JPH06178693A

JPH06178693A - 新規１９員環マクロラクトン

Info

Publication number: JPH06178693A
Application number: JP4332953A
Authority: JP
Inventors: Mie Shimura; 美恵志村; Satoshi Akashi; 敏明石; Kazutoshi Mizogami; 一敏溝上; Takatoshi Nagate; 尊俊長手; Kazunori Hanada; 和紀花田
Original assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1992-12-14
Filing date: 1992-12-14
Publication date: 1994-06-28

Abstract

(57)【要約】【目的】抗真菌作用と抗腫瘍作用を有する新規な化合物
を提供すること。【構成】式（Ｉ）

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、抗真菌作用と抗腫瘍作
用を有する新規な１９員環マクロラクトンに関する。

【０００２】

【従来の技術】本発明の化合物と構造が同一で同様の作
用を持つ化合物は知られていない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、抗真
菌作用と抗腫瘍作用を有する新規な化合物を提供するこ
とにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、抗真菌活
性を有する新規物質を土壌分離菌の中から得るべく探索
研究を重ねた結果、本発明者らの見出した特定の微生物
が、抗真菌作用と抗腫瘍作用を有する新規な生理活性物
質を生産することを見出し本発明を完成するに至った。

【０００５】本発明は、式（Ｉ）

【０００６】

【０００７】で表される化合物（以下、ＡＦ−１４０と
称する。）である。

【０００８】本発明の化合物を生産する菌株は、本発明
者らが採取した土壌より新たに分離した菌株であり、微
生物の名称「Amycolatopsis sp.TA-0234」および微生物
寄託番号「微工研菌寄第１３３２２号（FERM pー1332
2）」として、工業技術院微生物工業技術研究所に寄託
されている。

【０００９】この菌株の菌学的性状を以下に示す。

【００１０】［形態］本菌株の栄養菌糸は合成寒天培
地、天然寒天培地においてよく発達し、不規則に分枝す
る。また隔壁は認められない。胞子はグリセリン・アス
パラギン寒天培地およびイースト・麦芽寒天培地などで
中程度に形成される。顕微鏡で観察すると、胞子形成菌
糸の分枝方法は単純分枝で、胞子は栄養菌糸より伸長し
た菌糸の部分的な分断により直鎖状又はジクザク状にコ
ロニ周辺部に形成される。気菌糸には明確な分断が認め
られないため、胞子のサイズを特定することはできなか
ったが表面は平滑であることが確認された。

【００１１】菌核、胞子嚢、鞭毛胞子は培養期間中観察
されなかった。

【００１２】培地上での生育状態各種培地上で28℃、３週間培養した時の肉眼による観察
結果を表１に示す。

【００１３】［培地上での諸性状］

【００１４】

【表１】

【００１５】生理的性質１）生育温度範囲イースト・麦芽エキス培地で２１〜２９℃の範囲で良好
に生育する。１６℃以下、３４℃以上の温度範囲では生
育しない。

【００１６】２）生化学的性質 a）好気性、嫌気性の区別：好気性 b）ゼラチンの液化：陽性（遅い） c）脱脂乳の凝固：陰性 d）脱脂乳のペプトン化：陰性 e）スターチの加水分解：陽性 f）メラニン様色素の生成：陰性 g）細胞壁タイプ；ＩＶＡ型 h) メナキノン組成：主成分［ＭＫ−９（Ｈ₂），ＭＫ−
９（Ｈ₄）］

【００１７】３）炭素源の利用（プリドハム・ゴドリーブ寒天培地上）利用する：Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、イノシト
ール、Ｌ−ラムノースわずかに利用する：Ｌ−アラビノース、Ｄ−フラクトー
ス、シュクロース、ラフィノース、Ｄ−マンニット

【００１８】以上の形態的特徴及び化学的分類結果から
本菌株が放線菌に属することが明かとなったので、上記
性状を元に「マニュアル・オブ・シスマテック・バクテ
リオロジー」第４巻（１９８９年）、Ｉ．Ｓ．Ｐ．「ジ
・インターナショナル・ストレプトミセス・プロジェク
ト」、バージー著「マニュアル・オブ・シスマテック・
バクテリオロジー」第４巻（１９８９年）及びワックス
マン著「ジ・アクチノミセテス」第２巻（１９６１年）
等に報告されている多くの既知菌株と比較した結果、本
菌株はアミコラトプシス属に属することが確認された。
しかし種を決定するには至らなかったので本菌株を、Am
ycolatopsis sp.TA-0234と命名した。

【００１９】この培養により生産されたＡＦ−１４０を
単離するには、発酵生産物を採取する一般的な方法に準
じて行えば良い。すなわち各種の栄養物質を含む培地で
Amycolatopsis sp.TA0234株を好気的条件下で培養し、
培養終了後、培養液をアセトン抽出し、更に酢酸エチル
エステルにて抽出する。抽出されたＡＦ−１４０の画分
を濃縮してシロップ状とする。このシロップをシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー、ゲルろ過カラムクロマト
グラフィーに付すことにより、ＡＦ−１４０を精製単離
することができる。

【００２０】以上の精製法によって得られたＡＦ−１４
０の理化学的性質を以下に示す。（１）外観：白色粉末（２）融点：２１８〜２２１℃ （３）質量分析値：ＥＩＭＳスペクトルｍ／ｚ４９１（Ｍ⁺）陽イオンＦＡＢＭＳスペクトルｍ／ｚ４９２（Ｍ＋
Ｈ）⁺ 陰イオンＦＡＢＭＳスペクトルｍ／ｚ４９０（Ｍ−
Ｈ）^- （４）ＥＩ−高分解能マススペクトル：実測値：４９１．２６６３５理論値：４９１．２６７３１（Ｃ₃₀Ｈ₃₇ＮＯ₅として
計算）（５）分子式：Ｃ₃₀Ｈ₃₇ＮＯ₅ （６）分子量：４９１（７）比旋光度：［α］_D ²⁵＝−６２°（ｃ＝0.1，クロロホルム溶液）（８）紫外線吸収スペクトル：メタノール溶液で測定し
た結果、 λmax ２９５ｎｍ（ε＝３１４００）（９）赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒ錠中で測定したス
ペクトルを図１に示す。（１０）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中、
４００ＭＨｚで測定したスペクトルを図２に示す。（１１）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中、
１００ＭＨｚで測定したスペクトルを図３に示す。（１２）溶剤に対する溶解性：クロロホルム、酢酸エチ
ル、アセトン、メタノ−ルに可溶水に不溶

【００２１】また、ＡＦ−１４０はその元素分析値，分
子量，紫外線スペクトル，赤外線スペクトル，¹Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトル，¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルの解析により
その構造式が式（Ｉ）のように決定された。

【００２２】

【発明の効果】本発明の化合物は抗真菌作用と抗腫瘍作
用を有するので医薬として有用である。

【００２３】

【実施例】以下、実施例および試験例を挙げて本発明を
具体的に説明する。実施例（１）１００ｍｌ当りオ−トミ−ル２ｇ、グルコ−ス２
ｇ、塩化ナトリウム０．３ｇ、肉エキス０．３ｇ、硫酸
第二鉄０．０４ｇ、塩化マンガン０．０４ｇ、炭酸カル
シウム０．３ｇを含む無菌液体培地にAmycolatopsis s
p.TA0234株を接種し、２８℃、９６時間振とう培養し
た。次に内容量５Ｌのミニジャー２基を用いて種培地と
同じ組成の無菌培地３Ｌに前記培養液１００ｍｌを接種
し、２８℃、９６時間通気攪拌培養した。

【００２４】（２）培養終了後、２基分の培養液６Ｌを
アセトン６Ｌで抽出した。アセトンを除去した後、酢酸
エチルエステル６Ｌで抽出を行い、無水硫酸ナトリウム
で脱水後、濃縮し褐色のシロップ状物質１．２ｇを得
た。

【００２５】（３）シロップ状物質をメタノールに溶解
し、メタノールで調製したセファデックスＬＨ−２０
（商品名，ファルマシア社製）を充填した４００ｍｌの
カラムを用いて、ゲルろ過を行った。活性画分を集め、
油状物質８５０ｍｇを得た。

【００２６】（４）前項の油状物質８５０ｍｇを６０％
メタノ−ル５ｍｌに溶解し、６０％メタノ−ルで調製し
た逆相シリカゲルのクロマトレックス（商品名，フジ−
デビットソン社製）を充填した３００ｍｌのカラムに吸
着させ、同一溶媒にて洗浄後、８０％メタノ−ルにて溶
出し活性画分を薄黄色物質として１６３ｍｇ得た。

【００２７】（５）前項の薄黄色物質１６３ｍｇをクロ
ロホルム：メタノ−ル：ｎ−ヘキサン（５：１：５）で
調製したセファデックスＬＨ−２０を充填した２００ｍ
ｌのカラムにかけ、白色粉末４１ｍｇを得た。

【００２８】（６）前項の白色粉末４１ｍｇを７０％メ
タノ−ルに溶解し、以下の条件で行った高速液体カラム
クロマトグラフィ−の試料とした。

【００２９】カラムサイズ１０φ×２５０ｍｍ担体センシュパックＯＤＳ（センシュ科
学社製）溶媒組成７０％メタノ−ル、０．１％ＴＦＡ流速４．５ｍｌ／ｍｉｎ温度５０℃ 検出波長２１５ｎｍ装置日本分光８８０−ＰＶ保持時間１１．５〜１２．０分の画分を分取し１９ｍｇ
のＡＦ−１４０を得た。

【００３０】試験例１（抗真菌作用）（検体）実施例で得られたＡＦ−１４０、１ｍｇをメタ
ノールに溶解し、目的濃度となるようにサブロ−培地に
て希釈したものを用いた。

【００３１】（試験菌株）カンジダ・アルビカンスＪＣＭ１５４２クリプトコッカス・ネオフォルマンスＴＩＭＭ
０３５４アスペルギルス・フミガタスＴＩＭＭ００６３トリコフィ−トン・メンタグロファイテス＃８１
０２８

【００３２】（試験方法）目的濃度に希釈した検体入り
サブロ−培地を１００μｌずつ９６穴プレ−トに分注
し、次いで生理食塩水を用いて１０⁶分生子／ｍｌに調
製した各種菌液を１．５〜３μｌ添加した。

【００３３】カンジダ，クリプトコッカスは３７℃で２
０時間、アスペルギルスは２８℃で２０時間、トリコフ
ィ−トンは２８℃で５日間培養器内で培養をした後、Ｍ
ＩＣ（最小発育阻止濃度）を測定した。

【００３４】（結果）結果は表２に示す。

【００３５】

【表２】

【００３６】試験例２（抗腫瘍作用）（検体）実施例で得られたＡＦ−１４０、５ｍｇをメタ
ノ−ルに溶解し、目的濃度となるように滅菌生理食塩水
にて希釈したものを用いた。

【００３７】（試験細胞）Ｐ３８８マウス白血病Ｌ１２１０マウス白血病ＨＬ−６０ヒト白血病

【００３８】（使用した培養液）ＲＰＭＩ−１６４０培地

【００３９】（試験方法）前記培養液を用いて各種癌細
胞を、２×１０⁴〜１×１０⁵／ｍｌとし、直径３５ｍｍ
の６穴シャ−レに２ｍｌずつ分注した。次いで目的濃度
にあらかじめ希釈した検体５０μｌを、培養開始と同時
に添加した。

【００４０】試験細胞は、３７℃、５％炭酸ガス培養器
内で３〜４日間培養を続けた後、生細胞を測定し、試験
濃度と阻害率から、ＩＣ₅₀値（５０％阻害のための濃
度）を求めた。

【００４１】（結果）結果は表３に示す。

【００４２】

【表３】

【図面の簡単な説明】

【図１】ＫＢｒ錠にて測定したＡＦ−１４０の赤外線吸
収スペクトルを示す。

【図２】重クロロホルム中、４００ＭＨｚで測定したＡ
Ｆ−１４０の¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。

【図３】重クロロホルム中、１００ＭＨｚで測定したＡ
Ｆ−１４０の¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者長手尊俊東京都豊島区高田３丁目24番１号大正製薬株式会社内 (72)発明者花田和紀東京都豊島区高田３丁目24番１号大正製薬株式会社内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式で表される化合物。