JPH10147586A - ２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−１ −イル）−１，３−オキサチオランの抗ウィルス活性およ び分割 - Google Patents
２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−１ −イル）−１，３−オキサチオランの抗ウィルス活性およ び分割Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ヒトにおけるＨＩＶまたはＨＢＶ感染の治療
に有効な化合物を提供すること及びヌクレオシド鏡像異
性体のラセミ混合物の分割方法を提供すること。 【解決手段】 ２−ヒドロキシメチル−５−（５−フル
オロシトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン、
５′またはＮ４のアルキル化またはアシル化誘導体、そ
の製造方法、薬学的に受容可能な担体中にこれらの化合
物、その薬学的に受容可能な誘導体、もしくはその薬学
的に受容可能な塩の有効量を含むヒトにおけるＨＩＶま
たはＨＢＶ感染の治療のための組成物及びそれによる治
療方法。及び、ラセミ混合物を、一方の鏡像異性体にお
いて反応を優先的に触媒する酵素に曝す工程を包含する
ヌクレオシド鏡像異性体のラセミ混合物を分割する方
法。
に有効な化合物を提供すること及びヌクレオシド鏡像異
性体のラセミ混合物の分割方法を提供すること。 【解決手段】 ２−ヒドロキシメチル−５−（５−フル
オロシトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン、
５′またはＮ４のアルキル化またはアシル化誘導体、そ
の製造方法、薬学的に受容可能な担体中にこれらの化合
物、その薬学的に受容可能な誘導体、もしくはその薬学
的に受容可能な塩の有効量を含むヒトにおけるＨＩＶま
たはＨＢＶ感染の治療のための組成物及びそれによる治
療方法。及び、ラセミ混合物を、一方の鏡像異性体にお
いて反応を優先的に触媒する酵素に曝す工程を包含する
ヌクレオシド鏡像異性体のラセミ混合物を分割する方
法。
Description
【発明の詳細な説明】 本発明は生物活性なヌクレオシドの分野に関し、特に、
２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−
１−イル）−１，３−オキサチオラン（「ＦＴＣ」）、
その生理的に受容可能な誘導体、または生理的に受容可
能な塩を含む抗ウィルス性組成物、ならびにＦＴＣの
（−）−β−Ｌおよび（＋）−β−Ｄの鏡像異性体の分
割および使用の方法を包含する。１９８１年、後天性免
疫不全症候群（ＡＩＤＳ）が、ヒト免疫系を著しく狂わ
せ、ほとんど例外なく死に至らしめる疾病として認定さ
れた。１９８３年に、ＡＩＤＳの病因はヒト免疫不全ウ
ィルス（ＨＩＶ）であると確定された。世界保健機構
（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏ
ｎ）は、１９９０年１２月までには全世界で８００万か
ら１０００万人がＨＩＶに感染し、その中の１００万か
ら１４０万人が米国にいると概算した。１９８５年、合
成ヌクレオシド３’−アジド−３’−デオキシチミジン
（ＡＺＴ）がヒト免疫不全ウィルスの複製を阻害するこ
とが報告された。以後、２’，３’−ジデオキシイノシ
ン（ＤＤＩ）、２’，３’−ジデオキシシチジン（ＤＤ
Ｃ）、３’−フルオロ−３’−デオキシチミジン（ＦＬ
Ｔ）、および２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジ
デヒドロチミジン（Ｄ４Ｔ）を含む多数の他の合成ヌク
レオチドが、ＨＩＶに対して有効であることが証明され
ている。多数の他の２’，３’−ジデオキシヌクレオシ
ドが、種々のウィルスの増殖をインビトロで阻害するこ
とが証明されている。細胞のキナーゼにより５’−トリ
リン酸に細胞によるリン酸化がなされた後、これらの合
成ヌクレオシドは成長中のウィルスＤＮＡ鎖に取り込ま
れるが、３’−ヒドロキシル基がないために鎖の合成が
そこで止まると考えられる。種々の２’，３’−ジデオ
キシヌクレオシドがＨＩＶの複製をインビボまたはイン
ビトロで阻害することに成功したことから、多数の研究
者がヌクレオシドの３’位の炭素原子をヘテロ原子に置
換したヌクレオシドを作成し、試験した。Ｎｏｒｂｅｃ
ｋらは、（±）−１−［（２β，４β）−２−（ヒドロ
キシメチル）−４−ジオキソールアニル］チミン
（（±）−ジオキソラン−Ｔと呼ぶ）がＨＩＶに対する
中程度の活性を示し（ＡＴＨ８細胞におけるＥＣ５０は
２０μｍ）、非感染対照の細胞に対しては２００μＭの
濃度で毒性を示さないことを開示する。Ｔｅｔｒａｈｅ
ｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ３０（４６），６２４６，
（１９８９）。ＩＡＦ ＢｉｏＣｈｅｍ Ｉｎｔｅｒｎ
ａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．に譲渡された欧州特許出願公
開第０ ３３７ ７１３号および米国特許第５，０４
１，４４９号は、抗ウィルス活性を示す２−置換−４−
置換−１，３−ジオキソランを開示する。やはりＩＡＦ
Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎ
ｃ．に譲渡された米国特許第５，０４７，４０７号およ
び欧州特許出願公開第０ ３８２５２６号は、抗ウィル
ス活性を有する多数の２−置換−５−置換−１，３−オ
キサチオランヌクレオシドを開示し、そして特に２−ヒ
ドロキシメチル−５−（シトシン−１−イル）−１，３
−オキサチオランのＣ１’−β異性体のラセミ混合物
（Ｃ４’−位に関する）（以下（±）−ＢＣＨ−１８９
と呼ぶ）がＡＺＴとほぼ同程度の抗ＨＩＶ活性を有し、
試験されたレベルでは細胞毒性を有さないことを報告す
る。（±）−ＢＣＨ−１８９はまた、３６週間以上にわ
たってＡＺＴによる治療を受けている患者から単離され
たＡＺＴ−耐性ＨＩＶの複製をインビトロで阻害するこ
とがわかった。ヒトの健康に関しての深刻な問題を引き
起こす他のウィルスは、Ｂ型肝炎ウィルス（以下「ＨＢ
Ｖ」と呼ぶ）である。ＨＢＶはタバコに次ぐ２番目の、
ヒトの癌の原因である。ＨＢＶが癌を誘導するメカニズ
ムは不明であるが、腫瘍の発達の直接の引金であり得る
か、または感染に伴って生じる慢性の炎症、肝硬変、お
よび細胞の再生を介して間接的に腫瘍の発生を誘導し得
ると考えられる。宿主が感染に気付かない２から６カ月
間の潜伏期間の後、ＨＢＶ感染は急性肝炎および肝障害
を引き起こし、腹部痛、黄疸、およびいくつかの酵素の
血中レベル上昇の原因となる。ＨＢＶは激症肝炎を引き
起こし得る。この激症肝炎は進行が速く、この疾病のし
ばしば致命的な形態であり、肝臓の大部分が破壊され
る。通常、患者は急性肝炎から回復する。しかしなが
ら、何人かの患者では、長期または不定の期間、高レベ
ルのウィルス性抗原が血中に維持されて慢性感染の原因
となる。慢性感染は慢性持続性肝炎となり得る。慢性持
続性ＨＢＶの感染患者は、発展途上国において最も一般
的である。１９９１年中ごろには、アジアだけで約２億
２千５００万人のＨＢＶの慢性キャリアが、そして世界
中ではほぼ３億人のキャリアが存在した。慢性持続性肝
炎は疲労、肝硬変、および肝細胞癌、すなわち初期の肝
臓癌を引き起こし得る。西側工業国では、ＨＢＶ感染の
危険性の高い集団は、ＨＢＶキャリアまたは彼らの血液
試料と接触した者を含む。ＨＢＶの疫学は後天性免疫不
全症候群の疫学と極めて類似しており、ＡＩＤＳまたは
ＡＩＤＳ関連複合症の患者の間でＨＢＶ感染が一般的で
ある理由が説明される。しかし、ＨＢＶはＨＩＶよりも
より伝染性である。ヒト血清由来のワクチンが、ＨＢＶ
に対する免疫を患者に付与するために開発されている。
それは効果的ではあったが、慢性キャリアからのヒト血
清の供給に限りがあり、そして精製操作は時間がかかり
かつ高価であるため、ワクチンの製造は問題点が多い。
さらに、異なる血清から調製されたワクチンのそれぞれ
のバッチは、安全性確認のためチンパンジーで試験しな
ければならない。ワクチンはまた、遺伝子工学によって
生産されている。遺伝子工学で生産されたタンパク質で
あるα−インターフェロンの連日投与もまた、有望であ
る。しかしながら、このウィルスの複製を有効に阻害す
る薬剤は、現在まで知られていない。薬学的目的のため
にヌクレオシドを市販するには、低毒性で薬効があるだ
けではなく、工業生産のために、コストにおいて効果的
でなければならない。ヌクレオシドを大量生産するため
の新規な低コストの工程を目的として多くの研究および
開発が行われた。２’，３’−ジデオキシヌクレオシド
は、現在次の２つの方法のいずれかを用いて調製されて
いる：無傷のヌクレオシドの誘導化またはヘテロサイク
リック塩基と誘導化糖部分との縮合。無傷のヌクレオシ
ドを改変して新しいヌクレオシドアナログを得ることは
多くの欠点を伴うが、この方法の大きな利点は、適切な
絶対的な立体化学が天然によってすでに決っていること
である。しかしながら、この方法は、例えば１，３−オ
キサチオランヌクレオシドおよび１，３−ジオキソラン
ヌクレオシドのような、天然に存在しない塩基または天
然に存在しない炭水化物残基を含むヌクレオシド（従っ
てそれは無傷のヌクレオシドから調製されない）の生産
には用いられ得ない。合成ヌクレオシドを形成するため
にヘテロサイクリック塩基と炭水化物または炭水化物様
部分とを縮合する場合、２つのキラル中心（Ｃ１’およ
びＣ４’−位）が存在し、従ってジアステレオマー対と
して存在するヌクレオシドが生産される。それぞれのジ
アステレオマーは鏡像異性体の組として存在する。それ
ゆえ、生成物は４つの鏡像異性体の混合物である。Ｃ
１’またはＣ４’−位における天然に存在しない立体化
学を有するヌクレオシドは、天然に決まった立体化学を
有する同一のヌクレオシドよりも活性が低いことが、し
ばしば見いだされている。例えば、Ｃａｒｔｅｒらは、
逆転写酵素活性を５０％まで低減するために必要な、細
胞培養物中のカルボビル（ｃａｒｂｏｖｉｒ）（２’，
３’−ジデヒドロ−２’，３’−ジデオキシグアノシ
ン）の（−）−鏡像異性体の濃度（ＥＣ５０）は０．８
μＭであり、それに対してカルボビルの（＋）−鏡像異
性体のＥＣ５０は６０μＭより大きいことを報告してい
る。Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎ
ｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、３４：６、１２９７−
１３００（１９９０年６月）。ＰＣＴ国際公報番号ＷＯ
９１／１１１８６は、縮合工程で用いられるルイス酸
を注意して選択することにより、１，３−オキサチオラ
ンヌクレオシドが高いジアステレオ選択性（Ｃ１’−炭
素からヘテロサイクリック塩基への結合がβ立体配置を
有するヌクレオシドの高いパーセンテージ）を伴って調
製され得ることを開示する。塩化第二スズを縮合触媒と
して用いるとき、塩基との１，３−オキサチオランヌク
レオシドの縮合がほぼ完全なβ−立体特異性を伴って起
こることがわかった。他のルイス酸は、低い（または全
くない）Ｃ１’−β選択性をもたらすか、または反応を
触媒できないかである。後天性免疫不全症候群、ＡＩＤ
Ｓ関連複合症、およびＢ型肝炎ウィルスが世界規模の流
行の水準に達しており、そして感染患者に悲惨な作用を
有することを考慮して、これらの疾病を治療するため
の、宿主に対して低毒性の新規な有効な薬剤の提供が、
強く望まれている。また、薬学的に重要なヌクレオシド
を生産するための、コストにおいて効果的な、商業的に
実行可能な方法を提供すること、そして特に、炭水化物
様部分と塩基とを縮合して調製される合成ヌクレオシド
のＣ４’−位におけるβ−立体特異性を達成することが
望まれている。従って、本発明の１つの目的は、ＨＩＶ
に感染したヒト患者の治療のための方法および組成物を
提供することである。本発明の他の目的は、ＨＢＶに感
染したヒト患者および他の宿主動物の治療のための方法
および組成物を提供することである。本発明のさらに他
の目的は、鏡像異性的に濃縮された１，３−オキサチオ
ランヌクレオシドを提供することである。本発明のさら
に他の目的は、１，３−オキサチオランヌクレオシドの
Ｃ４’−鏡像異性体を分割する方法を提供することであ
る。ヒトまたは他の宿主動物におけるＨＩＶおよびＨＢ
Ｖ感染の治療のための方法および組成物が開示され、そ
の方法は薬学的に受容可能な担体中の、２−ヒドロキシ
メチル−５−（５−フルオロ−１−イル）−１，３−オ
キサチオラン、５’またはＮ４アルキル化もしくはアシ
ル化誘導体を含むその薬学的に受容可能な誘導体、また
はその薬学的に受容可能な塩の有効量を投与する工程を
包含する。２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロ
シトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン（「Ｆ
ＴＣ」）がヒト免疫不全ウィルスに対して著しく高い活
性を示し、かつ細胞毒性が非常に低いことがわかった。
また、ＦＴＣは、ＨＢＶに対しても著しく高い活性を示
すことがわかったので、ＨＢＶ感染に伴う多様な疾患を
有する患者の治療に用いられ得る。毒性および薬物動態
の検討により、薬剤投与用抗ウィルス剤としてのＦＴＣ
の有用性を確認した。ＦＴＣおよびその鏡像異性体は、
ヒト末梢性骨髄細胞には５０μＭまでの濃度で無毒性で
あり、他の細胞系には２００μＭまでの濃度で無毒性で
ある。ＦＴＣ−ＴＰはＰＢＭＣおよびＨｅｐＧ２細胞に
おける主要な細胞内代謝物である。ＦＴＣ−ＴＰは、ポ
リ（Ｉ）オリゴ（ｄＣ）鋳型プライマーを用いて、０．
２μＭのＫ１でＨＩＶ−１逆転写酵素（ＲＴ）を競合的
に阻害する。配列決定分析により、ＨＩＶ−ＲＴが用い
られるときＦＴＣ−ＴＰは強力なＤＮＡ鎖ターミネータ
ーとなり得ることがわかる（Ｃで止まる）。ＦＴＣによ
る長期の治療は、げっ歯動物には少なくとも２カ月間の
１日当り８５ｍｇ／ｋｇの経口投与でも毒性がなかっ
た。アカゲザルにおけるＦＴＣの薬物動態は、経口にお
ける高い生物学的利用能を示し（約７３±６％）、血清
中の半減期は約１．３４±０．１８（経口およびＩ．
Ｖ．投与の平均）を示す。ＦＴＣのラセミ混合物を含む
ヌクレオシド鏡像異性体のラセミ混合物の分割方法もま
た開示され、その方法は、鏡像異性体の１つにおいて反
応を優先的に触媒する酵素にラセミ混合物を曝す工程を
包含する。この方法は、炭水化物部分または塩基部分に
おいて任意に置換されたピリミジンヌクレオシドおよび
プリンヌクレオシドを含む、多様なヌクレオシドの分割
に用いられ得る。この方法はまた、炭水化物部分の中に
付加的なヘテロ原子を含有するヌクレオシド誘導体、例
えば（±）−ＦＴＣおよび（±）−ＢＣＨ−１８９の分
割にも用いられ得る。ヌクレオシドの分割は中程度のコ
ストで大量に行われ得る。 本明細書に記載した方法を
用いて、ＦＴＣは（＋）−β−Ｄおよび（−）−β−Ｌ
の鏡像異性体に分割された。（−）−β−Ｌ鏡像異性体
は、ＨＩＶ、ＨＢＶ、およびＳＩＶに対して（＋）−β
−Ｄ鏡像異性体よりもより強力であることがわかる。Ｆ
ＴＣの（＋）−鏡像異性体もまた、ＨＩＶ、ＨＢＶ、お
よびＳＩＶに対して活性である。本明細書で使用する用
語「鏡像異性体を濃縮したヌクレオシド（ｅｎａｎｔｉ
ｏｍｅｒｉｃａｌｌｙ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｎｕｃｌｅ
ｏｓｉｄｅ）」は、少なくとも９５％のそのヌクレオシ
ドの単一の鏡像異性体を有する、ヌクレオシド組成物を
表す。本明細書で使用する用語ＦＴＣは、２−ヒドロキ
シメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−
１，３−オキサチオラン（ラセミ体または鏡像異性体）
を表し、また、２’−デオキシ−５−フルオロ−３’−
チアシチジンをも表す。本明細書で使用する用語（±）
−ＦＴＣは、（±）−β−Ｄ，Ｌ−２−ヒドロキシメチ
ル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３
−オキサチオランを表す。本明細書で使用する用語
（−）−ＦＴＣは、（−）−β−Ｌ−２−ヒドロキシメ
チル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，
３−オキサチオランを表す。本明細書で使用する用語
（＋）−ＦＴＣは、（＋）−β−Ｄ−２−ヒドロキシメ
チル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，
３−オキサチオランを表す。本明細書で使用する用語Ｆ
ＴＣ−ＭＰ、ＦＴＣ−ＤＰ、およびＦＴＣ−ＴＰは、そ
れぞれＦＴＣのモノホスフェート、ジホスフェート、お
よびトリホスフェートを表す。本明細書で使用する用語
ＢＣＨ−１８９は、２−ヒドロキシメチル−５−（シト
シン−１−イル）−１，３−オキサチオランを表す。本
明細書で使用する用語「優先的な酵素触媒反応（ｐｒｅ
ｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｎｚｙｍｅ ｃａｔａｌｙｓｉ
ｓ）」は、一方の基質に対して他方の基質よりも優先し
て作用する酵素による触媒反応を表す。本明細書で使用
する用語脱離基（ａ ｌｅａｖｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）
は、その基が結合していた分子から離れたとき初めて炭
酸塩（ｉｎｃｉｐｉｅｎｔ ｃａｒｂｏｎａｔｉｏｎ）
を形成する官能基を意味する。本明細書で開示されるよ
うに、本発明は、ヒトまたは他の宿主動物におけるＨＩ
ＶおよびＨＢＶ感染、ならびに同様の方法で複製する他
のウィルス感染を治療するための方法および組成物であ
って、薬学的に受容可能な担体中の、２−ヒドロキシメ
チル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，
３−オキサチオランの（±）−β−Ｄ，Ｌ、（−）−β
−Ｌまたは（＋）−β−Ｄ鏡像異性体、５’またはＮ４
アルキル化またはアシル化誘導体を含む薬学的に（「生
理的に」）受容可能な誘導体、もしくはその薬学的に
（「生理的に」）受容可能な塩の有効量の投与を包含す
る。下記に示すように、本発明の化合物は、抗−ＨＩＶ
−１、抗−ＨＩＶ−２および抗−シミアン免疫不全ウィ
ルス（抗−ＳＩＶ）活性などの抗レトロウィルス活性を
それら自身有するか、または代謝されて抗レトロウィル
ス活性を示す化合物となる。ＦＴＣおよびその薬学的に
受容可能な誘導体またはそれらの化合物を含有する薬学
的に受容可能な製剤は、ＨＩＶ感染および他の関連する
症状、例えば、ＡＩＤＳ−関連複合症（ＡＲＣ）、慢性
全身性リンパ節疾患（ＰＧＬ）、ＡＩＤＳ−関連神経学
的症状、抗−ＨＩＶ抗体陽性およびＨＩＶ−陽性の症
状、カポジ肉腫、血小板減少性紫斑病および日和見感染
症などの、予防および治療に有用である。この他に、こ
れらの化合物または製剤は予防薬的に用いられて、抗−
ＨＩＶ抗体またはＨＩＶ−抗原に陽性かもしくはＨＩＶ
に接触した個体において臨床症状の進行を阻止するかま
たは遅延し得る。ＦＴＣおよびその薬学的に受容可能な
誘導体または塩、またはこれらの化合物を含有する薬学
的に受容可能な製剤はまた、ＨＢＶ感染および他の関連
する症状、例えば、抗−ＨＢＶ抗体陽性およびＨＢＶ−
陽性の症状、ＨＢＶに起因する慢性肝炎、肝硬変、急性
肝炎、激症肝炎、慢性持続性肝炎、および疲労などの、
予防および治療にも有用である。これらの化合物または
製剤はまた、予防薬的に用いられて、抗−ＨＢＶ抗体ま
たはＨＢＶ−抗原に陽性かもしくはＨＢＶに接触した個
体において臨床症状の進行を阻止するかまたは遅延し得
る。要約すれば、本発明は次の特徴を包含する： （ａ）（±）−β−Ｄ，Ｌ−２−ヒドロキシメチル−５
−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキ
サチオランおよびその薬学的に受容可能な誘導体および
塩； （ｂ）（−）−β−Ｌ−２−ヒドロキシメチル−５−
（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキサ
チオランおよびその薬学的に受容可能な誘導体および
塩； （ｃ）（＋）−β−Ｄ−２−ヒドロキシメチル−５−
（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキサ
チオランおよびその薬学的に受容可能な誘導体および
塩； （ｄ）例えば、ＨＩＶまたはＨＢＶ感染の治療または予
防などの、医療に用いるための、（±）−β−Ｄ，Ｌ−
２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−
１−イル）−１，３−オキサチオラン、その（−）およ
び（＋）鏡像異性体、ならびにその薬学的に受容可能な
誘導体および塩； （ｅ）（±）−β−Ｄ，Ｌ−２−ヒドロキシメチル−５
−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキ
サチオラン、その（−）および（＋）鏡像異性体、なら
びにその薬学的に受容可能な誘導体および塩の、ＨＩＶ
またはＨＢＶ感染の治療のための薬剤の製造における使
用； （ｆ）薬学的に受容可能な担体と共に、（±）−β−
Ｄ，Ｌ−２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシ
トシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン、その
（−）および（＋）鏡像異性体、ならびにその薬学的に
受容可能な誘導体および塩を含有する薬剤； （ｇ）以下を包含する、２−ヒドロキシメチル−５−
（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキサ
チオランの調製方法： （ｉ）任意に保護された５−フルオロシトシンを式Ａの
１，３−オキサチオランと反応させる工程 ここでＲ１ａは水素またはアシル基を含むヒドロキシル
保護基であり、そしてＬは脱離基である；および任意に
いずれかのヒドロキシル保護基を除去する工程。
２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−
１−イル）−１，３−オキサチオラン（「ＦＴＣ」）、
その生理的に受容可能な誘導体、または生理的に受容可
能な塩を含む抗ウィルス性組成物、ならびにＦＴＣの
（−）−β−Ｌおよび（＋）−β−Ｄの鏡像異性体の分
割および使用の方法を包含する。１９８１年、後天性免
疫不全症候群（ＡＩＤＳ）が、ヒト免疫系を著しく狂わ
せ、ほとんど例外なく死に至らしめる疾病として認定さ
れた。１９８３年に、ＡＩＤＳの病因はヒト免疫不全ウ
ィルス（ＨＩＶ）であると確定された。世界保健機構
（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏ
ｎ）は、１９９０年１２月までには全世界で８００万か
ら１０００万人がＨＩＶに感染し、その中の１００万か
ら１４０万人が米国にいると概算した。１９８５年、合
成ヌクレオシド３’−アジド−３’−デオキシチミジン
（ＡＺＴ）がヒト免疫不全ウィルスの複製を阻害するこ
とが報告された。以後、２’，３’−ジデオキシイノシ
ン（ＤＤＩ）、２’，３’−ジデオキシシチジン（ＤＤ
Ｃ）、３’−フルオロ−３’−デオキシチミジン（ＦＬ
Ｔ）、および２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジ
デヒドロチミジン（Ｄ４Ｔ）を含む多数の他の合成ヌク
レオチドが、ＨＩＶに対して有効であることが証明され
ている。多数の他の２’，３’−ジデオキシヌクレオシ
ドが、種々のウィルスの増殖をインビトロで阻害するこ
とが証明されている。細胞のキナーゼにより５’−トリ
リン酸に細胞によるリン酸化がなされた後、これらの合
成ヌクレオシドは成長中のウィルスＤＮＡ鎖に取り込ま
れるが、３’−ヒドロキシル基がないために鎖の合成が
そこで止まると考えられる。種々の２’，３’−ジデオ
キシヌクレオシドがＨＩＶの複製をインビボまたはイン
ビトロで阻害することに成功したことから、多数の研究
者がヌクレオシドの３’位の炭素原子をヘテロ原子に置
換したヌクレオシドを作成し、試験した。Ｎｏｒｂｅｃ
ｋらは、（±）−１−［（２β，４β）−２−（ヒドロ
キシメチル）−４−ジオキソールアニル］チミン
（（±）−ジオキソラン−Ｔと呼ぶ）がＨＩＶに対する
中程度の活性を示し（ＡＴＨ８細胞におけるＥＣ５０は
２０μｍ）、非感染対照の細胞に対しては２００μＭの
濃度で毒性を示さないことを開示する。Ｔｅｔｒａｈｅ
ｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ３０（４６），６２４６，
（１９８９）。ＩＡＦ ＢｉｏＣｈｅｍ Ｉｎｔｅｒｎ
ａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．に譲渡された欧州特許出願公
開第０ ３３７ ７１３号および米国特許第５，０４
１，４４９号は、抗ウィルス活性を示す２−置換−４−
置換−１，３−ジオキソランを開示する。やはりＩＡＦ
Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎ
ｃ．に譲渡された米国特許第５，０４７，４０７号およ
び欧州特許出願公開第０ ３８２５２６号は、抗ウィル
ス活性を有する多数の２−置換−５−置換−１，３−オ
キサチオランヌクレオシドを開示し、そして特に２−ヒ
ドロキシメチル−５−（シトシン−１−イル）−１，３
−オキサチオランのＣ１’−β異性体のラセミ混合物
（Ｃ４’−位に関する）（以下（±）−ＢＣＨ−１８９
と呼ぶ）がＡＺＴとほぼ同程度の抗ＨＩＶ活性を有し、
試験されたレベルでは細胞毒性を有さないことを報告す
る。（±）−ＢＣＨ−１８９はまた、３６週間以上にわ
たってＡＺＴによる治療を受けている患者から単離され
たＡＺＴ−耐性ＨＩＶの複製をインビトロで阻害するこ
とがわかった。ヒトの健康に関しての深刻な問題を引き
起こす他のウィルスは、Ｂ型肝炎ウィルス（以下「ＨＢ
Ｖ」と呼ぶ）である。ＨＢＶはタバコに次ぐ２番目の、
ヒトの癌の原因である。ＨＢＶが癌を誘導するメカニズ
ムは不明であるが、腫瘍の発達の直接の引金であり得る
か、または感染に伴って生じる慢性の炎症、肝硬変、お
よび細胞の再生を介して間接的に腫瘍の発生を誘導し得
ると考えられる。宿主が感染に気付かない２から６カ月
間の潜伏期間の後、ＨＢＶ感染は急性肝炎および肝障害
を引き起こし、腹部痛、黄疸、およびいくつかの酵素の
血中レベル上昇の原因となる。ＨＢＶは激症肝炎を引き
起こし得る。この激症肝炎は進行が速く、この疾病のし
ばしば致命的な形態であり、肝臓の大部分が破壊され
る。通常、患者は急性肝炎から回復する。しかしなが
ら、何人かの患者では、長期または不定の期間、高レベ
ルのウィルス性抗原が血中に維持されて慢性感染の原因
となる。慢性感染は慢性持続性肝炎となり得る。慢性持
続性ＨＢＶの感染患者は、発展途上国において最も一般
的である。１９９１年中ごろには、アジアだけで約２億
２千５００万人のＨＢＶの慢性キャリアが、そして世界
中ではほぼ３億人のキャリアが存在した。慢性持続性肝
炎は疲労、肝硬変、および肝細胞癌、すなわち初期の肝
臓癌を引き起こし得る。西側工業国では、ＨＢＶ感染の
危険性の高い集団は、ＨＢＶキャリアまたは彼らの血液
試料と接触した者を含む。ＨＢＶの疫学は後天性免疫不
全症候群の疫学と極めて類似しており、ＡＩＤＳまたは
ＡＩＤＳ関連複合症の患者の間でＨＢＶ感染が一般的で
ある理由が説明される。しかし、ＨＢＶはＨＩＶよりも
より伝染性である。ヒト血清由来のワクチンが、ＨＢＶ
に対する免疫を患者に付与するために開発されている。
それは効果的ではあったが、慢性キャリアからのヒト血
清の供給に限りがあり、そして精製操作は時間がかかり
かつ高価であるため、ワクチンの製造は問題点が多い。
さらに、異なる血清から調製されたワクチンのそれぞれ
のバッチは、安全性確認のためチンパンジーで試験しな
ければならない。ワクチンはまた、遺伝子工学によって
生産されている。遺伝子工学で生産されたタンパク質で
あるα−インターフェロンの連日投与もまた、有望であ
る。しかしながら、このウィルスの複製を有効に阻害す
る薬剤は、現在まで知られていない。薬学的目的のため
にヌクレオシドを市販するには、低毒性で薬効があるだ
けではなく、工業生産のために、コストにおいて効果的
でなければならない。ヌクレオシドを大量生産するため
の新規な低コストの工程を目的として多くの研究および
開発が行われた。２’，３’−ジデオキシヌクレオシド
は、現在次の２つの方法のいずれかを用いて調製されて
いる：無傷のヌクレオシドの誘導化またはヘテロサイク
リック塩基と誘導化糖部分との縮合。無傷のヌクレオシ
ドを改変して新しいヌクレオシドアナログを得ることは
多くの欠点を伴うが、この方法の大きな利点は、適切な
絶対的な立体化学が天然によってすでに決っていること
である。しかしながら、この方法は、例えば１，３−オ
キサチオランヌクレオシドおよび１，３−ジオキソラン
ヌクレオシドのような、天然に存在しない塩基または天
然に存在しない炭水化物残基を含むヌクレオシド（従っ
てそれは無傷のヌクレオシドから調製されない）の生産
には用いられ得ない。合成ヌクレオシドを形成するため
にヘテロサイクリック塩基と炭水化物または炭水化物様
部分とを縮合する場合、２つのキラル中心（Ｃ１’およ
びＣ４’−位）が存在し、従ってジアステレオマー対と
して存在するヌクレオシドが生産される。それぞれのジ
アステレオマーは鏡像異性体の組として存在する。それ
ゆえ、生成物は４つの鏡像異性体の混合物である。Ｃ
１’またはＣ４’−位における天然に存在しない立体化
学を有するヌクレオシドは、天然に決まった立体化学を
有する同一のヌクレオシドよりも活性が低いことが、し
ばしば見いだされている。例えば、Ｃａｒｔｅｒらは、
逆転写酵素活性を５０％まで低減するために必要な、細
胞培養物中のカルボビル（ｃａｒｂｏｖｉｒ）（２’，
３’−ジデヒドロ−２’，３’−ジデオキシグアノシ
ン）の（−）−鏡像異性体の濃度（ＥＣ５０）は０．８
μＭであり、それに対してカルボビルの（＋）−鏡像異
性体のＥＣ５０は６０μＭより大きいことを報告してい
る。Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎ
ｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、３４：６、１２９７−
１３００（１９９０年６月）。ＰＣＴ国際公報番号ＷＯ
９１／１１１８６は、縮合工程で用いられるルイス酸
を注意して選択することにより、１，３−オキサチオラ
ンヌクレオシドが高いジアステレオ選択性（Ｃ１’−炭
素からヘテロサイクリック塩基への結合がβ立体配置を
有するヌクレオシドの高いパーセンテージ）を伴って調
製され得ることを開示する。塩化第二スズを縮合触媒と
して用いるとき、塩基との１，３−オキサチオランヌク
レオシドの縮合がほぼ完全なβ−立体特異性を伴って起
こることがわかった。他のルイス酸は、低い（または全
くない）Ｃ１’−β選択性をもたらすか、または反応を
触媒できないかである。後天性免疫不全症候群、ＡＩＤ
Ｓ関連複合症、およびＢ型肝炎ウィルスが世界規模の流
行の水準に達しており、そして感染患者に悲惨な作用を
有することを考慮して、これらの疾病を治療するため
の、宿主に対して低毒性の新規な有効な薬剤の提供が、
強く望まれている。また、薬学的に重要なヌクレオシド
を生産するための、コストにおいて効果的な、商業的に
実行可能な方法を提供すること、そして特に、炭水化物
様部分と塩基とを縮合して調製される合成ヌクレオシド
のＣ４’−位におけるβ−立体特異性を達成することが
望まれている。従って、本発明の１つの目的は、ＨＩＶ
に感染したヒト患者の治療のための方法および組成物を
提供することである。本発明の他の目的は、ＨＢＶに感
染したヒト患者および他の宿主動物の治療のための方法
および組成物を提供することである。本発明のさらに他
の目的は、鏡像異性的に濃縮された１，３−オキサチオ
ランヌクレオシドを提供することである。本発明のさら
に他の目的は、１，３−オキサチオランヌクレオシドの
Ｃ４’−鏡像異性体を分割する方法を提供することであ
る。ヒトまたは他の宿主動物におけるＨＩＶおよびＨＢ
Ｖ感染の治療のための方法および組成物が開示され、そ
の方法は薬学的に受容可能な担体中の、２−ヒドロキシ
メチル−５−（５−フルオロ−１−イル）−１，３−オ
キサチオラン、５’またはＮ４アルキル化もしくはアシ
ル化誘導体を含むその薬学的に受容可能な誘導体、また
はその薬学的に受容可能な塩の有効量を投与する工程を
包含する。２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロ
シトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン（「Ｆ
ＴＣ」）がヒト免疫不全ウィルスに対して著しく高い活
性を示し、かつ細胞毒性が非常に低いことがわかった。
また、ＦＴＣは、ＨＢＶに対しても著しく高い活性を示
すことがわかったので、ＨＢＶ感染に伴う多様な疾患を
有する患者の治療に用いられ得る。毒性および薬物動態
の検討により、薬剤投与用抗ウィルス剤としてのＦＴＣ
の有用性を確認した。ＦＴＣおよびその鏡像異性体は、
ヒト末梢性骨髄細胞には５０μＭまでの濃度で無毒性で
あり、他の細胞系には２００μＭまでの濃度で無毒性で
ある。ＦＴＣ−ＴＰはＰＢＭＣおよびＨｅｐＧ２細胞に
おける主要な細胞内代謝物である。ＦＴＣ−ＴＰは、ポ
リ（Ｉ）オリゴ（ｄＣ）鋳型プライマーを用いて、０．
２μＭのＫ１でＨＩＶ−１逆転写酵素（ＲＴ）を競合的
に阻害する。配列決定分析により、ＨＩＶ−ＲＴが用い
られるときＦＴＣ−ＴＰは強力なＤＮＡ鎖ターミネータ
ーとなり得ることがわかる（Ｃで止まる）。ＦＴＣによ
る長期の治療は、げっ歯動物には少なくとも２カ月間の
１日当り８５ｍｇ／ｋｇの経口投与でも毒性がなかっ
た。アカゲザルにおけるＦＴＣの薬物動態は、経口にお
ける高い生物学的利用能を示し（約７３±６％）、血清
中の半減期は約１．３４±０．１８（経口およびＩ．
Ｖ．投与の平均）を示す。ＦＴＣのラセミ混合物を含む
ヌクレオシド鏡像異性体のラセミ混合物の分割方法もま
た開示され、その方法は、鏡像異性体の１つにおいて反
応を優先的に触媒する酵素にラセミ混合物を曝す工程を
包含する。この方法は、炭水化物部分または塩基部分に
おいて任意に置換されたピリミジンヌクレオシドおよび
プリンヌクレオシドを含む、多様なヌクレオシドの分割
に用いられ得る。この方法はまた、炭水化物部分の中に
付加的なヘテロ原子を含有するヌクレオシド誘導体、例
えば（±）−ＦＴＣおよび（±）−ＢＣＨ−１８９の分
割にも用いられ得る。ヌクレオシドの分割は中程度のコ
ストで大量に行われ得る。 本明細書に記載した方法を
用いて、ＦＴＣは（＋）−β−Ｄおよび（−）−β−Ｌ
の鏡像異性体に分割された。（−）−β−Ｌ鏡像異性体
は、ＨＩＶ、ＨＢＶ、およびＳＩＶに対して（＋）−β
−Ｄ鏡像異性体よりもより強力であることがわかる。Ｆ
ＴＣの（＋）−鏡像異性体もまた、ＨＩＶ、ＨＢＶ、お
よびＳＩＶに対して活性である。本明細書で使用する用
語「鏡像異性体を濃縮したヌクレオシド（ｅｎａｎｔｉ
ｏｍｅｒｉｃａｌｌｙ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｎｕｃｌｅ
ｏｓｉｄｅ）」は、少なくとも９５％のそのヌクレオシ
ドの単一の鏡像異性体を有する、ヌクレオシド組成物を
表す。本明細書で使用する用語ＦＴＣは、２−ヒドロキ
シメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−
１，３−オキサチオラン（ラセミ体または鏡像異性体）
を表し、また、２’−デオキシ−５−フルオロ−３’−
チアシチジンをも表す。本明細書で使用する用語（±）
−ＦＴＣは、（±）−β−Ｄ，Ｌ−２−ヒドロキシメチ
ル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３
−オキサチオランを表す。本明細書で使用する用語
（−）−ＦＴＣは、（−）−β−Ｌ−２−ヒドロキシメ
チル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，
３−オキサチオランを表す。本明細書で使用する用語
（＋）−ＦＴＣは、（＋）−β−Ｄ−２−ヒドロキシメ
チル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，
３−オキサチオランを表す。本明細書で使用する用語Ｆ
ＴＣ−ＭＰ、ＦＴＣ−ＤＰ、およびＦＴＣ−ＴＰは、そ
れぞれＦＴＣのモノホスフェート、ジホスフェート、お
よびトリホスフェートを表す。本明細書で使用する用語
ＢＣＨ−１８９は、２−ヒドロキシメチル−５−（シト
シン−１−イル）−１，３−オキサチオランを表す。本
明細書で使用する用語「優先的な酵素触媒反応（ｐｒｅ
ｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｎｚｙｍｅ ｃａｔａｌｙｓｉ
ｓ）」は、一方の基質に対して他方の基質よりも優先し
て作用する酵素による触媒反応を表す。本明細書で使用
する用語脱離基（ａ ｌｅａｖｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）
は、その基が結合していた分子から離れたとき初めて炭
酸塩（ｉｎｃｉｐｉｅｎｔ ｃａｒｂｏｎａｔｉｏｎ）
を形成する官能基を意味する。本明細書で開示されるよ
うに、本発明は、ヒトまたは他の宿主動物におけるＨＩ
ＶおよびＨＢＶ感染、ならびに同様の方法で複製する他
のウィルス感染を治療するための方法および組成物であ
って、薬学的に受容可能な担体中の、２−ヒドロキシメ
チル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，
３−オキサチオランの（±）−β−Ｄ，Ｌ、（−）−β
−Ｌまたは（＋）−β−Ｄ鏡像異性体、５’またはＮ４
アルキル化またはアシル化誘導体を含む薬学的に（「生
理的に」）受容可能な誘導体、もしくはその薬学的に
（「生理的に」）受容可能な塩の有効量の投与を包含す
る。下記に示すように、本発明の化合物は、抗−ＨＩＶ
−１、抗−ＨＩＶ−２および抗−シミアン免疫不全ウィ
ルス（抗−ＳＩＶ）活性などの抗レトロウィルス活性を
それら自身有するか、または代謝されて抗レトロウィル
ス活性を示す化合物となる。ＦＴＣおよびその薬学的に
受容可能な誘導体またはそれらの化合物を含有する薬学
的に受容可能な製剤は、ＨＩＶ感染および他の関連する
症状、例えば、ＡＩＤＳ−関連複合症（ＡＲＣ）、慢性
全身性リンパ節疾患（ＰＧＬ）、ＡＩＤＳ−関連神経学
的症状、抗−ＨＩＶ抗体陽性およびＨＩＶ−陽性の症
状、カポジ肉腫、血小板減少性紫斑病および日和見感染
症などの、予防および治療に有用である。この他に、こ
れらの化合物または製剤は予防薬的に用いられて、抗−
ＨＩＶ抗体またはＨＩＶ−抗原に陽性かもしくはＨＩＶ
に接触した個体において臨床症状の進行を阻止するかま
たは遅延し得る。ＦＴＣおよびその薬学的に受容可能な
誘導体または塩、またはこれらの化合物を含有する薬学
的に受容可能な製剤はまた、ＨＢＶ感染および他の関連
する症状、例えば、抗−ＨＢＶ抗体陽性およびＨＢＶ−
陽性の症状、ＨＢＶに起因する慢性肝炎、肝硬変、急性
肝炎、激症肝炎、慢性持続性肝炎、および疲労などの、
予防および治療にも有用である。これらの化合物または
製剤はまた、予防薬的に用いられて、抗−ＨＢＶ抗体ま
たはＨＢＶ−抗原に陽性かもしくはＨＢＶに接触した個
体において臨床症状の進行を阻止するかまたは遅延し得
る。要約すれば、本発明は次の特徴を包含する： （ａ）（±）−β−Ｄ，Ｌ−２−ヒドロキシメチル−５
−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキ
サチオランおよびその薬学的に受容可能な誘導体および
塩； （ｂ）（−）−β−Ｌ−２−ヒドロキシメチル−５−
（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキサ
チオランおよびその薬学的に受容可能な誘導体および
塩； （ｃ）（＋）−β−Ｄ−２−ヒドロキシメチル−５−
（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキサ
チオランおよびその薬学的に受容可能な誘導体および
塩； （ｄ）例えば、ＨＩＶまたはＨＢＶ感染の治療または予
防などの、医療に用いるための、（±）−β−Ｄ，Ｌ−
２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−
１−イル）−１，３−オキサチオラン、その（−）およ
び（＋）鏡像異性体、ならびにその薬学的に受容可能な
誘導体および塩； （ｅ）（±）−β−Ｄ，Ｌ−２−ヒドロキシメチル−５
−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキ
サチオラン、その（−）および（＋）鏡像異性体、なら
びにその薬学的に受容可能な誘導体および塩の、ＨＩＶ
またはＨＢＶ感染の治療のための薬剤の製造における使
用； （ｆ）薬学的に受容可能な担体と共に、（±）−β−
Ｄ，Ｌ−２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシ
トシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン、その
（−）および（＋）鏡像異性体、ならびにその薬学的に
受容可能な誘導体および塩を含有する薬剤； （ｇ）以下を包含する、２−ヒドロキシメチル−５−
（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキサ
チオランの調製方法： （ｉ）任意に保護された５−フルオロシトシンを式Ａの
１，３−オキサチオランと反応させる工程 ここでＲ１ａは水素またはアシル基を含むヒドロキシル
保護基であり、そしてＬは脱離基である；および任意に
いずれかのヒドロキシル保護基を除去する工程。
（ｉｉ）式Ｂの化合物 （ここでＲ１ａは上記に定義した通りであり、そしてＲ
１ｂはアミノ保護基である）を、シトシン環の５−位に
フッ素原子を導入するフッ化剤と反応させる工程；また
は （ｉｉｉ）式Ｃの化合物 （ここでＲ１ａは上記に定義した通り）をウラシル環の
４−位のオキソ基をアミノ基に変換する試薬と反応させ
る工程；所望の生成物を生成するために、残留するいず
れの保護基をも除去する工程。
１ｂはアミノ保護基である）を、シトシン環の５−位に
フッ素原子を導入するフッ化剤と反応させる工程；また
は （ｉｉｉ）式Ｃの化合物 （ここでＲ１ａは上記に定義した通り）をウラシル環の
４−位のオキソ基をアミノ基に変換する試薬と反応させ
る工程；所望の生成物を生成するために、残留するいず
れの保護基をも除去する工程。
ｆ）２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシ
ン−１−イル）−１，３−オキサチオランの（−）また
は（＋）鏡像異性体を調製する方法であって、（−）お
よび（＋）鏡像異性体の混合物の形態の該化合物または
その誘導体（例えば５’−エステル）を、鏡像異性体を
分離する条件下に置くか、または分離させる試薬と反応
させて、必要ならば得られた誘導体を親の化合物に変換
する工程を包含する方法。
ン−１−イル）−１，３−オキサチオランの（−）また
は（＋）鏡像異性体を調製する方法であって、（−）お
よび（＋）鏡像異性体の混合物の形態の該化合物または
その誘導体（例えば５’−エステル）を、鏡像異性体を
分離する条件下に置くか、または分離させる試薬と反応
させて、必要ならば得られた誘導体を親の化合物に変換
する工程を包含する方法。
方法ｅ）（ｉ）に関して、ヒドロキシ保護基は下記に詳
述する保護基を含み、アシル（例えばアセチル）、アリ
ールアシル（例えば、ベンゾイルまたは置換ベンゾイ
ル）、トリチルまたはモノメトキシトリチル、ベンジル
または置換ベンジル、トリアルキルシリル（例えばジメ
チル−ｔ−ブチルシリル）またはジフェニルメチルシリ
ルを含む三置換シリルを包含する。５−フルオロシトシ
ン化合物は、三置換シリル基によって任意に保護され得
る。保護基は、常法により除去され得る。脱離基Ｌは、
ヌクレオシド化学の分野で公知の典型的な脱離基であ
り、例えば塩素または臭素のようなハロゲン、メトキシ
またはエトキシのようなアルコキシ、もしくはアセチル
またはベンゾイルのようなアシルなどである。
述する保護基を含み、アシル（例えばアセチル）、アリ
ールアシル（例えば、ベンゾイルまたは置換ベンゾイ
ル）、トリチルまたはモノメトキシトリチル、ベンジル
または置換ベンジル、トリアルキルシリル（例えばジメ
チル−ｔ−ブチルシリル）またはジフェニルメチルシリ
ルを含む三置換シリルを包含する。５−フルオロシトシ
ン化合物は、三置換シリル基によって任意に保護され得
る。保護基は、常法により除去され得る。脱離基Ｌは、
ヌクレオシド化学の分野で公知の典型的な脱離基であ
り、例えば塩素または臭素のようなハロゲン、メトキシ
またはエトキシのようなアルコキシ、もしくはアセチル
またはベンゾイルのようなアシルなどである。
方法ｅ）（ｉ）の反応は、有機溶媒（例えば、１，２−
ジクロロエタンまたはアセトニトリル）中で、ルイス
酸、好ましくは塩化第二スズまたはトリメチルシリルト
リフレートの存在下で行われ得る。式Ａの化合物（ここ
でＬは、例えばアセチル基などのアシル基を示す）は、
式Ｄの化合物 （ここでＲ１ａは上記に定義した通り）を、例えば水酸
化リチウムアルミニウムなどの還元剤と反応させ、次に
所望の中間体のための適切な常用試薬、例えば、アシル
化のための無水酢酸などのカルボン酸無水物、ハロゲン
化のための塩化または臭化試薬、またはアルキル化試薬
などを用いて処理することによって得られ得る。式Ｄの
化合物は、式Ｅの化合物 を、高温でＨＳＣＨ２ＣＯ２Ｈと反応させることにより
調製され得る。式Ｅの化合物は、Ｒがアルキル、シリ
ル、またはアシル基のような保護基である、式ＣＨ２＝
ＣＨ−ＣＨ２−ＯＲの構造を有するアリルエーテルまた
はエステルもしくは式ＲＯＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２
ＯＲの構造を有する２−ブテン−１，３−ジオールのジ
エーテルまたはジエステルをオゾン分解することにより
調製され得る。
ジクロロエタンまたはアセトニトリル）中で、ルイス
酸、好ましくは塩化第二スズまたはトリメチルシリルト
リフレートの存在下で行われ得る。式Ａの化合物（ここ
でＬは、例えばアセチル基などのアシル基を示す）は、
式Ｄの化合物 （ここでＲ１ａは上記に定義した通り）を、例えば水酸
化リチウムアルミニウムなどの還元剤と反応させ、次に
所望の中間体のための適切な常用試薬、例えば、アシル
化のための無水酢酸などのカルボン酸無水物、ハロゲン
化のための塩化または臭化試薬、またはアルキル化試薬
などを用いて処理することによって得られ得る。式Ｄの
化合物は、式Ｅの化合物 を、高温でＨＳＣＨ２ＣＯ２Ｈと反応させることにより
調製され得る。式Ｅの化合物は、Ｒがアルキル、シリ
ル、またはアシル基のような保護基である、式ＣＨ２＝
ＣＨ−ＣＨ２−ＯＲの構造を有するアリルエーテルまた
はエステルもしくは式ＲＯＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２
ＯＲの構造を有する２−ブテン−１，３−ジオールのジ
エーテルまたはジエステルをオゾン分解することにより
調製され得る。
方法ｅ）（ｉｉ）に関して、５−フルオロ置換基は当該
分野で公知の方法（Ｍ．Ｊ．Ｒｏｂｉｎｓら、Ｎｕｃｌ
ｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｐａｒｔ２，
Ｌ．Ｂ．ＴｏｗｎｓｅｎｄおよびＲ．Ｓ．Ｔｉｐｓｏｎ
編集、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙ
ｏｒｋ，８９５−９００（１９／８）およびその参考文
献；Ｒ．Ｄｕｓｃｈｉｎｓｋｙ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｐａｒｔ１，Ｌ．Ｂ．Ｔｏ
ｗｎｓｅｎｄおよびＲ．Ｓ．Ｔｉｐｓｏｎ編集、Ｊ．Ｗ
ｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，４３
−４６（１９７８）およびその参考文献）によって導入
され得る。フッ化試薬は、例えば、フルオロトリクロロ
メタン中のトリメチルハイポフルオライトなどであり得
る。
分野で公知の方法（Ｍ．Ｊ．Ｒｏｂｉｎｓら、Ｎｕｃｌ
ｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｐａｒｔ２，
Ｌ．Ｂ．ＴｏｗｎｓｅｎｄおよびＲ．Ｓ．Ｔｉｐｓｏｎ
編集、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙ
ｏｒｋ，８９５−９００（１９／８）およびその参考文
献；Ｒ．Ｄｕｓｃｈｉｎｓｋｙ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｐａｒｔ１，Ｌ．Ｂ．Ｔｏ
ｗｎｓｅｎｄおよびＲ．Ｓ．Ｔｉｐｓｏｎ編集、Ｊ．Ｗ
ｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，４３
−４６（１９７８）およびその参考文献）によって導入
され得る。フッ化試薬は、例えば、フルオロトリクロロ
メタン中のトリメチルハイポフルオライトなどであり得
る。
方法ｅ）ｉｉｉ）に関して、式Ｃの化合物は、１，２，
４−トリアゾールと４−クロロフェニルジクロロホスフ
ェートとを用いて処理され、対応する４−（１，２，４
−トリアゾイリル）化合物を形成し、次に例えばメタノ
ールと反応して所望の４−アミノ（シチジン）化合物に
変換され得る。式ＢおよびＣの開始物質は、例えば適切
な（任意に保護された）塩基と式Ａの化合物とを方法
ｅ）ｉ）に記載した方法と同様の方法で反応させること
により調製され得る。５−フルオロウラシルおよび５−
フルオロシトシンは、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ Ｃｏ．，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ ５３２３３，
ＵＳＡから市販されている。
４−トリアゾールと４−クロロフェニルジクロロホスフ
ェートとを用いて処理され、対応する４−（１，２，４
−トリアゾイリル）化合物を形成し、次に例えばメタノ
ールと反応して所望の４−アミノ（シチジン）化合物に
変換され得る。式ＢおよびＣの開始物質は、例えば適切
な（任意に保護された）塩基と式Ａの化合物とを方法
ｅ）ｉ）に記載した方法と同様の方法で反応させること
により調製され得る。５−フルオロウラシルおよび５−
フルオロシトシンは、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ Ｃｏ．，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ ５３２３３，
ＵＳＡから市販されている。
（±）−鏡像異性体の分割は、下記のＩＩＩ節に詳細に
記載するようにして達成し得る。
記載するようにして達成し得る。
ＦＴＣは、例えば酸ハロゲン化物または酸無水物などの
適切なエステル化剤と反応することにより、薬学的に受
容可能なエステルに変換され得る。ＦＴＣまたはその薬
学的に受容可能な誘導体は、例えば適切な塩基で処理す
るなどの常法により、その薬学的に受容可能な塩に変換
され得る。ＦＴＣのエステルまたは塩は、例えば加水分
解により、ＦＴＣに変換され得る。
適切なエステル化剤と反応することにより、薬学的に受
容可能なエステルに変換され得る。ＦＴＣまたはその薬
学的に受容可能な誘導体は、例えば適切な塩基で処理す
るなどの常法により、その薬学的に受容可能な塩に変換
され得る。ＦＴＣのエステルまたは塩は、例えば加水分
解により、ＦＴＣに変換され得る。
Ｉ．活性化合物、およびその生理的に受容可能な誘導体
およびその塩 本明細書に開示された抗ウィルス性活性化合物は、ラセ
ミ体または単離された鏡像異性体としての２−ヒドロキ
シメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−
１，３−オキサチオラン（図１参照）である。本活性化
合物は、受容個体（ｒｅｃｉｐｉｅｎｔ）への投与に際
して、親のＦＴＣ化合物を直接的または間接的に提供し
得るかもしくはそれ自身が活性を示すいずれかの誘導体
として投与され得る。これらの例は、薬学的に受容可能
な塩（あるいは「生理的に受容可能な塩」とも呼ぶ）、
ならびに活性化合物の５’およびＮ４アシル化またはア
ルキル化誘導体（あるいは「生理的または薬学的に活性
な誘導体」と呼ぶ）であるが、これらに限定されない。
１つの実施態様では、アシル基はカルボン酸エステルで
あり、ここで該エステル基の非カルボニル部分は直鎖、
分枝状、または環状のアルキルから選択され、メトキシ
メチルを含むアルコキシアルキル、ベンジルを含むアラ
ルキル、フェノキシメチルなどのアリールオキシアルキ
ル、任意にハロゲン、Ｃ１からＣ４のアルキルまたはＣ
１からＣ４のアルコキシで置換されたフェニルを含むア
リール、メタンスルホニルを含むアルキルまたはアラル
キルスルホニルなどのスルホン酸エステル、モノ、ジ、
またはトリリン酸エステル、トリチルまたはモノメトキ
シトリチル、置換ベンジル、トリアルキルシリル（例え
ばジメチル−ｔ−ブチルシリル）またはジフェニルメチ
ルシリルである。このエステル中のアリール基は、最適
にはフェニル基である。アルキル基は、直鎖、分枝状、
または環状であり得、最適にはＣ１からＣ１８の基であ
る。ＦＴＣの薬学的に受容可能な誘導体の特定の例は以
下を含むがこれに限定されない： ここでＲ１およびＲ２はアルキルおよびアシルからなる
群からそれぞれ独立して選択され、これは特に、限定さ
れないがメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチ
ル、ヘキシル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブ
チル、ｔ−ブチル、イソペンチル、アミル、ｔ−ペンチ
ル、３−メチルブチリル、ハイドロゲンスクシネート、
３−クロロベンゾエート、シクロペンチル、シクロヘキ
シル、ベンゾイル、アセチル、ピバロイル、メシレー
ト、プロピオニル、ブチリル、バレリル、カプロイッ
ク、カプリリック、カプリック、ラウリック、ミリスチ
ック、パルミチック、ステアリック、オレイック；アラ
ニル、バリニル、ロイシニル、イソロイシニル、ブロリ
ニル、フェニルアラニニル、トリプトファニル、メチオ
ニニル、グリシニル、セリニル、スレオニニル、システ
イニル、チロシニル、アスパラギニル、グルタミニル、
アスパルトイル、グルタオイル、リジニル、アルギニニ
ル、およびヒスチジニルを含むがこれに限定されないア
ミノ酸を包含し、そしてここでＲ１およびＲ２の一方は
Ｈで有り得る。ＦＴＣまたはその誘導体は、薬学的に受
容可能な塩の形態で提供され得る。本明細書で用いられ
る薬学的に受容可能な塩または複合物という用語は、親
の化合物の所望の生物活性を有し、望ましくない毒物学
的な作用はあるとしても最小限しか示さない、ＦＴＣの
塩または複合物を意味する。そのような塩の例として
は、（ａ）無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、
リン酸、硝酸など）によって形成された酸付加塩、なら
びに酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、ア
スコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パモ酸（ｐａｍ
ｏｉｃ ａｃｉｄ）、アルギン酸、ポリグルタミン酸、
ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、およ
びポリガラクツロン酸などの有機酸によって形成された
塩；（ｂ）亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マ
グネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、
カドミウム、ナトリウム、カリウムなどの多価金属カチ
オンによって形成されるか、もしくはＮ，Ｎ−ジベンジ
ルエチレン−ジアミン、アンモニウム、またはエチレン
ジアミンから形成された有機カチオンによって形成され
た塩基付加塩；または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合
せ；例えば、タンニン酸亜鉛塩などであるが、これらに
限定されない。特にＮ４および５’−０位における活性
化合物の改変は、生物学的利用能および活性種の代謝速
度に作用し得、従って活性種の送達を制御し得る。さら
に、その改変は化合物の抗ウィルス活性に作用し得、い
くつかの例では親の化合物よりも活性が増大し得る。こ
のことは、本明細書に記載した方法または当業者に公知
の他の方法に従って誘導体を調製し、その抗ウィルス活
性を試験することによって容易に評価され得る。
およびその塩 本明細書に開示された抗ウィルス性活性化合物は、ラセ
ミ体または単離された鏡像異性体としての２−ヒドロキ
シメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−
１，３−オキサチオラン（図１参照）である。本活性化
合物は、受容個体（ｒｅｃｉｐｉｅｎｔ）への投与に際
して、親のＦＴＣ化合物を直接的または間接的に提供し
得るかもしくはそれ自身が活性を示すいずれかの誘導体
として投与され得る。これらの例は、薬学的に受容可能
な塩（あるいは「生理的に受容可能な塩」とも呼ぶ）、
ならびに活性化合物の５’およびＮ４アシル化またはア
ルキル化誘導体（あるいは「生理的または薬学的に活性
な誘導体」と呼ぶ）であるが、これらに限定されない。
１つの実施態様では、アシル基はカルボン酸エステルで
あり、ここで該エステル基の非カルボニル部分は直鎖、
分枝状、または環状のアルキルから選択され、メトキシ
メチルを含むアルコキシアルキル、ベンジルを含むアラ
ルキル、フェノキシメチルなどのアリールオキシアルキ
ル、任意にハロゲン、Ｃ１からＣ４のアルキルまたはＣ
１からＣ４のアルコキシで置換されたフェニルを含むア
リール、メタンスルホニルを含むアルキルまたはアラル
キルスルホニルなどのスルホン酸エステル、モノ、ジ、
またはトリリン酸エステル、トリチルまたはモノメトキ
シトリチル、置換ベンジル、トリアルキルシリル（例え
ばジメチル−ｔ−ブチルシリル）またはジフェニルメチ
ルシリルである。このエステル中のアリール基は、最適
にはフェニル基である。アルキル基は、直鎖、分枝状、
または環状であり得、最適にはＣ１からＣ１８の基であ
る。ＦＴＣの薬学的に受容可能な誘導体の特定の例は以
下を含むがこれに限定されない： ここでＲ１およびＲ２はアルキルおよびアシルからなる
群からそれぞれ独立して選択され、これは特に、限定さ
れないがメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチ
ル、ヘキシル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブ
チル、ｔ−ブチル、イソペンチル、アミル、ｔ−ペンチ
ル、３−メチルブチリル、ハイドロゲンスクシネート、
３−クロロベンゾエート、シクロペンチル、シクロヘキ
シル、ベンゾイル、アセチル、ピバロイル、メシレー
ト、プロピオニル、ブチリル、バレリル、カプロイッ
ク、カプリリック、カプリック、ラウリック、ミリスチ
ック、パルミチック、ステアリック、オレイック；アラ
ニル、バリニル、ロイシニル、イソロイシニル、ブロリ
ニル、フェニルアラニニル、トリプトファニル、メチオ
ニニル、グリシニル、セリニル、スレオニニル、システ
イニル、チロシニル、アスパラギニル、グルタミニル、
アスパルトイル、グルタオイル、リジニル、アルギニニ
ル、およびヒスチジニルを含むがこれに限定されないア
ミノ酸を包含し、そしてここでＲ１およびＲ２の一方は
Ｈで有り得る。ＦＴＣまたはその誘導体は、薬学的に受
容可能な塩の形態で提供され得る。本明細書で用いられ
る薬学的に受容可能な塩または複合物という用語は、親
の化合物の所望の生物活性を有し、望ましくない毒物学
的な作用はあるとしても最小限しか示さない、ＦＴＣの
塩または複合物を意味する。そのような塩の例として
は、（ａ）無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、
リン酸、硝酸など）によって形成された酸付加塩、なら
びに酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、ア
スコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パモ酸（ｐａｍ
ｏｉｃ ａｃｉｄ）、アルギン酸、ポリグルタミン酸、
ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、およ
びポリガラクツロン酸などの有機酸によって形成された
塩；（ｂ）亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マ
グネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、
カドミウム、ナトリウム、カリウムなどの多価金属カチ
オンによって形成されるか、もしくはＮ，Ｎ−ジベンジ
ルエチレン−ジアミン、アンモニウム、またはエチレン
ジアミンから形成された有機カチオンによって形成され
た塩基付加塩；または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合
せ；例えば、タンニン酸亜鉛塩などであるが、これらに
限定されない。特にＮ４および５’−０位における活性
化合物の改変は、生物学的利用能および活性種の代謝速
度に作用し得、従って活性種の送達を制御し得る。さら
に、その改変は化合物の抗ウィルス活性に作用し得、い
くつかの例では親の化合物よりも活性が増大し得る。こ
のことは、本明細書に記載した方法または当業者に公知
の他の方法に従って誘導体を調製し、その抗ウィルス活
性を試験することによって容易に評価され得る。
ＩＩ．活性化合物の調製 ＦＴＣのラセミ混合物は、１９９１年８月８日に発行さ
れ、Ｅｍｏｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙによって提出さ
れたＰＣＴ国際公報番号ＷＯ９１／１１１８６に詳細に
開示された方法に従うか、または実施例１に開示される
方法を用いて調製され得る。一般に、この方法は、Ｒが
アルキル、シリル、またはアシル基のような保護基であ
る、式ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＨ２−ＯＲの構造を有するアリ
ルエーテルまたはエステルもしくは式ＲＯＣＨ２−ＣＨ
＝ＣＨ−ＣＨ２ＯＲの構造を有する２−ブテン−１，３
−ジオールのジエーテルまたはジエステルのいずれかを
オゾン処理して、式ＯＨＣ−ＣＨ２−ＯＲの構造を有す
る糖アルデヒドを形成する工程；その糖アルデヒドにチ
オグリコール酸を加えて式２−（Ｒ−オキシ）−メチル
−５−オキソ−１，３−オキサチオランで示されるラク
トンを形成する工程；ラクトンを還元してオキサチオラ
ン環の５位に脱離基を有する種々の化合物を生じる工
程；ＳｎＣｌ４の存在化でこれらの化合物をシリル化
（ｓｉｌｙａｔｅｄ）５−フルオロシトシンとカップリ
ングさせてＦＴＣのβ−異性体を形成する工程；および
任意に保護基を除去する工程を包含する。
れ、Ｅｍｏｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙによって提出さ
れたＰＣＴ国際公報番号ＷＯ９１／１１１８６に詳細に
開示された方法に従うか、または実施例１に開示される
方法を用いて調製され得る。一般に、この方法は、Ｒが
アルキル、シリル、またはアシル基のような保護基であ
る、式ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＨ２−ＯＲの構造を有するアリ
ルエーテルまたはエステルもしくは式ＲＯＣＨ２−ＣＨ
＝ＣＨ−ＣＨ２ＯＲの構造を有する２−ブテン−１，３
−ジオールのジエーテルまたはジエステルのいずれかを
オゾン処理して、式ＯＨＣ−ＣＨ２−ＯＲの構造を有す
る糖アルデヒドを形成する工程；その糖アルデヒドにチ
オグリコール酸を加えて式２−（Ｒ−オキシ）−メチル
−５−オキソ−１，３−オキサチオランで示されるラク
トンを形成する工程；ラクトンを還元してオキサチオラ
ン環の５位に脱離基を有する種々の化合物を生じる工
程；ＳｎＣｌ４の存在化でこれらの化合物をシリル化
（ｓｉｌｙａｔｅｄ）５−フルオロシトシンとカップリ
ングさせてＦＴＣのβ−異性体を形成する工程；および
任意に保護基を除去する工程を包含する。
実施例１（±）−β−Ｄ，Ｌ−２−ヒドロキシメチル−
５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オ
キサチオランの調製 ＦＴＣのラセミ混合物の調製方法を図２に図解し、下記
に詳述する。２−ブテン−１，４−ジオールの保護 乾燥した２Ｌの３頸フラスコ中において、不活性雰囲気
下で２−ブテン−１，４−ジオール１００グラム（９
３．５ｍｌ＝１．１３５ｍｏｌ＝１．００当量）および
ＤＭＡＰ（４−ジメチルアミノピリジン）１５グラム
（約０．１当量）を、乾燥ピリジン８００ｍｌに溶解
し、０℃に冷却しながら攪拌した。ブチリルクロライド
（２６０ｍｌ＝２．２当量）を過熱しないように徐々に
加え、１時間攪拌した。少量の氷水を用いて反応を停止
させた。塩から液体をデカントして取り除き、真空下で
エバポレートした。残った塩を水に溶解し、その水溶液
よりエチルエーテルで２回抽出した。エーテル（ｏｔｈ
ｅｒ）層を合わせ 濃縮された反応混合物をエーテルに溶解した後、上記塩
溶液に用いた手法と同じ手法に従って洗浄した。有機層
を合わせて、ロータリーエバポレーションにより濃縮
し、次に真空下で静置した。この反応は一般に定量的に
は非常に精密である。反応スケールは、必要ならば容易
に拡大し得る。生成物の１，４−ジブチリル−２−ブテ
ン−１，４−ジオールは、無色から僅かに黄色の、澄明
な液体である。保護されたジオールのオゾン分解 大きな乾燥管および気体導入用の開口管を装着し、乾燥
した５Ｌの３頸フラスコ中で、１，４−ジブチリル−２
−ブテン−１，４−ジオール（１．３６５ｍｏｌ）を、
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２４Ｌに溶解した。フリット化した通気
管は濃縮された溶液にさらされると目詰まりするので、
上記の管としては適していない。溶液に不活性ガスを吹
き込みながら溶液を攪拌し、−７８℃に冷却した。溶液
が充分冷却すると同時に気体導入口を密閉し、フラスコ
および攪拌装置をオゾン発生器に移動した。氷浴中に維
持しながら、攪拌中の溶液に少なくとも２０分間酸素を
吹き込んだ。この長い反応の間低温を維持するにはクリ
オクール（Ｃｒｙｏｃｏｏｌ）が理想的である。オゾン
を８から８．５ｐｓｉ導入した。終了に際しては、オゾ
ンの流入を停止させて、溶液に酸素を約０．５時間吹き
込み、３当量のＭｅ２Ｓを加えた。フラスコを冷却浴か
ら取り出して、フードに移し、完全に反応させるために
約２日間攪拌した。溶液をエバポレートし、真空下に数
時間置いた。この反応により、一般的には、無色から黄
色の澄明な液体である保護されたアルデヒド（２−ブチ
リルオキシアセトアルデヒド）が約９５％の収率で得ら
れる。メルカプト酢酸によるアルデヒドの環化 ディーンスターク型（Ｄｅａｎ Ｓｔａｒｋ−ｔｙｐ
ｅ）トラップを装着したフラスコ中で、上記アルデヒド
（１．０当量）をトルエンに溶解し、０．８０から０．
８５Ｍ溶液を作成した。チオグリコール酸（１．１当
量）を加え、混合液を加熱して還流した。トラップを介
して、水を共沸により除去した。反応は３時間で完了
し、反応液を室温まで冷却した。有機溶液を等量の飽和
ＮａＨＣＯ３水溶液で２回、水で１回洗浄した後、Ｍｇ
ＳＯ４およびＮｏｒｉｔで乾燥し、セライトを通して真
空濾過した後、真空下でエバポレートした。１回目のＮ
ａＨＣＯ３洗液をエーテルで１回再抽出し；そのエーテ
ル 通して真空濾過し、トルエン溶液から得られた他の有機
物質と一緒にしてエバポレートした。合わせた物質を真
空下に一晩静置した。この反応により、一般的には、２
−（ブチリルオキシ）−メチル−５−オキソ−１，３−
オキサチオランが収率９０％で得られる。ラクトンの還
元およびアセテートへの変換機械的攪拌装置を装着し不
活性雰囲気下に保った、乾燥した３頸フラスコ中で、２
−ブチリルオキシ−メチル−５−オキソ−１，３−オキ
サチオラン（１．００当量）を乾燥ＴＨＦに溶解し、
０．２３Ｍ溶液とした。溶液を攪拌し、０℃に冷却した
後、ＴＨＦに１．１当量の１．０Ｍ Ｌｉ（ｔ−Ｂｕ
Ｏ）３ＡｌＨをカニューレを通して加えた。２：１のエ
ーテル／ヘキサン溶媒系およびアニスアルデヒド染色を
用いたＴＬＣに示されるように、還元は約３時間で完了
した。新たに蒸留したＡｃ２Ｏ約１０当量を加え、２日
間攪拌してアセチル化生成物を得た。飽和ＮａＨＣＯ３
を加えて反応を停止させ、一晩攪拌した。この溶液をエ
ーテルで抽出し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で２回洗浄（注
意深く）し、水で１回洗浄し、ＭｇＳＯ４およびＮｏｒ レートした。生成物は暗黄色の澄明な液体である。ガス
クロマトグラフィー（初期Ｔ− ８０゜；初期時間＝５
分；昇温速度−１０゜／分；最終Ｔ＝２４０℃）によ
り、一般的には、約７０％の純度であることが示され
る。５−フルオロシトシンのシリル化 ５−フルオロシトシン（前工程で得られ、ＧＣによって
純度を確認されたアセチル化ラクトールの量に基づく
１．０５当量）を、触媒量の純粋な硫酸アンモニウム
（０．０５から０．１０当量）を含有する少なくとも１
０当量のヘキサメチルジシラザン中で、２時間、還流し
てシリル化した溶液は、再び澄明になった。次にフラス
コを固く密閉し、補助トラップを有する真空ポンプを用
いて溶媒を除去した。白色固体である生成物を、真空下
に一晩放置した後、次のカップリング反応に用いた。シリル化５−フルオロシトシンとアセチル化ラクトール
とのカップリング 乾燥ジクロロメタン（３５０ｍｌ）中のシリル化５−フ
ルオロシトシン（３３．８６ｇｍ．、０．１２４ｍｏ
ｌ）を、窒素雰囲気下で、ＳｎＣｌ４溶液（１３５．６
ｍｌ、ＣＨ２Ｃｌ２中の１モル溶液）に加えた。溶液を
室温で１５分間攪拌した。この溶液を、カニューレを用
い、窒素雰囲気下で３０分間かけて、ジクロロメタン
（４００ｍｌ）中の酢酸アセテート（３８ｇｍ、０．１
１３ｍｏｌ）溶液に加えた。反応液を２時間攪拌した。
この時点において、反応が完了したことをＴＬＣにより
確認した。反応溶液をジクロロメタン（５００ｍｌ）で
希釈した後、水酸化アンモニウム溶液により反応を停止
させた。３０℃以下に反応温度を維持しながら、水酸化
アンモニウム溶液（１００ｍｌ）を徐々に加えると、白
色沈澱が形成され得た。混合液をさらに３０分間攪拌し
た後、シリカゲルプラグカラム（直径７インチ、高さ５
インチ）を通した。ジクロロメタン（２Ｌ）、酢酸エチ
ル（２Ｌ）および酢酸エチル：エタノール（９：１）
（４Ｌ）を用いて、連続的に溶出した。酢酸エチル溶出
液および酢酸エチル：エタノール溶出液には、所望の生
成物が含有されていた。これらの溶液を合わせて、減圧
下でエバポレートした。残留した粘着性の固体を乾燥エ
ーテル（２００ｍｌ）で洗浄し、白色固体（２５．３５
ｇｍ；７１％）のＦＴＣ−５’−ブチレートを得た。Ｆ
ＴＣ−５’−ブチレート（８．７４ｇｍ；０．０２６ｍ
ｏｌ）を、メタノール２５０ｍｌに溶解した。ナトリウ
ムメトキシド（２．８５ｇｍ；０．０５２ｇｍ）を室温
で加えた。反応液を１時間攪拌した。この時点におい
て、反応が完了したことをＴＬＣで確認した。反応を停
止させるためＮＨ４Ｃｌ溶液（１０ｍｌ）を加え、減圧
下で溶媒を除去した。残留物をシリカゲル（５ｇｍ）に
吸着させ、酢酸エチル：エタノール（９：１）を溶出液
として用い小カラムに通した。生成物を含有する画分を
合わせてエバポレートして、粘着性の固体を得た。その
固体を乾燥エーテルで洗浄して、白色固体であるＦＴＣ
（６．００ｇｍ、８８％）を得た。（ １Ｈ ＮＭＲ：
（ＤＭＳＯ−ｄ６）８．１８（１Ｈ、ｄ、Ｈ６、Ｊ＝
８．４Ｈｚ）、７．８１および７．５７（２Ｈ、ブロー
ド、ＮＨ２）、６．１２（１Ｈ、ｄｄ、Ｈ１’、Ｊ＝
５．７および４．２Ｈｚ）、５．４０（１Ｈ、ｔ、Ｏ
Ｈ、Ｊ＝５．７Ｈｚ）、５．１７（１Ｈ、ｔ、１
Ｈ４’、Ｊ＝３−６Ｈｚ）、３．７４（２Ｈ、ｍ、２Ｈ
５’）、３．４１（１Ｈ、ｄｄ、１Ｈ２’、Ｊ＝５．７
および１１．７Ｈｚ）、３．１１（１Ｈ、ｄｄ、１Ｈ
２’、Ｊ＝４．２および１１．７Ｈｚ）； １３Ｃ ＮＭ
Ｒ：（ＤＭＳＯ−ｄ６）１５７．８５（ｄ、Ｊ＝１３．
４Ｈｚ）、１５３．２８、１３６．１２（ｄ、Ｊ＝２４
１ＨＺ）、１２６．０１（ｄ、Ｊ＝３２．６Ｈｚ）、８
６．９０、８６．８４、６２．４８、３７．０７；ｍｐ
１９５−１９６℃。
５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オ
キサチオランの調製 ＦＴＣのラセミ混合物の調製方法を図２に図解し、下記
に詳述する。２−ブテン−１，４−ジオールの保護 乾燥した２Ｌの３頸フラスコ中において、不活性雰囲気
下で２−ブテン−１，４−ジオール１００グラム（９
３．５ｍｌ＝１．１３５ｍｏｌ＝１．００当量）および
ＤＭＡＰ（４−ジメチルアミノピリジン）１５グラム
（約０．１当量）を、乾燥ピリジン８００ｍｌに溶解
し、０℃に冷却しながら攪拌した。ブチリルクロライド
（２６０ｍｌ＝２．２当量）を過熱しないように徐々に
加え、１時間攪拌した。少量の氷水を用いて反応を停止
させた。塩から液体をデカントして取り除き、真空下で
エバポレートした。残った塩を水に溶解し、その水溶液
よりエチルエーテルで２回抽出した。エーテル（ｏｔｈ
ｅｒ）層を合わせ 濃縮された反応混合物をエーテルに溶解した後、上記塩
溶液に用いた手法と同じ手法に従って洗浄した。有機層
を合わせて、ロータリーエバポレーションにより濃縮
し、次に真空下で静置した。この反応は一般に定量的に
は非常に精密である。反応スケールは、必要ならば容易
に拡大し得る。生成物の１，４−ジブチリル−２−ブテ
ン−１，４−ジオールは、無色から僅かに黄色の、澄明
な液体である。保護されたジオールのオゾン分解 大きな乾燥管および気体導入用の開口管を装着し、乾燥
した５Ｌの３頸フラスコ中で、１，４−ジブチリル−２
−ブテン−１，４−ジオール（１．３６５ｍｏｌ）を、
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２４Ｌに溶解した。フリット化した通気
管は濃縮された溶液にさらされると目詰まりするので、
上記の管としては適していない。溶液に不活性ガスを吹
き込みながら溶液を攪拌し、−７８℃に冷却した。溶液
が充分冷却すると同時に気体導入口を密閉し、フラスコ
および攪拌装置をオゾン発生器に移動した。氷浴中に維
持しながら、攪拌中の溶液に少なくとも２０分間酸素を
吹き込んだ。この長い反応の間低温を維持するにはクリ
オクール（Ｃｒｙｏｃｏｏｌ）が理想的である。オゾン
を８から８．５ｐｓｉ導入した。終了に際しては、オゾ
ンの流入を停止させて、溶液に酸素を約０．５時間吹き
込み、３当量のＭｅ２Ｓを加えた。フラスコを冷却浴か
ら取り出して、フードに移し、完全に反応させるために
約２日間攪拌した。溶液をエバポレートし、真空下に数
時間置いた。この反応により、一般的には、無色から黄
色の澄明な液体である保護されたアルデヒド（２−ブチ
リルオキシアセトアルデヒド）が約９５％の収率で得ら
れる。メルカプト酢酸によるアルデヒドの環化 ディーンスターク型（Ｄｅａｎ Ｓｔａｒｋ−ｔｙｐ
ｅ）トラップを装着したフラスコ中で、上記アルデヒド
（１．０当量）をトルエンに溶解し、０．８０から０．
８５Ｍ溶液を作成した。チオグリコール酸（１．１当
量）を加え、混合液を加熱して還流した。トラップを介
して、水を共沸により除去した。反応は３時間で完了
し、反応液を室温まで冷却した。有機溶液を等量の飽和
ＮａＨＣＯ３水溶液で２回、水で１回洗浄した後、Ｍｇ
ＳＯ４およびＮｏｒｉｔで乾燥し、セライトを通して真
空濾過した後、真空下でエバポレートした。１回目のＮ
ａＨＣＯ３洗液をエーテルで１回再抽出し；そのエーテ
ル 通して真空濾過し、トルエン溶液から得られた他の有機
物質と一緒にしてエバポレートした。合わせた物質を真
空下に一晩静置した。この反応により、一般的には、２
−（ブチリルオキシ）−メチル−５−オキソ−１，３−
オキサチオランが収率９０％で得られる。ラクトンの還
元およびアセテートへの変換機械的攪拌装置を装着し不
活性雰囲気下に保った、乾燥した３頸フラスコ中で、２
−ブチリルオキシ−メチル−５−オキソ−１，３−オキ
サチオラン（１．００当量）を乾燥ＴＨＦに溶解し、
０．２３Ｍ溶液とした。溶液を攪拌し、０℃に冷却した
後、ＴＨＦに１．１当量の１．０Ｍ Ｌｉ（ｔ−Ｂｕ
Ｏ）３ＡｌＨをカニューレを通して加えた。２：１のエ
ーテル／ヘキサン溶媒系およびアニスアルデヒド染色を
用いたＴＬＣに示されるように、還元は約３時間で完了
した。新たに蒸留したＡｃ２Ｏ約１０当量を加え、２日
間攪拌してアセチル化生成物を得た。飽和ＮａＨＣＯ３
を加えて反応を停止させ、一晩攪拌した。この溶液をエ
ーテルで抽出し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で２回洗浄（注
意深く）し、水で１回洗浄し、ＭｇＳＯ４およびＮｏｒ レートした。生成物は暗黄色の澄明な液体である。ガス
クロマトグラフィー（初期Ｔ− ８０゜；初期時間＝５
分；昇温速度−１０゜／分；最終Ｔ＝２４０℃）によ
り、一般的には、約７０％の純度であることが示され
る。５−フルオロシトシンのシリル化 ５−フルオロシトシン（前工程で得られ、ＧＣによって
純度を確認されたアセチル化ラクトールの量に基づく
１．０５当量）を、触媒量の純粋な硫酸アンモニウム
（０．０５から０．１０当量）を含有する少なくとも１
０当量のヘキサメチルジシラザン中で、２時間、還流し
てシリル化した溶液は、再び澄明になった。次にフラス
コを固く密閉し、補助トラップを有する真空ポンプを用
いて溶媒を除去した。白色固体である生成物を、真空下
に一晩放置した後、次のカップリング反応に用いた。シリル化５−フルオロシトシンとアセチル化ラクトール
とのカップリング 乾燥ジクロロメタン（３５０ｍｌ）中のシリル化５−フ
ルオロシトシン（３３．８６ｇｍ．、０．１２４ｍｏ
ｌ）を、窒素雰囲気下で、ＳｎＣｌ４溶液（１３５．６
ｍｌ、ＣＨ２Ｃｌ２中の１モル溶液）に加えた。溶液を
室温で１５分間攪拌した。この溶液を、カニューレを用
い、窒素雰囲気下で３０分間かけて、ジクロロメタン
（４００ｍｌ）中の酢酸アセテート（３８ｇｍ、０．１
１３ｍｏｌ）溶液に加えた。反応液を２時間攪拌した。
この時点において、反応が完了したことをＴＬＣにより
確認した。反応溶液をジクロロメタン（５００ｍｌ）で
希釈した後、水酸化アンモニウム溶液により反応を停止
させた。３０℃以下に反応温度を維持しながら、水酸化
アンモニウム溶液（１００ｍｌ）を徐々に加えると、白
色沈澱が形成され得た。混合液をさらに３０分間攪拌し
た後、シリカゲルプラグカラム（直径７インチ、高さ５
インチ）を通した。ジクロロメタン（２Ｌ）、酢酸エチ
ル（２Ｌ）および酢酸エチル：エタノール（９：１）
（４Ｌ）を用いて、連続的に溶出した。酢酸エチル溶出
液および酢酸エチル：エタノール溶出液には、所望の生
成物が含有されていた。これらの溶液を合わせて、減圧
下でエバポレートした。残留した粘着性の固体を乾燥エ
ーテル（２００ｍｌ）で洗浄し、白色固体（２５．３５
ｇｍ；７１％）のＦＴＣ−５’−ブチレートを得た。Ｆ
ＴＣ−５’−ブチレート（８．７４ｇｍ；０．０２６ｍ
ｏｌ）を、メタノール２５０ｍｌに溶解した。ナトリウ
ムメトキシド（２．８５ｇｍ；０．０５２ｇｍ）を室温
で加えた。反応液を１時間攪拌した。この時点におい
て、反応が完了したことをＴＬＣで確認した。反応を停
止させるためＮＨ４Ｃｌ溶液（１０ｍｌ）を加え、減圧
下で溶媒を除去した。残留物をシリカゲル（５ｇｍ）に
吸着させ、酢酸エチル：エタノール（９：１）を溶出液
として用い小カラムに通した。生成物を含有する画分を
合わせてエバポレートして、粘着性の固体を得た。その
固体を乾燥エーテルで洗浄して、白色固体であるＦＴＣ
（６．００ｇｍ、８８％）を得た。（ １Ｈ ＮＭＲ：
（ＤＭＳＯ−ｄ６）８．１８（１Ｈ、ｄ、Ｈ６、Ｊ＝
８．４Ｈｚ）、７．８１および７．５７（２Ｈ、ブロー
ド、ＮＨ２）、６．１２（１Ｈ、ｄｄ、Ｈ１’、Ｊ＝
５．７および４．２Ｈｚ）、５．４０（１Ｈ、ｔ、Ｏ
Ｈ、Ｊ＝５．７Ｈｚ）、５．１７（１Ｈ、ｔ、１
Ｈ４’、Ｊ＝３−６Ｈｚ）、３．７４（２Ｈ、ｍ、２Ｈ
５’）、３．４１（１Ｈ、ｄｄ、１Ｈ２’、Ｊ＝５．７
および１１．７Ｈｚ）、３．１１（１Ｈ、ｄｄ、１Ｈ
２’、Ｊ＝４．２および１１．７Ｈｚ）； １３Ｃ ＮＭ
Ｒ：（ＤＭＳＯ−ｄ６）１５７．８５（ｄ、Ｊ＝１３．
４Ｈｚ）、１５３．２８、１３６．１２（ｄ、Ｊ＝２４
１ＨＺ）、１２６．０１（ｄ、Ｊ＝３２．６Ｈｚ）、８
６．９０、８６．８４、６２．４８、３７．０７；ｍｐ
１９５−１９６℃。
ＩＩＩ．ヌクレオシド鏡像異性体の分割 ＦＴＣの（＋）および（−）鏡像異性体を含むがこれに
限定されないヌクレオシド鏡像異性体のラセミ混合物の
分割のための方法を、本明細書中に示す。この方法は、
１，３−オキサチオランおよび１，３−ジオキソランの
誘導体のような、炭水化物または炭水化物様部分のラセ
ミ混合物の分割にも用いられ得る。この方法は、ラセミ
混合物中の１つの鏡像異性体との反応を優先的に触媒す
る酵素の使用を伴う。反応した鏡像異性体は、物理的構
造の新たな違いに基づいて、未反応の鏡像異性体と分離
される。本明細書中の開示に従い、当業者は上記ヌクレ
オシド鏡像異性体に対して選択的（または所望でない鏡
像異性体に対して選択的、所望でないものを排除する方
法として）な酵素を選択し得る。この選択は、以下に述
べる酵素の中の１つを選択するかまたは他の公知の酵素
を組織的に進化させることよって行う。本明細書の開示
により、当業者はまた必要に応じて、所望の分割を得る
基質を改変する方法を知り得る。キラルＮＭＲシフト試
薬、旋光分析、またはキラルＨＰＬＣのいずれかを用
い、回収したエステルの光学的な濃縮度を決定し得る。
以下の例は、鏡像異性体のラセミ混合物を分割する酵素
の使用方法を示している。他の公知のラセミ混合物の分
割方法と、本明細書に開示した分割方法とを組み合わせ
て使用し得る。これらの改変のすべてが、本発明の範囲
内にあると考えられる。
限定されないヌクレオシド鏡像異性体のラセミ混合物の
分割のための方法を、本明細書中に示す。この方法は、
１，３−オキサチオランおよび１，３−ジオキソランの
誘導体のような、炭水化物または炭水化物様部分のラセ
ミ混合物の分割にも用いられ得る。この方法は、ラセミ
混合物中の１つの鏡像異性体との反応を優先的に触媒す
る酵素の使用を伴う。反応した鏡像異性体は、物理的構
造の新たな違いに基づいて、未反応の鏡像異性体と分離
される。本明細書中の開示に従い、当業者は上記ヌクレ
オシド鏡像異性体に対して選択的（または所望でない鏡
像異性体に対して選択的、所望でないものを排除する方
法として）な酵素を選択し得る。この選択は、以下に述
べる酵素の中の１つを選択するかまたは他の公知の酵素
を組織的に進化させることよって行う。本明細書の開示
により、当業者はまた必要に応じて、所望の分割を得る
基質を改変する方法を知り得る。キラルＮＭＲシフト試
薬、旋光分析、またはキラルＨＰＬＣのいずれかを用
い、回収したエステルの光学的な濃縮度を決定し得る。
以下の例は、鏡像異性体のラセミ混合物を分割する酵素
の使用方法を示している。他の公知のラセミ混合物の分
割方法と、本明細書に開示した分割方法とを組み合わせ
て使用し得る。これらの改変のすべてが、本発明の範囲
内にあると考えられる。
Ｃ５’−ヌクレオシドエステルの加水分解に基づく分割 １つの実施態様では、本方法は、ヌクレオシドのラセミ
体混合物のＣ５’−ヒドロキシル基をアシル化合物と反
応させ、ヌクレオシドがエステルの「カルビノール」末
端にあるＣ５’−エステルを形成する工程を包含する。
次に鏡像異性体の一方を優先的に開裂し他方を開裂しな
い酵素、または、鏡像異性体の一方を加水分解し他方を
加水分解しない酵素を用いて、ヌクレオシドＣ５’−エ
ステルのラセミ混合物を所定の時間内処理する。本方法
の利点は、炭水化物部分または塩基部分中に任意に置換
されたピリミジンおよびプリンヌクレオシドを含む、多
様なヌクレオシドを分割するために用いられ得ることで
ある。本方法はまた、例えばＦＴＣおよびＢＣＨ−１８
９のような炭水化物部分中に付加的なヘテロ原子を含有
するヌクレオシド誘導体を分割するためにも用いられ得
る。本方法の広い適用性は、ある酵素が鏡像異性体を区
別する能力においてこのエステルのカルビノール部分が
１つの役割を果たすにもかかわらず、これらの酵素に対
する主要な認識部位がこのエステルのカルボン酸部分に
あるという事実に、部分的に帰する。さらに、一方の酵
素／基質の研究結果に基づき、両者の基質のカルボン酸
部分が同一であるかまたは実質的に同じであるという条
件で、他方の表面的に異なる系をうまく推定し得る。本
方法の他の利点は、この方法が局所選択性を有すること
である。エステルを加水分解する酵素は、一般に、その
分子の他の部分における異質な反応を触媒しない。例え
ば、酵素リパーゼは、その内部のラクトンを加水分解す
ることなく、２−ヒドロキシメチル−５−オキソ−１，
３−オキサチオランのエステルの加水分解を触媒する。
このことは、エステルを加水分解する「化学的な」手法
とは明らかに対照的である。さらに本方法の他の利点
は、反応混合物から加水分解されない鏡像異性体と加水
分解された鏡像異性体とを分別することが、非常に簡単
であることである。加水分解されない鏡像異性体は、加
水分解された鏡像異性体に比べ、より親油性であり、ヘ
キサンおよびヘキサン／エーテルを含む、多様な非極性
溶媒または溶媒混合液の１つを用いる簡単な抽出によっ
て効率よく回収され得る。より親油性が低く、より極性
が高い、加水分解された鏡像異性体は、例えば酢酸エチ
ルなどのより極性の高い有機溶媒による抽出、もしくは
凍結乾燥後のエタノールまたはメタノールによる抽出に
よって得られ得る。いくつかの条件下で酵素を変性し得
るので、加水分解の間はアルコールを避けるべきであ
る。酵素および基質 酵素および基質の適切な組合せにより、各ヌクレオシド
鏡像異性体の単離のための条件が確立され得る。所望の
鏡像異性体を加水分解する酵素でラセミ混合物を処理す
る（次に極性の加水分解物を極性溶媒で抽出する）か、
または所望でない鏡像異性体を加水分解する酵素でラセ
ミ混合物を処理する（次に非極性溶媒を用いて所望でな
い鏡像異性体を除去する）ことにより、所望の鏡像異性
体を単離し得る。エステルの加水分解を触媒する酵素と
しては、例えばブタ肝臓エステラーゼなどのエステラー
ゼ、ブタ膵臓リパーゼおよびＡｍａｎｏ ＰＳ−８００
リパーゼを含むリパーゼ、サブスチルリシン（ｓｕｂｓ
ｔｉｌｌｉｓｉｎ）、およびα−キモトリプシンを含
む。図３は、ＦＴＣの（＋）および（−）鏡像異性体に
対するアルカリ性ホスファターゼおよびヘビ毒ホスホジ
エステラーゼの特異性に関するフローチャートである。
図に示すように、アルカリ性ホスファターゼはＦＴＣの
両方の鏡像異性体のトリホスフェートを加水分解するの
で、分離の手段として有効ではない。ホスホジエステラ
ーゼＩによりＦＴＣの（＋）−異性体をそのモノエステ
ルに優先的に加水分解し、このエステルを次に５’−ヌ
クレオチダーゼにさらして（＋）−ＦＴＣを生じさせ得
る。ヌクレオシドのＣ５’−位のエステル化に用いられ
る最も有効なアシル基は、選択された酵素系を用いて多
数の同族体を評価することにより、過度の実験を行わず
に決定され得る。例えば、１，３−オキサチオランヌク
レオシドが酪酸でエステル化されていれば、ブタ肝臓エ
ステラーゼおよびＡｍａｎｏ ＰＳ−８００のいずれに
よる分割も、高い鏡像選択性（多い方の鏡像異性体の占
める割合が９４−１００％）および逆の選択性を伴って
進行する。ブタ肝臓エステラーゼはＦＴＣの（＋）−鏡
像異性体を優先的に加水 的に加水分解する。表１に記載した、多い方の鏡像異性
体の占める割合（％）は、酵素処理した混合物中に残存
する精製ブチレートエステル（すなわち、ＰＬＥの場合
の（−）−ＦＴＣのブチレート エステル）の量である。特定のヌクレオシド鏡像異性体
混合物および特定の酵素に用いて使用性を評価し得るア
シル基の例としては、酢酸、プロピオン酸、酪酸、およ
び吉草酸を含むアルキルカルボン酸および置換されたア
ルキルカルボン酸が含まれるが、これに限定されない。
エステル結合を弱めて加水分解を促進するためには、あ
る種の酵素と共に、著しい電子−受容性のアシル化合物
を用いることが好ましい。電子−受容性のアシル基の例
としては、２−クロロプロピオン酸、２−クロロ酪酸、
および２−クロロ吉草酸などのα−ハロエステルを含
む。α−ハロエステルはリパーゼに対する優れた基質で
ある。分割条件 酵素的加水分解は、一般に、問題となる酵素に最適なｐ
Ｈに近いｐＨを有する水性緩衝液中で、その酵素の触媒
量を用いて行われる。反応の進行に従って、遊離したカ
ルボン酸によりｐＨが下降する。その酵素に対する最適
値に近いｐＨを維持するためには、水性の塩基を加えな
ければならない。反応の進行は、ｐＨの変化およびｐＨ
維持に必要な塩基の量によって容易にモニターされ得
る。疎水性エステル（加水分解されない鏡像異性体）お
よびより極性の高いアルコール（加水分解された鏡像異
性体）は、有機溶媒の賢明な選択により、溶液から連続
的および選択的に抽出され得る。一方、固体支持相上に
固定された酵素を含有するカラムに分割する物質を通し
て、分割し得る。不均質な条件下で行われた酵素的加水
分解は、再現性が悪いという欠点がある。従って、加水
分解は均質な条件下で行われることが好ましい。アルコ
ール溶媒は酵素を変性し得るので好ましくない。均質性
は、トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００のような非イ
オン界面活性剤の使用により、成し遂げられ得る。しか
しながら、これらの界面活性剤の添加は開始物質の溶解
を助け、また、生成物の水溶性を増強させる。従って、
酵素反応は、非イオン界面活性剤の添加により、不均質
な条件下よりもより効果的に進行し得るが、回収された
開始物質および生成物の単離がより困難になり得る。生
成物は、適切なクロマトグラフィーおよび化学的（例え
ば、選択的な塩の形成）な方法によって単離され得る。
ジアシル化ヌクレオシドは、使用し得るが、多くの場合
かなり親油性であり、用いる媒体に溶解しにくい。
体混合物のＣ５’−ヒドロキシル基をアシル化合物と反
応させ、ヌクレオシドがエステルの「カルビノール」末
端にあるＣ５’−エステルを形成する工程を包含する。
次に鏡像異性体の一方を優先的に開裂し他方を開裂しな
い酵素、または、鏡像異性体の一方を加水分解し他方を
加水分解しない酵素を用いて、ヌクレオシドＣ５’−エ
ステルのラセミ混合物を所定の時間内処理する。本方法
の利点は、炭水化物部分または塩基部分中に任意に置換
されたピリミジンおよびプリンヌクレオシドを含む、多
様なヌクレオシドを分割するために用いられ得ることで
ある。本方法はまた、例えばＦＴＣおよびＢＣＨ−１８
９のような炭水化物部分中に付加的なヘテロ原子を含有
するヌクレオシド誘導体を分割するためにも用いられ得
る。本方法の広い適用性は、ある酵素が鏡像異性体を区
別する能力においてこのエステルのカルビノール部分が
１つの役割を果たすにもかかわらず、これらの酵素に対
する主要な認識部位がこのエステルのカルボン酸部分に
あるという事実に、部分的に帰する。さらに、一方の酵
素／基質の研究結果に基づき、両者の基質のカルボン酸
部分が同一であるかまたは実質的に同じであるという条
件で、他方の表面的に異なる系をうまく推定し得る。本
方法の他の利点は、この方法が局所選択性を有すること
である。エステルを加水分解する酵素は、一般に、その
分子の他の部分における異質な反応を触媒しない。例え
ば、酵素リパーゼは、その内部のラクトンを加水分解す
ることなく、２−ヒドロキシメチル−５−オキソ−１，
３−オキサチオランのエステルの加水分解を触媒する。
このことは、エステルを加水分解する「化学的な」手法
とは明らかに対照的である。さらに本方法の他の利点
は、反応混合物から加水分解されない鏡像異性体と加水
分解された鏡像異性体とを分別することが、非常に簡単
であることである。加水分解されない鏡像異性体は、加
水分解された鏡像異性体に比べ、より親油性であり、ヘ
キサンおよびヘキサン／エーテルを含む、多様な非極性
溶媒または溶媒混合液の１つを用いる簡単な抽出によっ
て効率よく回収され得る。より親油性が低く、より極性
が高い、加水分解された鏡像異性体は、例えば酢酸エチ
ルなどのより極性の高い有機溶媒による抽出、もしくは
凍結乾燥後のエタノールまたはメタノールによる抽出に
よって得られ得る。いくつかの条件下で酵素を変性し得
るので、加水分解の間はアルコールを避けるべきであ
る。酵素および基質 酵素および基質の適切な組合せにより、各ヌクレオシド
鏡像異性体の単離のための条件が確立され得る。所望の
鏡像異性体を加水分解する酵素でラセミ混合物を処理す
る（次に極性の加水分解物を極性溶媒で抽出する）か、
または所望でない鏡像異性体を加水分解する酵素でラセ
ミ混合物を処理する（次に非極性溶媒を用いて所望でな
い鏡像異性体を除去する）ことにより、所望の鏡像異性
体を単離し得る。エステルの加水分解を触媒する酵素と
しては、例えばブタ肝臓エステラーゼなどのエステラー
ゼ、ブタ膵臓リパーゼおよびＡｍａｎｏ ＰＳ−８００
リパーゼを含むリパーゼ、サブスチルリシン（ｓｕｂｓ
ｔｉｌｌｉｓｉｎ）、およびα−キモトリプシンを含
む。図３は、ＦＴＣの（＋）および（−）鏡像異性体に
対するアルカリ性ホスファターゼおよびヘビ毒ホスホジ
エステラーゼの特異性に関するフローチャートである。
図に示すように、アルカリ性ホスファターゼはＦＴＣの
両方の鏡像異性体のトリホスフェートを加水分解するの
で、分離の手段として有効ではない。ホスホジエステラ
ーゼＩによりＦＴＣの（＋）−異性体をそのモノエステ
ルに優先的に加水分解し、このエステルを次に５’−ヌ
クレオチダーゼにさらして（＋）−ＦＴＣを生じさせ得
る。ヌクレオシドのＣ５’−位のエステル化に用いられ
る最も有効なアシル基は、選択された酵素系を用いて多
数の同族体を評価することにより、過度の実験を行わず
に決定され得る。例えば、１，３−オキサチオランヌク
レオシドが酪酸でエステル化されていれば、ブタ肝臓エ
ステラーゼおよびＡｍａｎｏ ＰＳ−８００のいずれに
よる分割も、高い鏡像選択性（多い方の鏡像異性体の占
める割合が９４−１００％）および逆の選択性を伴って
進行する。ブタ肝臓エステラーゼはＦＴＣの（＋）−鏡
像異性体を優先的に加水 的に加水分解する。表１に記載した、多い方の鏡像異性
体の占める割合（％）は、酵素処理した混合物中に残存
する精製ブチレートエステル（すなわち、ＰＬＥの場合
の（−）−ＦＴＣのブチレート エステル）の量である。特定のヌクレオシド鏡像異性体
混合物および特定の酵素に用いて使用性を評価し得るア
シル基の例としては、酢酸、プロピオン酸、酪酸、およ
び吉草酸を含むアルキルカルボン酸および置換されたア
ルキルカルボン酸が含まれるが、これに限定されない。
エステル結合を弱めて加水分解を促進するためには、あ
る種の酵素と共に、著しい電子−受容性のアシル化合物
を用いることが好ましい。電子−受容性のアシル基の例
としては、２−クロロプロピオン酸、２−クロロ酪酸、
および２−クロロ吉草酸などのα−ハロエステルを含
む。α−ハロエステルはリパーゼに対する優れた基質で
ある。分割条件 酵素的加水分解は、一般に、問題となる酵素に最適なｐ
Ｈに近いｐＨを有する水性緩衝液中で、その酵素の触媒
量を用いて行われる。反応の進行に従って、遊離したカ
ルボン酸によりｐＨが下降する。その酵素に対する最適
値に近いｐＨを維持するためには、水性の塩基を加えな
ければならない。反応の進行は、ｐＨの変化およびｐＨ
維持に必要な塩基の量によって容易にモニターされ得
る。疎水性エステル（加水分解されない鏡像異性体）お
よびより極性の高いアルコール（加水分解された鏡像異
性体）は、有機溶媒の賢明な選択により、溶液から連続
的および選択的に抽出され得る。一方、固体支持相上に
固定された酵素を含有するカラムに分割する物質を通し
て、分割し得る。不均質な条件下で行われた酵素的加水
分解は、再現性が悪いという欠点がある。従って、加水
分解は均質な条件下で行われることが好ましい。アルコ
ール溶媒は酵素を変性し得るので好ましくない。均質性
は、トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００のような非イ
オン界面活性剤の使用により、成し遂げられ得る。しか
しながら、これらの界面活性剤の添加は開始物質の溶解
を助け、また、生成物の水溶性を増強させる。従って、
酵素反応は、非イオン界面活性剤の添加により、不均質
な条件下よりもより効果的に進行し得るが、回収された
開始物質および生成物の単離がより困難になり得る。生
成物は、適切なクロマトグラフィーおよび化学的（例え
ば、選択的な塩の形成）な方法によって単離され得る。
ジアシル化ヌクレオシドは、使用し得るが、多くの場合
かなり親油性であり、用いる媒体に溶解しにくい。
実施例２： 鏡像選択性リパーゼに触媒されたＦＴＣエ
ステルの加水分解 多数のＦＴＣの５’−０−アシル誘導体を、（±）−Ｆ
ＴＣのＮ−塩酸塩の選択的な０−アシル化によって調製
した（表１および図４参照）。これらの誘導体のリパー
ゼによる加水分解の効率を調べた。表１に示すように、
ブタ肝臓エステラーゼ（ＰＬＥ）は、ＦＴＣの（＋）−
鏡像異性体のエステルの加水分解に対する高い選択性を
示し、混合物のＨＰＬＣ分析においては、（−）−ＦＴ
Ｃのブチレートが支配的であることが示されている。こ
れとは対照的に、ＰＳ−８００は、ＦＴＣの（−）−鏡
像異性体のエステルを優先的に加水分解し、混合物のＨ
ＰＬＣ分析においては、（＋）−ＦＴＣのブチレートが
支配的であることが示されている。加水分解の速度はま
た、アシル基の性質に依存することがわかっている；ア
セチル誘導体はブチリル誘導体よりも著しく遅い。現在
では、ＦＴＣのプロピオン酸エステルの加水分解の速度
は、ブチレート誘導体において見られたよりもさらに速
いことがわかっている。回収率および多い方の鏡像異性
体が占める割合（％）を、いずれもＨＰＬＣを用いて測
定した。ＰＬＥを用いる場合には鏡像選択性が優れてい
る（一般に多い方の鏡像異性体が占める割合が９７％ま
たはそれ以上）が、それ以上の濃縮は連続的な酵素的加
水分解反応によって成し遂げられ得る。ＰＬＥに触媒さ
れた加水分解由来の鏡像異性体が濃縮されたブチレート
は、ＰＳ−８００によって酵素的に加水分解される。
ステルの加水分解 多数のＦＴＣの５’−０−アシル誘導体を、（±）−Ｆ
ＴＣのＮ−塩酸塩の選択的な０−アシル化によって調製
した（表１および図４参照）。これらの誘導体のリパー
ゼによる加水分解の効率を調べた。表１に示すように、
ブタ肝臓エステラーゼ（ＰＬＥ）は、ＦＴＣの（＋）−
鏡像異性体のエステルの加水分解に対する高い選択性を
示し、混合物のＨＰＬＣ分析においては、（−）−ＦＴ
Ｃのブチレートが支配的であることが示されている。こ
れとは対照的に、ＰＳ−８００は、ＦＴＣの（−）−鏡
像異性体のエステルを優先的に加水分解し、混合物のＨ
ＰＬＣ分析においては、（＋）−ＦＴＣのブチレートが
支配的であることが示されている。加水分解の速度はま
た、アシル基の性質に依存することがわかっている；ア
セチル誘導体はブチリル誘導体よりも著しく遅い。現在
では、ＦＴＣのプロピオン酸エステルの加水分解の速度
は、ブチレート誘導体において見られたよりもさらに速
いことがわかっている。回収率および多い方の鏡像異性
体が占める割合（％）を、いずれもＨＰＬＣを用いて測
定した。ＰＬＥを用いる場合には鏡像選択性が優れてい
る（一般に多い方の鏡像異性体が占める割合が９７％ま
たはそれ以上）が、それ以上の濃縮は連続的な酵素的加
水分解反応によって成し遂げられ得る。ＰＬＥに触媒さ
れた加水分解由来の鏡像異性体が濃縮されたブチレート
は、ＰＳ−８００によって酵素的に加水分解される。
実施例３： 鏡像選択性のリパーゼに触媒された、ＦＴ
Ｃブチレートの加水分解を介する（＋）−および（−）
−ＦＴＣの調製方法 （±）−ＦＴＣの５’−０−ブチレート（０．４７ｍｍ
ｏｌ、１４９ｍｇ）を、ｐＨ８緩衝液：ＣＨ３ＣＮが
４：１の溶液１６ｍＬに溶解した。澄明な溶液を攪拌
し、２６ｍｇのブタ肝臓エステラーゼ（ＰＬＥ−Ａ）で
処理した。反応の進行をＨＰＬＣによってモニターした
（図４）。２０時間後（変換率５２％）、ＣＨＣｌ３
２×８０ｍＬおよび酢酸エチル８０ｍＬを用いて、反応
混合物を抽出した。抽出液の有機層を合わせて、無水Ｍ
ｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そしてロータリーエバポレ
ーションにより濃縮した。溶出液として酢酸エチルを用
い、２×１０００ｍのｐＴＬＣプレートによって残留物
を溶出（２回溶出）し、単離し、ＨＰＬＣにより、多い
方の鏡像異性体が占める割合が９８％であるＦＴＣブチ
レート５３ｍｇ（開始物質に対し３６％）を得た。鏡像
異性体が濃縮されたブチレートを１．６ｍＬのメタノー
ルで処理し、次に０．３８ｍｍｏｌ（２０ｍｇ）のナト
リウムメトキシドで処理した。得られた混合物を室温で
攪拌し、反応の進行をＨＰＬＣでモニターした。反応は
３０分以内に完了した。溶媒をロータリーエバポレーシ
ョンにより除去し、粗製の白色固体（７６ｍｇ）を得、
５：１の酢酸エチル：エタノールを用いて１０００ｍの
ｐＴＬＣにより溶出した。（−）−ＦＴＣが白色固体
（３３ｍｇ；収率８２％）として単離された。５’−０
−アセテート誘導体としてのＦＴＣのＨＰＬＣ分析は、
多い方の鏡像異性体の占める割合が９７％；［α］（
２０，Ｄ）−１２０．５゜（ｃ＝０．８８；無水エタノ
ール）を示した。完了時に反応混合液にＨＣＣｌ３を加
え（これにより、酵素を変性させる）、真空下で溶媒を
除き、次にＨＣＣｌ３で抽出することにより、操作工程
における乳濁化を避け得る。同様に、（±）−ＦＴＣの
５’−０−ブチレート１．２ｍｍｏｌ（３７５ｍｇ）を
４：１のｐＨ８緩衝液−ＣＨ３ＣＮ ４０ｍＬに溶解し
た。澄明な溶液を攪拌し、５８ｍｇのブタ肝臓エステラ
ーゼ（ＰＬＥ−Ａ）で処理した。反応の進行をＨＰＬＣ
でモニターした。９０分後（変換率３８％）、反応混合
物に１５０ｍＬのＣＨＣｌ３を加えた。層を分離し、水
層を凍結乾燥して溶媒を除去した。凍結乾燥により白色
残留物を、３×１０ｍＬの無水エタノールで抽出した。
抽出物を濾過し、合わせて、真空下で濃縮し、１７９ｍ
ｇの粗製の油状物質を得た。粗製の物質を４５×３０ｍ
ｍのシリカゲルカラムにより３×７５ｍＬの酢酸エチル
を用いて溶出し、次に５：１の酢酸エチル−エタノール
を用いて溶出した。（＋）−ＦＴＣが白色固体（１０９
ｍｇ；開始ブチレートに対し３７％）として単離され
た。５’−０−アセテート誘導体としての（＋）−ＦＴ
ＣのＨＰＬＣ分析により、多い方の鏡像異性体の占める
割合が９７．４％；［ａ］０（２０、Ｄ）＋１１３．４
゜（ｃ＝２．５３；無水エタノール）であった。４：１
のｐＨ８緩衝液−ＣＨ３ＣＮ中４．０ｍＬ（７）ＦＴＣ
の５’−０−ブチレート０．１２ｍｍｏｌ（３７ｍｇ）
およびＰＳ−８００ ７ｍｇを用いて、同様の反応を行
った。反応はＰＬＥ−Ａを用いる場合よりもかなり遅
く、５９％の変換率を得るには７４時間を要した。回収
したブチレート（１１．４ｍｇ；開始時の量の３１％）
は、ＨＰＬＣによる多い方の鏡像異性体の占める割合が
９４％であった。シチジン−デオキシシチジンデアミナ
ーゼによるヌクレオシド鏡像異性体の分割その他の実施
態様としては、シチジン−デオキシシチジンデアミナー
ゼを用いて２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロ
−シトシン−１−イル）−１，３−オキサチオランを含
む２−ヒドロキシメチル−５−（シトシン−１−イル）
−１，３−オキサチオランおよびその誘導体のラセミ混
合物を分割する。この酵素はシトシン部分を脱アミノ化
してウラシルにする反応を触媒する。１，３−オキサチ
オランヌクレオシドの鏡像異性体の１つは、シチジン−
デオキシシチジンデアミナーゼに対する好ましい基質で
あることがわかっている。ウラシル誘導体に変換されな
い（従ってまだ塩基性である）鏡像異性体を、酸性の溶
液を用いて溶液から抽出する。強い酸性溶液（３．０よ
り低いｐＨ）はオキサチオラン環を開裂するので、避け
るように注意する。シチジン−デオキシシチジンデアミ
ナーゼはラット肝臓またはヒト肝臓から単離され得る
か、もしくはＥ．ｃｏｌｉ中のような原核系での組換え
配列によって発現され得る。シチジン−デオキシシチジ
ンデアミナーゼを用いるシチジンヌクレオシド鏡像異性
体の分割方法は、単独の分割方法として用いられ得る
か、または上述のような５’−０−ヌクレオシドエステ
ルの酵素的加水分解による分割を含む他の分割方法と組
み合わせて用いられ得る。
Ｃブチレートの加水分解を介する（＋）−および（−）
−ＦＴＣの調製方法 （±）−ＦＴＣの５’−０−ブチレート（０．４７ｍｍ
ｏｌ、１４９ｍｇ）を、ｐＨ８緩衝液：ＣＨ３ＣＮが
４：１の溶液１６ｍＬに溶解した。澄明な溶液を攪拌
し、２６ｍｇのブタ肝臓エステラーゼ（ＰＬＥ−Ａ）で
処理した。反応の進行をＨＰＬＣによってモニターした
（図４）。２０時間後（変換率５２％）、ＣＨＣｌ３
２×８０ｍＬおよび酢酸エチル８０ｍＬを用いて、反応
混合物を抽出した。抽出液の有機層を合わせて、無水Ｍ
ｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そしてロータリーエバポレ
ーションにより濃縮した。溶出液として酢酸エチルを用
い、２×１０００ｍのｐＴＬＣプレートによって残留物
を溶出（２回溶出）し、単離し、ＨＰＬＣにより、多い
方の鏡像異性体が占める割合が９８％であるＦＴＣブチ
レート５３ｍｇ（開始物質に対し３６％）を得た。鏡像
異性体が濃縮されたブチレートを１．６ｍＬのメタノー
ルで処理し、次に０．３８ｍｍｏｌ（２０ｍｇ）のナト
リウムメトキシドで処理した。得られた混合物を室温で
攪拌し、反応の進行をＨＰＬＣでモニターした。反応は
３０分以内に完了した。溶媒をロータリーエバポレーシ
ョンにより除去し、粗製の白色固体（７６ｍｇ）を得、
５：１の酢酸エチル：エタノールを用いて１０００ｍの
ｐＴＬＣにより溶出した。（−）−ＦＴＣが白色固体
（３３ｍｇ；収率８２％）として単離された。５’−０
−アセテート誘導体としてのＦＴＣのＨＰＬＣ分析は、
多い方の鏡像異性体の占める割合が９７％；［α］（
２０，Ｄ）−１２０．５゜（ｃ＝０．８８；無水エタノ
ール）を示した。完了時に反応混合液にＨＣＣｌ３を加
え（これにより、酵素を変性させる）、真空下で溶媒を
除き、次にＨＣＣｌ３で抽出することにより、操作工程
における乳濁化を避け得る。同様に、（±）−ＦＴＣの
５’−０−ブチレート１．２ｍｍｏｌ（３７５ｍｇ）を
４：１のｐＨ８緩衝液−ＣＨ３ＣＮ ４０ｍＬに溶解し
た。澄明な溶液を攪拌し、５８ｍｇのブタ肝臓エステラ
ーゼ（ＰＬＥ−Ａ）で処理した。反応の進行をＨＰＬＣ
でモニターした。９０分後（変換率３８％）、反応混合
物に１５０ｍＬのＣＨＣｌ３を加えた。層を分離し、水
層を凍結乾燥して溶媒を除去した。凍結乾燥により白色
残留物を、３×１０ｍＬの無水エタノールで抽出した。
抽出物を濾過し、合わせて、真空下で濃縮し、１７９ｍ
ｇの粗製の油状物質を得た。粗製の物質を４５×３０ｍ
ｍのシリカゲルカラムにより３×７５ｍＬの酢酸エチル
を用いて溶出し、次に５：１の酢酸エチル−エタノール
を用いて溶出した。（＋）−ＦＴＣが白色固体（１０９
ｍｇ；開始ブチレートに対し３７％）として単離され
た。５’−０−アセテート誘導体としての（＋）−ＦＴ
ＣのＨＰＬＣ分析により、多い方の鏡像異性体の占める
割合が９７．４％；［ａ］０（２０、Ｄ）＋１１３．４
゜（ｃ＝２．５３；無水エタノール）であった。４：１
のｐＨ８緩衝液−ＣＨ３ＣＮ中４．０ｍＬ（７）ＦＴＣ
の５’−０−ブチレート０．１２ｍｍｏｌ（３７ｍｇ）
およびＰＳ−８００ ７ｍｇを用いて、同様の反応を行
った。反応はＰＬＥ−Ａを用いる場合よりもかなり遅
く、５９％の変換率を得るには７４時間を要した。回収
したブチレート（１１．４ｍｇ；開始時の量の３１％）
は、ＨＰＬＣによる多い方の鏡像異性体の占める割合が
９４％であった。シチジン−デオキシシチジンデアミナ
ーゼによるヌクレオシド鏡像異性体の分割その他の実施
態様としては、シチジン−デオキシシチジンデアミナー
ゼを用いて２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロ
−シトシン−１−イル）−１，３−オキサチオランを含
む２−ヒドロキシメチル−５−（シトシン−１−イル）
−１，３−オキサチオランおよびその誘導体のラセミ混
合物を分割する。この酵素はシトシン部分を脱アミノ化
してウラシルにする反応を触媒する。１，３−オキサチ
オランヌクレオシドの鏡像異性体の１つは、シチジン−
デオキシシチジンデアミナーゼに対する好ましい基質で
あることがわかっている。ウラシル誘導体に変換されな
い（従ってまだ塩基性である）鏡像異性体を、酸性の溶
液を用いて溶液から抽出する。強い酸性溶液（３．０よ
り低いｐＨ）はオキサチオラン環を開裂するので、避け
るように注意する。シチジン−デオキシシチジンデアミ
ナーゼはラット肝臓またはヒト肝臓から単離され得る
か、もしくはＥ．ｃｏｌｉ中のような原核系での組換え
配列によって発現され得る。シチジン−デオキシシチジ
ンデアミナーゼを用いるシチジンヌクレオシド鏡像異性
体の分割方法は、単独の分割方法として用いられ得る
か、または上述のような５’−０−ヌクレオシドエステ
ルの酵素的加水分解による分割を含む他の分割方法と組
み合わせて用いられ得る。
酵素的分割方法と古典的分割方法との組合せ ヌクレオシド鏡像異性体のラセミ混合物を分割するため
の上述の方法は、最終生成物の光学純度を増大するため
に、鏡像異性体分割の他の古典的方法と組み合され得
る。分割の古典的方法は、種々の物理的および化学的手
法を含む。多くの場合、最も単純で最も効果的な手法は
再結晶である。これは、ラセミ体の方が、対応するそれ
ぞれの鏡像異性体よりもほとんどの場合溶解し易いとい
う原理に基づく。再結晶は、アシル化化合物または最終
鏡像異性体生成物を含むどの段階でも行われ得る。成功
する場合には、この単純な方法を、選択する方法とす
る。受容可能な光学純度の物質が再結晶によって得られ
ない場合には、他の方法が評価され得る。ヌクレオシド
が塩基性（例えば、シチジン）であれば、著しく異なる
溶解度特性を有し得るジアステレオマー混合物を形成す
る、キラルな酸を用い得る。キラルな酸の例としては、
リンゴ酸、マンデル酸、ジベンゾイル酒石酸、３−ブロ
モカンファー−８−スルホン酸、１０−カンファースル
ホン酸、およびジ−ｐ−トルオイル酒石酸を含むが、こ
れに限定されない。同様に、キラルな酸誘導体によるフ
リーなヒドロキシル基のアシル化はまた、分離されるに
充分な程度に物理的特性が異なり得る、ジアステレオマ
ー混合物を形成する。鏡像異性的に濃縮された少量のヌ
クレオシドは、Ｒａｉｎｉｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ
により販売されるシクロデキストリン結合カラムを含
む、キラル分離のために設計されたＨＰＬＣカラムにラ
セミ混合物を通すことによって得られ得るかまたは精製
され得る。
の上述の方法は、最終生成物の光学純度を増大するため
に、鏡像異性体分割の他の古典的方法と組み合され得
る。分割の古典的方法は、種々の物理的および化学的手
法を含む。多くの場合、最も単純で最も効果的な手法は
再結晶である。これは、ラセミ体の方が、対応するそれ
ぞれの鏡像異性体よりもほとんどの場合溶解し易いとい
う原理に基づく。再結晶は、アシル化化合物または最終
鏡像異性体生成物を含むどの段階でも行われ得る。成功
する場合には、この単純な方法を、選択する方法とす
る。受容可能な光学純度の物質が再結晶によって得られ
ない場合には、他の方法が評価され得る。ヌクレオシド
が塩基性（例えば、シチジン）であれば、著しく異なる
溶解度特性を有し得るジアステレオマー混合物を形成す
る、キラルな酸を用い得る。キラルな酸の例としては、
リンゴ酸、マンデル酸、ジベンゾイル酒石酸、３−ブロ
モカンファー−８−スルホン酸、１０−カンファースル
ホン酸、およびジ−ｐ−トルオイル酒石酸を含むが、こ
れに限定されない。同様に、キラルな酸誘導体によるフ
リーなヒドロキシル基のアシル化はまた、分離されるに
充分な程度に物理的特性が異なり得る、ジアステレオマ
ー混合物を形成する。鏡像異性的に濃縮された少量のヌ
クレオシドは、Ｒａｉｎｉｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ
により販売されるシクロデキストリン結合カラムを含
む、キラル分離のために設計されたＨＰＬＣカラムにラ
セミ混合物を通すことによって得られ得るかまたは精製
され得る。
実施例４： ＨＰＬＣによるヌクレオシドのラセミ混合
物の分離 （±）−ＦＴＣのＣ４’−鏡像異性体の分割を、Ｒａｉ
ｎｉｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｗｏｂｕｒｎ，Ｍ
Ａ）から入手したキラルなシクロデキストリン結合（シ
クロボンド（ｃｙｃｌｏｂｏｎｄ）ＡＣ−Ｉ）カラムを
用いて行った。条件は次の通りであった：イソクラティ
ックな０．５％メタノール水；流速１ｍｌ／ｍｉｎ．、
２６２ｎｍでのＵＶの検出。ＨＰＬＣ用メタノールは
Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ（Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，Ｎ
Ｊ）から入手した。ラセミ混合物を注入し、画分を収集
した。鏡像異性体のそれぞれを含有する画分をプール
し、凍結し、次に凍結乾燥した。ＵＶ分光分析およびそ
れらのＨＰＬＣの保持時間によって、化合物を特徴づけ
た。一般に、（−）−鏡像異性体は、（＋）−鏡像異性
体よりも短い保持時間を有する（Ｊ．Ｌｉｑｕｉｄ Ｃ
ｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ７：３５３−３７６，１９
８４を参照）。生物学的評価のために、水中に調製され
た濃度既知の保存溶液（１５μＭ）を用いて、化合物の
濃度をＵＶ分光分析により測定した。分離された鏡像異
性体の保持時間を、表２に示す。
物の分離 （±）−ＦＴＣのＣ４’−鏡像異性体の分割を、Ｒａｉ
ｎｉｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｗｏｂｕｒｎ，Ｍ
Ａ）から入手したキラルなシクロデキストリン結合（シ
クロボンド（ｃｙｃｌｏｂｏｎｄ）ＡＣ−Ｉ）カラムを
用いて行った。条件は次の通りであった：イソクラティ
ックな０．５％メタノール水；流速１ｍｌ／ｍｉｎ．、
２６２ｎｍでのＵＶの検出。ＨＰＬＣ用メタノールは
Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ（Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，Ｎ
Ｊ）から入手した。ラセミ混合物を注入し、画分を収集
した。鏡像異性体のそれぞれを含有する画分をプール
し、凍結し、次に凍結乾燥した。ＵＶ分光分析およびそ
れらのＨＰＬＣの保持時間によって、化合物を特徴づけ
た。一般に、（−）−鏡像異性体は、（＋）−鏡像異性
体よりも短い保持時間を有する（Ｊ．Ｌｉｑｕｉｄ Ｃ
ｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ７：３５３−３７６，１９
８４を参照）。生物学的評価のために、水中に調製され
た濃度既知の保存溶液（１５μＭ）を用いて、化合物の
濃度をＵＶ分光分析により測定した。分離された鏡像異
性体の保持時間を、表２に示す。
実施例５ キラルなカラムを用いるＦＴＣ鏡像異性体の
その他の分離方法 シクロボンドＩ−Ａｃカラム（５μｍ、２５ｃｍ×４．
６ｍｍ、ＲａｉｎｉｎＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｗｏｂ
ｕｒｎ，ＭＡ、カタログ番号ＡＳＴ−４１０４９）を用
いた、流速０．６ｍｌ／ｍｉｎのイソクラティックな
０．５％メタノール（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆ
ｉｃ，Ｉｎｃ．、ＨＰＬＣ用、カタログ番号Ａ−４５２
−４水溶液）および２６２ｎｍでのＵＶの検出による、
ＦＴＣ鏡像異性体の保持時間は１２．６８分（（−）−
ＦＴＣ）および１３．２０分（（＋）−ＦＴＣ）であっ
た。キラルパック（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ）ＡＳカラム
（１０μｍ、２５ｃｍ×４．６ｍｍ、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅ
ｒ Ｉｎｃ．，Ｐｈｉｌｌｉｓｂｕｒｇ，ＮＪ、カタロ
グ番号７４０６−００、製造番号０９−２９−１０３２
０）を用いた、流速０．８ｍｌ／ｍｉｎのイソプロピル
アルコール（ＨＰＬＣ用、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔ
ｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．、カタログ番号Ａ−４５１−４）
および２６２ｎｍでのＵＶの検出による、ＦＴＣ鏡像異
性体の保持時間は、５．９分（（−）−ＦＴＣ）および
９．８分（（＋）−ＦＴＣ）であった。
その他の分離方法 シクロボンドＩ−Ａｃカラム（５μｍ、２５ｃｍ×４．
６ｍｍ、ＲａｉｎｉｎＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｗｏｂ
ｕｒｎ，ＭＡ、カタログ番号ＡＳＴ−４１０４９）を用
いた、流速０．６ｍｌ／ｍｉｎのイソクラティックな
０．５％メタノール（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆ
ｉｃ，Ｉｎｃ．、ＨＰＬＣ用、カタログ番号Ａ−４５２
−４水溶液）および２６２ｎｍでのＵＶの検出による、
ＦＴＣ鏡像異性体の保持時間は１２．６８分（（−）−
ＦＴＣ）および１３．２０分（（＋）−ＦＴＣ）であっ
た。キラルパック（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ）ＡＳカラム
（１０μｍ、２５ｃｍ×４．６ｍｍ、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅ
ｒ Ｉｎｃ．，Ｐｈｉｌｌｉｓｂｕｒｇ，ＮＪ、カタロ
グ番号７４０６−００、製造番号０９−２９−１０３２
０）を用いた、流速０．８ｍｌ／ｍｉｎのイソプロピル
アルコール（ＨＰＬＣ用、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔ
ｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．、カタログ番号Ａ−４５１−４）
および２６２ｎｍでのＵＶの検出による、ＦＴＣ鏡像異
性体の保持時間は、５．９分（（−）−ＦＴＣ）および
９．８分（（＋）−ＦＴＣ）であった。
ＩＶ． ＨＩＶ複製に対する２−ヒドロキシメチル−５
−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキ
サチオラン（「ＦＴＣ」）の阻害能 鏡像異性的に濃縮された成分にさらに分割する、および
さらに抗ウィルス活性を評価するためのヌクレオシド異
性体を決定するために、多数のヌクレオシドのラセミ混
合物を予備工程で選別することが多くの場合望ましい。
ＨＩＶを阻害するヌクレオシドの能力は、種々の実験手
法によって測定され得る。本明細書で用い、下記に詳述
する手法では、ＨＩＶ−１（ＬＡＶ株）に感染したフィ
トヘムアグルチニン（ＰＨＡ）刺激性ヒト末梢血単核
（ＰＢＭ）細胞中のウィルス複製の阻害を測定する。ウ
ィルス−コードされた逆転写酵素を測定することによ
り、産生されたウィルスの量が決定される。生成された
酵素の量は、産生されたウィルスの量に比例する。表３
に、多数の（±）−１，３−オキサチオランおよびヌク
レオシドの、ＥＣ５０値（ＰＢＭ細胞中のウィルス複製
を５０％阻害するヌクレオシド濃度、誤差係数１０％で
算定）およびＩＣ５０値（ミトゲン−剌激性未感染ヒト
ＰＢＭ細胞の増殖を５０％阻害するヌクレオシド濃度）
を示す。
−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキ
サチオラン（「ＦＴＣ」）の阻害能 鏡像異性的に濃縮された成分にさらに分割する、および
さらに抗ウィルス活性を評価するためのヌクレオシド異
性体を決定するために、多数のヌクレオシドのラセミ混
合物を予備工程で選別することが多くの場合望ましい。
ＨＩＶを阻害するヌクレオシドの能力は、種々の実験手
法によって測定され得る。本明細書で用い、下記に詳述
する手法では、ＨＩＶ−１（ＬＡＶ株）に感染したフィ
トヘムアグルチニン（ＰＨＡ）刺激性ヒト末梢血単核
（ＰＢＭ）細胞中のウィルス複製の阻害を測定する。ウ
ィルス−コードされた逆転写酵素を測定することによ
り、産生されたウィルスの量が決定される。生成された
酵素の量は、産生されたウィルスの量に比例する。表３
に、多数の（±）−１，３−オキサチオランおよびヌク
レオシドの、ＥＣ５０値（ＰＢＭ細胞中のウィルス複製
を５０％阻害するヌクレオシド濃度、誤差係数１０％で
算定）およびＩＣ５０値（ミトゲン−剌激性未感染ヒト
ＰＢＭ細胞の増殖を５０％阻害するヌクレオシド濃度）
を示す。
実施例６： （±）−１，３−オキサチオランヌクレオ
シドの抗−ＨＩＶ活性 Ａ．Ｂ型肝炎およびＨＩＶ−１の血清陰性の健康な提供
者から得られた３日齢のフィトヘムアグルチニン−刺激
性ＰＢＭ細胞（１０６細胞／ｍｌ）を、ｍｌ当りの５０
％組織培養感染容量（ＴＩＣＤ５０）の約１００倍の濃
度でＨＩＶ−１（ＬＡＶ株）に感染させ、種々の濃度の
抗ウィルス化合物の存在下および非存在下で培養した。
シドの抗−ＨＩＶ活性 Ａ．Ｂ型肝炎およびＨＩＶ−１の血清陰性の健康な提供
者から得られた３日齢のフィトヘムアグルチニン−刺激
性ＰＢＭ細胞（１０６細胞／ｍｌ）を、ｍｌ当りの５０
％組織培養感染容量（ＴＩＣＤ５０）の約１００倍の濃
度でＨＩＶ−１（ＬＡＶ株）に感染させ、種々の濃度の
抗ウィルス化合物の存在下および非存在下で培養した。
Ｂ．感染の約１時間後、試験する化合物を含む（培地中
の最終濃度の２倍）かまたは含まない培地を、フラスコ
に加えた（５ｍｌ；最終容量１０ｍｌ）。陽性対照とし
てＡＺＴを用いた。
の最終濃度の２倍）かまたは含まない培地を、フラスコ
に加えた（５ｍｌ；最終容量１０ｍｌ）。陽性対照とし
てＡＺＴを用いた。
Ｃ．細胞をウィルス（約２×１０５ｄｐｍ／ｍｌ，逆転
写酵素アッセイによって測定した）にさらし、次にＣＯ
２インキュベーター中に置いた。ＨＩＶ−１（ＬＡＶ
株）は、米国防疫センター（Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒＤｉ
ｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ）Ａｔｌａｎｔａ，Ｇｅｏ
ｒｇｉａから入手した。ＰＢＭ細胞の培養、ウィルスの
収集および逆転写酵素活性測定に用いた方法は、培地中
にファンギソンを含まないこと（Ｓｃｈｉｎａｚｉら、
Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．ＡｇｅｎｔｓおよびＣｈ
ｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．３２、１７８４−１７８７（１
９８８）；同、３４：１０６１−１０６７（１９９０）
を参照）以外は、ＭｃＤｏｕｇａｌら（Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎ．Ｍｅｔｈ．７６、１７１−１８３、１９８５）およ
びＳｐｉｒａら（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｔｈ．２５、９７
−９９、１９８７年）に記載された方法を用いた。
写酵素アッセイによって測定した）にさらし、次にＣＯ
２インキュベーター中に置いた。ＨＩＶ−１（ＬＡＶ
株）は、米国防疫センター（Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒＤｉ
ｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ）Ａｔｌａｎｔａ，Ｇｅｏ
ｒｇｉａから入手した。ＰＢＭ細胞の培養、ウィルスの
収集および逆転写酵素活性測定に用いた方法は、培地中
にファンギソンを含まないこと（Ｓｃｈｉｎａｚｉら、
Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．ＡｇｅｎｔｓおよびＣｈ
ｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．３２、１７８４−１７８７（１
９８８）；同、３４：１０６１−１０６７（１９９０）
を参照）以外は、ＭｃＤｏｕｇａｌら（Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎ．Ｍｅｔｈ．７６、１７１−１８３、１９８５）およ
びＳｐｉｒａら（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｔｈ．２５、９７
−９９、１９８７年）に記載された方法を用いた。
Ｄ．６日目に、細胞および上清を１５ｍｌのチューブに
移し、約９００ｇで１０分間遠心分離した。上清５ｍｌ
を除去し、４０，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離して
（Ｂｅｃｋｍａｎ７０．１Ｔｉローター）濃縮した。可
溶化したウィルスペレットの逆転写酵素レベルの決定を
行った。結果を、試料とした上清１ｍｌ当りのｄｐｍで
表す。より小容量の上清（１ｍｌ）からのウィルスも、
可溶化および逆転写酵素レベルの決定の前に、遠心分離
して濃縮し得る。中間有効濃度（ＥＣ５０）を、中間有
効濃度法（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈ
ｅｍｏｔｈｅｒ．３０、４９１−４９８（１９８６））
によって測定した。簡単に述べると、逆転写酵素の測定
によって決定されたウィルスの阻害率を、化合物のマイ
クロモル濃度に対してプロットする。ＥＣ５０は、ウィ
ルスの増殖を５０％阻害する化合物の濃度である。
移し、約９００ｇで１０分間遠心分離した。上清５ｍｌ
を除去し、４０，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離して
（Ｂｅｃｋｍａｎ７０．１Ｔｉローター）濃縮した。可
溶化したウィルスペレットの逆転写酵素レベルの決定を
行った。結果を、試料とした上清１ｍｌ当りのｄｐｍで
表す。より小容量の上清（１ｍｌ）からのウィルスも、
可溶化および逆転写酵素レベルの決定の前に、遠心分離
して濃縮し得る。中間有効濃度（ＥＣ５０）を、中間有
効濃度法（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈ
ｅｍｏｔｈｅｒ．３０、４９１−４９８（１９８６））
によって測定した。簡単に述べると、逆転写酵素の測定
によって決定されたウィルスの阻害率を、化合物のマイ
クロモル濃度に対してプロットする。ＥＣ５０は、ウィ
ルスの増殖を５０％阻害する化合物の濃度である。
Ｅ．ミトゲン刺激性未感染ヒトＰＢＭ細胞（３．８×１
０５細胞／ｍｌ）を、上述の抗ウィルスアッセイに用い
た条件と同様の条件で、薬物の存在および非存在下で培
養した。６日後、Ｓｃｈｉｎａｚｉら、Ａｎｔｉｍｉｃ
ｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒｐｙ、２２
（３）、４９９（１９８２）に記載された血球計数器
（ｈｅｍａｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）およびトリパンブルー
排除法を用いて、細胞数をカウントした。ＩＣ５０は、
正常な細胞の増殖を５０％阻害する化合物の濃度であ
る。
０５細胞／ｍｌ）を、上述の抗ウィルスアッセイに用い
た条件と同様の条件で、薬物の存在および非存在下で培
養した。６日後、Ｓｃｈｉｎａｚｉら、Ａｎｔｉｍｉｃ
ｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒｐｙ、２２
（３）、４９９（１９８２）に記載された血球計数器
（ｈｅｍａｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）およびトリパンブルー
排除法を用いて、細胞数をカウントした。ＩＣ５０は、
正常な細胞の増殖を５０％阻害する化合物の濃度であ
る。
表３に示すように、一般には、置換されたシトシン１，
３−オキサチオランヌクレオシドは対応するウラシルヌ
クレオシドよりも活性が高い。ＥＣ５０およびＩＣ５０
の測定における誤差は、±１０％と算定された。化合物
の１つである（±）−ＦＴＣ（「ＤＬＳ−０２２」、化
合物８と呼ぶ）は、きわめて希な高活性（ＰＢＭ細胞中
で約１０ｎＭ）を示すばかりでなく、かなりの低毒性
（ＰＢＭ、ＶｅｒｏおよびＣＥＭ細胞中で＞１００μ
Ｍ）を示す。（±）−ＦＴＣのＩＣ５０は、１００μＭ
よりも大きく、未感染ＰＢＭ細胞において１００μＭま
で評価したが、この化合物には毒性がなかった。
３−オキサチオランヌクレオシドは対応するウラシルヌ
クレオシドよりも活性が高い。ＥＣ５０およびＩＣ５０
の測定における誤差は、±１０％と算定された。化合物
の１つである（±）−ＦＴＣ（「ＤＬＳ−０２２」、化
合物８と呼ぶ）は、きわめて希な高活性（ＰＢＭ細胞中
で約１０ｎＭ）を示すばかりでなく、かなりの低毒性
（ＰＢＭ、ＶｅｒｏおよびＣＥＭ細胞中で＞１００μ
Ｍ）を示す。（±）−ＦＴＣのＩＣ５０は、１００μＭ
よりも大きく、未感染ＰＢＭ細胞において１００μＭま
で評価したが、この化合物には毒性がなかった。
実施例７： ＨＰＬＣによって分割されたＦＴＣの鏡像
異性体の抗ウィルス活性 ＦＴＣの鏡像異性体を、実施例４の方法によって単離
し、実施例６の方法によって抗ウィルス活性を評価し
た。結果を表４に示し、図５に図解する。
異性体の抗ウィルス活性 ＦＴＣの鏡像異性体を、実施例４の方法によって単離
し、実施例６の方法によって抗ウィルス活性を評価し
た。結果を表４に示し、図５に図解する。
表４に示すように、この実験では、ＦＴＣの（−）−鏡
像異性体は（＋）−ＦＴＣ鏡像異性体に比べ、約１桁大
きい強さの効力を示し、ラセミ混合物とほぼ同程度の抗
−ＨＩＶ活性を有する。ラセミ混合物および鏡像異性体
のいずれも、ヒトＰＢＭ細胞におけるトリパンブル−排
除法による測定では、１００μＭまでの毒性を示さな
い。
像異性体は（＋）−ＦＴＣ鏡像異性体に比べ、約１桁大
きい強さの効力を示し、ラセミ混合物とほぼ同程度の抗
−ＨＩＶ活性を有する。ラセミ混合物および鏡像異性体
のいずれも、ヒトＰＢＭ細胞におけるトリパンブル−排
除法による測定では、１００μＭまでの毒性を示さな
い。
実施例８： 実施例３の方法によって分割したＦＴＣ鏡
像異性体の抗ウィルス活性 （±）−ＦＴＣの鏡像異性体を、実施例３の方法によっ
て分割し、実施例６の方法によって抗ウィルス活性を評
価した。結果を図６に図解する。図６に示すように、Ｆ
ＴＣのラセミ混合物のＥＣ５０は０．０１７μＭ、
（−）−ＦＴＣ（１：）ＥＣ５０は０．００７７μＭ、
そして（＋）−ＦＴＣのＥＣ５０は０．８４μＭであっ
た。
像異性体の抗ウィルス活性 （±）−ＦＴＣの鏡像異性体を、実施例３の方法によっ
て分割し、実施例６の方法によって抗ウィルス活性を評
価した。結果を図６に図解する。図６に示すように、Ｆ
ＴＣのラセミ混合物のＥＣ５０は０．０１７μＭ、
（−）−ＦＴＣ（１：）ＥＣ５０は０．００７７μＭ、
そして（＋）−ＦＴＣのＥＣ５０は０．８４μＭであっ
た。
実施例９： （±）−ＦＴＣのヒトＰＢＭ細胞中への取
り込み 放射性標識したＦＴＣを用いて検討を行い、細胞内の親
薬物および代謝物の細胞内特性を検出した。すべての検
討を２回づつ行った。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭ細
胞）を、ウシ胎児血清および抗生物質を１０％含有する
ＲＰＭＩ １６４０培地に懸濁した（２×１０６細胞／
ｍｌ）、採取時点当り１０ｍｌ）、そして１０μＭのＦ
ＴＣ（約７００ｄｐｍ／ｐｍｏｌの特異的活性）を加え
てインキュベートした。細胞を２、６、１２、および２
４時間、薬物にさらした。これらの採取時点で、培地を
除去し、細胞を冷却したＨａｎｋの平衡塩溶液で２回洗
浄した。冷却した６０％のメタノール／水を０．２ｍｌ
加えて抽出を行い、−７０℃で一晩保存した。翌朝、懸
濁液を遠心分離し、抽出を−７０℃で０．５時間２回繰
り返して行った。上清を合計し（０．６ｍｌ）、完全に
凍結乾燥した。残留物を２５０μｌの水に再懸濁し、５
０と１００μｌとの間のアリコートをＨＰＬＣで分析し
た。細胞内の親薬物および代謝性誘導体の定量を、ＨＰ
ＬＣを用いて行った。いくつかの化合物が潜在的に酸不
安定性であるために、代謝物の分離には生理的なｐＨに
近い緩衝液系を用いた。図７は、ヒトＰＢＭ細胞中のト
リチウム化（±）−ＦＴＣの存在（取り込み）を、時間
（時間）に対するｐｍｏｌ／１０６細胞で示した（２回
の測定の平均）グラフである。取り込みの判定は、放射
性標識したＦＴＣがヒトリンパ球中に容易に取り込ま
れ、ＦＴＣの５’−トリホスフェート誘導体が大量に生
成されることによる。
り込み 放射性標識したＦＴＣを用いて検討を行い、細胞内の親
薬物および代謝物の細胞内特性を検出した。すべての検
討を２回づつ行った。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭ細
胞）を、ウシ胎児血清および抗生物質を１０％含有する
ＲＰＭＩ １６４０培地に懸濁した（２×１０６細胞／
ｍｌ）、採取時点当り１０ｍｌ）、そして１０μＭのＦ
ＴＣ（約７００ｄｐｍ／ｐｍｏｌの特異的活性）を加え
てインキュベートした。細胞を２、６、１２、および２
４時間、薬物にさらした。これらの採取時点で、培地を
除去し、細胞を冷却したＨａｎｋの平衡塩溶液で２回洗
浄した。冷却した６０％のメタノール／水を０．２ｍｌ
加えて抽出を行い、−７０℃で一晩保存した。翌朝、懸
濁液を遠心分離し、抽出を−７０℃で０．５時間２回繰
り返して行った。上清を合計し（０．６ｍｌ）、完全に
凍結乾燥した。残留物を２５０μｌの水に再懸濁し、５
０と１００μｌとの間のアリコートをＨＰＬＣで分析し
た。細胞内の親薬物および代謝性誘導体の定量を、ＨＰ
ＬＣを用いて行った。いくつかの化合物が潜在的に酸不
安定性であるために、代謝物の分離には生理的なｐＨに
近い緩衝液系を用いた。図７は、ヒトＰＢＭ細胞中のト
リチウム化（±）−ＦＴＣの存在（取り込み）を、時間
（時間）に対するｐｍｏｌ／１０６細胞で示した（２回
の測定の平均）グラフである。取り込みの判定は、放射
性標識したＦＴＣがヒトリンパ球中に容易に取り込ま
れ、ＦＴＣの５’−トリホスフェート誘導体が大量に生
成されることによる。
実施例１０ 種々の細胞系におけるＦＴＣの抗レトロウ
イルス活性 ＦＴＣの抗レトロウィルス活性を、実施例６に述べた方
法と類似の方法ではあるが全く同じではない方法を用い
て、多数の細胞系で測定した。細胞系は、ヒト提供者、
ＡＩＤＳ研究および関連試薬計画（ＡＩＤＳ Ｒｅｓｅ
ａｒｃｈ ａｎｄ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｒｅａｇｅｎ
ｔ Ｐｒｏｇｒａｍ，ＮＩＨ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍ
ａｒｙｌａｎｄ，ＡＴＣＣ）、または赤十字社（Ｒｅｄ
Ｃｒｏｓｓ）のいずれかから入手した。５−ブロモ−
２’−デオキシウリジンの存在下にＣＥＭ細胞を連続的
に継代培養して、ＣＥＭチミジンキナーゼ欠乏細胞を調
製した。結果を表５に示す。
イルス活性 ＦＴＣの抗レトロウィルス活性を、実施例６に述べた方
法と類似の方法ではあるが全く同じではない方法を用い
て、多数の細胞系で測定した。細胞系は、ヒト提供者、
ＡＩＤＳ研究および関連試薬計画（ＡＩＤＳ Ｒｅｓｅ
ａｒｃｈ ａｎｄ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｒｅａｇｅｎ
ｔ Ｐｒｏｇｒａｍ，ＮＩＨ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍ
ａｒｙｌａｎｄ，ＡＴＣＣ）、または赤十字社（Ｒｅｄ
Ｃｒｏｓｓ）のいずれかから入手した。５−ブロモ−
２’−デオキシウリジンの存在下にＣＥＭ細胞を連続的
に継代培養して、ＣＥＭチミジンキナーゼ欠乏細胞を調
製した。結果を表５に示す。
実施例１１： ヒトＰＢＭ細胞における（±）−ＦＴＣ
の放出 放射性標識したＦＴＣを用いて実験を行い、薬物を有す
る培地中で２４時間インキュベートし、次に薬物を除去
した後に、親の薬物および細胞内で検出される代謝物の
細胞内特性を測定した。この実験では、細胞内のトリホ
スフェート濃度が低下するまでに要する時間を測定す
る。実験は２回行った。血清（採取時点ごとに１０ｍ
ｌ）を追加した適切な培地中に未感染細胞（２×１０６
ｍｌ）を懸濁し、５％ＣＯ２インキュベーター中で３７
℃でインキュベートした。放射性標識したＦＴＣの濃度
は１０μＭであった。標識した化合物で細胞を２４時間
パルスした後、細胞を完全に洗浄し、次に抗ウィルス性
薬物を含有しない新鮮培地を加えた（０時間）。０、
２、４、６、１２、２４および４８時間（２回目のイン
キュベーション時間）で細胞を除去し、冷却した６０％
のメタノール／水で直ちに抽出した。遠心分離および細
胞ペレットの除去により、抽出物を得た。抽出物を凍結
乾燥し、次に−７０℃で保存した。分析の前に、２５０
マイクロリットルのＨＰＬＣ緩衝液中にその物質を再懸
濁し、そして直ちに分析した。細胞内の親の薬物および
代謝性の誘導体の定量を、アニオン交換Ｐａｒｔｉｓｉ
ｌ１０ＳＡＸカラム（Ｗｈａｔｍａｎ，Ｉｎｃ．）を有
するＭｉｃｒｏｍｅｒｉｔｉｃｓまたはＨｅｗｌｅｔｔ
−Ｐａｃｋａｒｄ ｍｏｄｅｌ１０９０ＰＨＬＣシステ
ムのいずれかを用いて、流速１ｍｌ／ｍｉｎ、圧力１ｋ
ｐｓｉ、２６２ｎｍにおけるＵＶ検出のＨＰＬＣにより
行った。移動相は脱イオン水（Ａ）、２ｍＭのＮａＨ２
ＰＯ４／１６ｍＭのＮａＯＡｃ（ｐＨ＝６．６）
（Ｂ）、１５ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４／１２０．２ｍＭの
ＮａＯＡｃ（ｐＨ＝６．６）（Ｃ）、および１００ｍＭ
のＮａＨ２ＰＯ４／８００ｍＭのＮａＯＡｃ（ｐＨ＝
６．６）（Ｄ）で構成した。
の放出 放射性標識したＦＴＣを用いて実験を行い、薬物を有す
る培地中で２４時間インキュベートし、次に薬物を除去
した後に、親の薬物および細胞内で検出される代謝物の
細胞内特性を測定した。この実験では、細胞内のトリホ
スフェート濃度が低下するまでに要する時間を測定す
る。実験は２回行った。血清（採取時点ごとに１０ｍ
ｌ）を追加した適切な培地中に未感染細胞（２×１０６
ｍｌ）を懸濁し、５％ＣＯ２インキュベーター中で３７
℃でインキュベートした。放射性標識したＦＴＣの濃度
は１０μＭであった。標識した化合物で細胞を２４時間
パルスした後、細胞を完全に洗浄し、次に抗ウィルス性
薬物を含有しない新鮮培地を加えた（０時間）。０、
２、４、６、１２、２４および４８時間（２回目のイン
キュベーション時間）で細胞を除去し、冷却した６０％
のメタノール／水で直ちに抽出した。遠心分離および細
胞ペレットの除去により、抽出物を得た。抽出物を凍結
乾燥し、次に−７０℃で保存した。分析の前に、２５０
マイクロリットルのＨＰＬＣ緩衝液中にその物質を再懸
濁し、そして直ちに分析した。細胞内の親の薬物および
代謝性の誘導体の定量を、アニオン交換Ｐａｒｔｉｓｉ
ｌ１０ＳＡＸカラム（Ｗｈａｔｍａｎ，Ｉｎｃ．）を有
するＭｉｃｒｏｍｅｒｉｔｉｃｓまたはＨｅｗｌｅｔｔ
−Ｐａｃｋａｒｄ ｍｏｄｅｌ１０９０ＰＨＬＣシステ
ムのいずれかを用いて、流速１ｍｌ／ｍｉｎ、圧力１ｋ
ｐｓｉ、２６２ｎｍにおけるＵＶ検出のＨＰＬＣにより
行った。移動相は脱イオン水（Ａ）、２ｍＭのＮａＨ２
ＰＯ４／１６ｍＭのＮａＯＡｃ（ｐＨ＝６．６）
（Ｂ）、１５ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４／１２０．２ｍＭの
ＮａＯＡｃ（ｐＨ＝６．６）（Ｃ）、および１００ｍＭ
のＮａＨ２ＰＯ４／８００ｍＭのＮａＯＡｃ（ｐＨ＝
６．６）（Ｄ）で構成した。
分離方法：Ａにより５分間のイソクラティック溶離、次
に１５分間、１００％Ｂへ直線グラジェント溶離、次に
２０分間、１００％ｃへ直線グラジェント溶離、次に１
０分間、１００％Ｄへ直線グラジェント溶離、次に１０
０％Ｄにより３０分間のイソクラティック溶離を行う。
に１５分間、１００％Ｂへ直線グラジェント溶離、次に
２０分間、１００％ｃへ直線グラジェント溶離、次に１
０分間、１００％Ｄへ直線グラジェント溶離、次に１０
０％Ｄにより３０分間のイソクラティック溶離を行う。
図８は、ヒトＰＢＭ細胞からの放射性標識した（±）−
ＦＴＣの放出を薬物除去後の時間に対する濃度（ｐｍｏ
ｌ／１０６細胞）として測定した、グラフである。図に
示すように、ＦＴＣ−トリホスフェートは約１２時間の
細胞内半減期を有し、細胞外の薬物を除去してから４８
時間後に１−５μＭの濃度が容易に細胞内で検出され
得、その濃度はその化合物のＥＣ５０よりもかなり高
い。さらに、ＨＩＶ ＲＴを用いる（±）−ＦＴＣトリ
ホスフェートに対する親和性（ＫＩ）は０．２μＭであ
り、４８時間の濃度レベルよりも低い。
ＦＴＣの放出を薬物除去後の時間に対する濃度（ｐｍｏ
ｌ／１０６細胞）として測定した、グラフである。図に
示すように、ＦＴＣ−トリホスフェートは約１２時間の
細胞内半減期を有し、細胞外の薬物を除去してから４８
時間後に１−５μＭの濃度が容易に細胞内で検出され
得、その濃度はその化合物のＥＣ５０よりもかなり高
い。さらに、ＨＩＶ ＲＴを用いる（±）−ＦＴＣトリ
ホスフェートに対する親和性（ＫＩ）は０．２μＭであ
り、４８時間の濃度レベルよりも低い。
実施例１２ （±）−ＦＴＣの薬学的に受容可能な誘導
体の抗−ＨＩＶ活性 ａ．５’およびＮ４位を誘導化して調製された（±）−
ＦＴＣの多数の薬学的に受容可能な誘導体を、実施例６
に述べた方法と同様の方法を用いてＰＢＭ細胞における
抗−ＨＩＶ活性について評価した。結果は次の通りであ
る。（±）−ＦＴＣの５’−Ｏ−ブチレートエステル
は、０．００１７のＥＣ５０を示した。（±）−ＦＴＣ
のＮ４−アセチル誘導体は、０．００２８のＥＣ５０を
示した。（±）−ＦＴＣの５’−Ｏ−ブチレート、Ｎ４
−エステルは、０．００５８のＥＣ５０を示した。
体の抗−ＨＩＶ活性 ａ．５’およびＮ４位を誘導化して調製された（±）−
ＦＴＣの多数の薬学的に受容可能な誘導体を、実施例６
に述べた方法と同様の方法を用いてＰＢＭ細胞における
抗−ＨＩＶ活性について評価した。結果は次の通りであ
る。（±）−ＦＴＣの５’−Ｏ−ブチレートエステル
は、０．００１７のＥＣ５０を示した。（±）−ＦＴＣ
のＮ４−アセチル誘導体は、０．００２８のＥＣ５０を
示した。（±）−ＦＴＣの５’−Ｏ−ブチレート、Ｎ４
−エステルは、０．００５８のＥＣ５０を示した。
ｂ．ＭＴ４系における（±）−ＦＴＣの５’−Ｏ−ブチ
レートエステルの抗−ＨＩＶ活性（ＥＣ５０）は０．０
４μＭであった。同じアッセイで、アシル化されていな
い（±）−ＦＴＣは０．５２μＭのＩＣ５０を示した。
この系でのＡＺＴのＩＣ５０は０．０９μＭであった。
レートエステルの抗−ＨＩＶ活性（ＥＣ５０）は０．０
４μＭであった。同じアッセイで、アシル化されていな
い（±）−ＦＴＣは０．５２μＭのＩＣ５０を示した。
この系でのＡＺＴのＩＣ５０は０．０９μＭであった。
Ｖ． ＨＢＶ複製に対するＦＴＣの阻害能 実施例１３ ＦＴＣの（＋）および（−）−鏡像異性体
の活性の２．２．１５細胞培養物における評価 ２．２．１５細胞培養物（肝炎ビリオンによって形質転
換されたＨｅｐＧ２細胞）におけるウィルスの増殖を阻
害するＦＴＣの鏡像異性体の能力を、下記に詳述する。
この培養系における抗ウィルス作用についてのアッセイ
およびＨＢＶのＤＮＡの分析の、要旨および説明が記載
されている（ＫｏｒｂａおよびＭｉｌｍａｎ、１９９１
年、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．、１５：２１７）。
抗ウイルス性の評価は、２つの細胞系を別々に継代培養
して行った。すべてのプレートのすべてのウェルに、同
じ密度で同時に接種した。
の活性の２．２．１５細胞培養物における評価 ２．２．１５細胞培養物（肝炎ビリオンによって形質転
換されたＨｅｐＧ２細胞）におけるウィルスの増殖を阻
害するＦＴＣの鏡像異性体の能力を、下記に詳述する。
この培養系における抗ウィルス作用についてのアッセイ
およびＨＢＶのＤＮＡの分析の、要旨および説明が記載
されている（ＫｏｒｂａおよびＭｉｌｍａｎ、１９９１
年、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．、１５：２１７）。
抗ウイルス性の評価は、２つの細胞系を別々に継代培養
して行った。すべてのプレートのすべてのウェルに、同
じ密度で同時に接種した。
アッセイパラメーター 細胞内および細胞外の両方のＨＢＶのＤＮＡのレベルで
の本質的な変動のために、未処理の細胞中のこれらのＨ
ＢＶのＤＮＡ型に対しての平均レベルよりも３．５倍
（ＨＢＶビリオンＤＮＡに対して）または３．０倍（Ｈ
ＢＶのＤＮＡ複製中間体に対して）大きい抑制だけが統
計的に有意［Ｐ＜０．０５］であると考えられる。各細
胞性ＤＮＡ調製物中の組み込まれたＨＢＶ ＤＮＡのレ
ベル（このレベルは、これらの実験では、細胞当りを基
礎として一定に保った）を細胞内ＨＢＶ ＤＮＡのレベ
ルを算出に用いた。これによって、別々の試料の間で比
較した細胞ＤＮＡが等量であることを確認した。未処理
細胞の細胞外ＨＢＶビリオンＤＮＡの代表的な値は、５
０から１５０ｐｇ／ｍｌ培養培地（平均は約７６ｐｇ／
ｍｌ）の範囲内であった。未処理細胞の細胞内ＨＢＶ
ＤＮＡ複製中間体は、５０から１００ｐｇ／μｇ細胞Ｄ
ＮＡ（平均は約７４ｐｇ／μｇ細胞ＤＮＡ）の範囲内で
あった。一般には、抗ウィルス化合物による処理による
細胞内ＨＢＶ ＤＮＡのレベルの抑制は、ＨＢＶビリオ
ンＤＮＡのレベルの抑制よりもより不明瞭に、より緩や
かに起こる（ＫｏｒｂａおよびＭｉｌｍａｎ、１９９１
年、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．、１５：２１７）。
これらの実験についてハイブリダイゼイション分析を行
う方法により、細胞当り２−３個のゲノム複写物に相当
する約１．０ｐｇの細胞内ＨＢＶ ＤＮＡおよび３×１
０５個のウィルス粒子／ｍｌに相当する約１．０ｐｇ／
ｍｌの細胞外ＨＢＶ ＤＮＡを生成した。
の本質的な変動のために、未処理の細胞中のこれらのＨ
ＢＶのＤＮＡ型に対しての平均レベルよりも３．５倍
（ＨＢＶビリオンＤＮＡに対して）または３．０倍（Ｈ
ＢＶのＤＮＡ複製中間体に対して）大きい抑制だけが統
計的に有意［Ｐ＜０．０５］であると考えられる。各細
胞性ＤＮＡ調製物中の組み込まれたＨＢＶ ＤＮＡのレ
ベル（このレベルは、これらの実験では、細胞当りを基
礎として一定に保った）を細胞内ＨＢＶ ＤＮＡのレベ
ルを算出に用いた。これによって、別々の試料の間で比
較した細胞ＤＮＡが等量であることを確認した。未処理
細胞の細胞外ＨＢＶビリオンＤＮＡの代表的な値は、５
０から１５０ｐｇ／ｍｌ培養培地（平均は約７６ｐｇ／
ｍｌ）の範囲内であった。未処理細胞の細胞内ＨＢＶ
ＤＮＡ複製中間体は、５０から１００ｐｇ／μｇ細胞Ｄ
ＮＡ（平均は約７４ｐｇ／μｇ細胞ＤＮＡ）の範囲内で
あった。一般には、抗ウィルス化合物による処理による
細胞内ＨＢＶ ＤＮＡのレベルの抑制は、ＨＢＶビリオ
ンＤＮＡのレベルの抑制よりもより不明瞭に、より緩や
かに起こる（ＫｏｒｂａおよびＭｉｌｍａｎ、１９９１
年、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．、１５：２１７）。
これらの実験についてハイブリダイゼイション分析を行
う方法により、細胞当り２−３個のゲノム複写物に相当
する約１．０ｐｇの細胞内ＨＢＶ ＤＮＡおよび３×１
０５個のウィルス粒子／ｍｌに相当する約１．０ｐｇ／
ｍｌの細胞外ＨＢＶ ＤＮＡを生成した。
毒性分析 毒性分析を行って、観察された抗ウィルス作用が細胞の
生存能力の一般的な作用によるのかどうかを評価した。
本明細書で用いた方法は、ＨＳＶおよびＨＩＶを含む種
々のウィルス−宿主系での細胞生存能力に対して標準的
でありかつ広く用いられている、ニュートラルレッド染
料の取り込みの測定であった。毒性分析は、底が平坦な
９６ウェルの組織培養プレートで行った。毒性分析用の
細胞を培養し、下記抗ウィルス性の評価において記載し
たスケジュールに従って試験化合物で処理した。それぞ
れの化合物を４種類の濃度で各３培養物（「Ａ」、
「Ｂ」、および「Ｃ」のウェル）で試験した。ニュート
ラルレッド染料の取り込みを、毒性の相対レベルを測定
するために用いた。内部に取り込まれた染料の５１０ｎ
ｍ（Ａｓｉｎ）での吸収を、定量分析に用いた。未処理
細胞を被験化合物の場合と同じ９６ウェルのプレート上
に保持し、この未処理細胞の、９つの別々の培養物にお
ける平均Ａｓｉｎ値の百分率として、測定値を表した。
プレート５の９つの対照培養物における染料の取り込み
は９１．６％から１１０．４％の範囲であり、プレート
６では９６．６％から１０９％の範囲であった。結果を
表６に示す。
生存能力の一般的な作用によるのかどうかを評価した。
本明細書で用いた方法は、ＨＳＶおよびＨＩＶを含む種
々のウィルス−宿主系での細胞生存能力に対して標準的
でありかつ広く用いられている、ニュートラルレッド染
料の取り込みの測定であった。毒性分析は、底が平坦な
９６ウェルの組織培養プレートで行った。毒性分析用の
細胞を培養し、下記抗ウィルス性の評価において記載し
たスケジュールに従って試験化合物で処理した。それぞ
れの化合物を４種類の濃度で各３培養物（「Ａ」、
「Ｂ」、および「Ｃ」のウェル）で試験した。ニュート
ラルレッド染料の取り込みを、毒性の相対レベルを測定
するために用いた。内部に取り込まれた染料の５１０ｎ
ｍ（Ａｓｉｎ）での吸収を、定量分析に用いた。未処理
細胞を被験化合物の場合と同じ９６ウェルのプレート上
に保持し、この未処理細胞の、９つの別々の培養物にお
ける平均Ａｓｉｎ値の百分率として、測定値を表した。
プレート５の９つの対照培養物における染料の取り込み
は９１．６％から１１０．４％の範囲であり、プレート
６では９６．６％から１０９％の範囲であった。結果を
表６に示す。
表６に示すように、抗ウィルス性評価に用いた濃度では
被験化合物についての著明な毒性（未処理細胞で観察さ
れた染料の取り込みレベルの５０％抑制よりも大きい）
は観察されなかった。（−）−ＦＴＣおよび（＋）−Ｆ
ＴＣのいずれの被験化合物も、毒性試験に用いた最高濃
度（３３０μＭ）で毒性を表した。
被験化合物についての著明な毒性（未処理細胞で観察さ
れた染料の取り込みレベルの５０％抑制よりも大きい）
は観察されなかった。（−）−ＦＴＣおよび（＋）−Ｆ
ＴＣのいずれの被験化合物も、毒性試験に用いた最高濃
度（３３０μＭ）で毒性を表した。
抗ウィルス性評価 対照物 ＨＢＶビリオンＤＮＡおよび細胞内ＨＢＶ複製中間体
［ＨＢＶ ＲＩ］のレベルは、未処理細胞においては試
験期間（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ｐｅｒｉｏｄ）に対し
て、正規の変動で一定であった。ＤＭＳＯは１％濃度で
は、２．２．１５細胞培養物におけるＨＢＶ複製のレベ
ルに影響しなかった。
［ＨＢＶ ＲＩ］のレベルは、未処理細胞においては試
験期間（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ｐｅｒｉｏｄ）に対し
て、正規の変動で一定であった。ＤＭＳＯは１％濃度で
は、２．２．１５細胞培養物におけるＨＢＶ複製のレベ
ルに影響しなかった。
被験化合物 図７に示すように、（−）−ＦＴＣおよび（＋）−ＦＴ
Ｃはいずれも試験したレベルでＨＢＶ複製を著明に阻害
した。図８に示すように、（−）−ＦＴＣはさらに、Ｈ
ＢＶビリオンＤＮＡおよび細胞内ＨＢＶ ＤＮＡの合成
を４、１、および０．２５μＭの濃度で阻害する。
Ｃはいずれも試験したレベルでＨＢＶ複製を著明に阻害
した。図８に示すように、（−）−ＦＴＣはさらに、Ｈ
ＢＶビリオンＤＮＡおよび細胞内ＨＢＶ ＤＮＡの合成
を４、１、および０．２５μＭの濃度で阻害する。
＠細胞内ＨＢＶ ＤＮＡは、処理の９日目から２４時間
分析した。各細胞ＤＮＡ調製物中の組み込まれたＨＢＶ
ＤＮＡのレベルを用いて、エピソーム性の３．２Ｋｂ
ＨＢＶゲノム（ＭＯＮＯ．）およびＨＢＶ ＤＮＡ複
製中間体（ＲＩ）のレベルを算出した。
分析した。各細胞ＤＮＡ調製物中の組み込まれたＨＢＶ
ＤＮＡのレベルを用いて、エピソーム性の３．２Ｋｂ
ＨＢＶゲノム（ＭＯＮＯ．）およびＨＢＶ ＤＮＡ複
製中間体（ＲＩ）のレベルを算出した。
＠細胞内ＨＢＶ ＤＮＡの分析は、処理の９日目から２
４時間で行った。各細胞ＤＮＡ調製物中の組み込まれた
ＨＢＶ ＤＮＡのレベルを用いて、エピソーム性の３．
２ｋｂ ＨＢＶゲノム（ＭＯＮＯ．）およびＨＢＶ Ｄ
ＮＡ複製中間体（ＲＩ）のレベルを算出した。
４時間で行った。各細胞ＤＮＡ調製物中の組み込まれた
ＨＢＶ ＤＮＡのレベルを用いて、エピソーム性の３．
２ｋｂ ＨＢＶゲノム（ＭＯＮＯ．）およびＨＢＶ Ｄ
ＮＡ複製中間体（ＲＩ）のレベルを算出した。
実施例１４： ヒト肝細胞中への（±）−ＦＴＣの取
り込み；ＦＴＣのＨＶＢ活性 ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２細胞、ＡＴＣＣより購入）を用
いて実施例９の操作手順を繰り返して、これらの細胞に
おけるＦＴＣの取り込みおよび代謝を測定した。図９に
示すように、（±）−ＦＴＣはＨｅｐＧ２細胞中に大量
に取り込まれる。これらのヒト肝細胞は大部分の（±）
−ＦＴＣを、（±）−ＦＴＣトリホスフェートに代謝す
る。このデータは、本明細書に提供される他のデータと
ともに、（±）−ＦＴＣならびにその（−）および
（＋）鏡像異性体が肝細胞中でリン酸化されることを示
す。これらの細胞はＢ型肝炎ウィルスによって形質転換
され得る。
り込み；ＦＴＣのＨＶＢ活性 ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２細胞、ＡＴＣＣより購入）を用
いて実施例９の操作手順を繰り返して、これらの細胞に
おけるＦＴＣの取り込みおよび代謝を測定した。図９に
示すように、（±）−ＦＴＣはＨｅｐＧ２細胞中に大量
に取り込まれる。これらのヒト肝細胞は大部分の（±）
−ＦＴＣを、（±）−ＦＴＣトリホスフェートに代謝す
る。このデータは、本明細書に提供される他のデータと
ともに、（±）−ＦＴＣならびにその（−）および
（＋）鏡像異性体が肝細胞中でリン酸化されることを示
す。これらの細胞はＢ型肝炎ウィルスによって形質転換
され得る。
実施例１５ ヒトＨｅｐＧ２細胞におけるＦＴＣの放出 図１０は、１０μＭの［３Ｈ］−（±）−ＦＴＣ（７０
０ ＤＰＭ／ｐｍｏｌｅ）で２４時間パルスし、化合物
の除去後２４時間の化合物濃度を決定した後、ヒトＨｅ
ｐＧ２細胞における［３Ｈ］−（±）−ＦＴＣおよびそ
のリン酸化誘導体の放出を、採取細胞について（ｏｖｅ
ｒ ｔｉｍｅ ｃｅｌｌｓ）ｐｍｏｌ／１０６細胞で示
す。図１１は、１０μＭの［３Ｈ］−（±）−ＦＴＣ
（７００ ＤＰＭ／ｐｍｏｌｅ）で２４時間インキュベ
ートした後の、ヒトＨｅｐＧ２細胞における［３Ｈ］−
（±）−ＦＴＣとそのリン酸化誘導体との合計の濃度の
減少を時間に対するｐｍｏｌ／１０６細胞で示す。例証
のように、４８時間後でも、１μＭを越える活性化合物
（これはこの化合物のＥＣ５０よりも有意に高い）が、
細胞内にまだ存在している。
０ ＤＰＭ／ｐｍｏｌｅ）で２４時間パルスし、化合物
の除去後２４時間の化合物濃度を決定した後、ヒトＨｅ
ｐＧ２細胞における［３Ｈ］−（±）−ＦＴＣおよびそ
のリン酸化誘導体の放出を、採取細胞について（ｏｖｅ
ｒ ｔｉｍｅ ｃｅｌｌｓ）ｐｍｏｌ／１０６細胞で示
す。図１１は、１０μＭの［３Ｈ］−（±）−ＦＴＣ
（７００ ＤＰＭ／ｐｍｏｌｅ）で２４時間インキュベ
ートした後の、ヒトＨｅｐＧ２細胞における［３Ｈ］−
（±）−ＦＴＣとそのリン酸化誘導体との合計の濃度の
減少を時間に対するｐｍｏｌ／１０６細胞で示す。例証
のように、４８時間後でも、１μＭを越える活性化合物
（これはこの化合物のＥＣ５０よりも有意に高い）が、
細胞内にまだ存在している。
Ｖ． 顆粒球−マクロファージ前駆細胞における毒性 実施例１６ 顆粒球−マクロファージ前駆細胞のコロニ
ー形成におけるＦＴＣの効果 図１２は、顆粒球−マクロファージ前駆細胞のコロニー
形成におけるＦＴＣの（−）および（＋）鏡像異性体の
効果を、μＭで表した濃度に対する生存百分率として測
定したグラフである（（−）−ＦＴＣ、白円；（＋）−
ＦＴＣ、黒円；ＡＺＴ、黒四角）。ここに示すように、
ＦＴＣの（−）−鏡像異性体がより毒性が低いこと、す
なわち、この細胞系では（＋）−鏡像異性体またはＡＺ
Ｔのいずれよりも高いＩＣ５０を有することがわかっ
た。
ー形成におけるＦＴＣの効果 図１２は、顆粒球−マクロファージ前駆細胞のコロニー
形成におけるＦＴＣの（−）および（＋）鏡像異性体の
効果を、μＭで表した濃度に対する生存百分率として測
定したグラフである（（−）−ＦＴＣ、白円；（＋）−
ＦＴＣ、黒円；ＡＺＴ、黒四角）。ここに示すように、
ＦＴＣの（−）−鏡像異性体がより毒性が低いこと、す
なわち、この細胞系では（＋）−鏡像異性体またはＡＺ
Ｔのいずれよりも高いＩＣ５０を有することがわかっ
た。
ＶＩ． ＦＴＣの薬物動態 実施例１７ ラットに投与した場合のＦＴＣの代謝 １０、５０および１００ｍｇ／ｋｇの用量で（±）−Ｆ
ＴＣをラットに経静脈的に投与し、時間と血漿中薬物濃
度とで囲まれた面積（ＡＵＣ）、総クリアランス（ＣＬ
Ｔ）、分布の定常状態容量（Ｖｓｓ）、平均滞留時間
（ＭＲＴ）および半減期（ｔ１／２）を決定した。結果
を表９に示す。
ＴＣをラットに経静脈的に投与し、時間と血漿中薬物濃
度とで囲まれた面積（ＡＵＣ）、総クリアランス（ＣＬ
Ｔ）、分布の定常状態容量（Ｖｓｓ）、平均滞留時間
（ＭＲＴ）および半減期（ｔ１／２）を決定した。結果
を表９に示す。
実施例１８ 経静脈的および経口的投与後の、ＦＴＣの
薬物動態パラメーター アカゲザルに３３．３ｍｇ／ｋｇを投与（経静脈的
（Ｉ．Ｖ）および経口的（Ｐ．Ｏ．））して、投与方式
に依存しない薬物動態パラメーターを、（±）−ＦＴＣ
について得た。結果を表１０に示す。サルにおけるこの
化合物の平均生物学的利用能が７３％（±６％）であっ
たことは重要である。
薬物動態パラメーター アカゲザルに３３．３ｍｇ／ｋｇを投与（経静脈的
（Ｉ．Ｖ）および経口的（Ｐ．Ｏ．））して、投与方式
に依存しない薬物動態パラメーターを、（±）−ＦＴＣ
について得た。結果を表１０に示す。サルにおけるこの
化合物の平均生物学的利用能が７３％（±６％）であっ
たことは重要である。
実施例１９ アカゲザルにおけるＦＴＣおよびその代謝
物のＣＳＦ／血清比 ３３．３ｍｇ／ｋｇの活性化合物をアカゲザルに投与
し、１時間後の脳脊髄液（ＣＳＦ）および血清中の
（±）−ＦＴＣの量を測定することによって、（±）−
ＦＴＣの血液脳関門通過能力を決定した。結果を表１１
に示す。このデータは、この活性化合物の有意な量が、
この哺乳動物の血液−脳関門を通過することを示す。
物のＣＳＦ／血清比 ３３．３ｍｇ／ｋｇの活性化合物をアカゲザルに投与
し、１時間後の脳脊髄液（ＣＳＦ）および血清中の
（±）−ＦＴＣの量を測定することによって、（±）−
ＦＴＣの血液脳関門通過能力を決定した。結果を表１１
に示す。このデータは、この活性化合物の有意な量が、
この哺乳動物の血液−脳関門を通過することを示す。
ＩＩＩ． 薬剤組成物の調製 患者に（±）−ＦＴＣ、またはその（−）または（＋）
鏡像異性体もしくはそれらの薬学的に受容可能な誘導体
またはそれらの塩の有効量を、薬学的に受容可能な担体
または希釈剤の存在下で投与することによって、ＨＩＶ
またはＨＢＶ感染に起因する疾病に罹患しているヒトを
治療し得る。この活性物質は、例えば、経口、非経口、
経静脈、経皮、皮下、または局所などの適切な投与経路
によって、液体または固体の形態で投与され得る。イン
ビボにおいてウィルスの複製、特にＨＩＶおよびＨＢＶ
の複製を、治療される患者に深刻な毒性作用を与えるこ
となく阻害するための治療有効量の化合物を患者に送達
するに充分な量で、薬学的に受容可能な担体または希釈
剤中に、活性化合物が含まれる。用語「阻害量（ｉｎｈ
ｉｂｉｔｏｒｙ ａｍｏｕｎｔ）」は、例えば本明細書
に記載したようなアッセイによって測定されるような阻
害効果を発揮するに充分な活性成分の量を意味する。上
述した条件のすべてにおいて好ましい（−）、（＋）ま
たは（±）−ＦＴＣの量は、１日当り体重の約１から５
０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１から２０ｍｇ／ｋｇ、より
一般的には１日当り受容者の体重の１キログラムにつき
０．１から１００ｍｇの範囲である。薬学的に受容可能
な誘導体の有効な用量の範囲は、送達される親のヌクレ
オシドの重量に基づいて算出され得る。その誘導体がそ
れ自身で活性を示す場合は、有効量は、その誘導体の重
量を用いて上記のように算定され得るか、または当業者
に公知の他の方法によって算定され得る。この化合物
は、単位投与形態当り７から３０００ｍｇ、好ましくは
７０から１４００ｍｇの活性成分を含有するがこれに限
定されない、何らかの適切な投与形態の単位で都合よく
投与される。５０−１０００ｍｇの経口用量が、通常は
好都合である。理想的には、約０．２から７０μＭ、好
ましくは約１．０から１０μＭの活性化合物の最高血漿
濃度となるように、活性成分が投与されるべきである。
このことは、例えば、活性成分の０．１から５％溶液
を、任意には生理食塩水の溶液として、静脈内に注入す
るか、または活性成分のボーラスとして投与することに
よって成し遂げられ得る。薬物組成物中の活性化合物濃
度は、吸収、不活化、および薬物の排出速度、および当
業者に公知の他の要因に依存する。投与量の値がまた、
緩和すべき症状の重篤度によっても変化することに注意
するべきである。さらに、何人かの特別な患者のために
は、個々の対象の必要性、およびこの組成物を投与する
かまたは投与を管理する人物の専門家的な判断に従っ
て、特別な経時的用量処方が調整されるべきであり、そ
して本明細書に提示した濃度範囲が単なる例示のみであ
り、クレームの組成物の範囲または実施の限定を意図し
ないことが、理解されるべきである。この活性成分は、
一度に、または種々の時間間隔で投与されるように、多
数のより小さい用量に分割され得る。この活性化合物の
好ましい投与方式は、経口投与である。経口用組成物は
一般に、不活性希釈剤または食用の担体を含む。それら
はゼラチンカプセルに封入されるかまたは錠剤に圧縮成
形され得る。治療的経口投与の目的では、活性化合物は
賦形剤と混合し、錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤
の形式で用いられ得る。薬学的に適合可能な結合剤、お
よび／または補助薬物質が、組成物の一部として含まれ
得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以
下の成分、または同様の性質の化合物のいずれかを含有
し得る：微結晶セルロース、トラガカントガムまたはゼ
ラチンのような結合剤；デンプンまたは乳糖のような賦
形剤；アルギン酸、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）、
またはトウモロコシデンプンのような崩壊剤；ステアリ
ン酸マグネシウムまたはステロテス（Ｓｔｅｒｏｔｅ
ｓ）のような滑沢剤；コロイド状二酸化珪素のような滑
走剤；ショ糖またはサッカリンのような甘味剤；または
ペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ香料
のような香味剤。用量単位形態がカプセルであるとき
は、上記のような物質の他に、脂肪油などの液状の担体
を含有し得る。さらに、用量単位形態は、例えば糖衣、
セラック、または他の腸溶性剤などの、用量単位の物理
的な形態を改変する他の物質を含有し得る。
鏡像異性体もしくはそれらの薬学的に受容可能な誘導体
またはそれらの塩の有効量を、薬学的に受容可能な担体
または希釈剤の存在下で投与することによって、ＨＩＶ
またはＨＢＶ感染に起因する疾病に罹患しているヒトを
治療し得る。この活性物質は、例えば、経口、非経口、
経静脈、経皮、皮下、または局所などの適切な投与経路
によって、液体または固体の形態で投与され得る。イン
ビボにおいてウィルスの複製、特にＨＩＶおよびＨＢＶ
の複製を、治療される患者に深刻な毒性作用を与えるこ
となく阻害するための治療有効量の化合物を患者に送達
するに充分な量で、薬学的に受容可能な担体または希釈
剤中に、活性化合物が含まれる。用語「阻害量（ｉｎｈ
ｉｂｉｔｏｒｙ ａｍｏｕｎｔ）」は、例えば本明細書
に記載したようなアッセイによって測定されるような阻
害効果を発揮するに充分な活性成分の量を意味する。上
述した条件のすべてにおいて好ましい（−）、（＋）ま
たは（±）−ＦＴＣの量は、１日当り体重の約１から５
０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１から２０ｍｇ／ｋｇ、より
一般的には１日当り受容者の体重の１キログラムにつき
０．１から１００ｍｇの範囲である。薬学的に受容可能
な誘導体の有効な用量の範囲は、送達される親のヌクレ
オシドの重量に基づいて算出され得る。その誘導体がそ
れ自身で活性を示す場合は、有効量は、その誘導体の重
量を用いて上記のように算定され得るか、または当業者
に公知の他の方法によって算定され得る。この化合物
は、単位投与形態当り７から３０００ｍｇ、好ましくは
７０から１４００ｍｇの活性成分を含有するがこれに限
定されない、何らかの適切な投与形態の単位で都合よく
投与される。５０−１０００ｍｇの経口用量が、通常は
好都合である。理想的には、約０．２から７０μＭ、好
ましくは約１．０から１０μＭの活性化合物の最高血漿
濃度となるように、活性成分が投与されるべきである。
このことは、例えば、活性成分の０．１から５％溶液
を、任意には生理食塩水の溶液として、静脈内に注入す
るか、または活性成分のボーラスとして投与することに
よって成し遂げられ得る。薬物組成物中の活性化合物濃
度は、吸収、不活化、および薬物の排出速度、および当
業者に公知の他の要因に依存する。投与量の値がまた、
緩和すべき症状の重篤度によっても変化することに注意
するべきである。さらに、何人かの特別な患者のために
は、個々の対象の必要性、およびこの組成物を投与する
かまたは投与を管理する人物の専門家的な判断に従っ
て、特別な経時的用量処方が調整されるべきであり、そ
して本明細書に提示した濃度範囲が単なる例示のみであ
り、クレームの組成物の範囲または実施の限定を意図し
ないことが、理解されるべきである。この活性成分は、
一度に、または種々の時間間隔で投与されるように、多
数のより小さい用量に分割され得る。この活性化合物の
好ましい投与方式は、経口投与である。経口用組成物は
一般に、不活性希釈剤または食用の担体を含む。それら
はゼラチンカプセルに封入されるかまたは錠剤に圧縮成
形され得る。治療的経口投与の目的では、活性化合物は
賦形剤と混合し、錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤
の形式で用いられ得る。薬学的に適合可能な結合剤、お
よび／または補助薬物質が、組成物の一部として含まれ
得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以
下の成分、または同様の性質の化合物のいずれかを含有
し得る：微結晶セルロース、トラガカントガムまたはゼ
ラチンのような結合剤；デンプンまたは乳糖のような賦
形剤；アルギン酸、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）、
またはトウモロコシデンプンのような崩壊剤；ステアリ
ン酸マグネシウムまたはステロテス（Ｓｔｅｒｏｔｅ
ｓ）のような滑沢剤；コロイド状二酸化珪素のような滑
走剤；ショ糖またはサッカリンのような甘味剤；または
ペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ香料
のような香味剤。用量単位形態がカプセルであるとき
は、上記のような物質の他に、脂肪油などの液状の担体
を含有し得る。さらに、用量単位形態は、例えば糖衣、
セラック、または他の腸溶性剤などの、用量単位の物理
的な形態を改変する他の物質を含有し得る。
（±）−ＦＴＣ、もしくはその（−）または（＋）鏡像
異性体もしくはその薬学的に受容可能な誘導体またはそ
れらの塩は、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、ウエハ
ース、チューインガムなどの組成物として投与され得
る。シロップは、活性成分の他に、甘味剤としてのショ
糖ならびに若干の保存剤、染料および着色剤および香料
を含有し得る。
異性体もしくはその薬学的に受容可能な誘導体またはそ
れらの塩は、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、ウエハ
ース、チューインガムなどの組成物として投与され得
る。シロップは、活性成分の他に、甘味剤としてのショ
糖ならびに若干の保存剤、染料および着色剤および香料
を含有し得る。
（±）−ＦＴＣ、もしくはその（−）または（＋）鏡像
異性体もしくはその薬学的に受容可能な誘導体またはそ
れらの塩はまた、所望の作用を妨げない他の活性物質、
もしくは抗生物質、抗真菌剤、抗炎症剤、または他のヌ
クレオシド抗ＨＩＶ化合物を含む他の抗ウィルス剤など
のような、所望の作用を補助する物質と混合され得る。
非経口、経皮、皮下、または局所的適用に用いる溶液ま
たは懸濁液は、次の成分を含み得る：注射用蒸留水のよ
うな滅菌希釈剤、生理食塩水溶液、固定油、ポリエチレ
ングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまた
は他の合成溶媒；ベンジルアルコールまたはメチルパラ
ベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または重硫酸ナトリ
ウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキ
レート剤、アセテート、シトレートまたはホスフェート
などの緩衝液および塩化ナトリウムまたはデキストロー
スなどの等張性調整剤。非経口用（ｐａｒｅｎｔａｌ）
製剤は、アンプル、使い捨てシリンジもしくはガラスま
たはプラスチック製の多回投与用バイアルに封入され得
る。経静脈的に投与されるときは、好ましい担体は生理
的食塩水またはリン酸緩衝液添加生理食塩水（ＰＢＳ）
である。好ましい実施態様では、インプラントおよびマ
イクロカプセル化送達システムを含む放出制御型製剤の
ように、体内からの速やかな化合物の排出を防ぐ担体を
用いて活性化合物が調製される。エチレンビニルアセテ
ート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポ
リオルトエステルおよびポリ酢酸などの、生物分解性で
生物親和性のポリマーが用いられ得る。そのような製剤
の調製方法は、当業者に明かである。それらの物質はま
た、Ａｌｚａ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ
Ｐｈａｒｍａｃ ｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から購
入され得る。リポソーム性懸濁液（ウィルス抗原に対す
るモノクローナル抗体を用いて感染細胞に標的化させた
リポソームを含む）もまた、薬学的に受容可能な担体と
して好ましい。これらは、例えば米国特許第４，５２
２，８１１号（参考文献としてその全文を本明細書に援
用する）に記載されているような、当業者に公知の方法
に従って調製され得る。例えば、リポソーム製剤は、適
切な脂質（例えばステアロイルホスファチジルエタノー
ルアミン、ステアロイルホスファチジルコリン、アラカ
ドイルホスファチジルコリン、およびコレステロールな
ど）を無機溶媒中に溶解し、次に蒸発させ、後に容器の
表面に乾燥した脂質の薄い膜を形成することによって調
製し得る。活性化合物もしくはそのモノホスフェート、
ジホスフェート、および／またはトリホスフェート誘導
体の水溶液を、次に容器内に導入する。次に容器を手で
水平方向に回転して容器の側面から脂質物質を遊離し、
脂質凝集体を分散させ、それによってリポソーム性懸濁
液を形成する。
異性体もしくはその薬学的に受容可能な誘導体またはそ
れらの塩はまた、所望の作用を妨げない他の活性物質、
もしくは抗生物質、抗真菌剤、抗炎症剤、または他のヌ
クレオシド抗ＨＩＶ化合物を含む他の抗ウィルス剤など
のような、所望の作用を補助する物質と混合され得る。
非経口、経皮、皮下、または局所的適用に用いる溶液ま
たは懸濁液は、次の成分を含み得る：注射用蒸留水のよ
うな滅菌希釈剤、生理食塩水溶液、固定油、ポリエチレ
ングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまた
は他の合成溶媒；ベンジルアルコールまたはメチルパラ
ベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または重硫酸ナトリ
ウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキ
レート剤、アセテート、シトレートまたはホスフェート
などの緩衝液および塩化ナトリウムまたはデキストロー
スなどの等張性調整剤。非経口用（ｐａｒｅｎｔａｌ）
製剤は、アンプル、使い捨てシリンジもしくはガラスま
たはプラスチック製の多回投与用バイアルに封入され得
る。経静脈的に投与されるときは、好ましい担体は生理
的食塩水またはリン酸緩衝液添加生理食塩水（ＰＢＳ）
である。好ましい実施態様では、インプラントおよびマ
イクロカプセル化送達システムを含む放出制御型製剤の
ように、体内からの速やかな化合物の排出を防ぐ担体を
用いて活性化合物が調製される。エチレンビニルアセテ
ート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポ
リオルトエステルおよびポリ酢酸などの、生物分解性で
生物親和性のポリマーが用いられ得る。そのような製剤
の調製方法は、当業者に明かである。それらの物質はま
た、Ａｌｚａ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ
Ｐｈａｒｍａｃ ｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から購
入され得る。リポソーム性懸濁液（ウィルス抗原に対す
るモノクローナル抗体を用いて感染細胞に標的化させた
リポソームを含む）もまた、薬学的に受容可能な担体と
して好ましい。これらは、例えば米国特許第４，５２
２，８１１号（参考文献としてその全文を本明細書に援
用する）に記載されているような、当業者に公知の方法
に従って調製され得る。例えば、リポソーム製剤は、適
切な脂質（例えばステアロイルホスファチジルエタノー
ルアミン、ステアロイルホスファチジルコリン、アラカ
ドイルホスファチジルコリン、およびコレステロールな
ど）を無機溶媒中に溶解し、次に蒸発させ、後に容器の
表面に乾燥した脂質の薄い膜を形成することによって調
製し得る。活性化合物もしくはそのモノホスフェート、
ジホスフェート、および／またはトリホスフェート誘導
体の水溶液を、次に容器内に導入する。次に容器を手で
水平方向に回転して容器の側面から脂質物質を遊離し、
脂質凝集体を分散させ、それによってリポソーム性懸濁
液を形成する。
ＩＶ． ＦＴＣのホスフェート誘導体の調製 ＦＴＣのモノ、ジ、およびトリホスフェート誘導体は、
下記記載のように調製され得る。モノホスフェートは、
Ｉｍａｉら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、３４（６）、１
５４７−１５５０（１９６９年６月）の方法に従って調
製され得る。例えば、約１００ｍｇのＦＴＣと約２８０
μｇのホスホリルクロライドとを約８ｍｌの乾燥した酢
酸エチル中で０℃で約４時間攪拌して反応させる。反応
を氷で抑制する。水相を活性炭カラムに通し、エタノー
ルおよび水の１：１混合液中の５％の水酸化アンモニウ
ムで溶出して精製する。溶出液を蒸発して、アンモニウ
ムＦＴＣ−５′−モノホスフェートを得る。ジホスフェ
ートは、Ｄａｖｉｓｓｏｎら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅ
ｍ．、５２（９）、１７９４−１８０１（１９８７年）
の方法に従って調製され得る。ＦＴＣジホスフェートは
対応するトシレートから調製され得、トシレートは、例
えばヌクレオシドとトシルクロライドとをピリジン中で
室温で約２４時間反応させ、常法（例えば、それを洗
浄、乾燥、および再結晶して）により操作して調製し得
る。トリホスフェートは、Ｈｏａｒｄら、Ｊ．Ａｍ．Ｃ
ｈｅｍ．Ｓｏｃ．、８７（８）、１７８５−１７８８
（１９６５年）の方法に従って調製され得る。ＦＴＣを
活性化し（当業者に公知の方法に従ってイミダゾールを
形成することにより）、ＤＭＦ中でトリブチルアンモニ
ウムピロホスフェートで処理する。この反応は、主とし
てヌクレオシドのトリホスフェートを、若干の未反応の
モノホスフェートおよび若干のジホスフェートとともに
生じる。ＤＥＡＥカラムのアニオン交換クロマトグラフ
ィーによる精製により、例えばテトラナトリウム塩とし
て、トリホスフェートを単離する。本発明は、その好ま
しい実施態様に関して記載されている。本発明の変更お
よび改変は、前記発明の詳細な説明より当業者に自明で
ある。これらの変更および改変のすべてを、添付した請
求の範囲内に含むことを意図する。
下記記載のように調製され得る。モノホスフェートは、
Ｉｍａｉら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、３４（６）、１
５４７−１５５０（１９６９年６月）の方法に従って調
製され得る。例えば、約１００ｍｇのＦＴＣと約２８０
μｇのホスホリルクロライドとを約８ｍｌの乾燥した酢
酸エチル中で０℃で約４時間攪拌して反応させる。反応
を氷で抑制する。水相を活性炭カラムに通し、エタノー
ルおよび水の１：１混合液中の５％の水酸化アンモニウ
ムで溶出して精製する。溶出液を蒸発して、アンモニウ
ムＦＴＣ−５′−モノホスフェートを得る。ジホスフェ
ートは、Ｄａｖｉｓｓｏｎら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅ
ｍ．、５２（９）、１７９４−１８０１（１９８７年）
の方法に従って調製され得る。ＦＴＣジホスフェートは
対応するトシレートから調製され得、トシレートは、例
えばヌクレオシドとトシルクロライドとをピリジン中で
室温で約２４時間反応させ、常法（例えば、それを洗
浄、乾燥、および再結晶して）により操作して調製し得
る。トリホスフェートは、Ｈｏａｒｄら、Ｊ．Ａｍ．Ｃ
ｈｅｍ．Ｓｏｃ．、８７（８）、１７８５−１７８８
（１９６５年）の方法に従って調製され得る。ＦＴＣを
活性化し（当業者に公知の方法に従ってイミダゾールを
形成することにより）、ＤＭＦ中でトリブチルアンモニ
ウムピロホスフェートで処理する。この反応は、主とし
てヌクレオシドのトリホスフェートを、若干の未反応の
モノホスフェートおよび若干のジホスフェートとともに
生じる。ＤＥＡＥカラムのアニオン交換クロマトグラフ
ィーによる精製により、例えばテトラナトリウム塩とし
て、トリホスフェートを単離する。本発明は、その好ま
しい実施態様に関して記載されている。本発明の変更お
よび改変は、前記発明の詳細な説明より当業者に自明で
ある。これらの変更および改変のすべてを、添付した請
求の範囲内に含むことを意図する。
【図１】２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシ
トシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン（「ＦＴ
Ｃ）」）の化学構造を示している。
トシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン（「ＦＴ
Ｃ）」）の化学構造を示している。
【図２】２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロ−
１−イル）−１，３−オキサチオランの調製方法を示し
ている。
１−イル）−１，３−オキサチオランの調製方法を示し
ている。
【図３】ＦＴＣの（＋）および（−）鏡像異性体に対す
るアルカリ性ホスファターゼおよびヘビ毒ホスホジエス
テラーゼの特異性に関するフローチャートである。
るアルカリ性ホスファターゼおよびヘビ毒ホスホジエス
テラーゼの特異性に関するフローチャートである。
【図４】Ａｍａｎｏ ＰＳ−８０００Ｒ（−白四角−）
およびＰＬＥ（−黒点付き白円−）を用いた、リパーゼ
に触媒されたＦＴＣの５′−ブチリルエステルの加水分
解の経時的変化を示すグラフである。
およびＰＬＥ（−黒点付き白円−）を用いた、リパーゼ
に触媒されたＦＴＣの５′−ブチリルエステルの加水分
解の経時的変化を示すグラフである。
【図５】ＨＩＶ−１に感染したヒトＰＢＭ細胞の阻害百
分率に対する、ラセミ体および鏡像異性体を濃縮したＦ
ＴＣ（実施例４の方法によって調製した）の濃度（μ
Ｍ）の効果のグラフである。（（−黒円−、（±）−Ｆ
ＴＣ）、（−白円−、（−）−ＦＴＣ）、（−黒四角
−、（＋）−ＦＴＣ）。
分率に対する、ラセミ体および鏡像異性体を濃縮したＦ
ＴＣ（実施例４の方法によって調製した）の濃度（μ
Ｍ）の効果のグラフである。（（−黒円−、（±）−Ｆ
ＴＣ）、（−白円−、（−）−ＦＴＣ）、（−黒四角
−、（＋）−ＦＴＣ）。
【図６】ＨＩＶ−１に感染したヒトｐＢＭ細胞の阻害百
分率におけるラセミ体および鏡像異性体を濃縮したＦＴ
Ｃ（実施例３の方法によって調製した）の濃度（μＭ）
の効果のグラフである。（（−黒円−、（±）−ＦＴ
Ｃ）、（−白円−、（−）−ＦＴＣ）、（−黒四角−、
（＋）−ＦＴＣ）。
分率におけるラセミ体および鏡像異性体を濃縮したＦＴ
Ｃ（実施例３の方法によって調製した）の濃度（μＭ）
の効果のグラフである。（（−黒円−、（±）−ＦＴ
Ｃ）、（−白円−、（−）−ＦＴＣ）、（−黒四角−、
（＋）−ＦＴＣ）。
【図７】トリチウム化（±）−ＦＴＣのヒトＰＢＭ細胞
中への取り込みを、時間（時間）対ｐｍｏｌ／１０６細
胞で示したグラフである。
中への取り込みを、時間（時間）対ｐｍｏｌ／１０６細
胞で示したグラフである。
【図８】時間対ｐｍｏｌ／１０６細胞で測定した、ヒト
ＰＢＭ細胞からの放射性標識された（±）−ＦＴＣの放
出のグラフである。
ＰＢＭ細胞からの放射性標識された（±）−ＦＴＣの放
出のグラフである。
【図９】１０μＭの〔３Ｈ〕−（±）−ＦＴＣを含有す
る培地中でインキュベートされたＨｅｐＧ−２細胞にお
ける〔３Ｈ〕−（±）−ＦＴＣおよびそのリン酸化誘導
体の存在を、経過時間に対するｐｍｏｌ／１０６細胞と
して測定した結果を示す（２回の測定の平均）。
る培地中でインキュベートされたＨｅｐＧ−２細胞にお
ける〔３Ｈ〕−（±）−ＦＴＣおよびそのリン酸化誘導
体の存在を、経過時間に対するｐｍｏｌ／１０６細胞と
して測定した結果を示す（２回の測定の平均）。
【図１０】１０μＭの〔３Ｈ〕−（±）−ＦＴＣ（７０
０ ＤＰＭ／ｐｍｏｌｅ）で２４時間細胞をパルスし、
化合物の除去後２４時間の化合物濃度を決定した後、ヒ
トＨｅｐＧ−２細胞における〔３Ｈ〕−（±）−ＦＴＣ
およびそのリン酸化誘導体の放出を、経時的な細胞につ
いてｐｍｏｌ／１０６細胞で示す。
０ ＤＰＭ／ｐｍｏｌｅ）で２４時間細胞をパルスし、
化合物の除去後２４時間の化合物濃度を決定した後、ヒ
トＨｅｐＧ−２細胞における〔３Ｈ〕−（±）−ＦＴＣ
およびそのリン酸化誘導体の放出を、経時的な細胞につ
いてｐｍｏｌ／１０６細胞で示す。
【図１１】１０μＭの〔３Ｈ〕−（±）−ＦＴＣ（７０
０ ＤＰＭ／ｐｍｏｌｅ）で２４時間インキュベートし
た後の、ヒトＨｅｐＧ２細胞における〔３Ｈ〕−（±）
−ＦＴＣとそのリン酸化誘導体との合計濃度の減少を、
時間に対するｐｍｏｌ／１０６細胞で示す。
０ ＤＰＭ／ｐｍｏｌｅ）で２４時間インキュベートし
た後の、ヒトＨｅｐＧ２細胞における〔３Ｈ〕−（±）
−ＦＴＣとそのリン酸化誘導体との合計濃度の減少を、
時間に対するｐｍｏｌ／１０６細胞で示す。
【図１２】顆粒球−マクロファージ前駆細胞のコロニー
形成におけるＦＴＣの鏡像異性体の効果を、μＭで表し
た濃度に対する生存百分率として測定したグラフである
（−）−ＦＴＣ、白円；（＋）−ＦＴＣ、黒円；ＡＺ
Ｔ、黒四角）。
形成におけるＦＴＣの鏡像異性体の効果を、μＭで表し
た濃度に対する生存百分率として測定したグラフである
（−）−ＦＴＣ、白円；（＋）−ＦＴＣ、黒円；ＡＺ
Ｔ、黒四角）。
フロントページの続き (72)発明者 シナッツィ，レイモンド エフ. アメリカ合衆国 ジョージア 30333，デ カトゥー ，リージェンシー ウォーク ドライブ 1524 (72)発明者 チョイ，ウー−ベク アメリカ合衆国 ニュージャージー 08902 ノー ス ブランズウィック，シ ュミット レーン 1061
Claims (58)
- 【請求項１】（±）−β−Ｄ，Ｌ−２−ヒドロキシメチ
ル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３
−オキサチオラン、もしくはその生理的に受容可能な誘
導体または生理的に受容可能な塩。 - 【請求項２】（−）−β−Ｌ−２−ヒドロキシメチル−
５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オ
キサチオラン、もしくはその生理的に受容可能な誘導体
または生理的に受容可能な塩。 - 【請求項３】（＋）−β−Ｄ−２−ヒドロキシメチル−
５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オ
キサチオラン、もしくはその生理的に受容可能な誘導体
またはその生理的に受容可能な塩。 - 【請求項４】次の構造を有する、請求項１に記載の化合
物： ここでＲ１およびＲ２はそれぞれ独立にアルキル；エス
テル基の非カルボニル部分が直鎖、分枝状、または環状
アルキルからなる群より選択される、カルボン酸エステ
ル；アルコキシアルキル；アラルキル；アリールオキシ
アルキル；ハロゲン、Ｃ１からＣ４のアルキルまたはＣ
１からＣ４のアルコキシで任意に置換されたフェニルを
含むアリール；スルホネートエステル；アルキルまたは
アラルキルスルホニル；モノ、ジ、またはトリホスフェ
ートエステル、またはアミノ酸エステルであり、そして
Ｒ１またはＲ２の一方は水素であり得る。 - 【請求項５】次の構造を有する、請求項２に記載の化合
物： ここでＲ１およびＲ２はそれぞれ独立にアルキル；エス
テル基の非カルボニル部分が直鎖、分枝状、または環状
アルキルからなる群より選択される、カルボン酸エステ
ル；アルコキシアルキル；アラルキル；アリールオキシ
アルキル；ハロゲン、Ｃ１からＣ４のアルキルまたはＣ
１からＣ４のアルコキシで任意に置換されたフェニルを
含むアリール；スルホネートエステル；アルキルまたは
アラルキルスルホニル；モノ、ジ、またはトリホスフェ
ートエステル、またはアミノ酸エステルであり、そして
Ｒ１またはＲ２の一方は水素であり得る。 - 【請求項６】次の構造を有する、請求項３に記載の化合
物： ここでＲ１およびＲ２はそれぞれ独立にアルキル；エス
テル基の非カルボニル部分が直鎖、分枝状、または環状
アルキルからなる群より選択される、カルボン酸エステ
ル；アルコキシアルキル；アラルキル；アリールオキシ
アルキル；ハロゲン、Ｃ１からＣ４のアルキルまたはＣ
１からＣ４のアルコキシで任意に置換されたフェニルを
含むアリール；スルホネートエステル；アルキルまたは
アラルキルスルホニル；モノ、ジ、またはトリホスフェ
ートエステル、またはアミノ酸エステルであり、そして
Ｒ１またはＲ２の一方は水素であり得る。 - 【請求項７】請求項４に記載の化合物であって、ここで
Ｒ１およびＲ２が、メチル、エチル、プロピル、ブチ
ル、ペンチル、ヘキシル、イソプロピル、イソブチル、
ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、イソペンチル、アミル、
ｔ−ペンチル、３−メチルブチリル、ハイドロゲンスク
シネート、３−クロロベンゾエート、シクロペンル、シ
クロヘキシル、ベンゾイル、アセチル、ピバロイル、メ
シレート、プロピオニル、ブチリル、バレリル、カプロ
イック、カプリリック、カプリック、ラウリック、ミリ
スチック、パルミチック、ステアリック、オレイック、
およびアラニル、バリニル、ロイシニル、イソロイシニ
ル、プロリニル、フェニルアラニニル、トリプトファニ
ル、メチオニニル、グリシニル、セリニル、スレオニニ
ル、システイニル、チロシニル、アスパラギニル、グル
タミニル、アスパルトイル、グルタオイル、リシニル、
アルギニニル、およびヒスチジニルを含むがこれに限定
されないアミノ酸からなる群よりそれぞれ独立に選択さ
れ、そしてＲ１またはＲ２の一方が水素であり得る、化
合物。 - 【請求項８】請求項５に記載の化合物であって、ここで
Ｒ１およびＲ２が、メチル、エチル、プロピル、ブチ
ル、ペンチル、ヘキシル、イソプロピル、イソブチル、
ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、イソペンチル、アミル、
ｔ−ペンチル、３−メチルブチリル、ハイドロゲンスク
シネート、３−クロロベンゾエート、シクロペンチル、
シクロヘキシル、ベンゾイル、アセチル、ピバロイル、
メシレート、プロピオニル、ブチリル、バレリル、カプ
ロイク、カプリリック、カプリック、ラウリック、ミリ
スチック、パルミチック、ステアリック、オレイック、
およびアラニル、バリニル、ロイシニル、イソロイシニ
ル、プロリニル、フェニルアラニニル、トリプトファニ
ル、メチオニニル、グリシニル、セリニル、スレオニニ
ル、システイニル、チロシニル、アスパラギニル、グル
タミニル、アスパルトイル、グルタオイル、リシニル、
アルギニニル、およびヒスチジニルを含むがこれに限定
されないアミノ酸からなる群よりそれぞれ独立に選択さ
れ、そしてＲ１またはＲ２の一方が水素であり得る、化
合物。 - 【請求項９】請求項６に記載の化合物であって、ここで
Ｒ１およびＲ２が、メチル、エチル、プロピル、ブチ
ル、ペンチル、ヘキシル、イソプロピル、イソブチル、
ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、イソペンチル、アミル、
ｔ−ペンチル、３−メチルブチリル、ハイドロゲンスク
シネート、３−クロロベンゾエート、シクロベンチル、
シクロヘキシル、ベンゾイル、アセチル、ピバロイル、
メシレート、プロピオニル、ブチリル、バレリル、カプ
ロイック、カプリリック、カプリック、ラウリック、ミ
リスチック、パルミチック、ステアリック、オレイッ
ク、およびアラニル、バリニル、ロイシニル、イソロイ
シニル、プロリニル、フェニルアラニニル、トリプトフ
ァニル、メチオニニル、グリシニル、セリニル、スレオ
ニニル、システイニル、チロシニル、アスパラギニル、
グルタミニル、アスパルトイル、グルタオイル、リシニ
ル、アルギニニル、およびヒスチジニルを含むがこれに
限定されないアミノ酸からなる群よりそれぞれ独立に選
択され、そしてＲ１またはＲ２の一方が水素であり得
る、化合物。 - 【請求項１０】Ｒ１がｎ−ブチルであり、そしてＲ２が
水素である、請求項７に記載の化合物。 - 【請求項１１】Ｒ１がｎ−ブチルであり、そしてＲ２が
水素である、請求項８に記載の化合物。 - 【請求項１２】Ｒ１がｎ−ブチルであり、そしてＲ２が
水素である、請求項９に記載の化合物。 - 【請求項１３】ラセミ体の２−ヒドロキシメチル−５−
（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキサ
チオラン、もしくはその生理的に受容可能な誘導体また
は生理的に受容可能な塩の、ヒトにおけるＨＩＶまたは
ＨＢＶ感染を治療するための有効量を薬学的に受容可能
な担体中に含有する、薬剤組成物。 - 【請求項１４】（−）−β−Ｌ−２−ヒドロキシメチル
−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−
オキサチオラン、もしくはその生理的に受容可能な誘導
体または生理的に受容可能な塩の、ヒトにおけるＨＩＶ
またはＨＢＶ感染を治療するための有効量を薬学的に受
容可能な担体中に含有する、薬剤組成物。 - 【請求項１５】（＋）−β−Ｄ−２−ヒドロキシメチル
−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−
オキサチオラン、もしくはその生理的に受容可能な誘導
体または生理的に受容可能な塩の、ヒトにおけるＨＩＶ
またはＨＢＶ感染を治療するための有効量を薬学的に受
容可能な担体中に含有する、薬剤組成物。 - 【請求項１６】前記生理的に受容可能な誘導体が次の式
を有する、請求項１３に記載の薬剤組成物： ここでＲ１およびＲ２はそれぞれ独立にアルキル；エス
テル基の非カルボニル部分が直鎖、分枝状、または環状
アルキルからなる群より選択される、カルボン酸エステ
ル；アルコキシアルキル；アラルキル；アリールオキシ
アルキル；ハロゲン、Ｃ１からＣ４のアルキルまたはＣ
１からＣ４のアルコキシで任意に置換されたフェニルを
含むアリール；スルホネートエステル；アルキルまたは
アラルキルスルホニル；モノ、ジ、またはトリホスフェ
ートエステル、またはアミノ酸エステルであり、そして
Ｒ１またはＲ２の一方は水素であり得る。 - 【請求項１７】前記生理的に受容可能な誘導体が次の式
を有する、請求項１４に記載の薬剤組成物： ここでＲ１およびＲ２はそれぞれ独立にアルキル；エス
テル基の非カルボニル部分が直鎖、分枝状、または環状
アルキルからなる群より選択される、カルボン酸エステ
ル；アルコキシアルキル；アラルキル；アリールオキシ
アルキル；ハロゲン、Ｃ１からＣ４のアルキルまたはＣ
１からＣ４のアルコキシで任意に置換されたフェニルを
含むアリール；スルホネートエステル；アルキルまたは
アラルキルスルホニル；モノ、ジ、またはトリホスフェ
ートエステル、またはアミノ酸エステルであり、そして
Ｒ１またはＲ２の１つは水素であり得る。 - 【請求項１８】前記生理的に受容可能な誘導体が次の式
を有する、請求項１５に記載の薬剤組成物： ここでＲ１およびＲ２はそれぞれ独立にアルキル；エス
テル基の非カルボニル部分が直鎖、分枝状、または環状
アルキルからなる群より選択される、カルボン酸エステ
ル；アルコキシアルキル；アラルキル；アリールオキシ
アルキル；ハロゲン、Ｃ１からＣ４のアルキルまたはＣ
１からＣ４のアルコキシで任意に置換されたフェニルを
含むアリール；スルホネートエステル；アルキルまたは
アラルキルスルホニル；モノ、ジ、またはトリホスフェ
ートエステル、またはアミノ酸エステルであり、そして
Ｒ１またはＲ２の一方は水素であり得る。 - 【請求項１９】請求項１３に記載の薬剤組成物であっ
て、ここでＲ１およびＲ２が、メチル、エチル、プロピ
ル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、イソプロピル、イソ
ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、イソペンチル、
アミル、ｔ−ペンチル、３−メチルブチリル、ハイドロ
ゲンスクシネート、３−クロロベンゾエート、シクロペ
ンチル、シクロヘキシル、ベンゾイル、アセチル、ピバ
ロイル、メシレート、プロピオニル、ブチリル、バレリ
ル、カプロイック・ カプリリック、カプリック、ラウ
リック、ミリスチック、パルミチック、ステアリック、
オレイック、およびアラニル、バリニル、ロイシニル、
イソロイシニル、プロリニル、フェニルアラニニル、ト
リプトファニル、メチオニニル、グリシニル、セリニ
ル、スレオニニル、システイニル、チロシニル、アスパ
ラギニル、グルタミニル、アスパルトイル、グルタオイ
ル、リシニル、アルギニニル、およびヒスチジニルを含
むがこれに限定されないアミノ酸からなる群よりそれぞ
れ独立に選択され、そしてＲ１またはＲ２の一方が水素
であり得る、薬剤組成物。 - 【請求項２０】請求項１４に記載の薬剤組成物であっ
て、ここでＲ１およびＲ２が、メチル、エチル、プロピ
ル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、イソプロピル、イソ
ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、イソペンチル、
アミル、ｔ−ペンチル、３−メチルブチリル、ハイドロ
ゲンスクシネート、３−クロロベンゾエート、シクロン
チル、シクロヘキシル、ベンゾイル、アセチル、ピバロ
イル、メシレート、プロピオニル、ブチリル、バレリ
ル、カプロイック、カプリリック、カプリック、ラウリ
ック、ミリスチック、パルミチック、ステアリック、オ
レイック、およびアラニル、バリニル、ロイシニル、イ
ソロイシニル、プロリニル、フェニルアラニニル、トリ
プトファニル、メチオニニル、グリシニル、セリニル、
スレオニニル、システイニル、チロシニル、アスパラギ
ニル、グルタミニル、アスパルトイル、グルタオイル、
リシニル、アルギニニル、およびヒスチジニルを含むが
これに限定されないアミノ酸からなる群よりそれぞれ独
立に選択され、そしてＲ１またはＲ２の一方が水素であ
り得る、薬剤組成物。 - 【請求項２１】請求項１５に記載の薬剤組成物であっ
て、ここでＲ１およびＲ２が、メチル、エチル、プロピ
ル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、イソプロピル、イソ
ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、イソペンチル、
アミル、ｔ−ペンチル、３−メチルブチリル、ハイドロ
ゲンスクシネート、３−クロロベンゾエート、シクロペ
ンチル、シクロヘキシル、ベンゾイル、アセチル、ピバ
ロイル、メシレート、プロピオニル、ブチリル、バレリ
ル、カプロイック、カプリリック、カプリック、ラウリ
ック、ミリスチック、パルミチック、ステアリック、オ
レイック、およびアラニル、バリニル、ロイシニル、イ
ソロイシニル、プロリニル、フェニルアラニニル、トリ
プトファニル、メチオニニル、グリシニル、セリニル、
スレオニニル、システイニル、チロシニル、アスパラギ
ニル、グルタミニル、アスパルトイル、グルタオイル、
リシニル、アルギニニル、およびヒスチジニルを含むが
これに限定されないアミノ酸からなる群よりそれぞれ独
立に選択され、そしてＲ１またはＲ２の一方が水素であ
り得る、薬剤組成物。 - 【請求項２２】Ｒ１がｎ−ブチルであり、そしてＲ２が
水素である、請求項１３に記載の薬剤組成物。 - 【請求項２３】Ｒ１がｎ−ブチルであり、そしてＲ２が
水素である、請求項１４に記載の薬剤組成物化合物。 - 【請求項２４】Ｒ１がｎ−ブチルであり、そしてＲ２が
水素である、請求項１５に記載の薬剤組成物。 - 【請求項２５】薬学的に受容可能な担体中の、（±）−
β−Ｄ，Ｌ−２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオ
ロシトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン、も
しくはその生理的に受容可能な誘導体または生理的に受
容可能な塩の、ヒトにおけるＨＩＶ感染を治療するため
の有効量を投与する工程を包含する、方法。 - 【請求項２６】薬学的に受容可能な担体中の、（−）−
β−Ｌ−２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシ
トシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン、もしく
はその生理的に受容可能な誘導体または生理的に受容可
能な塩の、ヒトにおけるＨＩＶ感染を治療するための有
効量を投与する工程を包含する、方法。 - 【請求項２７】薬学的に受容可能な担体中の、（＋）−
β−Ｄ−２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシ
トシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン、もしく
はその生理的に受容可能な誘導体または生理的に受容可
能な塩の、ヒトにおけるＨＩＶ感染を治療するための有
効量を投与する工程を包含する、方法。 - 【請求項２８】薬学的に受容可能な担体中の、（±）−
β−Ｄ，Ｌ−２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオ
ロシトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン、も
しくはその生理的に受容可能な誘導体または生理的に受
容可能な塩の、ヒトまたは他の宿主動物におけるＨＢＶ
感染を治療するための有効量を投与する工程を包含す
る、方法。 - 【請求項２９】生理的に受容可能な担体中の、（−）−
β−Ｌ−２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシ
トシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン、もしく
はその生理的に受容可能な誘導体または生理的に受容可
能な塩の、ヒトまたは他の宿主動物におけるＨＢＶ感染
を治療するための有効量を投与する工程を包含する、方
法。 - 【請求項３０】生理的に受容可能な担体中の、（＋）−
β−Ｄ−２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシ
トシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン、もしく
はその生理的に受容可能な誘導体または生理的に受容可
能な塩の、ヒトまたは他の宿主動物におけるＨＢＶ感染
を治療するための有効量を投与する工程を包含する、方
法。 - 【請求項３１】前記担体が経口的送達に適切である、請
求項２５、２６、２７、２８、２９または３０に記載の
方法。 - 【請求項３２】前記担体がカプセルを含む、請求項２
５、２６、２７、２８、２９または３０に記載の方法。 - 【請求項３３】前記担体が錠剤の形態である、請求項２
５、２６、２７、２８、２９または３０に記載の方法。 - 【請求項３４】前記投与工程が非経口的である、請求項
２５、２６、２７、２８、２９または３０に記載の方
法。 - 【請求項３５】任意に保護された５−フルオロシトシン
と次式の１，３−オキサチオランとを反応させる工程、
およびいずれかのヒドロキシル保護基を任意に除去する
工程を包含する、２−ヒドロキシメチル−５−（５−フ
ルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン
を調製する方法： ここでＲ１ａは、水素またはアシル基を含むヒドロキシ
ル保護基であり、そしてＬは脱離基である。 - 【請求項３６】シトシン環の５位にフッ素原子を導入す
るフッ素化試薬と次式の化合物とを反応させる工程、お
よび任意にヒドロキシル保護基を除去する工程を包含す
る、２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシ
ン−１−イル）−１，３−オキサチオランを調製する方
法： ここでＲ１ａはヒドロキシル保護基であり、そしてＲ
１ｂはアミノ保護基である。 - 【請求項３７】ウラシル環の４位のオキソ基をアミノ基
に変換する試薬と、次式の化合物とを反応させる工程、
および次に保護基を除去する工程を包含する、２−ヒド
ロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イ
ル）−１，３−オキサチオランを調製する方法： ここでＲ１ａはヒドロキシル保護基である。 - 【請求項３８】次の工程によって１，３−オキサチオラ
ンを調製する工程をさらに包含する、請求項３５に記載
の方法： （ｉ）Ｒが保護基である、式ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＨ２−Ｏ
ＲまたはＲＯＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２ＯＲの化合物
をオゾン分解し、次の基を形成する、工程： （ｉｉ）工程（ｉ）の生成物をメルカプト酢酸と反応さ
せて次の構造の化合物を形成する工程：および （ｉｉｉ）工程（ｉｉ）の生成物を還元し、次にその還
元生成物をカルボン酸無水物、アルキル化剤、またはハ
ロゲン化剤と反応させて次の化合物を形成する工程 ここでＬは脱離基である。 - 【請求項３９】前記カルボン酸無水物が無水酢酸であ
る、請求項３８に記載の方法。 - 【請求項４０】一方の鏡像異性体において優先的に反応
を触媒する酵素にラセミ混合物を曝す工程を包含する、
ヌクレオシド鏡像異性体のラセミ混合物を分割する方
法。 - 【請求項４１】前記酵素が、エステラーゼ、リパーゼ、
サブスチルリシン（ｓｕｂｓｔｉｌｌｉｓｉｎ）、α−
キモトリプシン、およびシチジン−デオキシシチジンデ
アミナーゼを含む群より選択される、請求項４０に記載
の方法。 - 【請求項４２】前記エステラーゼがブタ肝臓エステラー
ゼである、請求項４１に記載の方法。 - 【請求項４３】前記リパーゼがブタ膵臓リパーゼおよび
Ａｍａｎｏ ＰＳ−８００リパーゼからなる群より選択
される、請求項４１に記載の方法。 - 【請求項４４】前記ヌクレオシド鏡像異性体がＣ５’−
ヒドロキシル位でアシル化される、請求項４０に記載の
方法。 - 【請求項４５】前記鏡像異性体が、分割の前に、アルキ
ルカルボン酸および置換されたアルキルカルボン酸から
なる群より選択される化合物によってアシル化される、
請求項４４に記載の方法。 - 【請求項４６】前記アルキルカルボン酸が、酢酸、プロ
ピオン酸、酪酸、吉草酸、２−クロロプロピオン酸、２
−クロロ酪酸、２−クロロ吉草酸からなる群より選択さ
れる、請求項４５に記載の方法。 - 【請求項４７】前記ヌクレオシド鏡像異性体が、支持体
上に固定された前記酵素を含むカラムを通過する、請求
項４０に記載の方法。 - 【請求項４８】前記鏡像異性体が溶液中で前記酵素と混
合される、請求項４０に記載の方法。 - 【請求項４９】前記酵素反応を非イオン界面活性剤の存
在下で行う工程を包含する、請求項４０に記載の方法。 - 【請求項５０】前記非イオン界面活性剤がＴｒｉｔｏｎ
Ｘ−１００である、請求項４９に記載の方法。 - 【請求項５１】分割を強化する第２の酵素に分割生成物
を曝す工程をさらに包含する、請求項４０に記載の方
法。 - 【請求項５２】分割生成物を再結晶する工程をさらに包
含する、請求項４０に記載の方法。 - 【請求項５３】分割生成物をキラルな酸（ｃｈｉｒａｌ
ａｃｉｄ）で処理する工程をさらに包含する、請求項
４０に記載の方法。 - 【請求項５４】前記キラルな酸が、リンゴ酸、マンデル
酸、ジベンゾイル酒石酸、３−ブロモカンホロ−８−ス
ルホン酸（３−ｂｒｏｍｏｃａｍｐｈｏｒ−８−ｓｕｌ
ｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、１０−カンホロスルホン酸、
およびジ−ｐ−トルオイル酒石酸からなる群より選択さ
れる、請求項５３に記載の方法。 - 【請求項５５】前記ラセミ混合物が（±）−２−ヒドロ
キシメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）
−１，３−オキサチオランである、請求項４０に記載の
方法。 - 【請求項５６】前記ラセミ混合物が（±）−２−ヒドロ
キシメチル−５−（シトシン−１−イル）−１，３−オ
キサチオランである、請求項４０に記載の方法。 - 【請求項５７】ＨＩＶまたはＨＢＶ感染の治療または予
防のためなどの、医療における使用のための、（±）−
β−Ｄ，Ｌ−２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオ
ロシトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン、そ
の（−）および（＋）鏡像異性体、ならびにそれらの薬
学的に受容可能な誘導体およびそれらの塩。 - 【請求項５８】ＨＩＶまたはＨＢＶ感染の治療のための
医薬品の製造における、（±）−β−Ｄ，Ｌ−２−ヒド
ロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イ
ル）−１，３−オキサチオラン、その（−）および
（＋）鏡像異性体、ならびにそれらの薬学的に受容可能
な誘導体およびその塩の使用。
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