SU800877A1 - Способ получени конъюгированногоС бЕлКОМ АМиНАзиНА - Google Patents
Способ получени конъюгированногоС бЕлКОМ АМиНАзиНА Download PDFInfo
- Publication number
- SU800877A1 SU800877A1 SU792748079A SU2748079A SU800877A1 SU 800877 A1 SU800877 A1 SU 800877A1 SU 792748079 A SU792748079 A SU 792748079A SU 2748079 A SU2748079 A SU 2748079A SU 800877 A1 SU800877 A1 SU 800877A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- aminazine
- protein
- conjugated
- mol
- serum albumin
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Изобретение относится к иммунологии и·может быть применено в медицине и биологии для получения антител к фенотиазиновым лекарственным препаратам, для изучения толерантности к аминазину, нейтрализации его токсического действия, а также для определения низких концентраций этих лекарств в биологических жидкостях- с помощью иммуно-химических методов.
Известен способ получения конъю гированного с белком аминазина путем проведения реакции комплексообразования реакционноспособного производного аминазина с белком [1].
Однако известный способ позволяет получить аминазин, содержащий 9 моль производного аминазина, ковалентно связанных с 1 моль белка, конверсия реакционноспособного производного аминазина составляет 13%. Способ тру доемкий, используются дорогостоящие реактивы.
Цель изобретения - повышение содержания аминазина в конъюгате и упрощение способа .
Цель достигается тем, что в качестве реакционноспособного производ ного аминазина используют п-аминодифенил азоаминазин и реакцию комплек- ” сообразования ведут с бычьим сывороточным альбумином.
П р и м е р 1. Получение п-амин одифенилазоаминазина.
К смеси 1,84 г (0,01 моль) бензидина, 2 мл (0,05 моль) муравьиной кислоты и 100 мл воды добавляют при -10°C 1,518 г (0,022 моль) нитрита натрия в 2 мл воды. Реакционную смесь выдерживают при охлаждении и перемешивании в течение 1 ч. Полученный раствор прибавляют к раствору 3,55 г (0,01 моль) хлоргидрата аминазина в 20 мл воды, поддерживая pH 7-8 добавлением 10%-ного раствора гидроокиси натрия. Выпавший осадок отфильтровывают, трижды проливают водой, отфильтровывают, высушивают и перекристаллизовывают из смеси хлороформ-пет.релейный эфир (1st) . Получают 4 г η -аминодифенилазоаминазина. Выход 85% Т.пл. выше 300°С, Rf 0,47 (пиридин-этилацетат-вода а 1:1:1). В ИКопектре полученного соединения имеет-.* ся полоса поглощения в области 3430см, характерная для колебаний свободной аминогруппы. Найдено,%: С 84,35;
Н 5,50. Вычислено,% : С 84,20 ; Н 5,55.
Получение конъюгированного антигена аминазин-бычий сывороточный альбумин .
К смеси 260 мг (0,5 моль) η-аминодифенилазоаминазина и 10 мл концентрированной соляной кислоты при температуре -10°C добавляют 35 мг (0,55 моль) нитрита натрия в 2 мл воды. Реакционную смесь выдерживают при охлаждении и перемешивании в течение мин. Полученный раствор прибавляют при температуре 0-10°C к раствору 500 мг (0,072 ммоль ) бычьего сыво10 роточного альбумина в 10 мл воды, поддерживая pH 7-9 добавлением 10%-ного раствора гидроокиси натрия. Смесь ogтавляют на ночь при температуре 0-4°С .15 Полученный яркоокрашенный раствор конъюгированного антигена аминазинбычий сывороточный альбумин очищают от низкомолекулярных примесей диализом против дистиллированной воды в 20 течение 6 сут. После удаления воды лиофильной сушкой получают 500 мг сухого порошкообразного целевого продука.
Содержание ковалентно связанного аминазина в синтезированном конъюгированном антигене определяют спект— рофотометрически по разнице введенного в реакцию и непрореагировавшего где V и EV - объем и поглощение при 280 нм низкомолекулярной фракции, выделенной после реакции.
По данным спектрофотометрии рассчитывают, что из 260 мг производного аминазина в реакцию с белком вступило 80 мг . Таким образом, при указанном соотношении исходных компонентов получают конъюгированный антиген аминазин-бычий сывороточный альбумин, содержащий 21 остаток аминазина, ковалентно связанные с 1 моль белка.
Пример 2.По вышеописанной методике из 300 мг (0,58 моль) паминодифенилазоаминазина и 3 г (0,045 моль) бычьего сывороточного альбумина получают конъюгированный антиген аминазин-бычий сывороточный альбумин, содержащий 9 моль производного аминазина, ковалентно связанных с 1,моль белка.
Применение предлагаемого способа позволяет повысить конверсию реакционноспособного производного аминазина в б раз, исключить из процесса целый ряд реактивов и растворителей, удешевить способ получения конъюгирован•ных антигенов аминазин-белковый антигенный носитель .
п-аминодифенилазоаминазина по известному способу . Устанавливают удельное поглощение низкомолекулярной фракции, выделяемой после диализа из реакционной смеси. Для этого п-аминодифенилазоаминазин обрабатывают в условиях, аналогичных условиям реакции ковалентного связывания, но в отсутствии белка, и изучают УФ-спектр полученной смеси. Установлено, что поглощение ее в концентрации 1 мг/мл в пересчете на исходный п-аминодифе- 40 нилаэоаминазин при 280 нм составляет 10,0. Количество п-аминод'ифенилазоаминазина'(в мг), 'не вступившего в реакцию с белком, рассчитывают по формуле:
V· Еу
10,0 г
Claims (2)
- (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЪЮГИРОВАННОГО С БЕЛКОМ АМИНАЗИНА Получение конъюгированного антигена аминаЗИН-бычий сывороточный альбумин , К смеси 260 мг (0,5 моль) п-аминодифенилазоаминазина и 10 мл концентрированной сол ной кислоты при температуре -10 С добавл ют 35 мг (о, 55 моль) нитрита натри в 2 мл воды . Реакционную смесь выдерживают при охлаждении и перемешивании в течение 30 мин. Полученный раствор прибавл ют при температуре 0-10°С к раствору 500 MI- (0,072 ммоль ) бычьего сывороточного альбумина в 10 мл воды, под держива рН 7-9 добавлением 10%-ного раствора гидроокиси натри . Смесь оставл ют на ночь при температуре 0-4 С Полученный ркоокрашенный раствор конъюгированного антигена аминазинбычий сывороточный альбумин очищают от низкомолекул рных примесей диализом против дистиллированной воды в течение 6 сут. После удалени воды лиофильной сушкой получают 500 мг сухого порошкообразного целевого про дука. Содержание ковалентно св занного аминазина в синтезированном конъюгированном антигене определ ют спект- рофотометрически по разнице введенного в реакцию и непрореагировавшего п-аминодифенилазоаминазина по извест ному способу . Устанавливают удельное поглощение низкомолекул рной фракции выдел емой после диализа из реакционной смеси. Дл этого п-аминоДифенилазоаминазин обрабатывают в услови х , аналогичных услови м реакции ковалентного св зывани , но в отсутствии белка, и изучают УФ-спектр полученной смеси. Установлено, что пог лощение ее в концентрации 1 мг/мл в пересчете на исходный п-аминодифенилазоаминазин при 280 нм составл ет 10,0. Количество п-аминодифенилазоаминазина (в мг) , не вступившего в реакцию с белком, рассчитывают пЪ фор где V и EV - объем и поглощение при 280 нм низкомолекул рной фракции, выделенной после реакции. По данным спектрофотометрии рассчитывают , что из 260 мг производного аминазина в реакцию с белком вступило 80 мг. Таким образом, при указанном соотнс иении исходных компонентов получают конъюгированный антиген аминазин-бычий сывороточный альбумин, содержащий 21 остаток аминазина ковалентно св занные с 1 моль белка. Пример
- 2. По вышеописанной методике из 300 мг (0,58 моль) памиаодифенилазоаминазина и 3 г (0,045 моль) бычьего сывороточного альбумина получают конъюгированный антиген аминазин-бычий сывороточный альбумин, содержащий 9 моль производного аминазина, ковалентно св занных с белка. Применение предлагаемого способа позвол ет повысить конверсию реакционноспособного производного аминазина в б раз, исключить из процесса целый р д реактивов и растворителей, удешевить способ получени конъюгирован|ных антигенов аминазин-белковый антигенный носитель . Формула изобретени Способ получени конъюгированного с белком аминазина путем проведени реакции комштексообразовани реакционноспособного производного аминазина с белком, отличающийс тем, что, с целью повышени содержани аминазина в конъюгате и упрощени способа, в качестве реакционноспособного производного аминазина используют п-аминодифенилазоаминазин и реакцию коплексообразовани ведут с бычьим сывороточным альбумином. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Патент США № 3976763,кл .424-1,5 , 24.08.76.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU792748079A SU800877A1 (ru) | 1979-03-30 | 1979-03-30 | Способ получени конъюгированногоС бЕлКОМ АМиНАзиНА |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU792748079A SU800877A1 (ru) | 1979-03-30 | 1979-03-30 | Способ получени конъюгированногоС бЕлКОМ АМиНАзиНА |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU800877A1 true SU800877A1 (ru) | 1981-01-30 |
Family
ID=20820111
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU792748079A SU800877A1 (ru) | 1979-03-30 | 1979-03-30 | Способ получени конъюгированногоС бЕлКОМ АМиНАзиНА |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU800877A1 (ru) |
-
1979
- 1979-03-30 SU SU792748079A patent/SU800877A1/ru active
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4680338A (en) | Bifunctional linker | |
| EP0000938B1 (en) | Macromolecular covalent conjugates, methods for preparing and pharmaceutical compositions containing them | |
| US5514559A (en) | Immunologically active conjugates and method for their preparation | |
| Safer et al. | Undecagold clusters for site-specific labeling of biological macromolecules: simplified preparation and model applications | |
| US4149003A (en) | Pyridine disulfide compounds | |
| CA1234800A (en) | Processes for the preparation of new conjugates of vinblastine or of vinblastine derivatives and the products of such processes | |
| AU659427B2 (en) | Site-specific conjugation of immunoglobulins and detectable labels | |
| US5594111A (en) | Phenylboronic acid complexes for bioconjugate preparation | |
| US4760142A (en) | Divalent hapten derivatives | |
| JPH01146891A (ja) | モノホスホリルリピドａの誘導体 | |
| US5623055A (en) | Phenylboronic acid complexes derived from aminosalicylic acid for bioconjugate preparation | |
| CN108047071B (zh) | 一种卡西酮人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用 | |
| US5440023A (en) | Method for making valproic acid derivatives | |
| JPS63203683A (ja) | ビオチニル化剤 | |
| US4798795A (en) | Biotinylating agents | |
| SU800877A1 (ru) | Способ получени конъюгированногоС бЕлКОМ АМиНАзиНА | |
| US4423227A (en) | Process for the preparation of reactive, couplable derivatives of the thyroid hormones | |
| CA2109636A1 (en) | Process for preparing immunoconjugates | |
| SU1123704A1 (ru) | Способ получени конъюгированных антигенов | |
| US4954637A (en) | Certain maleimide-N-alkylenecarboxylate-ortho-nitrobenzenesulfonic acid esters and derivatives useful for coupling biological materials | |
| US4360592A (en) | Process for the detection of antibodies | |
| US4954638A (en) | Leukotriene by amides and hydrazides | |
| SU792869A1 (ru) | Способ получени конъюгированных антигенов барбитурова кислота-иммуногенный носитель | |
| US4943636A (en) | Certain pyridyl-di-sulfide-alkylenecarbonxylate-ortho-nitro-phenylsulfonic acid esters useful for coupling biological materials | |
| EP0216162A2 (en) | A method of preparing indoles or indole derivatives, coupled via position 4, 5, 6, or 7, the indoles or indole derivatives concerned, as well as the use thereof |