JPH083097A

JPH083097A - ベンゾフェノン系化合物ｆｄ−５４９

Info

Publication number: JPH083097A
Application number: JP6132686A
Authority: JP
Inventors: Tsuguyoshi Kiyou; 亜芳喬; Yoji Kawamura; 洋治河村; Tadayasu Okazaki; 忠靖岡崎; Kazutoshi Mizogami; 一敏溝上; Shigeo Morimoto; 繁夫森本
Original assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1994-06-15
Filing date: 1994-06-15
Publication date: 1996-01-09

Abstract

(57)【要約】【目的】抗腫瘍作用を有する新規な化合物を提供す
る。【構成】式【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、抗腫瘍作用を有する新
規なベンゾフェノン系化合物に関する。

【０００２】

【従来の技術】本発明の化合物と構造同一で同様の作用
を持つ化合物は知られていない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、抗腫
瘍作用を有する新規な化合物を提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、抗腫瘍作
用を有する新規物質を土壌や植物由来の分離菌から得る
べく探索研究を重ねた結果、本発明者らの見出した特定
の微生物が、HL-60 細胞（ヒト前骨髄性白血病細胞）に
対して増殖抑制作用を有する新規な生理活性物質を生産
することを見出し本発明を完成するに至った。本発明
は、

【０００５】

【化２】

【０００６】で表されるＦＤ−５４９である。

【０００７】本発明のＦＤ−５４９を生産する菌株は本
発明者らが採取した枯死植物から新たに分離した菌株で
あり、微生物の名称「Penicillium sp. TF-0379」およ
び微生物寄託番号「ＦＥＲＭＰ−１３５３４」とし
て、工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託されてい
る。

【０００８】この菌株の菌学的性状を以下に示す。

【０００９】１）形態本菌株は、オ−トミ−ル寒天培地、麦芽エキス寒天培
地、ＹｐＳｓ寒天培地などで良好に生育し、胞子の形成
はバレイショ・ブドウ糖寒天培地、オ−トミ−ル寒天培
地、ＹｐＳｓ寒天培地で極めて良好である。本菌株がバ
レイショ・ブドウ糖寒天培地上、２５℃、７日間の培養
で形成したコロニ−を顕微鏡下で観察すると、菌糸は隔
壁を有し、高度に分岐しており、白色から明るい黄色を
呈する。分生子形成細胞は、気生菌糸または基中菌糸か
ら分岐して立ち上がった分生子柄の先端から、それぞれ
メトレ（Metre）を介して複輪生状−対称型に分岐し、
先端からフィアロ型分生子を連鎖状に形成しており、ペ
ニシリウム属に特徴的なペニシリ（Penicilli）と呼ば
れる形態が認められる。分生子柄は隔壁を有し、表面は
平滑、４０〜１６５μｍ × ２．０〜３．４μｍであ
る。メトレは８．０〜１６．０μｍ × ２．０〜３．０
μｍ、フィアライドは８．０〜１５．０（〜１８．０）
μｍ × ２．０〜３．０（〜３．４）μｍである。分生
子は球形から亜球形、まれに長楕円形、洋梨形で表面は
わずかに粗面または刺状を呈し、大きさは２．０〜３．
８（〜６．０）μｍ × １．６〜３．２（〜４．０）μ
ｍである。なお、培養を３週間に延長したが有性生殖器
官の形成は認められなかった。２）培地上での生育状態各種培地上で、２５℃、１４日間培養した場合の肉眼的
観察結果を次の表１に示した。なお色の表示は日本規格
協会、ＪＩＳ色名帳（１９８５年）の系統色名を引用し
た。

【００１０】

【表１】

【００１１】３）生理的性質生育温度範囲及び最適温度本菌株はｐＨ６．０のサブロー液体培地において、１３
〜３９℃の範囲で生育し、最適温度は３０〜３３℃であ
る。

【００１２】生育ｐＨ範囲及び最適ｐＨ本菌株はＹｐＳｓ液体培地中２６℃においてｐＨ２〜９
の範囲で生育し、最適ｐＨは４〜５である。４）好気性，嫌気性の区別；好気性。

【００１３】以上の形態的特徴および培養上の性状か
ら、本菌株がPenicillium属の１菌種であることが明か
となり、宇田川俊一，椿啓介編『菌類図鑑』（1978
年）、K.B. Raper，C.Thom著の「A MANUAL OF THE PENI
CILLIA」（1949年）およびJ.I.Pitt著の「A LABORATORY
GUIDE TO COMMON Penicillium SPECIES」（1985年）に
報告されている多くの既知菌株と比較検討した。その結
果、本菌株はBiverticillium亜属に含まれると思われた
が種を決定するまでには至らなかったので、本菌株を
「Penicillium sp. TF-0379」と命名した。

【００１４】この培養により生産されたＦＤ−５４９を
単離するには、発酵生産物を採取する一般的な方法に準
じて行えば良い。すなわち各種の栄養物質を含む培地で
Penicillium sp. ＴＦ−０３７９株を好気的条件下で培
養し、培養終了後、培養液をＨＰ−２０に吸着させ、ア
セトンで溶出し、アセトンを除去した後、酢酸エチルで
抽出を行い、更に酢酸エチルエキスについて塩化メチレ
ンで抽出する。得られた塩化メチレンエキスをシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー、ゲル濾過カラムクロマト
グラフィーおよび逆相高速液体カラムクロマトグラフィ
ーに付すことにより、ＦＤ−５４９を精製単離すること
ができる。

【００１５】以上の精製法によって得られたＦＤ−５４
９の理化学的性質を以下に示す。（１）外観：黄色粉末（２）融点：１３９〜１４１℃ （３）質量分析値：ＥＩＭＳスペクトルｍ／ｚ３８２（Ｍ⁺）（４）ＥＩ−高分解能マススペクトル：実測値：３８２．１７８２理論値：３８２．１７７９（Ｃ₂₃Ｈ₂₆Ｏ₅として計算）（５）分子式：Ｃ₂₃Ｈ₂₆Ｏ₅ （６）分子量：３８２（７）紫外線吸収スペクトル： λ（ε）：２１８（４５１００），２７５（１９３０
０），３２５（ｓｈ）（６８００）ｎｍ（メタノール溶
媒で測定）（８）赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒ法で測定したスペ
クトルを図１に示す。

【００１６】（９）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重クロロ
ホルム中、３００ＭＨｚで測定したスペクトルを図２に
示す。

【００１７】（１０）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重クロ
ロホルム中、７５ＭＨｚで測定したスペクトルを図３に
示す。

【００１８】（１１）溶剤に対する溶解性：水に不溶エタノール、メタノール、アセトン、塩化メチレンに可
溶また、ＦＤ−５４９はその分子量，紫外線スペクトル，
赤外線スペクトル，ＮＭＲスペクトルの解析によりその
構造式が化２のように決定された。

【００１９】

【発明の効果】本発明の化合物はHL-60細胞に対して増
殖抑制作用を有するので医薬として有用である。

【００２０】

【実施例】以下、実施例および試験例を挙げて本発明を
具体的に説明する。実施例（１）１００ｍｌ当りグルコース２ｇ、酵母エキス０．
２ｇ、硫酸マグネシウム０．０５ｇ、ポリペプトン０．
５ｇ、リン酸一カリウム０．１ｇを含む無菌液体培地に
Penicillium sp. ＴＦ−０３７９株を接種し，２６
℃，７２時間振とう培養した。次に種培地と同じ組成の
無菌培地を内容量５０Ｌの培養槽３基に３０Ｌずつ、お
よび２００Ｌ培養槽１基に１２０Ｌを入れ、それぞれ１
％の前記培養液を接種し、２８℃、４８時間通気撹拌培
養した。（２）培養終了後、上記培養液２１０Ｌを遠心分離し、
上清２１０ＬにＨＰ−２０（商品名；三菱化成社製）７
Ｌを加え、２時間撹はんして吸着させた後アセトン１５
Ｌで溶出した。アセトンを留去後残査の半量の酢酸エチ
ルで２回抽出し、酢酸エチル画分を無水硫酸ナトリウム
で脱水後濃縮して、濃縮物３４．７９ｇを得た。前記濃
縮物を更に塩化メチレン２００ｍｌで抽出して濃縮し、
褐色油状物質２１．８２ｇを得た。

【００２１】（３）前項の褐色油状物質２１．８２ｇを
塩化メチレンに溶解し、塩化メチレンで調製したシリカ
ゲル「ワコーゲルＣ−２００（商品名；和光純薬）」を
充填したカラムに付し、塩化メチレンで溶出した画分を
除いた後、塩化メチレン：アセトン溶液（９５：５）で
溶出し、溶媒を留去し、褐色油状物質２．０７ｇを得
た。（４）前項の褐色油状物質２．０７ｇをヘキサン：アセ
トン（９５：５）溶液に溶解し同様の溶液で調製したシ
リカゲル「ワコーゲルＣ−２００（商品名；和光純
薬）」を充填したカラムに吸着させ、アセトン濃度５
％、１０％、２０％で溶出した画分を除いた後４０％ア
セトン溶出液を濃縮し、褐色油状物質６６０ｍｇを得
た。

【００２２】（５）前項の褐色油状物質６６０ｍｇをク
ロロホルム：メタノール：ヘキサン（５：１：５）に溶
解し、同様の溶媒で調製したセファデックスＬＨー２０
（商品名；ファルマシア社製）を充填したカラムを用い
て前記同様の溶媒でゲル濾過を行った。活性区分を集
め、溶媒を留去し、黄色粉末３６０ｍｇを得た。（６）前項の黄色粉末をメタノールに溶解し、以下の条
件で行った高速液体カラムクロマトグラフィーの試料と
した。（７）カラムサイズ２０¢×２５０ｍｍ、担体センシュ
パックＯＤＳー５２５１Ｎ（センシュ科学社製）、溶媒
５５％アセトニトリル、流速１２ｍｌ／ｍｉｎ、検出波
長２１５ｎｍ、装置センシュー科学社製ｓｓｃ−３１０
０、保持時間１８分の画分を集め、２８０ｍｇのＦＤ−
５４９を得た。

【００２３】試験例（各種培養細胞に対する増殖阻害作
用）（検体）実施例で得られたＦＤ−５４９１０ｍｇをメ
タノールに溶解し、目的濃度となるように滅菌生理食塩
水にて希釈したものを用いた。（試験細胞）ＨＬ−６０細胞（ヒト前骨髄性白血病細胞）（使用した培養液）ＲＰＭＩ−１６４０培地（試験方法）前記培養液を用いて各種癌細胞を、２×１
０⁴〜１×１０⁵／ｍｌとし、直径３５ｍｍの６穴シャー
レに２ｍｌずつ分注した。次いで目的濃度にあらかじめ
希釈した検体５０μｌを、培養開始と同時に添加した。
試験細胞は、３７℃、５％炭酸ガス培養器内で２〜３日
間培養を続けた後、生細胞を測定し、試料濃度と阻害率
から、ＩＣ₅₀値（５０％阻害のための濃度）を求めた。（結果）結果は表２に示す。

【００２４】

【表２】

【図面の簡単な説明】

【図１】ＫＢｒ法にて測定したＦＤ−５４９の赤外線吸
収スペクトルを示す。

【図２】重クロロホルム中、３００ＭＨｚで測定したＦ
Ｄ−５４９の¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。

【図３】重クロロホルム中、７５ＭＨｚで測定したＦＤ
−５４９の¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示した。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:80） (72)発明者溝上一敏東京都豊島区高田３丁目24番１号大正製薬株式会社内 (72)発明者森本繁夫東京都豊島区高田３丁目24番１号大正製薬株式会社内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式【化１】で表されるＦＤ−５４９。