JPH07258243A

JPH07258243A - テトラヒドロフラン系化合物

Info

Publication number: JPH07258243A
Application number: JP6031264A
Authority: JP
Inventors: Sosho Chin; 曽湘陳; Hekibai Ka; 璧梅何; Osamu Nozawa; 修野沢; Kazutoshi Mizogami; 一敏溝上; Shigeo Morimoto; 繁夫森本
Original assignee: Sichuan Industrial Institute of Antibiotics; Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Sichuan Industrial Institute of Antibiotics; Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1994-03-01
Filing date: 1994-03-01
Publication date: 1995-10-09

Abstract

(57)【要約】【目的】土壌から分離される微生物から抗腫瘍作用を
有する新規な化合物を見いだすこと。【構成】微生物から産生される式

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、抗腫瘍作用を有する新
規なテトラヒドロフラン系化合物に関する。

【０００２】

【従来の技術】抗腫瘍作用を有し、本発明化合物と構造
類似の化合物は知られていない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、抗腫
瘍作用を有する新規な化合物を提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、抗腫瘍活
性を有する新規物質を植物分離菌の中から得るべく探索
研究を重ねた結果、本発明者らの見出した特定の微生物
が癌培養細胞に対して増殖抑制作用を有する新規な生理
活性物質を生産することを見出し、本発明を完成するに
至った。

【０００５】本発明は、式

【０００６】

【０００７】で表されるテトラヒドロフラン系化合物で
ある。

【０００８】本発明の新規テトラヒドロフラン系化合物
（以下、これをＦＤ−２１２と称する。）を生産する菌
株は本発明者らが自然界から新たに分離した菌株であ
り、微生物の名称「Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａｌ
ｕｔｅａＴＦ−０４０９」および受託番号「ＦＥＲＭ
Ｐ−１４０５７」として、工業技術院生命工学工業技
術研究所に寄託されている。

【０００９】この菌株の菌学的性状を以下に示す。１）形態本菌株は、オートミール寒天培地、ＹｐＳｓ寒天培地、
ツアペック・ドックス寒天培地、三浦寒天培地等で良好
に生育し、また胞子の形成は上記４種の寒天培地に加え
バレイショ・ブドウ糖寒天培地で良好である。本菌株が
バレイショ・ブドウ糖寒天培地上、２６℃、１４日間の
培養で形成したコロニーを光学顕微鏡で観察すると、菌
糸は隔壁を有し高度に分岐しており、気生菌糸の径は
１．０〜３．０μｍである。分生子形成細胞は気生菌糸
と明確には区別できず、アンプル状または球状に膨潤し
た先端部分からアレウロ型分生子が単生、または最初に
形成された分生子の１〜数ヶ所からさらに２次分生子が
形成される。分生子は亜球形から球形で多くは基部に短
い柄（突起）を有する裁断状、淡黄緑色（古くなると灰
褐色）を呈し、わずかに厚壁、表面は平滑、亜球形から
球形、まれに長楕円形、大きさは４．０〜９．０×３．
０〜６．０μｍである。なお、培養を３週間に延長した
が有性生殖器官の形成は認められなかった。

【００１０】２）培地上での生育状態各種培地上で、２６℃、１４日間培養した場合の肉眼的
観察結果を次の表１に示した。なお色の表示は日本規格
協会、ＪＩＳ色名帳（１９８５年）の系統色名を引用し
た。

【００１１】

【表１】

【００１２】３）生理的性質生育温度範囲及び最適温度本菌株はｐＨ６．０のサブロー液体培地において、１７
〜４１℃の範囲で生育し、最適温度は２９〜３５℃であ
る。生育ｐＨ範囲及び最適ｐＨ本菌株はＹｐＳｓ液体培地中２６℃においてｐＨ４〜１
０の範囲で生育し、最適ｐＨは５〜６である。４）好気性，嫌気性の区別；好気性

【００１３】以上の形態的特徴および培養上の性状か
ら、本菌株が不完全菌亜門中の、Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔ
ｈｏｒａ属の一菌種であることが明かとなり、Ｃ．Ａ．
Ｎ．Ｖａｎｏｏｒｓｃｈｏｔ，『Ｔｈｅｇｅｎｕｓ
Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ』Ｐｅｒｓｏｏｎｉａ，
第９巻，第４０１〜４０８頁（１９７７年）、Ｃ．Ａ．
Ｎ．Ｖａｎｏｏｒｓｃｈｏｔ，『Ａｒｅｖｉｓｉｏｎ
ｏｆＣｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍａｎｄａｌｌ
ｉｅｄｇｅｎｅｒａ』，ＳｔｕｄｉｅｓｉｎＭｙｃ
ｏｌｏｇｙ，Ｎｏ．２０，第４６〜５６頁（１９８０
年）に報告されている多くの既知菌種と比較検討した結
果、本菌株はＭｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａｌｕｔｅ
ａＣｏｓｔ．の性状と極めてよく一致し、本菌株を
「ＭｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａｌｕｔｅａＴＦ−
０４０９」と命名した。

【００１４】この培養により生産されたＦＤ−２１２を
単離するには、発酵生産物を採取する一般的な方法に準
じて行えば良い。すなわち各種の栄養物質を含む培地で
ＭｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａｌｕｔｅａＴＦ−０
４０９株を好気的条件下で培養し、培養終了後、培養液
をＨＰ−２０に吸着させ、メタノールで溶出し、メタノ
ールを留去後水層を酢酸エチルエステルにて抽出する。
抽出したＦＤ−２１２の画分を濃縮してシロップ状とす
る。このシロップをシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー、ゲル濾過カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣを行
う事により、ＦＤ−２１２を精製単離することができ
る。

【００１５】以上の精製法によって得られたＦＤ−２１
２の理化学的性質を以下に示す。（１）外観：無色オイル状（２）質量分析値：ＥＩＭＳスペクトルｍ／ｚ２６８（Ｍ⁺）（３）ＥＩ−高分解能マススペクトル：実測値：２６８．１３１４理論値：２６８．１３１２（Ｃ₁₄Ｈ₂₀Ｏ₅として計算）（４）分子式：Ｃ₁₄Ｈ₂₀Ｏ₅ （５）分子量：２６８（６）紫外線吸収スペクトル：メタノール溶液で測定し
た結果、末端吸収（７）赤外線吸収スペクトル：Ｎｅａｔ法で測定したス
ペクトルを図１に示す。（８）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中、４
００ＭＨｚで測定したスペクトルを図２に示す。（９）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中、１
００ＭＨｚで測定したスペクトルを図３に示す。（１０）溶剤に対する溶解性：水に不溶メタノール，クロロホルムに可溶また、ＦＤ−２１２はその分子量，紫外線スペクトル，
赤外線スペクトル，¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル，¹³Ｃ−Ｎ
ＭＲスペクトルの解析によりその構造式が前記式のよう
に決定された。

【００１６】

【発明の効果】本発明の化合物は癌培養細胞に対して増
殖抑制作用を有するので、医薬として有用である。

【００１７】

【実施例】以下、実施例および試験例を挙げて本発明を
具体的に説明する。実施例（１）１００ｍｌ当りグルコース２ｇ、酵母エキス０．
２ｇ、硫酸マグネシウム０．０５ｇ、ポリペプトン０．
５ｇ、リン酸一カリウム０．１ｇを含む無菌液体培地に
ＭｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａｌｕｔｅａＴＦ−０
４０９株を接種し、２６℃、９６時間振とう培養した。
次に内容量５０Ｌのジャー１基を用いて種培地と同じ組
成の無菌培地３０Ｌに前記培養液４００ｍｌを接種し、
２６℃、９６時間通気攪拌培養した。

【００１８】（２）培養終了後、１基分の培養液３０Ｌ
を遠心分離し、上清３０ＬにＨＰ−２０を約１Ｌ分加
え、２時間攪拌した。その後、ＨＰ−２０を水、５０％
メタノールで洗浄後、メタノール５Ｌで溶出した。メタ
ノールを除去した後、酢酸エチルエステル１０Ｌで抽出
を行い、無水硫酸ナトリウムで脱水後、濃縮し、褐色の
シロップ状物質３．１７ｇを得た。

【００１９】（３）シロップ状物質をメタノールに溶解
し、メタノールで調製したセファデックスＬＨ−２０
（商品名、ファルマシア社製）を充填したカラムを用い
てメタノールでゲル濾過を行った。活性画分を合わせ、
濃縮乾固し、油状物質１．２４ｇを得た。

【００２０】（４）前項の油状物質１．２４ｇを、クロ
ロホルム５ｍｌに溶解し、クロロホルムで調製したシリ
カゲルを充填したカラムに吸着させ、メタノールの濃度
を徐々にあげながらメタノール／クロロホルム（９９．
９：０．１〜９９．２：０．２）溶液で溶出した。活性
画分を集め、油状物質１０１ｍｇを得た。

【００２１】（５）前項の油状物質１０１ｍｇを、クロ
ロホルム：メタノール：ｎ−ヘキサン（５：１：５）に
溶解し、クロロホルム：メタノール：ｎ−ヘキサン
（５：１：５）で調製したセファデックスＬＨ−２０
（商品名、ファルマシア社製）を充填したカラムを用い
てクロロホルム：メタノール：ｎ−ヘキサン（５：１：
５）でゲル濾過を行った。活性画分を集め、油状物質４
５ｍｇを得た。

【００２２】（６）前項の油状物質をアセトニトリルに
溶解し、以下の条件で行った高速液体カラムクロマトグ
ラフィーの試料とした。

【００２３】カラムサイズ１０φ×２５０ｍｍ担体センシュパックＯＤＳ（センシュ科
学社製）溶媒組成３０％アセトニトリル流速４．７ｍｌ／ｍｉｎ温度５０℃ 検出波長２１５ｎｍ装置日本分光ＰＵ−９８６保持時間７．５〜１０分の画分を分取し２０
ｍｇのＦＤ−２１２を得た。

【００２４】試験例（各種培養細胞に対する増殖阻害作
用）（検体）実施例で得られた１０ｍｇのＦＤ−２１２をメ
タノールに溶解し、目的濃度となるように滅菌生理食塩
水にて希釈したものを用いた。

【００２５】（試験細胞）ＨＬ−６０（ヒト白血病）ＨｅＬａＳ−３（ヒト子宮癌）Ａ５４９（ヒト肺癌）（使用した培養液）ＲＰＭＩ−１６４０培地（試験方法）前記培養液を用いて各種癌細胞を、２×１
０⁴〜１×１０⁵／ｍｌとし、直径３５ｍｍの６穴シャー
レに２ｍｌずつ分注した。次いで目的濃度にあらかじめ
希釈した検体５０μｌを、培養開始と同時に添加した。

【００２６】試験細胞は、３７℃、５％炭酸ガス培養器
内で２〜３日間培養を続けた後、生細胞を測定し、試料
濃度と阻害率から、ＩＣ₅₀値（５０％阻害のための濃
度）を求めた。

【００２７】（結果）結果は表２に示す。

【００２８】

【表２】

【図面の簡単な説明】

【図１】Ｎｅａｔ法にて測定したＦＤ−２１２の赤外線
吸収スペクトルを示す。

【図２】重クロロホルム中、４００ＭＨｚで測定したＦ
Ｄ−２１２の¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。

【図３】重クロロホルム中、１００ＭＨｚで測定したＦ
Ｄ−２１２の¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者野沢修東京都豊島区高田３丁目24番１号大正製薬株式会社内 (72)発明者溝上一敏東京都豊島区高田３丁目24番１号大正製薬株式会社内 (72)発明者森本繁夫東京都豊島区高田３丁目24番１号大正製薬株式会社内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式で表されるテトラヒドロフラン系化合物。