TWI426905B - 用於乳癌、大腸直腸癌、胰臟癌、卵巢癌及肺癌之治療的７-乙基-１０羥喜樹鹼之多臂聚合性共軛物 - Google Patents

用於乳癌、大腸直腸癌、胰臟癌、卵巢癌及肺癌之治療的７-乙基-１０羥喜樹鹼之多臂聚合性共軛物 Download PDF

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Description

用於乳癌、大腸直腸癌、胰臟癌、卵巢癌及肺癌之治療的7－乙基－10羥喜樹鹼之多臂聚合性共軛物 相關申請案之交互參照
本申請案主張美國臨時專利申請案序號60/772,464(申請日2006年2月9日)、60/804,391(申請日2006年6月9日)、60/844,938(申請日2006年9月15日)及60/864,516(申請日2006年11月6日)的優先權利益，其完整內容以引用方式納入本文中。
本發明是有關於7－乙基－10－羥喜樹鹼共軛物的多臂聚合性前藥。特別地，本發明是有關於7－乙基－10－羥喜樹鹼的4臂聚乙二醇共軛物及其用途。
在數年的期間，許多將生物有效性物質投予哺乳動物的方法已被提出。當所要的醫藥作用劑在水溶液中是不溶時，問題就會產生。生物鹼通常是特別難以溶解的。
喜樹鹼是一種由原產於中國的喜樹(Camptotheca accuminata )及原產於印度的青脆枝(Nothapodytes foetida )所製造的水不溶性細胞毒性生物鹼。喜樹鹼及相關的類似物已知是有潛力的抗癌作用劑，並且已顯示試管內及活體內的治療活性。
喜樹鹼以及類似物已知是DNA拓普異構酶I抑制劑。例如，一種喜樹鹼類似物是愛萊諾迪肯(Irinotecan；CPT－11，Camptosar)，其也是DNA拓普異構酶I抑制劑，並且也已顯示抗癌活性。7－乙基－10－羥喜樹鹼是CPT－11的一種活性代謝物。
為了克服上述問題並且改善經由聚乙二醇化的藥物傳遞之技術，本發明提供經由適當連接子而直接使用多臂聚乙二醇以共軛到藥物分子的新方法。在這個方法中，不需要將費力的分支分子部分併入到聚乙二醇中。此外，藥物分子彼此之間是相當遠的。因此，與聚乙二醇的共軛效率是大幅地增加。聚乙二醇共軛物的溶解度相較於末端分支方法也是改善的。
本發明的一種形態係提供式(I)化合物： 其中R1 、R2 、R3 及R4 獨立地是OH或(L)m －D；L是雙功能性的連接子；D是喜樹鹼或喜樹鹼類似物的殘基，例如： m是0或正整數；以及n是正整數；限制條件為R1 、R2 、R3 及R4 不全是OH。
在本發明的這個形態中，喜樹鹼或喜樹鹼類似物是與聚合物反應，使其20－OH基團形成具有4臂聚合物的共軛物。
在本發明的較佳形態中，L是胺基酸殘基。在本發明的特定較佳形態中，n是從約28至約341，以及較佳是約227。
本發明也提供製造共軛物的方法以及利用本發明的化合物之治療方法。
從以下的說明及圖示中，優點將是顯而易見的。
為了本發明之目的，名詞“殘基”應理解為是指所提到的化合物(也就是，喜樹鹼類似物、7－乙基－10－羥喜樹鹼、胺基酸等)之部分，其在與另一化合物經歷取代反應之後其仍然繼續存在。
為了本發明之目的，名詞“包含聚合物的殘基”或“聚乙二醇殘基”應個別理解為是指聚合物或聚乙二醇的部分，在經歷與包含喜樹鹼或喜樹鹼類似物的化合物反應之後其仍然繼續存在。
為了本發明之目的，名詞“烷基”應理解為包括直鏈、支鏈、取代(例如，鹵－、烷氧基－、硝基－)的C1－12 ，但較佳是C1－4 烷基、C3－8 環烷基或經取代的環烷基等。
為了本發明之目的，名詞“經取代的”應理解為包括以一個或多個不同的原子加入或取代一個或多個包含在官能基或化合物內的原子。
為了本發明之目的，經取代的烷基包括羧烷基、胺烷基、二烷胺基、羥烷基及巰烷基；經取代的烯基包括羧烯基、胺烯基、二烯胺基、羥烯基及巰烯基；經取代的炔基包括羧炔基、胺炔基、二炔胺基、羥炔基及巰炔基；經取代的環烷基包括例如4－氯環己基的分子部分；芳基包括例如萘基的分子部分；經取代的芳基包括例如3－溴苯基的分子部分；芳烷基包括例如甲苯基的分子部分；雜烷基包括例如乙基噻吩的分子部分；經取代的雜烷基包括例如3－甲氧基－噻吩的分子部分；烷氧基包括例如甲氧基的分子部分；以及苯氧基包括例如3－硝基苯氧基的分子部分。鹵應理解為包括氟、氯、碘及溴。
為了本發明之目的，名詞“有效量”及“足夠量”應指可達到所要效果或治療效果的量，就效果本身而論是由一般熟悉於此技藝者所理解。
在本發明的一個具體實例中係提供式(I)化合物： 其中R1 、R2 、R3 及R4 獨立地是OH或(L)m －D；L是雙功能性的連接子；D是喜樹鹼或喜樹鹼類似物的殘基，例如： m是0或正整數，較佳是從約1到約10，以及更佳是1；以及n是正整數，較佳是從約28到約341，更佳是約227；限制條件為R1 、R2 、R3 及R4 不全是OH。
A.喜樹鹼及相關的喜樹鹼類似物：
喜樹鹼是一種由原產於中國的喜樹及原產於印度的青脆枝所製造的水不溶性細胞毒性生物鹼。喜樹鹼以及相關的化合物及類似物已知是有潛力的抗癌或抗腫瘤作用劑，並且已顯示可在實驗室動物的試管內及活體內具有這些活性。
喜樹鹼及特定相關的類似物共享以下結構：
從這個核心結構中，許多已知的類似物已被製備。例如，在10－及11－位置的任一或兩者中的A環可被OH取代。A環也可被直鏈或分支的C1－30 烷基或C1－17 烷氧基取代，視需要藉由雜原子(也就是，－O或－S)而連結到環。在7－位置中的B環可被直鏈或分支的C1－30 烷基(較佳是C2 烷基)、C5－8 環烷基、C1－30 烷氧基、苯烷基等、氨基甲酸烷基酯、烷基二卡肼、苯肼衍生物等取代。在C、D及E環中的其他取代是可能的。例如，參見美國專利第5,004,758、4,943,579、RE 32,518號，其內容以引用方式納入本文中。如同在此技藝中之人士將理解者，10－羥喜樹鹼、11－羥喜樹鹼以及10,11－二羥喜樹鹼類似物是在喜樹及其親屬樹種中以微量成分之一的形式天然存在。對於這些化合物的其他取代，也就是，7－烷基－、7－經取代的烷基－、7－胺基－、7－胺烷基－、7－芳烷基－、9－烷基－、9－芳烷基－喜樹鹼等衍生物，可利用已知的合成技術無須過度實驗而製得。部分喜樹屬的生物鹼具有以下所示的結構：
在以上所示的結構中，R7 是NO2 、NH2 、N3 、氫、鹵(F、Cl、Br、I)、COOH、OH、O－C1－8 烷基、SH、S－C1－3 烷基、CN、CH2 NH2 、NH-C1-3 烷基、CH2 -NH-C1-3 烷基、N(C1-3 烷基)2 、CH2 N(C1-3 烷基)、O-、NH-及S-CH2 CH2 N(CH2 CH2 OH)2 、O-、NH-及S-CH2 CH2 CH2 N(CH2 CH2 OH)2 、O-、NH-及S-CH2 CH2 N(CH2 CH2 CH2 OH)2 、O-、NH-及S-CH2 CH2 CH2 N(CH2 CH2 CH2 OH2 )2 、O-、NH-及S-CH2 CH2 N(C1-3 烷基)2 、O-、NH-及S-CH2 CH2 CH2 N(C1-3 烷基)2 、CHO或C1-3 烷基之一。
在以上所示的結構(II)中，R8 可以是H或C1-8 烷基(較佳是C2 烷基)或CH2 NR9 R10 ，其中：
(a)R9 及R10 獨立地是氫、C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C3-7 環烷基-C1-6 烷基、C2-6 烯基、羥基-C1-6 烷基、C1-6 烷氧基-C1-6 烷基；可選擇地
(b)R9 可以是氫、C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C3-7 環烷基-C1-6 烷基、C2-6 烯基、羥基-C1-6 烷基、C1-6 烷氧基-C1-6 烷基，以及R10 可以是-COR11 ，其中R11 是氫、C1-6 烷基、過鹵-C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C3-7 環烷基-C1-6 烷基、C2-6 烯基、羥基-C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 烷氧基-C1-6 烷基；或
(c)R9 及R10 與它們附屬的氮原子一起形成飽和的3-7員雜環，其可包含O、S或NR12 基團，其中R12 是氫、C1-6 烷基、過鹵-C1-6 烷基、芳基、以選自由C1-6 烷基、鹵素、硝基、胺基、C1-6 烷胺基、過鹵-C1-6 烷基、羥基-C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 烷氧基-C1-6 烷基以及-COR13 所組成的族群中之一個或多個基團取代的芳基，其中R13 是氫、C1-6 烷 基、過鹵-C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、芳基及以一個或多個C1-6 烷基、過鹵-C1-6 烷基、羥基-C1-6 烷基或C1-6 烷氧基-C1-6 烷基取代的芳基；R110 -R111 各自獨立地是選自由氫；鹵；醯基；烷基(例如，C1-6 烷基)；經取代的烷基；烷氧基(例如，C1-6 烷氧基)；經取代的烷氧基；烯基；炔基；環烷基；羥基；氰基；硝基；疊氮基；醯胺基；肼；胺基；經取代的胺基(例如，單烷胺基及二烷胺基)；羥羰基；烷氧羰基；烷羰氧基；烷羰胺基；氨基甲醯氧基；芳磺醯氧基；烷磺醯氧基；-C(R117 )=N-(O)j -R118 ，其中R117 是H、烷基、烯基、環烷基或芳基，j是0或1，以及R118 是H、烷基、烯基、環烷基或雜環；以及R119 C(O)O-，其中R119 是鹵素、胺基、經取代的胺基、雜環、經取代的雜環或R120 -O-(CH2 )k -，其中k是1-10的整數，以及R120 是烷基、苯基、經取代的苯基、環烷基、經取代的環烷基、雜環或經取代的雜環所組成的族群中；或R7 與R110 或R110 與R111 一起形成取代或未經取代的亞甲二氧基、伸乙二氧基或乙烯氧基；以及R112 是H或OR’，其中R’是烷基、烯基、環烷基、鹵烷基或羥烷基。
較佳的芳基是苯基及萘基。適合的雜環(當R9 及R10 與它們附屬的氮原子一起時)包括：吖、四氫吖唉、吡咯啶、哌啶、六甲伸乙亞胺、咪唑啶、吡唑啶、異唑啶、哌、N-甲基哌、四氫吖庚因(tetrahydroazepine)、N-甲基－四氫吖庚因、噻唑啶等。在共軛之後，剩下的喜樹鹼類似物是指未共軛的化合物之殘基。
為了容易說明並且非為限制，說明以7－乙基－10－羥喜樹鹼作為喜樹鹼類似物作為較佳及說明性的化合物。應理解的是，所主張的本發明包括所有該等衍生物及類似物，只要類似物具有OH(例如，20－OH基)以用作為聚合物連接的點即可。喜樹鹼或喜樹鹼類似物可以是外消旋混合物或光學純的異構物。較佳地，例如20(S)喜樹鹼或喜樹鹼類似物之實質上純的及活性的形式是用於多臂聚合性的前藥中。
B.雙功能性連接子：
在本發明的特定較佳形態中，L是胺基酸的殘基。可從任何已知的天然存在的L－胺基酸中被選出的胺基酸是，僅列舉一些，例如，丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、甲硫胺酸、半胱胺酸、苯丙胺酸、酪胺酸、色胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、精胺酸、組胺酸、脯胺酸、及/或其組合等等。在另一形態中，L可以是肽殘基。肽的大小範圍可是，例如，從約2至約10個胺基酸殘基。
天然存在的胺基酸之衍生物及類似物，以及各種在此技藝中已知的非天然存在的胺基酸(D或L)，無論是疏水性或非疏水性，也被涵蓋在本發明的範疇之內。僅作為例子，胺基酸類似物及衍生物包括：2－胺基己二酸、3－胺基己二酸、β－丙胺酸、β－胺基丙酸、2－胺基丁酸、4－胺基丁酸、哌啶酸、6-胺基己酸、2-胺基庚酸、2-胺基異丁酸、3-胺基異丁酸、2-胺基庚二酸、2,4-胺基丁酸、鎖鏈離胺素、2,2-二胺基庚二酸、2,3-二胺基丙酸、N-乙基甘胺酸、N-乙基天冬醯胺酸、3-羥基脯胺酸、4-羥基脯胺酸、異鎖鏈離胺素、別-異白胺酸、N-甲基甘胺酸或肌胺酸、N-甲基-異白胺酸、6-N-甲基-離胺酸、N-甲基纈胺酸、正纈胺酸、正白胺酸、鳥胺酸及其他不勝枚舉，其等列舉在63 Fed.Reg.29620、29622，係以引用方式納入本文中。一些較佳的L基團包括甘胺酸、丙胺酸、甲硫胺酸或肌胺酸殘基。更佳地，本發明的化合物包括甘胺酸殘基以作為連接子基團(L)。
在本發明的另一形態中，於喜樹鹼類似物及聚合物間附著之後的L是選自由：-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 O)t -、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 O)t (CR24 R25 )y O-、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 O)t (CR24 R25 )y -、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 )t O-、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 )t (CR24 CR25 O)y NR26 -、-[C(O)]v O(CR22 R23 )t NR26 -、-[C(O)]v O(CR22 R23 )t O-、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 )t NR26 -、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 )t (CR24 CR25 O)y -、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 O)t (CR24 CR25 )y NR26 -、 以及 其中R21 －R26 是獨立地選自由氫、C1－6 烷基、C2－6 烯基、C2－6 炔基、C3－19 分支的烷基、C3－8 環烷基、C1－6 經取代的烷基、C2－6 經取代的烯基、C2－6 經取代的炔基、C3－8 經取代的環烷基、芳基、經取代的芳基、芳烷基、C1－6 雜烷基、經取代的C1－6 雜烷基、C1－6 烷氧基、苯氧基以及C1－6 雜烷氧基所組成的族群中；R27 是選自由氫、C1－6 烷基、C2－6 烯基、C2－6 炔基、C3－19 分支的烷基、C3－8 環烷基、C1－6 經取代的烷基、C2－6 經取代的烯基、C2－6 經取代的炔基、C3－8 經取代的環烷基、芳基、經取代的芳基、芳烷基、C1－6 雜烷基、經取代的C1－6 雜烷基、C1－6 烷氧基、苯氧基、C1－6 雜烷氧基、NO2 、鹵烷基以及鹵素所組成的族群中；t及y是從約1到約4之個別選擇的正整數；以及v是0或1。
在本發明的一些較佳形態中，化合物包括一個單元的雙功能性連接子，並且因此m是1。
其他的連接子可在Greenwald等人(Bioorganic & Medicinal Chemistry ，1998，6：551－562)的表1中找到，其內容以引用方式納入本文中。
C.多臂聚合物：
多臂PEG是在NOF公司。藥物傳遞系統目錄本第8版(2006年4月)中所說明者，其揭露以引用方式納入本文中。一種特別較佳的多臂PEG具有以下結構： 其中n是正整數。
在本發明的一個較佳具體實例中，對於聚合物的聚合作用程度(n)是從約28至約341，以提供具有總分子量從約5,000 Da至約60,000 Da的聚合物，以及較佳是從約114至約227，以提供具有總分子量從約20,000 Da至40,000 Da的聚合物。這代表在聚合物鏈中的重複單元之數目，並且是取決於聚合物的分子量而定。在本發明的一個特別較佳具體實例中，n是約227。
D.前藥的合成：
一般而言，本發明的前藥是藉由將一或多當量活化的多臂聚合物與例如每個活性位置一或多當量的喜樹鹼－胺基酸共軛物，在足以有效使胺基經歷與聚合物的羧酸反應並形成連結的條件下反應而製備。
更特別地，方法可包括：1)提供一當量包含可利用的20－羥基之喜樹鹼或喜樹鹼類似物，以及一或多當量包含可利用的羧酸基團之雙功能性連接子；2)在惰性溶劑中(例如，DCM(或DMF、氯仿、甲苯或其混合物))，於偶聯試劑(例如，1－(3－二甲基胺丙基)－3－乙基碳化二亞胺(EDC)(或1,3－二異丙基碳化二亞胺(DIPC)、任何適合的二烷基碳化二亞胺、Mukaiyama試劑(例如，2－鹵－1－烷基－吡啶鎓鹵化物)或丙烷膦酸環酐(PPACA)等等))以及適合的鹼(例如，DMAP)之存在下，將兩個反應物反應以形成喜樹鹼－雙功能性連接子中間產物；以及3)在惰性溶劑中(例如，DCM(或DMF、氯仿、甲苯或其混合物))，於偶聯試劑(例如，1－(3－二甲基胺丙基)－3－乙基碳化二亞胺(EDC)、PPAC(或1,3－二異丙基碳化二亞胺(DIPC)、任何適合的二烷基碳化二亞胺、Mukaiyama試劑(例如，2－鹵－1－烷基－吡啶鎓鹵化物)或丙烷膦酸環酐(PPACA)等等))以及適合的鹼(例如，DMAP)，其可得自，例如，市售來源(例如，Sigma化學)或利用已知的技術在0℃至多達22℃的溫度下合成，之存在下將每個活性位置一或多當量具有胺基的所得中間產物(在實施例中是2當量)與一當量活化的聚合物(例如，PEG－酸)反應。
在一較佳形態中，7－乙基－10－羥喜樹鹼的10－羥基是在步驟1)之前被保護。
用於喜樹鹼或喜樹鹼類似物的OH基(例如，7－乙基－10－羥喜樹鹼中的10－羥基)之芳香保護基是較佳的，因為其7－乙基－10－羥喜樹鹼中間產物具有較佳的溶解度，並且可高效率及有效地以高純度的形式而純化。例如，包含矽烷基的保護基例如TBDPSCl、TBDMSCl及TMSCl可用於保護喜樹鹼或喜樹鹼類似物中的10－羥基。
活化的聚合物(也就是，包含1－4個末端羧酸基團的聚合物)可例如藉由將NOF Sunbright型或其他具有末端OH基的分支聚合物，利用一般熟悉於此技藝者所熟知的標準技術轉換成對應的羧酸衍生物而製備。例如，參見此處的實施例1－2以及共同讓與的美國專利第5,605,976號，其內容在此以引用方式納入本文中。
第一及第二偶聯作用劑可以是相同或不同的。
較佳雙功能性連接子基團的例子包括甘胺酸、丙胺酸、甲硫胺酸、肌胺酸等，以及合成是在實施例中顯示。可替代及特定的合成是在實施例中提供。
例如，本發明的化合物是在以下之中： 、與 。
特別較佳的化合物是： ，其中聚合物的所有4臂都經由甘胺酸而共軛到7－乙基－10－羥喜樹鹼。根據本發明的這個形態所進行的化合物之HPLC分析顯示，平均而言，4個7－乙基－10－羥喜樹鹼分子是共軛到1個PEG分子(4重量%)。
E.組成物/調配物：
包含本發明聚合共軛物的醫藥組成物可藉由在此技藝中熟知的方法而製造，例如，利用各種已知的混合、溶解、粒化、磨細(levigating)、乳化、包膠(encapsulating)、陷入(entrapping)或冷凍乾燥方法。組成物可結合一種或多種生理上可接受的載劑(包括賦形劑及輔助劑)而調配，其可促進將活性化合物加工成可醫藥上使用的製備物。適當的調配物是根據所選擇的投予途徑而定。非腸胃道途徑在本發明的許多形態中是較佳的。
對於注射，包括但並不限於靜脈、肌肉內及皮下注射，本發明的化合物可在水溶液中調配，溶液較佳是在生理上相容的緩衝溶液(例如，生理鹽緩衝溶液)或極性溶劑(包括但並不限於，吡咯烷酮或二甲基亞碸。
化合物也可例如藉由快速注射或連續式注入而調配成非腸胃道投予。用於注射的調配物可以單位劑型而呈現，例如，在安瓿或多劑的容器中。有用的組成物包括，但並不限於，懸浮液、溶液、或在油性或水溶性載劑中的乳液，並且可包含附屬物，例如，懸浮劑、穩定劑及/或分散劑。用於非腸胃道投予的醫藥組成物包括水可溶解形式的水溶液，例如，但並不限於，活性化合物的鹽(較佳)。此外，活性化合物的懸浮液也可在親脂性載劑中製備。適合的親脂性載劑包括脂肪油，例如，芝麻油、合成的脂肪酸酯(例如，油酸乙酯及三甘油酯)或例如微脂粒的材料。水溶性注射懸浮液可包含增加懸浮液黏度的物質，例如，羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇或右旋糖聚糖。視需要地，懸浮液也可包含適合的穩定劑及/或可增加化合物溶解度的作用劑，以使製備高濃縮溶液成為可能。可替代地，活性成分可以是粉末的形式，用以在使用之前以適合的載劑(例如，無菌、無熱原的水)構成。
對於口服投予，化合物可藉由將活性化合物與在此技藝中熟知的醫藥上可接受的載劑結合而調配。該等載劑可使本發明的化合物被調配成錠劑、丸劑、菱形錠、糖衣錠、膠囊、液體、凝膠、糖漿、糊劑、漿體、溶液、懸浮液、用於在患者的飲用水中稀釋的濃縮溶液及懸浮液、用於在患者的餐飲中稀釋的預混物等，以被患者口服攝取。口服使用的醫藥製備物可利用固體賦形劑，視需要研磨所得到的混合物並且處理顆粒混合物(在加入其他想要的適合輔助物之後)以獲得錠劑或糖衣錠核心而製得。有用的賦形劑特別是充填劑(例如，糖類，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇)、纖維素製備物(例如，玉米澱粉、小麥澱粉、稻米澱粉及馬鈴薯澱粉)以及其他物質(例如，明膠、特拉加康斯膠、甲基纖維素、羥丙基－甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉及/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP))。如果需要的話，可添加崩散劑，例如，交聯的聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或藻酸。也可使用鹽類，例如，藻酸鈉。
對於藉由吸入的投予，本發明的化合物可便利地以氣溶膠噴劑的形式，利用加壓包或噴霧器以及適合的推進劑而傳遞。
化合物也可利用例如傳統的栓劑基底(例如，可可油或其他甘油酯)，而調配於直腸組成物(例如，栓劑或保留灌腸劑)。
除了前述的調配物之外，也可將化合物調配成儲存製備物。該等長作用的調配物可藉由植入(例如，皮下或肌肉內)或藉由肌肉內注射而投予。本發明的化合物可與適當的聚合性或疏水性物質調配(例如，在乳液中與藥學上可接受的油)、與離子交換樹脂調配、或調配為難溶性衍生物(例如，但並不限於，難溶性鹽)，以用於這個投予途徑。
其他的傳遞系統，例如，微脂粒及乳液，也可被使用。
此外，化合物也可利用持續釋放系統而傳遞，例如，包含治療作用劑的固體疏水性聚合物之半通透基質。許多持續釋放的材料已被建立，並且是在此技藝中之人士所熟知的。根據它們的化學特性，持續釋放的膠囊可釋放化合物數週至多達超過100天。根據特定化合物的化學特性及生物穩定性，可使用其他的穩定化策略。
F.劑量：
治療有效量是指有效於預防、減輕或緩和可受喜樹鹼或相關類似物(也就是，7－乙基－10－羥喜樹鹼)影響的症狀之化合物的量。治療有效量的測定是充分在熟悉於此技藝者的能力內，特別是依照此處之揭露。
對於在本發明方法中所使用的任何化合物，治療有效量可從試管內的分析中初步估計。接著可調配劑量以用於動物模式，以便達成可包括有效劑量的循環濃度範圍。該等資訊可接著用於更精確地測定有效於患者的劑量。
此處所說明的化合物之毒性及治療功效，可藉由在細胞培養或實驗動物中的標準藥學程序，利用在此技藝中熟知的方法而測定。當然，劑量可根據劑型及投予途徑而改變。確實的調配物、投予途徑以及劑量，可由個別醫師考量患者的症狀而選擇。然而，一般而言，對於本發明化合物的全身性傳遞，目前較佳的劑量範圍將從約1至約100mg/kg/週，以及較佳是從約2至約60mg/kg/週。
組成物可每天投予一次或分成多個劑量，其可作為多週治療方法的部分而給予。精確的劑量將取決於症狀的階段及嚴重性、腫瘤對於聚合物-前藥組成物的敏感性以及要被治療的患者之個人特質而定，如同將由一般熟悉於此技藝者所理解。
G.治療方法：有鑑於以上說明，本發明也提供治療哺乳動物的方法，其包括將治療有效量的式(I)之本發明化合物投予至有需要的患者，其中D是生物活性的分子部分，也就是，喜樹鹼類似物。在本發明的較佳形態中，D是7-乙基-10-羥喜樹鹼的殘基。
本發明的另一形態係提供在哺乳動物中治療各種醫療症狀的方法。相較於其他疾病，組成物是特別有效於在哺乳動物中治療新生物(neoplasm)疾病、減少腫瘤負擔、預防新生物轉移以及預防腫瘤/新生物生長的復發。在另一形態中，被治療的癌症可以是以下一種或多種：固態腫瘤、淋巴瘤、肺癌、小細胞肺癌、急性淋巴細胞白血病(ALL)、胰臟癌、神經膠母細胞瘤、卵巢癌、胃癌等。
被投予的組成物的量(例如，使用作為前藥)將取決於包括在其中的母體分子而定。一般而言，用於治療方法中的前藥的量是可以在哺乳動物中有效達到所要治療結果的量。天然地，各種前藥化合物的劑量將取決於母體化合物、活體內水解速率、聚合物的分子量等而有稍微改變。一般而言，喜樹鹼的聚合性酯衍生物以及相關組成物是以範圍從約1至約100 mg/kg/週的量而投予，以及較佳是從約2至約60 mg/kg/週的量而投予。以上所列舉的範圍是說明性的，以及熟悉於此技藝者將根據臨床經驗及治療指示而決定所選擇的前藥之最適給藥。
在本發明的另一形態中，治療方法包括將有效量的此處所說明之化合物，投予患有可藉由拓普異構酶干擾而治療的症狀之有需要的哺乳動物或患者。
實施例
以下的實施例係用以提供本發明進一步的理解，但絕非欲以任何方式限制本發明的有效範圍。在實施例中列出的畫底線及粗體數字係對應於第1－5圖所示者。
一般方法： 所有的反應都是在乾燥的氮氣或氬氣氣氛下進行。使用市售的試劑而無進一步純化。所有的PEG化合物在使用之前，都在真空下或從甲苯中藉由共沸蒸餾而乾燥。除非有其他不同的指明，否則13 C NMR光譜是在75.46 MHz，利用Varian Mercury300 NMR光譜儀，並且以氘化的氯仿及甲醇作為溶劑而獲得。化學位移(δ)是以從四甲基矽烷(TMS)起的百萬分之一(ppm)低磁場而報導。
HPLC方法： 反應混合物以及中間產物及最終產物的純度，是藉由Beckman Coulter System GoldHPLC儀器而監測。它使用ZOBAX300SB C8反相管柱(150×4.6 mm)或Phenomenex Jupiter300A C18反相管柱(150×4.6 mm)，具有多波長的UV偵測器，利用10－90%乙腈於0.05%三氟醋酸(TFA)中的梯度，流速1 mL/min。
實施例1： 40k 4臂－PEG－tBu酯 (化合物2 )：將40k 4臂－PEG－OH(12.5 g，1 eq.)與220 mL的甲苯共沸，以移除35 mL的甲苯/水。將溶液冷卻至30℃，並且加入1.0 M於第三－丁醇中的第三－丁醇鉀(3.75 mL，3 eq×4＝12 eq.)。將混合物於30℃攪拌30 min，然後加入溴醋酸第三－丁基酯(0.975 g，4 eq.×4＝16 eq.)。將反應在30℃維持1小時，然後等卻至25℃。將150 mL的乙醚緩慢加入以將產物沈澱。將所得的懸浮液冷卻至17℃，並且在17℃保持半小時。將粗產物過濾，並將濕的濾餅以乙醚清洗兩次(2×125 mL)。將分離的濕濾餅溶解在50 ml的DCM，並將產物以350 ml的乙醚沈澱，並且過濾。將濕的濾餅以乙醚清洗兩次(2×125 mL)。將產物在真空下以40℃乾燥(產率＝98%，12.25 g)。13 C NMR(75.4 MHz,CDCl3 )：δ 27.71,68.48－70.71(PEG),80.94,168.97。
實施例2： 40k 4臂－PEG酸 (化合物3 )：將40k 4臂－PEG－tBu酯(化合物2，12 g)溶解在120 mL的DCM，然後加入60 mL的TFA。將混合物於室溫攪拌3小時，然後將溶劑在真空下於35℃移除。將所得的油狀殘留物溶解在37.5 mL的DCM。將粗產物以375 mL的乙醚沈澱。將濕的濾餅溶解在30 mL的0.5% NaHCO3 。將產物以DCM萃取兩次(2×150 ml)。將結合的有機層在2.5 g的MgSO4 上乾燥。將溶劑在真空下於室溫移除。將所得的殘留物溶解在37.5 mL的DCM，並將產物以300 mL的乙醚沈澱，並且過濾。將濕的濾餅以乙醚清洗兩次(2×125 ml)。將產物在真空下以40℃乾燥(產率＝90%，10.75 g)。13 C NMR(75.4 MHz,CDCl3 )：δ 67.93－71.6(PEG),170.83。
實施例3：TBDPS－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼) (化合物5 )：將Et3 N(4.3 mL，30.58 mmol，6 eq.)及TBDPSCl(7.8 mL，30.58 mmol，6 eq.)加到7－乙基－10－羥喜樹鹼(化合物4 ，2.0 g，5.10 mmol，1 eq.)於100 mL無水DCM的懸浮液中。將反應混合物加熱以迴流隔夜，然後以0.2 N HCl溶液(2×50 mL)、飽和的NaHCO3 溶液(100 mL)及濃鹽水(100 mL)清洗。將有機層在MgSO4 上乾燥、過濾並且在真空下蒸發。將殘留物溶解在無水DCM中，並且藉由加入己烷而沈澱。重複以DCM/己烷沈澱以除去過量的TBDPSCl。將固體濾出並且在真空下乾燥，得到2.09 g的產物(65%產率)。1 H NMR(300 MHz,CDCl3 )：δ 0.90(3 H,t,J＝7.6 Hz),1.01(3 H,t,J＝7.3 Hz),1.17(9H,s),1.83－1.92(2H,m),2.64(2H,q,6.9 Hz),3.89(1 H,s,OH),5.11(2H,s),5.27(1H,d,J＝16.1 Hz),5.72(1H,d,J＝16.4 Hz),7.07(2 H,d,J＝2.63 Hz),7.36－7.49(7 H,m),7.58(1 H,s),7.75－7.79(4H,m),8.05(1 H,d,J＝9.4 Hz)。13 C NMR(75.4 MHz,CDCl3 )：δ 7.82,13.28,19.52,22.86,26.48,31.52,49.23,66.25,72.69,97.25,110.09,117.57,125.67,126.57,127.65,127.81,130.02,131.69,131.97,135.26,143.51,145.05,147.12,149.55,149.92,154.73,157.43,173.72。
實施例4：TBDPS－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(20)－Gly－Boc (化合物6 )：將EDC(1.72 g，8.99 mmol，1.5 eq.)及DMAP(329 mg，2.69 mmol，0.45 eq.)加到TBDPS－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)(化合物5 ，3.78 g，5.99 mmol，1 eq.)及Boc－Gly－OH(1.57 g，8,99 mmol，1.5 eq.)於100 mL無水DCM中的0℃溶液。將反應混合物於0℃攪拌，直到HPLC顯示原料完全消失為止(大約1小時45分鐘)。將有機層以0.5% NaHCO3 溶液(2×50 mL)、水(1×50 mL)、0.1 N HCl溶液(2×50 mL)及濃鹽水(1×50 mL)清洗；並且在MgSO4 上乾燥。在過濾以及在真空下蒸發之後，得到4.94 g的粗產物(定量的產率)。將粗固體用於下一個反應而無進一步純化。1 H NMR(300 MHz,CDCl3 )：δ 0.89(3 H,t,J＝7.6 Hz),0.96(3 H,t,J＝7.5 Hz),1.18(9H,s),1.40(9H,s),2.07－2.29(3H,m),2.64(2H,q,7.5 Hz),4.01－4.22(2H,m),5.00(1 H,br s),5.01(2H,s),5.37(1H,d,J＝17.0 Hz),5.66(1H,d,J＝17.0 Hz),7.08(1 H,d,J＝2.34 Hz),7.16(1H,s),7.37－7.50(7 H,m),7.77(4H,d,J＝7.6 Hz),8.05(1 H,d,J＝9.4 Hz)。13 C NMR(75.4 MHz,CDCl3 )：δ 7.52,13.30,19.50,22.86,26.45,28.21,31.64,42.28,49.14,67.00,76.65,79.96,95.31,110.13,118.98,125.75,126.45,127.68,127.81,130.03,131.54,131.92,135.25,143.65,144.91,145.19,147.08,149.27,154.75,155.14,157.10,166.98,169.17。
實施例5：TBDPS－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(20)－Gly．HCl (化合物7 )：將5 mL的4 M HCl於二烷中的溶液加到TBDPS－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(20)－Gly－Boc(化合物6 ，1 g，1.27 mmol)於5 mL無水二烷的溶液中。將反應混合物於室溫中攪拌，直到HPLC顯示原料完全消失為止(1小時)。將反應混合物加到50 mL的乙醚中，並且過濾所得到的固體。將固體溶解在50 mL DCM，並以濃鹽水清洗(藉由加入飽和的NaHCO3 溶液而將pH調整至2.5)。將有機層在MgSO4 上乾燥、過濾並且在真空下蒸發。將殘留物溶解在5 mL的DCM，並且藉由加入50 mL乙醚而沈澱。過濾得到770 mg(84%產率)的最終產物。1 H NMR(300 MHz,CDCl3 )：δ 0.84(3 H,t,J＝7.6 Hz),1.05(3 H,t,J＝7.3 Hz),1.16(9H,s),2.15－2.30(3H,m),2.59(2H,q,7.6 Hz),4.16(1H,d,J＝17.9 Hz),4.26(1H,d,J＝17.9 Hz),5.13(2H,s),5.46(1H,d,J＝17.0 Hz),5.60(1H,d,J＝17.0 Hz),7.11(1 H,d,J＝2.34 Hz),7.30(1H,s),7.40－7.51(6 H,m),7.56(1H,dd,J＝2.34,9.4 Hz),7.77(4H,dd,J＝7.6,1.6 Hz),7.98(1 H,d,J＝9.1 Hz)。13 C NMR(75.4 MHz,CDCl3 )：δ 8.09,13.72,20.26,23.61,26.94,31.83,41.01,50.71,67.62,79.51,97.03,111.65,119.69,127.13,128.97,128.99,129.11,131.43,131.96,133.00,133.03,136.51,145.62,145.81,147.24,148.29,150.58,156.27,158.68,167.81,168.34。
實施例6： 40k 4臂－PEG－Gly－(20)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(10)－TBDPS (化合物8 )：將TBDPS－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(20)－Gly．HCl(化合物7，207 mg，0.29 mmol，每個活性位置2.0 eq.)、DMAP(175 mg，1.44 mmol，10 eq.)及PPAC(0.85 mL的50%溶液於EtOAc中，1.44 mmol，10 eq.)，加到40k 4臂－PEGCOOH(化合物3 ，1.4 g，0.036 mmol，1 eq.)於14 mL的無水DCM溶液中。將反應混合物在室溫中攪拌隔夜，然後在真空下蒸發。將所得到的殘留物溶解在DCM，並將產物以乙醚沈澱，並且過濾。將殘留物以DMF/IPA再結晶，得到產物(1.25 g)。13 C NMR(75.4 MHz,CDCl3 )：δ 7.45,13.20,19.39,22.73,26.42,31.67,40.21,49.01,66.83,95.16,110.02,118.83,125.58,126.40,127.53,127.73,129.96,131.49,131.76,131.82,135.12,143.51,144.78,145.13,146.95,149.21,154.61,156.92,166.70,168.46,170.30。
實施例7： 40k 4臂－PEG－Gly(20)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼) (化合物9 )：將TBAF(122 mg，0.46 mmol，4 eq.)於THF及0.05 M HCl溶液(12.5 mL)的1：1混合物中之溶液，加到化合物40k 4臂－PEG－Gly－(20)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(10)－TBDPS(化合物8 ，1.25 g)。將反應混合物在室溫中攪拌4小時，然後以DCM萃取兩次。將結合的有機相在MgSO4 上乾燥、過濾並且在真空下蒸發。將殘留物溶解在7 mL的DMF，並以37 mL IPA沈澱。將固體過濾出，並以IPA清洗。重複以DMF/IPA的沈澱。最後，將殘留物溶解在2.5 mL的DCM，並且藉由加入25 mL的乙醚而沈澱。將固體過濾出，並且在在真空烘箱中以40℃乾燥隔夜(860 mg)。13 C NMR(75.4 MHz,CDCl3 )：δ 7.48,13.52,22.91,31.67,40.22,49.12,66.95,94.82,105.03,118.68,122.54,126.37,128.20,131.36,142.92,144.20,144.98,147.25,148.29,156.44,156.98,166.82,168.49,170.39。這個NMR數據顯示沒有PEG－COOH的訊號，代表所有的COOH都被反應。以同由螢光偵測所測定的裝載經發現是3.9，其與7－乙基－10－羥喜樹鹼在聚合物的4個分支的每一個上之完全裝載一致。以更大的規模重複進行這個實驗，得到一致的結果。
實施例8：Boc－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼) (化合物10 )：將二－第三－丁基重碳酸酯(1.764 g，1.3 eq.)及無水吡啶(15.2 mL，30 eq.)在氮氣下於室溫加到7－乙基－10－羥喜樹鹼(化合物4 ，2.45 g，1 eq.)於250 mL無水DCM的懸浮液中。將懸浮液於室溫中攪拌隔夜。將薄霧狀的溶液經由賽力特(celite)(10 g)而過濾，並將濾液以0.5 N HCl清洗三次(3×150 mL)及以NaHCO3 飽和溶液清洗一次(1×150 ml)。將溶液在MgSO4 上乾燥(1.25 g)。將溶劑在真空下以30℃移除。將產物在真空下以40℃乾燥(產率＝82%，2.525 g)。13 C NMR(75.4 MHz,CDCl3 )δ 173.53,157.38,151.60,151.28,150.02,149.70,147.00,146.50,145.15,131.83,127.19,127.13,124.98,118.53,113.88,98.06,84.26,72.80,66.18,49.33,31.62,27.73,23.17,13.98,7.90。
實施例9：Boc－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(20)－Ala－Bsmoc (化合物11 )：將EDC(0.51g，2.67 mmol)及DMAP(0.065g，0.53 mmol)於0℃時加到Boc－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)(化合物10 ，0.85g，1.71 mmol)及Bsmoc－Ala(0.68g，2.30 mmol)於無水CH2 Cl2 (20 mL)的溶液中。將混合物在氮氣下於0℃攪拌45分鐘，然後回溫至室溫。當反應的完成藉由HPLC確認時，將反應混合物以1% NaHCO3 (2×50 ml)、H2 O(50 mL)及0.1 N HCl(2×50 mL)清洗。將有機相以無水MgSO4 乾燥並且過濾。將溶劑在減壓下移除。將所得到的固體在真空下以低於40℃乾燥隔夜，得到1.28 g的產物，產率為95%。13 C NMR(75.4 MHz,CDCl3 )δ：171.16,166.83,157.16,154.78,151.59,151.33,149.82,147.17,146.68,145.35,145.15,139.08,136.88,133.60,131.83,130.45,130.40,130.33,127.40,127.08,125.32,125.14,121.38,120.01,114.17,95.90,84.38,77.19,76.64,67.10,56.66,53.45,49.96,49.34,31.7,27.76,17.94,14.02,7.53。ESI－MS,786.20[M＋H]＋ 。
實施例10：Boc－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(20)－Ala (化合物12 )：將Boc－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(20)－Ala－Bsmoc(化合物11 ，4.2 g，5.35 mmol)及4－哌啶基哌啶(1.17g，6.96 mmol)於無水CH2 Cl2 (200 ml)中的溶液，在室溫攪拌5小時。然後將這個混合物以0.1 N HCl(2×40 ml)清洗，然後將有機層在無水MgSO4 上乾燥。將這個溶液過濾，並且藉由真空蒸餾而將溶劑移除，得到2.8 g的產物，具有93%的純度，係由HPLC所測定。將這個產物藉由以乙醚研製(3×20 ml)，然後以乙酸乙酯研製(4×20 ml)而進一步純化，得到1.52 g(2.70 mmol)，具有純度97%。13 C NMR(75.4 MHz,CDCl3 )δ 168.39,166.63,156.98,151.20,151.15,149.69,146.67,146.56,145.37,144.53,131.66,127.13,124.99,119.80,113.82,96.15,84.21,77.67,67.16,49.48,49.06,31.56,27.74,23.14,15.98,13.98,7.57。
實施例11： 40k 4臂－PEG－Ala－(20)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(10)－Boc (化合物13 )：將Boc－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(20)－Ala(化合物12 ，1.50 g，2.5 mmol)及4臂PEG－COOH(化合物3 ，10.01 g，1.0 mmol)於室溫中加到無水CH2 Cl2 (100 mL)。將溶液冷卻至0℃，然後加入EDC(0.29 g，1.5 mmol)及DMAP(0.30 g，2.5 mmol)。將混合物在氮氣下於0℃攪拌1小時。接著將其保持在室溫中隔夜。將溶劑在減壓下蒸發。將殘留物溶解在40 mL的DCM，並將粗產物以乙醚沈澱(300 mL)。將得自過濾的濕固體於65℃溶解在DMF/IPA的混合物中(60/240 mL)。在2－3小時之內使溶液冷卻至室溫，並且將產物沈澱。接著，將固體過濾出，並以乙醚清洗(2×200 mL)。將濕的濾餅在真空下以低於40℃乾燥隔夜，得到8.5 g的產物。
實施例12： 40k 4臂－PEG－Ala－(20)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼) (化合物14 )：將40k 4臂－PEG－Ala－(20)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(10)－Boc(化合物13 ，7.98 g)於室溫加到30% TFA於無水CH2 Cl2 的溶液中(130 mL)。將混合物攪拌3小時，或直到原料的消失係藉由HPLC確認為止。將溶液在真空下於35℃儘可能移除。將殘留物溶解在50 mL的DCM，並將粗產物以乙醚(350 mL)沈澱，並且過濾。將濕的固體於65℃溶解在DMF/IPA的混合物中(50/200 mL)。使溶液在2－3小時之內冷卻至室溫，並將產物沈澱。接著將固體過濾出，並以乙醚清洗(2×200 mL)。將濕的濾餅在真空下以低於40℃乾燥隔夜，得到6.7 g的產物。13 C NMR(75.4 MHz,CDCl3 )δ：170.75,169.30,166.65,157.00,156.31,148.36,147.19,145.03,144.29,143.00,131.49,128.26,126.42,122.47,118.79,105.10,94.57,78.08,77.81,77.20,71.15,70.88,70.71,70.33,70.28,70.06,69.93,69.57,66.90,49.14,47.14,31.53,22.95,17.78,13.52,7.46。
實施例13：Boc－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(20)－Met－Bsmoc (化合物15 )：將EDC(1.64g，8.59 mmol)及DMAP(0.21g，1.72 mmol)於0℃時加到Boc－(10)－7－乙基－10－羥喜樹鹼(化合物10 ，2.73 g，5.53 mmol)及Bsmoc－Met(3.19 g，8.59 mmol)於無水CH2 Cl2 (50 mL)的溶液中。將混合物在氮氣下於0℃攪拌45分鐘，然後回溫至室溫。當反應的完成係藉由HPLC確認時，將反應混合物以1% NaHCO3 (2×100 ml)、H2 O(100 mL)及0.1 N HCl(2×100 mL)清洗。將有機相以無水MgSO4 乾燥，並且過濾。將溶劑在減壓下移除。將所得到的固體在真空下已低於40℃乾燥隔夜，得到4.2 g的產物，具有88%的產率。13 C NMR(75.4 MHz,CDCl3 )δ：170.3,166.8,157.1,155.2,151.4,151.2,149.7,147.0,146.6,145.3,145.1,138.9,136.6,133.5,131.7,130.5,130.3,130.2,127.3,127.0,125.3,125.1,121.2,119.8,114.1,96.1,84.3,76.7,67.0,56.7,53.5,53.4,49.3,31.6,31.0,29.7,27.7,23.1,15.4,13.9,7.4；ESI－MS,846.24[M＋H]＋ 。
實施例14：Boc－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(20)－Met－NH 2 ．HCl (化合物16 )：將Boc－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(20)－Met－Bsmoc(化合物15 ，4.1 g，4.85 mmol)及4－哌啶基哌啶(1.06 g，6.31 mmol)於無水CH2 Cl2 (200 mL)的溶液在室溫中攪拌5小時。接著將這個混合物以0.1 N HCl(2×40 ml)清洗，然後將有機層在無水MgSO4 上乾燥。將這個溶液過濾，並將溶劑藉由真空蒸餾而移除，得到2.8 g的產物，具有約97%的純度，係由HPLC所測定。將這個產物藉由以乙醚(3×20 ml)研製，然後以乙酸乙酯(4×20 ml)研製而進一步純化，得到1.54 g，具有97%的純度。13 C NMR(75.4 MHz,CDCl3 )δ：167.2,166.5,156.9,151.12,150.9,149.8,146.3,145.9,145.8,144.9,131.3,127.2,127.0,125.1,119.6,113.8,96.7,84.3,78.2,67.0,60.4,52.2,49.4,31.4,29.6,29.1,27.7,23.2,15.1,13.9,7.7。
實施例15： 40k 4臂－PEG－Met－(20)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(10)－Boc (化合物17 )：將Boc－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(20)－Met(化合物16 ，1.48 g，2.25 mmol)及4臂－PEG－COOH(化合物3 ，9.0 g，0.9 mmol)於室溫加到無水CH2 Cl2 (80 mL)的溶液中。將溶液冷卻至0℃，然後加入EDC(0.26 g，1.35 mmol)及DMAP(0.27 g，2.25 mmol)。將混合物在氮氣下於0℃攪拌1小時。接著將其保持在室溫中隔夜。將反應混合物以70 ml的CH2 Cl2 稀釋、以30 ml的0.1 N HCl/1M NaCl水溶液萃取。在有機層以MgSO4 乾燥之後，將溶劑在減壓下蒸發。將殘留物溶解在40 mL的CH2 Cl2 ，並將粗產物以乙醚沈澱(300 mL)。將源於過濾中所得到的濕固體於65℃溶解在270 mL的DMF/IPA中。使溶液在2－3小時之內冷卻至室溫，並將產物沈澱。接著將固體過濾出，並以乙醚清洗(2×400 mL)。重複上述在DMF/IPA中的結晶步驟。將濕的濾餅在真空下以低於40℃乾燥隔夜，得到7.0 g的產物。13 C NMR(75.4 MHz,CDCl3 )δ：169.8,169.6,166.5,156.9,151.2,151.1,149.9,147.0,146.6,145.0,131.7,127,1,126.8,124.9,119.7,113.8,95.5,84.1,70.1,69.9,66.9,50.7,49.2,31.5,31.2,29.6,27.6,23.1,15.3,13.9,7.5。
實施例16： 40k 4臂－PEG－Met－(20)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼) (化合物18 )：將二甲基亞碸(2.5 mL)及4臂－PEG－Met－(20)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(10)－Boc(化合物17 ，6.0 g)在室溫加到30% TFA於無水CH2 Cl2 (100 mL)的溶液中。將混合物攪拌3小時，或直到原料的消失係藉由HPLC確認為止。將溶劑在真空下於35℃儘可能移除。將殘留物溶解在50 mL的CH2 Cl2 ，並將粗產物以乙醚(350 ml)沈澱，並且過濾。將濕的固體於65℃溶解在DMF/IPA(60/300 mL)的混合物中。使溶液在2－3小時之內冷卻至室溫，並將產物沈澱。接著將固體過濾出，並以乙醚(2×200 mL)清洗。將濕的濾餅在真空下以低於40℃乾燥隔夜，得到5.1 g的產物。13 C NMR(75.4 MHz,CDCl3 )δ：169.7,166.6,157.0,156.3,148.4,147.3,145.0,144.4,142.9,131.5,128.3,126.4,122.5,118.7,105.2,94.7,78.1,67.0,50.7,49.2,31.6,31.3,29.7,23.0,15.3,13.5,7.5；7－乙基－10－羥喜樹鹼與PEG的比例：2.1%(重量)。
實施例17：Boc－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(20)－Sar－Boc (化合物19 )：將Boc－Sar－OH(432 mg，2.287 mmol)加到Boc－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)(化合物10 ，750 mg，1.52 mmol)於75 mL DCM的溶液中，並且冷卻至0℃。加入DMAP(432 mg，2.287 mmol)及EDC(837 mg，0.686 mmol)，並將反應混合物從0℃至室溫攪拌1.5小時。然後將反應混合物以0.5% NaHCO3 清洗(75 mL×2)、以水清洗(75 mL×2)，並且最終以0.1 N HCl清洗(75 mL×1)。將二氯甲烷層在MgSO4 上乾燥，並將溶劑在真空下蒸發以及乾燥。產率＝0.900 mg(89%)。結構係由NMR所確認。
實施例18：7－乙基－10－羥喜樹鹼－(20)－Sar．TFA (化合物20 )：將Boc－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(20)－Sar－Boc(化合物19 ，900 mg，1.357 mmol)加到4 mL TFA及16 mL DCM的溶液中，並且在室溫攪拌1小時。將反應混合物與甲苯於30℃蒸發。將殘留物溶解在10 mL的CHCl3 ，並且以乙醚沈澱。將產物過濾並且乾燥。得到700 mg(1.055 mmol，78%)。13 C NMR(67.8 MHz,CDCl3 )δ 168.26,167.07,158.84,158.71,148.82,147.94,147.22,146.34,144.04,131.18,130.08,128.97,124.46,119.78,106.02,97.23,79.84,79.34,66.87,50.84,49.86,31.81,23.94,15.47,13.84,8.08。
實施例19：TBDMS－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(20)－Sar．HCl (化合物21 )：將7－乙基－10－羥喜樹鹼－(20)－Sar．TFA(化合物20 ，2.17 g，3.75 mmol，1 eq.)於無水DMF(30 mL)中的溶液，以200 mL的無水DCM稀釋。加入Et3 N(2.4 mL，17.40 mmol，4.5 eq.)，然後再加入TBDMSCl(2.04 g，13.53 mmol，3.5 eq.)。將反應混合物在室溫攪拌，直到HPLC顯示原料消失為止(大約1小時)。將有機層以0.5% NaHCO3 清洗兩次，以水清洗一次，並且以濃鹽水飽和的0.1 N HCl溶液清洗兩次；然後在MgSO4 上乾燥。在過濾以及在真空下將溶劑蒸發之後，將所得到的油溶解在DCM。加入乙醚得到固體，將該固體利用細或中的布氏漏斗而過濾(2.00 g，87%產率)。固體的HPLC顯示96%的純度。1 H NMR及13 C NMR確認了結構。1 H NMR(300 MHz,CD3 OD)：δ 0.23(6H,s),0.96(9H,s),0.98(3 H,t,J＝7.3 Hz),1.30(3 H,t,J＝7.6 Hz),2.13－2.18(2H,m),2.67(3H,s),3.11(2 H,q,J＝7.6 Hz),4.10(1H,d,J＝17.6 Hz),4.22(1H,d,J＝17.6 Hz),5.23(2 H,s),5.40(1 H,d,J＝16.7 Hz),5.55(1H,d,J＝16.7 Hz),7.32(1H,s),7.38－7.43(2H,m),8.00(1H,d,J＝9.1 Hz).13 C NMR(75.4 MHz,CD3 OD)：δ－4.14,8.01,14.10,19.30,23.98,26.16,31.78,33.52,49.46,50.95,67.66,79.80,97.41,111.96,119.99,127.75,129.28,129.67,131.57,145.24,146.86,147.16,148.02,150.34,156.69,158.72,167.02,168.27。
實施例20： 40K 4臂－PEG－Sar－(20)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(10)－TBDMS (化合物22 )：將TBDMS－(10)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－Sar．HCl(化合物21 ，1.53 g，2.5 mmol，2.5 eq.)於20 mL無水DMF的溶液，加到40K 4臂－PEG－COOH(化合物3 ，10 g，0.25 mmol，1 eq.)於150 mL無水DCM的溶液中，並將混合物冷卻至0℃。將EDC(767 mg，4 mmol，4 eq.)及DMAP(367 mg，3 mmol，3 eq.)加到這個溶液中，並使反應混合物緩慢回溫至室溫，並且在室溫中攪拌隔夜。接著，將反應混合物在真空下蒸發，並將殘留物溶解在最少量的DCM中。在加入乙醚之後形成固體，並且將固體在真空下過濾。將殘留物溶解在30 mL的無水CH3 CN，並且藉由加入600 mL的IPA而沈澱。將固體過濾出，並以IPA及乙醚清洗，得到產物(9.5 g)。結構係由NMR所確認。
實施例21： 40K 4臂－PEG－Sar－(20)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼) (化合物23 )：方法A ：將40K 4臂－PEG－Sar－(20)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(10)TBDMS(化合物22 )溶解在TFA於H2 O(200 mL)的50%混合物中。將反應混合物在室溫攪拌10小時，然後以100 mL的H2 O稀釋，並以DCM萃取(2×300 mL)。將結合的有機相以H2 O清洗(2×100 mL)、在MgSO4 上乾燥、過濾並且在真空下蒸發。將殘留物溶解在100 mL的無水DMF，以加熱槍溫和地加熱，並且藉由緩慢加入400 mL的DMF而沈澱。將固體過濾出，並以20% DMF於IPA及乙醚清洗。將固體溶解在DCM，並以乙醚沈澱(6.8 g)。結構係由NMR確認。
方法B ：將40K 4臂－PEG－Sar－(20)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)－(10)－TBDMS(1 g)溶解在10 mL的1N HCl溶液中。將反應混合物在室溫攪拌1小時(由HPLC檢測)，然後以DCM萃取(2×40 mL)。將有機層在MgSO4 上乾燥、過濾並且在真空下蒸發。將所得到的亮黃色殘留物溶解在10 mL的DMF(以加熱槍稍微加熱)，然後加入40 mL的IPA。將所得到的固體過濾出，並且在真空烘箱中以40℃乾燥隔夜。結構係由NMR所確認。
生物學數據
實施例22：毒性數據 4－臂PEG共軛的7－乙基－10－羥喜樹鹼之最大耐受劑量(MTD)是利用裸鼠而研究。對於死亡及疾病的徵候監測小鼠14天，並且當體重喪失>20%治療前的體重時將小鼠犧牲。
表1顯示每個化合物對於單劑及多劑投予之最大耐受劑量。對於多劑投予，每個劑是每隔一天給予小鼠共10天，並且觀察小鼠另外4天，因此總共是14天。
當以單劑給予時，對於4臂－PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)(化合物9 )發現到MTD是30 mg/kg，以及當以多劑給予時，發現到MTD是10 mg/kg(q2d×5)。
實施例23：試管內的數據 在表2中，細胞毒性(可導致IC50 的每個化合物的mM)提供每個化合物的試管內抗腫瘤效價之指標。這個研究是用於測定4－臂聚乙二醇化的7－乙基－10－羥喜樹鹼共軛物的聚乙二醇化作用之效果。PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)、7－乙基－10－羥喜樹鹼及CPT－11的試管內細胞毒性，是利用MTS分析而測定。將細胞於37℃以藥物培養72小時。在培養之後，加入MTS染劑，以及有色產物(甲脯(formazan))的形成是在490 nm測量。
4－臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)及CPT－11的IC50 值顯示在所有測試的腫瘤細胞中，4－臂－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)比CPT－11具有更高的試管內抑制。此外，4－臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)也比天然的7－乙基－10－羥喜樹鹼具有明顯更高的試管內抑制測試的腫瘤細胞，除了HT29腫瘤細胞之外。
PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)共軛物是比Camptosar更有效大約10至600倍。在COLO 205、HT－29及OVCAR－3細胞系中，PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)共軛物是比Pegamotecan(一種喜樹鹼的聚乙二醇化前藥)更靈敏8至16倍。
包含各種胺基酸的PEG－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)共軛物對表3所摘述的一些癌細胞系具有有效的試管內細胞毒性。所有的PEG－7－乙基－10－羥喜樹鹼共軛物都顯示有效的試管內抗腫瘤活性，其超過小分子前藥CPT－11及Pegamotecan的活性。
實施例24：活體內數據－在乳房腫瘤異種移植小鼠中的單劑功效4－臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)共軛物(化合物9)對生長在裸鼠中的皮下人類乳腺癌(MX－1)之功效，是以下述方式測定。在環境適應至少一週之後，將腫瘤藉由將來自供體小鼠的小腫瘤片段移植到裸鼠左副脅區域上的單一皮下位置而建立。每週兩次觀察腫瘤移植位置，並且觸診測量一次。每隻小鼠的腫瘤體積是藉由以卡鉗測量二維而測定，並且利用計算公式：腫瘤體積＝(長度×寬度2 )而計算。當腫瘤達到約100 mm3 的平均體積時，將小鼠分開至它們的實驗組，其係由未處理的對照組、根據此處實施例7所製得的4－臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)、如Conover等人(Anti －Cancer Drug Design ，1999，14：499－506)之說明所製備的PEG－Ala－CPT(其內文以引用方式納入本文中)以及CPT－11所組成。藥物是經由尾靜脈以20 mg/kg小鼠體重的單劑而靜脈投予。共軛物的劑量是指等同於7－乙基－10－羥喜樹鹼的量。小鼠的重量及腫瘤大小是在研究一開始以及單劑投予後的第31天測量。
表4顯示在20 mg/kg小鼠體重的單劑靜脈注射後第31天，在MX－1乳房腫瘤細胞異種移植的小鼠中測量的腫瘤減小。腫瘤的整體生長是以平均腫瘤體積(TV)計算。同時也計算治療組與對照組(T/C)的百分比。腫瘤退化的百分比代表每個化合物的活體內活性。4－臂PEG－GLY－7－乙基－10－羥喜樹鹼共軛物顯示明顯的抗－腫瘤活性，其具有100%的小鼠存活率以及100%的治癒。CPT－11以及鹽溶液對照組都顯示0%存活率的無保護作用。所有的數據都摘述於表4。
結果顯示4－臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)是比PEG－Ala－CPT或CPT－11更明顯有效於治療乳癌。
在乳房MX－1腫瘤模式中，以4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)的治療導致幾乎100%的腫瘤生長抑制，以及所有動物的完全治癒。在等同的劑量水平時，以CPT－11的治療則產生26%的腫瘤生長抑制。
實施例25：活體內數據－在乳房腫瘤異種移植小鼠中的多劑功效 這個實施例測定一系列4－臂PEG－胺基酸(衍生物)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)共軛物對生長在裸鼠中的人類乳腺癌(MX－1)之功效。將小鼠分成數個組別，每個接受4臂－PEG－Ala－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)、4臂－PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)、4臂－PEG－Met－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)、4臂－PEG－Sar－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)(每個都是如此處的說明而製得)、CPT－11或鹽溶液對照組。將小鼠給藥5 mg/kg/天，連續6天(每2天[q×2d]×6)。小鼠的重量及腫瘤大小係監測至第一劑投予以及後續投予之後的第31天。
表5顯示在5 mg/kg/劑的靜脈注射六天(q2d×6)之後的第31天，在MX－1乳房腫瘤細胞異種移植的小鼠中測量的腫瘤減小。所有的4－臂PEG－胺基酸(衍生物)－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)共軛物都顯示明顯的抗腫瘤活性，其具有100%的小鼠存活率以及100%的復原。CPT－11及鹽溶液對照組都顯示0%存活率的無保護作用。所有的數據都摘述於表5。
數據顯示7－乙基－10－羥喜樹鹼的4－臂PEG－胺基酸衍生物是比CPT－11更明顯有效於治療乳癌。
實施例26：在小及大乳房腫瘤異種移植小鼠中的活體內功效 4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)的抗腫瘤功效是在帶有小的(約100 mm3 )或大的(約450 mm3 )已建立之人類乳腺腫瘤MX－1的裸鼠中評估。抗腫瘤的治療活性是在小鼠中同時以單劑或多劑攝生法而測定。在具有小乳房腫瘤異種移植的小鼠中，以單劑的4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)(20 mg/kg)之治療導致100%的TGI。以多劑的4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)(20 mg/kg q2d×5)之治療也導致100%的TGI。單劑(20 mg/kg)投予CPT－11並不能抑制腫瘤生長，以及多劑的CPT－11(20 mg/kg q2d×5)在第31天時導致44%的TGI。
在帶有大乳房腫瘤的小鼠中，以單一MTD的4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)(30 mg/kg)之治療導致96%的TGI。在第54天時六隻小鼠中的四隻被治癒。以單一MTD的CPT－11(80 mg/kg)之治療在第13天導致70%的TGI。使所有的動物在第20天犧牲，因為過量的腫瘤負擔所致。在其MTD以多劑的4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)(10 mg/kg q2d×5)之治療也導致96%的TGI，以及在第54天時六隻小鼠中的五隻被治癒。當在其MTD以多劑給予時(40 mg/kg q2d×5)，CPT－11在第13天時導致約95%的TGI。然而，腫瘤卻在約5週之後在六隻小鼠中的四隻中再次生長。當以如4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)的等同劑量水平給予時(10 mg/kg q2d×5)，CPT－11具有有效的TGI直到治療中斷為止，其後腫瘤再次生長。結果是列於第6A及6C圖。抗腫瘤效果並非歸因於一般的毒性作用，因為當在MTD給予時，以4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)或CPT－11之治療，在治療期間並沒有明顯減少動物的體重，如同第6B及6D圖所示。
在以單劑或多劑注射的MX－1乳房腫瘤模式中，4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)在小(100 mm3 )及大(450 mm3 )體積已建立的腫瘤中有效抑制腫瘤生長。在MX－1乳房腫瘤異種移植的小鼠中，大小從約75 mm3 至約450 mm3 的腫瘤是成功地被治療。
實施例27：活體內數據－在結腸直腸腫瘤異種移植小鼠中的單劑功效 在這個實施例中，腫瘤減小是在以HT－29結腸直腸腫瘤細胞異種移植的小鼠中，在單劑靜脈注射30 mg/kg的4－臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)或CPT－11之後的第4、8、11、15、18及22天而測量。CPT 11也給藥80 mg/kg。結果是列於第7圖。4－臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)共軛物顯示明顯的抗腫瘤活性。鹽溶液對照組顯示0%存活率的無保護作用。結果顯示4－臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)是比CPT－11明顯有效於治療結腸直腸癌。
實施例28：活體內數據－在結腸直腸腫瘤異種移植小鼠中的多劑功效 腫瘤減小是在以HT－29結腸直腸腫瘤細胞異種移植的小鼠中，在靜脈注射10 mg/kg/劑的4－臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)或CPT－11共5天之後的第4、8、11、15、18及22天而測量。CPT 11也給藥40 mg/kg/劑共5天。結果是列於第8圖。相似的結果在多劑投予中獲得。此外，4－臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)的多劑投予也顯示比CPT－11明顯的治療功效。結果顯示多劑的4－臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)是比CPT－11更明顯有效於治療結腸直腸癌。如同在MX－1腫瘤異種移植的小鼠中所觀察到的，以4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)或CPT－11之治療，在治療期間並沒有明顯減少小鼠的體重。
實施例29：活體內數據－在胰臟腫瘤異種移植小鼠中的單劑功效 在這個實施例中，腫瘤減小是在以MiaPaCa－2胰臟腫瘤細胞異種移植的小鼠中，在單劑靜脈注射30 mg/kg的4－臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)或CPT－11之後的第4、8、11、15、18及22天而測量。CPT 11也給藥80 mg/kg。結果是列於第9圖。4－臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)共軛物顯示明顯的抗腫瘤活性。鹽溶液對照組及CPT－11顯示無保護作用。結果顯示4－臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)是比CPT－11明顯有效於治療胰臟癌。以單劑的4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)之治療導致71%的TGI，而單劑注射CPT－11的治療則導致0%的TGI。
實施例30：活體內數據－在胰臟腫瘤異種移植小鼠中的多劑功效 腫瘤減小是在以MiaPaCa－2胰臟腫瘤細胞異種移植的小鼠中，在靜脈注射10 mg/kg/劑的4－臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)或CPT－11共5天之後的第4、8、11、15、18及22天而測量。CPT 11也給藥40 mg/kg/劑共5天。結果是列於第10圖。4－臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)的多劑投予顯示比CPT－11明顯的治療功效。結果顯示多劑的4－臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)是比CPT－11更有效於治療胰臟癌。以多劑的4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)之治療導致95%的TGI，而CPT－11則導致34%的TGI。
實施例31：試管內的代謝 PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)共軛物的試管內代謝是在大鼠肝細胞中觀察。將PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)與大鼠肝細胞在pH 7.5、37℃培養2小時。如第11圖所示，7－乙基－10－羥喜樹鹼及7－乙基－10－羥喜樹鹼－葡萄糖苷酸(7－乙基－10－羥喜樹鹼－G)是被鑑定出的主要代謝物，其與7－乙基－10－羥喜樹鹼在活體內的已知代謝途徑一致。
實施例32：PEG共軛物的性質 表6顯示四種不同PEG－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)共軛物在水溶性鹽溶液中的溶解度。所有的4－臂PEG－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)共軛物都顯示達4 mg/mL 7－乙基－10－羥喜樹鹼的當量之優異溶解度。在人類血漿中，7－乙基－10－羥喜樹鹼是從PEG共軛物中以22至52分鐘的倍增時間而穩定釋放，以及釋放似乎是pH及濃度依賴性的，如同在以下實施例33中之說明。
在室溫時，PEG－7－乙基－10－羥喜樹鹼共軛物在鹽溶液及其他水溶性媒介中顯示優異的穩定性達24小時。
實施例33：濃度及pH對於穩定性的影響 根據我們先前的成果，在20－OH位置處的醯化可以活性封閉的形式保護內酯環。在大鼠及人類血漿中的水溶性穩定性及水解性質，是利用UV為基礎的HPLC方法而監測。將4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)共軛物與每個樣品在室溫培養5分鐘。
PEG－7－乙基－10－羥喜樹鹼共軛物在緩衝溶液中的穩定性是pH依賴性的。第12圖顯示4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)在各種樣品中的穩定性。第13圖顯示7－乙基－10－羥喜樹鹼從PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)釋放的速率是隨著pH的增加而增加。
實施例34：藥物動力學 以單一注射20 mg/kg的4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)共軛物注射無腫瘤的Balb/C小鼠。在各個時間點，使老鼠犧牲，並且藉由HPLC分析血漿的完整共軛物以及釋放的7－乙基－10－羥喜樹鹼。藥物動力學分析是利用無分隔分析(Non－Compartmental Analysis，WinNonlin)而完成。細節列於表7。
如第14圖所示，7－乙基－10－羥喜樹鹼的聚乙二醇化使天然藥物7－乙基－10－羥喜樹鹼有長的循環半生期以及高度暴露。4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)共軛物的腸肝循環也被觀察。PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)在小鼠中的藥物動力學紀錄是雙相的，顯示在一開始2小時期間的快速血漿分佈期，然後是18－22小時對於共軛物的終端排除半生期以及伴隨的18－26小時對於7－乙基－10－羥喜樹鹼的終端消除半生期。
此外，4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)的藥物動力學曲線也在大鼠中研究。在大鼠中，係使用3、10及30 mg/kg(7－乙基－10－羥喜樹鹼當量)的劑量水平。在大鼠中的藥物動力學曲線是與小鼠的藥物動力學紀錄一致。
在大鼠中，4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)顯示從循環中的雙相清除，而在大鼠中具有12－18小時的排除半生期。從4臂PEG－Gly－7－乙基－10－羥喜樹鹼共軛物中釋放的7－乙基－10－羥喜樹鹼具有21－22小時顯著排除半生期。最大血漿濃度(Cmax )以及曲線下的面積(AUC)在大鼠中是以劑量依賴性的方式增加。在小鼠或大鼠中從4臂PEG－Gly共軛物中釋放的7－乙基－10－羥喜樹鹼之顯著半生期，是比從CPT－11中釋放的7－乙基－10－羥喜樹鹼之報導的顯著半生期明顯更長，以及從4臂PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)釋放的7－乙基－10－羥喜樹鹼之暴露，是比從CPT－11中釋放的7－乙基－10－羥喜樹鹼之報導的暴露明顯更高。母體化合物在大鼠中的清除是0.35 mL/hr/kg。母體化合物在穩定態之估計的分佈體積(Vss)是5.49 mL/kg。在大鼠中釋放的7－乙基－10－羥喜樹鹼之清除是131 mL/hr/kg。在大鼠中釋放的7－乙基－10－羥喜樹鹼之估計的Vss是2384 mL/kg。釋放的7－乙基－10－羥喜樹鹼之腸肝循環是在小鼠及大鼠中觀察到。
第1圖概要地說明製備4臂聚乙二醇酸的反應方案。
第2圖概要地說明製備在實施例3－7中所說明的4臂－PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)之反應方案。
第3圖概要地說明製備在實施例8－12中所說明的4臂－PEG－Ala－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)之反應方案。
第4圖概要地說明製備在實施例13－16中所說明的4臂－PEG－Met－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)之反應方案。
第5圖概要地說明製備在實施例17－21中所說明的4臂－PEG－Sar－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)之反應方案。
第6圖顯示在實施例26所說明的大MX－1乳房腫瘤異種移植小鼠中的單一劑及多劑功效。
第7圖顯示在實施例27所說明的HT－29結腸直腸腫瘤異種移植小鼠中的單一劑功效。
第8圖顯示在實施例28所說明的HT－29結腸直腸腫瘤異種移植小鼠中的多劑功效。
第9圖顯示在實施例29所說明的MiaPaCa－2胰臟腫瘤異種移植小鼠中的單一劑功效。
第10圖顯示在實施例30所說明的MiaPaCa－2胰臟腫瘤異種移植小鼠中的多劑功效。
第11圖顯示如實施例31中所說明的4臂－PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)之試管內代謝。
第12圖顯示如實施例33中所說明的4臂－PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)之穩定性。
第13圖顯示pH對於如實施例33中所說明的4臂－PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)之穩定性的影響。
第14圖顯示如實施例34中所說明的4臂－PEG－Gly－(7－乙基－10－羥喜樹鹼)之藥物動力曲線。

Claims (25)

  1. 一種式(I)化合物： 其中R1 、R2 、R3 及R4 獨立地是OH或(L)m -D；L是雙功能性的連接子，其係選自由胺基酸或胺基酸衍生物之殘基、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 O)t -、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 O)t (CR24 R25 )y O-、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 O)t (CR24 R25 )y -、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 )t O-、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 )t (CR24 CR25 O)y NR26 -、-[C(I)]v O(CR22 R23 )t NR26 -、-[C(O)]v O(CR22 R23 )t O-、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 )t NR26 -、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 )t (CR24 CR25 O)y -、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 O)t (CR24 CR25 )y NR26 -、 及所組成之群；其中：該胺基酸衍生物係選自由2-胺基己二酸、3-胺基己二酸、β-丙胺酸、β-胺基丙酸、2-胺基丁酸、4-胺基丁酸、哌啶酸、6-胺基己酸、2-胺基庚酸、2-胺基異丁酸、3-胺基異丁酸、2-胺基庚二酸、2,4-二胺基丁酸、鎖鏈離胺素(desmosine)、2,2-二胺基庚二酸、2,3-二胺基丙酸、N-乙基甘胺酸、N-乙基天冬醯胺酸、3-羥基脯胺酸、4-羥基脯胺酸、異鎖鏈離胺素(isodesmosine)、別-異白胺酸、N-甲基甘胺酸、肌胺酸、N-甲基異白胺酸、γ-N-甲基離胺酸、N-甲基纈胺酸、正纈胺酸、正白胺酸及鳥胺酸所組成之群；R21 -R26 是獨立地選自由氫、C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C3-19 分支的烷基、C3-8 環烷基、C1-6 經取代的烷基、C2-6 經取代的烯基、C2-6 經取代的炔基、C3-8 經取代的環烷基、芳基、經取代的芳基、芳烷基、C1-6 雜烷基、經取代的C1-6 雜烷基、C1-6 烷氧基、苯氧基以及C1-6 雜烷氧基所組成的之群； R27 是選自由氫、C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C3-19 分支的烷基、C3-8 環烷基、C1-6 經取代的烷基、C2-6 經取代的烯基、C2-6 經取代的炔基、C3-8 經取代的環烷基、芳基、經取代的芳基、芳烷基、C1-6 雜烷基、經取代的C1-6 雜烷基、C1-6 烷氧基、苯氧基、C1-6 雜烷氧基、NO2 、鹵烷基以及鹵素所組成之群；t及y各自獨立地是選自從1到4之的正整數；以及v是0或1；D是喜樹鹼或式(II)化合物的殘基 其中R7 是選自由NO2 、NH2 、N3 、氫、鹵素、F、Cl、Br、I、COOH、OH、O-C1-8 烷基、SH、S-C1-3 烷基、CN、CH2 NH2 、NH-C1-3 烷基、CH2 -NH-C1-3 烷基、N(C1-3 烷基)2 、CH2 N(C1-3 烷基)2 、O-、NH-及S-CH2 CH2 N(CH2 CH2 OH)2 、O-、NH-及S-CH2 CH2 CH2 N(CH2 CH2 OH)2 、O-、NH-及S-CH2 CH2 N(CH2 CH2 CH2 OH)2 、O-、NH-及S-CH2 CH2 CH2 N(CH2 CH2 CH2 OH)2 、O-、NH-及S-CH2 CH2 N(C1-3 烷基)2 、O-、NH-及S-CH2 CH2 CH2 N(C1-3 烷基)2 、CHO以及C1-3 烷基 所組成之群；以及R8 是選自由H、C1-8 烷基以及CH2 NR9 R10 所組成之群；其中R9 是選自由氫、C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C3-7 環烷基-C1-6 烷基、C2-6 烯基、羥基-C1-6 烷基、以及C1-6 烷氧基-C1-6 烷基所組成之群；R10 是選自由氫、C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C3-7 環烷基-C1-6 烷基、C2-6 烯基、羥基-C1-6 烷基、C1-6 烷氧基-C1-6 烷基、以及COR11 所組成之群；其中R11 是選自由氫、C1-6 烷基、過鹵-C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C3-7 環烷基-C1-6 烷基、C2-6 烯基、羥基-C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、以及C1-6 烷氧基-C1-6 烷基所組成之群；或R9 、R10 、及B環的氮形成飽和的3-7員雜環，其包含O、S或NR12 ；其中R12 是選自由氫、C1-6 烷基、過鹵-C1-6 烷基、芳基、經選自由C1-6 烷基、鹵素、硝基、胺基、C1-6 烷胺基、過鹵-C1-6 烷基、羥基-C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 烷氧基-C1-6 烷基以及COR13 所組成之群之一個或多個基團取代的芳基所組成之群，其中R13 是選自由氫、C1-6 烷基、過鹵-C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、芳基、及以一個或多個C1-6 烷基、過鹵-C1-6 烷基、羥基-C1-6 烷基、以及C1-6 烷氧基-C1-6 烷基取代的芳基所組成之群；R110 -R111 各自獨立地是選自由氫、鹵素、醯基、烷基、經取代的烷基、烷氧基、經取代的烷氧基、烯基、炔基、 環烷基、羥基、氰基、硝基、疊氮基、醯胺基、肼、胺基、經取代的胺基、羥羰基、烷氧羰基、烷羰氧基、烷羰胺基、氨基甲醯氧基、芳磺醯氧基、烷磺醯氧基、-C(R117 )=N-(O)j -R118 ，其中R117 是H、烷基、烯基、環烷基、或芳基，j是0或1，以及R118 是H、烷基、烯基、環烷基、或雜環、R119 C(O)O-，其中R119 是鹵素、胺基、經取代的胺基、雜環、經取代的雜環、以及R120 -O-(CH2 )k -，其中k是1-10的整數以及R120 是烷基、苯基、經取代的苯基、環烷基、經取代的環烷基、雜環或經取代的雜環所組成之群；或R7 與R110 或R110 與R111 一起形成經取代或未經取代的亞甲二氧基、伸乙二氧基或乙烯氧基；以及R112 是H或OR’，其中R’是烷基、烯基、環烷基、鹵烷基、或羥烷基；m是從1至10之正整數；以及n是從28至341之正整數；限制條件為R1 、R2 、R3 及R4 不全是OH。
  2. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中該式(II)化合物的殘基是
  3. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中L是甘胺酸、丙胺酸、甲硫胺酸或肌胺酸的殘基。
  4. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中L是甘胺酸的殘基。
  5. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中m是1。
  6. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中n是從114到227以使化合物之聚合性部分之總分子量範圍在從20,000至40,000道耳頓之間。
  7. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中n是227以使化合物之聚合性部分之總分子量係40,000道耳頓。
  8. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中R1 、R2 、R3 與R4 是(L)m -D。
  9. 如申請專利範圍第1項之化合物，係選自由以下所組成之群： 以及 。
  10. 如申請專利範圍第1項之化合物，其具有式 。
  11. 如申請專利範圍第1項之化合物，其用作為醫藥品。
  12. 如申請專利範圍第11項之化合物，其中D是7-乙基-10-羥喜樹鹼的殘基。
  13. 一種有效量的如申請專利範圍第1項之化合物之用途，其用於製備供治療癌症之用的醫藥品。
  14. 如申請專利範圍第13項之用途，其中該癌症係選自由固態腫瘤、淋巴瘤、肺癌、急性淋巴細胞白血病(ALL)、乳癌、結腸直腸癌、胰臟癌、神經膠母細胞瘤、卵巢癌以及胃癌所組成的群。
  15. 如申請專利範圍第13項之用途，其中該癌症係小細胞肺癌。
  16. 如申請專利範圍第13項之用途，其中該癌症係轉 移性的。
  17. 如申請專利範圍第13項之用途，其中D係7-乙基-10-羥喜樹鹼之殘基且該化合物是以從約1mg/kg/週至約100mg/kg/週的量而投予，其中該量係化合物中所包含的7-乙基-10-羥喜樹鹼之重量。
  18. 如申請專利範圍第13項之用途，其中D係7-乙基-10-羥喜樹鹼之殘基且該化合物是以從約2mg/kg/週至約60mg/kg/週的量而投予，其中該量係化合物中所包含的7-乙基-10-羥喜樹鹼之重量。
  19. 如申請專利範圍第13項之用途，其中該癌症是乳癌以及如申請專利範圍第1項之化合物是 。
  20. 如申請專利範圍第19項之用途，其中化合物是以從約5至約20mg/kg/劑的量而投予，其中該量係化合物中所包含的7-乙基-10-羥喜樹鹼之重量。
  21. 如申請專利範圍第13項之用途，其中該癌症是結腸直腸癌，以及如申請專利範圍第1項之化合物是 。
  22. 如申請專利範圍第21項之用途，其中化合物是以從約10至約30mg/kg/劑的量而投予，其中該量係化合物中所包含的7-乙基-10-羥喜樹鹼之重量。
  23. 如申請專利範圍第13項之用途，其中該癌症是胰臟癌，以及如申請專利範圍第1項之化合物是 。
  24. 如申請專利範圍第23項之用途，其中化合物是以從約10至約30mg/kg/劑的量而投予，其中該量係化合物中所包含的7-乙基-10-羥喜樹鹼之重量。
  25. 一種製備多臂聚合性前藥之方法，其包括：(a)將一當量包含可利用的20-羥基之喜樹鹼或喜樹鹼類似物，與一或多當量包含可利用的羧酸基團之雙功能性連接子，在可有效形成具有可利用的胺基基團之喜樹鹼-雙功能性連接子中間產物的條件下反應；以及(b)將每個活性位置一或多當量的自步驟(a)所得中 間產物，與一當量式(I)之活化的聚合物，其中式(I)是 在可有效形成多臂聚合性前藥的條件下反應，該多臂聚合性前藥具有結構 其中R1 、R2 、R3 及R4 獨立地是OH或(L)m -D；L是雙功能性的連接子，其係選自由胺基酸或胺基酸衍生物之殘基、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 O)t -、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 O)t (CR24 R25 )y O-、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 O)t (CR24 R25 )y -、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 )t O-、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 )t (CR24 CR25 O)y NR26 -、-[C(O)]v O(CR22 R23 )t NR26 -、 -[C(O)]v O(CR22 R23 )t O-、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 )t NR26 -、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 )t (CR24 CR25 O)y -、-[C(O)]v NR21 (CR22 R23 O)t (CR24 CR25 )y NR26 -、 及所組成之群；其中該胺基酸衍生物係選自由2-胺基己二酸、3-胺基己二酸、β-丙胺酸、β-胺基丙酸、2-胺基丁酸、4-胺基丁酸、哌啶酸、6-胺基己酸、2-胺基庚酸、2-胺基異丁酸、3-胺基異丁酸、2-胺基庚二酸、2,4-二胺基丁酸、鎖鏈離胺素、2,2-二胺基庚二酸、2,3-二胺基丙酸、N-乙基甘胺酸、N-乙基天冬醯胺酸、3-羥基脯胺酸、4-羥基脯胺酸、異鎖鏈離胺素、別-異白胺酸、N-甲基甘胺酸、肌胺酸、N-甲基異白胺酸、γ-N-甲基離胺酸、N-甲基纈胺酸、正纈胺酸、正白胺酸及鳥胺酸所組成之群；R21 -R26 是獨立地選自由氫、C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C3-19 分支的烷基、C3-8 環烷基、C1-6 經取代的烷基、 C2-6 經取代的烯基、C2-6 經取代的炔基、C3-8 經取代的環烷基、芳基、經取代的芳基、芳烷基、C1-6 雜烷基、經取代的C1-6 雜烷基、C1-6 烷氧基、苯氧基以及C1-6 雜烷氧基所組成之群；R27 是選自由氫、C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C3-19 分支的烷基、C3-8 環烷基、C1-6 經取代的烷基、C2-6 經取代的烯基、C2-6 經取代的炔基、C3-8 經取代的環烷基、芳基、經取代的芳基、芳烷基、C1-6 雜烷基、經取代的C1-6 雜烷基、C1-6 烷氧基、苯氧基、C1-6 雜烷氧基、NO2 、鹵烷基以及鹵素所組成之群；t及y各自獨立地是選自從1到4之正整數；以及v是0或1；D是喜樹鹼或式(II)化合物的殘基 其中R7 是選自由NO2 、NH2 、N3 、氫、鹵素、F、Cl、Br、I、COOH、OH、O-C1-8 烷基、SH、S-C1-3 烷基、CN、CH2 NH2 、NH-C1-3 烷基、CH2 -NH-C1-3 烷基、N(C1-3 烷基)2 、CH2 N(C1-3 烷基)2 、O-、NH-及S-CH2 CH2 N(CH2 CH2 OH)2 、O-、NH-及S-CH2 CH2 CH2 N(CH2 CH2 OH)2 、 O-、NH-及S-CH2 CH2 N(CH2 CH2 CH2 OH)2 、O-、NH-及S-CH2 CH2 CH2 N(CH2 CH2 CH2 OH)2 、O-、NH-及S-CH2 CH2 N(C1-3 烷基)2 、O-、NH-及S-CH2 CH2 CH2 N(C1-3 烷基)2 、CHO以及C1-3 烷基所組成之群；以及R8 是選自由H、C1-8 烷基以及CH2 NR9 R10 所組成之群；其中R9 是選自由氫、C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C3-7 環烷基-C1-6 烷基、C2-6 烯基、羥基-C1-6 烷基、以及C1-6 烷氧基-C1-6 烷基所組成之群；R10 是選自由氫、C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C3-7 環烷基-C1-6 烷基、C2-6 烯基、羥基-C1-6 烷基、C1-6 烷氧基-C1-6 烷基、以及COR11 所組成之群；其中R11 是選自由氫、C1-6 烷基、過鹵-C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C3-7 環烷基-C1-6 烷基、C2-6 烯基、羥基-C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、以及C1-6 烷氧基-C1-6 烷基所組成之群；或R9 、R10 、及B環的氮形成飽和的3-7員雜環，其包含O、S或NR12 ；其中R12 是選自由氫、C1-6 烷基、過鹵-C1-6 烷基、芳基、經選自由C1-6 烷基、鹵素、硝基、胺基、C1-6 烷胺基、過鹵-C1-6 烷基、羥基-C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 烷氧基-C1-6 烷基以及-COR13 所組成之群之一個或多個基團取代的芳基所組成之群，其中R13 是選自由氫、C1-6 烷基、過鹵-C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、芳基、及以一個或多個C1-6 烷基、過鹵 -C1-6 烷基、羥基-C1-6 烷基、以及C1-6 烷氧基-C1-6 烷基取代的芳基所組成之群；R110 -R111 各自獨立地是選自由氫、鹵素、醯基、烷基、經取代的烷基、烷氧基、經取代的烷氧基、烯基、炔基、環烷基、羥基、氰基、硝基、疊氮基、醯胺基、肼、胺基、經取代的胺基、羥羰基、烷氧羰基、烷羰氧基、烷羰胺基、氨基甲醯氧基、芳磺醯氧基、烷磺醯氧基、-C(R117 )=N-(O)j -R118 ，其中R117 是H、烷基、烯基、環烷基、或芳基，j是0或1，以及R118 是H、烷基、烯基、環烷基、或雜環、R119 C(O)O-，其中R119 是鹵素、胺基、經取代的胺基、雜環、經取代的雜環、以及R120 -O-(CH2 )k -，其中k是1-10的整數以及R120 是烷基、苯基、經取代的苯基、環烷基、經取代的環烷基、雜環或經取代的雜環所組成之群；或R7 與R110 或R110 與R111 一起形成經取代或未經取代的亞甲二氧基、伸乙二氧基或乙烯氧基；以及R112 是H或OR’，其中R’是烷基、烯基、環烷基、鹵烷基、或羥烷基；m是從1至10之正整數；以及n是從28至341之正整數；限制條件為R1 、R2 、R3 及R4 不全是OH。
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Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7462627B2 (en) 2006-02-09 2008-12-09 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Multi-arm polymeric conjugates of 7-ethyl-10-hydroxycamptothecin for treatment of breast, colorectal, pancreatic, ovarian and lung cancers
US7671067B2 (en) 2006-02-09 2010-03-02 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Treatment of non-hodgkin's lymphomas with multi-arm polymeric conjugates of 7-ethyl-10-hydroxycamtothecin
MX2009008549A (es) 2007-02-09 2009-08-18 Enzon Pharmaceuticals Inc Tratamiento de canceres resistentes o refractarios con conjugados polimericos de brazos multiples de 7-etil-10-hidroxicamptotecina.
US20100056555A1 (en) * 2008-08-29 2010-03-04 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Method of treating ras associated cancer
CN102215688A (zh) * 2008-10-21 2011-10-12 安龙制药公司 用7-乙基-10-羟基喜树碱的多臂聚合物对神经母细胞瘤的治疗
EP2419102A4 (en) * 2009-04-17 2013-06-12 Enzon Pharmaceuticals Inc PROCESS FOR INHIBITING ANGIOGENESIS WITH MULTICOLOR POLYMER CONJUGATES FROM 7-ETHYL-10-HYDROXYCAMPTOTHECIN
EP2771034B1 (en) 2011-10-25 2018-08-08 Nektar Therapeutics Topoisomerase-i and-ii inhibitors for use in the treatment of patients suffering from cancer
ES2731725T3 (es) 2012-11-28 2019-11-18 Nektar Therapeutics Método para evaluar y predecir la eficacia del tratamiento del cáncer de mama con un inhibidor de la topoisomerasa I de acción prolongada
EP3004888A1 (en) 2013-05-31 2016-04-13 Nektar Therapeutics Method for predicting and evaluating responsiveness to cancer treatment with dna-damaging chemotherapeutic agents
CN104650342B (zh) * 2013-11-18 2018-07-10 江苏豪森药业集团有限公司 多支链聚合药物前体及其应用
KR102501566B1 (ko) 2014-01-14 2023-02-17 넥타르 테라퓨틱스 병용 기반 치료 방법
CN110448533B (zh) * 2014-12-05 2022-03-29 天津键凯科技有限公司 一种聚乙二醇修饰的喜树碱类衍生物的药物组合物及其制备方法
CN106831853B (zh) * 2017-02-15 2019-02-22 浙江海正药业股份有限公司 7-乙基-10-o-叔丁基二苯基硅基喜树碱-20-o-甘氨酸盐酸盐的制备工艺
CN108727584B (zh) * 2017-04-21 2021-01-05 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 抗癌偶联物
CN108727583B (zh) * 2017-04-21 2022-03-22 高瑞耀业(北京)科技有限公司 多臂靶向抗癌偶联物
CN108164419B (zh) * 2017-12-25 2021-03-16 武汉大学 单分散聚乙二醇单甲醚修饰的丙泊酚前药的制备与应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050112088A1 (en) * 2003-09-17 2005-05-26 Xuan Zhao Multi-arm polymer prodrugs

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5880131A (en) * 1993-10-20 1999-03-09 Enzon, Inc. High molecular weight polymer-based prodrugs
IL128610A (en) * 1996-08-30 2004-07-25 Lilly Co Eli Cryptophycin compound and its use as a medicament for treating neoplasm
US20040009229A1 (en) * 2000-01-05 2004-01-15 Unger Evan Charles Stabilized nanoparticle formulations of camptotheca derivatives
US6548488B2 (en) * 2000-03-17 2003-04-15 Aventis Pharma S.A. Composition comprising camptothecin or a camptothecin derivative and an alkylating agent for the treatment of cancer
US7132423B2 (en) * 2001-09-21 2006-11-07 Reddy Us Therapeutics, Inc. Methods and compositions of novel triazine compounds
WO2004063200A1 (en) * 2003-01-16 2004-07-29 Techno Mart Co., Ltd Porphyrin derivatives
DE10307787A1 (de) * 2003-02-24 2004-09-02 Ktb Tumorforschungsgesellschaft Mbh Protein-bindende Camptothecin-Derivate
NZ542475A (en) * 2003-04-03 2009-04-30 Semafore Pharmaceuticals Inc PI-3 kinase inhibitor prodrugs
SI3345895T1 (sl) * 2003-04-11 2020-03-31 Ptc Therapeutics, Inc. Spojina 1,2,4-oksadiazol benzojske kisline in njena uporaba za supresijo nesmiselne in zdravljenje bolezni
TWI334868B (en) * 2003-06-03 2010-12-21 Nippon Kayaku Kk [1,2,4] triazoro [1,5-a] pyrimidine-2-ylurea derivative and use thereof
US20040247624A1 (en) * 2003-06-05 2004-12-09 Unger Evan Charles Methods of making pharmaceutical formulations for the delivery of drugs having low aqueous solubility
WO2005068424A1 (en) * 2004-01-20 2005-07-28 Cell Therapeutics Europe S.R.L. Indolinone derivatives as receptor tyrosine kinase ihibitors
TW200530236A (en) * 2004-02-23 2005-09-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Heteroaryl phenylurea
ITRM20040239A1 (it) * 2004-05-13 2004-08-13 Sigma Tau Ind Farmaceuti Derivati ciclopeptidici ad attivita' antintegrine.

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050112088A1 (en) * 2003-09-17 2005-05-26 Xuan Zhao Multi-arm polymer prodrugs

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