JPS6016237B2 - 抗生物質ｃ―１５００３ ｐ―２の製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、抗生物質Ｃ−１５００班−２を工業的に有利
に製造する方法に関するものである。

抗生物質Ｃ−１５００犯−２〔以下単に「Ｐ−２」と略
称することもある。〕は、カプチャンらによつてメイタ
ンシノール・プロピオネートなる名称で得られ、抗腫場
作用を有する化合物である〔ジヤーナル・オブ・ジ・ア
メリカン・ケミカル．ソサエテイ（Ｊｏ川岬ｌ ｏｆ
ｔｈｅ ＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅ
ｔｙ）９７巻、５２９４頁（１９５７年）〕。すなわち
、メイタンシノール・プロピオネートは、プッターリキ
ア・ベルコサ（ニシシギ科の植物）の樹皮に徴量存在す
るメィタンシノール、メイタナシンまたはメィタンシン
を抽出、分離精製し、得られたメィタンシノール（メィ
タナシンまたはメイタンシンの場合は化学的にメイタン
シノールにして）を化学的にプ。ピオニル化することに
よって、得られている。Ｐ−２は、土壌などの試料から
分離された微生物ノカルディア属菌の培養により、工業
的に有利に生産される方法が発見され、該方法は当出願
人によりすでに出願されている〔椿競昭班−３７１６７
、特顔昭５２一３７総５〕。

上記の方法で使用された菌は、抗生物質Ｃ−１５００３
の各成分の一種又はそれ以上を同時に生産蓄積するので
、もしそのうちの特定成分のみを採取しようとする場合
には、その分離精製がや）複雑となり、精製工程で収率
が低下するという問題が残っていた。

本発明者らは、この分離精製工程をできるだけ簡略化し
てＰ−２を効率よく製造する方法について種々研究した
ところ、培地中に特定物質を添加することにより、目的
とするＰ一２を極めて効率よく、または単独に近い状態
で製造し得るという新知見を得、これに基づいてさらに
研究した結果、本発明を完成したものである。

すなわち本発明は、ノカルディア属に属する抗生物質Ｃ
−１５００２主産菌を、プロピオニ／にｏＡの前駆物質
、プロピオン酸、ロィシン類似化合物およびバリン類似
化合物の少なくとも一種を添加した培地に培養し、培養
物中に抗生物質Ｃ−１５００兜−２を特異的に生成蓄積
せしめ、これを採取することを特徴とする抗生物質Ｃ−
１５００が−２の製造法である。

本発明においては、「抗生物質Ｃ−１５００３」あるい
は「Ｃ−１５００３」とは、下記の一般式（１）におい
て示される四つの化合物の夫々あるいは２以上の混合物
も含めた総称である。

〔式中、Ｒは−ＣＯ−Ｃ比−ＣＨ３， ，一ＣＯ−Ｃ均一ＣＨ２一Ｃ瓜又 は を表わす。

〕一般式（１）においてＲが−Ｃ０一Ｃ比−ＣＨ３の化
合物を「抗生物質Ｃ−１５００犯−２」と、Ｒがの化合
物を「抗生物質Ｃ− １５００知−３」あるいは単に「Ｐ−３」と、Ｒが−Ｃ
Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３一ＣＨ３の化合物を「抗生物質Ｃ−
１５００犯−３′」あるいは単に「Ｐ−３′」と、Ｒが
の化合物を「抗生物質Ｃ−１５００犯‐４」あるいは単
にｒＰ−４Ｊと、それぞれ称するものとする。

本発明の方法に用いることができる菌株としては、たと
えば士穣などから分離された放線菌Ｍ．Ｃ−１５００３
珠〔以下、「舷．Ｃ−１５００３珠」と略称することも
ある。

〕などが挙げられる。Ｍ．Ｃ−１５００３株の菌学的諸
性質をシヤー′リングおよびゴットリープの方法〔イン
ターナショナル．ジヤーナル・オブ・システマテイツク
・／ゞクテリオ ロ ジー（ｌｎｔｅｍａｔｉｏＭＩ
Ｊｏ川旭１ ｏｆＳ＄ｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏ
ｌｏｇｙ）、第１母萱、３１３頁〜３４０頁、１９６８
王〕に準じて検討し、２８℃、２１日間にわたって観察
した結果は下記の通りである。

１ 形態的特徴 基生菌糸は寒天培地上および液体培地中ともによく伸長
し、分枝する。

その直径の多くは０．８〜１．２ぶれであり、時には梓
菌状または分枝した短い菌糸状に分断することがある。
種々の分類用培地上でよく生育し、気菌糸は基生菌糸上
に発育するが、東状体（５０〜２００〃肌×２００×１
０００仏ｍ）を形成し、それらの上に発育することが多
い。気菌糸の形状の多くは屈曲状または直線状を示し、
まれにゆるい螺旋状を示すものも見られる。成熟した培
養を検鏡すると胞子が連鎖状になっていると考えられる
ものは少なく、それらの培養表面から採取した菌懸濁液
について検鏡した所、長楕円形（０．８×１．２ム肌×
４．８〜６．８山肌）および楕円形（０．８〜１．２×
１．０〜２．０ムｍ）の分節胞子様のものが多く観察さ
れ、電子顕微鏡による観察ではその表面は平滑であった
。２ 菌体組成 本菌株をＩＳＰ恥．１の改変塔地中で２８℃、６６〜９
０時間振函培養して、菌体を集め、洗総した。

上記菌体をピー・ベツカーらの方法〔アプライド、マイ
クロバイオロジ−（ＡｐｐｌｉｅｄＭにｒｏｂｉｏｌｏ
数）、１２篭、４２１頁、１９６４王〕およびェム・ビ
・レェヒバリェーの方法〔ジャーナル・オブ・ラボラト
リー・アンド・クリニカル・メデイシン（Ｊｏｕｍａｌ
ｏｆ凶ｂｏｒａｔｏひａｎｄ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅ
ｄｉｃｎｅ）７１巻、９３４萱、１９総年〕に従って菌
体細胞中のジアミノピメリン酸および糖組成を検した結
果、前者はメソ体であること、後者はガラクトースおよ
びアラビノースに相当するスポットの存在が認められた
。３ 分類用培地上の諸性質 本菌株は各種培地上で、いずれも比較的よく発育し、そ
の基生菌糸は培養初期無色ないし淡黄色で、その後、淡
黄褐色または黄褐色を示す。

また種々の分類用塔地中に黄色ないし黄褐色の可溶性色
素を生成する。気菌糸は粉状で、一般には中程度に発育
し、白色ないし黄色または淡黄褐色を示す。本菌株の各
種分類用塔地上における諸性状は第１表に示した通りで
ある。第１表 Ｍ．Ｃ−１５００３珠の分類用塔地上の
諸性質（ィ） 茂糖・硝酸塩寒天培地生育（Ｇ）：豊富
、黄色（３ｊａ）※ないし淡黄褐色（乳ｃ）※東状体形
成気菌糸（ＡＭ）：貧弱、白色 可溶性色素（ＳＰ）：なしまたは徴黄褐色（ロ） グリ
セロール・硝酸塩寒天塔地 Ｇ：中程度、淡黄色（次ａ）※東状体形成ＡＭ：中程度
、白色 ＳＰ：なし （ハ） ブドウ糖・アスパラギン寒天塔地Ｇ：中程度、
淡明黄色（３ｐａ）※ないし明黄色（独ａ）※ＡＭ：貧
弱、白色 ＳＰ：明黄色（沙ａ）※ （ニ） グリセロール・アスパラギン寒天培地Ｇ：中程
度、淡黄色（幻ａ）※東状体形成ＮＭ：貧弱、白色 ＳＰ：なし （ホ） でん粉寒天渚地 Ｇ：中程度、淡黄色（父ａ）※ないし淡黄褐色（次ａ）
※東状体形成ＡＭ：豊富、淡黄色（本ａ）※ ＳＰ：なし （へ） 栄養寒天培地 Ｇ：中程度、淡黄色（Ｚａ）※ないし黄色（Ｚ３）※東
状体形成 ＡＭ：貧弱、白色 ＳＰ：なし （ト） リンゴ酸カルシウム寒天塔地 Ｇ：中程度、淡黄色（沙ａ）※ないし淡黄褐色（彼ａ）
※東状体形成ＡＭ：中程度、白色ないし淡黄色（次ａ）
※ＳＰ：なし（チ） 酵母エキス・麦芽エキス寒天培地
Ｇ：中程度、淡黄褐色（母ｃ）※ないし賜褐色（乳ａ）
※東状体形成ＡＭ：中程度、白色ないし淡黄色（Ｘａ）
※ＳＰ：なし（ＩＪ） オートミール寒天培地Ｇ：中程
度、淡黄色（幻ａ）※ないし黄色（Ｚ３）※東状体形成 ＡＭ：貧弱、白色ないし淡黄色 ＳＰ：なし （ヌ） べプトン・酵母エキス・鉄寒天培地Ｇ：中程度
、黄色（Ｚ３）※ＡＭ：なし ＳＰ：黄色（なめ）※ （ル） チロジン寒天培地 Ｇ：中程度、淡黄色（Ｚａ）※ないし黄色（竿ａ）、束
状体形成 ＡＭ：中程度、白色ないし淡黄色（Ｚａ）※ＳＰ：蓑褐
色（３ｅ）※※：カラー・ハーモニー・マニュアル、第
４版、（コンテェイナー・コーポレーション・オブ・ア
メリカ、１９＄年発行）による色名記号 ４ 生理的性質 本菌株の生理的性質は第２表に示した通りである。

すなわち生育温度範囲は１ぞ○ないし斑℃、また寒天培
地（ＩＳＰ恥．２）上で気菌糸をよく着生する温度範囲
は２０ｑＣないし３５℃である。第２表 Ｎｏ．Ｃ−１
５００３珠の生理的性状生育温度範囲：１が０〜斑。○
気菌糸着生温度２０００〜３軍Ｃ ゼラチン液化：陽性 でん粉加水分解：陽・性 硝酸塩還元館：陽性 ミルク・ベプトン化：陽性 ミルク・凝固：陰性 カゼイン分解熊：陽・性 メラニン様色素形成（ベプトン・酵母エキス鉄寒天塔地
）：陰性、（チロジン寒天培地）：陽性チロジン分解熊
：腸性 キサンチン分解館：陰性． ヒポキサンチン分解館：陰性 リゾチーム耐性：腸性 食塩耐性：２％ ５ 各種炭素源の利用性 プリーダムおよびゴツトリーブの方法〔ジヤ−ナル・オ
ブ・バクテリオロジー（Ｊｏ町旧ｌｏｆ舷ｃｔｅｒｉｏ
ｌｏ幻）、５嶺篭、１０７頁、１９４８王〕に記載され
ている培地およびそれに酵母エキスを０．１％添加した
基礎培地を用いて、各種炭素源の利用性を検し、それら
の結果を第３表に示した。

第３表修Ｃ‐１５００３株の炭素源利用性炭素源
生育 炭素源 生育Ｄ−キン。

−ス 十什＊ ラフィノ−ス 十十＊Ｌ−アラビノ
ース ＋＋ メリビオース ＋ ＋Ｄ−グルコー
ス 什日 ｉ−ィノシトール −−Ｄ−ガラクトー
ス 十 十 Ｄ−ソルビトール −Ｄ−フラ
クトース 日日 Ｄ−マンニトール 日ＨＬ−ラムノ
ース ＋ ＋ グリセロール − 十Ｄーマン
ノース 川日 可溶性澱粉 ＋十シュークロー
ス 日日 対 照ラクトース マルトース 士＋ トレハロース 十日 ＊：酵母エキス０．１％添加基礎培地 注；川：豊富な発育 Ｈ：比較的良好を発育 ＋：発育を認める 土：僅かに発育する 」：発育しをい ６ その他の諸性質 前述２に示した方法で菌体を集め、これらとジェー・マ
ーマ−らの方法〔ジャーナル・オブ・モレキユフー・バ
イオロジ−（Ｊｏｕｍａｌ ｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢ
ｉｏｌｏ戦）、２０８頁、１９６１年〕に準じてＤＮＡ
を調製し、ＤＮＡのＧ−Ｃ含量を検すると約７１モル％
であった。

本菌株の栄養菌糸をグラム染色すると腸性であつた。

以上述べた地．Ｃ−１５００３珠の諸性質をェス・ェー
・ワックスマン著、ジ・アクチノミセテス（ｍｅＡｃｔ
ｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）、第２巻、ザ・ウィリアム・ア
ンド・ウィルキンス・カンパニー発行、１９６１年、ア
ール・イ−・ブツフアナン・アンド・ェヌ・ィー・ギボ
ンヌ線、パージーズ・マニュアル・オプ・デターミネー
テイブ・バクテリオロジ‐ （ Ｂｅｒｇｅｙ′ｓ Ｍ
ａｎｕａｌ ｏｆ 戊ｔｅ皿ｉ似ｔｉＶｅ母ｃｔｅｒｉ
ｏｌｏ幻）、第８版、１９７乎王およびその他の文献に
従って検索した。

本菌株は／カルディア（ＮＭａｒｄｉａ）属のグループ
ｍに属すると考えられるが、既知菌株の中には上記諸性
質を有する種は見出されず、新菌種と同定された。本菌
株肋．Ｃ−１５００３珠‘ま、工業技術院微生物工業技
術研究所にＦＥＲＭ−Ｐ 船．３９９２として、財団法
人発酵研究所にＩＦＯ−１３７２６として、ジ・アメリ
カン・タイプ・カルチヤー・コレクション（Ｔｈｅ Ａ
ｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｍｅ Ｃｏｌｌｅ
ｃｔｉｏｎ，ＮＥｒｙｌａｎｄ，Ｕ．Ｓ．Ａ）にＡＴＣ
Ｃ−３１２８１としてそれぞれ寄託されている。

以上に述べた様にＮｏ．Ｃ−１５００針茶はノカルデイ
ア属の新種であるが、微生物の一般的性質として自然的
にまたは変異剤によって変異を起し得る。

たとえばＸ線、ガンマ‐線、紫外線等の放射線の照射単
胞子分離、種々の薬剤を含有する培地上での培養、その
他の手段で変異ごせて得られる多くの変異株、あるいは
自然的に得られる突然変異株等であっても、上記した菌
学的性状または下記に示した様な菌学的性状との比較に
おいて実質的に別種とするに足らず、しかもＰ−２，Ｐ
−３，Ｐ−３′および（または）Ｐ−４を生成する性質
を有するものはすべて本発明の方法に利用し得る。たと
えばＮｏ．Ｃ−１５００３珠を種々の変異処理すること
により、可溶性色素をほとんど生成しないもの、基生菌
糸が無色のもの、黄緑色のもの、赤褐色ないし燈赤色を
示すもの、菌糸が樟菌状または分枝した短い菌糸に分断
し易いものおよび気菌糸が多く白色または気菌糸をほと
んど着生しない変異株が得られている。本発明の方法に
おいて培地に添加されるプロピオニルＣｏＡの前駆物質
とは、抗生物質Ｃ−１５００３生産菌を培養している培
地中に添加した場合に、プロピオニルＣｏＡに変りうる
物質を意味し、その例としては、炭素数４のＱ−アミノ
酸、炭素数４のケトカルボン酸が挙げられる。

炭素数４のＱ−アミノ酸としては、たとえばスレオニン
、ホモセリンなどが挙げられ、それらの塩（例、ナトリ
ウム塩、カリウム塩、カルシウム塩）またはェステル（
例、メチルェステル、エチルェステル）でもよく、Ｄ体
、Ｌ体、ＤＬ体のいずれでもよい。炭素数４のケトカル
ボン酸としてはたとえばはーケトブチレートなどが挙げ
られ、その塩（例、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシ
ウム塩）またはェステル（例、メチルェステル、エチル
ェステル）でもよく、Ｄ体、Ｌ体、ＤＬ体のいずれでも
よい。本発明において使用されるプロピオン酸は、塩（
例、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩）または
ェステル（例、メチルェステル、エチルェステル）でも
よい。

さらに、ロィシン類似化合物としては、たとえばノルロ
ィシンなどが挙げられ、バリン類似化合物としてはたと
えばノルバリンなどが挙げられる。上記のロィシン類似
化合物およびバリン類似化合物は、塩（例、塩酸塩、燐
酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩）またはェステル（例
、メチルェステル、エチルヱステル）でもよい。上記の
添加物の添加量は、培地に対し、一般的には約０．０１
〜１．０％（Ｗ／Ｖ％）、より好ましくは約０．１〜０
．５％（Ｗ／Ｖ％）である。

添加時期は、Ｐ−２の生産が継続している限りいつでも
よく、たとえば培養当初でもよく、培養開始後の適宜の
時期であってもよい。抗生物質Ｃ−１５００３生産菌の
培養に用いられる堵地は該菌株が利用し得る栄養源を含
むものなら、液状でも固状でもよいが、大量を処理する
ときには液体培地を用いるのがより適当である。

培地には本発明に用いられる添加物を添加するほか、舵
．Ｃ−１５００３珠が同化し得る炭素源、消化し得る窒
素源、無機物質、微量栄養素等が適宜配合される。炭素
源としては、たとえばブドウ糖、乳糖、ショ糖、麦芽糖
、デキストリン、でん粉、グリセリン、マンニトール、
ソルビトール等、油脂類（例、大豆油、ラード油、チキ
ン油等）その他が、窒素源としては、たとえば肉エキス
、酵母エキス、乾燥酵母、大豆粉、コーン・スチープ・
リカー、ベプトン、棉実粉、藤糖蜜、尿素、アンモニウ
ム塩類（例、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝
酸アンモニウム、酢酸アンモニウム等）その他が用いら
れる。さらにナトリウム、カリウム、カルシウム、マグ
ネシウムなどを含む塩類、鉄、マンガン、亜鉛、コバル
ト、ニッケルなどの金属塩類、リン酸、ホウ酸などの塩
類や酢酸、プロピオン酸などの有機酸の塩類が適宜用い
られる。その他、アミノ酸（例、グルタミン酸、アスパ
ラギン酸、アラニン、グリシン、リジン、メチオニン、
プロリン等）、ベプチド（例、ジベプチド、トリベプチ
ド等）、ビタミン類（例、Ｂ，Ｂ２，ニコチン酸、Ｂ２
，Ｃ，Ｅ等）、核酸類（例、プリン、ピリミジンおよび
その誘導体等）等を含有させてもよい。もちろん堵地の
ｐＨを調節する目的で無機または有機の酸、アルカリ酸
、緩衝剤等を加え、あるし、は消泡の目的で油脂類、表
面活性剤等の適量を添加してもよい。培養の手段は静置
培養でも、振盤培養あるいは通気燈洋培養法等の手段を
用いてもよい。

大量の処理には、いわゆる深部通気燈梓培養によるのが
望ましいことはいうまでもない。培養の条件は培地の状
態、組成、菌株の種類、培養の手段等によって一定しな
いのは当然であるが、それらは通常２０ｏｏ〜３５００
の温度で初発ｐＨを中性附近に選択するのがよい。とり
わけ、培養中期の温度は２３００〜３０℃、また初発ｐ
Ｈ‘ま６．５〜７．５の条件が望ましい。培養期間も前
記の諸条件により一定しないが、所望の抗生物質濃度が
最大となるまで培養するのがよい。これに要する時間は
液体培地を用いる振盤培養または通気蝿梓培養の場合は
通常２〜８日間程度である。上記したＰ−２製造法の具
体的な実験例として、Ｎｏ．Ｃ−１５００３珠を可溶性
でんぷん３％、塩化アンモニウム０．２％、硫酸マグネ
シウム０．０５％、りん酸第１カリウム１．０９％、り
ん酸第２カリウム２．０９％、硫酸第１鉄０．００１％
からなる培地（１）またはデキストリン５％、コーン・
スチープ・リカー３％、ベプトン０．１％、炭酸カルシ
ウム０．５％からなる培地（ロ）に前記した種々の添加
物を加え、培養した結果を渚地・（１）の場合を第４表
に、また培地（０）の実験例を第５表に示した。

この場合、抗生物質Ｃ−１５００３の総生成量はタフ。
ミセス・アベラネウス（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓａｖｅ
ｌｌａｎｅ船）ＩＦ０７７２１を試験菌とし、検定培地
〔燐酸二ナトリウム３．５夕、燐酸ーカリウム０．５夕
、酵母エキス（ディフコ）５．夕、グルコース１０夕、
寒天１５夕、蒸留水ｌｏｏ０泌、ＰＨ７．０〕上で、Ｃ
−１５００班−３を標準とするペーパー・ディスク法で
測定した。また生成されたＰ−２，Ｐ−３および／また
はＰ−４の分別には、これらを含む培養炉液に同量の酢
酸エチルを添加抽出し、濃縮、乾固後、元の炉液の１／
１０舷客の酢酸エチルに溶解し、薄層クロマトグラフィ
ー用の試料とした。薄層クロマトグラフィーは、シリカ
ゲル６岬２５４（メルク社製）のガラスプレートを用い
展開溶媒として、水飽和酢酸エチルを用いた。生成量お
よび生成比率は、島津２波長クロマトスキャナーＣＳ−
９１０を用い２私．即ｍの吸収の濃さと広さから測定し
た。この場合Ｐ−２，Ｐ−３およびＰ−４の総検出量を
１００％としてそれぞれの比較計算した。これらの結果
を第４表および第５表に示した。すなわち、舷．Ｃ−１
５００３珠を通常の培養を行なった場合、Ｐ一２の生成
量は約１５Ｗ／Ｗ％であり、それを単離する工程で収率
も低下するが、実験例に示したように、たとえば培地中
にナトリウム・プロピオネートを加えて培養することに
より、その生成物中のほとんどは所望のＰ−２のみとな
り、効率的に採取できる。第 ４ 表 （注）添力庇寺間が０とは、培養当初の時を表わすもの
とする。

第 ５ 表（注）添加時間が０は、上記と同意義。

このように培養物中に特異的に蓄積生成されたＰ−２を
精製取得するには、かかる微生物代射物を採取するのに
通常用いられる分離精製の方法が適宜利用される。

まず本物質が中性脂溶性であるため、水と混じらない有
機溶媒たとえば酢酸エチル、酢酸アミルなどの脂肪酸ヱ
ステル、プタノ−ルなどのアルコール類、クロロホルム
などのハロゲン化炭化水素、メチルィソブチルケトンな
どのケトン類が用いられる。抽出は中性付近で行なわれ
、好ましくはｐＨ７に調製された培養炉液から酢酸エチ
ルを用いて行なわれる。抽出液を水洗後、減圧下に濃縮
し、石油エーテル、ヘキサンのような非樋性溶媒を加え
て有効成分を含む粗物質を採取する。この中にはＴＬＣ
上で抗生物質Ｃ−１５００３以外の多数のスポットがみ
とめられるため、つぎの精製工程が利用される。すなわ
ち、通常用いられる精製法として種々の吸着クロマトグ
ラフィーが有効であり、吸着剤としては一般に使用され
る担体たとえばシリカゲル、アルミナ、マクロポーラス
非イオン系吸着樹脂等が利用できる。シリカゲルを利用
する場合には、非極‘性溶媒たとえば石油エーテル、ヘ
キサンから展開をはじめ、酢酸エチル、アセトン、エタ
ノール、メタノ−ルなどの極性溶媒を添加するかまたは
、ジクロルメタン、クロロホルムなどの含ハロゲン炭化
水素類から展開をはじめ、エタノール、メタノールなど
のアルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどの
ケトン類等の極性溶媒を添加することにより、Ｐ−２を
溶出、分離、採取する。また、マクロポーラス吸着性樹
脂を用いる場合、Ｐ−２を溶出するには、低級アルコー
ル類あるいは低級ケトン類、ェステルと水との混合物等
が用いられる。低級アルコール類としては、たとえばメ
タノ−ル、エタノール、プロパノール、ブタノールなど
、低級ケトン類としては、たとえばアセトン、メチルエ
チルケトン、ェステル類としては、酢酸エチルなどが利
用できる。その一例を示すと６０％メタノール水に粗物
質０をとかし、ダイヤイオンＨＰ−１０（三菱化成）カ
ラムに通過させて吸着せしめ、７０％メタノール水で洗
浄後９０％メタノール水で溶出すると目的物Ｐ−２が綾
出される。いずれの方法でも、得られたＰ−２の画分を
減圧濃縮し、乾燥物に対して５〜８倍量の酢酸エチルを
加え放置するとＰ−２の結晶が析出する。

実施例４で得られた抗生物質Ｐ−２の物理化学的性状は
、前述のカプチャンらの報告に示されるメィタンシノー
ル・プロピオネートに関する記載とよく一致した。本発
明の方法によると、Ｐ−２の生成比率は非常に高くなり
、また、生成量も数倍に増大するので、本発明方法は生
産量の増大と分離精製の容易この点において工業上きわ
めて有利である。

生物活性Ａ 抗微生物活性 トリプティカーゼ・ソィ寒天塔地（ＢＢＵ製）を検定培
地として、以下に示す微生物に対する発育阻止能をペー
パー・ディスク法で検した。

すなわち、下記微生物含菌平板塔地上でＰ一２の３００
仏夕／叫の溶液の０．０２財をペーパー・ディスク（東
洋製作所、薄型、直径８肌）に含ませたものにより生育
阻止能を検した。その結果、下記微生物に対しては活性
を示さなかった。エシエリヒア・コリ、プロテウス・ブ
ルガリス、プロテウス・ミラビリス、シユウドモナス・
アエルギノサ、スタフイロコツクス・アウレウス、バチ
ルス・ズブチリス、バチルス・セレワス、クレブジエラ
・ニユウモニヱ、セラチア・マルセスセンス、ミコバク
テリウム・アピウムー方、検定培地（燐酸ニナトリゥム
３．５夕、燐酸ーカリウム０．５夕、酵母エキス（ディ
フコ）５夕、グルコース１０夕、寒天１５夕、蒸留水１
０００の上、ｐＨ７．０〕の寒天平板を用い、タラロマ
ィセス・アベラネウス（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ ａｖ
ｅｌｌａｎｅ雌）を試験菌としてその生育能を検すると
Ｐ−２は３〜５仏夕／泌で生育阻止力を示した。

また、テトラヒメナ・ピリホルミス （ＴｅｔｒｈｙｍｅｎａｐＭｉｆｏｒｍｉｓ）Ｗ株を試
験微生物とし、検定塔地〔トリプトース・ベプトン（デ
ィフコ）２Ｍ、酵母エキス１夕、グルコース２夕、蒸留
水１０００の‘、１モル燐酸緩衝液ｐＨ７．０、１０地
〕を用い、２８ｑｏ、４４時間ないし４斑時間培養して
、液体稀釈検定法により該抗生物質の該微生物発育阻止
能を検した。

その結果、Ｐ−２は１山夕／机【で該微生物の発育を阻
止することを認めた。抗カピ性を第６表に示す。

第６表から明らかなように、Ｐ一２は、植物病源菌の発
育を阻止する。Ｐ一２の１０００仏夕／舵【溶液０．０
２の‘を侵した円形炉紙を、第６表の微生物をそれぞれ
移植した培地に置き、阻止円の直径を測定した。第６表
抗菌スベクトラム 試 験 菌 ＩＦＯ番号
塔地 時間 阻止径（机の）Ｐｙｒｊｃｕｌａｒ
ｉａ ｏｒｙｚａｅ
ＰＳＡ＊ ． ４ ８ ４ ０Ｐ
ｅｌｌｉｃｕｌａｒｉａ ｓａｓａｋｉｉ
９２５３ ＰＳＡ＊ ４８ ３５
Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｒｕｂｒｍｍ
５４ ６ ７ ＧＢ＊＊
４ ８ ３ ０Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ
ｍａｎｔａｇｒｏｕｈｙｔｅｓ ７５２
２ ＧＢ＊＊ ４ ８ ３ ２Ｃｒ
ｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ
０ ４１０ ＧＢ＊＊ ４
８ ３ ５＊ ＰＳＡ：ポテト・ンュークロ
ース・寒天培地 ＊＊ＧＢ：グルコース栄養寒天培地
上託したようにＰ−２は糸状菌および原虫に対し、強い
発育阻止館を有するので、防徴剤または抗原虫剤として
も有用なものである。

また、ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサ
エティ９７巻５２９４頁（１９５４）に示されているよ
うに、本物質は抗腫湯活性を示す抗腫場剤としても有用
であると期待される。Ｐ−２を防徴剤および抗原虫剤と
して使用するには、たとえば土壌、活性汚泥または動物
体液などの細菌生態を検する際に有利に使用し得る。

すなわち、土壌から有用な細菌類を分離する場合、また
は糠水処理に用いられている活性汚泥法の運転、解析に
原虫または轍以外の細菌類の作用を検する場合、試料中
に生存する轍または原虫を発育させず、細菌生態を選択
的に発育させることが出来る。具体的には被検試料を液
体または固体培地に添加し、その培地１舵【当りに本抗
生物質１０ないし１００〃夕／奴の１％メタノール含有
水溶液を０．２〜０．５机上添加し、培養する。Ｐ−２
は、表６に示した微生物によってひきおこされる植物病
の処理に用いる抗菌剤としても用いることができる。

その具体的な応用例としては、Ｐ−２を１％メタノール
水に５仏夕／地〜２０山夕／叫となるように溶解した液
剤として、たとえばィネ小黒菌談病、ィネゴマ葉枝病、
ィネ紋枯病などの処理に用いることができる。以下に実
施例を挙げて、本発明を詳しく説明する。

実施例 １ 種塔地（グルコース１．０％、パクトートリプトン２．
０％、バクトー酵母エキス１．２％、ｐＨ７．０）４０
奴【を２００の‘ェルレンマィャーフラスコに分注し、
滅菌後、ノカルディア・スベシーズ舷．Ｃ−１５００３
（ＩＦＯ−１３７２６：ＡＴＣＣ−３１２８１：ＦＥＲ
Ｍ一Ｐ 舷．３９９２）を接種した。

このものを２８ｏｏで回転振縁機上（２０仇ｐｍ）で４
報時間培養し種培養とした。この培養物５００奴を２０
０そ客ステンレススチール醗酵タンクに種培地（グルコ
ース２．０％、可溶性でんぶん３．０％、コーンスチー
プリカー１．０％、生大豆粉１．０％、ポリベプトン０
．５％、食塩０．３％、炭酸カルシュウム０．５％、Ｐ
Ｈ７．０）１００そを滅菌冷却したものに移植し、２蟹
○、通気量１００ぞ／分、蝿拝２００回転／分で４報時
間培養した。主培養は、２００そ客ステンレススチール
醗酵タンクに主培地（可溶性でんぷん３％、塩化アンモ
ニウム０．２％、硫酸マグネシウム０．０５％、リン酸
第１カリウム１．０９％、リン酸第２カリウム２．０９
％、硫酸第１鉄０．００１％、ナトリウム・プロピオネ
ート０．０５％）１００そを分洋滅菌後、種１０そを移
植し、２８ｑ○、通気量１００ぞ／分、蝿拝２００回転
／分、８日間培養を行った。生成された抗生物質Ｃ−１
５００３の総生産量は２．０メタ／机上で、その９０Ｗ
／Ｗ％がＰ−２であった。

実施例 ２実施例１で得られた培養物９５れこアセトン
５０夕を加え３び分間擬伴し、／・ィフロスーパーセル
（米国、ジョンズ マンヴィル、プロダクト社）２ｋ９
を加えよくかきまぜる。

混合物を加圧式炉過機で炉過し、炉液１３５夕を得る。
炉液に水５０と、酢酸エチル９０夕を加え櫨梓抽出し、
この操作を２回くり返す。酢酸エチル層を合せて水８０
ク宛で２回水洗し、無水硫酸ナトリウムｌｋｇを加えて
乾燥後２００肌まで減圧濃縮し、石油エーテルを加え、
析出する沈澱を炉取する（１５夕）。得られた粗物質に
酢酸エチル５０の‘を加えかきまぜ、不溶物を炉去し炉
液にシリカゲル（西独 メルク社 ０．０５〜０．２側
）１０夕を加えてかきまぜた後酢酸エチルを減圧下に蟹
去し、あらかじめ用意したシリカゲルカラム（５００の
‘）の上端におき、ｎ−へキサン５００の‘、ｎ−へキ
サン酢酸エチル（３：１）５００の‘、ｎ−へキサン酢
酸エチル（１：１）、水飽和酢酸エチル２そを流し、溶
出液を５０の【あて分画する。

各フラクションの１の‘宛を濃縮乾固し０．１の‘の酢
酸エチルを加え、シリカゲルガラスプレート（西独メル
ク社 キーゼルゲル６価２鼠０．２５職 ２０×２０）
の下端から２．５肌の位置にスポットし、展開溶媒 水
飽和酢酸エチルで約１７伽展開する。展開後紫外線（２
５３７Ａ）下で吸収像をしらべＲｆｏ．没却付近に吸収
のあるフラクションを集め、約１の‘まで減圧濃縮後、
濃縮液に石油エーテル１０机を加え、粗結晶２５０の９
を得た。これを酢酸エチル５泌に加溢溶解後、冷却し、
析出する結晶を炉取すると１８０の９のＰ−２精結晶が
得られた。融点１８７〜１８８００。（Ｐ−２：９３Ｗ
／Ｗ％）実施例 ３実施例２で得られた粗物質２０夕を
メタノール１００の‘にとかし、水１００の‘を加えて
溶解する。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ノカルデイア属に属する抗生物質Ｃ−１５００３生
   産菌を、プロピオニルＣｏＡ前駆物質、プロピオン酸、
   ロイシン類似化合物およびバリン類似化合物の少なくと
   も一種を添加した培地に培養し、培養物中に抗生物質Ｃ
   −１５００３Ｐ−２を特異的に生成蓄積せしめ、これを
   採取することを特徴とする抗生物質Ｃ−１５００３Ｐ−
   ２の製造法。