JPH06271561A

JPH06271561A - ジベンゾオキセピン系化合物

Info

Publication number: JPH06271561A
Application number: JP5061746A
Authority: JP
Inventors: Kazutoshi Mizogami; 一敏溝上; Ahou Kiyou; 亜芳喬; Shiro Nakaike; 司郎中池; Tomotake Ikeda; 智岳池田; Kazunori Hanada; 和紀花田
Original assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1993-03-22
Filing date: 1993-03-22
Publication date: 1994-09-27

Abstract

(57)【要約】（修正有）【構成】下記式で表される化合物。【効果】上記の化合物は癌培養細胞に対して増殖抑制
作用を有するので、医薬として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、微生物より産生され医
薬の分野で有用な新規な化合物、さらに詳しくは抗腫瘍
作用を有する新規なジベンゾオキセピン系化合物に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】数多くの微生物代謝産物を抗腫瘍剤とし
て臨床的に応用することが試みられており、また実際に
医薬として使用されている。しかしながら、これらは種
々の腫瘍に対してその効果は必ずしも充分でなく、より
優れた抗腫瘍作用を持ち安全性が高い新規化合物が切望
されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、抗腫
瘍作用を有する新規な化合物を提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、制癌活性
を有する新規物質を土壌や植物由来の分離菌から得るべ
く探索研究を重ねた結果、本発明者らの見出した特定の
微生物が、癌培養細胞に対して増殖抑制作用を有する新
規な生理活性物質を生産することを見出し本発明を完成
するに至った。

【０００５】本発明は、式

【０００６】

【０００７】で表される化合物である（以下、これをＦ
Ｄ−５４８と称する）。

【０００８】本発明の新規生理活性物質ＦＤ−５４８を
生産する菌株は本発明者らが採取した枯死植物から新た
に分離した菌株であり、微生物の名称「Ｐｅｎｉｃｉｌ
ｌｉｕｍｓｐ．ＴＦ−０３７９」および微生物受託番
号「ＦＥＲＭＰ−１３５３４」として工業技術院生命
工学工業技術研究所に寄託されている。

【０００９】この菌株の菌学的性状を以下に示す。（１）形態本菌株は、オートミール寒天培地、麦芽エキス寒天培
地、ＹｐＳｓ寒天培地などで良好に生育し、胞子の形成
はバレイショ・ブドウ糖寒天培地、オートミール寒天培
地、ＹｐＳｓ寒天培地で極めて良好である。本菌株がバ
レイショ・ブドウ糖寒天培地上、２５℃、７日間の培養
で形成したコロニーを顕微鏡下で観察すると、菌糸は隔
壁を有し、高度に分岐しており、白色から明るい黄色を
呈する。分生子形成細胞は、気生菌糸または基中菌糸か
ら分岐して立ち上がった分生子柄の先端から、それぞれ
メトレ（Ｍｅｔｒｅ）を介して複輪生状−対称型に分岐
し、先端からフィアロ型分生子を連鎖状に形成してお
り、ペニシリウム属に特徴的なペニシリ（Ｐｅｎｉｃｉ
ｌｌｉ）と呼ばれる形態が認められる。分生子柄は隔壁
を有し、表面は平滑、４０〜１６５μｍ×２．０〜３．
４μｍである。メトレは８．０〜１６．０μｍ×２．０
〜３．０μｍ、フィアライドは８．０〜１５．０（〜１
８．０）μｍ×２．０〜３．０（〜３．４）μｍであ
る。分生子は球形から亜球形、まれに長楕円形、洋梨形
で表面はわずかに粗面または刺状を呈し、大きさは２．
０〜３．８（〜６．０）μｍ×１．６〜３．２（〜４．
０）μｍである。

【００１０】なお、培養を３週間に延長したが有性生殖
器官の形成は認められなかった。

【００１１】（２）培地上での生育状態各種培地上で、２５℃、１４日間培養した場合の肉眼的
観察結果を次の表１に示した。なお色の表示は日本規格
協会、ＪＩＳ色名帳（１９８５年）の系統色名を引用し
た。

【００１２】

【表１】

【００１３】（３）生理的性質生育温度範囲及び最適温度本菌株はｐＨ６．０のサブロー液体培地において、１３
〜３９℃の範囲で生育し、最適温度は３０〜３３℃であ
る。生育ｐＨ範囲及び最適ｐＨ本菌株はＹｐＳｓ液体培地中２６℃においてｐＨ２〜９
の範囲で生育し、最適ｐＨは４〜５である。（４）好気性，嫌気性の区別；好気性

【００１４】以上の形態的特徴および培養上の性状か
ら、本菌株がＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属の１菌種である
ことが明かとなり、宇田川俊一，椿啓介編『菌類図鑑』
（１９７８年）、Ｋ．Ｂ．Ｒａｐｅｒ，Ｃ．Ｔｈｏｍ著
の「ＡＭＡＮＵＡＬＯＦＴＨＥＰＥＮＩＣＩＬＬ
ＩＡ」（１９４９年）およびＪ．Ｉ．Ｐｉｔｔ著の「Ａ
ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＧＵＩＤＥＴＯＣＯＭＭ
ＯＮＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍＳＰＥＣＩＥＳ」（１
９８５年）に報告されている多くの既知菌株と比較検討
した。その結果、本菌株はＢｉｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕ
ｍ亜属に含まれると思われたが種を決定するまでには至
らなかったので、本菌株を「Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ
ｓｐ．ＴＦ−０３７９」と命名した。

【００１５】この培養により生産されたＦＤ−５４８を
単離するには、発酵生産物を採取する一般的な方法に準
じて行えば良い。すなわち、各種の栄養物質を含む培地
でＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｓｐ．ＴＦ−０３７９株を
好気的条件下で培養し、培養終了後、培養液をＨＰ−２
０に吸着させ、メタノールとアセトンで溶出し、メタノ
ールとアセトン溶液を合せて濃縮しシロップ状とする。
このシロップをゲル濾過カラムクロマトグラフィー、逆
相高速液体カラムクロマトグラフィーに付すことによ
り、ＦＤ−５４８を精製単離することができる。

【００１６】以上の精製法によって得られたＦＤ−５４
８の理化学的性質を以下に示す。（１）外観：黄色針状晶（２）融点：１５８〜１６０℃ （３）質量分析値：ＥＩＭＳスペクトルｍ／ｚ３４
０（Ｍ⁺）（４）ＥＩ−高分解能マススペクトル：実測値：３４０．１３１２理論値：３４０．１３１１（Ｃ₂₀Ｈ₂₀Ｏ₅として計算）（５）分子式：Ｃ₂₀Ｈ₂₀Ｏ₅ （６）分子量：３４０（７）紫外線吸収スペクトル（メタノール溶媒で測
定）： λ（ε）：２０８（３５５００），２２２（ｓｈ）（２
７９００），２８８（１１６００），３５４（８１０
０）ｎｍ（８）赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒ法で測定したスペ
クトルを図１に示す。（９）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重アセトン中、４００
ＭＨｚで測定したスペクトルを図２に示す。（１０）溶剤に対する溶解性：水に不溶エタノール、メタノール、アセトン、ジクロロメタンに
可溶

【００１７】

【発明の効果】本発明の化合物は癌培養細胞に対して増
殖抑制作用を有するので、医薬として有用である。

【００１８】

【実施例】以下、実施例および試験例を挙げて本発明を
具体的に説明する。

【００１９】実施例（１）１００ｍｌ当りグルコース２ｇ、酵母エキス０．
２ｇ、硫酸マグネシウム０．０５ｇ、ポリペプトン０．
５ｇ、リン酸一カリウム０．１ｇを含む無菌液体培地に
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｓｐ．ＴＦ−０３７９株を接
種し，２６℃，９６時間振とう培養した。次に内容量５
０Ｌのジャーファーメンターを用いて種培地と同じ組成
の無菌培地３０Ｌに前記培養液４００ｍｌを接種し、２
６℃、９６時間通気攪拌培養した。（２）培養終了後、培養液３０Ｌを遠心分離し、上清３
０ＬにＨＰ−２０を約１Ｌ分加え、２時間攪はんした。
その後、ＨＰ−２０を水、３０％、５０％、７０％メタ
ノール、メタノールとアセトンの順で溶出した。メタノ
ールとアセトン溶出液を合わせて、濃縮し、褐色のシロ
ップ状物質３．２６ｇを得た。（３）シロップ状物質をメタノールに溶解し、メタノー
ルで調製したセファデックスＬＨ−２０（商品名、ファ
ルマシア社製）を充填したカラムを用いてメタノールで
ゲル濾過を行った。活性画分を合わせ、濃縮放置し、黄
色針状晶物質５２ｍｇを得た。（４）前項の黄色針状晶物質の一部２０ｍｇを、ジクロ
ロメタン／メタノール（１：１）の溶媒１．５ｍｌに溶
解し、ジクロロメタン／メタノール（１：１）で調製し
たセファデックスＬＨ−２０を充填したカラムに吸着さ
せ、ジクロロメタン／メタノール（１：１）溶液で溶出
した。活性画分を集め、黄色粉末状物質１８．３ｍｇ
を得た。（５）前項の粉末状物質１８．３ｍｇを、メタノールに
溶解し、以下の条件で行った高速液体カラムクロマトグ
ラフィーの試料とした。（６）カラムサイズ１０¢×２５０ｍｍ、担体センシュ
パックＯＤＳ（センシュ科学社製）、溶媒７０％メタノ
ール、流速４．５ｍｌ／ｍｉｎ、検出波長２１０ｎｍ、
装置ガリバー（日本分光）。保持時間２０分の画分を
集め、１７ｍｇのＦＤ−５４８を得た。

【００２０】試験例（各種培養細胞に対する増殖阻害作用）（検体）実施例で得られたＦＤ−５４８１０ｍｇをメ
タノールに溶解し、目的濃度となるように滅菌生理食塩
水にて希釈したものを用いた。（試験細胞）ＨＬ−６０（ヒト白血病）ＨｅＬａＳ−３（ヒト子宮癌）Ａ５４９（ヒト肺癌）（使用した培養液）ＲＰＭＩ−１６４０培地（試験方法）前記培養液を用いて各種癌細胞を、２×１
０⁴〜１×１０⁵／ｍｌとし、直径３５ｍｍの６穴シャー
レに２ｍｌずつ分注した。次いで目的濃度にあらかじめ
希釈した検体５０μｌを、培養開始と同時に添加した。

【００２１】試験細胞は、３７℃、５％炭酸ガス培養器
内で２〜３日間培養を続けた後、生細胞を測定し、試料
濃度と阻害率から、ＩＣ₅₀値（５０％阻害のための濃
度）を求めた。（結果）結果は表２に示した。

【００２２】

【表２】

【図面の簡単な説明】

【図１】ＫＢｒ法にて測定したＦＤ−５４８の赤外線吸
収スペクトルを示す。

【図２】重アセトン中、４００ＭＨｚで測定したＦＤ−
５４８の¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:80） (Ｃ１２Ｐ 17/08 Ｃ１２Ｒ 1:80） (72)発明者池田智岳東京都豊島区高田３丁目24番１号大正製薬株式会社内 (72)発明者花田和紀東京都豊島区高田３丁目24番１号大正製薬株式会社内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式で表される化合物。