒　　　　　　　　　　Ｒｆ プロパノ−〜・水　　　　　　０，４７（４１） ブタノ−μ・酢酸・水　　　　０，６８（２：１：１） ＴＴ−６２９９２は、常套手段によプ薬理学的に許容し
得る塩とすることもできる。級塩としてはたとえば塩酸
塩、トリエチルアミン塩などが挙げられる。

ＴＴ−５２９９２はその紫外部吸収スペクトμからヘプ
タエン（ｈｅｐｔａｒｎｅ）を発色団（りｐモフオアー
）とし、マ喪赤外部吸収スペクト〜上１７２０ａｓ　　
Ｋ？り）ンｃｏの吸収が認められる１＋推定分子式で示
されるように、１分子中窒素８原子が含まれていること
から、アミノし糖体を含むヘプタエン・マクロライＦ　
（ｈｅｐｔａｅｎｓ加ａｏｒｏｌｉ（１０）と推定され
る。

へ１タ工ン群抗生物質としては、種々の化合物か知られ
ている。たとえばトリ：１マインン（Ｔｒｉｏｈｏｍｙ
ｏｉｎ　）、ベリマイシン（Ｐｅｒｉｍｙａｉｎ）。

フルボマイシンＣＢ’ｕｌｖｏｍｙｃｉｎ）、ｚ＜　）
　リＶン（Ｐａｔｒｌｏｌｎ）　、アスコシンＡ　、　
Ｂ　（Ａｓｏｏｏｉｎ）などが挙げられるが、これらの
化金物の直素含量は約１〜８％であるのに対し、本抗生
物質’Ｉ’Ｔ−５２９９２の窒素含量は約４．７９％で
あること、またこれらの公知のへブタ千ン抗生物質の生
物活ｉ　　　　　性のパターンと本抗生物質Ｔ’Ｉ’−
５２９９２の生物活性のパターンとは全く異なっている
ことから、本抗生物質ＴＴ−５２９９２は新規化合物と
考えられる。

各種微生物に対する最少阻止ａ度（ＭＩＣ）を第８表に
示す。なおここにおいて、１ｈｃｏｂａａｔθｒ１ｕｌ
ｎｔｕ’ｂｓｒａｕｌａｇ１ｓ　　Ｈ３’７　Ｒｖおよ
びＭｙｏｏｂａｏｔｅｒｉｕｍｉｎｔｒａｏｅｌｌｕｌ
ａｒｅ　　ｐ　−４ｇは５％牛血清添加キルヒナー培地
を使用した稀釈法にょ夛ａ７℃で２ＩＩ４間＠費後に、
その他ＯＭ７ａｏｂａｏｔｅｒｌｕｍ属菌ハ３第グリセ
ロ−／Ｖ添加トリプティヶース・ソイ寒天（Ｔ８Ａ、Ｂ
ＢＬ＠ｌ）を用いた稀釈法によって８７℃で４２時間後
に、一般細菌に対して＃１ＴＳＡを用いた稀釈法によっ
て８７℃で１８時間後に、またカビ・酵母に対しては！
襲グμコース添加ＴＳムを用いた稀釈法により２８℃で
４２時間後にそれぞれ判定した。

（以下余白） 第８表 （μｇ／ｇ？） Ｅａａｈｅｒｉｃｈｉａ　ｏｏｌｉ　Ｎ工Ｈ，Ｔ　ＪＣ
２〉１００Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｖｕ１ｇａｒｉｓ工ＩＰＯ
ａ０４５　　　＞１００ＰＩ３＠ｕａｏｍｏｎａｓ　　
ａ＠ｒｕｇ１ｎｏａａ　　ＩＦＯ８０８Ｇ　　　ン１０
０Ｂａｏｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ　ＰＣ工２１９
　　０．７８Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｏｅｒｅｕｓ工ＩＰＯ
Ｂ６１４　　０．７８９ｔａｐＪｌｏｃｏｏｃｕａ　　
ａｕｒｅｕｓ　ＦＤＡ　２０９Ｆ　　　　１．５６Ｍｙ
ｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ａｍｅｇｍａｔｌｓ　　ＡＴ
ＣＣ６Ｇ？　　　ｔｏｏ〜＞ｔｏ。

Ｍｙａｏｂａｏｔｅｒｉｕｍ　　ｐｈｌｅｉム’Ｉ’Ｃ
Ｃ１９２４９６，２５］ｌｌｌｙａｏｂａａｔｂｒｉｕ
ｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　Ｈ；Ｊ７Ｒｖ　　１２
．５Ｍｙｃ＋ｏｂａｏｔｅｒｉｕｍ　１ｎｔｒａｏｅｌ
ｌｕｌａｒｅ　Ｐ−４８１２，５Ｃａｎｄｉｄａ　　ａ
ｌｂｉｏａｎｓ　　ＩＦＯ０５８ａ　　　　　＞１００
Ｓａ１００５ａｏａｈａｒｏ　ａｅｒｅｖ１＊１ａｅ　
ＩＦＯ０２０９）１００Ａａｐｅｒｇ１１１ｕｓ　ｎｉ
ｇｅｒ工Ｆ０４０６６　　＞１００ｐ６ＨＩＱｉｌｌｉ
ｕｌｌｌ　Ｑｈｘ”ｙＢＯｇ＠ｎｕｍ工ＦＯ４６２６＞
１００マウスを供試動物とした急性毒性試験でＴＴ−６
２９９２を腹腔的注射投与した場合のＬＤ５ｏは４００
１１ｆ／に９以上であった。

本発明の抗生物質’Ｉ’Ｔ−６２９９２は檎々の微生物
に対して抗菌活性を有するので、抗菌剤として用いるこ
とができる。

本抗生物質ＴＴ−５２９９２は、これを１０〜１００μ
ｇ／麿を程度の水溶液（液剤）とすることＫよシ、鳥か
ごの消毒、９！験器具の消毒９人の手の消毒などに消毒
剤として直接塗布あるいは該溶剤に実験器具２人の手を
侵すことにより用いる仁とが出来る。

以下に実施例を挙げて本発明上さらに詳しく説明する。

なお、培地組成のパーセント（％）は重量／容量パーセ
ントを示す。

実施例！ り〃コース２％。可ｓａ殿ｓａ％、コーン・スチーデ嗜
リカー１襲、生大豆粉１％、べ１トン０．５％１食塩０
．　ａ％ｔ　ＣａＣＯ３’　０．５　％　（ｐＨ７−０
）からなる培地５００　＠ｔを２１’ｌａ坂ロフフスコ
に入れ、１２１℃で２５分間滅菌したしたのち、シュー
ドツカμダイア・ラグネンシス庵ＴＴ−５２９９２（Ｉ
Ｆｏ　　１４１ａ４．ＦＥＲＭＰ−６２８８）を接種し
、２８℃で２日間往復式振盪機上で培養した。得られた
培養液１１を上記檎培地と同一組成の培地１００１を含
む２００１容タンクに移植し、２８℃で２日間通気攪拌
培養（通気量、１００％。

攪拌　２００回転／毎分）を行なった。得られた１７Ｍ
培ＩｊＨ＆５０１ｔシュークロース８％、コーン・スｆ
−７”−リカー２％、　ＣａＣ０３ｏ、　５％（ｐＨ７
，０）からなる培地１．００（ＩＪを含ｔｒ２，０’０
０１容３１７りに接種し、ａ日間通気攪拌培養（通気量
、１００％；攪拌、２００回転／毎分）を行った。以上
のようにして得られた培養液９２０１にハイフロス−バ
ーセル（米国　ジョンズ・マンヴイル・プロダクト社製
）１０ｋｇを加えて、オリーパ濾過器（日本　大機ゴム
ＫＫ製）を用いて濾過し、湿菌体７９ｋＱを集めた。こ
れに６０％メタノ−／Ｉ／１６０番　　　１ １を加え攪拌抽出を６０分行い加圧式沖讐届で濾過し抽
出メタノール液１８（Ｄ７ｔｌｉた。抽出液をｔｓｌｔ
で減圧濃縮し、濃縮液に希塩酸を加えてｐＨ３，ＯＫ調
整後、イソブタノ−ＩＶ７．５ｆ宛で２回抽出を行った
。得られた抽出イソブタノール（１５１）を８％炭酸水
素ナトリウム水５１宛で２回洗滌後、Ｎ／６０樵ａ１７
．５１宛で２回洗滌し、さらに水６１１宛で２回洗滌し
た。最後の洗液のｐＨが６以上であることをたしかめた
上で洗滌インブタノ−μをａｏｏｙｔで減圧濃縮した。

ここに得られた濃縮液にエータｆｉ７１．５１を加えて
析出する沈澱を枦取乾燥すると３．８ｆの粗物質工が得
られた。このうち２．５ｆをメタノール：クロロホルム
（１：１）２Ｌｓ／に溶解後、シリカゲ／Ｉ／２ｙを加
えて混合し、減圧濃縮して溶媒を留去した。あらかじめ
用意されたシリカゲｆｉ／（西独メルク社０．０６〜０
．２鱈）カラム２５０１１上に加え、クロロホルム：メ
タノール（４：１）２５０ｍで洗滌後、　同ｓ媒ｉ　１
　、クロロホルム二メタ／−／Ｌ’（２：１）Ｉｌで溶
出し、５０ｗ１宛分画した。前述の方法で有効区分を検
出しフラクション番号１８〜２８１でを集めて減圧濃縮
後、エーテルを加えて得られた沈澱を集め、乾燥すると
粗物質Ｉ１１．４Ｎが得られた。ここに得られた粗物質
Ｉ１１．４Ｆを９墓のメタノ−ｆｉ７に溶解し、あらか
じめ用意され九セファデックヌＬＨ−２００カラム５０
０　ｍｌ上に注ぎ、メタノールで展開し、有効区分を集
めて、減圧濃縮を行った。濃縮液ＬｙｓｌＫ酢酸エチｌ
Ｌ’２ｍ。

エータ／ｕ２ｍを加えて放置すると黄色針状晶が晶出し
た。これを枦取乾燥するとＴＴ−５２９９２の黄色針状
晶１８ＯＩ’Ｆが得られた。母液を濃縮後エーテルを加
えると無友形のＴＴ−５２９９２ののようにして得られ
た再結６品の融点は１９１〜１９３℃（分解）であった
。

実施例２ 実施例１の方法で得られた培養液（９２０１）にメタノ
−μｍ、０ＯＯ１を加え室温て゛６ｏ分間攪拌後、ハイ
フロス−バー七〜ｌｏ幻を濾過助剤として加え、オリ−
が−濾過器を用いて濾過した。ここに得られ九Ｅ液（１
８５０１）を減圧濃縮して５００Ｊｔで濃縮し、濃縮液
に稀塩酸を加えてｐｎ８に調整後、酢酸エチＡ／ａｏｏ
ｌを加えて抽出し、これに可溶の不純物を除去後、イソ
ブタノール２６０１宛で２回抽出を行った。ここに得ら
れた抽出液を実施例１で得られた抽出液と同様に、８囁
戻酸水素ナトリウム水８０ｇ宛２回、Ｎ１５０塩酸１２
０ｊ宛２回、水８０１宛で２回洗滌後、洗滌イソブタノ
−μを約ａｏ□ｗｌｉで減圧濃縮し、エータ１４／Ｌ５
ｇを加え析出する沈澱を枦取乾燥すると粗物質Ｉ５．２
ｆが得られ九。このうち３．９ｆを実施例１に準じて、
シリカゲルカラム、セファデックスＬＨ−２０カラムの
順に精製すると、精ＴＴ−６２９９２黄色針状晶１２８
Ｗが得られ友。融点１８５〜１８７℃（分解）。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１で得られた抗生物質ＴＴ−５２９９２
の赤外線吸収スペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 〔１〕、結晶として次の理化学的性質を有する抗生物質
   ＴＴ−６２９９２：　　。 （１）元素分析（％）：（五酸化リン上、６０’Ｃ。 １６時間減圧乾燥したもの） Ｃ６３Ｊ±１ ■　　８．５±０．５ Ｎ　　４．８±０．５ （２）分子量：　８４０ｆ４０　（１３Ｃ−ＭＭＲおよ
   Ｕ７Ｃ素分析値より計算） （３）比旋光度：〔α）Ｆ＋！２７°　：１＝２０＠（
   ａ＝０．５．ジメチルホルムアミド） （４）紫外線吸収スベク）ＩＬ／：　（メタノ−〃中吸
   収極大波長および吸光度 。１囁　） ３ ２７Ｂ＋２ｎｍ　　（９７ｆｌＯ） ８６７±２　ｎｍ　　（６０８ｉ６Ｇ）ａ８５ｆ！ｎ＝
   　　（９０６ｆ９Ｇ） ８９ｇ＝１＝２ｎｍ　　（８７０±９０）（５）赤外線
   吸収スペクトμ：（臭化カリウム錠。 １　、主要ピーク） １７２０．１６７Ｇ、１８ｇ０．１０１０（６）溶剤に
   対すゐ溶解性・： 可溶：ｓ／メチルホ〜ムアミド、ジメチμスルフォキサ
   イド、ビーリジン 難溶：水、メタノ−ｐ、アセトン 不溶ニジエチルエーテル、石油エーテルｆｆ）呈色反応
   ： 陽性：二ンζドリン試薬、ぺ１タイド試薬、過マンガン
   酸カリウム試薬 陰性：エールリッヒ試薬 （８）塩基性、酸性、中性の区別；両性物質（９）物質
   の色；黄色 〔２〕、Ｖニードツカ〃ダイア属に属する抗生物質ＴＴ
   −６２９９２生産菌を培地に培養し、培養物中に抗生物
   質ＴＴ−５２９９！を生成蓄積せしめ、これを採取する
   ことを特徴とする抗生物質ＴＴ−５２９９２の製造法。 〔８〕、シュークローズ・ナイトレート寒天培地上およ
   び酵母エキス・麦芽エキス寒天培地上で白色の気菌糸を
   着生し、胞子はその大きさが約０．ａ〜０．４μ司Ｘ　
   Ｏ，６−１，６μｍでその表面は平滑であり、生育温度
   範囲は約１８〜８９℃で生育至適温度は約２５〜８８℃
   であプ、スターチの加水分解は弱い陽性であシ、ゼラチ
   ンの液化、脱脂牛乳の凝固および脱脂牛乳のべ１トン化
   はそれぞれ陽性であり、メラニン様色素の生成状陰性で
   あり、かつＬ−アブビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フ
   フクトース、シュークロース、１−イノ３／　）　＋　
   ＃およびＤ−マンニットのいずれかを単一炭素源として
   利用スるシュードノカルディア・フグネンＶス。