JPS6265685A - 生理活性物質ｆｄ−８３８及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は新規生理活性物質ＦＤ−８３８及びての製造法
に関する。

（従来の技術） 本発明の生理活性物質［Ｄ　−８３８は分子量４１１、
分子一式Ｃ２２＋−１２１Ｎｏ７の新規な物質であって
、これと同一の物理化学的性質、及び生理活性を有する
物質の存在は現在まで報告されていない。

（発明が解決しようとする問題点） 号なわら、本発明者らは分化誘導活性、制ガン活性を右
する１′ｉ規な生理活性物質を土壌分離菌の中から１ｉ
Ｉるべく探索研究を重ねた結果、本発明者らの見出した
１）定の微〈ｌ−物が白面癌細胞の分化誘導作用を右す
る新規な生理活性物質を産生することを見出し本発明を
完成した。

そして本発明者らはこの新牛即活性物質を［生理活性物
質ＦＤ−８３８Ｊと命名した。

（問題点を解決するための手段） 本発明の目的を達成するのに必須の要件である目的物質
を生産する微住物は、本発明者らが、秋田県仙北郡角館
町の土壌試料から新たに分離した微生物である。この微
生物は本発明者らにＪ、って［アスペルギルス Ｆ　−　８　３　８　（Ａｓｐｅｒｇｉ　ｌ　Ｉｕｓ　
ｆｕｍｉｇａｔｕｓ　ＦｒｅｓｅｎｉｕｓＦ−８３８）
Ｊと命名されたものであり、工業技術院微生物工業技術
研究所に微生物寄託番？ｉＩ微工研菌奇第８４０６号（
ＦＦＲＭ　　Ｐ−８４０６）」として寄託されている。

この菌株を培養してｊｑられる本発明の目的物？１が生
理活性物質ＦＤ−８３８である。

この菌株の菌学的性状を以下に示す。

１　形態 本菌株は、麦芽汁寒天培地、バレイシ］・ブドウ糖寒天
培地及びＹ，Ｓ，寒天培地などて良好に生産し、分生子
の着生も良好である。

バレイショ・ブドウ糖寒天培地に生産した］■ニーを顕
微鏡下で観察すると、菌糸は透明で隔壁を有し、高度に
分枝しており、分生子柄は基底菌糸より分枝し立ち上り
、”１５０〜３００Ｘ２．５〜６．５μと変化に富み、
平滑壁を右している。

頂のうば、フラスコ状で゛直径１５〜２５μと変化に富
み、通常的１／２のところからフィアライドが互いに平
行し形成される。人きざは６．５〜９、ＯＸ２．Ｏ〜２
．２μであり、メトμの形成は認められない。

はじめにフイアライドの頂端にフイアロ型分生子が１個
石生じ、培養の経過とともに連鎖状となり、長さ１２０
〜１５０μの密な円筒形の分生子頭を形成する。電子顕
微鏡下で観察すると、分生子は球状から細球型で大きさ
２．４〜３．０μであり、その表面はイガグリ状を呈し
ていた。

２　培地−［の諸性状 各種培養地上で３０：Ｃ，１４日間培養した場合の肉眼
的観察結果を次の表に示す。

（以下余白） 上記すべての培地で菌核の形成は観察されなかった。

（以下余白） ３１狸的、生態的性状 ■最適牛育条イ′１ 本菌株の最適生育条件はＹ、Ｓ、培地においてｐｌ−１
３〜７、温石２５〜３７°Ｃである。

■生育の範囲 本菌株の生育範囲はＹｐ　Ｓ３　＋Ｂ地においてｐｌ−
１２−１０，温度２０〜５０℃である。

■好気↑ノ１、嫌気↑ｑのト別 好気性 以上が本菌株の諸性状である。このうち形態観察の結果
から本菌株がアルペルＸシス属に属することか明らかに
なったので、前記諸性状を基に、宇田用俊−１椿啓介偏
［菌類図鑑１（１９７８）およびレイパー（Ｒａｐｅｒ
　）　、フェンネル（Ｆｅｎｎｅ　１１）共茗の１１Ｆ
・ジ−ノース・アスペルギルス（Ｔｈｅ　Ｇｅｎｕｓ　
Ａｓｐｅｒｇｉ　Ｉ　１ｕｓ）　Ｊに報告されている多
くの既知の菌株と比較検討した。その結果本菌株はアス
ペルギルス・フミ力タス・フレセニウス（ＡＳｐｅｒ（
］！ｆｌｕｓ　ｆｕｍ！ｊｌａｔｌＪｓ　ＦｒｅＳｅｎ
ｌ！ＪＳ）に最も近い性状を示すことか明らかになった
。

そこで、本菌株はアスペルギルス・フミ力タス・フレセ
ニウスと種を同じくするものと判断し、本菌株をアスペ
ルギルス・フミガタス・フレレニウスＦ　−Ｆ３３３　
（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｕｍｉｇａｔｕｓ　ｒｒ
ｅｓｅｎｉｕｓ　Ｆ−８３８）　：受託番号（ＦＥＲＭ
　　Ｐ−８４０６）と命名した。

次に本菌株によって産生される新牛理活竹物質ＦＤ−８
３８の生産であるが、これは大略一般の醗酵生産物を生
産する場合に準じて行われる。すなわち各種の栄養物質
を含む培地で、アスペルギルス・フミガタス・フレセニ
ウスＦ−８３８株を好気的条件下で培養することによっ
て行う。

培地は主として液体培地を用い、炭素源としてはグルコ
ース、シュクロース、廃糖蜜、スターチなどを単独かま
たは混合して用いる。窒素源としては、ポリペプトン、
大豆粉、酵母エキスなどを単独かまたは混合して用いる
。その他、本菌株の生育を助は生理活性物質ＦＤ−８３
８の生産を促進する有機物および無機塩を必要により添
加づることができる。

消泡剤としては、アデカノール、シリコンなどを用いる
ことができる。

培養方法は振とう培養、通気攪拌培養などの好気培養が
適しておりＩ）　）−１３〜７，２５°Ｃ〜３７°Ｃで
２〜５日間、望ましくはｐＨ６〜７，２８°Ｃ〜３０°
Ｃで３〜４日間培養する。

この培養により生産された生理活性物質ＦＤ−８３８を
単離するには、醗酵生産物を採取する一般的な方法に準
じて行えばよい。

すなわち、培養終了後、遠心分離または、ろ過により分
離した培養液をダイヤイオンＨＰ−２０（商品名、三菱
化成製）などに吸着せしめ、低級アルコール、アセトン
等にて溶出する。

溶出された生理活性物質ＦＤ−８３８の両分を濃縮後、
酢酸１−チル、ベンゼン、クロロホルムなどの非水溶性
溶媒に転溶し、これを濃縮してシロップ状と覆る。この
シロップを再度ベンビン、酢酸エチル、メタノールなど
の有機溶媒に溶解し、シリカゲル（例えばキーセルグル
６０．西独メルク社製）を用いたカラムクロマトグラフ
ィーおよび−〇　− セファデックスＬＨ−２０（商品名、ファルマシア社製
）によるゲルろ過に付することにより、生理活性物質Ｆ
Ｄ−８３８を単離することかできる。

以上の製造法によって得られた生理活性物質ＦＤ−８３
８の物理化学的性質は次に示す通りである。

［物理化学的性質］ （１）外観：淡緑色粉末 （２）融点：９８〜９９℃ （３）元素分析値： 実測値　　　　　　　　ｔ１算値 Ｃ：６４．２０％　　　Ｃ：６４．２３％Ｈ：　　　　
５．３６％　　　　　　　ト１：５．１４　％Ｎ：３．
３９％　　　Ｎ：３．４１％ （４）分子量：高分解能マス・スペクトル実測値　４１
１．１３５６ 計算値　４１１．１３１８ （５）分子式：Ｃ２２Ｈ２１ＮＯ７ （６）［α］Ｄ　：０°（Ｃ＝０．１　　メタノール溶
液）（７）ＵＶ吸収：メタノール溶液で測定２５２、ｍ
（ε７５００）、　２８３，１ｌｌ（ε４１１０）、３
３６．ｍ（ε１０００７） （８）ＩＲ吸収スペクトル： り］１０ホルム溶液で測定したスペクトルを第１図に示
す。

（９）　　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル： 重り１１０ホルム中、４００ＭＨＺで測定したスペクト
ルを第２図に示す。

（１０）　　１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重り［１０ホ
ルム中、１００ＭＨＺで測定したスペクトルを第３図に
示す。

（１１）溶解性： 易溶：クロ［ト１（ルム、ベンゼン、メタノール、−１
ニタノール、アゼトン、酢酸エチール難溶：］−プルエ
ーテル、ｎ−へキサン、石油−［−ｊル 不溶：水 （１２）〒色反応 陽Ｐ［：硫酸、ヨウ素、アニスアルデヒド−硫酸、バニ
リン−硫酸 陰性：ニンヒト刀ン、ＢＣＧ （１３）堪り性、酸性、中性の区別：塩基＝ｔ４（作用
） 生理活性物質ＦＤ−８３８は白血病細胞に対して分化誘
導活性を示し、ある種のグラム陽性菌、真菌に対して増
殖抑制作用を示す。この点に関しては以下、試験例１及
び２で具体的に説明する。

試験例１ １５％の牛胎児血清（ギブニ１社製）を含むＲＰＭｌ−
１６４０培地（ギブ］社製）２ｍｌを径３５履のシャー
レに分注し、２ｘ　１０５ｃｅｌｌｓ　／ｍＩｌのヒト
前骨髄白血病細胞（＋−１１−６０）を加えて。

３７℃、５％炭酸ガス存在下で３日間培養した。

ＦＤ−８３８の分化誘導試験は、前記培養素にＦＤ−８
３８を培養開始と同時に添加し、］ラッド（Ｃｏｒｒａ
ｄｏ）らの方法［カン＋Ｊ−−、リサーチ（ＣａｎＣｅ
ｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）第４２巻第４４５〜４４９ペー
ジ、１９８２年］にしたがってＮＢＴ還元能試験により
、分化誘導した陽性細胞率を線用した。

ＦＤ−８３８の各濃度に於けるＨＬ−６０に対−１２＝ する陽↑イ［細胞率を次表に示す。

試験例２ 細菌の培地としてはハートインフュージョン寒天を、真
菌の培地としてはサブロー寒天を用い、イノキュラムυ
イズ１０６ＣＦＵ／７！で生理活性物質Ｆ　Ｄ　−８３
８の各種菌に対する抗菌作用をペーパーディスク法にて
調べた。

（以下余白） （発明の効果） 本発明の目的物質である生理活性物質ＦＤ−８３８は、
以上の諸性状を有し、白血病細胞に対して分化誘導活性
を示し、ある種のダラム陽性菌、真菌に対して増殖抑制
作用を示すので医薬として右用なしのである。

（実施例） 以上実施例をあげて本発明をさらに詳細に説明覆る。。

実施例 （１）　グルコース５％、ポリペプトン１％からなるｐ
ｌ−１７の無菌液体培地にアスペルギルス・フミガタス
・フレレニウスＦ−８３８株を接種し、３０℃、９６１
５間、攪拌浸どう培養し、種培養液とした３、次に内容
ｆＡ２００．ｌ）の培養タンクを用いて、（１１１人養
と同じ組成の無菌培地１２０ｇに前記種培青液２．０を
接種し、３０：Ｃ１７２時間通気攪拌１８査した。

（２）　培谷終了後、培養液をろ過し、菌体とる液に分
（）、冑られたろ液をダイＡフイＡンＨＰ−２０＋５ｇ
に吸％ｔＬめ、７５％メタノール溶液１０．０で溶出し
、溶出液を４！Ｊに濃縮した。濃縮液をＵ５規定の水酸
化ナトリウム溶液でｐＨ１０に調整し、′８量のベンピ
ンで２回抽出した。このベンピン区分を合わけ、無水硫
酸−ｔ−トリウムで脱水後、濃縮して褐色のシロップを
１９だ。

（３）　このシロップをクロロホルム５０ｍｆｆに溶解
し、クロロホルムで調整したシリカゲル（１−ゼルゲル
６０．商品名・メルク社製）の３００ｄのカラムに吸着
させた。クロロホルム６００ｄ、次にクロロホルム−メ
タノール（９９，８：　０．２）混液６００ｍｊで溶出
し、これらの両分を合わＵて濃縮乾固し、粗粉末１．２
ｇを１７だ。

（４）　前項（３）で１９だ粗粉末をクロロホルム５７
！に溶解し、ｎ−へキサンで調整したシリカゲル（キー
ゼルグル６０、商品名・メルク社製）５０ｄカラムに吸
着させｎ−ベキ１ノンーアセトン（８５：　１５）で溶
出し、その両分を濃縮乾固し淡緑色粉末７００ｍｇを得
た。

この粉末を３ｄのメタノールに溶解し、５００ｄのセフ
ァデックスＩ　Ｈ−２０（ファルマシｊ７礼製）カラム
を用いてメタノールでゲルろ過を行った。得られた活性
画分を集めて濃縮乾固し、淡緑色粉末的６００＃１ｇを
（ｑた。

このものの融点を測定したところ９８〜９９℃であった
。

【図面の簡単な説明】

第１図はクロロホルム溶液で測定した生理活性物ｆｆｆ
ｆ　Ｆ　Ｄ−８３８の赤外吸収スペクトル、第２図は、
重クロロホルム中、４００Ｍ１−１２で測定した牛狸粘
性物質Ｆ　Ｄ　−８３８の１１１１−１−Ｎスペクトル
、第３図は重クロロホルム中、１００ＭＨＺで測定した
生理活性物１４　Ｆ　Ｄ−８３８の１３Ｃ−ＮｆＶＩＲ
スペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　下記の物理化学的性質を有する生理活性物質ＦＤ−
   ８３８ （１）外観：淡緑色粉末 （２）融点：９８〜９９℃ （３）元素分析値：Ｃ　６４．２０％ Ｈ　５．３６％ Ｎ　３．３９％ （４）分子量：高分解能マス・スペクトル 実測値　４１１．１３５６ 計算値　４１１．１３１８ （５）分子式：Ｃ＿２＿２Ｈ＿２＿１ＮＯ＿７（６）［
   α］＾２＾６＿Ｄ：０°（Ｃ＝０．１メタノール溶液）
   （７）ＵＶ吸収：メタノール溶液で測定 ２５２ｎｍ（ε７５００）、２８３ｎｍ（ε４１１０）
   、３３６ｎｍ（ε１０００７） （８）ＩＲ吸収スペクトル：第１図で示す通り。 （クロロホルム溶液で測定） （９）＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：第２図で示す通り。 （重クロロホルム中、４００ＭＨＺで測定）（１０）＾
   １＾３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：第３図で示す通り。（重
   クロロホルム中、１００ＭＨＺで測定）（１１）溶解性
   ： クロロホルム、ベンゼン、メタノール、エタノール、ア
   セトン、酢酸エチルに易溶 エチルエーテル、ｎ−ヘキサン、石油エーテルに難溶 水に不溶 （１２）呈色反応： 陽性：硫酸、ヨウ素、アニスアルデヒド−硫酸、バニリ
   ン−硫酸 陰性：ニンヒドリン、ＢＣＧ （１３）塩基性、酸性、中性の区別：塩基性２　アスペ
   ルギルス属に属する生理活性物質ＦＤ−８３８を生産す
   る菌を培養し、培養物中に蓄積した生理活性物質ＦＤ−
   ８３８を採取することを特徴とする生理活性物質ＦＤ−
   ８３８の製造法。