JPH0310689A

JPH0310689A - 生理活性物質ｆｄ―８３９

Info

Publication number: JPH0310689A
Application number: JP1147772A
Authority: JP
Inventors: Kazutoshi Mizogami; 溝上　一敏; Tadayasu Okazaki; 岡崎　忠靖; Kazunori Hanada; 和紀花田
Original assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1989-06-09
Filing date: 1989-06-09
Publication date: 1991-01-18

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は、新規な生理活性物質ＦＤ−８３９に関する。

［従来の技術］本発明の生理活性物質ＦＤ−８３９は分子量３９７、分
子式〇　、、Ｈ□ＮＯ，の新規な物質であり、これと同
一の物理化学的性質、および生理活性を有する物質の存
在は現在まで報告されていない。

［発明が解決しようとする課題］悪性腫瘍は、その性質が千差万別であるため、新規な抗
腫瘍剤の開発が望まれている。

［課題を解決するための手段］本発明者らは、制癌活性を甫する新規物質を土壌分離菌
の中から得るべく探索研究を重ねた結果、本発明者らの
見出した特定の微生物が、癌培養細胞に対して増殖抑制
作用を有し、またある種の真菌に対しても増殖抑制作用
を有する新規な生理活性物質を生産することを見出し本
発明を完成するに至った。

本発明者らは、この新規生理活性物質を’ＦＤ−８３９
Ｊと命名した。

本発明の新規生理活性物質ＦＤ−８３９を生産する菌株
は、本発明者らが、秋田県仙北郡角館町で採取した土壌
より新たに分離した菌株であり、微生物の名称１アスペ
ルギルス、フミガタス　フレセウス　Ｆ　−８３８（Ａ
ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、　ｆｕｍｉｇａｔｕｓＦｒｅｓ
ｅｎｔｕｓ　Ｆ−８３８Ｊおよび微生物寄託番号「微工
研条寄第１１２４号（ＦＥＲＭ　ＢＰ（１２４）　Ｊと
して、工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されてい
るものである。

この菌株の菌学的性状を以下に示す。

■　形態本菌株は麦芽汁寒天培地、バレイショ・ブドウ糖寒天培
地、ＹｐＳｓ寒天培地などで良好に生育し、分生子の形
成も良好である。

バレイショ・ブドウ糖寒天培地に生育したコロニーを顕
微鏡下で観察すると、菌糸は透明で隔壁を有し、高度に
分校しており、分生子柄は基底菌糸より分校し立ち上が
り、１５０〜３００μ×２．５〜６．５μと変化に富み
、平滑壁を有している。頂嚢は、フラスコ状で直径１５
〜２５μと変化に富み、通常１／２のところ、ブイアラ
イドが互いに平行し形成されている。大きさは６．５〜
９．０μ×２．０〜２．２μであり、基底ブイアライド
（メトレ）の形成は認められない。

初めにブイアライドの頂端にフイアロ型分生子が一個着
生し、培養の経過とともに連鎖状となり、長さ１２０〜
１５０μの密な円筒形の分生子頭を形成する。電子顕微
鏡下で観察すると分生子は亜球形で太ききは直径２．４
〜３．０μであり、その表面はイガグリ状を呈している
。

■　培地上での諸性状各種培地上で３０℃、１４日間培養した場合の肉眼的観
察結果を次の表１に示した。

表１ ■　生理的、生態的性質１）最適生育条件本菌株の最適生育条件は、ＹｐＳｓ培地においてｐＨ３
〜７、温度２５〜３７℃である。

２）生育温度範囲本菌株の生育範囲はＹｐＳｓ培地においてｐＨ２〜１０
、温度２０〜５０℃である。

３）好気性、嫌気性の区別；好気性すべての培地で菌核の形成は観察されなかった。

以上の形態的特徴および培養上の性状から、本菌株が、
アスペルギルス属に属することが明らかになったので、
前記諸性状を基に、宇田用俊−椿啓介偏「菌類図鑑、（
１９７８）およびレイバー（Ｒａｐｅｒ）、フェンネル
（Ｆｅｎｎｅｌｌ）共著のす普シーナス・アスペルギル
ス（Ｔｈｅ　ＧｅｎｕｓＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）　（
１９６５）　Ｊに報告されている多くの既知菌株と比較
検討した。その結果、本菌株はアスペルギルス・フミガ
タス・フレセウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｕｍｉ
ｇａｔｕｓ　Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ）に最も近い性状を示
すことが明らかとなった。

そこで、本菌株はアスペルギルス・フミガタス・フレセ
ウスと種を同じくするものと判断し、本菌株をアスペル
ギルス、フミガタス　フレセウスＦ　−８３８（Ａｓｐ
ｅｒｇｉｌｌｕｓ、　ｆｕｍｉｇａｔｕｓ　Ｆｒｅｓｅ
ｎｉｕｓ　Ｆ−８３８」：微生物寄託番号１微工研条寄
第１１２４号（ＦＥＲＭ　ＢＰ−１１２４）　Ｊと命名
した。

次に、本菌株によって生産される新規生理活性物質ＦＤ
−８３９の生産は、大略して　一般発酵生産物を生産す
る場合に準じて行なわれる。　すなわち、各種の栄養物
質を含む培地でアスペルギルス、フミガタス　フレセウ
ス株を好気的条件下で培養する。

培地は主として液体培地を用い、炭素源としてはグルコ
ース、シュクロース、廃糖蜜、スターチなどを単独また
は混合して用いることができる。

窒素源としてはポリペプトン、大豆粉、酵母エキスなど
を単独かまたは混合して用いることができる。その他、
菌株の生育を助は生理活性物質ＦＤ＝８３９の生産を促
進する有機物および無機塩を必要により添加することが
できる。消泡剤としては、アデカノール、シリコンなど
を用いることができる。

培養方法は振とう培養、通気攪拌培養などの好気培養が
適しており、ｐＨ３〜７．２５〜３７°Ｃで、２〜５日
間、望ましくは、ｐＨ６〜７．２８〜３０℃で３〜４日
間培養する。

この培養液中に生産きれた生理活性物質ＦＤ−８３９を
単離するには、発酵生産物を採取する一般的な方法に準
じて行なえば良い。すなわち培養終了後、遠心分離また
は濾過により分離した培養濾液をダイヤイオンＨＰ−２
０（商品名；三菱化成製）などに吸着させ、低級アルコ
ール、アセトン等にて溶出する。

溶出された生理活性物質ＦＤ−８３９の画分を濃ｍ後、
酢酸エチルエステル、ベンゼン、クロロホルムなどの非
水溶媒に転溶し、濃縮してシロップ状とする。このシロ
ップを再度、ベンゼン、酢酸エチルエステル、クロロホ
ルムなどの有機溶媒に溶解し、シリカゲルを用いたカラ
ムクロマトグラフおよびゲル濾過および逆相高速液体ク
ロマトグラフィーに付すことにより、活性成分を集める
ことにより、生理活性物質ＦＤ−８３９を単離すること
ができる。

以上の精製法によって得られた生理活性物質ＦＤ−８１
９の理化学的性質は次の通りである。

＜１）外観：白色粉末（２）融点：１０５〜１０７℃ （３）元素分析値；Ｃ！　！　Ｈ！　＊　Ｎ　Ｏａ　　として計算値：　Ｃ
；６６．５０％、Ｈ；５．７８＠Ａ、Ｎ；３．５２％実
測値：　Ｃ；６６．２８％、１（；６．０１％、Ｎ；３
．６３％。

（４）Ｅ　Ｉマススペクトルｍ／ｚ　　３９７　　Ｍ” ＦＡＢマススペクトルｍ／ｚ　　　３９８　　（Ｍ＋Ｈ）” （５〉分子式：　Ｃ＊　＊　Ｈｔ　ｓ　Ｎ　Ｏ６（６）
分子量　３９７（７）［（２］　　　：０゜（ｃ−０、１、メタノール溶液）（８）ＵＶ吸収スペクトル：メタノール溶液で測定した結果、２４９ｎｍ（ε１１１００）２８３　ｎｍ（ε３１７０）＜９）ＩＲ吸収スペクトル：クロロホルム溶液で測定したスペクトルを第１図に示す
。

（１０）’Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルり中、４００ＭＨ，で測定したスペクトル
を第２図に示す。

（１１）”Ｃ−ＮＭ　Ｒスペクトル：重クロロホルム中、１００ＭＨ，で測定したスペクトル
を第３図に示す。

り１２）溶解性：クロロホルム、メタノール、エタノール、ベンゼン、酢
酸エチルエステル、アセトンに易溶。

ｎ−ヘキサン、石油エーテル、エチルエーテルに難溶。

水に不溶。

（１３〉呈色反応：陽性：沃素、硫酸、アニスアルデヒド−硫酸、バニリン
−硫酸、ニンヒドリン、陰性：　ＢＣＧ、　Ｆ　ｅ　Ｃｆ１ｍ（１４）塩基性
、酸性、中性の区別：塩基性［発明の効果コ本発明の生理活性物質ＦＤ−８３９は、癌培養細胞に対
して増殖抑制作用を有し、またある種のダラム陽性菌、
真菌に対しても増殖抑制作用を有するので医薬として有
用である。

［実施例］以下、実施例および試験例を挙げて本発明を具体的に説
明する。

実施例１（１＞　　１００ｍ１１当り、グルコース４ｇ、ポリペ
プトン１ｇを含む無菌液体培地にアスペルギルス。

フミガタス　フレセウス　Ｆ−８３８株を接種し、３０
°Ｃ１９６時間振とう培養した。次に、内容量５０１の
ジャーファーメンタ−を用いて、種培養と同じ組成の無
菌培地３（ｌに前記種培養液０゜６２を接種し、３０℃
、７２時間通気攪拌、培養した。

（２）培養終了後、３基分の培養液８５１２を′ｌＩｉ
過し、得られた濾液８０ＰをダイヤイオンＨＰ−２０（
商品名；三菱化成製）２．５ｆに吸着させ、７５％メタ
ノール溶液５１で溶出し、諮らに溶出液をＩＰに濃縮し
た。この濃縮液を５ＮのＮａＯＨ溶液でｐＨ１０，０に
調整し、等量の酢酸エチルエステルで２回抽出した。得
られた酢酸エチルエステル層を無水硫酸ナトリウムで脱
水後、濃縮し褐色のシロップ状物質７．５ｇを得た。

り３）　　シロップ状物質７．５ｇをメタノール５ｍＱ
に溶解し、メタノールで調製したセファデックスＬＨ−
２０（商品名、ファルマシア社製）を充填した２Ｐのカ
ラムを用いて、メタノールでゲル濾過を行なった。活性
画分を集め、茶色のシロップ状物質４ｇを得た。

（４）前項の茶色のシロップ状物質を、クロロホルム５
ｍＱに溶解許せ、クロロホルムで調整したシフカゲル（
キーモルゲル６０．商品名、メルク社製）の２００ｍＱ
のカラムに吸着許せ、クロロホルム−メタノール（９９
，８：０．２）の混合溶媒４００ｔｎｌ！で溶出した画
分を濃縮乾固し、粗精製物３０　ＱＴｎｇを得た。

（５）前項で得られた粗粉末粗精製物３００■を７０％
メタノール１０ｍ１に溶解し、同じ溶媒で調製したクロ
マトレックス（商品名、富士−デビソン化学社製）に付
し、同じ組成の溶媒で溶出し、得られた活性画分を集め
た。この活性画分をそのまま逆相高速クロマトグラフィ
ー（センシュパック、ＯＤＳ　　４２５１−Ｕ、１０Φ
Ｘ２５０ｆｆｌｌ。

センシュー科学社製）に付し、カラム温度５゜℃、流速
４ｍ１Ｚ分、６０％メタノールで繰り返し溶出し、保持
時間７．５分前後の両分を集めた。

この両分を集めて濃縮乾固し、白色粉末１７ＩＴｇを得
た。この白色粉末の融点を測定したところ、１０５〜１
０７℃であった。

試験例１（各種培養細胞に対する増殖阻害作用）（検体
）実施例１で得られた白色粉末５■をメタノールに溶解し
、目的濃度となるように滅菌生理食塩水にて希釈した。

（試験剤ヤ） ■　Ｐ２Ｓ５　　　マウス白血病 ■　Ｌ−１２１０マウス白血病 ■　ＨＬ−６０ヒト白血病（使用した培養液） ■　ＲＰＭＩ−１６４０培地 ■　イーグルＭＥＭ培地（試験方法）前記培養液を用いて各種癌細胞を、２Ｘ１０’〜ｌＸｌ
０’／ｍＱとし、直径３５１ｍ１の６穴シヤーレに２ｍ
ｕずつ分注した。次いで目的濃度にあらかしめ希釈した
検体５０μを、培養開始と同時に分注した。試験細胞は
、７日間３７°Ｃ，５％炭酸ガス培養器内で培養を続け
た後、生細胞を測定し、試料濃度と阻害率から、ＩＣ１
ｏ値（５０％阻害のための濃度）を求めた。

（結果）結果は表２に示す。

表２培地を用い、実施例１で得られた白色粉末をイノキュラ
ムサイズ１０”ＣＦＵ／ｎｉｌで各種菌に対する抗菌活
性をペーパディスク法にて調べた。

（結果）結果を表３に示す。

表３　各種菌株に対する阻止円の大きさ試験例２（各種
真菌に対する増殖抑制作用）細菌の培地としては、ハー
トインフュージョン寒天培地を、真菌の培地としては、
サブロー寒天

【図面の簡単な説明】

第１図は、クロロホルム溶液にて測定したＦＤ８３９の
ＩＲスペクトルを示す。第２図は重クロロホルム中、４
００ＭＨｚで測定したＦＤ−８３９の’Ｈ−ＮＭＲスペ
クトルを示す。第３図は重クロロホルム中、１００ＭＨ
ｚで測定したＦＤ−８３９の”Ｃ−ＮＭＲスペクトルを
示す。

Claims

【特許請求の範囲】１）下記理化学的性質を有する生理活性物質ＦＤ−８３
９（１）外観：白色粉末（２）融点：１０５〜１０７℃ （３）元素分析値；Ｃ＿２＿２Ｈ＿２＿４ＮＯ＿５として計算値：Ｃ；６６．５０％、Ｈ；５．７８％、Ｎ；３．
５２％実測値：Ｃ；６６．２８％、Ｈ；６．０１％、Ｎ
；３．６３％（４）ＥＩマススペクトルｍ／ｚ３９７Ｍ＾＋ＦＡＢマススペクトルｍ／ｚ３９８（Ｍ＋Ｈ）＾＋（５）分子式：Ｃ＿２＿２Ｈ＿２＿３ＮＯ＿６（６）分
子量　３９７（７）▲数式、化学式、表等があります▼：０゜（ｃ＝０．１、メタノール溶液）（８）ＵＶ吸収スペクトル：メタノール溶液で測定した結果、２４９ｎｍ（ε１１１００）２８３ｎｍ（ε３１７０）（９）ＩＲ吸収スペクトル：クロロホルム溶液で測定したスペクトルを第１図に示す
。（１０）＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中、４００ＭＨｚで測定したスペクトル
を第２図に示す。（１１）＾１＾５Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中、１００ＭＨｚで測定したスペクトル
を第３図に示す。（１２）溶解性：クロロホルム、メタノール、エタノール、ベンゼン、酢
酸エチルエステル、アセトンに易溶。ｎ−ヘキサン、石油エーテル、エチルエーテルに難溶。水に不溶。（１３）呈色反応：陽性：沃素、硫酸、アニスアルデヒド−硫酸、バニリン−硫酸、ニンヒドリン陰性：ＢＣＧ、Ｆｅｃｌ＿３（１４）塩基性、酸性、中性の区別：塩基性