JPH10506375A

JPH10506375A - カンプトセシン化合物の水溶性エステル

Info

Publication number: JPH10506375A
Application number: JP8505140A
Authority: JP
Inventors: イーウォール，モンロー; シーワニ，マンスク
Original assignee: Research Triangle Institute
Current assignee: Research Triangle Institute
Priority date: 1994-07-20
Filing date: 1995-07-20
Publication date: 1998-06-23
Also published as: US6040313A; AU3195395A; US5916896A; US5646159A; WO1996002546A1; AU705792B2; EP0815113A4; EP0815113A1

Abstract

(57)【要約】カンプトセシン誘導体の２０-位ヒドロキシル基のエステル化により無毒性のカンプトセシンプロドラッグが調製される。

Description

【発明の詳細な説明】カンプトセシン化合物の水溶性エステル（発明の分野）本発明は水溶性のカンプトセシン化合物に関する。特に、本発明はカンプトセシン化合物の２０位でヒドロキシル基をエステル化して無毒性の水溶性プロドラッグを形成することにより調製されるカンプトセシン化合物のエステルに関する。（背景となる議論）カンプトセシンは中国原産のカンプトセカ・アクミナータ（Camptotheca acum inata）木より単離される光学活性（２０Ｓ）アルカロイドである。天然に既存する化合物及びその誘導体は抗腫瘍活性を示す。カンプトセシンは以下に示される構造を有する縮合環系である。細胞毒性活性を向上させるため及び水溶性を向上させようと、Ａ環及び／またはＢ環を変性させるために多くの合成の試みが成されてきた。カンプトセシン及びカンプトセシン誘導体は、化学療法剤として用いることが可能な細胞毒性化合物である。カンプトセシン化合物の細胞毒性活性は、これら化合物のＤＮＡとＲＮＡの双方の合成を抑制し、哺乳類の細胞中でＤＮＡの可逆フラグメンテーシヨンを引き起こす能力によって生じると信じられている。カンプトセシン化合物は、超螺旋ＤＮＡを緩めることが知られている酵素ＤＮＡトポイソメラーゼIを抑制する。この弛緩は、等価のトポイソメラーゼI−ＤＮＡ錯体の形成におけるＤＮＡ鎖の一つの破損によって起こる。カンプトセシン誘導体は、“開裂可能錯体”と称される酵素ＤＮＡ中間体を可逆に捕捉することにより機能すると信じられている。シャン（Hsiang）ら、(1989)，Cancer Research，49: 4385-4389。シャンらによって開発された開裂可能な錯体の分析は、カンプトセシン化合物の細胞毒性活性を決定するための標準試験である。残念ながら、カンプトセシン及び多くのカンプトセシン化合物は水に不溶である。このように水に不溶であることのために、カンプトセシンの投与は困難である。水溶性のカンプトセシン誘導体が、Ａ及びＢ環を変性させ、またラクトンのＥ環を開裂することにより調製されている。例えば、米国特許４，９８１，９６８号、米国特許５，０４９，６６８号及び欧州特許０５４０，０９９号が参照される。米国特許４，９１４，２０５号には、ラクトンのＥ環が開裂し、変性してアミドを形成しているプロドラッグタイプのカンプトセシン化合物が記載されている。米国特許４，９４３，５７９号には２０位のヒドロキシル基がエステル化され、注射された後に加水分解してカンプトセシン親化合物を形成するようなカンプトセシンプロドラッグを形成しているカンプトセシン化合物が記載されている。高い抗腫瘍活性及び低い毒性を有する新規なカンプトセシン化合物の必要性は依然としてある。（発明の要旨）従って、本発明の目的の一つは、それ自体無毒性であり生体内投与の後加水分解によって再生成し、高い抗腫瘍活性をもつカンプトセシン化合物である。（好ましい実施態様の詳細な説明）本発明は、カンプトセシン化合物の２０位でのヒドロキシル基のエステル化により無毒性の水溶性プロドラッグが生成するという発見に基づく。このプロドラッグは、親カンプトセシン化合物自体が本質的により毒性であっても無毒性である。２０位でのエステルの加水分解により、投与後に親カンプトセシン化合物が再生成し、これによってカンプトセシン療法の間中に患者が経験する全毒物量が減少する。本発明のカンプトセシンエステルの毒性もしくは無毒性は、ネズミなどの、該エステル化合物を投与された実験動物の体重減少を監視することによって評価することができる。本発明のエステル化合物についてここに用いた“無毒性”は、Ｒ．Ｉ．ゲラン（R．I．Geran）、Ｎ．Ｈ．グリーンバーグ（N．H．Greenberg）、Ｍ．Ｍ．マクドナルド（M．M．MacDonald）、Ａ．Ｍ．シューマッハー（A．M ．Schumacher）及びＢ．Ｊ．アボット（B．J．Abbott）によるCancer Chemother apy Reports，Part 3，Vol．3，No．2，1972年9月で、毒性が、４．０以上の体重減少と定義されているプロトコル４、セクション４．３０１（ｂ）（３）において無毒性である化合物を意味する。米国特許４,９４３,５７９号には、カンプトセシンの２０位でのヒドロキシル基のエステル化がいくつかのプロドラッグを形成することが記載されている。この特許にはさらに、このプロドラッグが水溶性で、加水分解によって親カンプトセシン化合物に転化されることが記載されている。驚くべきことに、ここに、２０位でヒドロキシル基をエステル化することによって形成されるプロドラッグは、投与の後、エステル化された誘導体が加水分解されて親カンプトセシン化合物になるとしても、親カンプトセシン化合物の毒性とは逆に無毒性であることが発見された。米国特許４,９４３,５７９号には、２０位でヒドロキシル基をエステル化することによって形成されるプロドラッグが親化合物に対して無毒性であることは示唆されていない。米国特許４,９４３,５７９号に記載の化合物は、本発明の範囲には入らない。本発明の化合物は、カンプトセシン化合物の２０位のヒドロキシル基をエステル化することにより水溶性部分を含有するエステルを形成して調製される。通常はカンプトセシン化合物を、まず、塩化メチレンもしくは他の不活性溶媒中に懸濁させ、撹拌して冷却する。この冷却した混合物に、化学式ＨＯＯＣ-ＣＨＲ⁹- ＮＲ¹⁰Ｒ¹¹もしくはＨＯＯＣ-（ＣＨ₂）_m-ＮＲ¹⁰Ｒ¹¹においてｍが１〜６、好ましくは２〜６の整数、Ｒ⁹が天然に既存するα-アミノ酸の側鎖の一つである酸を１当量加える。Ｒ¹⁰及びＲ¹¹は、個別に水素もしくはＣ_1-8である。適切な側鎖Ｒ⁹には、アミノ酸グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、ロイシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパルタート、グルタマート、アスパラギン、グルタミン、システイン及びメチオニンの側鎖である。特に好ましいエステルは、グルシナートエステルである。ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）１当量とアミン塩基、好ましくは第２級もしくは第３級アミンの触媒量とを、該混合物にさらに加えた後、完全に反応するように撹拌する。あらゆる沈殿物を濾過によって除去し、溶媒を除去した後、生成物を単離する。遊離のアミンは、製薬用として許容される酸の添加により酸の付加塩に転化することができる。適切な酸には、無機酸及び有機酸のいずれもが含まれる。適切な付加塩には、塩酸塩、硫酸塩、二リン酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、酢酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、桂皮酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パルミトレイン酸塩（ palmoate）、サリチル酸塩及びステアリン酸塩があるが、これらに限定されるものではない。これらの塩は、適切な溶媒から結晶化させることにより精製することができる。カンプトセシン及びその誘導体は、２０位に不斉炭素を有し、そのため２つのエナンチオマー形態、すなわち、（Ｒ）及び（Ｓ）立体配置で存在している。本発明には、双方の鏡像異性体形態及びこれらの形態の全ての組み合わせが含まれ、（ＲＳ）と表現されるラセミ混合物も含まれる。利用可能なヒドロキシル基を有するあらゆるカンプトセシン化合物が、本発明のエステル化合物の調製に使用可能である。適切なカンプトセシン化合物は、例えば、米国特許４,８９４,４５６号、米国特許４,９８１,９６８号、米国特許５ ,０５３,５１２号、米国特許５,０４９,６６８号、米国特許５,１０６,７４２号、米国特許５,１８０,７２２号、米国特許５,２４４,９０３号、米国特許５,２２７,３８０号、米国特許５,１２２,６０６号、米国特許５,１２２,５２６号、米国特許５,２２５,４０４号、米国特許４,９１４,２０５号、米国特許４,５４５,８８０号、米国特許４,６０４,４６３号、米国特許４,４７３,６９２号、米国特許４,０３１,０９８号、,欧州特許０２２０６０１号、欧州特許００７４２５６号及び米国特許出願連番０７／７８４,２７５及び０７／８２６,７２９（欧州特許０５４００９９号）に記載されている。これらの米国特許出願及び米国特許を、本発明のエステルを調製するために使用可能なカンプトセシン化合物の説明をより完全にするために、ここに参考として取り込む。本発明の方法において使用される、好ましいヒドロキシル基含有のカンプトセシン化合物は、Ａ環が９-,１０-もしくは９-及び１０，１１-位で置換されているカンプトセシン誘導体である。適切な化合物は、以下に示す構造を有する。上記の構造において、ＲはＮＯ₂、ＮＨ₂、Ｎ₃、水素、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ＣＯＯＨ、ＯＨ、Ｏ-Ｃ_1-3アルキル、ＳＨ、Ｓ-Ｃ_1-3アルキル、ＣＮ、ＣＨ₂ＮＨ₂、ＮＨ-Ｃ_1-3アルキル、ＣＨ₂-ＮＨ-Ｃ_1-3アルキル、Ｎ（Ｃ_1-3 アルキル）₂、ＣＨ₂Ｎ（Ｃ_1-3アルキル）₂、Ｏ-、ＮＨ-及びＳ-ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ）₂、Ｏ-、ＮＨ-及びＳ-ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ）₂ 、Ｏ-、ＮＨ-及びＳ-ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ）₂、Ｏ-、ＮＨ-及びＳ-ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ）₂、Ｏ-、ＮＨ-及びＳ-ＣＨ₂ＣＨ₂ Ｎ（Ｃ_1-3アルキル）₂、Ｏ-、ＮＨ-及びＳ-ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（Ｃ_1-3アルキル）₂、ＣＨＯもしくはＣ_1-3アルキルである。好ましい化合物はＲがハロゲン、ニトロまたはアミノであるものである。上記の構造において、Ｚ¹はＨ、Ｃ_1-8アルキル、もしくはＣＨ₂ＮＲ¹Ｒ²において（ａ）Ｒ¹及びＲ²が個別に水素、Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル、Ｃ_3-7 シクロアルキル-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_2-6アルケニル、ヒドロキシ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ-Ｃ_1-6アルキル、（ｂ）Ｒ¹が水素、Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_3-7 シクロアルキル、Ｃ_3ー7シクロアルキル-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_2-6アルケニル、ヒドロキシ-Ｃ_1-6アルキルもしくはＣ_1-6アルコキシ-Ｃ_1-6アルキルであり、Ｒ²が- ＣＯＲ³においてＲ³が水素、Ｃ_1-6アルキル、ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_2-6アルケニル、ヒドロキシ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルコキシ-Ｃ_1-6アルキル、もしくは（ｃ）Ｒ¹及びＲ²はその結合する窒素と共に、Ｏ、ＳもしくはＮＲ⁴基を含有可能な３員から７員の飽和複素環を形成し、このＲ⁴は水素、Ｃ_1-6アルキル、ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、アリール、以下の、Ｃ_1-6アルキル、ハロゲン、ニトロ、アミノ、Ｃ_1-6アルキルアミノ、ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、ヒドロキシ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルコキシ-Ｃ_1-6アルキル及び-ＣＯＲ⁵においてＲ⁵が水素、Ｃ_1-6アルキル=ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、アリール、及び一以上のＣ_1-6アルキル、ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、ヒドロキシ-Ｃ_1- ₆ アルキル、もしくはＣ_1-6アルコキシ-Ｃ_1-6アルキル基で置換されたアリールからなる群より選択される一以上の置換基により置換されたアリールである。上記の構造中、ｎは１または２の整数である。好ましいアリール基は、フェニル及びナフチル基である。本発明に使用可能な別の好ましいヒドロキシル基含有カンプトセシンは、下記の構造を有する。この構造において、Ｒ⁶はシアノ、ホルミル、ヒドロキシ、Ｃ_1-8アルコキシ、ニトロ、アミノ、ハロゲン、トリフルオロメチル、アミノメチル、アジゾ、アミド、ヒドラジノ、ＯＣ（Ｏ）Ｒ⁷もしくはＯＣ（Ｏ）ＮＲ⁷Ｒ⁸においてＲ⁷及びＲ⁸ が個別に水素もしくはＣ_1-8アルキルであり、Ｚ¹は既に述べたとおりである。これら好ましい化合物の調製は、米国特許４,８９４,４５６号、米国特許５, １８０,７２２号及び欧州特許０５４０,０９９号に記載されている。本発明のカンプトセシンエステルのＥ環は、下記においてｍ、Ｒ⁹、Ｒ¹⁰、Ｒ¹ ¹ が既に述べた定義を有する構造の一つを有する。生体内における環外エステル結合の加水分解により、ヒドロキシル基含有の親カンプトセシン化合物が再生成する。本発明のカンプトセシンプロドラッグ化合物は、生体内での加水分解の後に酵素トポイソメラーゼIを抑制するのに効果的な投与量で投与される。これらの効果的な量とは、通常、１週間に体重１kgあたり１〜８０mg、好ましくは１週間に体重１kgあたり２〜４０mgである。本発明のプロドラッグ化合物は、本質的に親化合物よりも毒性が少ないので、本発明の化合物は対応する親化合物よりもずっと多量の投与量で投与することができる。いかなる科学的理論にもよらないが、本化合物の毒性が低いことはカンプトセシン化合物の２０位でのヒドロキシル基のエステル化によるものと信じられている。ヒドロキシル基のエステル化によってヒドロキシル基の水素とラクトンＥ環のカルボニルとの水素結合が回避されると考えられるが、この水素結合は抗白血病及び抗腫瘍活性に必要であると信じられている。いかなる場合においても、カンプトセシン及び類似体が抗白血病及び抗腫瘍剤として活性であるためには、２０α-ヒドロキシルが非変性形態で存在することが必要である。従って、ＣＰＴ-２０α-アセタートは、２０-デスオキシ-ＣＰＴであるので不活性である（モンロー・Ｅ・ウォール（Honroe E．Wall ）によるPlant Antitumor Agents．V．Alkaloids with Antitumor Activity，Sy mpoiumsberichtes，77-87頁，4．Internationales Symposium，Biochemie and P hysiologie der Alkaloide，Halle(Saale)25，bis 28．1969年、6月、Ｋ・モーゼス（K．Hothes）、Ｋ・シュライバー（K.Schreiber）及びＨ・Ｒ・シュッテ（ H．R．schutte）編、Akademie-Verlag，Berlin，1969年）。２０位でのエステル基の遅い加水分解によって遊離のヒドロキシル基が得られることにより、エステルプロドラッグの投与後、遅い、制御された親化合物の形成が起こる。親化合物の遅く形成されることは、相当する量の親化合物が最初に投与されるよりも毒性が少ない。すなわち、本発明によれば、対応する親カンプトセシン化合物としてよりも、プロドラッグとしての方が、ずっと多量のカンプトセシン化合物を投与することができる。例えば、体重１kgあたり２〜４mgの腹腔内から投与された１０，１１-メチレンジオキシ-２０（ＲＳ）-カンプトセシンは、表IIに示したように体重１kgあたり８．０mgの毒物量を有する。対照的に、この化合物の２０-グリシニルエステルは、体重１kgあたり２０mgで投与された場合でさえも無毒性である。本発明によれば、親化合物自体よりも、（加水分解されて親化合物になる）エステルを、１０倍多量に投与することができる。本化合物のこの特性は、カンプトセシン療法の間の化合物の毒性を減少させるために驚くほど好適である。さらに、ＣＰＴ及び類似体のラクトン環は、生理学的ｐＨ７．２で生理学的に不活性な開裂形態に開裂する（トーマス・Ｇ・バーク（Thomas G．Burke）、アヴアデシュ・Ｋ・ミシュラ（Awadesh K．Hishra）、マンスク・Ｃ・ヴァニ（Man sukh C．Wani）及びモンロー・Ｅ・ウォールによるLipid Bilayer Partitioning and Stability of Camptithecin Drugs，Biochem.，32(20)，5352(1993)）。本発明の化合物において２０-エステル基の存在によってラクトン環の加水分解が妨げられているために、血液等の体液中のラクトン形態の濃度は保たれる。この効果のため、ラクトン環の加水分解を妨げることによって動物中の活性ラクトン化合物の寿命が延びる。本発明の化合物は、カンプトセシン化合物及び製薬用として許容される担体もしくは希釈剤を含有する製薬組成物として投与することができる。活性物質はまた、望ましい活性を損なうことのない及び／または望ましい活性を補う他の活性物質と混合することも可能である。本発明の活性物質は、あらゆる経路、例えば経口、非経口、静脈内、皮膚内、皮下もしくは局所から、液体もしくは固体の形態で投与することが可能である。非経口の治療用投与の目的のためには、活性成分を溶液もしくは懸濁液に混合することができる。この溶液もしくは懸濁液はまた、以下の成分を含有することができる：水等の注射用に殺菌した希釈剤、食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロビレングリコールもしくは他の合成溶媒；ベンジルアルコールもしくはメチルパラベン等の抗生物質；アスコルビン酸もしくは二硫酸ナトリウム等の抗酸化剤；エチレンジアミンテトラ酢酸等のキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩もしくはリン酸塩等の緩衝剤及び塩化ナトリウムもしくはデキストロース等の張度を調整するための薬剤。非経口用の調剤は、アンプル、使い捨てシリンジもしくはガラスまたはプラスチック製のマルチ投与薬瓶（multiple dose vials）に封入可能である。本発明の化合物の投与の別の方法は、経日である。経口用の組成物は、通常、不活性な希釈剤もしくは食用の媒体を含有する。これらは、ゼラチンカプセルに封入するか、錠剤中に圧縮することができる。経日の治療用投与の目的のためには、既出の化合物を賦形剤と混合し、錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、ウェファー、チューイングガム等の形態で用いることが可能である。錠剤、ピル、カプセル等は、以下の成分を含有してもよく：微晶セルロース、ガム・トラガカンスもしくはゼラチン等の結合剤；デンプンもしくはラクトース等の賦形剤、アルギン酸、プリモゲル（Primogel）、コーンスターチ等の分解剤；ステアリン酸マグネシウムもしくはステローツ（Sterotes）等の潤滑剤；コロイドシリコーンジオキシド等のグライダント（glidant）；及び蔗糖もしくはサッカリン等の甘味料もしくはペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ風味剤等の香味料を加えることができる。投薬単位形態がカプセルである場合には、上記のタイプの材料に加えて脂肪オイルなどの液状担体をさらに含有することができる。他の投薬単位形態では、例えばコーティング等の投薬単位の物理的形態を修正する他の様々な材料を含有することができる。従って、錠剤もしくはピルは、砂糖、シェラック、もしくは他の腸用コーティング剤で被覆することができる。シロップは、活性化合物に加えて甘味料として蔗糖を、また、所定の保存料、染料及び着色料及び香味料を含有することができる。これら様々な組成物の調製に用いられる物質は、製薬用としてもしくは家畜用として純粋で、使用される量で無毒性でなければならない。本発明の水溶性の２０-ヒドロキシルエステルは、本質的に、このエステルを調製する元の親化合物よりも毒性が少ない。２つのカンプトセシン化合物、すなわち、９-アミノ-（２０ＲＳ）-ＣＲＴ及び１０,１１-ＭＤＯ-（２０ＲＳ）-ＣＲＴ並びに、対応するこれら化合物の２０-グリシニルエステルのトポイソメラーゼ抑制活性を、下記の表Iに示す。表Iに示した結果により、開裂可能な錯体検定による測定では、親化合物はトポイソメラーゼIの抑制において対応するエステルよりもかなり活性であることが示される。親化合物に対して、エステルは表IIに示されるようにずっと毒性が低い。本発明のエステル化合物は、トポイソメラーゼIの抑制に活性であるが、表II に示されるように、広範囲に渡る活性な投与量で無毒性である。従って、本発明の化合物であれば、親化合物の毒性を回避すると共に、その無毒性のエステルプロドラッグとして、活性なカンプトセシン化合物をより多量に投与することができる。いかなる特定の理論にもよらないが、エステルプロドラッグは、細胞組織、特に血液細胞への損害を限定する親カンプトセシン化合物にゆっくりと加水分解されると信じられている。本発明の化合物の無毒性は、従来のカンプトセシン化合物からの、重量な進歩である。本発明のエステル化合物は、ヒトを含む哺乳類中で、白血病、固形腫瘍の治療のために投与することができる。本発明のエステルは、加水分解して、トポイソメラーゼIに抑制活性を示すカンプトセシン化合物になるプロドラッグである。本発明のエステルの加水分解により形成されるカンプトセシン化合物はまた、哺乳類における白血病及び固形腫瘍の治療に効果的である。多くのカンプトセシン化合物が、標準Ｌ１２１０白血病検定（ウォール（Wall）ら、（1993），Journa l of Medicinal Chemistry，36:2689-2700）を用いて白血病に効果的であることが示されている。カンプトセシン及びカンプトセシン類似体の活性が高いこともまた、Ｐ３８８白血病検定（ウォールによる、（1993），Medical and Pediatri c Oncology，11:480A-489A）に示されている。後者の文献にはまた、Ｌ１２１０により決定される抗白血病活性と、固形腫瘍に対するカンプトセシン化合物の効用についてのＰ３８８白血病検定との相関関係が与えられている。白血病検定において活性であると報告されている化合物はまた、結腸異種移植、肺異種移植、ウオーカー肉腫及び胸部異種移植を含む多数の固形腫瘍において活性を示している（ウォール（1983）、表IV、484頁A）。最近の研究ではトポイソメラーゼI抑制活性と、カンプトセシン化合物の抗白血病／抗腫瘍活性との相関関係が確認されている（ジオバメラ（Giovanella）ら、（1989），Science，246： 1046-1048 ）。本発明の化合物は特に、結腸、肺及び胸部固形腫瘍の治療に効果的である。本発明の他の特徴は、本発明を詳細に説明するためであってこれを限定するためのものではない、以下の例として挙げた実施態様の記載によって明らかになるであろう。（実施例）実施例１：９-アミノ-２０-グリシニル-（２０ＲＳ）-ＣＰＴ・ＨＣｌ攪拌して透明黄色溶液とした、９-ニトロ-（２０ＲＳ）-ＣＲＴ（７８．６mg 、０．２００mmol）、ｔ-ＢＯＣ-グリシン（７５mg、０．４００mmol）及び４- （Ｎ，Ｎ-ジメチルアミノ）-ピリジン（ＤＭＡＰ、１２mg）のジメチル=ホルムアミド溶液を、窒素雰囲気下、常温にてＤＣＣ（８４mg、０．４００mmol）で処理した。１．５時間の過程の後、反応物は茶−緑に懸濁（hazy）した。ＤＭＦを減圧下で除去し、ＣＨＣｌ₃を溶離剤とするクロマトグラフィーによって残基を精製した。粗製の生成物は、黄色固体として単離され、ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ₃から再結晶してニトログリセリンエステルの暗黄色固体が得られた。ニトロ化合物を、Ｈ₂１気圧下、無水エタノール（１２ml）中で１０％Ｐｄ／Ｃ（１２mg）と１時間撹拌した。この混合物を濾過して触媒を除去し、ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ₃（１：１、３×５ml）で洗った。濾液を減圧下で蒸発させ、該当するアミンが明橙黄色固体として得られた（１８mg）。メタノールから再結晶し、純粋化合物が暗橙黄色固体として得られた（１３mg）。ｔ-ＢＯＣ-保護エステルを塩化メチレン（３ml）に溶解し、攪拌して得られた明黄色溶液を一滴ずつＨＣｌ飽和ダイオキサン（４ml）で処理した。当初の発泡が迅速に静まり、１時間後に減圧下で溶媒を蒸留し、標的化合物を灰茶色固体として得た。この物質は水（４ml）中に溶解し、得られた深燈黄色溶液を濾過し（０．４５μm膜）、凍結乾燥して綿毛状の渋茶色固体が得られた（１７mg）。実施例２：１０-アミノ-２０-グリシニル-（２０ＲＳ）-ＣＰＴ−ＨＣｌ窒素雰囲気下で塩化メチレン（１ml）及びＤＭＦ（１０ml）中で攪拌し、溶液とした１０-ニトロ-（２０ＲＳ）-ＣＲＴ（５０mg、０．１２７mmol）、ｔ-ＢＯＣ-グリシン（５０mg、０．２８６mmol）及びＤＭＡＰ（１０mg）を室温にてＤＣＣ（７０mg、０．３４０mmol）で処理した。２時間後、反応物は混濁した茶− 緑となった。この混合物を減圧下で濃縮し、ＣＨＣｌ₃に溶解し、カラムクロマログラフィー（ＳｉＯ₂、１０ｇ、ＣＨＣｌ₃）により精製した。ニトロ化合物を単離し、ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３から再結晶して暗黄色固体が得られた。ニトロ化合物（２０mg）を超音波処理によって無水エタノール（１５ml）に溶解した。懸濁した黄色溶液を、１０％Ｐｄ／Ｃの存在下で一気圧の水素で１時間処理した。得られた真珠光沢をもつ明緑色混合物を濾過し、濾紙をＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ₃で洗った。溶媒を蒸発させることにより燈黄色固体が得られた（１８mg ）。ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ₃から再結晶することにより該当するアミノ化合物が微細な燈色粉末として得られた。アミノ化合物を塩化メチレン（８ml）に混入し、ＭｅＯＨ（１ml）を添加することにより済んだ溶液とし、０℃に冷却してＨＣｌ飽和ダイオキサン（４ml）で３分間処理した。室温まで加温し、２時間おいた後、減圧下で溶媒を蒸発させた。得られたオレンジ色の固体を水（３ml）に溶解し、明るいオレンジ色の溶液が得られた。濾過（０．４５μm膜）の後、溶液を凍結し、凍結乾燥して表題化合物が綿毛状の燈色固体として得られた（１８mg）。実施例３：１０，１１-ＭＤＯ-２０-Ｏ-グリシニル-（２０ＲＳ）-ＣＲＴ・ＨＣｌ攪拌して懸濁混合物とした１０，１１-ＭＤＯ-（２０ＲＳ）-ＣＲＴ（４２５m g、１．０８４mmol）及び乾燥塩化メチレン（５００ml）に、ｔ-ＢＯＣ-グリシン（４７５mg、２．７１４mmol）及びＤＭＰ（１２５mg）を加えた。この混合物を０℃に冷却し、ＤＣＣ（６００mg、２．９１３mmol）で処理した後、室温になるまで静置した。２０時間後、反応混合物を５０mlに濃縮し、濾過した。２０ml に濃縮し、再度濾過した後、反応混合物をカラムタロマトグラフィー（ＳｉＯ₂ 、４０g、ＣＨＣｌ₃）で精製した。溶媒を蒸発させることによりオフホワイトの固体（１８５mg）が得られた。メタノール／塩化メチレンからの再結晶により、アミンエステルが白色固体として得られた。このエステル（５７mg）を塩化メチレン（１５ml）に攪拌して溶解させ、この溶液を０℃に冷却した。ＨＣｌ飽和ダイオキサン（８ml）の溶液を３分間かけて滴々と加え、黄色懸濁溶液が得られた。この混合物を室温に加温し、１．５時間後に溶媒を蒸発させて粗製の生成物を得た。この物質を塩化メチレンと共に粉砕し、未反応のアミンエステルを除去した。残った固体を水（２０ml）に溶解し、懸濁青黄色溶液を濾過し（０．４５μm膜）、半透明黄青色の濾液を冷凍し凍結乾燥させて表題化合物が明黄色の綿毛状固体として得られた。上記の教示を考慮すれば明らかに、本発明の数多くの変更及び変化が可能である。従って、本発明は特にここに記載された以外にも、添付の請求項の範囲内で実施可能であると理解される。

Claims

【特許請求の範囲】１．カンプトセシン化合物のＥ環の２０位のヒドロキシル基をエステル化し、Ｅ環が以下の化学式を有するカンプトセシン化合物を形成することからなるカンプトセシン化合物の毒性を減少させる方法。［上記式中、ｍ＝１〜６、Ｒ⁹は天然のα-アミノ酸の一つの側鎖、Ｒ¹⁰及びＲ¹¹ は、個別に水素もしくはＣ1-8アルキルであり、ただし、カンプトセシン化合物は、天然のアミノ酸に見られるようなカンプトセシン、または、そのＡ環上にアルキル基または置換アルキル基を備えているカンプトセシン以外のものである。］２．カンプトセシン化合物が下記に示される構造を有する請求項１に記載の方法。［上記式中、ＲはＮＯ₂、ＮＨ₂、Ｎ₃、水素、ハロゲン、ＣＯＯＨ、ＯＨ、Ｏ-Ｃ_1-3 アルキル、ＳＨ、Ｓ-Ｃ_1-3アルキル、ＣＮ、ＣＨ₂ＮＨ₂、ＮＨ-Ｃ_1-3アルキル、ＣＨ₂-ＮＨ-Ｃ_1-3アルキル、Ｎ（Ｃ_1-3アルキル）₂、ＣＨ₂Ｎ（Ｃ_1-3アルキル）₂、Ｏ-、ＮＨ-及びＳ-ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ）₂、Ｏ-、ＮＨ-及びＳ-ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ）₂、Ｏ-、ＮＨ-及びＳ-ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ）₂、Ｏ-、ＮＨ-及びＳ-ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ）₂、Ｏ-、ＮＨ-及びＳ-ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（Ｃ、_1-3アルキル）₂、〇-、ＮＨ -及びＳ -ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（Ｃ_1-3アルキル）₂、ＣＨＯもしくはＣ_1-3アルキル；上記式中、Ｚ¹はＨ、Ｃ_1-8アルキル、もしくはＣＨ₂ＮＲ¹Ｒ²において（ａ）Ｒ¹ 及びＲ²が個別に水素、Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_2-6アルケニル、ヒドロキシ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ-Ｃ_1-6アルキル、（ｂ）Ｒ¹が水素、Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_2-6アルケニル、ヒドロキシ-Ｃ_1-6 アルキルもしくはＣ_1-6アルコキシ-Ｃ_1-6アルキルであり、Ｒ²が-ＣＯＲ³においてＲ³が水素、Ｃ_1-6アルキル、ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_2-6アルケニル、ヒドロキシ-Ｃ_l-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルコキシ-Ｃ_1-6アルキル、もしくは（ｃ）Ｒ¹ 及びＲ²はその結合する窒素と共に、Ｏ、ＳもしくはＮＲ⁴基を含有可能な３員から７員の飽和複素環を形成し、このＲ⁴は水素、Ｃ_1-6アルキル、ペルハロ-Ｃ₁ _-6 アルキル、アリール、以下の、Ｃ_1-6アルキル、ハロゲン、ニトロ、アミノ、Ｃ_1-6アルキルアミノ、ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、ヒドロキシ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルコキシ-Ｃ_1-6アルキル及び-ＣＯＲ⁵においてＲ⁵が水素、Ｃ_1-6アルキル=ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、アリール、及び一以上のＣ_1-6アルキル、ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、ヒドロキシ-Ｃ_1-6アルキル、もしくはＣ_1-6アルコキシ-Ｃ_1-6アルキル基で置換されたアリールからなる群より選択される−以上の置換基により置換されたアリールである；ｎは１または２の整数；及び、その製薬用として許容される塩である。］３．前記カンプトセシン化合物が以下に示される構造を有する請求項１に記載の方法。［上記式中、Ｒ⁶はシアノ、ホルミル、ヒドロキシ、Ｃ_1-8アルコキシ、ニトロ、アミノ、ハロゲン、トリフルオロメチル、アミノメチル、アジゾ、アミド、ヒドラジノ、ＯＣ（Ｏ）Ｒ⁷もしくはＯＣ（Ｏ）ＮＲ⁷Ｒ⁸においてＲ⁷及びＲ⁸が個別に水素もしくはＣ_1-8アルキルである；また、Ｚ¹はＨ、Ｃ_1-8アルキル、もしくはＣＨ₂ＮＲ¹Ｒ²において、（ａ）Ｒ¹及びＲ² が個別に水素、Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル- Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_2-6アルケニル、ヒドロキシ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ-Ｃ_1-6アルキル、（ｂ）Ｒ1が水素、Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_2-6アルケニル、ヒドロキシ-Ｃ_1-6アルキルもしくはＣ_1-6アルコキシ-Ｃ_1-6アルキルであり、Ｒ²が-ＣＯＲ³においてＲ³ が水素、Ｃ_1-6アルキル、ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル、Ｃ₃ _-7 シクロアルキル-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_2-6アルケニル、ヒドロキシ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルコキシ-Ｃ^1-6アルキル、もしくは（ｃ）Ｒ¹及びＲ²はその結合する窒素と共に、Ｏ、ＳもしくはＮＲ⁴基を含有可能な３員から７員の飽和複素環を形成し、このＲ⁴は水素、Ｃ_1-6アルキル、ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、アリール、以下の、Ｃ_1-6アルキル、ハロゲン、ニトロ、アミノ、Ｃ_1-6 アルキルアミノ、ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、ヒドロキシ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6 アルコキシ、Ｃ_1-6アルコキシ-Ｃ_1-6アルキル及び-ＣＯＲ⁵においてＲ⁵が水素、Ｃ_1-6アルキル=ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、アリール、及び一以上のＣ_1-6アルキル、ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、ヒドロキシ-Ｃ_1-6アルキル、もしくはＣ_1-6アルコキシ-Ｃ_1-6アルキル基で置換されたアリールからなる群より選択される一以上の置換基により置換されたアリールである。］４．前記カンアトセシン化合物が、９-アミノ-１０，１１-メチレンジオキシ- ２０（Ｓ）-カンプトセシン、９-クロロ-１０，１１-メチレンジオキシ-２０（Ｓ）-カンプトセシン、１０，１１-メチレンジオキシ-２０（Ｓ）-カンプトセシン、９-クロロ-２０（Ｓ）-カンプトセシン、７-メチル-１０，１１-メチレンジオキシ-２０（Ｓ）-カンプトセシン、７-エチル-１０，１１-メチレンジオキシ- ２０（Ｓ）-カンアトセシン、７-クロロメチル-１０，１１-メチレンジオキシ- ２０（Ｓ）-カンプトセシン、９-アミノ-２０（Ｓ）-カンプトセシン、１０-アミノ-２０（Ｓ）-カンプトセシン、及び１０-クロロ-２０（Ｓ）-カンプトセシンからなる群より選択される請求項１に記載の方法。５．下記の構造を有するカンプトセシンエステル。またはまたはまたは［上記式中、ＲはＮＯ₂、ＮＨ₂、Ｎ₃、水素、ハロゲン、ＣＯＯＨ、ＯＨ、Ｏ-Ｃ_1-3 アルキル、ＳＨ、Ｓ-Ｃ_1-3アルキル、ＣＮ、ＣＨ₂ＮＨ₂、ＮＨ-Ｃ_1-3アルキル、ＣＨ₂-ＮＨ-Ｃ_1-3アルキル、Ｎ（Ｃ_1-3アルキル）₂、ＣＨ₂Ｎ（Ｃ_1-3アルキル）₂、Ｏ-、ＮＨ-及びＳ-ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ）₂、Ｏ-、ＮＨ-及びＳ-ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ）₂、Ｏ-、ＮＨ-及びＳ-ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ）₂、Ｏ-、ＮＨ-及びＳ-ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ）₂、Ｏ-、ＮＨ-及びＳ-ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（Ｃ_1-3アルキル）₂、Ｏ-、ＮＨ- 及びＳ-ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（Ｃ_1-3アルキル）₂、ＣＨＯもしくはＣ_1-3アルキル；Ｚ¹はＨ、Ｃ_1-8アルキル、もしくはＣＨ₂ＮＲ¹Ｒ²において、（ａ）Ｒ¹及びＲ² が個別に水素、Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル-Ｃ_1-6 アルキル、Ｃ_2-6アルケニル、ヒドロキシ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ- Ｃ_1-6アルキル、（ｂ）Ｒ¹が水素、Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル、Ｃ_3- ₇ シクロアルキル-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_2-6アルケニル、ヒドロキシ-Ｃ_1-6アルキルもしくはＣ_1-6アルコキシ-Ｃ_1-6アルキルであり、Ｒ²が-ＣＯＲ³においてＲ³が水素、Ｃ_1-6アルキル、ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル、Ｃ_3-7 シクロアルキル-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_2-6アルケニル、ヒドロキシ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルコキシ-Ｃ_1-6アルキル、もしくは（ｃ）Ｒ¹及びＲ²はその結合する窒素と共に、Ｏ、ＳもしくはＮＲ⁴基を含有可能な３員から７員の飽和複素環を形成し、このＲ⁴は水素、Ｃ_1-6アルキル、ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、アリール、以下の、Ｃ_1-6アルキル、ハロゲン、ニトロ、アミノ、Ｃ_1-6アルキルアミノ、ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、ヒドロキシ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルコキシ-Ｃ_1-6アルキル及び-ＣＯＲ⁵においてＲ⁵が水素、Ｃ_1-6 アルキル=ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、アリール、及び一以上のＣ_1-6アルキル、ペルハロ-Ｃ_1-6アルキル、ヒドロキシ-Ｃ_1-6アルキル、もしくはＣ_1-6アルコキシ-Ｃ_1-6アルキル基で置換されたアリールからなる群より選択される一以上の置換基により置換されたアリールである。Ｒ⁶はシアノ、ホルミル、ヒドロキシ、Ｃ_1-8アルコキシ、ニトロ、アミノ、ハロゲン、トリフルオロメチル、アミノメチル、アジゾ、アミド、ヒドラジゾ、ＯＣ（Ｏ）Ｒ⁷もしくはＯＣ（Ｏ）ＮＲ⁷Ｒ⁸においてＲ⁷及びＲ⁸が個別に水素もしくはＣ_1-8アルキルである；ｍは１から６の整数であり；ｎは１または２の整数であり；その製薬用として許容される塩である。］６．請求項５のカンプトセシンエステル及び製薬用として許容される媒体もしくは希釈剤を含有することを特徴とする製薬組成物。７．請求項５のカンプトセシンエステルを、トポイソメラーゼIを抑制するに充分な量で哺乳類に投与することによって哺乳類中でカンプトセシン化合物を抑制するトポイソメラーゼIを形成する方法。８．カンプトセシンエステルを、週に体重１kgあたり１〜８０mg投与することからなる請求項７の方法。９．前記投与が経口もしくは非経口投与である請求項７の方法。１０．前記腫瘍を治療するために、前記哺乳類に効果的な量で請求項５のカンプトセシンエステルの投与を行うことからなる哺乳類白血病もしくは固形腫瘍の治療法。１１．カンプトセシンエステルを、週に体重１kgあたり１〜８０mg投与することからなる請求項１０の方法。１２．前記投与が経口もしくは非経口投与である請求項１０の方法。１３．前記の方法が、結腸、肺もしくは胸部の固形腫瘍の治療法である請求項１０の方法。１４．カンプトセシン化合物のＥ環の２０位にてヒドロキシル基をエステル化してカンプトセシン化合物を形成することからなり、該Ｅ環が下記の化学式のものである、哺乳類中でカンプトセシン化合物の生体内での全身的寿命を伸ばす方法。［上記式中、ｍ＝１〜６、Ｒ⁹は天然のα-アミノ酸の一つの側鎖、Ｒ¹⁰及びＲ¹¹ は、個別に水素もしくはＣ1-8アルキルであり、ただし、カンプトセシン化合物は、天然のアミノ酸に見られるようなカンプトセシン、または、そのＡ環上にアルキル基または置換アルキル基を備えているカンプトセシン以外のものである。］