JPS588394B2 - マレイミド誘導体 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は酵素と抗原とを結合剤でもって結合させて酵素
標識抗原を調製する場合における結合剤として有用な 式 で表わされる新規マレイミド誘導体に関する。

酵素標識抗原はインスリイ、ゴナドトロピンの如き各種
のホルモンや各種のハプテン等の有用な微量定量法とし
て知られている（特開昭４７一１３９９４号等）エンザ
イム イムノアツセイ（ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏ
Ａｓｓａｙ ；以下ＥＩＡと略す）における必須の試
薬である。

酵素と抗原とを結合させるには、特に熱や化学反応処理
に対し不安定な酵素や高分子の抗原の活性を消失しない
ような緩和な条件下で行なう必要があり、緩和な条件下
において結合させようとすれば、いきおい、非常に反応
性に富む官能基を有する結合剤を使用しなければならな
いことになる。

しかし、結合剤の官能基の反応性が高いことは反面にお
いて不安定であることにほかならず、反応性が高くかつ
安定な結合剤を見い出すのは容易でない。

また、従来繁用されてきたグルタルアルデヒドの如き二
官能性の結合剤は、２個の官能基が同一である故に、そ
の結合が非選択的でありその結果目的物の他に酵素−酵
素結合物や抗原−抗原結合物を副生しＥＩＡの実施に適
した酵素標識抗原の調製に大きな障害となる。

最近になって官能基が異なる二官能性の結合剤も２〜３
知られているが、これらの結合剤は水溶液中での酵素お
よび抗原に対する結合能力（活性）と安定性、ことに安
定性において充分なものとは云い難い。

本発明者は結合剤について種々検討した結果、酵素（ま
たは抗原）中に存するＳＨ基と反応（付加反応）して結
合を形成するマレイミド部分および抗原（または酵素）
中に存するＮＨ２ 基と反応（エステル交換反応）して
結合を形成するエステル部分を有し、かつこれらの反応
性を弱めることなく安定性に寄与するメトキシ部分をも
有することを特徴とする式〔Ｉ〕のマレイミド誘導体が
安定な二官能性結合剤として有用であることを見い出し
本発明を完成した。

ことに、式〔■〕のマレィミド誘導体の安定性が、次表
に示すように、極めて類似する化合物より優れているこ
とは注目に値する。

表中の数字は、それぞれの化合物１０ｍＭを含むテトラ
ヒドロフラン溶液２０ｒＩＬｌと０．０５Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ６．０、ｐＨ７．０）または０．０５Ｍクエン
酸緩衝液（ ｐＨ ５．０ ） ０．５ｍｌとを混和し
、３０℃で３０分間温置したときのマレイミド基の分解
度（％）を表す。

化合物１；本発明化合物 化合物２： （ｍ， ｐ １ ６ ４ 〜１ ６ ６．５℃）化合
物３： （ｍ．ｐ２２９〜２３２℃） 化合物４； （ｍ．ｐ １ ８ ５〜１ ８ ７℃）式〔Ｉ〕で表
わされるマレイミド誘導体は次式に従って容易に製造す
ることができる。

次に製造例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。

製造例 １ ３−マレイミド−４−メトキシベンゾイル−Ｎハイドロ
キシサクシンイミドエステルの製造３−アミノー４−メ
トキシ安息香酸１９．Ｏｆ、無水マレイン酸１２．０Ｐ
を４ｏｏｍ−１のジオキサン中、６０℃で１．５時間加
熱する。

析出結晶を沢取し２７．４９の粗３−（３’−カルポキ
シアクリロイル）アミノー４−メトキシ安息香酸を得る
（これをエタノールから再結晶すればｍ．ｐ２００〜２
０２℃を示す。

）ここで得られた安息香酸誘導体５ｇ、酢酸ソーダ−２
．５７を無水酢酸７０ｍｌ中、９０℃で２．５時間加熱
する。

反応液を氷水中に注ぎ室温で１時間攪拌後結晶をＰ取す
る。

乾燥後これをジメチルスルホキサイド中で約７０℃、３
時間加熱する。

溶媒を留去し水を加えた後析出結晶をろ取する。

エタノールより再結晶して２．２ｇの３−マレイミドー
４−メトキシ安息香酸（ｍ，ｐ２６５〜２ ７ １ ’
Ｃ ）を得る。

このマレイミド誘導体６１７〜、Ｎ−ハイドロキシサク
シンイミド３４５〜、ジシクロへキシル力ルポジイミド
６２０ＩＩＴ９を乾燥テトラヒド口フラン４０ｍｌに溶
解し室温で２．５時間攪拌する。

析出物を沢去し沢液を減圧濃縮する。

残渣をエーテＡで洗い析出結晶をジクロルメタンに溶か
し不溶物を沢去後減圧濃縮する。

得られる残渣について１０ｇのシリカゲルを用いてカラ
ムクロマトグラフイーな行ない、クロロホルム溶出部よ
り目的物２１０ｍｇを得る。

これをジクロルメタンーエーテルより再結晶した。

ｍ，ｐ ２０６ 〜２１０℃

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １式 で表わされるマレイミド誘導体。