JPH02275893A

JPH02275893A - マクロライド系化合物

Info

Publication number: JPH02275893A
Application number: JP1319817A
Authority: JP
Inventors: Akira Kawashima; 朗川嶋; Tomoko Akama; 赤間　智子; Mie Ota; 美恵太田; Kunio Kamigoori; 神郡　邦男; Masaharu Tamai; 玉井　正晴; Kazunori Hanada; 和紀花田
Original assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1988-12-14
Filing date: 1989-12-08
Publication date: 1990-11-09

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は、マクロライド系化合物に関し、更に詳しくは
コレステロール生合成阻害作用を有するマクロライド系
化合物に関する。

従来の技術及び発明が解決しようとする課題本発明の化
合物に類似する構造を有する化合物としては、り０ロス
ライシン（Ｃｈｌｏｒｏｔｈｒｉｃｉｎ　）［ヘノしペ
チカφケミカ・アクタ（Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ　Ｃｈｉｍ
−ｉｃａ　Ａｃｔａ）　、第５２巻、第１号、第１２７
ページ（１９６９年）及びザ・ジャーナル・才ブ・アン
チバイオティックス（Ｉｈａ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　
Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）　、第３９巻、第８号、第１
１２３ページ（１９８６年〉］及びヒドロキシクロロス
ライシン［ザ・ジャーナル・才プ・アンチバイオティッ
クス、第４０巻、第１０号、第１４５２ページ（１９８
７年）コが知られている。

しかしながら、これらの化合物にはコレステロール生合
成阻害作用を有するものは知られていで表される基を示
す。）で表されるマクロライド系化合物。

ない。

本発明の目的は、コレステロール生合成阻害作用を有す
るマクロライド系化合物を提供することにある。

課題を解決するための手段本発明者らは、前記課題を解決すべく鋭意努力した結果
、ある種の菌株がコレステロール生合成阻害作用を有す
る化合物を生産することを見いだし、本発明を完成した
。

すなわち、本発明は式（Ｉ） λ （式中、Ｘは水素原子又はヒドロキシ基を示し、Ｒ’及
びＲ１は異なって水素原子又は式で表される基を示す。

）で表されるマクロライド系化合物である。

本発明の化合物を生産する菌株は、本発明者らが埼玉県
大宮市吉野町の土壌より新たに分離した菌株であり、微
生物の名称ストレプトマイセス・エスピー・Ａ−７３６
１（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ−５Ｐ４−７３６１）及
び微生物寄託番号「微工研菌寄第１０４４２号（ＦＥＲ
Ｍ　Ｐ−１０４４２）　Ｊとして工業技術院微生物工業
技術研究所に寄託されている。

この菌株の菌学的性状を以下に示す。

［１コ形態栄養菌糸は合成寒天培地及び天然寒天培地においてよく
発達し、不規則に分枝する。また、隔壁は認められない
、胞子はスターチ・無機塩寒天培地、イースト・麦芽エ
キス寒天培地及びオートミール寒天培地などで栄養菌糸
より伸長した気菌糸の先端に中程度に形成される。顕微
鏡で観察すると、胞子形成菌糸の分枝方法は単純分枝で
、胞子は通常気菌糸の先端に直鎖状に形成されるがホッ
ク状あるいはループ状の混在も観察される。

胞子は１０個以上連鎖し、表面は平滑である。胞子の形
状は楕円形で、その大きさは０．６５〜０．８０μｍＸ
　Ｏ，９０〜１．２５μｍである。菌核、胞子のう、べ
ん毛胞子は観察されない。

［２コ培地上での生育状態各種培地上で２８℃、１４日間培養したときの肉眼によ
る観察結果を第１表に示す。

第　　１　　表［３］生理的性質（υ生育温度範囲イースト・麦芽エキス培地で２０〜３４℃の範囲で良好
に生育する。１０°Ｃ以下、４０℃以上の温度範囲では
生育しない。

■生化学的性質ａ）好気性、嫌気性の区別；　　好気性ｂ）ゼラチンの
液化：　　　　　陰性Ｃ）脱詣乳の凝固：　　　　　　陰性ｄ）脱詣乳のペプトン化；　　　陽性ｅ）スターチの加水分解；　　　陽性ｆ）メラニン様色素生成；　　　陽性ｇ）細胞壁の型；　　　　　　　■型（３）炭素源の利用（ブリドハム・ゴドリーブ寒天培地上）利用スる：Ｌ−
アラビノース、Ｄ−グルコース。

Ｄ−キシロース、Ｄ−フラクトース。

イノシトール、Ｄ−マンニット。

シュクロース、Ｌ−ラムノース。

ラフィノース以上の性状から本菌株がストレプトミセス属に属するこ
とは明らかであり、上記諸性状を１．Ｓ。

Ｐ、「ジ・インターナショナル・ストレプトミセス・プ
ロジェクト」、バージ−著１マニュアル・才ブ・ディタ
ーミナティブ・バクテリオロジー」第８版（１９７４年
）及びワックスマン著「ジ・アクチノミセテス」第２巻
（１９６１年）に報告されている多くの既知菌株と比較
した結果、本菌株はストレプトミセス・グリ七オスボレ
ウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇｒｉｓａｏ−ｓｐ
ｏｒｅｕｓ　）に最も近い性状を示していた。しかし、
文献値と培地上での生育状態や色調などで若干具なる点
が認められ種を決定するまでには至らなかったので、本
菌株をストレプトマイセス・エスピー・Ａ−７３６１（
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ−５Ｐ−Ａ−７３６１）と命
名した。

本発明化合物の生産は、大略一般の発酵生産物を生産す
る場合に準じ、各種の栄養物質を含む培地で本菌株を好
気的条件下で培養することにより行なう。

培地は主として液体培地を用い、炭素源とじてはグルコ
ース、シュクロース、廃糖蜜、スターチなどを単独又は
混合して用いる。窒素源としては肉エキス、オートミー
ル、酵母エキス、大豆粉、ポリペプトンなどを単独また
は混合して用いる。

その他、本菌株の生育を助は本発明化合物の生産を促進
する有機物及び無機塩を必要により添加することができ
る。消泡剤としては、アデカノール、シ、リコンなどを
用いることができる。ｌ培養方法は振とう培養、通気撹
拌培養などの好気培養が適しており、ｐＨ４〜８．２４
〜３０℃で３〜６日間、望ましくはｐＨ６〜７．２４〜
２７℃で４日間培養する。

この培養により生産された本発明化合物を単離するには
発酵生産物を採取する一般的な方法に準じて行えばよい
。

すなわち、培養終了後、遠心分離又は濾過により菌体と
上清に分け、菌体に蓄積された本発明化合物を低級アル
コール、アセトンなどの有機溶媒で抽出する。一方上清
に含まれる本発明化合物は、ポリスチレン樹脂に吸着さ
せた後、低級アルコール、アセトンなどの有機溶媒でこ
れを溶出する。

菌体抽出液及び上清から得られた溶出液を合わせ濃縮後
、ベンゼン、酢酸エチル、クロロホルムなどの非水溶性
有機溶媒に溶解し、これを濃縮する。

、この操作で得られたシロップを再度ベンゼン、クロロ
ホルム、アセトン、メタノールなどの有機溶媒に溶解し
、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、ゲル濾過カラ
ムクロマトグラフィー及び高速液体カラムクロマトグラ
フィーに付すことにより、本発明化合物を精製、単離す
ることができる。

発明の効果本発明の化合物はコンスチロール生合成阻害作用を有す
るので、詣質低下剤として動脈硬化性疾患の治療に役立
てることができる。

実施例次に、実施例及び試験例を挙げて本発明を具体的に説明
する。

（実施例）（１）　１００ｍ４！当り、可溶性デンプン１．５ｇ、
酵母エキス０．４ｇ、　　リン酸水素二カリウム０．０
５ｇ、硫酸マグネシウムｏ、　ｏｓ　ｇからなるｐＨ７
の無菌液体培地にストレプトミセス・エスピー・Ａ−７
３６１株を接種後、２８°Ｃで７２時間振盪培養し種培
養液とした。

次に、内容量２００　Ｊ２の培養タンクを用いて、種培
養と同じ組成の無菌培地１２０λに前記種培養液２．４
Ｊ２を接種し、２８°Ｃで９６時間撹拌通気培養した。

培養終了後、遠心分離機で上清と菌体に分けた。上清は
、ダイヤイオンＨＰ−２０（ポリスチレン樹脂の商品名
、三菱化成社製）のカラム（容量６２）に吸着させ、水
洗後１００％アセトンで溶出し、１．５〜２．５ベット
溶出区分を集めた。一方菌体は１０党のアセトンで２回
抽出した後、ダイヤイオンＨＰ　−２０溶出区分と合わ
せ、減圧濃縮してアセトンを除去し、残渣を残渣の半量
の酢酸エチルで２回抽出した。この酢酸エチル抽出区分
を無水硫酸ナトリウムで脱水後、減圧濃縮して褐色シロ
ップを５０ｇ得た。

（２）前項（１）で得たシロップをクロロホルム１００
ＩＢｌに溶解し、シリカゲルを充填したカラム（容量３
１、［ｉＣ：クロロホルム）に吸着させた。クロロホル
ム６Ｒ，で洗浄後、クロロホルム−メタノール（９８：
２）の混合溶媒で溶出きれる区分を除いた０次いで、ク
ロロホルム−メタノール（９５：５）の混合溶媒で溶出
を行い、２５０ｄずつ分画し、４〜９番までの区分を集
め、減圧濃縮乾固後、更に少量のメタノールに溶解し、
セファデックスＬＨ−２０（商品名、ファルマシア社製
）を用いゲル濾過し、得られた活性区分を集め減圧濃縮
乾固し、淡黄色粉末２．５ｇを得た。

（３）前項（２）で得た粗粉末を５０−の８０％メタノ
ール−０，１％リン酸溶液に溶解した。この溶液をこれ
と同じ溶媒を溶離液とした高速液体カラムクロマトグラ
フィー［使用装置：センシュウ−科学社製、　３１１０
　；カラム：センシュウ−パック０ＤＳ−５２５１−Ｎ
（２０ｘ　　２５０ｍｍ＞］を用いて、−ＵＶ吸収２２
０ｎｍでモニターしながら流速１０ｍｇ／ｆｆ１ｉｎで
７．４分後に溶出されるピーク、１０．０分後に溶出き
れるピーク、１０．６分後に溶出されるピーク及び１４
．４分後に溶出されるピークをそれぞれ分取した（これ
らをそれぞれＦｌ、Ｆ２．Ｆ３．Ｆ４とする。）、繰り
返し分取して得られたＦ１〜Ｆ４区分をそれぞれ合わせ
濃縮しメタノールを除去した後、等量の酢酸エチルで２
回抽出した。この酢酸エチル抽出区分を合わせ水洗した
後、無水硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮乾固した。この
操作で得られた白色粉末を少量のアセトンに溶解し、セ
ファデックスＬ　Ｈ−２０を用い、アセトンでゲル濾過
を行い、活性区分を集め濃縮乾固し、Ｆ１区分からはＲ
１が水素原子、Ｒ１が式（Ｉｆ）の基でＸが水素原子で
ある化合物（以下、これをＭ　Ｃ−０３１と称する。）
の白色粉末０．５ｇが、Ｆ２区分からはＲ１が水素原子
、Ｒ１が式（ＩＩ）の基でＸがヒドロキシ基である化合
物（以下、これをＭ　Ｃ−０３２と称する。）の白色粉
末０．４ｇが得られた。更にＦ３　、Ｆ４区分について
はアセトン−水混合溶媒で結晶化することにより２３区
分からはＲ１が式（Ｉ［）の基、Ｒ８が水素原子でＸが
水素原子である化合物（以下、これをＭ　Ｃ−０３３と
称する。）の白色針状結晶０．１ｇが、Ｆ４区分からは
Ｒ′が式（Ｉ［）の基、Ｒ８が水素原子でＸがヒドロキ
シ基である化合物（以下、これをＭ　Ｃ−０３４と称す
る。）の白色針状結晶０．３４ｇが得られた。

これらＭ　Ｃ−０３１〜Ｍ　Ｃ−０３４の理化学的性質
を第２表に示した。

※１ネガティブマススペクトル測定による※２　Ｃ−０
，５，アセトン中で測定 ※３メタノール中、０．０５ｓＪｄで測定※４ｊ！化カ
リウム錠で測定 ※５重クロロホルム中、４００Ｍ１ｌｚで測定※６重ジ
メチルスルホキシド中、４００Ｍｚで測定※７重ピリジ
ン中、４００ＭＨｚで測定７８重クロロホルム中、＋０
０？１）Ｉｚで測定※９重ジメチルスルホキシド中、１
００ＭＨｚで測定※ｌＯ重ピリジン中、１ｏＯＨＨｚで
測定（試験例）　コレステロール生合成阻害作用体重２
００ｇ前後のウィスター系ラットの肝臓をホモジナイズ
し、ｔｏ、ｏｏｏｘ　ｇで遠心分離し、上清を調製した
。この上清０．５ｍｇ、本発明化合物のメタノール溶液
２０−１生理食塩水８０縛、補酵素液（３０ｍＭ　アデ
ノシントリホスフェート、３０ｍＭＤ−グルコース−６
−ホスフェート、１０ｍＭ　β−ニコチンアミドアデニ
ンジヌクレオチドリン酸、３０ｍＭ　ニコチンアミド及
び５ｍＭ塩化マグネシウムを含む０．１Ｍ　　リン酸緩
衝液−ｐ　Ｈ７，５）　１００縛及び”ｃ−メバロン酸
溶液１００縛（０，２５μＣｉ）を加え、３７°Ｃで３
時間反応させたにの間１時間毎に補酵素液１００−を加
えた。１０％水酸化カリウム／メタノール溶液１ｄを加
え、反応を停止させ、７０°Ｃの温浴中で１時間ケン化
反応を行い、ケン化後、２ｄの石油エーテルで２回抽出
した。

石油エーテル留去後、残渣を１００４の石油エーテルに
溶解し、シリカゲルプレート（メルク社製、　Ｎｏ、　
１１７９８　）にスポットし、ジクロロメタンにて展開
した。風乾後、ラジオクロマトスキャナーにより生成さ
れたコレステロールの放射能を測定し、た。

対照は、本発明化合物のメタノール溶液２０傅の代わり
にメタノール２０縛を加え、同様に処理し、放射能を測
定した。

本発明化合物の５０％コレステロール生合成阻害濃度（
Ｉｃｅｓ値）は、次式より算出したコレステロール生合
成阻害率から求めた。

コレステロール生合成阻害率（％）− 結果は、第３表の如くであった。

第　　３　　表

【図面の簡単な説明】

第１図はメタノール中（０，０５ｍｇ／ｍｅ　）で測定
したＭ　Ｃ−０３１の紫外線吸収スペクトル、第２図は
臭化カリウム錠で測定したＭ　Ｃ−０３１の赤外線吸収
スペクトル、第３図は重クロロホルム中４００ＭＨｚで
測定したＭ　Ｃ−０３１の’Ｈ−ＮＭＲスペクトル、第
４図は重クロロホルム中１００ＭＨｚで測定したＭＣ−
０３１の”Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。第５図はメタノール中（０，０５ｍｇ／ａ！！　）で測
定したＭ　Ｃ−０３２の紫外線吸収スペクトル、第６図
は臭化カリウム錠で測定したＭ　Ｃ−０３２の赤外線吸
収スペクトル、第７図は重クロロホルム中４００ＭＨｚ
で測定したＭ　Ｃ−０３２の’Ｈ−ＮＭＲスペクトル、
第８図は重クロロホルム中１００ＭＨｚで測定したＭＣ
−０３２の”Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。第９図はメタノール中（０，０５ｍｇ／ｍｇ　）で測定
したＭ　Ｃ−０３３の紫外線吸収スペクトル、第１０図
は臭化カリウム錠で測定したＭ　Ｃ−０３３の赤外線吸
収スペクトル、第１１図は重ジメチルスルホキシド中４
００ＭＨｚで測定したＭ　Ｃ−０３３の’Ｈ−ＮＭＲス
ペクトル、第１２図は重ジメチルスルホキシド中１００
ＭＨｚで測定したＭＣ−０３３５７）”Ｃ−ＮＭＲスヘ
クトルを示す。第１３図はメタノール中（０，０５ｍｇ／ｍｅ　）で測
定したＭ　Ｃ−０３４の紫外線吸収スペクトル、第１４
図は臭化カリウム錠で測定したＭ　Ｃ−０３４の赤外線
吸収スペクトル、第１５図は重ピリジン中４００ＭＨｚ
で測定したＭ　Ｃ−０３４の’Ｈ−ＮＭＲスペクトル、
第１６ＵｇＪは重ピリジン中１００ＭＨｚで測定したＭ
　Ｃ−０３４のロＣ−ＮＭＲスペクトルを示す。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｘは水素原子又はヒドロキシ基を示し、Ｒ＾１
及びＲ＾２は異なって水素原子又は式▲数式、化学式、
表等があります▼ で表される基を示す。）で表されるマクロライド系化合
物。