JPH08511523A - 新規治療薬送達システム - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 治療薬を含む発泡性先駆物質充填マイクロスフェアからなる治療薬送達システムが記載される。この種のマイクロスフェアを治療薬送達の用途に使用する方法も提供される。コントラスト剤または薬物を封入した発泡性先駆物質充填リポソームからなる治療薬送達システムは好適である。この種のリポソームを製造する方法および装置並びにその種のリポソームを治療薬送達の用途に使用する方法も開示される。

Description

【発明の詳細な説明】 新規治療薬送達システム 関連出願 本出願は１９９３年１１月３０日に本出願と同時に出願された同時係属出願Ｕ Ｓ出願損号０８／１５９，６８７およびＵＳ出願番号０８／１５９，６７４の一 部継続出願であり、これらは１９９３年６月１１日出願の同時係属出願ＵＳ出願 番号０７６，２５０の一部継続出願であり、これは各１９９１年６月１８日出願 の同時継続出願ＵＳ出願番号７１６，８９９およびＵＳ出願番号７１７，０８４ の一部継続出願であり、これは順番に１９９０年８月２０日出願のＵＳ出願番号 ５６９，８２８の一部継続出願であり、これは順番に１９８９年１２月２２日出 願のＵＳ出願番号４５５，７０７の一部継続出願であり、これら先出願の全開示 内容は引用することにより本明細書中に取り込まれている。発明の技術分野 本発明は治療薬送達システム、さらに詳しくは治療用化合物を含む発泡性先駆 物質含有マイクロスフェアに関する。さらに本発明はこの種のマイクロスフェア を治療薬送達システムとして使用する方法に関する。発明の背景 標的指向型治療薬送達手段は薬物の毒性が問題である場合とくに重要である。 特定の治療薬送達方法は潜在的に、毒性の副作用を最小化し、投与所要量を減ら し、患者の費用を減少するのに役立つ。本発明は治療薬送達の分野におけるこれ らのおよび／または他の重要な要求に答える ことを目的としている。 動物およびヒトでの疾病の検出および診断には、種々の画像化技術が使用され てきた。Ｘ線は画像診断に使用された最初の技術の一つである。この技術で得ら れる画像は対象の電子密度を反映する。種々の組織間の対比を増加するようにＸ 線を減少または遮断するために、コントラスト剤、例えばバリウムまたはヨード が長年に亙って使用されてきた。しかし、Ｘ線中の放射線が電離性であり、しか も電離性放射線の各種有害作用は累積的であるので、Ｘ線は多少危険であること が知られている。 他の重要な画像化技術は磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）である。しかし、この技術 は種々の欠点を持っている。例えば、ＭＲＩスキャナーは高価でありシャー（ｓ ｈｅａｒ）サイズであるので据付になり、可搬式検査ができない。さらに、多く の医療センターではＭＲＩは利用できない。 核医療で使用される放射性核種も画像化技術を提供する。この技術を使用する 場合、テクネチウム標識化合物のような放射性核種を患者中に注射し、ガンマカ メラで画像を得る。しかし、核医療技術は空間解像力に乏しいのが悩みであり、 また動物またはヒトを放射線の有害作用に露呈する。さらに、放射性核種の取扱 いおよび処分が問題である。 超音波はもう一つの診断用画像化技術であり、核医療とＸ線と異なって、患者 を電離性放射線の有害作用に露呈しない。さらに、磁気共鳴画像法と異なって、 超音波は比較的安価であり、可搬式検査としても実施することができる。超音波 技術を使用する場合は、超音波はトランジュサーを介して患者または動物中に伝 導される。音波は身体を通って伝播するとき、組織と体液の境界面に出会う。身 体中の組織と体液の音響的特性によって、超音波は部分的または全体的に反射ま たは吸収される。 音波が境界面によって反射されるとき、境界面はトランジュサーのレシーバーに よって検出され、処理されて画像を形成する。身体内の組織と体液の音響的特性 が対比を決定し、その対比が画像中に現れる。 近年、超音波技術は進歩してきた。しかし、種々の技術的改良にもかかわらず 、超音波はまだ多くの点、特に肝臓、脾臓、腎臓、心臓、および血流の測定を含 めて血管系の疾病の画像および検出に関して不完全な道具である。これらの部位 を検出および測定する能力は、組織または体液と周囲の組織または体液との間の 音響的特性に依存する。結果として、超音波画像と疾病検出を改良するために、 組織または体液と周囲の組織または体液との間の音響的差異を増加するコントラ スト剤が求められている。 超音波の画像形成の基礎をなす原理から、研究者はガス状コントラスト剤の追 求に向かっている。音響特性または音響インピーダンスの変化は、密度または音 響インピーダンスが大きく変わる種々の物質の境界面、特に固体、液体および気 体の間の境界面で最も顕著である。超音波がこの種の境界面に出会うと、音響イ ンピーダンスが変化して、その結果音波がさらに強く反射し、超音波画像中にさ らに強いシグナルが生じる。音波の効率または反射に影響する他の要因は反射境 界面の弾性である。境界面の弾力性が大きくなる程、音波の反射の効率は増加す る。バブルのような物質は高弾性の境界面を示す。従って、前述の原理の結果と して、研究者はバブルまたはガス含有体を基材とする超音波のコントラスト剤の 開発およびその効率的な製造方法に焦点を合わせきた。 米国特許第４，５４４，５４５号明細書でＲｙａｎ等は化学修飾コレステロー ルコーティングを有するホスホリピドリポソームを開示してい る。コレステロールコーティングは一枚層または二枚層とすることができる。ト レーサ、治療薬、または細胞毒を含有する水性媒体がリポソーム内に封入される 。０．００１ミクロンから１０ミクロンの直径を持つリポソームが撹拌と超音波 振動によって製造される。 米国特許第４，６８４，４７９号および同５，２１５，６８０号明細書におい て、Ｄ′Ａｒｒｉｇｏは液体中気体型エマルションと界面活性剤混合物からの製 造方法を教示している。米国特許第４，６８４，４７９号明細書には液体媒体中 の界面活性剤の溶液を空気中で振盪することによるリポソームの製造方法を開示 している。米国特許第５，２１５，６８０号明細書は液体媒体中の表面活性剤の 溶液を空気または他のガス状混合物中で振盪し、得られた溶液をフィルター滅菌 することを含む、リピドコーティングマイクロバブルの大規模製造方法を目標に している。 国際公開第８０／０２３６５号パンフレットは、窒素のような不活性ガスまた は二酸化炭素がゲル化可能な膜中に封入されているマイクロバブルの製造方法を 開示している。リポソームを低温で貯蔵し、ヒトに使用する前および使用する間 に加温することができる。国際公開第８２／０１６４２号パンフレットはマイク ロバブル先駆物質とその製造方法を記載している。マイクロバブルは固体物質を 溶解することによって液体中に生成する。ガス充填空隙が生じ、その中でガスは １）固体先駆物質凝集体の微粒子の間の空隙中に存在するガスから生産され、２ ）先駆物質粒子の表面上に吸収され、３）先駆物質粒子の内部構造の不可欠な部 分となり、４）先駆物質が液体と化学的に反応するとき形成され、５）液体に溶 解して、先駆物質が溶解するとき放出される。 さらに、米国特許第４，７１８，４３３号および同４，７７４，９５ ８号明細書でＦｅｉｎｓｔｅｉｎは超音波の目的のためにアルブミンコーティン グマイクロバブルの使用を教示している。 米国特許第４，５７２，２０３号および同４，８４４，８８２号明細書でＷｉ ｄｄｅｒは超音波画像法およびマイクロバブル型超音波画像剤を開示している。 国際公開第９３／０５８１９号パンフレットでＱｕａｙは、１）バブルの大き さ、２）ガスの密度、３）ガスの周囲媒体中の溶解度、４）ガスの媒体への拡散 率を含む既知の物理定数の評価基準に基づいて特に選択されたガスを含むマイク ロバブルを形成する薬剤の使用を記載している。 米国特許第５，１７１，７５５号明細書でＫａｕｆｍａｎ等は高度フッ素化有 機化合物、実質的な表面活性または水溶解度を有しない油および界面活性剤を含 むエマルションを開示している。Ｋａｕｆｍａｎ等は医療用途にエマルションを 使用する方法を教示している。研究が顕著に行われた他の分野は標的指向型送達 に関するものである。例えば、生体細胞への遺伝子物質の導入についての従来の 方法および材料には限界があり有効ではなかった。現在、生体細胞に遺伝子物質 を送達するために、多くの異なった手法が開発されてきた。これらの手法には、 リン酸カルシウム沈殿法とエレクトロポレーション法のような技法およびカチオ ン性重合体と水性充填リポソームのような担体が含まれる。これらの方法はすべ て生体内では比較的効果がなく、ただ細胞培養物のトランスフェクションに制限 的に有用なだけである。これらの方法には、遺伝子物質の標的細胞への局所放出 、送達および取込みを可能にするものはない。 多種類のヒトおよび動物の疾病を治療するには、遺伝子物質のような 治療薬を送達するより良い手段が必要である。遺伝子病を同定することおよびタ ンパク質転写を理解することにおいては、大きな進歩があったが、ヒトおよび動 物の疾病を治療するために遺伝子を細胞に送達することには比較的進歩が少なか った。 主要な難点は遺伝子を細胞外空間から細胞内空間に送達することにあり、また は遺伝子物質を選択された細胞膜の表面に効果的に局在させることにある。多種 類の技法が試みられたが、大きな成功はなかった。例えば、アデノのウイルスと レトロウイルスのようなウイルスが遺伝子物質を細胞に移送するためのベクター として使用されてきた。ウイルス全体が使用されたが、ウイルスカプセルの内部 に入れることのできる遺伝子量は限られたものであり、また肝臓ウイルスによっ て起こる危険な相互作用についての心配もある。ウイルスカプセルの必須成分を 単離して、遺伝子物質を選択された細胞に運ぶために使用することができる。し かし、生体内では、送達媒体は特定細胞を認識する必要があるだけではなく、こ れら細胞に送達されねばならない。ウイルスベクターについての広範囲の研究に もかかわらず、生体内で遺伝子物質を送達するための標的指向型ウイルス媒介ベ クターの開発は困難である。 通常、細胞培養物中の細胞に遺伝子を送達するのに液体含有リポソームが使用 されてきたが、これは遺伝子物質の細胞送達には生体内で一般的に無効であった 。例えば、カチオン性リポソーム・トランスフェクション法は生体内では効果的 に働らかなかった。コントラスト剤および遺伝子物質のような治療薬の細胞送達 を改良するにはさらに改良された手段が必要である。 進歩があったにもかかわらず、従来技術によっては超音波コントラス ト剤の開発に固有の多くの問題点は解決されていない。ガスは安定化エマルショ ンまたは粒子コーティングから拡散し、生産物の効能が失われる。現在まで開発 中の超音波用のガス状基材コントラスト媒体のすべての中で、マイクロスフェア は比較的大きく、例えば２から７ミクロンのオーダーであり、それ故超音波コン トラスト増強のための十分な後方散乱が提供される。これらの粒子は粒径が大き いので、注射の間に患者に入って来る細菌のような注射による潜在的汚染を遮断 することが困難である。最近開発中のガス含有マイクロスフェアは一般的に生体 内で不安定であり、理想的なコントラスト増強を提供する程長く存続しない。 本発明は治療薬の有効な標的指向送達のための超音波画像および媒体に使用す るコントラスト剤の分野における前記および他の重要な要望に答えることを目的 にしている。本発明は超音波診断および遺伝子物質の送達のための改良されたか つ安全なコントラスト剤を提供することに捧げられる。 発明の要旨 本発明はガス充填マイクロスフェアを使用して治療薬を部位特異的に送達する 治療薬送達システムを提供する。マイクロスフェアは選択温度で活性化してガス となる温度活性化発泡性先駆物質を含有する。マイクロスフェアは患者の体内中 に導入されると、標的部位に向けられる音波エネルギー、マイクロ波エネルギー 、電磁気エネルギーまたは高体温の利用によって、治療用化合物は特定組織に標 的指向することができ、マイクロスフェアは破裂し、治療用化合物を放出する。 さらに詳しくは、本発明は治療用化合物を含む温度活性化発泡性先駆物質充填 マイクロスフェアからなる治療薬送達システムを提供する。 本発明はまた、（ｉ）治療用化合物を含む温度活性化発泡性先駆物質充填マイ クロスフェアを患者に投与すること；（ｉｉ）発泡性先駆物質の液体から気体へ の相転移を決定し、患部中のマイクロスフェアの存在を決定するために、超音波 を使用してマイクロスフェアを監視すること；（ｉｉｉ）超音波を利用してマイ クロスフェアを破裂させて患部に治療用化合物を放出することからなる、患者の 患部へ治療用化合物を制御送達する方法に関する。 さらに、本発明はコントラスト剤の送達と薬物送達剤としての利用に適した温 度活性化発泡性先駆物質充填リポソームを製造する方法と装置を提供する。本発 明の好適な方法は、例えば治療用化合物を含む温度活性化発泡性先駆物質マイク ロスフェアの製造における簡単性と潜在的コスト削減という利点を提供する。 温度活性化発泡性先駆物質充填リポソームはコントラスト剤と薬物の担体とし て特に有用である。水溶性の薬物を封入することにのみ適した液体内部を有する 従来技術のリポソームと異なって、本発明によって製造された温度活性化発泡性 先駆物質充填リポソームは親油性薬物を封入するのに特に有用である。さらに、 薬物の親油性誘導体、例えばメタロセンジハリドのアルキル誘導体を脂質層中に 容易に取込むことができる。Ｋｕｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ ｃ．１９９１，１１３，９０２７−９０４５。 本発明の利点の一つはマイクロスフェア中の発泡性先駆物質による超音波エネ ルギーの捕捉であり、それによって選択された転移温度で液体発泡性先駆物質が 気体に変化され、マイクロスフェアが破裂すると、膜の流動性が増加して、治療 用化合物の細胞による摂取が向上する。 本発明のこれらと他の特徴およびその利点について、以下の図面および説明に おいて詳細に説明する。 図面の簡単な説明 図１はリポソームマイクロスフェアの壁中に埋封された治療用化合物を有する 発泡性先駆物質充填リポソームおよび次いで超音波を適用したときの治療薬の放 出を示すの線図である。 図２はリポソームマイクロスフェアの壁の内側層中に埋封され、かつ発泡性先 駆物質充填内部に露呈している治療用化合物を有する発泡性先駆物質充填リポソ ーム、および次いで超音波を適用したときの治療薬の放出を示す線図である。 図３はリポソームマイクロスフェアの壁の外側層中に埋封され、かつ発泡性先 駆物質充填内部に露呈している治療用化合物を有する発泡性先駆物質充填リポソ ーム、および次いで超音波を適用したときの治療薬の放出を示す線図である。 図４はリポソームマイクロスフェアの壁の内側層と外側層中に埋封され、かつ 発泡性先駆物質充填内部空隙と外部環境に露呈している治療用化合物を有する発 泡性先駆物質充填リポソーム、および次いで超音波を適用したときの治療薬の放 出を示す線図である。 図５はリポソームの壁の内部に結合している治療用化合物を有する発泡性先駆 物質充填リポソームマイクロスフェア、および次いで超音波を適用したときの治 療薬の放出を示す線図である。 図６はリポソームマイクロスフェアの外部に結合している治療用化合物を有す る発泡性先駆物質充填リポソームマイクロスフェア、および次いで超音波を適用 したときの治療薬の放出を示す線図である。 図７はリポソームマイクロスフェアの内部と外部に結合している陰電荷の薬物 （Ａ）または陽電荷の薬物（Ｂ）のような治療用化合物を有する発泡性先駆物質 充填リポソームマイクロスフェア、および次いで超音波を適用したときの治療薬 の放出を示す線図である。 図８は発泡性先駆物質充填内部空隙内に封入された治療用化合物を有する発泡 性先駆物質充填リポソーム、および次いで超音波を適用したときの治療薬の放出 を示す線図である。 図９は本発明の治療薬含有発泡性先駆物質充填リポソームマイクロスフェアを 製造する本発明による好適な装置の図（部分的に略図）である。 図１０は本発明の治療薬含有発泡性先駆物質充填リポソームマイクロスフェア を濾過および／または投与する好適な装置を示す。 図１１は本発明の治療薬含有発泡性先駆物質充填リポソームマイクロスフェア を濾過および／または投与する好適な装置を示す。 図１２は図１１の装置の一部の分解図である。 図１３は真空乾燥ガス徐添加法によって製造され、内部に実質的に水の無い、 薬物が封入されていないガス充填リポソームのｄＢ反射能を示すグラフである。 データはＡｃｏｕｓｔｉｃ Ｉｍａｇｉｎｇ（商標）Ｍｏｄｅｌ ５２００スキ ャナ（Ａｃｏｕｓｔｉｃ Ｉｍａｇｉｎｇ，Ｐｈｏｅｎｉｘ，Ａｒｉｚｏｎａ） を使用して７．５メガヘルツのトランスジューサで走査することによって得られ 、反射能を測定するシステム試験ソフトウエアを使用して作成された。システム は各試験の前に既知の音響インピーダンスをもつ疑似模型で標準化した。 図１４は薬物含有真空乾燥ガス徐添加リポソーム、および真空乾燥ガス徐添加 法によって製造され内部に実質的に水の無い薬物含有ガス充填 リポソームを製造する好適な装置を示す。 図１５は本発明の発泡性先駆物質充填リポソームの濾過の前（Ａ）と後（Ｂ） の粒径を示す顕微鏡写真である。 図１６は本発明の発泡性先駆物質充填リポソームの濾過の前（Ａ）と後（Ｂ） の粒径大きさ分布を示すグラフである。 図１７はフィルターを通す押出し前（Ａ）と後（Ｂ）の脂質懸濁液の顕微鏡写 真である。 図１８は脂質懸濁液の濾過とオートクレーブの後に生成した発泡性先駆物質充 填リポソームの顕微鏡写真である。顕微鏡写真は発泡性先駆物質充填リポソーム の濾過による分粒の前（Ａ）と後（Ｂ）に取ったものである。 図１９は温度活性化の前の温度活性化発泡性先駆物質充填リポソームを示す線 図である。リポソームは多重層の膜を有する。 図２０は液体から気体状に温度活性化して単層膜とリポソーム直径の膨脹が起 った後の温度活性化液体発泡性先駆物質充填リポソーム示す線図である。 発明の詳細な説明 本発明は治療薬を含む温度活性化発泡性先駆物質充填マイクロスフェアからな る標的指向型治療薬送達システムを提供する。マイクロスフェアは内部空隙をも つ相対的に球形の形状を有する構造と定義される。治療用化合物は所望に応じて マイクロスフェアの壁内に埋封、マイクロスフェア中に封入および／またはマイ クロスフェアに結合され得る。成句「に結合した」またはその変形は治療用化合 物の位置と関連して使用されているように、治療用化合物がマイクロスフェアの 内側および／また は外側にある方法例えば、共有結合もしくはイオン結合または化学的もしくは例 えば図５、図６および図７に示すような電気化学的結合もしくは相互反応によっ て結合していることを意味する。成句「中に封入された」またはその変形は治療 用化合物の位置と関連して使用されているように、治療薬が例えば図８に示すよ うにマイクロスフェア内部空隙中に在ることを示す。成句「内に埋封された」ま たはその変形は治療用化合物の位置と関連して使用されているように、例えば図 １、図２、図３、図４に示すようにマイクロスフェア壁内に治療用化合物が位置 することを意味する。成句「治療薬を含む」はマイクロスフェアと連結して位置 する各種治療薬のすべてを示す。従って、治療薬は、例えば発泡性先駆物質充填 マイクロスフェアの内部空隙内に取込まれる、発泡性先駆物質と発泡性先駆物質 充填マイクロスフェアの内部壁との間に位置する、発泡性先駆物質充填マイクロ スフェアの外部表面に取込まれるおよび／またはマイクロスフェア構造自身内に 取込まれる、のような種々に位置することができる。マイクロスフェアの壁は脂 質を含む場合一つ以上の脂質二枚層を持つことができることは、本開示で一旦武 装した当業者によって理解される。 本発明のマイクロスフェアは生体内または生体外で標的指向型送達のために使 用することができる。好適には、各個のマイクロスフェアは超音波を適用された 時、実質的にすべての治療用化合物を放出することができる。成句「実質的にす べて」は少なくとも約８０％、好適には少なくとも約９０％、最も好適には約１ ００％を表す。ある実施態様では、マイクロスフェアのすべてからの治療用化合 物のすべての放出は即時的である。他の実施態様では、放出は漸進的である。放 出の好適な速度は 治療薬の投与の型によって変わることは、いったん本開示で武装した当業者によ って理解される。ある好適な実施態様では、例えば治療用化合物はマイクロスフ ェア中に封入され、したがってマイクロスフェアが破裂するとそこから実質的に すべての治療用化合物が即時に放出される。さらに、適用される超音波の周波数 と持続時間を変えて、治療用化合物の放出の所要速度を達成することができるこ とは、本開示で一旦武装した当業者によって理解される。 従って、上記のように、送達される治療薬はガス充填マイクロスフェア内に封 入されることができ、（各種の治療薬がガス含有マイクロスフェアの表面上中に 、例えばカチオン性脂質を陰電荷ＤＮＡでコーティングするもしくはアニオン性 脂質を陽電荷薬物でコーティングすることによって取込まれるように）、および ／または、例えば親脂質性の治療薬でのようにガス含有マイクロスフェアの壁内 に埋封され得る。マイクロスフェアは治療薬を含むマイクロスフェアとして製造 することができ、またはマイクロスフェアは治療薬なしで、治療薬は使用前に発 泡性先駆物質充填マイクロスフェアに添加されて製造されることができる。後者 の場合、例えば発泡性先駆物質充填マイクロスフェアを水性媒体中に加え、マイ クロスフェアを治療薬でコーティングするために振盪する。 本明細書で使用するように、成句「温度活性化発泡性先駆物質」は、選択され た活性化または転移温度で液体から気体に相を変える化合物を示す。活性化また は転移温度および同様の用語は、発泡性先駆物質の沸点、発泡性先駆物質の液体 から気体への相転移が起こる温度を表す。有用な発泡性先駆物質は約−１００℃ から約７０℃の範囲の沸点を有するガスである。活性化温度は各発泡性先駆物質 に特殊的である。この概念 は図１９と図２０で説明されている。約３７℃即ちヒトの体温の活性化温度は本 発明の発泡性先駆物質に好適である。従って、液体発泡性先駆物質は３７℃で活 性化してガスになる。しかし、発泡性先駆物質は本発明の方法では液体相または 気体相で使用される。適切な活性化発泡性先駆物質は当業者に公知であり、例え ば、メチルラクテート、即ちヒトの組織学的もしくは生理学的温度、体温で液体 である化合物を含む。この種の化合物は投与前に活性化され得る、またはメチル ラクテートの場合、患者に注射するときに活性化され得ることは当業者は認識し ている。適切な温度への露呈が投与の前に起こった時でさえ、発泡性先駆物質で 製造されたマイクロスフェアはガスを封入されて棚上に置かれたマイクロスフェ アよりも液体および気体中でさらに安定な実体であるという利点を達成している 。したがって、長い保存寿命が活性化発泡性先駆物質を封入するマイクロスフェ アに与えられる。その結果得られた発泡性先駆物質含有マイクロスフェアは周囲 の身体構造および器官に比較して低い密度であるので、マイクロスフェアを生体 内で容易に検出することができる。さらに、当時者ならば認識するであろうよう に、その種の温度感受性ガス生成マイクロスフェアは生体内温度の指標として使 用することができる。 本発明の好適な実施態様では、発泡性先駆物質は周囲温度即ち室温から患者に 投与したとき液体から気体相に変わる。発泡性先駆物質に依存して、コントラス ト剤は静脈注射の前、冷蔵庫中に貯蔵することができ、また例えば断熱シリンジ によって冷蔵することができる。注射したとき、発泡性先駆物質は膨脹して最高 超音波増強を示す。 標的組織または体液中のインサイチュで（例えば、超音波、マイクロ 波、電磁気エネルギーまたは光線エネルギー（例えば、レーザーもしくは赤外線 ）を適用したとき））、患者もしくは動物に入るとき生体外で、使用前に、貯蔵 中にまたは製造中に、発泡性先駆物質はガスを生成するように選択されうる。温 度活性化発泡性先駆物質充填マイクロスフェアの製造方法は発泡性先駆物質の沸 点以下の温度で実施される。この実施態様では、相転移が製造中に起こらないよ うに、発泡性先駆物質はマイクロスフェア内に取込まれる。その代わり、発泡性 先駆物質マイクロスフェアは発泡性先駆物質の液体相中で製造される。相転移の 活性化は、温度が先駆物質の沸点を超えると何時でも起こり得る。 低温度の沸点を有する発泡性先駆物質の場合、液体先駆物質を低温に冷却した マイクロフラッダイザー器を使用して乳化することができる。先駆物質を液体状 で利用するために、液体中に溶媒を使用することによって沸点を低下させること ができる。代案として、７０℃の上限は焦点を合わせた高エネルギー超音波で得 られる。 本発明の好適な実施態様では発泡性先駆物質は生体内で温度媒介相転移を介し てガスを生成するが、発泡性先駆物質は安定なコントラスト剤を作成するために 使用され、その中ではガスが先駆物質から誘導され、患者に入る前にガス状にな る。この実施態様は製造工程の間に発泡性先駆物質をマイクロスフェアに導入す ることによって製造される。 発泡性先駆物質は、使用前に予備製造された安定なガス充填マイクロスフェア を作成するのに利用することができる。本発明のこの形態では、発泡性先駆物質 は、各々の発泡性先駆物質の液体−気体相転移温度以下の温度で懸濁媒体および ／または安定媒体を入れている容器に添加される。温度が上がり、発泡性先駆物 質と液体溶液との間にエマルションが 形成されると、発泡性先駆物質は液体から気体への転移を受ける。この加熱とガ ス生成の結果として、ガスは懸濁液上のヘッドスペース中の空気と入れ替って、 発泡性先駆物質のガス、周囲ガス（例えば、空気）もしくは共取込ガスおよび周 囲ガスを取込んだガス充填脂質球を形成する。この相転移はコントラスト剤の最 適の混合および安定化に使用され得る。例えば、発泡性先駆物質、ペルフルオロ ブタンはリポソーム中に取込まれ、温度が３℃（ペルフルオロブタンの沸点）以 上に上がると、リポソーム状に取込まれたフルオロブタンが生成する。追加の実 例として、発泡性先駆物質フルオロブタンは、グリセロールまたはプロピレング リコールのような乳化剤と安定剤を含有する水性懸濁液中に懸濁し、市販の渦巻 撹拌器上で渦巻撹拌することができる。渦巻撹拌は、発泡性先駆物質が液体であ る程度に低い温度で開始し、試料温度が液体から気体への相転移温度を超えて上 昇するまで続けられる。そうすることによって、先駆物質はマイクロエマルショ ン化工程の間にガス状に変換する。適切な安定剤が存在すると、驚く程安定なガ ス充填リポソームが生成する。 同様に、室温で液体であるペルフルオロペンタンはリポソーム中に取込まれる 。少量の液体ペルフルオロペンタン先駆物質（０．７６−１．５２μＬ）を８０ 容量％の食塩水、１０％容量のプポピレングリコールをもつ１０容量％のグリセ ロールの溶液中の脂質溶液（例えば、８２モル％のジパルミトイルホスファチジ ルコリン−ＰＥＧ５００と１０モル％のジパルミトイルホスファチジン酸）に質 温度で添加し、振盪する。懸濁液の温度を相転移温度（例えば、３０℃以上）を 超えて上げ、ペルフルオロペンタン発泡性先駆物質の液体から気体への変換を始 める。発泡が起こって、ガス充填リポソームが生産される。生産されたガス充填 リポソームの平均粒径は、Ｗｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇ（商標）で渦巻撹拌または振盪す ることによって生産されたとき、一般的に２０ミクロン以上である。リポソーム を濾過することができ、１０ミクロン粒径以上の粒子の９９％を除去するには８ ．０ミクロンフィルターの一回通過が適切である。リポソームは扱い易くかつ柔 順であるので、濾過後により小さい脂質コーティングリポソームに再生する。リ ポソームを室温またはそれ以下に冷却した時、取込まれたペルフルオロペンタン 発泡性先駆物質は液体状態に帰り、リポソーム中に取込まれたナノ径微滴のペル フルオロペンタンとなる。再加温（例えば、生体内に注射）すると、適切な粒径 のガスリポソームが生成する。 ペルフルオロペンタン発泡性先駆物質を取込む他の方法を説明する。少量のペ ルフルオロペンタン（０．７６−１．５４μＬ）を上記の脂質の水溶液に添加し 、異なった方法の撹拌を使用する。材料をマイクロフラッダイザー（Ｍｉｃｒｏ ｆｌｕｉｄｉｃｓ，Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡ）中に入れ、１６，０００ｐｓｉで２０ ℃で１５回通過処理する。圧力と通過の回数を調整することによって、リポソー ムの粒径を適宜調整する。こうして平均粒径が約５ｎｍ径のナノ径微滴ペルフル オロペンタンが生産される。温度媒介ガス変換後（例えば、生体内への注射）に 膨脹した時、この粒径のナノ径微滴は直径１０ミクロン少し以下のリポソームを 生産する。この場合、得られるリポソームは部分的に脂質でコーティングされ、 得られるリポソームの粒径は調節される。製造工程において、未取込みペルフル オロペンタンは数種の方法で除去される。第一に、液体ペルフルオロペンタンは 密度が濃く、底に沈み、小さい脂質を取込んだナノ径微滴または微粒子は懸濁液 中に残る。第二に、懸濁液を加温す ることができる。ペルフルオロペンタンのナノ径微滴より大きい未取込み微粒子 は大きいリポソームを形成し、大きいリポソームは容器の頂部に急速に上昇して 除去される。極めて実用的な方法は、患者に注射する間の直列工程として実施す ることができる濾過を使用することである。 リポソーム（ナノ径微滴を取込むでいる脂質二枚層）の代わりにミセル形成物 を使用することができる。ミセル形成物は脂質の適切な混合物例えば、コール酸 ナトリウム、コレステロールおよびグリセロール（任意にＰＥＧ化脂質の一部） の入った落花生油を有する。マイクロフラッダイザー工程を使用して、各粒子が 平均直径約５ｎｍ以下のナノ径微滴のペルフルオロペンタンを取込んでいるエマ ルションのナノ径粒子または微粒子を生産する発泡性先駆物質のミセル形成物を 生産することができる。 発泡性先駆物質の相転移温度以下の温度で実施する場合、超音波処理を使用す ることができる。この場合、液体先駆物質のナノ径微滴が懸濁媒体内で分散する ように（例えば、ホスホリピドの懸濁液内に分散してリポソーム内にナノ径微滴 として取込まれる）、発泡性先駆物質を超音波処理によって乳化することができ る。 従って、本発明の発泡性先駆物質は、製造工程中、貯蔵中、もしくは使用前の ある時に、生体中でガス充填リポソームを形成するように選択されるか、または インサイチュでガス充填リポソームを生産するようにデザインされる。液体発泡 性先駆物質の微滴中の液体量を知って、ガス状態に達した時のリポソームの粒径 を決定することができる。 本発明の他の実施態様において、液状の発泡性先駆物質を水性エマルション中 に予備形成し、既知の粒径を維持することよって、ガス状態へ の転移が完結した時のマイクロバブルの最大粒径を気体の法則の知識を使用して 推定することができる。理想気体の法則は、気体相は瞬間的に形成され、新しく 生成した微バブル中の気体は液体中への拡散のために消費されなかったと仮定す る。それ故、エマルション中の既知の液体量から、実際に発泡性リポソームの粒 径についての上限が予測される。 本発明に従って、規定粒径をもつ液体発泡性先駆物質含有液体微滴のエマルシ ョンは配合されているから、特定温度、発泡性先駆物質の沸点に達した時、微滴 は規定粒径のガスリポソーム中に膨脹する。溶液中への気体拡散、圧力による気 体の損失、および高圧の影響のような要因は理想気体が説明することができない 要因であるから、規定粒径は現実の粒径についての上限を示す。 理想気体の法則と、液体から気体状態への転移の時の気体バルブの容量増加を 計算する式は次の通りである。 理想気体の法則は次式を予想する。 ＰＶ＝ｎＲＴ 式中、 Ｐ＝大気の圧力 Ｖ＝容量（リットル） ｎ＝ガスのモル Ｔ＝温度（°Ｋ） Ｒ＝理想気体定数＝２２．４Ｌ 大気 ｄｅｇ^-1 ｍｏｌ^-1 液体のエマルション中の液体の容量、密度および温度が既知の場合、液体先駆 物質の量（例えば、モル数）および液体先駆物質の容量を計算することができ、 液体先駆物質が気体に変換するとき、既知容量のリポ ソーム中に膨脹する。膨脹時におけるガスリポソーム中はの瞬間的膨脹と気体の 無視し得る拡散を仮定すれば、この計算容量は発泡性リポソームの粒径について の上限を反映する。 従って、先駆物質微滴が球状であるエマルション中で液体状態の先駆物質が安 定化したとき、先駆物質微滴が球状であるので、先駆物質微滴の容量は次式によ って決定される。 Ｖ（容量（球））＝４／３πｒ³ 式中、 ｒ＝球の半径 従って、容量を予測し、所望温度での液体の密度が既知であれば、微滴中の液 体（発泡性先駆物質）の量は決定される。さらに記述的に示すと、次式を適用す ることができる。 Ｖ_ガス＝４／３π（ｒ_ガス）³ 理想気体の法則によって、 ＰＶ＝ｎＲＴ 置換すると、 Ｖ_ガス＝ｎＲＴ／Ｐ_ガス または、 （Ａ） ｎ＝４／３［πｒ_ガス ³］Ｐ／ＲＴ 量ｎ＝４／３［πｒ_ガス ³］Ｐ／ＲＴ＊ＭＷ_n 液体容量に変換して、 （Ｂ） Ｖ液体＝［４／３［πｒ_ガス ³Ｐ／ＲＴ］＊ＭＷ_n／Ｄ］ 式中、Ｄ＝先駆物質の密度 液体微滴の直径について解くと、 （Ｃ）直径／２＝［３／４［４／３［πｒ_ガス ³Ｐ／ＲＴ］ＭＷ_n／Ｄ］^1/3換算 すると、 直径＝２［ｒ_ガス ³］Ｐ／ＲＴ［ＭＷ_n／Ｄ］^1/3 本発明のさらに他の実施態様では、容量およびとくに半径が既知であり、適切 な細孔径を持つフィルターによって、発泡性先駆物質微滴は適切な直径の球に分 粒される。代表的な発泡性先駆物質を使用して規定粒径、例えば１０ミクロン直 径のマイクロスフェアを生成することができる。この実施例では、マイクロスフ ェアはヒトの血流中で形成され、従って典型的な温度は３７℃または３１０°Ｋ である。１気圧の圧力で、（Ａ）の式を使用して、１０ミクロン直径マイクロス フェアの容量を満たすには７．５４×１０^-17モルの発泡性先駆物質が必要であ る。 上記の発泡性先駆物質の計算量と、７６．１１の分子量、３２．５℃の沸点、 ２０℃での６．７７８９ｇ／ｍＬ^-1の密度を有する１−フルオロブタンを使用し て、さらに計算すると、１０ミクロンマイクロスフェアの場合この先駆物質の５ ．７４×１０^-15ｇが必要であると予測される。さらに外挿し、また密度が既知 であれば、式（Ｂ）から、１０ミクロンの上限をもつマイクロスフェアを生成す るには８．４７×１０^-16ｍＬの液体先駆物質が必要であると予測される。 最後に、式（Ｃ）を使用して、１０ミクロンの上限のマイクロスフェアを持つ 発泡性先駆物質充填マイクロスフェアを生産するためには、０．０２７２ミクロ ンの半径、即ち０．０５４４ミクロンの対応する直径をもつ液体微滴のエマルシ ョンを形成することが必要である。 この特定粒径のエマルションは適切な細孔径のフィルターを使用すれば、容易 に達成することができる。さらに、規定粒径の発泡性先駆物質 微滴を形成するために必要なフィルターの細孔径から分かるように、フィルター の細孔径はまた可能性のある細菌汚染を十分に除去するから、滅菌濾過としても 使用することができる。 本発明のこの実施態様は温度によって活性化されるすべての発泡性先駆物質に 適用され得る。事実、溶媒系の凍結点の低下によって、０℃以下の温度で液体か ら気体はの相転移を受ける発泡性先駆物質の使用を可能にする。溶媒系を選択し て、発泡性先駆物質の懸濁液のための媒体を提供することができる。例えば、緩 衝食塩水中で混和する２０％ポリエチレングリコールは水単独の凍結点以下に凍 結点低下を示す。ポリエチレングリコール量を増加すること、または塩化ナトリ ウムのような物質を添加することによって、凍結点はさらに低下させることがで きる。 適切な溶媒系の選択は物理学的方法によっても説明することができる。物質、 固体もしくは液体（溶質と呼ぶ）が例えば水基材緩衝液のような溶媒中に溶解し てる場合、凍結点は溶液の組成に依存する量によって低下する。Ｗａｌｌによっ て定義されたように、溶媒の凍結点の低下は次式によって説明することができる 。 ＩｎＸ_a＝Ｉｎ（１−Ｘ_b）＝ΔＨ_fus／Ｒ（１／Ｔ₀−１／Ｔ） 式中、 Ｘａ＝溶媒のモル分率 Ｘｂ＝溶質のモル分率 ΔＨ_fus＝溶媒の融合熱 Ｔ₀＝溶媒の標準沸点 溶媒の正常な凍結点が出る。Ｘ_bがＸ_aと比べて小さい場合、上記の式は次のよ うに書き換えられる。 上記の式で温度変化ΔＴはＴ₂に比し小さいと仮定する。溶質濃度（溶媒の１０ ００ｇ当たりのモル）をモル濃度ｍで表現できると仮定すると、上記の式をさら に簡略化することができる。 式中、 Ｍａ＝溶媒の分子量 ｍ＝溶質のモル濃度、１０００ｇ当たりのモル 従って、分率Ｘ_bで置換して、 ΔＴ＝［Ｍ_aＲＴ₀ ²／１０００ΔＨ_fus］ｍ または ΔＴ＝Ｋ_fｍ 式中、Ｋ_f＝Ｍ_aＲＴ₀ ²／１０００ΔＨ_fus Ｋ_fはモル凍結点と呼ばれ、一気圧で水についてモル濃度の単位当たり１．８ ６に等しい。上記の式を使用して、本発明の発泡性先駆物質充填マイクロスフェ ア溶液のモル凍結点を正確に決定することができる。 それ故、上記の式を適用して、凍結点低下を推定し、溶媒凍結温度を適切値に 低下させるのに必要な液体もしくは固体溶質の適切な濃度を決定することができ る。 温度活性化発泡性先駆物質充填リポソームの製造方法には、本発明の発泡性先 駆物質リポソームの水性懸濁液を渦巻撹拌すること；この方法の変法は発泡性先 駆物質と脂質との水性懸濁液を任意に加熱すること、懸濁液を含有する容器を任 意にガス抜きすること、発泡性先駆物質リポソームを任意に振盪または自然に生 成させること、および発泡性先駆物質充填リポソームを冷却することが含まれ、 任意には濾過はオートクレーヌの必要性に取って代わるからオートクレーブする こと（約１００℃から約１３０℃の温度で）は第一工程として加えられ、任意に は発泡性先駆物質と脂質との水性懸濁液を約０．２２μｍのフィルターを通して 押出すことを含む；マクロエマルション化方法、そのによって本発明の発泡性先 駆物質充填リポソームの懸濁液が振盪もしくは渦巻撹拌によって乳化され、加熱 されて患者への投与の前にマイクロスフェアを形成する；；および加熱および／ または振盪によって脂質懸濁液中に発泡性先駆物質を生成すること、そのことに よって密度の低い発泡性先駆物質充填マイクロスフェアは膨脹および容器中の他 のマイクロスフェアと置き変ることによて溶液の頂部に浮き、および容器をガス 抜きして空気を放出すること；が含まれる。 凍結乾燥は振盪式ガス徐添加法の前に水と有機物質を脂質から除去するのに有 用である。乾燥ガス徐添加法はリポソームから水を除去するのに使用することが できる。加温後の乾燥リポソーム（即ち、乾燥前）中に発泡性先駆物質を予備取 込みすることによって、発泡性先駆物質は膨脹してリポソームを充填する。発泡 性先駆物質は、乾燥リポソームが真空処理を受けた後、乾燥リポソームを充填す るのに使用することができる。乾燥リポソームはゲル状から液晶への温度以下の 温度に保持されて いるとき、乾燥室はガス状にある発泡性先駆物質で徐々に充填することができる 。即ち、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）からなる乾燥リポソ ームを３℃（ペルフルオロブタンの沸点）と４０℃、脂質の相転移温度以下との 間の温度で充填するのに、ペルフルロブタン使用することができる。この場合、 約４℃から約５℃の温度でリポソームを充填するならば最も好適である。 発泡性先駆物質充填マイクロスフェアは、この種の診療技術、例えば先駆物質 の液体から気体への変換をお越し、生体内で部位選択的薬物送達を媒介する超音 波、マイクロ波放射線、または電磁気エネルギーと連結して使用することができ る。３７℃以上の沸点を持つ発泡性先駆物質を選択することによって、発泡性先 駆物質充填マイクロスフェアは長期の血中半減期をもつまたはその他関心のある 組織に指向する安定なナノ径微滴として組み立てられる。所望の超音波、マイク ロ波、または電磁気エネルギーは、標的組織に焦点が合わされ、発泡性先駆物質 をガス状に変換する。そうすることによって、発泡性ナノ径部滴中のコーティン グと安定化エマルション中に取込まれた医薬および生物活性物質は、マイクロス フェアが生体内で元の粒径の一倍以上に膨脹するとき放出される。適切な発泡性 先駆物質の実例は３８．６℃の沸点を持つ２−メチル−２−ブテンである。さら に、これらの発泡性先駆物質は、疎水性医薬例えば水性基礎配合で溶解が困難な アンスラサイクリン抗生物質を可溶化することにおいて特に優れている。 当業者ならば認識しているように、このマイクロエマルション化法例えば温度 活性化発泡性先駆物質からのガス充填マイクロスフェア安定化法は、多種類の改 良安定化発泡性マイクロスフェア生産物を製造するの に利用することができる。適切な溶媒系および発泡性先駆物質ならびに安定化剤 を選択することによって、通常の生産物以上に改良されたマイクロスフェアを製 造することができる。溶媒系は発泡性先駆物質の懸濁液のためのリガンド媒体を 提供するよう選択することができる。一例として、緩衝食塩水中で相溶性の２０ ％プロピレングリコールは水単独の凍結点より十分低い凍結点への降下を示す。 プロピレングリコール量を増加するかまたは食塩のような物質を添加することに よって、凍結点をさらに陛下させることができる。溶媒系の凍結点降下は、０℃ 以下の温度で液体から気体への相転移を受ける発泡性先駆物質を使用できる点で 重要である。これらの発泡性先駆物質を使用する追加の利点は、これらが空気と 窒素のような非先駆物質ガスより生体内で安定である点である。これら先駆物質 から誘導されるガスは空気と窒素よりも一般的に水性媒体中での拡散性が低く、 かつ溶解性が少ないので、得られるコントラスト剤は伝統的なガスまたは非先駆 物質基材コントラスト剤よりの一般的に安定である。 温度によって活性化される発泡性先駆物質は本発明において有用であり得る。 表１は標準体温（３７℃）に近い温度で液体から気体への相転移を受ける発泡性 先駆物質の実例、および１０ミクロンの粒径を持つマイクロスフェアを形成する のに要するエマルション化微滴の粒径の表にしたものである。この表は規定粒径 の温度活性化発泡性先駆物質含有リポソームを形成するのに使用することができ 潜在的な発泡性先駆物質から構成されている。この表は本発明のための発泡性先 駆物質の可能性に関して、制限するものとして絶対に解釈されてはならない。 発泡性先駆物質の実例は表１に決して制限されるものではない。事実、種々の 用途について、実質的にいずれの液体も、適切な活性化温度を通過するとき気体 状態への相転移を受けることができる限り、発泡性先駆物質とするのに使用する ことができる。使用することができ発泡性先駆物質の実例は次のものを含むが、 決してこれらに制限されない：ヘキサフルオロアセトン、イソプロピルアセチレ ン、アレン、テトラフルオロアレン、ボロントリフルオリド、１，２−ブタジエ ン、１，３−ブタジエン、１，２，３−トリクロロ−２−フルオロ−１，３−ブ タジエン、２−メチル−１，３−ブタジエン、ヘキサフルオロ−１，３−ブタジ エン、ブタジエン、１−フルオロ−ブタン、２−メチル−ブタン、デカフルオロ ブタン、１−ブテン、２−ブテン、２−メチル−１−ブテン、３−メチル−１− ブテン、ペルフルオロ−１−ブテン、ペルフルオロ−２−ブテン、４−フェニル −３−ブテン−２−オン、２−メチル−１−ブテン−３−イン、ブチルニトレー ト、１−ブチン、２−ブチン、２−クロロ−１，１，１，４，４，４−ヘキサフ ルオロ−ブチン、３−メチル−１−ブチン、ペルフルオロ−２−ブチン、２−ブ ロモ−ブチルアルデヒド、カルボニルサルフィド、クロトノニトリル、シクロブ タン、メチル−シクロブタン、オクタフルオロ−シクロブタン、ペルフルオロ− シクロブテン、３−クロロ−シクロペンテン、シクロプロパン、１，２−ジメチ ル−シクロプロパン、１，１−ジメチル−シクロプロパン、１，２−ジメチル− シクロプロパン、エチルシクロプロパン、メチルシクロプロパン、ジアセチレン 、３−エチル−３−メチルジアジリジン、１，１，１−トリフルオロ−ジアゾエ タン、ジメチルアミン、ヘキサフルオロ−ジメチルアミン、ジメチルエチルアミ ン、ビス−（ジメチルホスフ ィン）アミン、２，３−ジメチル−２−ノルボルナン、ペルフルオロ−ジメチル アミン、ジメチルオキソニウムクロリド、１，３−ジオキソラン−２−オン、４ −メチル−１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，１，１−トリフルオロ エタン、１，１，２，２−テトラフルオロエタン、１，１，２−トリクロロ−１ ，２，２−トリフルオロエタン、１，１−ジクロロエタン、１，１−ジクロロ− １，２，２，２−テトラフルオロエタン、１，２−ジフルオロエタン、１−クロ ロ−１，１，２，２，２−ペンタフルオロエタン、２−クロロ−１，１−ジフル オロエタン、１−クロロ−１，１，２，２−テトラフルオロエタン、２−クロロ −１，１−ジフルオロエタン、クロロエタン、クロロペンタフルオロエタン、ジ クロロトリフルオロエタン、フルオロエタン、ヘキサフルオロエタン、ニトロペ ンタフルオロエタン、ニトロソペンタフルオロエタン、ペルフルオロエタン、ペ ルフルオロエチルアミン、エチルビニルエーテル、１，１−ジクロロエチレン、 １，１−ジクロロ−１，２−ジフルオロエチレン、１，２−ジフルオロエチレン 、メタン、メタン−スルフォニルクロリド−トリフルオロ、メタン−スルフォニ ルフルオリド−トリフルオロ、メタン−（ペンタフルオロチオ）トリフルオロ、 メタンブロモジフルオロニトロソ、メタンブロモフルオロ、メタンブロモクロロ −フルオロ、メタン−ブロモ−トリフルオロ、メタン−クロロジフルオロニトロ 、メタンクロロジニトロ、メタンクロロフルオロ、メタン−クロロトリフルオロ 、メタン−クロロ−ジフルオロ、メタン−ジブロモジフルオロ、メタン−ジクロ ロジフルオロ、メタン−ジクロロ−フルオロ、メタンジフルオロ、メタンジフル オロ−ヨード、メタン−ジシラノ、メタン−フルオロ、メタン−ヨード−トリフ ルオロ、メタン−ニトロ−トリフルオロ、 メタン−ニトロソ−トリフルオロ、メタン−テトラフルオロ、メタン−トリクロ ロフルオロ、メタン−トリフルオロ、メタンスルフェニルクロリド−トリフルオ ロ、２−メチルブタン、メチルエーテル、メチルイソプロピルエーテル、メチル ラクタート、メチルニトリット、メチルスルフィド、メチルビニルエーテル、ネ オン、ネオペンタン、窒素、亜酸化窒素、１，２，３−ノナデカントリカルボン 酸−２−ヒドロキシトリメチルエステル、１−ノネン−３−イン、酸素、１，４ −ペンタジエン、ｎ−ペンタン、ペンタン−ペルフルオロ、２−ペンタノン−４ −アミノ−４−メチル、１−ペンテン、２−テンテン｛シス｝、２−ペンテン｛ トランス｝、１−ペンテン−３−ブロモ、１−ペンテン−ペルフルオロ、フタル 酸−テトラクロロ、ピペリジン−２，３，６−トリメチル、プロパン、プロパン １，１，１，２，２，３−ヘキサフルオロ、プロパン−１，２−エポキシ、プロ パン−２，２−ジフルオロ、プロパン−２−アミノ、プロパン−２−クロロ、プ ロパン−ヘプタフルオロ−１−ニトロ、プロパン−ヘプタフルオロ−１−ニトロ ソ、プロパン−ペルフルオロ、プロペン、プロピル−１，１，１，２，３，３− ヘキサフルオロ−２，３−ジクロロ、プロピレン−１−クロロ、プロピレン−ク ロロ−｛トランス｝、プロポピレン−２−クロロ、プロピレン−３−フルオロ、 プロピレン−ペルフルオロ、プロピン、プロピン−３，３，３−トリフルオロ、 スチレン−３−フルオロ、サルファヘキサフルオリド、サルファ（ジ）−デカフ ルオロ（Ｓ２Ｆ１０）、トルエン−２，４−ジアミン、トリフルオロアセトニト リル、トリフルオロメチルペルオキシド、トリフルオロメチルスルフィド、タン グステンヘキサフルオリド、ビニルアセチレン、ビニルエーテル、キセノン、窒 素、空気、および他の周囲ガ ス。 不活性ペルフッ素化ガスは毒性が低いので、ペルフルオロカーボンは本発明の 好適なガスであり、フッ素、ペルフルオロメタン、ペルフルオロエタン、ペルフ ルオロブタン、ペルフルオロペンタン、ペルフルオロヘキサン、さらに好適には ペルフルオロエタン、ペルフルオロペンテタン、ペルフルオロプロパン、および ペルフルオロブタン、最も好適にはペルフルオロペンタン、ペルフルオロプロパ ン、およびペルフルオロブタンである。 上記のガスは空気と窒素のような非先駆物質ガスよりも生体内で安定である。 これらの先駆物質から誘導されたガスは水性媒体中で一般的に空気または窒素よ り拡散性が低くかつ溶解性が少ないで、得られた治療薬送達システムは伝統的な ガスまたは非先駆物質基材コントラスト剤よりも一般的に安定である。 本明細書で使用する「ガス充填は」は少なくとも約１０％ガス、好適には少な くとも約２５％ガス、さらに好適には少なくとも約５０％ガス、一層うさらに好 適には少なくとも約７５％ガス、最も好適には少なくとも約９０％ガスである内 部容量を有するマイクロスフェアを意味する。発泡性先駆物質を使用し、次いで 活性化してガスを生成することができることは、本開示で一旦武装した当業者に よって理解される。 本発明の発泡性先駆物質充填マイクロスフェアには種々の生体適合性のガスを 使用することができる。この種のガスには、水素、窒素、二酸化炭素、酸素、ア ルゴン、フッ素、キセノン、ネオン、ヘリウムまたはこれらの組合せのすべて。 が含まれる。他の適切なガスは本開示で一旦武装した当業者には明らかである。 本発明のマイクロスフェアは好適には不透過性物質からなる。不透過性物質は 、通常の貯蔵条件または放出を誘発する超音波が適用される前の使用中、マイク ロスフェアの内容物の実質的な量の通過を可能にしない物質と定義される。典型 的な貯蔵条件は例えば４８時間４℃で保持された０．９％ＮａＣｌの非ガス抜き 水溶液である。不透過性と関連して使用される実質的は、内容物の約５０％以上 と定義され、内容物とは発泡性先駆物質と治療薬の両方である。好適には発泡性 先駆物質、ガスおよび治療薬の約２５％以下が放出され、さらに好適には発泡性 先駆物質、ガスおよび治療薬の約１０％が貯蔵中に放出され、最も好適には発泡 性先駆物質、ガスおよび治療薬の約１％が放出される。貯蔵温度は好適にはマイ クロスフェアを形成する物質の相転移温度以下でかつ発泡性先駆物質の活性化温 度以下である。 少なくとも一部、発泡性先駆物質充填リポソームのガス不透過性はゲル状態か ら液晶状態への相転移温度を関係していることが分かっている。「ゲル状から液 晶への相転移温度」は、脂質二枚相がゲル状から液晶へ変換する温度を意味する 。例えば、Ｃｈａｐｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９７４ ，２４９，２５１２−２５２１参照。一般的に、ゲル状態から液晶状態への相転 移温度が高い程、リポソームは所与温度で一層ガス不透過性である。飽和ジアシ ル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの主鎖融解転移については、下記の表２ およびＤｅｒｅｋ Ｍａｒｓｈ，ＣＲＣ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ｌｉｐｉｄ Ｂｉｌａｙｅｒ（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ １９９ ０），１３９頁参照。しかし、低いゲル状態から液晶状態への相転移温度をもつ 脂質を含む発泡性先駆物質充填リポソームから治療薬を放 出するには一般的に低い程度のエネルギーを使用することができることをも認め るべきである。使用する脂質のゲル状態から液晶状態への相転移温度が室温より 高い場合、例えば脂質溶液を保持する容器を冷却する冷却機構を提供することに よって、容器の温度を調節することができる。 発泡性先駆物質（ペルフルオロブタン）は空気のような他のガスより溶解性お よび拡散性が低いから、リポソームが液晶状態にある脂質を含む場合でさえ、発 泡性先駆物質はリポソーム中に取込まれるときより安定である。卵ホスファチジ ルコリンのような液晶状態の脂質を含む小リポソームを使用して、ペルフルオロ ブタンのナノ径微滴を取込むことができる。例えば、約３０ｎｍから約５０ｎｍ の直径をもつ脂質媒体を使用して、約２５ｎｍの平均直径を持つペルフルオロブ タンのナノ径微滴を取込むことができる。温度活性化変換の後、発泡性先駆物質 充填リポソームは約１０ミクロンの直径をもつマイクロスフェアを形成する。こ の場合、脂質は小リポソームを介してマイクロスフェアの粒径を規定する目的に 役立つ。また脂質は得られたマイクロスフェアの粒径を安定化するのに役立つ。 この場合、マイクロエマルション化法のような技法が先駆物質を取込む小リポソ ームを形成するのに好適である。マイクロフラッダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉ ｄｉｃｓ，Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡ）は、発泡性先駆物質を取込む小リポソームのエ マルションを形成するのに特に有用である。 種々の脂質のゲル状態から液晶状態への相転移温度は当業者には容易に明らか であり、また例えば、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ ｅｄ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ Ｔ ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．Ｉ，１−１８（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９８４） に記載されている。 ある実施態様ではマイクロスフェアを形成する物質の相転移温度は、それらを 投与する患者の内部体温より高い。例えば、約３７℃より高い相転移温度を有す るマイクロスフェアはヒトへの約３７℃より高い相転移温度を有するマイクロス フェアは投与に好適である。一般的に、約２０℃より高い相転移温度を有するマ イクロスフェアは好適である。 好適な実施態様では、本発明のマイクロスフェアは安定であり、安定性は配合 の時から超音波の適用までの破裂に対する抵抗性と定義される。マイクロスフェ アを構築するのに使用される脂質のような物質は安定性に基づいて選択される。 例えば、ＤＳＰＣ（ジステアロイルホスファチジルコリン）を含む発泡性先駆物 質充填リポソームはＤＰＰＣ（ジパルミトイルホスファチジル−コリン）を含む 発泡性先駆物質充填リポソームより安定であり、順番にこれらは卵ホスファチジ ルコリン（ＥＰＣ）を含む発泡性先駆物質充填リポソームよりさらに安定である 。好適には、５０％以下のマイクロスフェアが配合の時点から超音波の適用まで に破裂し、さらに好適には２５％以下のマイクロスフェアが破裂し、一層好適に は１０％以下のマイクロスフェア、そして最も好適には１％以下のマイクロスフ ェアが破裂する。 さらに、本発明の発泡性先駆物質充填リポソームはポリエチレングリコールの 重合体と共有結合した脂質（通常、ＰＥＧ化脂質と呼ばれる）で安定化すること ができることが分かっている。負電荷の脂質または正味負電荷を有する脂質の少 なくとも少量をリポソーム膜中に取込むことは、必要ではないが、相互の融合に よって破裂する性質を有しないリポソームを提供することに有利であることも分 かってきた。少なくとも少量は、全脂質の約１から約１０モル％を意味する。適 切な負電荷の脂質は当業者には容易に明らかであり、例えば、ホスファチジルセ リンを含む。共鳴振動数超音波の適用時に破裂する能力、エコー発現性、および 安定性について最も好適なものはジパルミトイルホスファチジルコリンから製造 されたリポソームである。 さらに、本発明のマイクロスフェアは血管系中で好適に十分安定であ るので、それらは再循環に耐えることができる。細網内皮系に摂取が最小になる ように発泡性先駆物質充填リポソームをコーティングすることができる。有用な コーティングには、例えば、ガングリオシド、グルクロナート、ガラクツロナー ト、グルロナート、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリ ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、デキストラン、澱粉、リン酸化とス ルホン化モノ、ジ、トリ、オリゴ、およびポリサカッリドが含まれる。免疫系に よる認識を回避する目的のためにマイクロスフェアをコーティングすることもで きる。 好適な実施態様では、マイクロスフェアが指向されている患者の内部部位に到 達して超音波を適用されるまでに、マイクロスフェアの治療薬とガス内容物の少 なくとも約５０％、好適には少なくとも約７５％、さらに好適には少なくとも約 ９０％、最も好適には約１００％がマイクロスフェアと共に残る。 さらに、マイクロスフェアを形成するのに使用される物質は生体適合性でなけ ればならない。生体適合性物質とは、それが投与される量において患者に無毒性 であり、好適には疾病発生的でなく、最も好適には無害なものと定義される。 マイクロスフェアを形成するのに使用される物質は好適には柔軟である。柔軟 性とは、例えばマイクロスフェアより小さい粒径をもつ開口部を通過するために 構造がその形状を変える能力である。柔軟な脂質膜のために、膜は圧力によって 直径と剛性をかえる能力を有する。それ故、身体内部の圧力を測定するために、 反射超音波シグナルを非観血的に使用することができる。 リポソームはガスを取込むのに極めて有用であるので、本発明の好適 な実施態様である。その他、発泡性先駆物質充填リポソームは、その生体適合性 とリポソームが破裂した後に細胞膜を容易に通過する親油性の治療化合物を収容 する能力のために好適である。本発明の開示で一旦武装した当業者ならば、特定 脂質がこの所期の利用に選ばれることを認識すると考えられる。 発泡性先駆物質から製造されたガス充填リポソームは、大きな一枚膜媒体また は乾燥脂質に対して水和多重膜脂質懸濁液から製造された場合、その収量は増加 する。脂質懸濁液から製造されたガス充填マイクロスフェアは最終生産物におい て非水和脂質の量が減少する。非水和脂質は不均一な粒径の非晶質塊として出現 し、好ましくないものである。多重膜脂質懸濁液は、発泡性先駆物質充填マイク ロスフェアの生産に全く悪影響なしに最終滅菌工程としてオートクレーブするこ とができる。オートクレーブは脂質粒子の粒径を変えず、脂質懸濁液が発泡性先 駆物質またはガスを取込む能力も減少しない。無菌バイアルまたはシリンジを脂 質懸濁液で充填し、次いでインサイチュでオートクレーブによって滅菌すること ができる。ガスは、無菌容器中でインサイチュでオートクレーブされた後の脂質 懸濁液中に、使用直前の例えば渦巻撹拌による手動撹拌、加圧、または振盪器の ような他の機械的撹拌を介して、徐々に添加される。 マイクロスフェアの循環半減期が十分長いものであれば、マイクロスフェアは 身体中を通過する時、一般的に標的組織を通過する。破裂を誘発する超音波を治 療する選択された組織上に焦点を合わせることによって、治療薬は標的組織中に 局所的に放出される。標的指向への助力として、抗生物質、抗体、炭水化物、ペ プチド、グリコペプチド、グリコリ ピド、レシチン、グリコ複合体、およびポリエチレングリコール、ポリビニルピ ロリドン、ポリビニルアルコールのような（しかし限定されない）合成重合体と 天然重合体はアルキル化とアシル化を介して表面に取込まれ、ジレオイルホスフ ァチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノ ールアミン（ＤＰＰＥ）、またはジステオイルホスファチジルエタノールアミン （ＤＳＰＥ）のようなホスファリピドのステロール類および頭部誘導体もマイク ロスフェアの表面中に組み込まれ得る。 マイクロスフェアを作成する、従ってリポソームを形成するのに脂質物質を使 用する場合、マイクロスフェアの構築において多種類の脂質を使用することがで きる。リポソームの製造において使用される物質には、当業者がリポソーム製造 に適切であると知っている物質またはその組合せのいずれもが含まれる。使用さ れる脂質は天然または合成起源のいずれかである。所望の特性例えば、血清中最 高安定性について短い血漿中半減期対長い血漿中半減期を最高に利用するために 、特定の脂質が選択される。 発泡性先駆物質充填リポソーム中の脂質は単独の二枚層の形態または多重膜二 枚層の形態にあり、好適には多重膜である。 リポソームを作成するのに使用できる脂質には、これらに限定されないが、リ ピド、例えば脂肪酸；リゾリピド；飽和および不飽和リピドを含めたホスファチ ジルコリン；ジレオイルホスファチジルコリン；ジミリストイルホスファチジル コリン；ジペンタデカノイルホスファチジル−コリン；ジラウロイルホスファチ ジルコリン；ジオレオイルホスファチジル−コリン；ジパルミトイルホスファチ ジルコリン；ジステアロイ ルホスファチジルコリン；ジオレオイルホスファチジルエタノールアミンのよう なホスファチジルエタノールアミン；ホスファチジルセリン；ホスファチジルグ リセロール；ホスファチジルイノシトール；スフィンゴミエリンのようなスフィ ンゴリピド；ガングリオシドＧＭ１とガングリオシドＧＭ２のようなグリコリピ ド；グルコリピド；スルファチド；グリコスフィンゴリピド；ホスファチジン酸 ；パルミチン酸；ステアリン酸；アラキドン酸；オレイン酸；ポリエチレングリ コール、キチン、ヒアルロン酸もしくはポリビニルピロリドンのような重合体を もつ脂質；スルホン化モノ、ジ、オリゴもしくはポリサッカリドをもつ脂質；コ レステロール；コレステロールサルフェート；コレステロールヘミスクシナート ；トコフェロールヘミスクシナート、エーテル結合とエステル結合した脂肪酸を もつ脂質、重合化脂質、ジアセチルホスフェート、ステアリルアミン、カルジオ リピン、炭素６−８個長の短鎖脂肪酸をもつホスフォリピド、不斉アシル鎖をも つ合成ホスホリピド（例えば、炭素６個の一つのアシル基と炭素１２個のもう一 つのアシル基をもつ）、６−（５−コレステン−３β−イロキシ）−１−チオ− βーＤ−ガラクトピラノシド、ジガラクトシルジグリセリド、６−（５−コレス テン−３β−イロキシ）ヘキシル−６−アミノ−６−デオキシ−１−チオ−βー Ｄ−ガラクトピラノシド、６−（５−コレステン−３β−イロキシ）ヘキシル− ６−アミノ−６−デオキシ−１−チオ−αーＤ−マンノピラノシド、１２−（（ （７′−ジエチルアミノコウマリン３−イル）カルボニル）メチルアミノ）−オ クタデカン酸；Ｎ−［１２−（（（７′−ジエチルアミノコウマリン−３−イル ）カルボニル）メチル−アミノ）オクタデカノイル］−２−アミノパルミチン酸 ；コレステリル（４′−ト リメチル−アンモニオ）ブタンノアート；ｎ−スクシニルジオレオイルホスファ チジルエタノール−アミン；１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロール；１， ２−ジパルミトイル−ｓｎ−３−スクシニルグリセロール；１，３−ジパルミト イル−２−スクシニルグリセロール；１−ヘキサデシル−２−パルミトイルグリ セロホスホエタノールアミン；パルミトイルホモシステイン；および／またはそ れらの組合せが含まれる。リポソームは一枚層または二枚層として形成され、コ ーティングを有するまたは有しないものがある。 ＰＥＧ２，０００ＭＷ、ＰＥＧ５，０００ＭＷおよびＰＥＧ８，０００ＭＷ（ に限定されないが）を含むポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような親水性重 合対をもつ脂質は、発泡性先駆物質含有リポソームの安定性と粒径分布を改良す るのに特に有用である。（ＤＰＰＥ）の種々異なったモル比率のＰＥＧ化リピド 、ＰＥＧ５，０００ＭＷをもつジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン も有用であり、８モル％ＤＰＰＥが好適である。発泡性先駆物質を取込むのに極 めて有用である好適な生産物は８３モル％ＤＰＰＣ、８モル％ＤＰＰＥ−ＰＥＧ ５，０００ＭＷおよび５モル％ジパルミトイルホスファチジン酸を含有する。 さらに、混合系を製造するのに使用される化合物の実例は、これらに決して限 定されないが、ラウリルトリメチルアンモニウムブロミド（ドデシル−）、セチ ルトリメチルアンモニウムブロミド（ヘキサデシル−）、ミリスチルトリメチル アンモニウムブロミド（テトラデシルー）、アルキルジメチルベンジルアンモニ ウムクロリド（アルキル＝Ｃ１２，Ｃ１４，Ｃ１６）、ベンジルジメチルドデシ ルアンモニウムブロミド／クロリド、ベンジルジメチルヘキサデシルアンモニウ ムブロミド／クロリ ド、ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウムブロミド／クロリド、セチルジ メチルエチルアンモニウムブロミド／クロリド、またはセチルピリジニウムボロ ミド／クロリドを含む。同様にペンタフルオロオクタデシルヨージド、ペルフル オロオクチルブロミド（ＰＦＯＢ）、ペルフルオロデカリン、ペルフルオロドデ カリン、ペルフルオロオクチルヨージド、ペルフルオロトリプロピルアミン、お よびペルフルオロトリブチルアミンのようなペルフルロカーボン。ペルフルロカ ーボンはリポソーム中に取込まれ、またはエマルション中で安定化され、このこ とはＵＳ４，８６５，８３６に記載され当業界では公知である。上記の実例の脂 質懸濁液もオートクレーブによって懸濁液の粒径に著しい変化なしで滅菌され得 る。本発明の好適な生産物は、標準食塩水：グリセロール：プロピレングリコー ルの比率が８：１：１または９：１：１の混合溶媒系として脂質を組込んでいる 。 所望に応じて、アニオン性またはカチオン性脂質のいづれかを使用してアニオ ン性またはカチオン性治療薬を結合することができる。カチオン性脂質を使用し てＤＮＡとＲＮＡ類似物を発泡性先駆物質充填マイクロスフェアの表面上に結合 することができる。ＤＯＴＭＡ、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイル）プロピル 」−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド；ＤＯＴＡＰ、１，２−ジオ レオイロキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン；およびＤＯＴＢ、１， ２−ジオレオイロキシ−３−（４′−トリメチル−アンモニオ）ブチタノイル− ｓｎ−グリセロールのような多種類の脂質を使用することができる。一般的に、 リポソーム中のカチオン性脂質の非カチオン性脂質に対するモル比率は例えば１ ：１０００、１：１００、好適には２：１と１：１０も間、さ らに好適には１：１と１：２．５の範囲、最も好適には１：１（カチオン性脂質 のモル量の非カチオン性脂質に対する比率、例えばＤＰＰＣ）である。マイクロ スフェアを構築するのにカチオン性脂質を使用する場合、多種類の非カチオン性 脂質を含む。好適には、この非カチオン性脂質はジパルミトイルホスファチジル コリン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、またはジオレオイル ホスファチジルエタノールアミンである。上記の脂質の代わりに、ポリリジンま たはポリアルギニンのようなカチオン性重合体を持つ脂質を使用してマイクロス フェアを構築することができ、遺伝子物質のような負電荷の治療薬がマイクロス フェアの外側に結合することを可能にする。実例として、アニオン性の脂質は、 決してこれらに限定するものではないが、ドデシル硫酸ナトリウム、ステアリン 酸、パルミチン酸ホスファチジン酸およびコレステロール硫酸からなる。 当業者には明らかであり、本発明の精神と共に保持されている他の有用な脂質 またはその組合せは本発明の範囲内にある。例えば、炭水化物を持つ脂質は、Ｕ Ｓ４，３１０，５０５に記載のように生体内で標的指向のために使用され、その 全開示内容は参考として本明細書に取込まれている。 最も好適な脂質はホスホリピド、好適にはＤＰＰＣとＤＳＰＣ、最も好適には ＤＰＰＣである。 発泡性先駆物質充填マイクロスフェアを生産するのに使用される飽和および不 飽和脂肪酸は好適には、これらに限定されないが、炭素原子１２個と炭素原子２ ２個を間を直鎖または枝分れ形態で有する分子を含む。イソプレノイド単位およ び／またはプレニル基からなる炭化水素類を使 用することができる。使用できる飽和脂肪酸の実例は、これらに限定されないが 、ラウリン酸、ミリスチン酸、およびステアリン酸を含む。使用できる不飽和脂 肪酸の実例は、これらに限定されないが、ラウロレイン酸、フィセテリン酸、ミ リストレイン酸、パルミトレイン酸、ペトロセリニン酸およびオレイン酸を含む 。使用できる枝分れ脂肪酸の実例は、これらに限定されないが、イソラウリン酸 、イソミリスチン酸、イソパルミチン酸、イソステアリン酸、イソプレノイド、 およびプレニル類を含む。 一般的に、発泡性先駆物質で治療薬含有送達システムを調合する場合、一また はそれ以上の乳化剤または安定剤が含まれる。これら乳化剤／安定剤の目的は二 つである。第一に、これらの薬剤は発泡性先駆物質充填マイクロスフェアの粒径 を維持するのを助ける。上記のように、これらマイクロスフェアの粒径は一般的 に得られたガス充填マイクロスフェアの粒径に影響を与える。第二に、乳化剤お よび安定剤を使用して先駆物質から生産されたマイクロスフェアをコーティング または安定化することができる。コントラスト剤含有マイクロスフェアの安定化 は生体内対比効果を最大にするために望ましい。マイクロスフェアの安定化は好 適でありが、これは絶対的な必要条件ではない。発泡性先駆物質から生産される ガス充填マイクロスフェアは空気より安定であるから、有用な対比増強を提供す るようにデザインされ、例えば一つ以上のコーティング剤または乳化剤によって 特別に安定化されなかった場合でも、末梢静脈注射の後に肺動脈循環を通過する 。一つ以上のコーティング剤または乳化剤は柔軟性のある安定化物質であるとき 、好適である。アルブミンと他のタンパク質で安定化されたガスマイクロスフェ アは効果が少ない。 この安定化コーティングは圧力変化例えば心臓と動脈を通過するとき脆く容易に 壊れるからである。脂肪族化合物物で安定化されたマイクロスフェアが圧力の変 化に対してさらに柔軟で安定であるから、脂肪族化合物を使用して生産されたリ ポソームはマイクロスフェアとして好適である。 脂質または発泡性先駆物質充填リポソームの溶液は、例えば、これらに限定さ れないが、炭水化物およびそのリン酸化とスルホン化誘導体；ポリエーテル、好 適には４００と８０００の範囲の分子量をもったもの；ジ−とトリヒドロキシア ルカンとその重合体、好適には４００と８０００の範囲の分子量をもったもの； を含む多種類の粘性の改質剤の添加によって安定化される得る。グリセローリプ ロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、および ポリビニルアルコールも本発明の安定化剤として有用である。ハイドロアパタイ ト、金属酸化物およびゲルたとえばヒアルロン酸とカルシウムとの共沈殿物のよ うな多孔性または半固体である粒子は先駆物質を安定化する中心部または核を作 成するのに使用され得る。勿論、石灰岩、ゼオライトおよび他の粒子のような固 体粒子は一般的に血管内への注射には不適切であると考えられが、発泡性先駆物 質の取込みのための核を形成するため、また効果的な胃腸用対比剤例えばＭＲＩ またはコンピュータ化断層Ｘ線撮影法用としてに全く有用であり得る。 乳化剤および／または溶解剤もまた脂質またはリポソームと連結して使用され 得る。この種の薬剤には、これらに限定されないが、アカシア、コレステロール 、ジエタノールアミン、グリセリールモノステアレート、ラノリンアルコール、 レシチン、モノ−とジーグリセリド、モノーエタ ノールアミン、オレイン酸、アレイルアッルコール、ポロキサマー、落花生油、 パルミチン酸、ポリオキシエチレン５０ステアレート、ポリオキシ３５カスター 油、ポリオキシ１０オレイルエーテル、ポリオキシ２０セトステアリルエーテル 、ポリオキシ４０ステアレート、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポ リソルベート６０、ポリソルベート８０、プロピレングリコールジアセテート、 プロピレングリコールモノステアレート、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン 酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノオレアート、ソルビ タンモノパルミレート、ステアリン酸、トロルアミン、および乳化ワクッスが含 まれる。植物または動物起源の脂質中に在る飽和または不飽和炭化水素脂肪酸の 代わりの成分としてペルフルオロ脂肪酸を持つすべての脂質を使用することがで きる。脂質またはリポソーム溶液と共に使用できる懸濁液および／または増粘剤 には、これらに限定されないが、アカシア、寒天、アルギン酸、アルミニウムモ ノステアレート、ベントナイト、マグマ、カルボマー９３４Ｐ、カルボキシメチ ルセルロース、アルシウムとナトリウムおよびナトリウム１２、カラゲナン、セ ルロース、デキストリン、ゲラチン、グアーガム、ヒドロキシエチルセルロース 、ヒドキロキシプロピルメチルセルロース、マグネシウムアルミニウムシリケー ト、エチウセルロース、ペクチン、ポリエチレンオキシド、ポリビニルアルコー ル、ポビｄｐン、プロピレングリコールアルギネート、二酸化ケイ素、アルギン 酸ナトリウム、トラガカンス、およびキサンタムガムが含まれる。いづれの各種 治療薬もマイクロスフェア中に封入することができる。 本明細書で使用する治療薬とは、患者に有利な効果を有する薬物を意 味する。本明細書で使用されるように、用語治療薬はコントラスト剤および薬物 と同意語である。 ある先駆物質のナノ径微滴およびエマルションは虚血性および疾病組織中に蓄 積する点で特に有効であると考えらえる。この種の先駆物質は超音波による虚血 性および疾病組織の検出およびこれらの組織への薬物の送達のために使用され得 る。発泡性先駆物質を含むエマルションまたはナノ径微滴中に薬物を共取込みす ることによって、前記薬物を疾病組織へ送達することができる。例えば、サルフ ァヘキサフルオリド、ヘキサフルオロプロピレン、ボロモクロロプルオロメタン 、オクタフルオロプロパン、１，１−ジクロロ、フルオロエタン、ヘキサフルオ ロフエタン、ヘキサフルオロ−２−ブチン、ペルフルオロペンタン、ペルフルオ ロブタン、オクタフルオロ−２−ブテンもしくはヘキサフルオロブタ−１，３− ジエンまたはオクタフルオロペンテンのエマルションは、強心配糖体、血管形成 因子および血管作用性化合物を心筋の虚血部位へ送達するのに使用し得る。同様 に、上記の先駆物質のエマルションもアンチセンスＤＮＡまたは化学治療薬を腫 瘍に送達するのに使用し得る。温度、ｐＨおよび酸素圧の微小な変化は、虚血性 および疾病組織中にある種の先駆物質が優先的に蓄積する原因であることが考え られる。これらに先駆物質は送達媒体として、または薬物送達のための超音波中 で使用され得る。 適切な治療薬には、限定されるものではないが、大気の空気のような、痕跡の 酸素１７もしくはＭｎ⁺²、Ｇｄ⁺²、Ｆｅ⁺³のような常磁気イオンおよび磁気共鳴 画像法（ＭＲＩ）に感受性対比剤として利用される超常磁気粒子（フェライト、 酸化鉄Ｆｅ₃Ｏ₄、）を含有する常磁気ガス、Ｘ線コントラスト剤として利用され るヨード、バリウム、臭素およびタングステンのような放射線不透明化剤金属イ オン、磁気共鳴コントラスト剤として利用される可能性をもっている四極子核か らのガス、白金化合物（例えば、スピロプラチン、シスプラチンおよびカルボプ ラチン）、メトトレキセート、フルオロウラシル、アドリアマイシン、マイトマ イシン、アンサニトシン、ブレオマイシン、シトシンアラビノシド、アラビノシ ルアデニン、メルカプトポリリジン、ビンクリスチン、ブスルファン、クロラン ブシル、メルファラン（例えば、ＰＡＭ）Ｌ−ＰＡＭまたはフェニルアラニンマ スタード）、メルカプトプリン、ミトタン、プロカルバジン、ヒドロクロリドダ クチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシンヒドロクロリド、ドキ ソルビシンヒドロクロリド、トキソール、マイトマイシン、プリカマイシン（ミ トラマイシン）、アミノグルテトイミド、エスｔｌアムスチンホスフェートソジ ウム、フルタミド、ロイプロリドアセテート、メゲステロール、アセテート、タ モキシフェンシトレート、テストラクトン、トリロスタン、アンサクリン（ｍ− ＡＭＳＡ）、アスパラギナーゼ（Ｌ−アスパラギナーゼ）、Ｅｒｗｉｎａアスパ ラギナーゼ、エトポシド（ＶＰ−１６）、インターフェロンα−２ａ、インター フェロンα−２ｂ、テニポシド（ＶＭ−２６）、ビンブラシチンサルフェート（ ＶＬＢ）、ビンクリスチンサルフェート、ブレオマイシン、ブレオマイシンサル フェート、メトトレキセート、ア ドリアマイシン、アラビノシル、ヒドロキシウレア、プロカルバジン、およびダ カルバジンのような抗腫瘍薬；エトポシドとビンカアリカロイドのような有糸分 裂阻害剤、放射性ヨードおよびリン生産物のような放射性医薬品；プロゲスチン 、エｓトロゲンおよびアンチエストロゲンのようなホリモン；抗寄生虫剤、抗マ ラリア薬、および抗結核薬；免疫血清のような生物学的製剤、抗毒素および抗蛇 毒素；狂犬病予防製品；細菌ワクチン；ウイルスワクチン；強心配糖体；キサン チン誘導体セオフィリンアミノフィリンのような呼吸系製剤；ヨード製剤および 抗甲状腺製剤のような甲状腺製剤；キレート剤と水銀利尿剤および強心配糖体を 含む心筋製剤；グルカコン；非経口鉄剤、ヘミン、ヘマトポーフィリンとその誘 導体のような血液製剤；ムラミルジペポチド、ムラミルトリペプチド、細菌細胞 壁成分、リンホカインのような生物学的反応改質製剤（リポ多糖類、マクロファ ージ活性化因子のような細菌内毒素）；細菌のサブユニット（ミコバクテリア、 コリネリアバクテリアのような）；合成ジペプチド Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ −アラニル−Ｄ−イソグルタミン；ケトコンゾール、ナイスタチン、グリセオフ ルビン、フルシトシン（５−ｆｃ）、ミコナゾール、アンフォテリシンＢ、リシ ン、サイクロスポリン、およびβ−ラクタム抗生物質（スルファザシン）；成長 ホルモン、メラニン細胞刺激ホルモン、エストラジオール、ベクロメタソンジプ ロピオネート、ベータメタソン、ベータメタソンアセテートおよびベータメタソ ンナトリウムホスフェート、ベタメタソンジナトリウムホスフェート、ベタメタ ソンナトリウムホスフェート、コルチゾンアセテート、デキサメサゾン、デキサ メサゾンアセテート、デキサメサゾンナトリウムホスフェート、フルニソリド、 ヒドロコルチゾン、ヒドロ コルチゾンアセテート、ヒドロコルチゾンシピオネート、ヒドロコルチゾンナト リウムホスフェート、ヒドロコルチゾンナトリウムスクシネート、メチルプレド ニソロン、メチルプレドニソロンアセテート、メチルプレドニソロンナトリウム スクシネート、パラメサソンアセテート、プレドニソロン、プレドニソロンアセ テート、プレドニソロンナトリウムホスフェート、プレドニソロンテブテート、 プレドニソロン、トリアンシノロン、トリアンシノロンアセトニド、トリアンシ ノロンジアセテート、トリアンシノロンヘキサアセトニド、フルドロコルチゾン アセテート、オキシトシン、バソプレシン、およびその誘導体；シアナコバルア ミンネイノン酸、レチノイドおよびレチノールパルミテートのようなその誘導体 およびαトコフェロールのようなビタミン；マンガンスーパオキシドジムターゼ のようなペプチド；アルカリホスファターゼのような酵素；アメレキサノクスの ような抗アレルギー薬；フェノプロカオモンおよびヘパリンのような抗凝血薬； プロプラノロールのような循環系薬；グルタチオンのような代謝増強薬；パラア ミノサリチル酸、イソナイアジン、カプレオマイシンスルフェートサイクロセリ ン、エタンブトールヒドロクロリドエチオナミド、ピラジンアミド、リファンピ ンおよびストレプトマイシンスルフェート；アシクロビア、アマンタジン、アジ ドチミジン（ＡＺＴ、ＤＤＩ、フォスカルネットまたはジドブジン）、リバビリ ン、ビダラビン一水和物（アデニンアラビノシド、ａｒａ−Ａ）のような抗ウイ ルス薬；ジルチアゼン、ニフェジピン、ベラパミル、エリスリトールテトラニト レート、イソソルビドジニトレート、ニトログリセリン（グルセリルトリニトレ ート）およびペンタエリスリトールテトラニトレートのような抗狭心薬；フェン プロコモン、ヘパリンのよう な抗凝固薬；ダアプソン、クロランフェニコール、ネオマイシン、セファクロア 、セファドロキシル、セファレキシン、セファラジン、エリスロマイシン、クリ ンダマイシン、リンコマイシン、アモキシシリン、アンオイシリン、バカピシリ ン、カルベニシリン、ジクロキサシリン、サイルラシリン、ピクロキサシリン、 ヘタシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧとペニシリ ンＶを含むペニシリン、チカルシリン、リファミピン、およびテトラサイクリン のような抗生物質；ジフルニサール、イウプロフェン、インドメスシン、メクロ フェナメート、メフェナミン酸、ナプロキセン、オキシフェンブタゾン、ピロキ シカン、スリンダック、トルメチン、アスピリンおよびサリチレートのような抗 炎症剤；クロロ金、非泥沖視クローニング路金、メトロニサゾール、キニンとメ グルミンアンチモネート、のような抗原虫薬；ペニシラミンのような抗リウマチ 薬；アヘン安息香チンキのような麻酔薬；コデイン、ヘロイン、メタドン、モル フィンおよびアヘンのようなアヘン製剤；デスラノシド、ジギトキシン、ジゴキ シン、ジギタリンおよびジギタリスのような強心配糖体；アトラキュリウムメシ レート、アラミントレエチオジド、ヘキサフルオレニウムブロミド、メトキュリ ンヨジド、パンキュロニウムブロミド、スクシニルコリンクロリド（スクサメト ニウムクロリド）、ツボキュラリンクロリドおよびベキュロニウムブロミドのよ うな神経筋遮断薬；アモバルビｔール、アモバルビｙールナトリウム、アプロバ ルビトール、ブタバルビトールナトリウム、クロラールヒドレート、エトクロル ビノール、エチナメ±ト、フルアｌｚエパンヒドロクロリド、グルテトイミド、 メトトリメプラジンヒドロクロリド、メチルリロン、ミダゾランヒドロクロリド 、アラアルデヒド、ペントバ ルビタール、ペントバルビタールナトリウム、フェノバルビタールナトリウム、 セコバルビタールントリウム、タルブタール、テマゼパンおよびトリアゾランよ うな鎮静薬（催眠薬）；ブピバカインヒドロクロリド、クロロプロカインヒドロ クロリド、エチドカインヒドロクロリド、リドカインヒドロクロリド、メピバカ インヒドロクロリド、プロカインヒドロクロリドおよびテトラカインヒドロクロ リドのような局所麻酔薬；ドペリドール、エトミデート、ドロペリドールをもつ フェンタニルシトレート、ケタミンヒドロクロリド、メトヘキシタールナトリウ ム、およびチオペンタールントリウムのような全身麻酔薬；ストロンチウム、レ ニウムヨージドおよびイトリウムのような放射性粒子が含まれる。ある好適な実 施態様では、治療薬は単クローン抗体、例えばメラノーマ抗原に結合できる単ク ローン抗体である。 他の好適な治療薬には、組換えＲＮＡとＤＮＡおよびアンチセンスＲＮＡとＤ ＮＡを含む核酸、ＲＮＡおよびＤＮＡのような遺伝子物質が含まれる。使用し得 る各種の遺伝子物質には、例えばプラスミド、ファージミド、コスミド酵母人工 染色体（ＴＡＣｓ）、欠損もしくは「ヘルパー」ウイルス、抗原核酸、ホスホロ チオアートとホスホロジチオアトオリゴデオキシヌクレオチドのような一本鎖も しくは二本鎖ＲＮＡとＤＮＡの両方およびその類似体が含まれる。その他、遺伝 子物質は例えばタンパク質または他の重合体と化合することができる。 本発明のマイクロスフェアを使用して投与できる遺伝子治療薬の実例には、Ｈ ＬＡ遺伝子の少なくとも一部をコードするＤＮＡ、ジストロフィンの少なくとも 一部をコードするＤＮＡ、ＣＦＴＲの少なくとも一部をコードするＤＮＡ、ＩＬ −２の少なくとも一部をコードするＤＮＡ、 ＴＮＦの少なくとも一部をコードするＤＮＡ、Ｒａｓの少なくとも一部をコード するＤＮＡを結合できるアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。 あるタンパク質をコードするＤＮＡは多くの異なった種類の疾病を治療するの に使用することができる。例えば、アデノシンデアミナーゼはＡＤＡ欠失を治療 するのに提供され；腫瘍壊死因子および／またはインターロイキン−２は進行性 癌を治療するのに提供され；ＨＤＬは受容体は肝臓病を治療するのに提供され ；チミジンキナーゼは卵巣癌、脳腫瘍またはＨＩＶ感染を治療するのに提供され ；ＨＬＡ−Ｂ７は悪性メラノーマを治療するのに提供され；インターロイキン− ２は神経芽細胞腫、悪性メラノーマまたは腎臓癌を治療するのに提供され；イン ターロイキン−４は癌を治療するのに提供され；ＨＩＶはＨＩＶ感染を治療する のに提供され；アンチセンスｒａｓ／ｐ５３は肺癌を治療するのに提供され；フ ァクターＶＩＩＩは血友病Ｂを治療するのに提供され得る。例えば、Ｓｃｉｅｎ ｃｅ，２５８，７４４−７４６，１９９２参照。 所望に応じて、一以上の治療薬がマイクロスフェアを使用して投与し得る。例 えば、単一のマイクロスフェアは一つ以上の治療薬を含有し得て、または種々の 治療薬を含有するマイクロスフェア類は共投与することができる。実例二よれば 、メラノーマ抗原に結合できる単クローン抗体およびＩＬ−２の少なくとも一部 をコードするオリゴヌクレオチドは同時に投与することができる。本明細書で使 用される成句「の少なくとも一部」は、示される遺伝子の部分が遺伝子発現への 有効なブロックを提供する限り、全遺伝子がオリゴヌクレオチドによって表わさ れる必要 がないことを意味する。 同様に、プロドラッグはマイクロスフェア中に封入されることができ、本明細 書で使用されている用語治療薬の範囲内に含まれる。プロドラッグは当業界では 公知であり、酸素もしくはその他の存在で高温、代謝酵素、空洞化ンおよび／ま たは圧力に露呈された時、またはマイクロスフェアから放出された時、活性薬物 を生成する不活性な薬物先駆体を含む。この種のプロドラッグは、超音波がプロ ドラッグ含有マイクロスフェアに適用された時、空洞化、加熱、圧力および／ま たはマイクロスフェアからの放出を伴う本発明の方法で活性化することができる 。適切なプロドラッグは当業者には明らかであり、例えばＳｈｉｎｋｕｌａ ｄ ｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１９７５ ６４，１８１−２１０に記載 され、この開示内容は本明細書に参考として取込まれている。 プロドラッグは例えば活性な薬物の不活性形態を含み、その中で化学基がプロ ドラッグ中に存在し、その化学基が薬物を不活性しおよび／または薬物に溶解性 もしくは他の性質を与える。この形態でプロドラッグは一般的に不活性であるが 、化学基が周囲環境とその他中で空洞化、圧力および／または酵素によってプロ ドラッグから切断されると、活性薬物が生成される。この種のプロドラッグは当 業界で記載され、短、中間、または長鎖脂肪族カーボネート、有機ホスフェート へのミエステル、ピロホスフェート、サルフェート、アミド、アミノ酸、アゾボ ンド、カルバメート、ホスファミド、グルコシドロネート、Ｎ−アセチルグルコ サミンおよびβ−グルコシドへのエステルのような結合によって化学基に結合さ れた多種類の薬物を含む。 親分子および可逆改変もしくは結合を持つ薬物の実例は次の通りであ る。ケタールをもつコンバラトキシン、アルキルエステルをもつヒダントイン、 グリシンまたはアラニンエステルをもつクロルフェネシン、カフェイン複合体を もつアセトアミノフェン、ＴＨＡＭ塩をもつアセチルサリチル酸、アセトアミノ フェニルエステルをもつアセチルサリチル酸、ナロキソン、サルファートエステ ルをもつアセチルサリチル酸、メチルエステルをもつ１５−メチルプロスタグラ ンヂンＦ₂₀、ポリエチレングリコールをもつプロカイン、アルキルエステルをも つエリスロマイシン、アルキルエステルまたはホスフェートエステルをもつクリ ンダマイシン、ベタイン塩をもつテトラサイクリン、環置換アシルオキシベンジ ルエステルをもつ７−アシルアミノセファロスポリンを含むセファロスポリン、 フェニルプロリオネートデカノアートエステルをもつナンドロロン、エノールエ ーテルアセタールをもつアストラジオール、アセテートエステルをもつメチルプ レドニソロン、ｎ−アセチルグリコサミニドグルコシドロネート（トリメチルシ リル）エーテルをもつテストステロン、２１−ホスファートエステルをもつコル チゾールもしくはプレドニソロンもしくはデキサメサゾン。 プロドラッグは可逆薬物誘導体としてデザインされ、部位特異的組織への薬物 移送を増強する改質剤として利用され得る。可逆性改変または部位特異的組織は の移送に影響する結合を持ち、かつ治療薬効果を増強するための親分子の実例に は、ハロアルキルニトロソウレアをもつイソシアネート、プロピオネートエステ ルをもつテストオステロン、ジアルキルエスエルをもつメトトリキセート（３− ５′−ジクロロメトトリキセート）、５′−アシレートをもつシトシンアラビノ シド、ナイトロゲンマスタアード（２，２′−ジクロロ−Ｎ−メチルジエチルア ミン）、 アミノメチルテトラサイクリンをもつナイトロゲンマスタード、コレステロール もしくはスタラジオールもしくはデヒドロエピアンドロステロンをもつナイトロ ゲンマスタード、アゾウベンゼンをもつナイトロゲンマスタードが含まれる。 当業者ならば認識しているように、所与の治療薬を改変する特定の化学基は、 マイクロスフェアの膜または内部空間中の治療薬の区画に影響するように選択さ れる。治療薬に化学基を結合するするのに選択される結合は、代謝、例えば発泡 性先駆物質充填マイクロスフェアからの放出後、血清エステラーゼの存在中での エステル結合の場合の加水分解の所望の速度を有するように選択さ得る。その他 、発泡性先駆物質充填薬物保持マイクロスフェア中に使用される治療薬、例えば 卵巣アデノカルチノーマのための環状ホスホルアミドをもつＮ，Ｎ−ビス（２− クロロエチル）−ホスホロジアミジン酸の生態適合性に影響するように選択され 得る。 その他、発泡性先駆物質充填マイクロスフェア中で使用されるプロドラッグは 、長期の作用効果を提供する活性の持続時間の改質剤として使用される可逆性誘 導体を含有するようにデザインされ得る。例えば、ニコチンはデキストランとカ ルボキシルメチルデキストランで改質され、アウトレプトマイシンはアリギン酸 塩で、ジヒドロストレプトマイシンはパモアート塩で、シタラビン（ａｒａ−Ｃ ）は５′−アダマントアートエステル、ａｒａ−アデノシン（ａｒａ−Ａ）は５ −パルミテートと５′−ベンゾアートエステル、アンホテリシンＢはメチルエス テル、テストステロンは１７−β−アルキルエステル、エストラジオールはフォ ルメートエステル、ピロストグランジンは２−（４−イミサゾイル）エ チリャミン塩、ドパミンはアミノ酸アミド、クロランフェニコールはモノ−およ びビス（トリメチルシリル）エーテル、およびシクログアニルはパモアート塩で 改質される。この形態では、長期作用性薬物の貯蔵所が発泡性先駆物質充填プロ ドラッグ保持マイクロスフェアから生体内で放出され得る。 さらに、一般的に熱に不安定な化合物は使用すると毒性の遊離化合物を生産す る。高温で分解するアゾ結合、ペルオキシドおよびジスルフィド結合をもつ化合 物は好適である。この形態のプロドラッグでは、アゾ、ペルオキシドまたはジス ルフィド結合を含有する化合物は、高エネルギー超音波と発泡性先駆物質充填マ イクロスフェアとの相互反応によって起こる空洞化および／または高温によって 活性化され、これらのプロドラッグから遊離ラジカルのカスケードが生成する。 多種類の薬物または化合物は、構造式がＲ−Ｎ＝Ｎ−Ｒ（式中、Ｒは炭化水素鎖 である）であり、その中で二つの窒素原子間の二重結合は反応して遊離ラジカル 生産物を生体内で生成するようなプロドラッグを構成する。 遊離ラジカルを生成するのに使用される模範的な薬物または化合物には、アゾ ベンゼン、２，２−アゾビスシソブチロニトリル、アゾジカルボンアミド、アゾ リトミン、アゾマイシン、アゾセミド、アゾスクフアミド、アゾオキシベンゼン 、アゾトレオナン、スダンＩＩＩ、スルファクリソイジン、スルフアミドクリソ イジンとスルファサラジン、スルベンチン、サイアミンジスルフィド、チオルチ ン、チラン、のようなジスルフィドを含有する化合物、過酸化水素とベンゾイル ペルオキシドのような過酸化物を含有する化合物、２，２−アゾビスイソブチロ ニトリル、２，２−アゾビス（２−アミドプロパン）ジヒドロクロリドおよび２ ， ２−アゾビス（２，４−ジメチルブァレロニトリル）ジヒドロクロリドが含まれ る。 酸素で充填された発泡性先駆物質マイクロスフェアはキャビテーションで広範 な遊離ラジカルを生成するべきである。また、遷移系の金属イオン、特にマンガ ン、鉄、および銅は酸素から反応性酸素中間体の生成速度を増加することができ る。マイクロスフェア中に金属を封入することによって、生体内での遊離ラジカ ルの生成は増加する。これらの金属イオンは、遊離塩として、例えばＥＤＴＡ， ＤＴＰＡ，ＤＯＴＡもしくはデスフェリオキサミンとの複合体として、または金 属イオンの酸化物としてマイクロスフェア中に取込まれる。その他、金属イオン の誘導化複合体は脂質ヘッド基に結合するか、またはイオンの親油性複合体は脂 質二枚層中に取込まれる。熱剌激例えば、キャビテーションに露呈された場合、 これらの金属イオンは反応性酸素中間体の生成速度を増加する。さらに、メトロ ニダゾールとミソニダゾールのような放射線増感剤は発泡性先駆物質充填枚中に 取込まれ、熱剌激で遊離ラジカルを生成する。 プロドラッグの使用についての実例から、アシル化化学基はエステル結合を介 して薬物に結合し、その結合は生成内で血清中で酵素の作用で容易に切断する。 シル化プロドラッグは本発明の発泡性先駆物質充填マイクロスフェア中に取込ま れる。炭化水素および置換炭化水素アルキル基の外に、誘導体はペルフルオロア ルキル基のようなハロ置換およびペルハロ置換基を含む。ペルフルオロアルキル 基はエマルションを安定化する能力をもつべきである。発泡性先駆物質充填マイ クロスフェアが超音波からの音波パルスによって破裂したとき、マイクロスフェ ア中に取込まれたプロドラッグは血清に露呈される。エステル結合は血清中のエ ステラーゼによって切断される。 同様に、超音波は発泡性先駆物質充填マイクロスフェアを破裂させるためだけ ではなく、化学切断の速度およびプロドラッグからの活性薬物の放出を速度を増 加する熱効果を起こさせるために利用される。 マイクロスフェアの内側と外側の両方に治療薬の対称的または非対称的分布が あるように、マイクロスフェアをデザインすることができる。 治療薬の特定の化学構造は所望の溶解度を得るように選択もしくは改変され、 その結果治療薬はマイクロスフェアの内部発泡性先駆物質充填空間中に封入され か、マイクロスフェアの結合されるかまたはマイクロスフェア中に取込まれるか のいずれかである。表面結合した治療薬は一つ以上のアシル鎖を持っているので 、マイクロスフェアがポップもしくは加熱またはキャビテーションによって破裂 するとき、アシル化治療薬は表面を離れるおよび／または治療薬はアシル鎖化学 基から切断される。同様に、他の治療薬は構造上芳香族もしくはステロールであ る疎水性基で組立てられ、マイクロスフェア表面中に取込まれる。 脂質の外に、マイクロスフェアを形成するのに使用できる他の物質には、例え ばアルブミンのようなタンパク質、ポリグルタミン酸のような合成ペプチド、が らくとーす、グルコースと他のヘキソサカッライドの直鎖と枝分れオリゴマーと ポリマー、ホスオリル化とスルホン化ペントースとヘキソース糖および糖アルコ ールから誘導されたポリマーが含まれる。アルギン酸、デキストリン、澱粉およ びＨＥＴＡのような炭化水素も使用できる。ヒアルロン酸のような他の天然ポリ マーを使用することができる。ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン 、ポリアクチド、ポリエチレンイミン（直鎖と枝分れ）、ポリイオネンもしくは ポリイミノカルボンキシレートのような合成ポリマーも使用することができる。 遺伝子物質のようにマイクロスフェアによって封入された治療薬が負電荷して いる場合、カチオン性脂質またはカチオン性基を持つペルフルオロアルキル化基 を使用して負電荷の治療薬を結合することができる。例えば、Ｇａｒｅｌｌｉ ａｎｄ Ｖｉｅｒｌｉｎｇ，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｓ Ａｃｔａ，１９９ ２，１１２７，４１−４８（この全開示内容は引用することにより本明細書に取 込まれている）に記載の両親媒性のペルフルオロアルキル化ビピリヂンのカチオ ン性類似体を使用することができる。 一般的に、遺伝子物質のような負電荷の治療薬は、混合ミセル成分、例えばカ チオン性脂質をもつ非カチオン性脂質、例えば、ＤＯＴＭＡもしくはステアリル アミンまたはトリメチルステアリルアミンのような置換アルキル類の親水性ヘッ ド基に結合され得る。有用な混合ミセル化合物には、これらに決して限定されな いが、ラウリルトリメチルアンモニウムブロミド（ドデシル−）、セチルトリメ チルアンモニウムブロミド（ヘキサデシル−）、ミリスチルトリメチルアンモニ ウムブロミド（テトラデシルー）、アルキルジメチルベンジルアンモニウムクロ リド（アルキル＝Ｃ１２，Ｃ１４，Ｃ１６）、ベンジルジメチルドデシルアンモ ニウムブロミド／クロリド、ベンジルジメチルヘキサデシルアンモニウムブロミ ド／クロリド、ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウムブロミド／クロリド 、セチルジメチルエチルアンモニウムブロミド／クロリド、またはセチルピリジ ニウムボロミド／クロリドが含まれる。 リポソームを含有する治療薬の粒径は、得られたリポソームの生体適 合性および浄化値を調節するために、所望に応じて、押出し法、濾過法、超音波 処理法、均質化法、液体の不混和性鞘中に導入された液体の核の層流を使用する 方法、規定粒径の細孔を通じる圧力下での押出し法、および同様の方法を含む種 々の方法によって、調整することができる。上記の技術およびその他については 、例えば、米国特許第４，７２８，５７８号；英国特許第２１９３０９５号；米 国特許第４，７２８，５７５号；米国特許第４，７３７，３２３号；国際出願Ｐ ＣＴ／ＵＳ／８５／０１１６１；Ｍａｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉ ｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．８５８，ｐｐ．１６１ −１６８（１９８６）；Ｈｏｐｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．８１２、ｐｐ．５５−６５（１９ ８５）；米国特許第４，５３３，２５４号；Ｍａｙｈｅｗ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅ ｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１４９，ｐｐ．６４−７７ （１９８７）；Ｍａｙｈｅｗ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂ ｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．７５５、ｐｐ．１６９−７４（１９８ ４）；Ｃｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｒａｄｉｏｌ ｏｇｙ，ｖｏｌ．２２，ｐｐ．４７−５５（１９８７）；国際出願ＰＣＴ／ＵＳ ８９／０５０４０；米国特許第４，１６２，２８２号；同４，３１０，５０５号 ；同４，９２１，７０６号；およびＬｉｐｏｓｏｍｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｇ．，ｅｄ．，ｖｏｌ．Ｉ，ｐｐ．２９−３１，５１ −６７，ａｎｄ ７９−１０８（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ Ｒ ａｔｏｎ，ＦＬ １９８４）に記載されている。上記の特許、出版物および特許 出願の全開示内容は引用する ことにより本明細書に取込まれている。 フィルター細孔径は分粒および潜在的な混入物を除去するように選択される。 フィルター細孔径は１０ｎｍと２０μｍの間、さらに好適には３０ｎｍと１０μ ｍの間、一層さらに好適には１００ｎｍと８μｍの間とすることができる。最も 好適には、フィルター細孔径は約０．２２μｍ径である。濾過の有効性を最大す るために二枚以上のフィルターを列に積重ねることができる。フィルターを形成 する有用な物質はには、ポリスルフォンネート、ポリカーボネートおよびポリビ ニリデンクロリドのような重合体が含まれる。さらに、ガラス、セラミックスお よび金属フィルターも利用できる。その他、ワイアー、重合体またはセラミック ス網が使用できる。濾過を使用できる。濾過は製造工程の一部として、または直 列フィルターを通して投与する間に実施され得る。 発泡性先駆物質充填マイクロスフェアはフィルター工程を介して末端段階とし て分粒される。例えば、１０ミクロンと次いで８ミクロンの二枚以上の直列フィ ルターを含むカスケードフィルターは収量を増加する。その結果、超音波画像法 と薬物送達のための高性能を持った安定な均一粒径の発泡性先駆物質充填マイク ロスフェアが高収量で得られる。理想気体の法則と液体から気体状態へのマイク ロスフェアの粒径膨脹を利用して、直列フィルターを通して注射される程十分小 さいマイクロスフェアは生体内で必要な対比増強を提供する。事実、液体から気 体への転移の時のマイクロスフェア直径の膨脹を考慮に入れて、エマルションの 粒子が注射／濾過の工程を介して分粒されるようにフィルターを設計することが できる。液体から気体への転移の時、適切な粒径のガス充填マイクロスフェアが 形成される。発泡性先駆物質の必要量および安定化剤の 有効径の微滴への貢献ならびに理想気体の法則を考慮に入れて、先駆物質を分粒 する最適のフィルター径を計算することができる。これによって順次に所望の直 径をもったマイクロスフェアが生産される。 発泡性先駆物質充填マイクロスフェアはフィルターを通す簡単な押出し法で分 粒される。フィルター細孔径が得られる発泡性先駆物質充填マイクロスフェア粒 度分布を調節する。二枚以上のカスケード即ち積重ねたフィルター、例えば１０ ミクロンと次いで８ミクロンのフィルターを使用することによって、発泡性先駆 物質の相転移温度以上の温度で押出しを実施した場合、７−９μｍに中心のある 極めて狭い粒度分布を有する発泡性先駆物質充填枚を生産することができる。濾 過後、これらの脂質コーティングマイクロスフェアは２４時間また一年以上さえ 安定である。懸濁液が使用前に無菌バイアルから取出されるとき、濾過工程はフ ィルターアセンブリーとして取込まれるか、またはさらに好適にはフィルターア センブリーが使用中にシリンジ自体中に取込まれ得る。この工程は種々の孔径の フィルターを使用して適用することができ、その結果種々の粒径のマイクロスフ ェアができる。 本発明のマイクロスフェアの粒径は所期の使用法に依存する。マイクロスフェ アの粒径は生体適合性に影響するから、種々の粒径のマイクロスフェアが種々の 目的に選択される。小さいマイクロスフェアでは、超音波の共鳴周波数は一般的 に大きなマイクロスフェアの場合より高い。 例えば、血管内投与の場合、好適な粒径範囲は約３０ｎｍと約１９ミクロンの 間の平均外径であり、好適な平均外径は約ミクロンｍである。 さらに詳しくは、血管内投与の場合、マイクロスフェアの粒径は好適には外径 で約１０μｍ以下、好適には約７μｍ以下、さらに好適には外 径で約５ナノメータ以上である。好適には、マイクロスフェアは平均外径で約３ ０ナノメータ以上である。 肝臓のような器官に治療薬を送達し、正常組織から腫瘍を区別するためには、 約３０ナノメータと約１００ナノメータの間の平均外径の小さいマイクロスフェ アが好適である。 腎臓と肺臓にような組織の塞栓形成の場合、マイクロスフェアは好適には約２ ００ミクロン以下の平均外径である。 鼻内、直腸内または局所投与の場合、マイクロスフェアは好適には約１００ミ クロン以下の平均外径である。 大きいマイクロスフェア例えば１と１０ミクロンの間の粒径では一般的に、ど う様毛細血管を裏装するマクロファージおよびクッパー細胞のような血管を裏装 する食細胞要素によって清浄にされるまで、血管内空間に制限される。どう様血 管を超えて細胞にまで通過する場合、小さいマイクロスフェア例えば約１ミクロ ン以下の直径例えば約３００ナノメータの粒径が利用される。 好適な実施態様ではマイクロスフェアは別個よりはむしろマトリックス中に埋 封入されて投与される。 一般的に、本発明の治療薬送達システムは、水または食塩水溶液（例えば、リ ン酸緩衝食塩水）のような水性懸濁液の形態で投与される。好適には水は無菌で ある。食塩溶液は好適には等張食塩溶液であり、しかし所望に応じて、低張性（ 例えば、約０．３からやあく０．５％ＮａＣｌ）とすることができる。溶液は所 望に応じて緩衝化して、約ｐＨ５から約ｐＨ７．４のｐＨ範囲を提供することが できる。得られた発泡性先駆物質充填脂質スフェアは室温では一年以上の貯蔵で 安定である。さら に、好適にはデキストロースが媒体中に含まれる。発泡性先駆物質充填リポソー ムの投与に使用するその他の溶液には、これらに限定されないが、アーモンド油 、コーン油、綿実油、エチルオレアート、イソプロピルミリステート、イソプロ ピルパルミテート、鉱油、ミリスチルアルコール、オクチル−ドデカノール、オ リーブ油、落下製油、パーシック油、ゴマ油、大豆油、アクアレン、ミリスチル オレアート、セチルオレアート、ミリスチルパリミテートおよびアルキル鎖脂肪 酸（Ｃ＝２−２２）にエステル化された他の飽和と不飽和アリキル鎖アルコール （Ｃ＝２−２２）が含まれる。 使用前の貯蔵について、本発明のマイクロスフェアは水性溶液中例えば食塩溶 液（例えば、リン酸緩衝食塩溶液）または単に水中に懸濁し、好適には約２℃と 約１０℃の間の温度で、好適には約４℃で貯蔵することができる。所望に応じて 、食塩溶液は低張食塩溶液（例えば、約０．３％から約０．５％ＮａＣｌ）とす ることができが、最も好適には、マイクロスフェアは等張食塩溶液中に貯蔵する ことができる。溶液は所望に応じて、約ｐＨ５から約ｐＨ７．４のｐＨ範囲を提 供するように緩衝化され得る。貯蔵媒体中で使用する適切な緩衝剤には、これら に限定されないが、アセテート、シトレート、ホスフェートおよびバイカーボネ ートが含まれる。 貯蔵中の細菌による劣化を防止するために、マイクロスフェアに静菌剤を含ま せることもできる。適切な静菌剤には、これらに限定されないが、ベンザルコニ ウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド、安息香酸、ベンジルアルコール、ブツ ルパラベン、セチルピリジニウムクロリド、クロロブタノール、クロロクレゾー ル、メチルパラベン、フェノール、 カリウムベンゾアート、カリウムソルベート、ナトリウムベンゾアートおよびソ ルビン酸が含まれる。さらに、脂質の酸化を防止するために発泡性先駆物質充填 リポソームに一以上の抗酸化剤を含ませることができる。適切な抗酸化剤にはト コフェロール、アスコルビン酸およびアｓｋオルビルパルミテートが含まれる。 患者の部位へ治療化合物を調節送達する方法は、 （ｉ）治療用化合物を含む発泡性先駆物質充填マイクロスフェアを患者に投与す ること； （ｉｉ）発泡性先駆物質の液体から気体への相転移を検出することができる。た め、かつ部位中のマイクロスフェアの存在を決定するために超音波を使用してマ イクロスフェアを監視すること； （ｉｉｉ）超音波を使用してマイクロスフェアを破裂させ、部位中に治療用化合 物を放出すること； の諸工程を含む。 本発明の発泡性先駆物質充填マイクロスフェアを使用すると、超音波エネルギ ーはガスと相互反応して、マイクロスフェアを破裂させ、例えば遺伝子物質のよ うな治療薬を放出し細胞中に移送する。超音波エネルギーが組織または体液媒体 内のガスの境界面に出会った時、超音波エネルギーの熱と運動エネルギーへの局 所変換は大いに増強される。このことによって、治療薬はマイクロスフェアから 放出され、驚くべきことに細胞中に送達される。作用についての特定の理論に縛 られるつもりはないが、細胞の部位で生成した熱と運動エネルギーは細胞の治療 薬摂取を増強することが考えられる。 マイクロスフェアの投与の経路は所期の用途に依存する。当業者なら ば、認識するように、本発明の治療薬送達システムの投与は種々の方法で、例え ば血管内的に、リンパ液内的に、非経口的に、皮下的に、筋肉内的に、鼻内的に 、直腸内的に、腹腔内的に、間質的に、噴霧器を介する気道中に、高圧的に、経 口的に、局所的に、または腫瘍内的に、種々の投与量形態で実施することができ る。一つの好適な投与経路は血管内的である。血管内使用の場合、治療薬送達シ ステムは一般的に静脈内的に注射されるが、動脈内的にも注射することができる 。本発明のマイクロスフェアはまた間質的にまたは体腔中に注射することができ る。 超音波を使用する本発明のマイクロスフェアから治療薬の送達は、超音波エネ ルギーの伝達に良好な音響窓を有する組織について、最高に達成される。これは 筋肉、心臓、肝臓および他の多くの生体構造のような身体中の最も多くの組織に ついての場合である。脳中では、頭蓋骨を通して超音波を向けるためには、外科 的窓が必要である。 投与される有用な投与量および投与方法は年齢、体重、治療される動物の種類 および特定の治療薬用法に依存する。典型的には、投与量は低い濃度から開始さ れ、所望の治療薬効果が達成されるまで増加される。 超音波エネルギーが部位指向性薬物送達の活性化には好適であるが、ある場合 には他のエネルギーを利用することができる。例えば、良好な窓が得られない場 合、例えば肺臓、マイクロ波周波数エネルギーが利用される。これは、発泡性先 駆物質が加熱される身体の部位で相転移を受け、そうすることによってマイクロ スフェアの表面から治療薬を放出するために使用される。例えば、２−メチル− ２−ブテンと化学治療薬を取込んだマイクロスフェアは、マイクロ波または超音 波を使用する局所的発熱、体温より数度高い３８．５℃の発熱によって活性化さ れる。磁 気誘導では、振動磁界が熱を生成するのに使用される。これは外部の磁界（例え ば、患者の外のマグネット）および患者内に移植された強磁性プローブで達成さ れ得る。マイクロスフェアは腫瘍中の血管を通って流動するから、磁界振動によ る部位の発熱に出会う。発泡性先駆物質はガスを生成し、マイクロスフェアを破 裂させ薬物を放出する。本発明の特に新規の実施態様は、磁性のマイクロスフェ アが作成できることである。これは、マイクロスフェア中に磁性物質例えば、マ イクロスフェア中に発泡性先駆物質と治療薬と共に取込まれた酸化鉄を使用する ことによって達成することができる。マイクロスフェアが磁界の領域に出会うと 、磁気粒子は振動磁界からエネルギーを獲得する。これは順番に液体発泡性先駆 物質を変換し、マイクロスフェアの内容物を局所的に放出させる。ある事例では 、光線エネルギーはマイクロスフェアをもつ薬物送達を指向する点で有用である 。光線は一般的に例えば超音波または高周波エネルギーより身体の深部まで貫通 する点で効果が少ないが、ある用途では貫通の程度は適切である。例えば、皮膚 に薬物を送達するためには、発泡性先駆物質充填マイクロスフェアは局所に投与 され、サンランプが皮膚に当てられる。マイクロスフェアを静脈注射して、皮膚 に適切なエネルギーの光線を照射することによって皮膚に標的指向することがで きる。赤外線エネルギーはペルフルオロカーボン基材発泡性先駆物質と相互反応 して光活性化を起こす点で特に効果的であると考えられる。内視鏡利用の場合（ 例えば、大腸の粘膜表面を治療するため）、光線エネルギーは大変有利である。 発泡性先駆物質マイクロスフェアで部位指向薬物送達を実施する好適な方法は エネルギーを標的組織に当て、そうすることによって、マイク ロスフェアから治療薬を放出することである。最も好適なエネルギー源は超音波 である。しかし、ある実例では、発泡性先駆物質マイクロスフェアは薬物を局所 に送達する点で単独で極めて有効であり得る。体温の近辺で液体から気体への相 転移を受ける発泡性先駆物質は虚血と疾病組織中に蓄積する点で特に有効である と考えられる。この仮説は空気を充填した通常のリポソームで実施した実験から 誘導された。実験動物例えばブタもしくはイヌが１００％酸素で換気される場合 、リポソームは急速にガスを失う。体温（例えば、３７℃）の近辺の相転移を受 ける発泡性先駆物質は疾病または虚血組織中に蓄積する傾向がある。心筋、脳お よび他の組織の感染部位にように、腫瘍はしばしば虚血性である。そこで薬物の 局所送達を達成するために、発泡性先駆物質を使用することができる。この目的 のためには、２５℃と約４０℃の間の温度で液体から気体への相転移をうける先 駆物質が特に好適である。発泡性先駆物質例えば、ペルフルオロペンタン、１− ブテン−３−イン−２−メチル、メチル−ラクテートまたはブロモクロロフルオ ロメタンを持つマイクロスフェア中に治療薬を取込むことによって、治療薬は虚 血組織に選択的に送達される。超音波または他のエネルギーを任意に虚血組織に 適用して薬物送達を助成することができる。 細胞培養物のような生体内利用の場合、発泡性先駆物質充填マイクロスフェア を培養基中の細胞に添加しインキュベートすることができる。超音波エネルギー を細胞とマイクロスフェアを含有する培養基に適用することができる。 本発明は患者の部位への治療薬の調節的送達に使用することができ、そこでは 患者に本発明による治療薬含有マイクロスフェアを投与し、部 位中のマイクロスフェアの存在を決定するために超音波を使用してマイクロスフ ェアを監視し、超音波を使用してマイクロスフェアを破裂させ、部位中に治療薬 を放出させる。 患者はいずれの種類の動物とすることもできるが、好適には脊椎動物、さらに 好適には哺乳動物、最も好適にはヒトである。患者の部位とは、患者全身または 患者の特定の部位もしくは一部を意味する。例えば、本発明の方法を使用するこ とによって、治療薬送達を患者の心臓および患者の血管系（静脈または動脈系） で行うことができる。本発明はまた、治療薬送達で容易に到達できない患者の左 心臓に治療薬を送達する点で特に有用である。本方法を使用して、治療薬は患者 の肝臓、脾臓および腎臓部位および他の部位に容易に送達され得る。 その他、本発明は患者の肺臓に治療薬を送達するのに特に有用である。本発明 の発泡性先駆物質充填マイクロスフェアは通常の液体充填リポソームより軽く、 通常のリポソームは肺臓の表面に到達するよりむしろ中心近辺の気道に沈着する 。本発明の発泡性先駆物質充填マイクロスフェアは末端気道および肺胞を含めて 肺臓の表面への治療化合物の送達を改良すると考えられる。肺臓への適用の場合 、発泡性先駆物質充填マイクロスフェアは例えば噴霧器を通って投与される。 肺臓への標的指向の様な用途の場合、標的組織を裏装している脂質を持つ発泡 性先駆物質充填マイクロスフェアが凝縮する時、治療薬が放出される。その他、 発泡性先駆物質充填マイクロスフェアは超音波の使用なしで投与した後に破裂す る。従って、上記の種類の投与の場合、治療薬を放出するために超音波を適用す る必要はない。 さらに、本発明の発泡性先駆物質充填マイクロスフェアは、水性媒体 中または酸素および／または大気の空気に露呈したとき分解する治療薬について 特に有用である。不安定な治療用化合物で使用する場合、例えばマイクロスフェ アは窒素またはアルゴンのような不活性ガスで充填される。その他、ガス充填マ イクロスフェアは不活性ガスで充填されて、皮膚と眼への投与のような、治療薬 が通常大気の空気に露呈される患者の部位に使用する不安定な治療薬を封入する のに使用される。 発泡性先駆物質充填マイクロスフェアはまたパッチ送達システムのような経皮 送達に特に有用である。破裂用超音波を使用すると、治療化合物の経皮送達が増 加する。さらに、治療薬送達を監視し調節する一つの機構を使用することができ る。例えば、診断用超音波を使用して発泡性先駆物質充填マイクロスフェアの破 裂を視覚的に監視し治療薬の送達を調節することができ、および／または通水式 聴診器を使用して発泡性先駆物質充填マイクロスフェアの破裂の音を検出し治療 薬の送達を調節することができる。 マイクロスフェアのエコー発現性と超音波を使用するピーク共鳴周波数でマイ クロスフェアを破裂する能力によって、所望の部位中のマイクロスフェアの存在 を決定するために患者への投与後にマイクロスフェアを監視することおよび超音 波を使用してマイクロスフェアを破裂させ、部位中に治療薬を放出することが可 能になり、患者の部位への治療薬の調節的送達が可能になる。 発泡性先駆物質から製造されたガス充填マイクロスフェアは超音波診断に大き な効能を持っている。それらは大量のガスを取込み、それ故反射性が高く優れた 超音波対比剤である。高エネルギー超音波、好適には１００ミリワット以上の連 続波を使用して、薬物、生体活性および遺伝 子物質をエアロソームから放出し、超音波発熱を増加し、およびキャビテーショ ン媒介組織破壊と薬物活性化することができる。 好適には、本発明のマイクロスフェアは２ｄＢ以上、好適には約４ｄＢと約２ ０ｄＢの間の反射能を有する。この範囲内で、本発明のマイクロスフェアの最高 の反射能は、大きいマイクロスフェアによって、高いマイクロスフェア濃度によ って、および／または高い超音波周波数を使用した場合に示された。 好適には、本発明のマイクロスフェアは約０．５ｍＨｚと約１０ｍＨｚのピー ク共鳴周波数を有する。勿論、本発明の発泡性先駆物質充填マイクロスフェアの ピーク共鳴周波数はマイクロスフェアの直径およびある程度弾力性もしくは柔軟 性に依存し、大きくて弾力性のあるマイクロスフェアは小さく弾力性も柔軟性の 低いマイクロスフェアより低い共鳴周波数を持っている。 本発明の治療薬含有マイクロスフェアの破裂は、驚くべきことに、マイクロス フェアが投与されたまたは他の方法で部位に到達した後、ある周波数の超音波を 治療薬が必要な患者の部位に適用することによって容易に実施される。さらに詳 しくは、超音波が治療薬含有発泡性先駆物質充填マイクロスフェアのピーク共鳴 周波数に対応する周波数で適用される時、マイクロスフェアは破裂しその内容物 を放出することが思いがけなく分かった。 マイクロスフェアを超音波に露呈し、反射共鳴周波数シグナルを受理し、シグ ナルのスペクトルを分析して通常の方法でピークを決定することによって、ピー ク共鳴周波数を生体内または生体外、好適には生体内で決定することができる。 そのように決定されたピークはピーク共鳴周波数（または時折呼称される第二調 波）に対応する。 発泡性先駆物質充填マイクロスフェアは高強度（ワット数）と持続時間（時間 ）を組合せてもつ非ピーク共鳴周波数超音波に露呈された時も破裂する。しかし 、この高エネルギーは極めて高い発熱を生じ、これは好ましくないことである。 ピーク共鳴周波数にマッチするエネルギーの周波数に調整することによって、破 裂と治療薬の放出の効率は改善され、大きな組織加熱が一般的に起こらず（しば しば約２℃以上の温度の上昇はない）、全体必要エネルギーが少なくなる。従っ て、ピーク共鳴周波数での超音波の適用は、要求はされないが、最も好適である 。 種々の診断用超音波画像器のいずれもが本発明の実行に使用できるが、特定の 型または機器のモデルが本発明の方法に臨界的である。超音波発熱を行うようデ ザインされた機器が適切であり、この種の機器は米国特許第４，６２０，５４６ 号、同４，６５８，８２８号、および同４，５８６，５１２号明細書に記載され ていて、その全開示内容は引用することにより本明細書に取込まれいる。好適に は、機器は共鳴周波数（ＲＦ）スペクトル分析機を使用する。トランジューサ・ プローブは外部から適用するかまたは移植される。超音波は一般的に低い強度と 持続時間で好適にはピーク共鳴周波数で開始し、次いで強度、時間および／また は共鳴周波数をマイクロスフェアが破裂するまで増加する。 種々の原理の応用は本発明で一旦武装した当業者にとって一般指導書 から容易に明らかであるが、約１．５から約１０ミクロンの平均外径の発泡性先 駆物質充填マイクロスフェアの場合、共鳴周波数は一般的に約１から約１０メガ ヘルツの範囲である。標的組織（例えば、腫瘍）の中心へ焦点領域を調整するこ とによって、発泡性先駆物質充填マイクロスフェアは標的組織内に蓄積するにつ れて、実時間超音波下で視覚化することができる。７．５メガヘルツの曲線状配 列トランスジューサを一事例として使用して、トランスジューサに送出される出 力を最大に調節し、焦点領域を標的組織中に調節することによって、空間ピーク 時間平均（ＳＰＴＡ）出力は水中で約５．３１ｍＷ／ｃｍ²の最大となる。この 出力によって、発泡性先駆物質充填マイクロスフェアからの治療薬の放出が起こ るが、さらに高い出力を使用することによってより大きい放出が達成される。 トランジューサをドップラーモードに切替えることによって、同トランスジュ ーサで２．５ワット／ｃｍ²までの高い出力が利用できる。機械をドップラーモ ードで運転する時、標的組織中の選択された焦点領域に出力を送出することがで き、発泡性先駆物質充填マイクロスフェアにその治療薬を放出させることができ る。トランジューサを発泡性先駆物質充填マイクロスフェアのけ共鳴周波数にマ ッチするように選択することによって、この治療薬の放出工程は一層効率的にな る。 より大きい直径の発泡性先駆物質充填マイクロスフェア例えば、３ミクロン以 上の平均外径の場合、低周波数トランジューサが治療薬放出を達成するのにさら に効果的である。例えば、３．５メガヘルツの低周波数トランジューサ（２０ｍ ｍ曲線状配列型）が発泡性先駆物質充填マイクロスフェアの共鳴周波数に対応す るように選択される。このトランジ ューサを使用して、１０１．６ミリワット／ｃｍ2が焦点領域に送出され、ドッ プラーモードに切替えることによって、出力（ＳＰＴＡ）は１．０２ワット／ｃ ｍ²に増加する。キャビテーションの減少を利用して、発泡性先駆物質充填マイ クロスフェア中の薬物／プロドラッグを放出および／または活性化することがで きる。ため、低周波数エネルギーが使用され、キャビテーションが低周波数で効 果的に起こる。高電圧（３００ボルトも）で運転される０．７５７メガヘルツ野 トランジューサを使用して、発泡性先駆物質充填マイクロスフェアの溶液のキャ ビテションは約５．２気圧の域値で起こる。 表３は、ｔｈｅ Ｐｉｃｏｎｉｃｓ Ｉｎｃ．（Ｔｙｎｇｓｂｏｒｏ，ＭＡ） Ｐｏｒｔａｓｃａｎ ｇｅｎｅｒａｌ ｐｕｒｐｏｓｅ ｓｃａｎｎｅｒ ｗｉ ｔｈ ｒｅｃｅｉｖｅｒ ｐｕｌｓｅｒ １９６６ Ｍｏｄｅｌ ６６１；ｔｈ ｅ Ｐｉｃｋｅｒ（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨ）Ｅｃｈｏｖｉｅｗ ８Ｌ Ｓｃ ａｎｎｅｒ ｉｎｎｃｌｕｄｉｎｇ ８０Ｃ Ｓｙｓｔｅｍまたはｔｈｅ Ｍｅ ｄｉｓｏｎｉｃｓ（Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）Ｍｏｄｅｌ Ｄ−９ Ｖｅｒｓａｔｏｎｅ Ｂｉｄｉｒｅｄｔｉｏｎａｌ Ｄｏｐｐｌｅｒｄのような 通常使用されている機器による、診断用超音波から組織に伝導されるエネルギー の範囲を示す。一般的に、パルス反復に使用されるこれらのエネルギー範囲は、 発泡性先駆物質充填マイクロスフェアを監視するのに有用であるが、本発明のガ ス充填マイクロスフェアを破裂させるには不十分である。 医療用超音波機器で通常使用されるような高エネルギー超音波が発泡性先駆物 質充填マイクロスフェアの活性化に好適である。一般的に、医療用超音波機器は 、超音波によって加熱される組織の面積に依って、５０％から１００％もの使用 率（ｄｕｔｙ ｃｙｃｌｅｓ）を使用する。大量の筋肉塊をもつ区域（背部、大 腿）および心臓のような高度の血管分布している組織では大きい使用率例えば、 １００％を要する。 発泡性先駆物質充填マイクロスフェアの位置を監視するために使用する診断用 超音波では、一つまたは数パルスの音波が使用され、機器は反射超音波シグナル を受理するためにパルスの間にポーズを置く。診断用超音波で使用されるパルス の数が制限されているので、画像化される組織に送出される有効エネルギーが制 限される。 治療用超音波では連続波を使用して高エネルギーレベルを送出する。本発明の マイクロスフェアの使用において、超音波エネルギーはパルス されるが、連続波超音波が好適である。パルシングが使用される場合、超音波は 好適には一度に少なくとも約８パルス、好適には少なくとも２０パルスのエコー 連続長でパルスされる。 固定周波数または変調周波数超音波のいずれかが使用される。固定周波数とは 超音波の周波数が時間に亙って一定であるものと定義される。変調周波数とは音 波の周波数が時間に亙って、例えば高い方から低い方に（ＰＲＩＣＨ）または低 い方から高い方に（ＣＨＩＲＰ）変化するものと定義される。例えば、１０ＭＨ ｚの音波エネルギーの初期周波数をもつＰＲＩＣＨパルスは出力が１から５ワッ ト増加する毎に１ＭＨづつ移動する。焦点調整、周波数変調された高エネルギー 超音波はマイクロスフェア中での局所的ガス膨脹速度および治療薬の局所的送達 を提供する破裂速度を増加することができる。 使用される超音波の周波数は約０．０２５から約１００メガヘルツの範囲では 変わり得る。約０．７５と約３メガヘルツの範囲の周波数が好適であり、約１と 約２メガヘルツの範囲の周波数が最も好適である。通常使用される約０．７５か ら約１．５メガヘルツの範囲の治療用超音波を使用することができる。通常使用 される約３から約７．５メガヘルツの範囲の診断用超音波も使用することができ る。極めて小さいマイクロスフェア例えば０．５ミクロン径以下の場合、これら 小さいマイクロスフェアは音波の高周波数でより効果的に音波エネルギーを吸収 するので、高周波数の超音波が好適である。極めて高い周波数例えば１０メガヘ ルツ以上を使用する場合、一般的に超音波エネルギーによって体液と組織中への 深部貫通が制限される。皮膚および他の表面組織には外部適用が好適であるが、 深部構造には介在プローブまたは血管内超音波カテーテ ルが好適である。 最も好適な実施態様では、本発明は新規のリポソームコントラスト剤および薬 物送達システムを提供する。 本発明の発泡性先駆物質充填治療薬含有マイクロスフェアを製造する種々の方 法は本開示で一旦武装した当業者ならば容易に明らかであると考えられる。マイ クロスフェアを製造する好適な方法を好適なリポソーム治療薬送達システムと関 連して以下に記載する。 さらに詳しくは、好適な実施態様では、本発明の温度活性化発泡性先駆物質充 填リポソームからなる標的指向型治療薬送達システムを製造する方法は、温度活 性化発泡性先駆物質の存在で、脂質のゲルから液晶への相転移温度以下の温度で かつ発泡性先駆物質の活性化温度以下で、脂質を含む水性溶液を振盪して、温度 活性化発泡性先駆物質充填リポソームを生成する工程、および治療化合物を添加 する工程からなる。もう一つの好適な実施態様では、本発明の温度活性化発泡性 先駆物質充填リポソームからなる標的指向型治療薬送達システムを製造する方法 は、温度活性化発泡性先駆物質の存在で、脂質のゲルから液晶への相転移温度以 下の温度でかつ発泡性先駆物質の活性化温度以下で、脂質と治療化合物を含む水 性溶液を振盪して、温度活性化発泡性先駆物質充填リポソームを生成する工程か らなる。その他の実施態様では、本発明の温度活性化発泡性先駆物質充填リポソ ームからなる標的指向型治療薬送達システムを製造する方法は、温度活性化発泡 性先駆物質の存在で、脂質と治療化合物を含む水性溶液を振盪する工程、および 得られた治療用の発泡性先駆物質充填リポソームを分離する工程からなる。上記 の方法で製造されたリポソームは、本明細書ではゲル状態振盪式発泡性先駆物質 徐添加法 によって製造された温度活性化発泡性先駆物質充填リポソーム、または治療薬含 有ゲル相対振盪式温度活性化発泡性先駆物質徐添加法と呼称する。 本発明のイクロスフェアの製造方法は発泡性先駆物質の活性化温度でまたは近 辺で実施されので、ガス充填リポソームが形成される。この実施態様では、本発 明のガス充填リポソームを含む標的指向型治療薬送達システムを製造する方法は 、ガスの存在で、脂質のゲルから液晶への相転移温度以下の温度でかつ発泡性先 駆物質の活性化温度以下で、脂質を含む水性溶液を振盪して、ガス充填リポソー ムを生成する工程、および治療化合物を添加する工程からなる。もう一つの実施 態様では、本発明のガス充填リポソームからなる標的指向型治療薬送達システム の製造方法は、ガスの存在で、脂質のゲルから液晶への相転移温度以下の温度で 脂質と治療用化合物を含む水性溶液を振盪する工程を含む。他の実施態様では、 ガス充填リポソームからなる標的指向型治療薬送達システムを製造する方法は、 ガスの存在で、脂質と治療用化合物を含む水性溶液を振盪する工程、および得ら れた治療用のガス充填リポソームを分離する工程を含む。上記の方法で製造され たリポソームは本明細書ではゲル状態振盪式ガス徐添加法によって製造されたガ ス充填リポソーム、または治療薬含有ゲル状態振盪式ガス徐添加リポソームを呼 称する。 従って、本発明の好適な方法は、温度活性化発泡性先駆物質の存在で、脂質と 治療用化合物を含む水性溶液を振盪することを提供する。この明細書で使用され る振盪することとは、水性溶液を撹拌して、ガスを局所周囲環境から水性溶液中 に導入する運動と定義される。従って、振盪はガス充填リポソームまたは発泡性 先駆物質充填リポソームを生成する温 度で実施される。水性溶液を撹拌しガスを導入するどの運動も振盪のために使用 される。振盪は一定時間の後、泡が形成される程強くなければならない。好適に は振盪は、３０分のような短い期間内、好適には２０分内、さらに好適には１０ 分内に泡が形成されるように十分強力である。振盪は渦巻き（渦巻撹拌のような ）、左右運動または上下運動とすることができる。さらに、種々の型の運動が組 合わせられる。また、振盪は水性溶液を入れた容器を振盪すること、または容器 自体を振盪しないで容器内の水性溶液を振盪することによって起こる。さらに、 振盪は手動でまたは機械によって起こる。使用できる機械的振盪器には、例えば ＶＷＲ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｃｅｒｒｉｔｏｓ，ＣＡ）振動テーブルのよう な振動テーブルおよび機械的ペンキ混合器並びに他の既知の機械が含まれる。振 盪を作る他の手段には、高速度または圧力下で発生するガスの作用が含まれる。 好適には、大量の水性溶液ではそれに対応して動力の全量が増加することは理解 されよう。強力振盪とは毎分少なくとも６０回の振盪運動と定義され、好適であ る。毎分少なくとも１０００回転の渦巻撹拌は強力振盪の一例であり、さらに好 適である。毎分１８００回転の渦巻撹拌は最も好適である。 振盪時の発泡性先駆物質充填リポソームの生成は水性溶液の頂部上の泡形成に よって検出され得る。これは、泡の形成時に水性溶液の容量の増加を伴う。好適 には、泡の最終容量は水性脂質溶液の初期容量の少なくとも約２倍であり、さら に好適には、泡の最終容量は水性溶液の初期容量の少なくとも約３倍であり、一 層好適には、泡の最終容量は水性脂質溶液の初期容量の少なくとも約４倍であり 、最も好適には、水性溶液の全量が泡に変換する。 振盪の所要時間は泡の生成の検出によって決定される。例えば、５０ｍｌの遠 沈管中の１０ｍｌの脂質溶液は約１５−２０分間、または発泡性先駆物質充填リ ポソームの粘度が十分濃くなり、撹拌のとき側壁にもはや付着しなくるまで渦巻 撹拌される。この時、泡によって、発泡性先駆物質充填リポソームを含有する溶 液は３０−３５ｍｌの水準まで上昇する。 好適な泡水準を形成するために必要な脂質濃度は使用する脂質の種類に依って 変わり、本開示で一旦武装した当業者によって容易に決定され得る。例えば、好 適な実施態様では、本発明の方法による発泡性先駆物質充填リポソームを生成す るために使用される１，２−ジパルミトイル−ホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ ）の濃度は約２ｍｇ／ｍｌから約３０ｍｇ／ｍｌ食塩水溶液である。好適な実施 態様で使用されるジステアロイルホスファチジルコリンの濃度は約５ｍｇ／ｍｌ から約１０ｍｇ／ｍｌ食塩水溶液である。 さらに詳しくは、２０ｍｇ／ｍｌから３０ｍｇ／ｍｌの濃度のＤＰＰＣは振盪 すると、全部が懸濁液となり、懸濁駅単独より４倍多いガス量を取込む。１０ｍ ｇ／ｍｌの濃度のＤＳＰＣは振盪すると、全量が全く液体懸濁液量の無いものと なり、全部泡を含有する。 脂質またはリポソームは本発明の方法で処理する前または後に操作され得るこ とは、本開示で一旦武装した当業者によって理解される。例えば、脂質は水和さ れ、次いで凍結乾燥されか、凍結と融解のサイクルによって加工されるかまたは 単に水和される。好適な実施態様では、脂質は発泡性先駆物質充填リポソームの 生成の前に、水和され次いで凍結乾燥されるか、または水和され次いで凍結と融 解のサイクルで加工され次 いで凍結乾燥される。 本発明の方法によると、ガスの存在は局所周囲大気によって提供される。局所 周囲大気とは密封容器中の大気であり、または外部環境である非密封容器中の大 気である。その他、本発明の好適な実施態様では、ガスまたは発泡性先駆物質は 、空気以外のガスを提供するために、水性脂質溶液を有する容器中にまたは水性 脂質溶液自身中に注入またはその他の方法で添加される。空気より重くないガス は密封容器中に添加され、一方空気より重いガスは密封または非密封容器中に添 加される。従って、本発明はには、発泡性先駆物質と共に空気および／または他 のガスの共取込みが含まれる。 本発明の上記の好適な実施態様は好適には脂質のゲルから液晶への相転移温度 以下の温度で実施される。「ゲルから液晶への相転移温度」とは、脂質二枚層が ゲル状態から液晶状態に変換する温度を意味する。例えば、Ｃｈａｐｍａｎ ｅ ｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９７４，２４９，２５１２−２５２１ 参照。種々の脂質のゲル状態から液晶状態への相転移温度は当業者には容易に明 らかであり、例えばＧｒｅｇｏｒｉａｄｅｓ，ｅｄ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ Ｔｅ ｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．Ｉ，１−１８（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９８４）と Ｄｅｒｅｋ Ｍａｒｓｈ，ＣＲＣ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｂｉ ｏｌａｙｅｒｓ（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ １９９０ ），ａｔ ｐ．１３９に記載されている。上記の表２も参照。使用される脂質の ゲル状態から液晶状態への相転移温度が室温より高い場合、脂質溶液を保持する 容器を冷却する冷却機構を提供することによって容器の温度を調節する。 本発明の方法は好適には発泡性先駆物質のゲル状態から液晶状態への相転移温 度以下の温度で実施される。上記の表１を参照。上記に確認された他の発泡性先 駆物質の活性化または転移温度は当業者には容易に明らかであり、Ｃｈｅｍｉｃ ａｌ Ｒｕｂｂｅｒ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓ ｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ，Ｒｏｂｅｒｔ Ｃ．Ｗｅａｓｔ ａｎｄ Ｄ ａｖｉｄ Ｒ．Ｌｉｄｅ，ｅｄｓ．ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．Ｂｏｃａ Ｒ ａｔｏｎ，Ｆｌｏ ｒｉｄａ（１９８９−１９９０）に記載されいる。その他、 本発明のマイクロスフェアを製造する方法は発泡性先駆物質の活性化温度でまた はその近辺でガス充填リポソームが生成するように実施される。 通常の水性充填リポソームは柔軟性があり、それ故液晶状態で生物学的系で有 用であるので、脂質のゲルから液晶への相転移温度で日常的に作成れている。例 えば、Ｓｚｏｋａ ａｎｄ Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａ ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９７８，７５，４１９４−４１９８を参照。対照的 に、本発明の方法の好適な実施態様に従って作成されたリポソームは究極的なガ ス充填であり、ガスは水性溶液よりも圧縮性が良く扱いやすいので、良好な柔軟 性を示す。従って、温度活性化発泡性先駆物質充填リポソームは、脂質の相転移 温度以下の温度で生成した場合、たとえゲル相が堅くても生物学的系において利 用される。 ゲル状態振盪式ガス徐添加法を使用して治療薬含有発泡性先駆物質充填リポソ ームを製造する好適な装置は図９に示されている。脂質と水性媒体の混合物を激 しく撹拌し、ガス徐添加の工程においてバッチもくは連続供給によって発泡性先 駆物質充填リポソームを生産する。図９を参 照して、脂質容器５０からの乾燥脂質５１を導管５９を介して連続流もしくは断 続的投入として混合容器６６に添加する。バッチ法を利用する場合、混合容器６ ６はシリンジ、試験管、丸底フラスコのような比較的小さい容器もしくは大型容 器からなる。連続法を利用する場合、混合器は好適にはバット（Ｖａｔ）のよう な大型容器である。発泡性先駆物質の転移温度の温度ではガス充填リポソームが 生成し、一方転移温度以下の温度では発泡性先駆物質充填リポソームが生成する ように装置は調節される。下記に説明する装置中では、マイクロスフェアを製造 する方法が転移温度以下の温度で実施される。しかし、また方法を相転移温度で も実施して、ガス充填リポソームを生成する。 例えば、ガス徐添加工程の前に治療用化合物を添加することができる。図９を 参照して、治療用化合物供給容器４０から治療用化合物４１を導管４２を介して 混合容器６６に添加する。その他、リポソームの外側を治療用化合物でコーティ ングする時のように、治療用化合物をガス徐添加工程の後に治療用化合物を添加 することができる。 脂質５１の他に、治療用化合物４１、食塩溶液のような水性媒体５３を水性媒 体供給容器５２から導管６１を介して容器６１に添加することができる。脂質５ １と水性媒体５３を合して水性脂質溶液を生成する。その他、乾燥脂質５１を混 合容器６６中に導入する前に、脂質が水性溶液中に導入されるように、水和する ことができる。リポソームを製造する方法の好適な実施態様では、溶液７４の初 期導入量は、溶液が混合容器６６の収容量の一部のみを占める程度である。さら に、連続工程では、水性溶液７４が添加される速度および発泡性先駆物質充填リ ポソームが取り出される速度は、脂質溶液７４の容量が混合容器６６の収容量の 所 期のパーセントを超えないように調節される。 振盪は高速ジェットの加圧発泡性先駆物質を水性脂質溶液７４中に直接に導入 することによって行う事ができる。その他、振盪は水性溶液を手動でまたは機械 で機械的に振盪することによって行い得る。この種の機械的振盪は混合容器６６ を振盪することによって、または混合容器自体を振盪することなく水性溶液７４ を直接に振盪することによって行い得る。図９に示すように、好適な実施態様で は、機械的振盪機７５は混合容器６６に連結している。振盪は、図９に示される ように、一定時間に後、発泡性先駆物質充填リポソームからなる泡７３が水性溶 液７４の頂部上に生成する程十分な強度がなくてはならない。泡７３の生成の検 出は振盪の持続時間を調節する手段として使用され、即ち所定の時間振盪するこ とよりも、泡の所定量が生産されるまで振盪を続ける。 装置がリポソームを製造する方法のための温度に維持されるように、装置は温 度を調節する手段を含むことができる。例えば、好適な実施態様では、リポソー ムを製造する方法は発泡性先駆物質の沸点以下の温度で実施される。好適な実施 態様では、液体発泡性先駆物質はリポソームに内部空間を充填する。その他、装 置は、ガスがリポソーム中で含有されるように発泡性先駆物質の液体から気体へ の転移温度の温度で維持される。さらに、装置の温度は、発泡性先駆物質は液体 として始まりが、ガスが得られたリポソーム中に取込まれるように、リポソーム の製造方法を通じて調節される。この実施態様では、装置の温度は、方法は相転 移温度以下の温度で始まり、発泡性先駆物質の相転移温度あたりの温度に調整さ れるように、リポソームの製造方法の間調節される。 使用脂質が室温以下のゲルから液晶への相転移温度を有する発泡性先 駆物質充填リポソームを製造する装置の好適な実施態様では、水性脂質溶液７４ を冷却する手段が提供される。図９に示される実施態様では、冷却は、容器の周 りを環状に通過するように混合容器６６の周りに配置されたジェット６４の手段 によって行われる。図９に示すように。冷却液６３は、夫々ジャケット入口６２ と出口６３によってこの環状通路を通って強制的に流動する。冷却液６２の温度 と速度を調節することによって、水性脂質溶液７４の温度が所望の温度に維持す ることができる。 図９に示すように、発泡性先駆物質５５は発泡性先駆物質７４と共に混合容器 ６６中に導入される。空気は、水性溶液が環境空気に連続的に露呈するように非 密封混合容器を利用して導入される。バッチ法では、固定導入量の局所周囲空気 が混合容器６６を密封することによって導入される。空気より重い発泡性先駆物 質が使用される場合、容器は密封される必要がない。しかし、空気より重くない 発泡性先駆物質が導入される場合、図９に示すように、例えば蓋６５を使用して 混合容器を密封する必要がある。発泡性先駆物質５５は、図９に示すように、例 えば、混合容器を導管５７を介して加圧ガス供給タンク５４に連結することによ って混合容器６６中で加圧される。 振盪が完結した後、泡７３を含有する発泡性先駆物質充填リポソームを混合容 器６６から取り出す。取出しは、シリンジ１００の針１０２を図１０に示すよう に泡７３中に挿入し、フランジ１０５を引いて泡の所定量をバレル１０４中に引 出すことによって行うことができる。下記に記載のように、針１０２の末端が泡 ７３中にある位置は、取出される発泡性先駆物質充填リポソームの粒径を調節す るために使用される。 その他、取出しは、図９に示すように、取出チューブ６７を混合容器６６中に 挿入して行うことができる。混合容器６６を加圧する場合、既に記載したように 、ガス５５の圧力を利用して、発泡性先駆物質充填リポソーム７７を混合容器６ ６から取出容器７６に導管７０を介して押し進める。混合容器６６が加圧されて いない場合、取出容器７６は真空ポンプのおような真空源５８に導管７８を介し て連結され、図９に示すように、負圧によって泡７３を取出容器７６中に吸引す る。取出容器７６から、発泡性先駆物質充填リポソーム７７はバイアル８２中に 導入され、最終使用者に出荷される。加圧ガス源５６が助力として押出容器７６ に連結され、発泡性先駆物質充填リポソームを突出す。発泡性先駆物質充填リポ ソームの粒径を増加すると負圧が生じるので、発泡性先駆物質充填リポソームを 取出すためには陽圧が好適である。 濾過は好適には実質的に均一な粒径の発泡性先駆物質充填リポソームを得るた めに実施される。ある好適な実施態様では、濾過アセンブリは一つ以上のフィル ターを含有し、好適には図１２に示すように、フィルターは相互に直接隣接する 。濾過の前、発泡性先駆物質充填リポソームは約１ミクロン６０ミクロン以上の 範囲の粒径である（図１５Ａと１６Ａ）。単独フィルターを通す濾過の後、発泡 性先駆物質充填リポソームは一般的に１０ミクロン以下であるが、２５ミクロン もの粒径の粒子が残る。二枚フィルター（１０ミクロンに次いで８ミクロンフィ ルター）を通す濾過の後、殆どすべてのリポソームは１０ミクロン以下であり、 多くは５から７ミクロンである（図１５Ｂと１６Ｂ）。 図９に示すように、濾過は、所定の粒径以下の発泡性先駆物質充填リポソーム のみが混合容器６６から取出されるように、フィルター要素７ ２を直接に取出チューブ６７の末端に取付けることによって行うことができる。 その他、または取出しチューブフィルター７２の外に、発泡性先駆物質充填リポ ソームの分粒は、図９に示すように、発泡性先駆物質充填リポソームを取出容器 ７６からバイアル８２に導く導管７９中に取込まれたフィルター８０によって行 うことができる。フィルター８０は図１２に示すようにカスケードフィルターア センブリ１２４を含有する。図１２に示されたカスケードフィルターアセンブリ １２４は二つの連続フィルター１１６と１２０を含み、フィルター１２０はフィ ルター１１６の上流に配置している。好適な実施態様では、上流フィルター１２ ０は“ＮＵＣＬＥＰＯＲＥ”１０μｍフィルターであり、下流フィルター１１６ は“ＮＵＣＬＥＰＯＲＥ”８μｍフィルターである。二つの０．１５ｍｍ金属板 １１５は好適にはフィルター１１６のいずれかの側に取付けられる。好適な実施 態様では、フィルター１１６と１２０はＴｅｆｌｏｎ（商標）Ｏリング１１８に よって最小１５０μｍの間隔が置かれている。 濾過の外に、分粒は、発泡性先駆物質充填リポソームの浮力が粒径に依存する ことを利用して行うことができる。発泡性先駆物質充填リポソームは水よりも相 当に低い密度を有し、それ故混合容器６６の頂部に浮く。最大のリポソームは最 低の密度を有するので、それらは最も急速に頂部に浮上がる。最小のリポソーム は一般的に頂部に浮上せず、非発泡性先駆物質充填リピド部分は底部に沈む。こ の現象を有利的に利用して、混合容器６６から示差浮上法で取出すことによって 発泡性先駆物質充填リポソームを分粒することができる。従って、取出しチュー ブ６７の混合容器６６中の垂直位置を設定することによって、取出す発泡性先駆 物 質充填リポソームの粒径を調節することができ、チューブが高い程、取出される 発泡性先駆物質充填リポソームは大きい。さらに、周期的にまたは連続的に混合 容器６６中での取出しチューブ６７の垂直位置を調整することによって、取出さ れる発泡性先駆物質充填リポソームの粒径は運転中に調節され得る。この種の取 出し法は、取出しチューブ６７に取付けられたねじ込みスリーブ７２と整合する ねじ込みカラー７１である装置６８を取込むことによって助成され、この装置６ ８によって混合容器６６中での取出しチューブ６７の垂直位置は正確に調整され る。 ゲル状態振盪式発泡性先駆物質充填徐添加法自体も利用して、発泡性先駆物質 充填リピド基材マイクロスフェアの分粒を改良することができる。一般的に、振 盪エネルギーの強度が大きくなる程、得られる発泡性先駆物質充填リポソームの 粒径は小さくなる。 本発明は、最終利用者に配送される治療薬含有温度活性化発泡性先駆物質充填 リポソームの新規の製造方法を含む。発泡性先駆物質充填リポソームが生成する と、破裂を起す温度での加熱によっては滅菌することはできない。それ故、無菌 の成分から発泡性先駆物質充填リポソームを形成し、汚染の危険を回避するため できる限り次の操作を少なくすることが望ましい。本発明によれば、このことは 例えば、図１０に示すように、振盪の前に脂質と水性溶液を含有する混合容器を 滅菌し、発泡性先駆物質充填リポソーム７７を混合容器６６から取出容器７６を 介して直接に無菌シリンジ１００のバレル１０４中に配送することによって、そ の他の加工および操作なしで、即ちその後の滅菌操作なしで達成され得る。発泡 性先駆物質充填リポソーム７７を入れ適切に包装されたシリンジ１００は次いで 最終使用者に配送される。それ故、発泡性先駆物質充 填リポソームを患者に投与するためには、生産物をさらに操作する必要は全くな く、包装品からシリンジを取出し、プロテクター（示されていない）をシリンジ １０２から取り除き、針を患者の体内またはカテーテ中に挿入するだけである。 さらに、シリンジ・プランジャー１０６がバレル１０４中に押し込まれた時に発 生する圧力によって、最も大きい発泡性先駆物質充填リポソームは破裂し、濾過 なしである程度の分粒が達成される。発泡性先駆物質温度で患者の体内に入った 時、発泡性先駆物質充填リポソームはガス充填リポソームになる。その他、この 方法は、ガス充填リポソームが患者に投与されるように先駆物質の相転移温度で 実施することができる。 使用の時点で発泡性先駆物質充填リポソームを濾過するのが望ましい場合、例 えばそれが濾過なしで取出容器７６から取出されるから、またはさらに濾過が望 まれるから、図１０に示すように、シリンジはそれ自身のフィルターを備えるこ とができる。このことによって、発泡性先駆物質充填リポソームは注射された時 、プランジャー１０６の作用によってフィルター１０８を通って押出され、分粒 される。このようにして、発泡性先駆物質充填リポソームは一工程で分粒と注射 が行われる。 シリンジのハブハウシング中に単独または二重フィルターの使用を格納するた めに、ハブハウシングをもつ非標準のシリンジが必要である。図３に示すように 、フィルターを格納するハブは、約１ｃｍから約２ｃｍの直径と約１．０ｃｍか ら約３．０ｃｍの長さの寸法を持ち、フィルターを入れる約０．８ｃｍの内部直 径を持っている。ハブ中のフィルター・ハウシングの異常に大きい寸法は、シリ ンジのプランジャーに掛ける必要のある圧力を減少させるのに十分な表面積を持 つハブを通ってマ イクロスフェアが通過するのを助成するためである。この方法では、マイクロス フェアは注射の際にマイクロスフェアの破裂を起こすような過度に大きい圧力を 受けない。 図１１に示すように、カスケードフィルター・ハウシング１１０はシリンジ１ １２中に直接に取付けられ、使用の時点でカスケード濾過を可能にする。図１２ に示すように、フィルター・ハウシング１１０はカスケードフィルターアセンブ リ１２４を含み、既に記載したが、雄型ねじ山を有する低部カラー１２２と雌型 ねじ山を有する雌型カラー１１４の間に取込まれる。低部カラー１２２はルーサ ・ロックで取付けられ、それによって底部カラーは容易にシリンジ１１２に固定 され、上部カラー１１４は針１０２で取付けられる。 好適な実施態様では、脂質溶液はフィルターを通して押出され、脂質溶液は振 盪前に滅菌される。発泡性先駆物質充填リポソームが形成されると、上記のよう に分粒のために濾過される。発泡性先駆物質充填リポソームの生成前のこれらの 工程によって、例えば非水和脂質量を減少させ、発泡性先駆物質充填リポソーム の相当な高収量を提供するという利点、並びに患者への投与が用意されている発 泡性先駆物質充填リポソームを提供するという利点を提供する。例えば、バイア ルまたはシリンジのような混合容器を濾過脂質懸濁液で満たし、溶液を混合容器 中で滅菌、例えばオートクレーブすることができる。発泡性先駆物質を徐々に脂 質懸濁液中に添加して、無菌容器を振盪することによって発泡性先駆物質充填リ ポソームを形成することができる。好適には、発泡性先駆物質充填リポソームが 患者に接触する前にフィルターを通過するような位置に、無菌容器はフィルター が備えられる。 この好適な方法の第一工程、脂質溶液をフィルターを通って押出すことのよっ て、乾燥脂質を壊して水和のために大きい表面積を露呈させて、非水和脂質量が 減少する。好適には、フィルターは約０．１から５μｍ、さらに好適には、約０ ．１から約４μｍ、一層好適には、約０．１から約２μｍ、最も好適には、約１ μｍの細孔径を有する。図１７に示すように、脂質懸濁液が濾過される場合（図 １７Ｂ）、非水和脂質は前濾過しない脂質懸濁液（図１７Ａ）と比較して減少す る。非水和脂質は不均一な粒径の無定型塊として現れ、好ましくないものである 。 第二工程、滅菌は患者に容易に投与できる組成物を提供する。好適には、滅菌 は熱滅菌によって、好適には、少なくとも約１００℃の温度で溶液をオートクレ ーブすることによって、さらに好適には、約１００℃から約１３０℃でオートク レーブすることによって、一層好適には、約１２０℃から約１３０℃、最も好適 には約１３０℃でオートクレーブすることによって行うことができる。好適には 、加熱は少なくとも約１分間、さらに好適には、約１から約３０分、一層好適に は、約１０から２０分、最も好適には約１５分行う。 滅菌が発泡性先駆物質充填リポソームの破裂が起こるような温度での熱滅菌以 外の方法で行われる場合には、滅菌は発泡性先駆物質充填リポソームの形成に続 いて行うことができ、好適である。例えば、ガンマ線照射は発泡性先駆物質充填 リポソームが生成する前および／または後に行うことができる。 発泡性先駆物質の滅菌は水性媒体中での乳化の前に０．２２μｍまたはそれ以 下のフィルターを通過させて行う事ができる。このことは、その内容物を同様に 滅菌されかつ無菌充填された水性担体の所定量を含有 するバイアル中直接に無菌濾過することによって容易に行う事ができる。 図１８は、１３０℃１５分間実施したオートクレーブの後続けて１０分間渦巻 撹拌することによって、発泡性先駆物質充填リポソームを成功的に生成すること ができることを示している。さらに、押出しと滅菌工程の後、振盪工程によって 残留無水脂質相を持たない発泡性先駆物質充填リポソームが得られる。図１８Ａ は、オートクレーブ後で濾過前、即ち１０μｍ以上の粒径を持つ多数の発泡性先 駆物質充填リポソームを与える条件で生成した発泡性先駆物質充填リポソームを 示す。図１８Ｂは、約１０μｍの均一粒径を与える１０μｍの「ＮＵＣＬＥＰＯ ＲＥ」フィルターでの濾過後の発泡性先駆物質充填リポソームを示す。 本発明のある実施態様は真空乾燥ガス徐添加法によって製造されかつ治療薬（ 即ち、対比剤または薬含有）を封入する治療薬送達システムに向けられ、この種 のリポソームは治療薬含有真空乾燥ガス徐添加リポソームと呼称する。さらに本 発明は内部に実施的に水が無い治療薬含有ガス充填リポソームを含む治療薬送達 システムに向けられている。この方法は発泡性先駆物質の相転移温度で実施され 、ガスは発泡性先駆物質によって供給される。液体先駆物質はガスとなり、転移 温度でリポソーム中に徐添加される。 本発明のリポソームを製造する方法は、（ｉ）治療薬を封入するリポソームを 負圧下に置くこと；（ｉｉ）リポソームから実質的にすべての水が除かれるに十 分な時間の間リポソームを負圧下でインキュウベートすること；（ｉｉｉ）周囲 圧に達するまで、選択されたガスをリポソーム中に徐添加することからなる。前 記の工程を使用する方法は、本明細書で薬物含有リポソームを製造するための真 空乾燥ガス徐添加法と呼称 する。 真空乾燥ガス徐添加法を使用する本発明のリポソームを製造する装置も提供さ れ、前記装置は（ｉ）治療薬を封入したリポソームを含有する容器；（ｉｉ）リ ポソームから水を引出すために容器に負圧を適用する手段；（ｉｉｉ）負加圧手 段を容器に連結し、前記の水の流動を指向する導管；（ｉｖ）容器のリポソーム 中にガスを導入する手段からなる。 真空乾燥ガス徐添加法によって製造された本ガス充填リポソームと内部に実質 的に水を持たないガス充填リポソームの両方を製造するために使用する真空乾燥 ガス徐添加法は次の工程を含む。第一に、この工程によって、治療薬含有リポソ ームを負圧下（即ち、減圧または真空条件）に置く。第二に、リポソームから実 質的に水を除去し、実質的乾燥リポソームを得るのに十分な時間の間、リポソー ムは負圧下にインキュベートされる。実質的にすべての水の除去および実質的乾 燥リポソームは、本明細書で成句として使用されるように、リポソームは少なく とも約９０％水を持たない、好適には少なくとも９５％水をの持たない、最も好 適には約１００％水を持たないことを意味する。水は除去されるが、高い分子量 をもつ治療薬はあとに残り、リポソーム中に封入される。最後に、リポソームは 、周囲圧に達しまでガスをリポソームに適用することによって、選択されたガス が徐添加され、本発明の本治療薬含有真空乾燥ガス徐添加リポソームおよび内部 に実質的に水を持たない本発明の治療薬含有ガス充填リポソームが得られる。内 部に実質的に水を持たないは、本明細書で使用するように、少なくとも約９０％ 水を持たない、好適には少なくとも９５％水をの持たない、最も好適には約１０ ０％水を持たない内部を有するリポソームを意味する。 思いがけなく、本発明の方法によって製造された治療薬含有リポソームはおお くの驚くべき高度に有利な特性を有する。本発明のリポソームは超音波に対し強 いエコー発現性を示し、ピーク共鳴周波数超音波（および十分な強度と持続時間 を持った他の共鳴周波数）の適用で破裂し、圧力に対し高度に安定であり、およ び／または乾燥貯蔵もしくは液体媒体中で懸濁された場合一般的に長い貯蔵寿命 を持つ。ガス充填リポソームは例えば安定な粒径、低毒性、および柔軟な膜とい う利点を有する。発泡性先駆物質充填リポソームの柔軟な膜は、腫瘍のような組 織にこれらリポソームを蓄積しまたは標的指向することを助ける点で有用である と考えっられる。ガスで充填する真空乾燥ガス徐添加法の間のリポソームがカッ プ様形状に不可逆的に破裂しないでむしろ元の環状形状に戻ることができること は思いがけないことである。 リポソームのエコー発現性および超音波を使用してピーク共鳴周波数でリポソ ームを破裂させる能力によって、患者への投与および液体先駆物質のガスへの転 移、所望の部位中のリポソームの存在および超音波を使用するリポソームの破裂 を決定するためのリポソームの監視が可能になり、患者の部位への治療薬の調節 送達ができる。好適には、本発明のリポソームは２ｄＢ以上、好適には約４ｄＢ と約２０ｄＢの間の反射能を有する。この範囲内で、本発明のリポソームは、大 きいリポソームによって、リポソームの高濃度によって、および／または高超音 波周波数を使用した場合、最高の反射能を示す。図１３は、真空乾燥ガス徐添加 法によって製造され、薬物を封入していない、内部に実質的に水を持たないガス 充填リポソームのｄＢ反射能示すグラフである。好適には、本発明のリポソーム は約０．５ｍＨｚと１０ｍＨｚの 間のピーク共鳴周波数を有する。勿論、本発明の発泡性先駆物質充填とガス充填 リポソームのピーク共鳴周波数は直径およびある程度はリポソームの弾力性によ って変わり、大きくかつ弾力性のあるリポソームは小さくかつ弾力性のあるリポ ソームより低い共鳴周波数を有する。 本発明のリポソームの安定性は実用的に非常に重要である。本リポソームは、 加圧または他の技術のような既知の方法によって製造された通常の液体、水性、 および／またはガス充填リポソームよりも貯蔵中に高い安定性を持つ傾向がある 。生成の７２時間後、例えば通常の方法で製造された、ガス含有リポソームはし ばしば実質的に水を持たず、ガスはリポソームから拡散し去ったか、および／ま たはリポソームは破裂してしまったか、および／または融解して反射能を同時に 失ったかである。比較すると、本発明の治療薬含有発泡性先駆物質充填リポソー ムは一般的に約３週間以上の保存寿命安定性、好適には約４週間以上の保存寿命 安定性、さらに好適には約５週間以上の保存寿命安定性、一層好適には約４か月 間以上の保存寿命安定性、しばしばさらに長い６か月、２０か月または２年を超 える保存寿命安定性を有する。 ガスで充填する真空乾燥ガス徐添加法の間のリポソームが、従来技術で予期さ れていたようにカップ様形状に不可逆的に破裂しないで、むしろ元の環状形状に 戻ることができることは思いがけないことである。Ｃｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．， Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓ ｉｃｓ，Ｖｏｌ．２４２，ｐｐ．２４０−２４７（１９８５）；Ｃｒｏｗｅ ｅ ｔ ａｌ．，Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂ ｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，Ｖｏｌ．２２０，ｐｐ．４７７−４８４（１９８３）；Ｆ ｕｋｕｄ ａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｖｏｌ．１０８，ｐｐ．２ ３２１−２３２７（１９８６）；Ｒｅｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅ ｍ．Ｓｏｃ．，Ｖｏｌ．１０２，ｐｐ．６６３８−６６４０（１９８０）参照。 本発明の真空乾燥ガス徐添加法の処理を受ける治療薬含有リポソームは、当業 者に明らかな種々の通常リポソーム製造技術のいずれか一つを使用して製造する ことができる。多数の変法のいずれも使用できるが、好適には、治療薬含有リポ ソームはマイクロエマルション化法によって製造される。種々の通常方法によっ て製造されたリポソームは、本発明の治療薬含有リポソームを製造するために、 本発明の真空乾燥ガス徐添加法で使用することができる。 本発明の真空乾燥ガス徐添加法で使用されるリポソームを製造する際に利用す る物質には、リポソーム構築にてきするものとして当業者には公知であるいずれ の物質およびその組合わせが含まれる。 リポソームは、当業者に明らかな種々の通常リポソーム製造技術を使用して、 ガス徐添加の前に製造される。これらの技術には、凍結−融解、並びに超音波処 理、キレート透析、均質化、溶媒侵出、マイクロエマルション化、自然形成、溶 媒蒸発、フレンチ受圧器法、調節洗剤透析、およびその他のような技術が含まれ 、各技術には治療薬が得られたリポソームに封入、網入、または結合されるよう に、所望の治療薬を含有する溶液中で種々の方法でリポソームを製造することが 含まれる。その他、治療薬をリポソーム中にｐＨ勾配法を使用して添加すること ができ、この技術は、当業者が認識するように、特定ｐＨでプロテイネション（ ｐｒｏｔｅｉｎａｔｉｏｎ）または脱タンパク質する治療薬に特に適用で きる。例えば、ｍａｄｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐ ｈｙｓｉｃｓ ｏｆ Ｌｉｐｉｄｓ，１９９０ ５３，３７−４６を参照のこと 、この全開示内容は引用することにより本明細書に取込まれている。 真空乾燥ガス徐添加法のために治療薬含有リポソームを製造するために、一般 的指導書によって、ジパルミトイルホスファチジルコリンリポソームは、封入す る治療薬を含有するリン酸緩衝食塩水または水中にジパルミトイルホスファチジ ルコリン脂質を懸濁すること、および脂質を約５０℃、ジパルミトイルホスファ チジルコリン液体のゲル状態から液晶状態への転移に必要な温度４１℃より少し 高い温度に加熱し、治療薬含有リポソームを生成させることによって製造するこ とができる。 約２ミクロンの不均質な粒径分布をもつ多重層媒体を製造するために、リポソ ームを手動で徐々に混合し、その間リポソーム溶液を約５０℃に保持する。温度 を室温まで下げ、リポソームはそのまま残る。ジパルミトイルホスファチジルコ リンリポソームを規定の細孔径のポリカーボネートフィルターを通して押出す方 法を使用して、所望に応じて、均一な粒径分布をもつリポソームを作成すること ができる。この技術に有用な装置は、押出しが脂質のゲル状態から液晶状態への 相転移温度以上で便利的に行うことができように、断熱バレルを装備した押出機 （Ｅｘｔｒｕｄｅｒ Ｄｅｖｉｃｅ（商標），Ｌｉｐｅｘ，Ｂｉｏｍｅｍｂｒａ ｎｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）である。 水性媒体に殆ど不溶である親油性治療薬の場合、この種の治療薬はリポソーム を生成する前に脂質自体と混合される。例えば、アンホテリシンは乾燥脂質（例 えば、クロロホルム中で卵ホスファチジルコリンとコ レステロールの８：２モル比）と懸濁させ、脂質と混合させる。クロロホルムを 蒸発させ（エタノールまたはエーテルのような他の適切な有機溶媒も使用できる ことに注意）、親油性治療薬の混合物を含有する乾燥脂質を水性媒体、例えば無 菌水または生理学的食塩水中に再懸濁する。この方法は、コルチコスイェロイド のような種々の治療薬に使用されて、親油性薬物をリポソーム膜に取込むことが できる。得られたリポソームを乾燥して、上記の真空乾燥ガス徐添加法の処理を 受ける。 その他、一般的指導書によって、通常の凍結−融解方法を使用して、複数膜ま たは一枚膜のジパルミトイルホスファチジルコリンリポソームを生産することが できる。凍結−融解方法の後、リポソームについて上記の押出方法を行う。 このように製造された治療薬含有リポソームを本発明の真空乾燥ガス徐添加法 で処理して、治療薬含有真空ガス徐添加リポソームおよび本発明の内部に実質的 に水を持たない治療薬含有温度活性化発泡性先駆物質充填リポソームを生産する ことができる。本発明によれば、治療薬含有リポソームを、リポソームの負圧（ 即ち、減圧または真空条件）処理に適する容器中に入れる。負圧を、リポソーム から実質的に水を除去するのに十分な時間の間適用すると、実質的に乾燥したリ ポソームが生成する。本開示で一旦武装した当業者が認識するように、種々の負 圧を使用することができ、重要なパラメータは実質的にすべての水をリポソーム から除去することである。一般的に、少なくとも約７００ｍｍＨｇ、好適には約 ７００ｍｍＨｇと７６０ｍｍＨｇ（ゲージ圧）の間の範囲の負圧を約２４からあ 約７２時間適用すれば、リポソームから実質的にすべての水を除去するには十分 である。他の適切な圧力と時間は当業者には 開示を勘案して明らかである。 最後に、選択されたガスをリポソームに適用して、周囲圧に達するまでリポソ ームにガスを徐々に添加し、本発明に薬物含有真空乾燥ガス徐添加リポソーム、 および内部に実質的に水を持たない薬物含有発泡性先駆物質充填リポソームが生 成する。好適には、ガス徐添加は緩慢に、即ち少なくとも４時間の期間に亙って 、最も好適には約４から約８時間の間の期間に亙って起こる。 種々の生体適合性ガスを使用することができる。この種のガスには、空気、窒 素、二酸化炭素、酸素、アルゴン、キセノン、ネオン、またはこれらのすべての 組合わせが含まれる。他の適切なガスは当業者に明らかであり、選択されたガス はリポソームの提案用途によってのみ制限される。本明細書に記載した発泡性先 駆物質の外に、先駆物質が他のガスと共取込みされる。例えば、周囲ガス（空気 ）を含有する密閉環境中で発泡性先駆物質からガスへの転移の間に、２種のガス が混合して、マイクロスフェアの撹拌および生成の時、マイクロスフェアのガス 内容物は混合されるガスの密度に依存して２種またはそれ以上のガスの混合物に なる。 リポソームの上記の製造方法は以下真空乾燥ガス徐添加法と呼称する。 所望に応じて、リポソームを負圧処理する前にリポソームを冷却し、この種の 冷却は好適である。好適には、リポソームは、リポソームを負圧処理する前に、 ０℃以下に、さらに好適には約−１０℃と約−２０℃に、最も好適には−１０℃ に冷却される。所望の負圧に達した時、リポソームから実質的にすべての水が除 去されるまで、リポソーム温度は好適には０℃以上に、さらに好適には約１０℃ と約２０℃の間に、最も好適にはには１０℃に昇温され、温度が室温に戻った時 、負圧は停止され る。 リポソームを０℃以下の温度に冷却する場合、真空乾燥ガス徐添加法、初期に 極低温保護剤の存在で製造されたリポソーム、または極低温保護剤を本発明の真 空乾燥ガス徐添加法を実施する前に添加したリポソームについて実施するのが好 適である。この種の極低温保護剤は強制的に添加されないが、低温でのリポソー ム膜の無傷性を保持するのを助け、膜の究極の安定性を増加する。好適な極低温 保護剤はトレハロース、グリセロール、ポリエチレングリコール（特に、分子量 ４００のポリエチレングリコール）、ラフィノース、スクロース、およびソルビ トールであり、トレハロースとポリエチレングリコールはとくに好適である。 驚くべきことに、本発明のリポソームは圧力の変化に対して極めて安定である ことが発見された。この特性のために、真空乾燥とガス徐添加後に規定の細孔径 のフィルターを通すリポソームの押出しを所望に応じて実施し、相対的に均一で 規定の細孔径のリポソームを生産することができる。 本発明の他の観点では、内部に実質的に水を持たない本発明の真空乾燥ガス徐 添加リポソームおよび治療薬含有ガス樹リポソームを製造する装置が提供される 。さらに詳しくは、リポソームを真空乾燥する好適な装置、および乾燥リポソー ム中にガスを徐々に添加する好適な装置が図１４に示される。装置は治療薬含有 リポソーム１９を含有するための容器８からなる。所望に応じて、装置は容器８ の周りにドライアイス１７を含有する氷浴５を含む。氷浴５とドライアイス１７ によって、リポソームは０℃まで冷却される。真空ポンプ１は容器に持続的負圧 を適用するための導管１５を介して容器８に連結されている。好適な実施態様で は、ポンプ１は、少なくとも約７００ｍｍＨｇの負圧、好適には約７００ｍｍＨ ｇから約７６０ｍｍＨｇ（ゲージ圧）の範囲の負圧を適用することができる。容 器８に適用される負圧の監視を可能にするため、マノメータ６が導管１５に連結 されている。 リポソームから除去された水がポンンプ１に入らないようにするため、一連の トラップが導管１５に連結され、リポソームから引出された水（と水蒸気、すべ てまとめて水を呼称する）の収集を助ける。好適な実施態様では、二つのトラッ プが使用される。第一トラップは好適にはドライアイス１７をもつ氷浴５中に配 置されたフラスコ７を含む。第二のトラップは好適には周りをチューブ１６が螺 旋状に取巻いているカラム３を含む。カラム３はその頂端において導管１５と、 その底部においてチューブ１６と連結している。チューブ１６に他の末端は導管 １５と連結している。図１４に示すように、ドライアイス１７をもつ氷浴２はカ ラム３とチューブ１６を囲っている。所望に応じて、ドライアイス１７は液体窒 素、液体空気または他の極低温物質と取り替えることができる。氷浴２と４はト ラップ中に収集するために水の収集とリポソームから引出された水蒸気の凝縮を 助ける。本発明の好適な実施態様では、氷トラップ２と４はともに少なくとも約 −７０℃の温度に維持されている。 ストップコック１４は容器８の上流で導管１５に配置され、選択されたガスが ガスボトル１８から容器８中とリポソーム１９中に導入される。 リポソームを製造する方法にための一つの温度に装置が維持されるように、装 置はまた温度を調節する手段を含有する。例えば、好適な実施態様では、リポソ ームを製造する方法は発泡性先駆物質の沸点以下の温度で実施される。好適な実 施態様では、液体発泡性先駆物質はリポソー ムの内部空間を充填する。他の他、ガスがリポソーム中に含有されるように、装 置は発泡性先駆物質の液体から気体への転移温度の温度に維持される。さらに、 発泡性先駆物質は液体として始めるが、得られるリポソーム中にはガスが取込ま れるように、装置の温度はリポソームを製造する方法の間ずっと調整される。こ の実施態様では、方法は相転移温度以下の温度で始まり、発泡性先駆物質の相転 移温度近辺の温度に調整されるように、装置の温度はリポソームを製造する方法 の間調整される。 本発明の装置は治療薬含有リポソーム１９を容器８中に入れることによって使 用される。好適な実施態様では、ドライアイス１７をもつ氷浴５を使用して、リ ポソームの温度を０℃以下に、さらに好適には−１０℃と約−２０℃の間に、最 も好適には−１０℃にまで低下させる。ストップコック１４と９が閉じて、真空 ポンプを稼働させる。ストップコック１０、１１、１２、および１３を注意深く 開けて、真空ポンプ１によって容器８中に真空を作成する。圧力はマノメータ６ によって少なくとも約７００ｍｍＨｇ（ゲージ圧）、好適には約７００ｍｍＨｇ と約７６０ｍｍＨｇの間の範囲の負圧に達するまで測定される。本発明の好適な 実施態様では、この種の水が真空ポンプ１に入らないように、ドアイアイス１７ をもつ氷浴４によって冷却される容器７およびドアイアイス１７をもつ氷浴２に よって冷却されるカラム３とコイル１６は、共にまたは個々にリポソームから引 出された水蒸気とトラップ水を凝縮する。本発明の好適な実施態様では、トラッ プ２と４の温度は各々少なくとも約−７０℃の温度に維持される。水と水蒸気が 容器８中のリポソーム１９から除去され、容器３と７中で凍結するまで、所望の 負圧が一般的に少なくとも２４時間維持される。システム中の圧力はマノメータ を使用し て監視され、一般的に約２４から約７２時間、リポソームから実質的にすべての 水が除去される時間維持される。この時点で、ストップコック１４をゆっくりと 閉じ、真空ポンプ１を停止する。ストップコック１４を徐々に開き、ガスをガス ボトル１８からストップコック１４を通って導管１５を介してシステム中にゆっ くりと導入して、容器８中の治療薬含有リポソーム１９中に徐々に添加する。好 適には、ガス徐添加は、少なくとも４時間の期間に亙って、最も好適には約４と 約８時間の間の期間に亙って、システムが周囲圧力に達するまで、ゆっくりと起 こる。 治療薬含有真空乾燥ガス徐添加リポソームとその内部に実質的に水を持たない 本発明の治療薬含有ガス樹リポソームは治療薬送達媒体として優秀な特徴を有す る。 本発明の方法によって製造されたガス充填リポソームは、多くの点において、 物理的と機能的特性の両方において、従来技術のリポソームとは異なっていると 考えられる。例えば、本発明のリポソームはその内部に実質的に水を持たない。 定義によれば、従来技術のリポソームは水性媒体の存在を特徴とすることができ る。例えば、Ｄｏｒｌａｎｄ′ｓＩｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄ ｉｃｔｉｏｎａｒｙ，ｐ．９４６，２７ｔｈ ｅｄ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒ ｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ １９８８）参照。さらに、本 リポソームは驚くべきことに超音波に対し強いエコー発現性を示し、リポソーム のピーク共鳴周波数の超音波を適用した時に破裂し易く、かつ治療薬送達システ ムとしてリポソームを使用する際に大きな利益となる特徴である長期の保存寿命 を有する。 従って、本発明は、（ｉ）真空乾燥ガス徐添加法によって製造され、 かつ治療薬を封入したガス充填リポソーム、および／またはその内部に実質的に 水を持ない、かつ治療薬を封入したガス充填リポソームを患者に投与すること； （ｉｉ）発泡性先駆物質の液体から気体への相転移を決定し、かつ部位中のリポ ソームの存在を決定するために、超音波を使用してリポソームを監視すること； （ｉｉｉ）超音波を使用して部位中に治療薬を放出することからなる、患者の部 位へ治療薬を制御送達する方法に関する。 本発明のリポソームについては、本明細書に記載するもの以上に種々の他の用 途がある。この種の追加の用途には、例えば超音波の発熱増強剤としておよび超 音波画像用コントラスト剤としてのような用途が含まれる。この種の追加の用途 および他の関連主題は本出願人の特許出願、米国出願番号７１６，７９３および 米国出願番号７１７，０８４に記載され、特許請求されていて、これらの全開示 内容は引用することにより本明細書に取り込まれている。 本発明はさらに次の実施例に記載される。実施例１と２は治療薬を含有する発 泡性先駆物質充填マイクロスフェアの製造方法、試験および利用を記載した実際 例である。残余の実施例のすべては予言的なものである。実施例３−２１は治療 薬を含有する発泡性先駆物質充填マイクロスフェアの製造方法、試験および利用 を記載する。実施例２２−２９はガスの存在で脂質を含む水性溶液を振盪するこ とによって製造された発泡性先駆物質充填リポソームの製造方法および試験を説 明する。実施例３０−３６は脂質懸濁液の濾過とオートクレーブの後脂質溶液を 振盪することによって製造された発泡性先駆物質充填リポソームの製造方法と分 粒を説明する。実施例３７と３８は治療薬含有温度活性化発泡性先駆物 質充填リポソームの製造方法に向けられている。次の実施例は添付した請求の範 囲を制限するものと解釈してはならない。 実施例 １ 以下に記載の方法は、ＤＮＡような治療薬がガス充填マイクロスフェア中に封 入されることができ、超音波を使用してガス充填マイクロスフェアから治療薬を 放出するすることができることを示す。下記のように、水とＤＮＡを封入してい るリポソームは同一量の超音波エネルギーに暴露された後も遺伝子物質を放出す ることはなかった。マイクロスフェア内部にガスが存在すると、超音波エネルギ ーのより効率的な捕捉が起こり、このことが遺伝子物質のような治療薬の送達に 利用される。 ガス充填リポソームは次のように合成された。純粋のジパルミトイルホスファ イチジルコリン（ＤＰＰＣ）、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ａｌ ａｂａｓｔｅｒ，Ａｌａ．、を標準食塩水中に懸濁し、次いでＥｘｔｒｕｄｅｒ Ｄｅｖｉｃｅ（Ｌｉｐｅｘ Ｂｉｏｍｅｍｂ ｒａｎｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅ ｒ，Ｃａｎａｄａ）を８００ｐ．ｓ．ｉ．で使用して２ミクロンのポリカーボネ ート・フィルター（Ｎｕｃｌｅｐｏｒｅ，Ｃｏｓｔｅｒ，Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ ，ＣＡ．）を通して５回押出した。次いで、得られたリポソームを、Ｕ．Ｓ．Ｓ ｅｒｉａｌ Ｎｕｍｂｅｒ ７１６，８９９（引用することによりその全体が本 明細書に取込まれている）の記載の通り、減圧下で乾燥した。完全に乾燥した後 、Ｕ．Ｓ．Ｓｅｒｉａｌ Ｎｕｍｂｅｒ ７１６，８９９の記載の通り、窒素ガ スで徐々に充填した。周囲圧力で平衡した後、得られたリポソームを食塩水（０ ．９％ＮａＣｌ）中に懸濁し、激しく振盪した。 次いで、得られたガス充填リポソームをＣｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕｎｔ ｅｒ（Ｂｅｄｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ）によって粒径について試験 した。機器をＣｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕｎｔｅｒから供給された操作説明書の記載 の較正方法を使用して較正した。ガス充填リポソーム溶液をＩｓｏｔｏｎ ＩＩ で希釈し、ガラス容器中に入れ、Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｓａｍｐｌｉｎｇ Ｓｔａｎ ｄの第３位置で撹拌した。 最初、１００μｍのアパーチュア・チューブを使用した。このアパーチュア・ チューブを使用して、一回に５００μｌの溶液を選択された粒径の範囲について 試験した。使用した次の粒径のアパーチュア・チューブは３０μｍであった。こ のチューブを使用して、マイクロスフェアを約１μｍまで粒度測定することがで き、その中でガス充填マイクロスフェアの平均直径を検出した。 一回に５０μｍの溶液を試験し、マイクロスフェアを選択された範囲の各粒径 について計数した。データをＣｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕｎｔｅｒ Ｍｏｄｅｌ Ｚ ＭとＣｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕｎｔｅｒ Ｃｈａｎｎｅｌｙｚｅｒ ２５６の両方 に収集した。準弾性光線散乱法（ＱＥＬ）と光学顕微鏡法を使用した。前決定さ れた粒径をもつラテックスビーズを使用して、接眼レンズ中のグリッドを較正し た。これらのグリッドは各１０Ｘ、４０Ｘ、１００Ｘ、４００Ｘ、１０００Ｘの 倍率について較正した。ガス充填マイクロスフェアをガラススライド上に置き、 種々の倍率で観察した。この方法によって、ガス充填リポソームだけではなく、 脂質粒子も粒度計測ができた。 ガス充填リポソームをＡｃｏｕｓｔｉｃ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｍｏｄｅｌ ５２ ００ 臨床用超音波機器（Ａｃｏｕｓｔｉｃ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌ ｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐ．，Ｐｈｅｅｎｏｘ，ＡＺ）と 特注卓上機器の両方を使用して超音波エネルギーで走査した。卓上音響ラボは、 Ｌｅｃｒｏｙ ９４１０Ｄｉｇｉｔａｌ Ｏｓｃｉｌｌｏｓｃｏｐｅ（Ｌｅｃｒ ｏｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ｃｏｐｏｒａｔｅ Ｈｅａｄｑｕａｒｔｅｒｓ ，Ｃｈｅｓｔｎｕｔ Ｒｉｄｇｅ，Ｎ．Ｙ．）、Ｐａｎａｍｅｔｒｉｃｓ Ｍｏ ｄｅｌ ５０５２ＰＲ Ｐｕｌｓｅｒ／Ｒｅｃｅｉｖｅｒ（Ｐａｎａｍｅｔｒｉ ｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓ）、２．２５，３．５，５．０，７ ．５，１０．０ ＭＨｚの周波数をもつＰａｎａｍｅｔｒｉｃｓ侵漬トランジュ ーサ（Ｐａｎａｍｅｔｒｉｃｓ，ＩＮｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓ）、およ びＴｅｓｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｔｅｓｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｅｘｔｏｎ，ＰＡ） による直列システムから構成されている。参考標準、組織模造の疑似模型、を使 用して時間−ゲイン補償（ＴＧＣ）を設定し、この様に平均振幅を設定する。組 織模倣の疑似模型はＲａｄｉａｔｉｏｎ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ． （Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ，ＷＩ）で制作されたものである。 表２に示すように、ガス充填リポソームの反射能は、試験した周波数の全範囲 に亙って、これら実験で使用したパルス音響の最高エネルギーにおいて、一定で ある。詳しくは、４．５−８．４ｍＶに設定した出力で、３．２５ｍＶ／ｃｍ² の音響強度（Ａｃｏｕｓｔｉｃ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｍｏｄｅｌ ＡＩ５２００ 臨床用超音波機器により発生させることができるパルス音響の最高パワー設定値 ）で６０分間連続走査したが、ガス充填リポソームの反射能は一定である。 ガス充填リポソームの溶液も、Ｒｉｃｈ−Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｕｌｔｒ ａｓｏｕｎｄ ａｐｐａｒａｔｕｓ ｍｏｄｅｌ ＲＭ−２５（Ｒｉｃｈ−Ｍａ ｒ Ｃｏｒｐ．，Ｉｎｏｌａ，ＯＫ）で適用される連続波超音波エネルギー処理 を行った（表４）。表４は連続波超音波を使用して生産された出力を示す。超音 波の連続波エネルギーによってガス充填リポソーム内部のガスがリポソームから 脱出し、それ故リポソームを破裂させることが分かる。食塩溶液中のガス充填リ ポソームを５ワットの出力と１ＭＨｚで完全に破壊するのに約２０−３０分を要 した。１０ワットの出力と１ＭＨｚではガス充填リポソームを完全に破壊するの に約５分を要した。ガス充填リポソームを高エネルギー超音波の適用前と後で光 学顕微鏡で検討した時、暴露の後はガス充填リポソームの球形は消滅していた。 次いで、一連の実験で、ガス充填マイクロスフェアをＤＮＡを送達する能力に ついて試験した。１ｃｃの標準食塩水中の７０００ｂｐプラスミド（ｐＣＨ１１ ０：Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｐｉｓｃａｔ ａｗａｙ，ＮＪ）上の２μｇのＤＮＡを乾燥ＤＰＰＣの再懸濁中に添加したこと を除いて、リポソームをＤＰＰＣから上記の通り調製した。次いで、ガス充填リ ポソームを上記の通り調製した。ガス充填リポソームの再懸濁の後、外部の非封 入ＤＮＡをアフィティークロマトグラフィによって除去した。ガス充填リポソー ムとＤＮＡの懸濁液を蠕動型ポンプ（Ｅｃｏｎｏｐｕｍｐ，Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌ ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を使用してカラム（ＤＮＡ 特異的Ｓｅｐｈａｄｅｘ（商標））に通塔した。ＤＮＡ親和性基質は非封入ＤＮ Ａに結合しそれを保持する。ガス充填マイクロスフェアは溶出する。 乾燥ガス徐添加工程を省略したことを除いて、水を充填したリポソームを上記 の方法の通り調製し、ＤＮＡを封入した。非封入ＤＮＡをクロマトグラフィで除 去した。次いで、ガス充填リポソームを上記の通り超音波で走査した。ＤＮＡ含 有するガス充填リポソームは上記のようにパルス超音波に対して同様にエコー発 現性（ｅｃｈｏｇｅｎｉｃ）であっ た。上記のように連続波超音波で走査した後は、マイクロスフェアはそのエコー 発現性を失った。連続波超音波での処理の後、遊離ＤＮＡ（即ち、ガス充填リポ ソームの外部にあるＤＮＡ）についてプロピオジウムヨージドダイマー検査を行 い、対照ＤＮＡ含有ガス充填リポソーム（即ち、連続波超音波に暴露していない ）と比較した。 最初、２ｍｌアリコートのガス充填マイクロスフェアを試験管に添加した。２ ｍｌのＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）を添加し、試験管をパラフィルムで密封した 。試験管を数回逆転させて、約５分間静置し、マイクロスフェアを分離させた。 底部の水層をパスツールピペットで試験管か取出した。この走査を全部で３回反 復して、マイクロスフェアを洗浄した。次に、０．０５μ／ｍｌのＤＮＡの２ｍ ｌアリコートをマイクロスフェアに添加し、試験管を密封し逆転させて混合した 。底部の水層をパスツールピペットで試験管か取出した。他の２ｍｌアリコート のＰＢＳを添加し、この操作を反復してすべての非結合ＤＮＡを洗い出した。こ の操作を全部で５回反復し、水層を分析のために取って置いた。 次いで、マイクロスフェアを２ｍｌのＰＢＳで希釈し、ガス充填マイクロスフ ェアが視覚されなくなるまで超音波を適用した。 超音波を適用した後、放出ＤＮＡを検出するためにＤＭＳＯ中２×１０^-5の濃 度のプロピオジウムヨージドダイマー（ＰＯＰＯ−３ヨージド、Ｍｏｌｅｃｕｌ ａｒ Ｐｒｏｂｅ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）の１４μｍを各２ｍｌの試 料に添加した。対照として、１４μｌのプロピオジウムヨージドをＰＢＳ単独の ものとＰＢＳ中の０．０２５μｇ／ｍｌＤＮＡに添加した。 試料の蛍光をＳｐｅｘ Ｆｌｕｏｒｏｇ ２ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏ ｔｏｍｅｔｅｒで５３４ｎｍの励起周波数を使用して測定した。発光は以下の表 ５に示すように５５８ｎｍで記録した。各試料中の実測されたＤＮＡの相対量は 、ＰＢＳ中のプロピジウムヨージドダイマーよりなる対照ＰＢＳ試料に基づく外 挿によって決定した。 洗浄サイクルは非結合ＤＮＡを除去するのに役立った。上記の表５に示すよう に、５回の洗浄サイクルの後、ガス充填マイクロスフェアはまだ約２１％のプラ スミドＤＮＡを含有した。 高エネルギー超音波に暴露されていないＤＮＡ含有ガス充填リポソームは内部 に大量のＤＮＡを保持し、そのことはプロピジウムヨージドダイマーからの蛍光 の顕著な増加がないことによって示された。しかし、連続波超音波に暴露された 後は、プロピジウムヨージドからの蛍光は顕著に増加し、このことはガス充填マ イクロスフェアからのＤＮＡの高程度の放出が連続波超音波エネルギーが原因で あることを示した。従って、 ＤＮＡは超音波が適用されるまでマイクロスフェアに保持されていた。超音波を 適用されると、封入ＤＮＡは放出された。 実施例 ２ ホスファチジン酸を含有するリポソームおよび発泡性先駆物質とガス含有リポ ソームによるＤＮＡの結合。ジステアロイル−ｓｎ−グリセロホスフェート（Ｄ ＳＰＡ）（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏａｒ Ｌｉｄｉｄｓ，Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＡＬ ）の７３０ｍＭ溶液を標準食塩水中に懸濁し、５０℃で渦巻撹拌した。この懸濁 液を室温まで放冷した。４０μｇのｐＢＲ３２２プラスミドＤＮＡ（Ｉｎｔｅｒ ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｈａ ｖｅｎ，ＣＴ）をこのリピドに添加し、静かに振盪した。溶液をＢｅｃｋｍａｎ ＴＪ−６ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ（Ｂｅｃｋｍａｎ，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，Ｃ Ａ）で１０分間遠心分離した。上澄液と沈殿のＤＮＡ含量をＨｏｅｆｅｒＴＫＯ −１００ ＤＮＡ Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ（Ｈｏｅｆｅｒ，Ｓａｎ Ｆｒａｎ ｃｉｓｃｏ，ＣＡ）を使用して検査した。この方法はＤＮＡ特異的である挿入染 料、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８を使用するので、二本鎖ＤＮＡのみを検出する 。ホスファチジン酸で調製された陰電荷リポソームは驚くべきことにＤＮＡと結 合することが分かった。対照としてＤＰＰＣから構成された中性リポソームを使 用して上記のことを反復した。ＤＰＰＣリポソームには相当量のＤＮＡは検出さ れなかった。マイクロスフェア中の８７：８：５モル％のＤＰＰＣ：ＤＰＰＥ− ＯＥＧ５００：ＤＰＰＡリピド混合物から調製されたガス充填リポソームを使用 して上記のことを反復した。再度、ＤＮＡはジパルミトイルホスファチジン酸を 含有するガス充填リポソームに結合することが分かった。 実施例 ３ ＤＯＴＭＡのようなカチオン性リピドをＤＰＰＣと１：３モル比で混合した。 混合物をクロロフォルム中に溶解し、ロータリー濃縮器でクロロフォルムを除去 した。乾燥試料に水を添加し、混合物をＥｘｔｒｕｄｅｒ Ｄｅｖｉｃｅ（Ｌｉ ｐｅｘ Ｂｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓ， Ｉｎｃ．，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ） を使用して２μｍのフィルターを通して押出した。米国出願番号７１７，０８４ 、出願６／１８／９１（引用することによりその全部が本明細書中に取り込まれ ている）に記載の方法に従って陽電荷の発泡性先駆物質充填リポソームを調製し た。 得られた乾燥した陽電荷の発泡性先駆物質充填リポソームをＰＢＳ、食塩水ま たは他の適切な緩衝液（ＨＥＰＥＳのような）を添加して再水和した。均質混合 を確保するために渦巻撹拌器を使用した。ＤＮＡを添加し、混合物を再び振盪し た。ＤＮＡはカチオン性発泡性先駆物質充填リポソームの表面に付着されるので 、非付着ＤＮＡをフィルターもしくは選択クロマトグラフィで除去することがで きる。カチオン性リピドが飽和する点まで実質的にすべてのＤＮＡは結合する。 その他、押出し工程の前にＤＮＡを添加することができ、上記の操作が続く。 得られたＤＮＡコーティングリポソームを乾燥し、発泡性先駆物質を徐々に添 加してＤＭＡ含有発泡性先駆物質充填リポソームを作成した。得られたリポソー ムに連続波超音波を暴露し、その破裂を超音波の反射能と吸収度によって試験し た。 ＤＮＡが発泡性先駆物質充填マイクロスフェアの内部または外側上に封入さて いるいる場合、超音波を使用して遺伝子物質を放出することが できる。発泡性先駆物質充填マイクロスフェアの外側上へＤＮＡが取り込まれる ので、マイクロスフェア内にガスを包含するスペースが増える。直径をさらに効 果的に大きくすると、マイクロスフェアは一般的に遺伝子物質を放出するために 超音波エネルギーを利用するのにさらに効果的なものになる。 ＤＮＡを結合するカチオン性リピドは、利点例えば、超音波エネルギーがリポ ソームの膜を破裂させると、疎水性基はＤＮＡが細胞中に統合するのを助け、細 胞膜および核室（ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）への通過 を援助するという利点を提供すると考えられる。 上記のカチオン性リピドはＤＮＡの陰電荷を中性化する利点と両親媒性を有す る。カチオン性リピドがリポソームから放出された場合、リピドは両親媒性であ り細胞膜は可溶性であるから、細胞ならびに核室への通過を促進する。 実施例 ４ １：２モル比のＤＯＴＭＡとＤＰＰＣを含む発泡性先駆物質充填リポソームを 製造し、ＨＬＡ（主要組織適合性抗原）をコードするＤＮＡでコーティングした 。ＤＮＡコーティングリポソームに軟質組織関与の転移性メラノーマを持つ患者 に静脈注射する。発泡性先駆物質は患者中に入ると、液体から気体に転移を受け る。ＨＬＡ−Ｂ７ ＤＮＡが腫瘍中に蓄積するように、連続波１．０メガヘルツ 超音波エネルギーを軟質組織に適用する。腫瘍細胞のいくつかはＨＬＡ−Ｂ７遺 伝子によって形質転換され、その結果免疫反応がおこり、患者のＴ細胞を剌激し て腫瘍を拒絶すると考えられる。 実施例 ５ ｒａｓ遺伝子に対するアンチセンスオイゴヌクレオチドはポリエチレングリコ ール−ジパルミトイルホスファアチジルエタノールアミンを含むリポソーム内に 封入される。これらのリポソームを転移性結腸癌をもつ患者に静脈注射する。発 泡性先駆物質は患者中に入ると液体から気体へ転移する。連続波１．０メガヘル ツ超音波エネルギーを転移部に適用する。 実施例 ６ 卵ホスファチジルコリンとＤＯＴＭＡ、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルキ シ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリドを使用して上記 のように発泡性先駆物質充填マイクロスフェアを調製し、ジストロピン遺伝子を 持つＹＡＣ発言ベクターを結合させた。マイクロスフェアをデュシェーム筋肉ジ ストロフィー（またはＢｅｃｋｅｒ′ＭＤ）をもつ患者に静脈注射する。発泡性 先駆物質は患者中に入ると液体から気体へ転移する。連続波１．０メガヘルツ超 音波エネルギーを患者の筋肉組織に適用すると、筋肉の強度と質量が増加するこ とができる。 実施例 ７ ＤＰＰＣと１：１モル組成でリピドを持ち１−フルオロブタン発泡性先駆物質 を封入するマイクロスフェアのミセル形成物内にＹＡＣ発現ベクター上のＣＦＴ Ｒ（膵嚢胞性繊維症膜内外伝導度調節因子）を封入する。マイクロスフェアを膵 嚢胞性繊維症の患者に静脈注射し、超音波エネルギーを感染組織（例えば、肺臓 、膵臓など）に適用する。発泡性先駆物質は患者の体温を受けると液体から気体 へ転移する。患者は肺臓中 の粘液蓄積の減少を示し、他の感染器官の作用を改善することができた。 実施例 ８ インターロイキン−２（ＩＬ−２）遺伝子をコードするＤＮＡを含有するカチ オン性マイクロスフェアを転移性腎臓癌の患者に注射する。先駆物質の液体から 気体への転移を監視する。患者の腹部中の癌の増殖を超音波で走査する。マイク ロスフェアが腫瘍中に蓄積するにしたがって、腫瘍からの後方散乱および超音波 エコーのスペクトル同調サインは増加する。ガス充填マイクロスフェアのスペク トル超音波サインが腫瘍から消失する点まで、超音波出力、パルス持続時間およ びパルス反復は増加する。水中聴音器で検出しながら注意深く出力を調節するこ とによって、空洞形成が調節される。この処置によって、腫瘍のいくつかはＩＬ −２遺伝子でトランスフェクションされる。次いで、Ｔ細胞リンパ球がサイトカ インに応答し、腫瘍に浸潤し破壊する。 実施例 ９ 腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の遺伝子をコードするＤＮＡを送達するカチオン性マ イクロスフェアを転移性腎臓癌の患者に注射する。先駆物質の液体から気体への 転移を監視する。患者の腹部中の癌の増殖を超音波で走査する。マイクロスフェ アが腫瘍中に蓄積するにしたがって、腫瘍からの後方散乱および超音波エコーの スペクトル同調サインは増加する。ガス充填マイクロスフェアのスペクトル超音 波サインが腫瘍から消失する点まで、超音波出力、パルス持続時間およびパルス 反復は増加する。水中聴音器で検出しながら注意深く出力を調節することによっ て、空洞形成が調節される。この処置によって、腫瘍のいくつかはＩＬ−２遺伝 子でトランスフェクションされる。腫瘍はＴＮＦを局所的に生産し始め ることができ、塊状凝固性壊死が生じる。 実施例 １０ ジパルミトイルホスホチジルコリンおよびＤＮＡを結合するカチオン性リピド を含むマイクロスフェアを抗腫瘍単クローン抗体のアルキル誘導体と共に構築す る。抗メラノーマ高原単クローン抗体でコーティングし、かつインターロイキン −２を含有するマイクロスフェアを転移性メラノーマの患者に注射する。患者を 診断用超音波によって走査し、先駆物質の液体から気体への転移を監視する。軟 質組織内の腫瘍沈着物は反射性のガスマイクロスフェアによって強調される。こ れらの結節は診断用超音波で検出されると、超音波の出力を５ワットまで増加し 、腫瘍を含有する転移性沈着物上に焦点を合わせる。出力を送達しながら、腫瘍 を超音波検査的に監視する。腫瘍に位置するマイクロスフェアを映す高周波数ス ペクトルサインのすべてが腫瘍の一定領域内で消えたとき、超音波エネルギーを 腫瘍の新しい区域上に焦点を合わせると、超音波検査のスペクトルサインはマイ クロスフェアを示す。 実施例 １１ ３つの表面結合アンチセンスＤＮＡをもつカチオン性ガス充填リポソームを上 記の通り合成する。アンチセンスＤＮＡはｃ−ｍｙｃ、ｃ−ｍｙｃ、平滑筋成長 因子および内皮細胞成長因子をコードする遺伝子を目標にする。発泡性先駆物質 充填リポソームを血管形成部位に動脈内投与する。５メガヘルツの連続波超音波 を血管形成部位に適用し、先駆物質のガス相を検出する。マイクロスフェアの破 裂の際のアンチセンスＲＮＡの放出によって、内皮形成（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａ ｌｉｚａｔｉｏｎ）が改善され、血液凝塊の性向が減少する。 実施例 １２ ジパルミトイルホスホチジルコリン（１ｇ）を薬物アドリアマイシンを含有す る１０ｍｌのリン酸緩衝食塩水中に懸濁し、懸濁液を約５０℃に加熱し、丸底フ ラスコ中で約３０分間手動で渦巻撹拌する。熱源を取去り、懸濁液をさらに２時 間渦巻撹拌し、その間室温にまで冷却して、薬物含有リポソームを生成する。 このように調製したリポソームを図１４に示したものと同様の装置の容器中に 入れ、約−１０℃に冷却し、次いで高い負圧にかける。リポソームの温度を１０ ℃に上げる。高い真空負圧を約４８時間維持する。約４８時間後、発泡性先駆物 質から供給される１−フルオロブタンガスが４時間に亙って徐々にチャンバー中 に添加され、その後周囲圧力に戻される。得られた薬物含有の真空乾燥ガス徐添 加リポソーム（このガス充填リポソームは内部に実質的に水が無い）を１０ｃｃ のリン酸緩衝食塩水中に懸濁させ１０分間渦巻撹拌し、その後約４℃で約３か月 間貯蔵する。 実施例 １３ 実施例 １１のリポソームを超音波検査的に試験するために、これらリポソー ムの２５０ｍｌ試料を３００ｃｃの非脱ガスリン酸緩衝食塩水中に懸濁する。Ａ ｃｏｕｓｔｉｃ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｍｏｄｅｌ ５２９９スキャナー（Ａｃｏｕ ｓｔｉｃ Ｉｍａｇｉｎｇ，Ｐｈｏｅｎｉｘ，ＡＺ）を使用し、７．５ＭＨｚの トランスデューサで種々の時間間隔でリポソームを生体外で走査し、システム試 験ソフトウエアを使用してｄＢ 反射能を測定する。リポソームの試験の前に、 既知の音響インピーダンスをもつ疑似模型でシステムを標準化する。リポソーム の良好な反射能が示される。 実施例 １４ ジパルミトイルホスホチジルコリン（１ｇ）と凍結保護剤トレハロース（１ｇ ）を薬物アドリアマイシンを含有する１０ｍｌのリン酸緩衝食塩水中に懸濁し、 懸濁液を約５０℃に加熱し、丸底フラスコ中で約３０分間手動で渦巻撹拌する。 熱源を取去り、懸濁液をさらに２時間渦巻撹拌し、その間室温にまで冷却して、 薬物含有リポソームを生成する。 このように調製したリポソームを図１１に示した操作に実質的に従って真空乾 燥しガスを徐々に添加して、薬物含有の真空乾燥ガス徐添加リポソーム（ガス充 填リポソームはその内部に実質的に水が無い）得た。リポソームを１０ｃｃのリ ン酸緩衝食塩水中に懸濁させ１０分間渦巻撹拌し、その後約４℃で約数週間貯蔵 する。使用の前、ガス充填リポソームを、１０μｍのポリカーボネートフィルタ ー（Ｎｕｃｌｅｐｏｒｅ，Ｃｏｓｔａｒ，Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ，ＣＡ）を通し て、フィルターがハブに付いたシリンジを通した注入によって押出す。 実施例 １５ 実施例１３のリポソームを試験するために、実施例１２の操作法に実質的に従 った。リポソームについて良好な反射能が示される。 実施例１６ ジパルミトイルホスホチジルコリン（１ｇ）を薬物アドリアマイシンを含有す る１０ｍｌのリン酸緩衝食塩水中に懸濁し、懸濁液を約５０℃に加熱し、丸底フ ラスコ中で約３０分間手動で渦巻撹拌する。加熱バレルのジャケット付き押出器 （Ｅｘｔｒｕｄｅｒ Ｄｅｖｉｃｅ（商標）Ｌｉｐｅｘ Ｂｉｏｍｅｍｂｒａｎ ｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）で、押出しの前に通常の凍結−融解 処理する場合としない場合 の両方で懸濁液を５回押出しを行い、その間温度を約５０℃に維持する。熱源を 取去り、懸濁液をさらに約２時間渦巻撹拌し、その間懸濁液は室温まで放冷して 、リポソームを生成する。 このように調製したリポソームを真空乾燥しガスを徐々に添加し、実施例１１ に示す操作法に実質的に従って、薬物含有の真空乾燥ガス徐添加リポソーム（ガ ス充填リポソームはその内部に実質的に水が無い）を得る。懸濁液を１０ｍｌの リン酸緩衝食塩水中の懸濁し、約４℃で数週間貯蔵する。 実施例１７ 実施例１５のリポソームを超音波検査的に試験するために、実施例１２の操作 法を実質的に従った。リポソームについて良好な反射能が示される。 実施例 １８ 本発明の薬物含有リポソームの安定性を試験するために、実施例１１のリポソ ーム懸濁液を図１０に示すシリンジ中の１０ミクロンのポリカーボネートフィル ターに手動で通す。押出し処理の後、リポソームを実施例１２に記載のように超 音波検査的に研究する。驚くべきことに、押出し後、本発明のリポソームは実質 的にそのエコー発現性を保持している。 実施例 １９ 実施例１１のリポソームを３から７．５ｍＨｚの範囲のトランスデューサ周波 数を使用して超音波により走査する。その結果から、高周波数の超音波では、エ コー発現性は急速に減衰し、そのことは相対的に高い共鳴振動数と高い振動数に 伴う高いエネルギーを反映することが示され る。 実施例 ２０ 癌の患者に静脈用薬物含有真空乾燥ガス徐添加リポソーム（ガス充填リポソー ムはその内部に実質的に水が無い）を投与する。リポソーム中に含有される薬物 はアドリアマイシンである。静脈注射で投与されると、腫瘍を超音波検査的に走 査し、自動化ソフトウエアプログラムを介して、リポソームの共鳴振動数を測定 する。超音波エネルギーはリポソームのピーク共鳴振動数で腫瘍中に焦点を合わ せる。超音波エネルギー量は明らかに組織の加熱を起こさせるには不十分（即ち 、２度以上の温度変化はない）であるが、このエネルギーはリポソームを破裂さ せ、腫瘍部位にアドリアマイシンを放出するには十分である。このように行って 、薬物の局所送達がリポソーム使用し超音波で達成される。 実施例２１ 重篤局所菌類感染の患者に、薬物含有真空乾燥ガス充填徐添加リポソーム（ガ ス充填リポソームはその内部に実質的に水が無い）を静脈注射し、超音波を実施 例１９に記載のものと実質的に同様の方法で使用して、薬物の局所送達を達成す る。リポソームが含有している薬物アンホテリシン−Ｂは感染部位に効果的に送 達される。 実施例 ２２ 先駆物質充填リポソームを調製するために、５０ｍｇの１，２−ジパルミトイ ル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＭＷ：７３４．５、粉末、Ｌｏｔ Ｎ ｏ．１６０ｐｃ−１８３）（Ａｖａｎｔｉ−Ｐｏｌａｔ Ｌｌｐｉｄｓ，Ａｌａ ｂｓｔｅｒ，ＡＬ）を秤量し、遠心分離管中で５．０ｍｌの食塩水（０．９％Ｎ ａＣｌ）またはリン酸緩衝食塩水（０ ．８％塩化ナトリウム、０．０２％塩化カリウム、０．１１５％二塩基性リン酸 ナトリウムおよび０．０２％一塩基性リン酸カリウム、ｐＨ７．４に調節）、１ ６５μβの１−フルオロブタンで水和する。渦巻撹拌器（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｂｏｈｅｍｉａ，ＮＹ）で６．５の機器設定値で水和 懸濁液を１０分間振盪する。１２ｍｌの懸濁液がノートされる。食塩水は５．０ から約４ｍｌに減少した。 この新規方法によって製造された発泡性先駆物質充填リポソームを光学顕微鏡 によって粒径の計測した。リポソームの最大の粒径は約５０から約６０μｍの範 囲にあり、最小の粒径は約８μｍであるが分かる。平均の粒径は約１５から約２ ０μｍの範囲である。 Ｓｗｉｎ−Ｌｏｋ Ｈｏｌｄｅｒ（“ＮＮＵＣＬＥＰＯＲＥ”Ｆｉｌｔｒａｔ ｉｏｎ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｃｏｓｔａｒ Ｃｏｒｐ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ， ＭＡ）および２０ｃｃシリンジ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＆ Ｃｏ ．，Ｒｕｔｈｅｒｆｏｒｄ，ＮＪ）使用して、発泡性先駆物質充填リポソームを １０または１２μｍの“ＮＵＣＬＥＰＯＲＥ”膜を通してフィルターする。膜は １０または１２μｍの“ＮＵＣＬＥＰＯＲＥ”膜（Ｎｕｃｌｅｐｏｒｅ Ｆｉｌ ｔｒａｔｉｏｎ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｃｏｓｔａｒ Ｃｏｒｐ．，Ｃａｍｂｒｉ ｄｇｅ，ＭＡ）である。１０．０μｍのフィルターをＳｗｉｎ−Ｌｏｋ Ｈｏｌ ｄｅｒ中に入れ、キャップを堅く締める。リポソーム溶液を振盪し、１８ゲージ の針を介して２０ｃｃのシリンジに移す。約１２ｍｌのリポソーム溶液をシリン ジ中に入れ、シリンジをＳｗｉｎ−Ｌｏｋ Ｈｏｌｄｅｒ中にねじ込む。ガス充 填リポソーム小胞の大きいものが頂部に上がるように、シリンジとフィルターホ ルダーアセンブリを逆転させる。シリ ンジを静かに押し上げて、ガス充填リポソームをこのように濾過する。 １０．０μｍのフィルターを通る押出しの後のガス充填リポソームの残存率（ 押出し後に残るガス充填リポソーム量）は約８３−９２％である。手動押出し前 、泡の容量は約１２ｍｌであり、水溶液の容量は約４ｍｌである。手動押出し後 、泡の容量は約１０−１１ｍｌであり、水溶液の容量は約４ｍｌである。リポソ ームの最大の粒径は約２５から約３０μｍであり、最小の粒径は約５μｍである ことが測定される。 濾過の後は、ガス充填リポソームの９０％以上は１５μｍ以下であることが分 かる。 実施例 ２３ ５０ｍｇの１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｍ Ｗ：７３４．５、粉末）（Ａｖａｎｔｉ−Ｐｏｌａｔ ＬＩｐｉｄｓ，Ａｌａｂ ｓｔｅｒ，ＡＬ）を秤量し、遠心分離管中に入れる。リピドを５．０ｍｌの食塩 溶液（０．９％ＮａＣｌ）で水和する。リピドを６．５の装置設定値で１０分間 渦巻撹拌する。渦巻撹拌の後、全溶液を液体窒素で凍結する。試料を凍結乾燥用 の凍結乾燥機上に置く。乾燥リピドを凍結乾燥機から取り出し、５ｍｌの食塩溶 液中で再水和し、６．５の設定値で１０分間渦巻撹拌する。この溶液の少量をス ライド上にピペットし、溶液を顕微鏡で観察する。ガス充填リポソームの粒径を 測定する。リポソームの最大の粒径は約６０μｍであり、最小の粒径は約２０μ ｍであることが測定される。平均の粒径は約３０から約４０μｍの範囲である。 実施例 ２４ ５０ｍｇの１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコ リン（ＭＷ：７３４．５、粉末）（Ａｖａｎｔｉ−Ｐｏｌａｔ Ｌｌｐｉｄｓ， Ａｌａｂｓｔｅｒ，ＡＬ）を秤量し、遠心分離管中に入れる。約２フィートのラ ッテクスチューブ（内径０．２５）を円錐遠分管の周りにコイルの様に包む。ラ テックスチューブを電気テープで遠沈管に繋いだ。ラテックスチューブを恒温循 環浴（ＶＷＲ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｍｏｄｅｌ １１３１）に連結した。浴 の温度を６０℃に設定し、水の循環をチューブをと通って循環する高速に設定し た。温度計をリピド溶液中に入れ、リピドの相転移温度以上である４２℃と５０ ℃の間にあることが分かった。 リピド溶液を６．５の渦巻撹拌機器の設定値で１０分間渦巻撹拌した。リピド （相転移温度＝４１℃）の発泡が極度に少ないとガス充填リポソームが十分には 生成しないことを認めた。光学顕微鏡から、溶液中に大きなリピド粒子があるこ とが分かった。この温度で生成するガス充填リポソームの数は相転移温度以下の 温度で生成する数の３％以下であった。溶液を温度が室温（２５℃）に平衡する まで、溶液を１５分間静置した。溶液を１０分の持続時間の間渦巻撹拌した。１ ０分後、ガス充填リポソームが生成したことが認められた。 実施例 ２５ ５０ｍｇの１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｍ Ｗ：７３４．５、粉末）（Ａｖａｎｔｉ−Ｐｏｌａｔ ＬＩｐｉｄｓ，Ａｌａｂ ｓｔｅｒ，ＡＬ）を秤量し、遠心分離管中に入れた。リピドを５．０ｍｌの０． ９％食塩溶液（０．９％ＮａＣｌ）で水和した。リピドを６．５の装置設定値で １０分間渦巻撹拌した。渦巻撹拌の後、全溶液を液体窒素で凍結した。全溶液を 室温（２５℃）の水浴中で 融解した。冷凍と融解を８回反復した。水和した懸濁液を６．５の装置設定値で １０分間渦巻撹拌した。ガス充填リポソームを実施例２１に記載のように検出し た。 実施例 ２６ 各５０ｍｇのＤＰＰＣを有する２本の遠沈管を用意する。一本目には１モル％ （〜０．２ｍｇのＤｕｐｏｎｏｌ Ｃ ｌｏｔ Ｎｏ．２８３２）のラウリル硫 酸ナトリウム、乳化剤を添加し、他の一本には１０モル％（２．０ｍｇのＤｕｐ ｏｎｏｌ Ｃ ｌｏｔ Ｎｏ．２８３２）を添加した。５ｍｌの０．９％ＮａＣ ｌを両遠沈管に添加した。両チューブを液体窒素で凍結し、約１６時間で凍結乾 燥した。両使用を凍結乾燥機から出し、両チューブに５ｍｌの食塩水を添加した 。両チューブを位置６．５で１０分間渦巻撹拌した。１モル％のラウリル硫酸ナ トリウムでのガス充填リポソームの最大の粒径は約７５μｍであり、最小の粒径 は約６μｍであることが測定された。平均の粒径は約１５から約４０μｍの範囲 であった。１０モル％のラウリル硫酸ナトリウムでのガス充填リポソームの最大 の粒径は約９０μｍであり、最小の粒径は約６μｍであることが測定された。平 均の粒径は約１５から約３０μｍの範囲であった。 １モル％のラウリル硫酸ナトリウムでのガス充填リポソームを含有する溶液中 の泡の容量は１５ｍｌであり、水溶液の容量は約３−４ｍｌであった。１０モル ％のラウリル硫酸ナトリウムでのガス充填リポソームを含有する溶液中の泡の容 量は１５ｍｌであり、水溶液の容量は約３−４ｍｌであった。 実施例 ２７ この実施例によって、超音波処理を使用してガス充填リポソームを作成するこ とができるかどうかを測定した。５０ｍｇの１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グ リセロ−３−ホスホコリン（Ａｖａｎｔｉ−Ｐｏｌａｔ Ｌｌｐｉｄｓ，Ａｌａ ｂｓｔｅｒ，ＡＬ）を秤量し、５ｍｌの０．９％ＮａＣｌで水和した。渦巻撹拌 の代わりに、Ｈｅａｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｓｏｎｉｃａｔｏｒ Ｕｌｔｒａｓｏ ｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ ＸＬ（Ｈｅａｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｆ ａｒｍｉｎｇｄａｌｅ，ＮＹ）で水溶液を超音波処理した。２０ ＬＨｚの周波 数をもつ超音波処理機をノブ上の位置４で連続波に設定した。マイクロチップを 使用して１０分間超音波処理した。超音波処理の後、溶液を光学顕微鏡下で観察 した。ガス充填リポソームが製造されている証拠があった。 次に、超音波処理機のマイクロチップを取り除き、超音波処理機に備えてある エンドキャップに置換えた。他の溶液（５ｍｌの食塩水当たり５０ｍｇのリピド ）を調製し、このチップで超音波処理した。１０分後、溶液を光学顕微鏡下で観 察した。ガス充填リポソームが製造されている証拠があった。 実施例 ２８ この実施例によって、低濃度限界のリピドがガス充填リポソームの生産を停止 するかどうかが決定された。１０ｍｇの１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセ ロ−３−ホスホコリン（Ａｖａｎｔｉ−Ｐｏｌａｔ Ｌｌｐｉｄｓ，Ａｌａｂｓ ｔｅｒ，ＡＬ）を１０ｍｌの食塩溶液（０．９％ｗ：ｖ ＮａＣｌ）中に添加し た。リピド／食塩溶液を位置６．５で１０分間渦巻撹拌した。溶液を粒径につい て顕微鏡下で観察した。リポソームの最大の粒径は約３０から４５μｍの範囲で あり、検出された 最小の粒径は約７μｍであることが測定された。平均の粒径は約３０から約４５ μｍの範囲であった。 ガス充填リポソームは前のものより急激に破裂したから、より脆い物のようで あった。それ故、リピドノ濃度はガス充填リポソームの生産と安定性の要因であ るようである。 実施例 ２９ 未濾過のガス充填リポソームを５０ｍｌのシリンジから引き出し、図１１と図 １２に示すような「ＮＵＣＬＥＰＯＲＥ」１０μｍフィルターと８μｍフィルタ ー（最小１５０μｍ離れている）のカスードを通過させた。その他、例えば、使 用を互いに直接隣接している１０μｍフィルターと１０μｍフィルターの積重ね を通過あさせることができる。ガス充填リポソームを流速が毎分２．０ｍｌとな る圧力で通過させた。引続いて濾過したガス充填リポソームをガス充填マイクロ スフェアの収率について測定し、未濾過のものの容量の８０−９０％であった。 得られたガス充填リポソームを４つの異なった方法で計測してその粒径と分布を 決定した。粒径計測はＰａｒｔｉｃｌｅ Ｓｉｚｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ Ｍｏｄ ｅｌ ７７０ Ｏｐｔｉｃａｌ Ｓｉｚｉｎｇ Ｕｎｉｔ、Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｉｍａｇｉｎｇによって製造された画像処理ソフトウエアに接合されたＺｅｉ ｓｓ Ａｘｉｐｌａｎ光学顕微鏡、およびＣｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｃ ｏｕｌｔｅｒ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ｌｕｔｏｎ，Ｂｅｄ ｓ．，Ｅｎｇｌａｎｄ）で行った。図１５と図１６に見られるように、ガス充填 リポソームの粒径は８−１０μｍに分布して、未濾過ガス充填リポソームと比較 して均一であった。従って、濾過ガス充填リポソームはさらに均一の粒径を持 っていると理解することができる。 実施例 ３０ ２５０ｍｇのＤＰＰＣ（ジパルミトイルホスホチジルコリン）と１０ｍｌの０ ．９％ＮａＣｌを５０ｍｌのＦａｌｃｏｎ遠沈管（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎ ｓｏｎ，Ｌｉｎｃｏｌｎ Ｐａｒｋ，ＮＪ）に添加し、周囲温度に維持した。懸 濁液を窒素圧力下で１μｍ「ＮＵＬＥＰＯＲＥ」（Ｃｏｓｔａｒ，Ｐｌｅａｓａ ｎｔｏｎ，ＣＡ）ポリカーボネート膜を通して押出した。得られた懸濁液の粒径 をＰａｒｔｉｃｌｅ Ｓｉｚｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｓａｎｔａ ＢａｒＢｒ ａ，ＣＡ）Ｍｏｄｅｌ ３７０１ レーザ光線散乱サイザーで測定した。平均外 径においてリピド粒子のすべては１μｍ以下であった。 さらに、同量のＤＰＰＣ懸濁液をＭｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ（商標）（Ｍｉ ｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡ）マイ クロフラッダイザーに１８，０００ｐ．ｓ．ｉ．で５回通過させた。濁りがうす くなった懸濁液の粒径をＰａｒｔｉｃｌｅ Ｓｉｚｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｓ ａｎｔａ ＢａｒＢｒａ，ＣＡ）Ｓｕｂ Ｍｉｃｒｏｎ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｓ ｉｚｅｒ Ｍｏｄｅｌ ３７０１レーザ光線散乱サイザーで測定し，粒径は均一 に１μｍ以下であった。マイクロフラッド化懸濁液の粒径は６週間まで安定であ ることが分かった。 実施例３１ １００ｍｇのＤＳＰＣ（ジステアロイルホスファチジルコリン）と１０ｍｌの ０．９％ＮａＣｌを５０ｍｌのＦａｌｃｏｎ遠沈管（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉ ｎｓｏｎ，Ｌｉｎｃｏｌｎ Ｐａｒｋ，ＮＪ）に添加 した。懸濁液を３００−８００ｐ．ｓ．ｉ．の窒素圧力下で１μｍ「ＮＵＬＥＰ ＯＲＥ」（Ｃｏｓｔａｒ，Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ，ＣＡ）ポリカーボネート膜を 通して押出した。得られた懸濁液の粒径をＰａｒｔｉｃｌｅ Ｓｉｚｉｎｇ Ｓ ｙｓｔｅｍｓ（Ｓａｎｔａ ＢａｒＢｒａ，ＣＡ）Ｓｕｂ Ｍｉｃｒｏｎ Ｐａ ｒｔｉｃｌｅ Ｓｉｚｅｒ Ｍｏｄｅｌ ３７０１レーザ光線散乱サイザーで測 定した。粒子はすべて１μｍ以下の粒径であった。 さらに、同量のＤＰＰＣ懸濁液をＭｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ（商標）（Ｍｉ ｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡ）マイ クロフラッダイザーに１８，０００ｐ．ｓ．ｉ．で５回通過させた。得られた懸 濁液は濁りがうすくなってたが、粒径をＳｕｂ Ｍｉｃｒｏｎ Ｐａｒｔｉｃｌ ｅ Ｓｉｚｅｒ Ｍｏｄｅｌ ３７０１レーザ光線散乱サイザーで測定し，粒径 は均一に１μｍ以下であることが分かった。 実施例３２ 実施例２９と実施例３０で示された夫々ＤＰＰＣとＤＳＰＣの懸濁液（既に粒 径が測定された）をＢａｒｎｓｔｅａｄ Ｍｏｄｅｌ Ｃ５７８３５ Ａｕｔｏ ｃｌｅｖｅ（Ｂａｒｎｓｔｅａｄ／Ｔｈｅｒｍｏｌｙｎｅ，Ｄｕｂｕｑｕｅ，Ｉ Ａ）で１０分間オートクレーブ処理した。室温（約２０℃）への平衡後、無菌懸 濁液をガス徐添加に使用した。 実施例３３ ０．９％ＮａＣｌ中の２５ｇ／ｍｌの１，２−ジパルミトイルホスホチジルコ リンの溶液（既に１μｍフィルターを通して押出し、２０分間オートクレーブ処 理した）の１０ｍｌをＦａｌｃｏｎ５０ｍｌ遠沈管（Ｂ ｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｌｉｎｃｏｌｎ Ｐａｒｋ，Ｎｅｗ Ｊｅｒ ｓｅｙ）に添加した。リピド懸濁液を室温（約２０℃）に平衡させた後、液体を ＶＷＲ Ｇｅｎｉｅ−２（１２０ Ｖ，０．５ ａｍｐ，６０ Ｈｚ．）（Ｓｃ ｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．Ｂｏｈｅｍｉａ，ＮＹ）で 、１０分間または発泡性先駆物質リポソームの全量が少なくとも元の水性リピド 溶液の容量の２倍もしくは３倍になる時まで渦巻撹拌した。チューブの底の溶液 は殆ど全体的に水性粒状リピドが無く、大量の泡含有発泡性先駆物質充填リポソ ームが生成した。従って、前オートクレーブ処理はリピド懸濁液がガス充填リポ ソームを生成する能力に影響しない。オートクレーブ処理はリポソームの粒径を 変化せず、リピド懸濁液がガス充填リポソームを生成する能力を減少させない。 実施例３４ ０．９％ＮａＣｌ中の２５ｇ／ｍｌの１，２−ジパルミトイルホスホチジルコ リンの溶液（既に１μｍフィルターを通して押出し、２０分間オートクレーブ処 理した）の１０ｍｌをＦａｌｃｏｎ５０ｍｌ遠沈管（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉ ｎｓｏｎ，Ｌｉｎｃｏｌｎ Ｐａｒｋ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）に添加した。リ ピド懸濁液を室温（約２０℃）に平衡させた後、チューブをＶＷＲ Ｓｃｉｅｎ ｔｉｆｉｃ Ｏｒｂｉｔａｌ Ｓｈａｋｅｒ（ＶＷＲ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｃｅｒｒｉｔｏｓ，ＣＡ）上に直立して置き、３００ｒ．ｐ．ｍ．で３０分間振 盪した。振盪器台上で振盪した結果、ガス充填リポソームが生産した。 実施例３５ ０．９％ＮａＣｌ中の２５ｇ／ｍｌの１，２−ジパルミトイルホスホ チジルコリンの溶液（既に１μｍフィルターを通して押出し、２０分間オートク レーブ処理した）の１０ｍｌをＦａｌｃｏｎ５０ｍｌ遠沈管（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄ ｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｌｉｎｃｏｌｎ Ｐａｒｋ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）に添加 した。リピド懸濁液を室温（約２０℃）に平衡させた後、チューブを１ガロンの 家庭用ペンキ容器の内部に固定し、旋回運動を使用するペンキ機械的混合機中に １５分間入れた。激しく混合した後、遠沈管を取出し、ガス充填リポソームが生 成したことを認めた。 実施例３６ ０．９％ＮａＣｌ中の２５ｇ／ｍｌの１，２−ジパルミトイルホスホチジルコ リンの溶液（既に１μｍフィルターを通して押出し、２０分間オートクレーブ処 理した）の１０ｍｌをＦａｌｃｏｎ５０ｍｌ遠沈管（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉ ｎｓｏｎ，Ｌｉｎｃｏｌｎ Ｐａｒｋ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）に添加した。リ ピド懸濁液を室温（約２０℃）に平衡させた後、チューブを手で力強く振盪した 。振盪を停止した時には、ガス充填リポソームが生成していた。 実施例３７ 実施例３２の記載の通りＤＰＰＣからガス充填リポソームを製造した。得られ た未濾過のリポソームをシリンジ中に入れて、「ＮＵＬＥＰＯＲＥ」（Ｃｏｓｔ ａｒ，Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ，ＣＡ）１０μｍフィルターと最小１５０μｍ離れ た８μｍフィルターからなるカスケードフィルターシステムを通過させた。さら に、別の試料では、積上げ１０μｍと８μｍフィルターアセンブリ（２つのフィ ルターは互いに隣接している）を使用した。ガス充填リポソームが２．０ｍｌ／ ｍｉｎの速度で濾過するような圧力でフィルターを通過させた。濾過ガス充填リ ポソームの容 量は未濾過の容量の８０−９０％であった。 得られたガス充填リポソームの粒径をその粒度分布を決定するために４つの異 なった方法で測定した。粒度計測はＰａｒｔｉｃｌｅ Ｓｉｚｉｎｇ Ｓｙｓｔ ｅｍ（Ｓａｎｔａ Ｂａｒｂａｒａ，ＣＡ）Ｍｏｄｅｌ ７７０ Ｏｐｔｉｃａ ｌ Ｓｉｚｉｎｇ Ｕｎｉｔ、画像処理ソフトウエア（Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｉ ｍａｇｉｎｇ，Ｗｅｓｔ Ｃｈｅｓｔｅｒ，ＰＡ）に接合されたＺｅｉｓｓ（Ｏ ｂｅｒｋｏｃｈｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）Ａｘｉｐｌａｎ光学顕微鏡、およびＣｏ ｕｌｔｅｒ Ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ Ｌｉ ｍｉｔｅｄ，Ｌｕｔｏｎ，Ｂｅｄｓ．，Ｅｎｇｌａｎｄ）で行った。図１８に見 られるように、ガス充填リポソームの粒径は８−１０μｍに分布して、未濾過ガ ス充填リポソームと比較して均一であった。 実施例３８ この実施例は、通常の温度が３７℃もしくは３１０°Ｋであるヒトの血流中で 生成するマイクロスフェア、例えば１０ミクロン直径の発泡性マイクロスフェア の製造に関するものである。１気圧の圧力では、１０ミクロンのマイクロスフェ アの容量を満たすのには、７.５４×１０^-17モルの発泡性先駆物質が必要である 。 １−フルオロブタンは７６．１１の分子量、３２．５℃の沸点、および６．７ ７８９ｇｍｌ^-1の密度であり、発泡性先駆物質として使用することができる。１ ０ミルロン直径のマイクロスフェアを満たすのには、この先駆物質の５．７４× １０^-15が必要である。１−フルオロブタンの密度では、１０ミクロンの上限を 持つマイクロスフェアを形成するには、８．４７×１^-16ｍｌの液体先駆物質が 必要である。 その上限値が１０ミクロンマイクロスフェアを生成する基準を満たす発泡性先 駆物質マイクロスフェアを製造するには、０．０２７２ミクロンの半径即ち対応 する０．０５４４ミクロンの直径をもつリピド小滴のエマルションが必要である 。適切な粒径のフィルターを使用すれば、この特定粒径のエマルションを容易に 達成することができる。さらに、規定粒径の発泡性先駆物質小滴を形成するのに 必要なフィルターの粒径から分かるように、フィルターの粒径は細菌汚染を除去 するのに十分であり、それ故滅菌濾過としても使用することができる。 １０μｍ直径のマイクロスフェアを製造するのに必要な液体先駆物質の１−フ ルオロブタンの場合、多重層の安定化リポソームコーティングであれば、有効な 粒径または液径は約０．０５４４μｍから約０．１３４４μｍに増加する。この 粒径の小滴は０．２２μｍのフィルターを容易に通過する。生体内での相転移後 は、多重積層形態の発泡性先駆物質充填マイクロスフェアは単積層もしくはオリ ゴ積層コーティングに変化することができる。二枚層コーティングによる最終発 泡性先駆物質充填マイクロスフェア粒径への影響は極小である。ゲル状態から液 体の液体−結晶状態への相転移が発泡性先駆物質の沸点と一致するように、リピ ド二枚層が選択される。そうすることによって、リピドコーティングはマイクロ スフェアの膨脹をさらに容易に促進する。 実施例３９ 発泡性先駆物質、１−フルオロブタンはリポソーム中に封入することができ、 温度が上昇するにしたがい、リポソーム状に封入されたフルオロブタンガスが生 じる。発泡性先駆物質、１−フルオロブタン、はグリセロールまたはポリエチレ ングリコールのような乳化剤と安定剤を含有 する水性懸濁液中に懸濁させることができ、市販の渦巻撹拌器上で渦巻撹拌され る。渦巻撹拌は発泡性先駆物質が液体である程度の温度で開始し、試料の温度が 液体状から気体状への相転移温度を超えて上昇するよう連続する。そうすること によって、先駆物質はマイクロエマルション化工程の間にガス状態に変換する。 適切な安定剤が存在すれば、驚くほど安定なガスマイクロスフェアが生成する。 実施例４０ 実施例３９と同一の実験を、ペルフルオロペンタンをサルファヘキサフルオリ ド、ヘキサフルオロプロピレン、ボロモクロロフルオロメタン、オクタフルオロ ブロパン、１，１−ジクロロ、フルオロエタン、ヘキサフルオロエタン、ヘキサ フルオロ−２−ブチン、ペルフルオロペンタン、ペルフルオロブタン、オクタフ ルオロ−２−ブテンもしくはヘキサフルオロブタ−１，３−ジエン、またはオク タフルオロシクロペンテンを順々に置換して実施することができ、すべて発泡性 先駆物質充填リポソームが生産された。 本明細書に記載の外の本発明の改変は当業者には本明細書の記載から自明のこ とである。この種の改変は添付の請求の範囲内にあるものとする。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (31)優先権主張番号 ０８／１５９，６８７ (32)優先日 1993年11月30日 (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ０８／１６０，２３２ (32)優先日 1993年11月30日 (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＣＮ，ＪＰ (72)発明者 マツナガ， テリー アメリカ合衆国アリゾナ州85710トウーソ ン・サウスフロントロイヤル751 (72)発明者 ラマスワミ， バラダラジヤン アメリカ合衆国アリゾナ州85719トウーソ ン・イーストロジヤーロードナンバーアイ ―59 2000 (72)発明者 イエロウヘア， デイビツド アメリカ合衆国アリゾナ州85719トウーソ ン・ノースフアーストアベニユーナンバー 14 2040 (72)発明者 ウ， グアンリ アメリカ合衆国アリゾナ州85745トウーソ ン・ウエストエイデンストリート2602

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．発泡性先駆物質充填マイクロスフェアは治療用化合物を含む、前記温度活 性化型発泡性先駆物質充填マイクロスフェアからなる標的指向型治療薬送達シス テム。 ２．マイクロスフェアが、フッ素、ペルフルオロメタン、ペルフルオロエタン 、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロペンタン、ペルフ ルオロヘキサン、サルファヘキサフルオリド、ヘキサフルオロプロピレン、ブロ モクロロフルオロメタン、オクタフルオロプロパン、１，１ジクロロフルオロエ タン、ヘキサフルオロエタン、ヘキサフルオロ−２−ブチン、ペルフルオロペン タン、ペルフルオロブタン、オクタフルオロ−２−ブテン、ヘキサフルオロブタ −１，３−ジエン、オクタフルオロシクロペンテン、ヘキサフルオロアセトン、 イソプロピルアセチレン、アレン、テトラフルオロアレン、ボロントリフルオリ ド、１，２−ブタジエン、１，３−ブタジエン、１，２，３−トリクロロ−２− フルオロ−１，３−ブタジエン、２−メチル−１，３−ブタジエン、ヘキサフル オロ−１，３−ブタジエン、ブタジエン、１−フルオロ−ブタン、２−メチル− ブタン、デカフルオロブタン、１−ブテン、２−ブテン、２−メチル−１−ブテ ン、３−メチル−１−ブテン、ペルフルオロ−１−ブテン、ペルフルオロ−２− ブテン、４−フェニル−３−ブテン−２−オン、２−メチル−１−ブテン−３− イン、ブチルニトレート、１−ブチン、２−ブチン、２−クロロ−１，１，１， ４，４，４−ヘキサフルオローブチン、３−メチル−１−ブチン、ペルフルオロ −２−ブチン、２−ブロモ−ブチルアルデヒド、カルボニルサルフィド、クロト ノニトリル、シクロブタン、メチル−シクロブタン、オクタフルオロ− シクロブタン、ペルフルオロ−シクロブテン、３−クロロ−シクロペンテン、シ クロプロパン、１，２−ジメチル−シクロプロパン、１，１−ジメチル−シクロ プロパン、１，２−ジメチル−シクロプロパン、エチルシクロプロパン、メチル シクロプロパン、ジアセチレン、３−エチル−３−メチルジアジリジン、１，１ ，１−トリフルオロ−ジアゾエタン、ジメチルアミン、ヘキサフルオロ−ジメチ ルアミン、ジメチルエチルアミン、ビス−（ジメチルホスフィン）アミン、２， ３−ジメチル−２−ノルボルナン、ペルフルオロ−ジメチルアミン、ジメチルオ キソニウムクロリド、１，３−ジオキソラン−２−オン、４−メチル−１，１， １，２−テトラフルオロエタン、１，１，１−トリフルオロエタン、１，１，２ ，２−テトラフルオロエタン、１，１，２−トリクロロ−１，２，２−トリフル オロエタン、１，１−ジクロロエタン、１，１−ジクロロ−１，２，２，２−テ トラフルオロエタン、１，２−ジフルオロエタン、１−クロロ−１，１，２，２ ，２−ペンタフルオロエタン、２−クロロ−１，１−ジフルオロエタン、１−ク ロロ−１，１，２，２−テトラフルオロエタン、２−クロロ−１，１−ジフルオ ロエタン、クロロエタン、クロロペンタフルオロエタン、ジクロロトリフルオロ エタン、フルオロエタン、ヘキサフルオロエタン、ニトロペンタフルオロエタン 、ニトロソペンタフルオロエタン、ペルフルオロエタン、ペルフルオロエチルア ミン、エチルビニルエーテル、１，１−ジクロロエチレン、１，１−ジクロロ− １，２−ジフルオロエチレン、１，２−ジフルオロエチレン、メタン、メタン− スルフォニルクロリド−トリフルオロ、メタン−スルフォニルフルオリド−トリ フルオロ、メタン−（ペンタフルオロチオ）トリフルオロ、メタンブロモジフル オロニトロソ、メタンブロモフルオ ロ、メタンブロモクロロ−フルオロ、メタン−ブロモ−トリフルオロ、メタン− クロロジフルオロニトロ、メタンクロロジニトロ、メタンクロロフルオロ、メタ ン−クロロトリフルオロ、メタン−クロロ−ジフルオロ、メタン−ジブロモジフ ルオロ、メタン−ジクロロジフルオロ、メタン−ジクロロ−フルオロ、メタンジ フルオロ、メタンジフルオロ−ヨード、メタン−ジシラノ、メタン−フルオロ、 メタン−ヨード−トリフルオロ、メタン−ニトロ−トリフルオロ、メタン−ニト ロソ−トリフルオロ、メタン−テトラフルオロ、メタン−トリクロロフルオロ、 メタン−トリフルオロ、メタンスルフェニルクロリド−トリフルオロ、２−メチ ルブタン、メチルエーテル、メチルイソプロピルエーテル、メチルラクタート、 メチルニトリット、メチルスルフィド、メチルビニルエーテル、ネオン、ネオペ ンタン、窒素、亜酸化窒素、１，２，３−ノナデカントリカルボン酸−２−ヒド ロキシトリメチルエステル、１−ノネン−３−イン、酸素、１，４−ペンタジエ ン、ｎ−ペンタン、ペンタン−ペルフルオロ、２−ペンタノン−４−アミノ−４ −メチル、１−ペンテン、２−テンテン｛シス｝、２−ペンテン｛トランス｝、 １−ペンテン−３−ブロモ、１−ペンテン−ペルフルオロ、フタル酸−テトラク ロロ、ピペリジン−２，３，６−トリメチル、プロパン、プロパン１，１，１， ２，２，３−ヘキサフルオロ、プロパン−１，２−エポキシ、プロパン−２，２ −ジフルオロ、プロパン−２−アミノ、プロパン−２−クロロ、プロパン−ヘプ タフルオロ−１−ニトロ、プロパン−ヘプタフルオロ−１−ニトロソ、プロパン −ペルフルオロ、プロペン、プロピル−１，１，１，２，３，３−ヘキサフルオ ロ−２，３−ジクロロ、プロピレン−１−クロロ、プロピレン−クロロー｛トラ ンス｝、プロポピレン−２−クロロ、 プロピレン−３−フルオロ、プロピレン−ペルフルオロ、プロピン、プロピン− ３，３，３−トリフルオロ、スチレン−３−フルオロ、サルファヘキサフルオリ ド、サルファ（ジ）−デカフルオロ（Ｓ２Ｆ１０）、トルエン−２，４−ジアミ ン、トリフルオロアセトニトリル、トリフルオロメチルペルオキシド、トリフル オロメチルスルフィド、タングステンヘキサフルオリド、ビニルアセチレン、ビ ニルエーテル、およびキセノンよりなる群から選択される発泡性先駆物質を含む 請求項１に記載の標的指向型治療薬送達システム。 ３．脂肪酸；リゾリピド；ホスファチジルコリン；ジレオイルホスファチジル コリン；ジミリストイルホスファチジルコリン；ジペンタデカノイルホスファチ ジル−コリン；ジラウロイルホスファチジルコリン；ジオレオイルホスファチジ ル−コリン；ジパルミトイルホスファチジルコリン；ジステアロイルホスファチ ジルコリン；ホスファチジルエタノールアミン；ジオレオイルホスファチジルエ タノールアミン；ホスファチジルセリン；ホスファチジルグリセロール；ホスフ ァチジルイノシトール；スフィンゴリピド；スフィンゴミエリン；グリコリピド ；ガングリオシドＧＭ１；ガングリオシドＧＭ２；グルコリピド；スルファチド ；グリコスフィンゴリピド；ホスファチジン酸；パルミチン酸；ステアリン酸； アラキドン酸；オレイン酸；ポリエチレングリコール、キチン、ヒアルロン酸も しくはポリビニルピロリドンのような重合体をもつ脂質；スルホン化モノ、ジ、 オリゴもしくはポリサッカリドをもつ脂質；コレステロール；コレステロールサ ルフェート；コレステロールヘミスクシナート；トコフェロールヘミスクシナー ト、エーテル結合とエステル結合した脂肪酸をもつ脂質、重合化脂質、ジアセチ ルホスフェート、ス テアリルアミン、カルジオリピン、炭素６−８個長の短鎖脂肪酸をもつホスフォ リピド、不齊アシル鎖をもつ合成ホスホリピド、６−（５−コレステン−３β− イロキシ）−１−チオ−βーＤ−ガラクトピラノシド、ジガラクトシルジグリセ リド、６−（５−コレステン−３β−イロキシ）ヘキシル−６−アミノ−６−デ オキシ−１−チオ−βーＤ−ガラクトピラノシド、６−（５−コレステン−３β −イロキシ）ヘキシル−６−アミノ−６−デオキシ−１−チオ−αーＤ−マンノ ピラノシド、１２−（（（７′−ジエチルアミノコウマリン３−イル）カルボニ ル）メチルアミノ）−オクタデカン酸；Ｎ−［１２−（（（７′−ジエチルアミ ノコウマリン−３−イル）カルボニル）メチル−アミノ）オクタデカノイル］− ２−アミノパルミチン酸；コレステリル（４′−トリメチル−アンモニオ）ブタ ンノアート；ｎ−スクシニルジオレオイルホスファチジルエタノール−アミン； １，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロール；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ− ３−スクシニルグリセロール；１，３−ジパルミトイル−２−スクシニルグリセ ロール；１−ヘキサデシル−２−パルミトイルグリセロホスホエタノールアミン ；パルミトイルホモシステイン；および／またはそれらの組合せ；ラウリルトリ メチルアンモニウムブロミド、セチルトリメチルアンモニウムブロミド、ミリス チルトリメチルアンモニウムブロミド、アルキルジメチルベンジルアンモニウム クロリド、ベンジルジメチルドデシルアンモニウムブロミド、ベンジルジメチル ヘキサデシルアンモニウムブロミド、ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウ ムブロミド、セチルジメチルエチルアンモニウムブロミド、またはセチルピリジ ニウムボロミド；ペンタフルオロオクタデシルヨージド、ペルフルオロオクチル ブロミド、ペルフルオロデカリン、 ペルフルオロドデカリン、ペルフルオロオクチルヨージド、ペルフルオロトリプ ロピルアミン、およびペルフルオロトリブチルアミンよりなる群から選択される 脂質からなり、並びにさらに共有結合させた重合体を持つ脂質からなる請求項１ に記載の治療薬送達システム。 ４．前記重合体が４００と２００，０００の間の分子量である請求項３に記載 の治療薬送達システム。 ５．前記重合体が１，０００と２００，０００の間の分子量である請求項３に 記載の治療薬送達システム。 ６．前記重合体が２，０００と８，０００の間の分子量である請求項３に記載 の治療薬送達システム。 ７．前記共有結合させた重合体を持つ脂質が式ＸＣＨＹ−（ＣＨ₂）ｎ−Ｏ− （ＣＨ₂）ｎ−ＹＣＨＸ（式中、Ｘはアルコール基であり、ＹはＯＨまたはアル キル基であり、かつｎは０から１０，０００である）の化合物を含む請求項３に 記載の治療薬送達システム。 ８．前記重合体がポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニ ルアルコールおよびポリプロピレングリコールよりなる群から選択される請求項 ３に記載の治療薬送達システム。 ９．前記重合体がポリエチレングリコールである請求項３に記載の治療薬送達 システム。 １０．前記脂質が約１モル％から約２０モル％を含む請求項３に記載の治療薬 送達システム。 １１．食塩水、グリセロールおよびプロピルグリコールの混合脂質溶媒システ ムからなる請求項１に記載の治療薬送達システム。 １２．脂肪酸；リゾリピド；ホスファチジルコリン；ジレオイルホス ファチジルコリン；ジミリストイルホスファチジルコリン；ジペンタデカノイル ホスファチジル−コリン；ジラウロイルホスファチジルコリン；ジオレオイルホ スファチジル−コリン；ジパルミトイルホスファチジルコリン；ジステアロイル ホスファチジルコリン；ホスファチジルエタノアミン；ジオレオイルホスファチ ジルエタノルアミン；ホスファチジルセリン；ホスファチジルグリセロール；ホ スファチジルイノシトール；スフィンゴリピド；スフィンゴミエリン；グリコリ ピド；ガングリオシドＧＭ１；ガングリオシドＧＭ２；グルコリピド；スルファ チド；グリコスフィンゴリピド；ホスファチジン酸；パルミチン酸；ステアリン 酸；アラキドン酸；オレイン酸；ポリエチレングリコール、キチン、ヒアルロン 酸もしくはポリビニルピロリドンのような重合体をもつ脂質；スルホン化モノ、 ジ、オリゴもしくはポリサッカリドをもつ脂質；コレステロール；コレステロー ルサルフェート；コレステロールヘミスクシナート；トコフェロールヘミスクシ ナート、エーテル結合とエステル結合した脂肪酸をもつ脂質、重合化脂質、ジア セチルホスフェート、ステアリルアミン、カルジオリピン、炭素６−８個長の短 鎖脂肪酸をもつホスフォリピド、不齊アシル鎖をもつ合成ホスホリピド、６−（ ５−コレステン−３β−イロキシ）−１−チオ−βーＤ−ガラクトピラノシド、 ジガラクトシルジグリセリド、６−（５−コレステン−３β−イロキシ）ヘキシ ル−６−アミノ−６−デオキシ−１−チオ−βーＤ−ガラクトピラノシド、６− （５−コレステン−３β−イロキシ）ヘキシル−６−アミノ−６−デオキシ−１ −チオ−αーＤ−マンノピラノシド、１２−（（（７′−ジエチルアミノコウマ リン３−イル）カルボニル）メチルアミノ）−オクタデカン酸；Ｎ−［１２−（ （（７′−ジエチルアミノコ ウマリン−３−イル）カルボニル）メチル−アミノ）オクタデカノイル］−２− アミノパルミチン酸；コレステリル（４′−トリメチル−アンモニオ）ブタンノ アート；ｎ−スクシニルジオレオイルホスファチジルエタノール−アミン；１， ２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロール；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−３− スクシニルグリセロール；１，３−ジパルミトイル−２−スクシニルグリセロー ル；１−ヘキサデシル−２−パルミトイルグリセロホスホエタノールアミン；パ ルミトイルホモシステイン；および／またはそれらの組合せ；ラウリルトリメチ ルアンモニウムブロミド、、セチルトリメチルアンモニウムブロミド、ミリスチ ルトリメチルアンモニウムブロミド、アルキルジメチルベンジルアンモニウムク ロリド、ベンジルジメチルドデシルアンモニウムブロミド、ベンジルジメチルヘ キサデシルアンモニウムブロミド、ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウム ブロミド、セチルジメチルエチルアンモニウムブロミド、またはセチルピリジニ ウムボロミド；ペンタフルオロオクタデシルヨージド、ペルフルオロオクチルブ ロミド、ペルフルオロデカリン、ペルフルオロドデカリン、ペルフルオロオクチ ルヨージド、ペルフルオロトリプロピルアミン、およびペルフルオロトリブチル アミンよりなる群から選択される脂質からなり、並びにさらに正味陰電荷を持つ 脂質からなる請求項１に記載の治療薬送達システム。 １３．前記正味陰電荷を持つ脂質がホスファチジン酸およびホスファチジルグ リセロールを含む請求項１２に記載の治療薬送達システム。 １４．前記正味陰電荷を持つ脂質がホスファチジン酸を含む請求項１２に記載 の治療薬送達システム。 １５．前記正味陰電荷を持つ脂質が約１モル％から２０モル％を含む 請求項１２に記載の治療薬送達システム。 １６．さらに一つまたはそれ以上の粘性活性化合物を含む請求項１に記載の治 療薬送達システム。 １７．前記粘性活性化合物がアルコール、ポリアルコール、プロピレングリコ ール、グリセロール、ソルビトール、セルロース、メチルセルロース、キサンタ ンガム、ヒドロキシメチルセルロース、炭水化物、リン酸化炭水化物およびスル ホン化炭水化物よりなる群から選択される請求項１６に記載の治療薬送達システ ム。 １８．アカシア（ａｃａｃｉａ）、コレステロール、ジエタノールアミン、グ リセリルモノステアレート、ラノリンアルコール、レシチン、モノグリセリド、 ジグリセリド、モノ−エタノールアミン、オレイン酸、オレイルアルコール、ポ ロキサマ−（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）、ポリオキシエチレン５０ステアレート、ポ リオキシ３５キャスター油、ポリオキシ１０オレイルエーテル、ポリオキシ２０ セチオステアリルエーテル、ポリオキシ４０ステアレート、ポリソルベート２０ 、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、プロピレン グルコールジアセタート、プロピレングリコールモノステアレート、ラウリル硫 酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ソルビタンモノステアリン酸、トロー ルアミン、乳化ワックスよりなる群から選択される一つまたはそれ以上の乳化剤 をさらに含む請求項１に記載の治療薬送達システム。 １９．アカシア、寒天、アルギン酸、モノステアリン酸アルミニウム、ベント ナイト、マグマ、カルボマ−（ｃａｒｂｏｍｅｒ）９３４Ｐ、カルボキシメチル セロロース、カルシウムとナトリウムおよびナトリウム１２、カラゲナン、セル ロース、デキストリン、ゲラチン、グアゴム、 ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルエチルセルロース、ケイ酸マ グネシウムアルミニウム、メチルセルロース、ペクチン、ポリエチレンオキシド 、ポリビニルアルコール、ポビドン、プロピレングリコールアルギネート、二酸 化ケイ素、アルギン酸ナトリウム、トラガカンス（ｔｒａｇａｃａｎｔｈ）、キ サンタンガムよりなる群から選択される懸濁剤をさらに含む請求項１に記載の治 療薬送達システム。 ２０．アーモンド油、コーン油、綿実油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イ ソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、鉱油、ミリスチルアルコール、オクチ ルードデカノール、オリーブ油、ピーナツ油、ペルシック（ｐｅｒｓｉｃ）油、 、ゴマ油、大豆油、およびスクアレンよりなる群から選択される媒体をさらに含 む請求項１に記載の治療薬送達システム。 ２１．一つまたはそれ以上の重合体微粒子の脂質を含む請求項１に記載の治療 薬送達システム。 ２２．前記重合体が約５００から約１５０，０００，０００の分子量を有する 請求項２１に記載の治療薬送達システム。 ２３．前記重合体がタンパク質である請求項２１に記載の治療薬送達システム 。 ２４．前記重合体が合成重合体である請求項２１に記載の治療薬送達システム 。 ２５．前記発泡性先駆物質が生体内で温度活性化される請求項１に記載の治療 薬送達システム。 ２６．前記発泡性先駆物質が約３７℃の活性化温度を有する請求項１に記載の 治療薬送達システム。 ２７．前記発泡性先駆物質が−１５０℃から８５℃の活性化温度を有する請求 項１に記載の治療薬送達システム。 ２８．前記発泡性先駆物質が−１２５℃から７０℃の活性化温度を有する請求 項１に記載の治療薬送達システム。 ２９．前記発泡性先駆物質が−１００℃から７０℃の活性化温度を有する請求 項１に記載の治療薬送達システム。 ３０．マイクロスフェアが約２０℃を超える相転移温度を有する請求項１に記 載の治療薬送達システム。 ３１．マイクロスフェアが外径が約１００μｍ以下である請求項１に記載の治 療薬送達システム。 ３２．マイクロスフェアが外径が約１０μｍ以下である請求項１に記載の治療 薬送達システム。 ３３．治療用化合物が遺伝子物質を含む請求項１に記載の治療薬送達システム 。 ３４．遺伝子物質がデオキシリボ核酸である請求項３３に記載の治療薬送達シ ステム。 ３５．遺伝子物質がリボ核酸である請求項３３に記載の治療薬送達システム。 ３６．アンチセンスリボ核酸またはアンチセンスデオキシリボ核酸を含む請求 項３３に記載の治療薬送達システム。 ３７．マイクロスフェアがカチオン性脂質物質をさらに含む請求項３３に記載 の治療薬送達システム。 ３８．カチオン性脂質物質がＮ−［１−（２，３−ジオレオイル）プロピル］ ＯＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド含む請求項３ ７に記載の治療薬送達システム。 ３９．ジステアロイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジル コリンおよび卵ホスファチジルコリンよりなる群から選択される脂質を含む請求 項１に記載の治療薬送達システム。 ４０．治療用化合物がヒト主要組織適合性遺伝子、ジストロフィー、嚢胞性繊 維症膜内外伝導度調節因子、インターロイキン−２および腫瘍壊死因子からなる 群から選択される遺伝子の少なくとも一部をコードするデオキシリボ核酸を含む 請求項３３に記載の治療薬送達システム。 ４１．治療用化合物がＲａｓをコードするデオキシリボ核酸の少なくとも一部 に結合できるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む請求項３３に記載の治療薬 送達システム。 ４２．治療用化合物が単クローン抗体を含む請求項１に記載の治療薬送達シス テム。 ４３．単クローン抗体がメラノーマ抗原に結合できる請求項４２に記載の治療 薬送達システム。 ４４．マイクロスフェアが内部に水が実質的に無くかつその中に治療用化合物 を封入しているガス充填リポソームを含む請求項１に記載の治療薬送達システム 。 ４５．マイクロスフェアが真空乾燥ガス徐添加法によって製造されかつその中 に治療用化合物を封入しているガス充填リポソームを含む請求項１に記載の治療 薬送達システム。 ４６．マイクロスフェアが振盪式ゲル状発泡性先駆物質徐添加法によって製造 されル発泡性先駆物質充填リポソームを含む請求項１に記載の治療薬送達システ ム。 ４７．（ｉ）治療用化合物を含む温度活性化発泡性先駆物質充填マイクロスフ ェアを患者に投与すること； （ｉｉ）液体から気体への相転移および患部中のマイクロスフェアの存在をを決 定するため、エネルギーを使用してマイクロスフェアを監視すること； （ｉｉｉ）エネルギーを使用してマイクロスフェアを破裂させ患部中に治療用化 合物を放出させること からなる患者の患部への治療化合物の制御送達方法 ４８．前記エネルギーが超音波、マイクロ波、高周波エネルギー、電磁気誘導 振動エネルギーおよび光エネルギーよりなる群から選択される請求項４７に記載 の方法。 ４９．前記超音波エネルギーが連続波超音波エネルギーを含む請求項４８に記 載の方法。 ５０．前記超音波エネルギーが振幅および周波数変調パルスよりなる群から選 択される請求項４８に記載の方法。 ５１．前記超音波エネルギーがＰＲＩＣＨパルスおよびＣＨＩＲＰパルスより なる群から選択される請求項４８に記載の方法。 ５２．前記光エネルギーがレーザーおよび赤外線エネルギーよりなる群から選 択される請求項４８に記載の方法。 ５３．前記エネルギーが患者に体外に適用される請求項４７に記載の方法。 ５４．前記エネルギーが患者に内視鏡的に適用される請求項４７に記載の方法 。 ５５．マイクロスフェアが静脈内投与される請求項４７に記載の方法。 ５６．マイクロスフェアが、脂肪酸；リゾリピド；ホスファチジルコリン；ジ レオイルホスファチジルコリン；ジミリストイルホスファチジルコリン；ジペン タデカノイルホスファチジル−コリン；ジラウロイルホスファチジルコリン；ジ オレオイルホスファチジル−コリン；ジパルミトイルホスファチジルコリン；ジ ステアロイルホスファチジルコリン；ホスファチジルエタノールアミン；ジオレ オイルホスファチジルエタノールアミン；ホスファチジルセリン；ホスファチジ ルグリセロール；ホスファチジルイノシトール；スフィンゴリピド；スフィンゴ ミエリン；グリコリピド；ガングリオシドＧＭ１；ガングリオシドＧＭ２；グル コリピド；スルファチド；グリコスフィンゴリピド；ホスファチジン酸；パルミ チン酸；ステアリン酸；アラキドン酸；オレイン酸；ポリエチレングリコール、 キチン、ヒアルロン酸もしくはポリビニルピロリドンのような重合体をもつ脂質 ；スルホン化モノ、ジ、オリゴもしくはポリサッカリドをもつ脂質；コレステロ ール；コレステロールサルフェート；コレステロールヘミスクシナート；トコフ ェロールヘミスクシナート、エーテル結合とエステル結合した脂肪酸をもつ脂質 、重合化脂質、ジアセチルホスフェート、ステアリルアミン、カルジオリピン、 炭素６−８個長の短鎖脂肪酸をもつホスフォリピド、不齊アシル鎖をもつ合成ホ スホリピド、６−（５−コレステン−３β−イロキシ）−１−チオ−βーＤ−ガ ラクトピラノシド、ジガラクトシルジグリセリド、６−（５−コレステン−３β −イロキシ）ヘキシル−６−アミノ−６−デオキシ−１−チオ−βーＤ−ガラク トピラノシド、６−（５−コレステン−３β−イロキシ）ヘキシル−６−アミノ −６−デオキシ−１−チオ−αーＤ−マンノピラノシド、１２−（（（７′−ジ エチルアミノコウマリン３− イル）カルボニル）メチルアミノ）−オクタデカン酸；Ｎ−［１２−（（（７′ −ジエチルアミノコウマリン−３−イル）カルボニル）メチル−アミノ）オクタ デカノイル］−２−アミノパルミチン酸；コレステリル（４′−トリメチル−ア ンモニオ）ブタンノアート；ｎ−スクシニルジオレオイルホスファチジルエタノ ール−アミン；１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロール；１，２−ジパルミ トイル−ｓｎ−３−スクシニルグリセロール；１，３−ジパルミトイル−２−ス クシニルグリセロール；１−ヘキサデシル−２−パルミトイルグリセロホスホエ タノールアミン；パルミトイルホモシステイン；および／またはそれらの組合せ ；ラウリルトリメチルアンモニウムブロミド、、セチルトリメチルアンモニウム ブロミド、ミリスチルトリメチルアンモニウムブロミド、アルキルジメチルベン ジルアンモニウムクロリド、ベンジルジメチルドデシルアンモニウムブロミド、 ベンジルジメチルヘキサデシルアンモニウムブロミド、ベンジルジメチルテトラ デシルアンモニウムブロミド、セチルジメチルエチルアンモニウムブロミド、ま たはセチルピリジニウムブロミド；ペンタフルオロオクタデシルヨージド、ペル フルオロオクチルブロミド、ペルフルオロデカリン、ペルフルオロドデカリン、 ペルフルオロオクチルヨージド、ペルフルオロトリプロピルアミン、およびペル フルオロトリブチルアミンよりなる群から選択される脂質からなる請求項４７に 記載の方法。 ５７．マイクロスフェアが、フッ素、ペルフルオロメタン、ペルフルオロエタ ン、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロペンタン、ペル フルオロヘキサン、サルファヘキサフルオリド、ヘキサフルオロプロピレン、ブ ロモクロロフルオロメタン、オクタフルオロ プロパン、１，１ジクロロフルオロエタン、ヘキサフルオロエタン、ヘキサフル オロ−２−ブチン、ペルフルオロペンタン、ペルフルオロブタン、オクタフルオ ロ−２−ブテン、ヘキサフルオロブタ−１，３−ジエン、オクタフルオロシクロ ペンテン、ヘキサフルオロアセトン、イソプロピルアセチレン、アレン、テトラ フルオロアレン、ボロントリフルオリド、１，２−ブタジエン、１，３−ブタジ エン、１，２，３−トリクロロ−２−フルオロ−１，３−ブタジエン、２−メチ ル−１，３−ブタジエン、ヘキサフルオロ−１，３−ブタジエン、ブタジエン、 １−フルオロ−ブタン、２−メチル−ブタン、デカフルオロブタン、１−ブテン 、２−ブテン、２−メチル−１−ブテン、３−メチル−１−ブテン、ペルフルオ ロ−１−ブテン、ペルフルオロ−２−ブテン、４−フェニル−３−ブテン−２− オン、２−メチル−１−ブテン−３−イン、ブチルニトレート、１−ブチン、２ −ブチン、２−クロロ−１，１，１，４，４，４−ヘキサフルオロ−ブチン、３ −メチル−１−ブチン、ペルフルオロ一２−ブチン、２−ブロモ−ブチルアルデ ヒド、カルボニルサルフィド、クロトノニトリル、シクロブタン、メチル−シク ロブタン、オクタフルオロ−シクロブタン、ペルフルオロ−シクロブテン、３− クロロ−シクロペンテン、シクロプロパン、１，２−ジメチル−シクロプロパン 、１，１−ジメチル−シクロプロパン、１，２−ジメチル−シクロプロパン、エ チルシクロプロパン、メチルシクロプロパン、ジアセチレン、３−エチル−３− メチルジアジリジン、１，１，１−トリフルオロ−ジアゾエタン、ジメチルアミ ン、ヘキサフルオロ−ジメチルアミン、ジメチルエチルアミン、ビス−（ジメチ ルホスフィン）アミン、２，３−ジメチル−２−ノルボルナン、ペルフルオロ− ジメチルアミン、ジメチルオキソ ニウムクロリド、１，３−ジオキソラン−２−オン、４−メチル−１，１，１， ２−テトラフルオロエタン、１，１，１−トリフルオロエタン、１，１，２，２ −テトラフルオロエタン、１，１，２−トリクロロ−１，２，２−トリフルオロ エタン、１，１−ジクロロエタン、１，１−ジクロロ−１，２，２，２−テトラ フルオロエタン、１，２−ジフルオロエタン、１−クロロ−１，１，２，２，２ −ペンタフルオロエタン、２−クロロ−１，１−ジフルオロエタン、１−クロロ −１，１，２，２−テトラフルオロエタン、２−クロロ−１，１−ジフルオロエ タン、クロロエタン、クロロペンタフルオロエタン、ジクロロトリフルオロエタ ン、フルオロエタン、ヘキサフルオロエタン、ニトロペンタフルオロエタン、ニ トロソペンタフルオロエタン、ペルフルオロエタン、ペルフルオロエチルアミン 、エチルビニルエーテル、１，１−ジクロロエチレン、１，１−ジクロロ−１， ２−ジフルオロエチレン、１，２−ジフルオロエチレン、メタン、メタン−スル フォニルクロリド−トリフルオロ、メタン−スルフォニルフルオリド−トリフル オロ、メタン−（ペンタフルオロチオ）トリフルオロ、メタンブロモジフルオロ ニトロソ、メタンブロモフルオロ、メタン−ブロモクロロ−フルオロ、メタン− ブロモ−トリフルオロ、メタン−クロロジフルオロニトロ、メタン−クロロジニ トロ、メタンクロロフルオロ、メタン−クロロトリフルオロ、メタン−クロロ− ジフルオロ、メタン−ジブロモジフルオロ、メタン−ジクロロジフルオロ、メタ ン−ジクロロ−フルオロ、メタンジフルオロ、メタンジフルオロ−ヨード、メタ ン−ジシラノ、メタン−フルオロ、メタン−ヨード−トリフルオロ、メタン−ニ トロ−トリフルオロ、メタン−ニトロソ−トリフルオロ、メタン−テトラフルオ ロ、メタン−トリクロロフルオロ、 メタン−トリフルオロ、メタンスルフェニルクロリド−トリフルオロ、２−メチ ルブタン、メチルエーテル、メチルイソプロピルエーテル、メチルラクタート、 メチルニトリット、メチルスルフィド、メチルビニルエーテル、ネオン、ネオペ ンタン、窒素、亜酸化窒素、１，２，３−ノナデカントリカルボン酸−２−ヒド ロキシトリメチルエステル、１−ノネン−３−イン、酸素、１，４−ペンタジエ ン、ｎ−ペンタン、ペンタン−ペルフルオロ、２−ペンタノン−４−アミノ−４ −メチル、１−ペンテン、２−テンテン｛シス｝、２−ペンテン｛トランス｝、 １−ペンテン−３−ブロモ、１−ペンテン−ペルフルオロ、フタル酸−テトラク ロロ、ピペリジン−２，３，６−トリメチル、プロパン、プロパン１，１，１， ２，２，３−ヘキサフルオロ、プロパン−１，２−エポキシ、プロパン−２，２ −ジフルオロ、プロパン−２−アミノ、プロパン−２−クロロ、プロパン−ヘプ タフルオロ−１−ニトロ、プロパン−ヘプタフルオロ−１−ニトロソ、プロパン −ペルフルオロ、プロペン、プロピル−１，１，１，２，３，３−ヘキサフルオ ロ−２，３−ジクロロ、プロピレン−１−クロロ、プロピレン−クロロ−｛トラ ンス｝、プロポピレン−２−クロロ、プロピレン−３−フルオロ、プロピレン− ペルフルオロ、プロピン、プロピン−３，３，３−トリフルオロ、スチレン−３ −フルオロ、サルファヘキサフルオリド、サルファ（ジ）−デカフルオロ（Ｓ２ Ｆ１０）、トルエン−２，４−ジアミン、トリフルオロアセトニトリル、トリフ ルオロメチルペルオキシド、トリフルオロメチルスルフィド、タングステンヘキ サフルオリド、ビニルアセチレン、ビニルエーテル、およびキセノンよりなる群 から選択されるガスで充填される請求項４７に記載の方法。 ５８．マイクロスフェアがペルフルオロブタンで充填される請求項４７に記載 の方法。 ５９．マイクロスフェアが共有結合した重合体を持つ脂質を含む請求項４７に 記載の方法。 ６０．前記重合体が４００と２００，０００の間の分子量である請求項５９に 記載の方法。 ６１．前記重合体が１，０００と２０，０００の間の分子量である請求項５９ に記載の方法。 ６２．前記重合体が２，０００と８，０００の間の分子量である請求項５９に 記載の方法。 ６３．前記共有結合させた重合体を持つ脂質が式ＸＣＨＹ−（ＣＨ₂）ｎ−Ｏ −（ＣＨ₂）ｎ−ＹＣＨＸ（式中、Ｘはアルコール基であり、ＹはＯＨまたはア ルキル基であり、およびｎは０から１０，０００である）の化合物を含む請求項 ５９に記載の方法。 ６４．前記重合体がポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビ ニルアルコールおよびポリプロピレングリコールよりなる群から選択される請求 項５９に記載の方法。 ６５．前記重合体がポリエチレングリコールである請求項５９に記載の方法。 ６６．前記脂質が約１モル％から約２０モル％を含む請求項５９に記載の方法 。 ６７．食塩液、グリセロールおよびプロピルグリコールの混合脂質溶媒システ ムからなる請求項４７に記載の方法。 ６８．陰電荷の脂質からなる請求項４７に記載の方法。 ６９．前記陰電荷の脂質がホスファチジン酸およびホスファチジルグリセロー ルを含む請求項６８に記載の方法。 ７０．前記正味陰電荷の脂質がホスファチジン酸を含む請求項６８に記載の方 法。 ７１．前記正味陰電荷の脂質が約１モル％から約２０モル％を含む請求項６８ に記載の治療薬送達システム。 ７２．前記マイクロスフェアが生体内で活性化される請求項４７に記載の方法 。 ７３．前記マイクロスフェアが水性媒体中に懸濁して貯蔵される請求項４７に 記載の方法。 ７４．マイクロスフェアが約２ｄＢと約２０ｄＢの間の反射能を有する請求項 ４７に記載の方法。 ７５．マイクロスフェアが内部に水が実質的に無くかつその中に治療用化合物 を封入しているガス充填リポソームを含む請求項４７に記載の方法。 ７６．マイクロスフェアが振盪式ゲル状発泡性先駆物質徐添加法によって製造 された発泡性先駆物質充填リポソームを含む請求項４７に記載の方法。 ７７．脂質のゲルから液晶への相転移温度以下かつ発泡性先駆物質の活性化温 度以下の温度で、発泡性先駆物質の存在で、脂質と治療用化合物を含む水溶液を 振盪する工程からなる、温度活性化発泡性先駆物質充填リポソームからなる標的 指向型治療薬送達システムを製造する方法。 ７８．前記方法が発泡性先駆物質の活性化温度で実施される請求項７７に記載 の方法。 ７９．振盪工程が渦巻撹拌することを含む請求項７７に記載の方法。 ８０．前記脂質水溶液を濾過および熱滅菌する工程をさらに含む請求項７７に 記載の方法。 ８１．発泡性先駆物質充填リポソームを選択された細孔径をもつ少なくとも一 つのフィルターを通して押出しすることを含む請求項７７に記載の方法。 ８２．細孔径が約１０μｍまたはそれ以下である請求項８１に記載の方法。 ８３．乾燥脂質を水和して脂質を含む水溶液を形成することを含む請求項７７ に記載の方法。 ８４．脂質のゲルから液晶への相転移温度以下の温度で、発泡性先駆物質の存 在で、脂質を含む水溶液を振盪し発泡性先駆物質充填リポソームを形成する工程 ；および前記リポソームに治療用化合物を添加する工程からなる、発泡性先駆物 質充填リポソームからなる標的指向型治療薬送達システムを製造する方法。 ８５．前記方法が発泡性先駆物質の活性化温度で実施される請求項８４に記載 の方法。 ８６．振盪工程を渦巻撹拌することを含む請求項８４に記載の方法。 ８７．前記脂質水溶液を濾過および熱滅菌する工程をさらに含む請求項８４に 記載の方法。 ８８．リポソームを選択された細孔径をもつ少なくとも一つのフィルターを通 して押出すことを含む請求項８４に記載の方法。 ８９．選択された細孔径が約１０μｍまたはそれ以下である請求項８８に記載 の方法。 ９０．乾燥脂質を水和して脂質を含む水溶液を形成生成することをさらに含む 請求項８４に記載の方法。 ９１．発泡性先駆物質の存在で、脂質と治療用化合物を含む水溶液を振盪する 工程；得られた治療用の発泡性先駆物質充填リポソームを分離する工程からなる 、発泡性先駆物質充填リポソームからなる標的指向型治療薬送達システムを製造 する方法。 ９２．脂質のゲルから液晶への相転移温度以下の温度で、発泡性先駆物質の存 在で、脂質を含む水溶液を振盪して発泡性先駆物質充填リポソームを形成する工 程；および治療用化合物を添加する工程；および得られた治療用の発泡性先駆物 質充填リポソームを分離する工程からなる、発泡性先駆物質充填リポソームから なる標的指向型治療薬送達システムを製造する方法。 ９３．ａ）脂質と治療用化合物を含む水溶液を容器中に導入する工程； ｂ）前記容器中に発泡性先駆物質を導入する工程； ｃ）前記発泡性先駆物質の存在で前記脂質水溶液を振盪して、前記水溶液中に前 記発泡性先駆物質の少なくとも一部を徐々に添加し、前記振盪は前記水溶液上に 泡含有の発泡性先駆物質充填リポソームを形成するに十分な強度と持続時間で実 施される工程； ｄ）前記泡含有の発泡性先駆物質充填リポソームの少なくとも一部を前記容器か ら取り出す工程 の諸工程からなる発泡性先駆物質充填リポソームマイクロスフェアを含有する治 療薬の製造方法。 ９４．前記水溶液を冷却する工程をさらに含む請求項９３に記載の方 法。 ９５．前記水溶液を冷却する工程が前記水溶液中の前記脂質のゲルから液晶へ の相転移温度以下に前記水溶液を冷却することを含む請求項９４に記載の方法。 ９６．前記容器を加圧する工程をさらに含む請求項９３に記載の方法。 ９７．前記発泡性先駆物質充填リポソームを分粒する工程をさらに含む請求項 ９３に記載の方法。 ９８．前記発泡性先駆物質充填リポソームを分粒する工程が前記容器から取り 出した前記発泡性先駆物質充填リポソームの粒径を調節することを含む請求項９ ７に記載の方法。 ９９．前記容器から取り出した前記発泡性先駆物質充填リポソームの粒径が前 記発泡性先駆物質充填リポソームをフィルターを通して取り出すことによって調 節される請求項９７に記載の方法。 １００．前記容器から取り出した前記発泡性先駆物質充填リポソームの粒径が 前記発泡性先駆物質充填リポソームが取り出される前記容器内の位置を設定する ことによって調節される請求項９７に記載の方法。 １０１．前記容器から取り出した前記発泡性先駆物質充填リポソームの粒径が 、前記容器から前記発泡性先駆物質充填リポソームを取り出す工程の間に、前記 発泡性先駆物質充填リポソームが取り出される前記容器内の位置を調整すること によって調節される請求項９７に記載の方法。 １０２．前記発泡性先駆物質充填リポソームを分粒する工程が前記発泡性先駆 物質充填リポソームをフィルターを通して押出すことを含む請求項９７に記載の 方法。 １０３．前記発泡性先駆物質充填リポソームを分粒する工程が前記振 盪の強度を調節することを含む請求項に記載９７の方法。 １０４．前記発泡性先駆物質充填リポソームをさらに加工しないで前記容器か らシリンジ中に流動させる工程をさらに含む請求項９３に記載の方法。 １０５．前記水溶液を振盪する工程が毎分少なくとも約６０回の振盪運動の振 動数で振盪する工程を含む請求項９３に記載の方法。 １０６．前記水溶液を振盪する工程が前記水溶液を渦巻撹拌する工程を含む請 求項９３に記載の方法。 １０７．前記水溶液を振盪する工程が前記容器を振盪する工程を含む請求項９ ３に記載の方法。 １０８．前記水溶液を振盪する工程が前記泡含有の発泡性先駆物質充填リポソ ームを約３０分以下で形成するのに十分な強度で前記水溶液を振盪することを含 む請求項９３に記載の方法。 １０９．前記水溶液を振盪する工程が、前記泡含有の発泡性先駆物質充填リポ ソームの検出に基づいて前記振盪の持続時間を調節する工程を含む請求項９３に 記載の方法。 １１０．前記泡含有の発泡性先駆物質充填リポソームの検出に基づいて前記振 盪の持続時間を調節する工程が前決定容量の前記泡の存在が検出されるまで振盪 することを含む請求項１０９に記載の方法。 １１１．前記方法が発泡性先駆物質の活性化温度で実施される請求項９３に記 載の方法。 １１２．ａ）容器； ｂ）脂質と治療用化合物を含む水溶液を前記容器中に導入する手段； ｃ）発泡性先駆物質を前記容器中に導入する手段； ｄ）前記容器中の前記水溶液中に前記発泡性先駆物質を徐々に添加し、泡含有の 発泡性先駆物質充填リポソームを前記容器中で製造する手段； からなるガス充填リポソームを含有する治療薬を製造する装置。 １１３．脂質水溶液を導入する前記手段が乾燥脂質を導入する手段、治療用化 合物を導入する手段、および前記容器中に水性媒体を導入する手段を含む請求項 １１２に記載の装置。 １１４．前記発泡性先駆物質を前記水溶液中に徐々に添加する前記手段が前記 水溶液を振盪する手段を含む請求項１１２に記載の装置。 １１５．前記水溶液を振盪する前記手段が前記容器を振盪する手段を含む請求 項１１２に記載の装置。 １１６．前記水溶液を振盪する前記手段が前記水溶液を渦巻撹拌する手段を含 む請求項１１２に記載の装置。 １１７．前記水溶液を冷却する手段をさらに含む請求項１１２に記載の装置。 １１８．前記泡を前記容器から取り出す手段をさらに含む請求項１１２に記載 の装置。 １１９．前記泡を前記容器から取り出す手段が前記泡が前記容器から取り出さ れる垂直位置を調整する手段を含む請求項１１２に記載の装置。 １２０．取出された前記発泡性先駆物質充填リポソームをフィルターアセンブ リーを通して流動させる手段をさらに含む請求項１１２に記載の装置。 １２１．前記フィルターアセンブリーが前決定距離に隔離した第一フィルター および第二フィルターを含む請求項１２０に記載の装置。 １２２．前記発泡性先駆物質充填リポソームを分粒する手段をさらに 含む請求項１１２に記載の装置。 １２３．前記容器と流路連結しているフィルターをさらに含む請求項１１２に 記載の装置。 １２４．前記容器を加圧する手段をさらに含む請求項１１２に記載の装置。 １２５．製造された前記発泡性先駆物質充填リポソームを前記容器からシリン ジ中に実質的にさらなる加工なしで流動させる手段をさらに含む請求項１１２に 記載の装置。 １２６．温度を調節する手段を含む請求項１１２に記載の装置。 １２７．前記温度を３７℃に調節する請求項１２６に記載の装置。 １２８．前記ガスが発泡性先駆物質によって供給される、真空乾燥ガス徐添加 法によって製造されかつその中に薬物が封入されたガス充填リポソームからなる 薬物送達システム。 １２９．前記リポソームが、脂肪酸、リゾリピド、ジパルミトイルホスファチ ジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ホスファチジルコリン、ホ スファチジン酸、スフィンゴミエリン、コレステロール、コレステロールスルフ ェート、コレストロールヘミスクシナート、トコフェロールヘミスクシナート、 ホスファチジルエタノ−ルアミン、ホスファチジルイノシトール、グリコスフィ ンゴリピド、グルコリピド、グリコリピド、スルファチド、スルホン化モノ、ジ 、オリゴもしくはポリサッカリドを持つリピド、エーテル結合とエステル結合し た脂肪を持つリピド、および重合化リピドよりなる群から選択される脂質物質か らなる請求項１２８に記載の薬物送達システム。 １３０．発泡性先駆物質が、フッ素、ペルフルオロメタン、ペルフル オロエタン、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロペンタ ン、ペルフルオロヘキサン、サルファヘキサフルオリド、ヘキサフルオロプロピ レン、ブロモクロロフルオロメタン、オクタフルオロプロパン、１，１ジクロロ フルオロエタン、ヘキサフルオロエタン、ヘキサフルオロ−２−ブチン、ペルフ ルオロペンタン、ペルフルオロブタン、オクタフルオロ−２−ブテン、ヘキサフ ルオロブタ−１，３−ジエン、オクタフルオロシクロペンテン、ヘキサフルオロ アセトン、イソプロピルアセチレン、アレン、テトラフルオロアレン、ボロント リフルオリド、１，２−ブタジエン、１，３−ブタジエン、１，２，３−トリク ロロ−２−フルオロ−１，３−ブタジエン、２−メチル−１，３−ブタジエン、 ヘキサフルオロ−１，３−ブタジエン、ブタジエン、１−フルオロ−ブタン、２ −メチル−ブタン、デカフルオロブタン、１−ブテン、２−ブテン、２−メチル −１−ブテン、３−メチル−１−ブテン、ペルフルオロ−１−ブテン、ペルフル オロ−２−ブテン、４−フェニル−３−ブテン−２−オン、２−メチル−１−ブ テン−３−イン、ブチルニトレート、１−ブチン、２−ブチン、２−クロロ−１ ，１，１，４，４，４−ヘキサフルオロ−ブチン、３−メチル−１−ブチン、ペ ルフルオロ−２−ブチン、２−ブロモ−ブチルアルデヒド、カルボニルサルフィ ド、クロトノニトリル、シクロブタン、メチル−シクロブタン、オクタフルオロ −シクロブタン、ペルフルオロ−シクロブテン、３−クロロ−シクロペンテン、 シクロプロパン、１，２−ジメチル−シクロプロパン、１，１−ジメチル−シク ロプロパン、１，２−ジメチル−シクロプロパン、エチルシクロプロパン、メチ ルシクロプロパン、ジアセチレン、３−エチル−３−メチルジアジリジン、１， １，１−トリフルオロ−ジアゾエ タン、ジメチルアミン、ヘキサフルオロ−ジメチルアミン、ジメチルエチルアミ ン、ビス−（ジメチルホスフィン）アミン、２，３−ジメチル−２−ノルボルナ ン、ペルフルオロ−ジメチルアミン、ジメチルオキソニウムクロリド、１，３− ジオキソラン−２−オン、４−メチル−１，１，１，２−テトラフルオロエタン 、１，１，１−トリフルオロエタン、１，１，２，２−テトラフルオロエタン、 １，１，２−トリクロロ−１，２，２−トリフルオロエタン、１，１−ジクロロ エタン、１，１−ジクロロ−１，２，２，２−テトラフルオロエタン、１，２− ジフルオロエタン、１−クロロ−１，１，２，２，２−ペンタフルオロエタン、 ２−クロロ−１，１−ジフルオロエタン、１−クロロ−１，１，２，２−テトラ フルオロエタン、２−クロロ−１，１−ジフルオロエタン、クロロエタン、クロ ロペンタフルオロエタン、ジクロロトリフルオロエタン、フルオロエタン、ヘキ サフルオロエタン、ニトロペンタフルオロエタン、ニトロソペンタフルオロエタ ン、ペルフルオロエタン、ペルフルオロエチルアミン、エチルビニルエーテル、 １，１−ジクロロエチレン、１，１−ジクロロ−１，２−ジフルオロエチレン、 １，２−ジフルオロエチレン、メタン、メタン−スルフォニルクロリド−トリフ ルオロ、メタン−スルフォニルフルオリド−トリフルオロ、メタン−（ペンタフ ルオロチオ）トリフルオロ、メタン−ブロモジフルオロニトロソ、メタン−ブロ モフルオロ、メタンブロモクロロ−フルオロ、メタン−ブロモ−トリフルオロ、 メタン−クロロジフルオロニトロ、メタンクロロジニトロ、メタンクロロフルオ ロ、メタン−クロロトリフルオロ、メタン−クロロ−ジフルオロ、メタン−ジブ ロモジフルオロ、メタン−ジクロロジフルオロ、メタン−ジクロロ−フルオロ、 メタン−ジフルオロ、メタン−ジ フルオロ−ヨード、メタン−ジシラノ、メタン−フルオロ、メタン−ヨード−ト リフルオロ、メタン−ニトロ−トリフルオロ、メタン−ニトロソ−トリフルオロ 、メタン−テトラフルオロ、メタン−トリクロロフルオロ、メタン−トリフルオ ロ、メタンスルフェニルクロリド−トリフルオロ、２−メチルブタン、メチルエ ーテル、メチルイソプロピルエーテル、メチルラクタート、メチルニトリット、 メチルスルフィド、メチルビニルエーテル、ネオン、ネオペンタン、窒素、亜酸 化窒素、１，２，３−ノナデカントリカルボン酸−２−ヒドロキシトリメチルエ ステル、１−ノネン−３−イン、酸素、１，４−ペンタジエン、ｎ−ペンタン、 ペンタン−ペルフルオロ、２−ペンタノン−４−アミノ−４−メチル、１−ペン テン、２−テンテン｛シス｝、２−ペンテン｛トランス｝、１−ペンテン−３− ブロモ、１−ペンテン−ペルフルオロ、フタル酸−テトラクロロ、ピペリジン− ２，３，６−トリメチル、プロパン、プロパン１，１，１，２，２，３−ヘキサ フルオロ、プロパン−１，２−エポキシ、プロパン−２，２−ジフルオロ、プロ パン−２−アミノ、プロパン−２−クロロ、プロパン−ヘプタフルオロ−１−ニ トロ、プロパン−ヘプタフルオロ−１−ニトロソ、プロパン−ペルフルオロ、プ ロペン、プロピル−１，１，１，２，３，３−ヘキサフルオロ−２，３−ジクロ ロ、プロピレン−１−クロロ、プロピレン−クロロ−｛トランス｝、プロポピレ ン−２−クロロ、プロピレン−３−フルオロ、プロピレン−ペルフルオロ、プロ ピン、プロピン−３，３，３−トリフルオロ、スチレン−３−フルオロ、サルフ ァヘキサフルオリド、サルファ（ジ）−デカフルオロ（Ｓ２Ｆ１０）、トルエン −２，４−ジアミン、トリフルオロアセトニトリル、トリフルオロメチルペルオ キシド、トリフルオロメチ ルスルフィド、タングステンヘキサフルオリド、ビニルアセチレン、ビニルエー テル、およびキセノンよりなる群から選択される請求項１２８に記載の薬物送達 システム。 １３１．マイクロスフェアをペルフルオロブタンで充填する請求項１２８に記 載の薬物送達システム。 １３２．共有結合した重合体を持つリピドをさらに含む請求項１２８に記載の 方法。 １３３．前記重合体が４００と２００，０００の間の分子量である請求項１３ ２に記載の薬物送達システム。 １３４．前記重合体が１，０００と２００，０００の間の分子量である請求項 １３２に記載の薬物送達システム。 １３５．前記重合体が２，０００と８，０００の間の分子量である請求項１３ ２に記載の薬物送達システム。 １３６．前記共有結合させた重合体を持つ前記脂質が式ＸＣＨＹ−（ＣＨ₂） ｎ−Ｏ−（ＣＨ₂）ｎ−ＹＣＨＸ（式中、Ｘはアルコール基であり、ＹはＯＨま たはアルキル基であり、かつｎは０から１０，０００である）の化合物を含む請 求項１３２に記載の薬物送達システム。 １３７．前記重合体がポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリ ビニルアルコールおよびポリプロピレングリコールよりなる群から選択される請 求項１３２に記載の薬物送達システム。 １３８．前記重合体がポリエチレングリコールである請求項１３２に記載の薬 物送達システム。 １３９．前記脂質が約１モル％から約２０モル％を含む請求項１３２に記載の 薬物送達システム。 １４０．前記リピドが食塩水、グリセロールおよびプロピルグリコールの混合 溶媒システムからなる請求項１３２に記載の薬物送達システム。 １４１．陰電荷リピドを含む請求項１３２に記載の方法。 １４２．前記陰電荷リピドがホスファチジン酸およびホスファチジルグリセロ ールを含む請求項１４１に記載の薬物送達システム。 １４３．前記陰電荷リピドがホスファチジン酸を含む請求項１４１に記載の薬 物送達システム。 １４４．前記陰電荷リピドが約１モル％から約２０モル％を含む請求項１４１ に記載の薬物送達システム。 １４５．前記リポソームが生体内で活性化される請求項１２８に記載の薬物送 達システム。 １４６．前記リポソームが脂肪酸；リゾリピド；ホスファチジルコリン；ジレ オイルホスファチジルコリン；ジミリストイルホスファチジルコリン；ジペンタ デカノイルホスファチジル−コリン；ジラウロイルホスファチジルコリン；ジオ レオイルホスファチジル−コリン；ジパルミトイルホスファチジルコリン；ジス テアロイルホスファチジルコリン；ホスファチジルエタノールアミン；ジオレオ イルホスファチジルエタノールアミン；ホスファチジルセリン；ホスファチジル グリセロール；ホスファチジルイノシトール；スフィンゴリピド；スフィンゴミ エリン；グリコリピド；ガングリオシドＧＭ１；ガングリオシドＧＭ２；グルコ リピド；スルファチド；グリコスフィンゴリピド；ホスファチジン酸；パルミチ ン酸；ステアリン酸；アラキドン酸；オレイン酸；ポリエチレングリコール、キ チン、ヒアルロン酸もしくはポリビニルピロリドンのような重合体をもつ脂質； スルホン化モノ、ジ、オリゴもしくはポリサッ カリドをもつ脂質；コレステロール；コレステロールサルフェート；コレステロ ールヘミスクシナート；トコフェロールヘミスクシナート、エーテル結合とエス テル結合脂肪酸をもつ脂質、重合化脂質、ジアセチルホスフェート、ステアリル アミン、カルジオリピン、炭素６−８個長の短鎖脂肪酸をもつホスフォリピド、 不齊アシル鎖をもつ合成ホスホリピド、６−（５−コレステン−３β−イロキシ ）−１−チオ−βーＤ−ガラクトピラノシド、ジガラクトシルジグリセリド、６ −（５−コレステン−３β−イロキシ）ヘキシル−６−アミノ−６−デオキシ− １−チオ−βーＤ−ガラクトピラノシド、６−（５−コレステン−３β−イロキ シ）ヘキシル−６−アミノ−６−デオキシ−１−チオ−αーＤ−マンノピラノシ ド、１２−（（（７′−ジエチルアミノコウマリン３−イル）カルボニル）メチ ルアミノ）−オクタデカン酸；Ｎ−［１２−（（（７′−ジエチルアミノコウマ リン−３−イル）カルボニル）メチル−アミノ）オクタデカノイル］−２−アミ ノパルミチン酸；コレステリル（４′−トリメチル−アンモニオ）ブタンノアー ト；ｎ−スクシニルジオレオイルホスファチジルエタノール−アミン；１，２− ジオレオイル−ｓｎ−グリセロール；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−３−スク シニルグリセロール；１，３−ジパルミトイル−２−スクシニルグリセロール； １−ヘキサデシル−２−パルミトイルグリセロホスホエタノールアミン；パルミ トイルホモシステイン；および／またはそれらの組合せ；ラウリルトリメチルア ンモニウムブロミド、セチルトリメチルアンモニウムブロミド、ミリスチルトリ メチルアンモニウムブロミド、アルキルジメチルベンジルアンモニウムクロリド 、ベンジルジメチルドデシルアンモニウムブロミド、ベンジルジメチルヘキサデ シルアンモニウムブロミド、 ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウムブロミド、セチルジメチルエチルア ンモニウムブロミド、またはセチルピリジニウムブロミド；ペンタフルオロオク タデシルヨージド、ペルフルオロオクチルブロミド、ペルフルオロデカリン、ペ ルフルオロドデカリン、ペルフルオロオクチルヨージド、ペルフルオロトリプロ ピルアミン、およびペルフルオロトリブチルアミンよりなる群から選択される脂 質からなる請求項１２８に記載の薬物送達システム。 １４７．前記リポソームがフルオロブタン、２−メチルブタン、２−メチル− １−ブテン、２−メチル−２−ブテン、１−ブテン−３−イン２−メチル、およ びメチル−１−ブチンよりなる群から選択されるガスで充填される請求項１２８ に記載の薬物送達システム。 １４８．前記リポソームが１−フルオロブタンで充填される請求項１２８に記 載の方法。 １４９．前記リポソームが水性媒体中で懸濁させて貯蔵される請求項１２８に 記載の薬物送達システム。 １５０．前記リポソームが乾燥貯蔵される請求項１２８に記載の薬物送達シス テム。 １５１．前記リポソームが少なくとも約３週間の安定性を有する請求項１２８ に記載の薬物送達システム。 １５２．前記リポソームが少なくとも約２ｄＢの反射能を有する請求項１２８ に記載の薬物送達システム。 １５３．前記リポソームが約２ｄＢと約２０ｄＢの間の反射能を有する請求項 １２８に記載の薬物送達システム。 １５４．前記ガスが発泡性先駆物質から供給される、その中に実質的 に水が無くかつその中に薬物が封入されているガス充填リポソームからなる薬物 送達システム。 １５５．前記リポソームが、脂肪酸、リゾリピド、ジパルミトイルホスファチ ジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ホスファチジルコリン、ホ スファチジン酸、スフィンゴミエリン、コレステロール、コレステロールスルフ ェート、コレストロールヘミスクシナート、トコフェロールヘミスクシナート、 ホスファチジルエタノ−ルアミン、ホスファチジルイノシトール、グリコスフィ ンゴリピド、グルコリピド、グリコリピド、スルファチド、スルホン化モノ、ジ 、オリゴもしくはポリサッカリドを持つリピド、エーテル結合とエステル結合し た脂肪を持つリピド、および重合化リピドよりなる群から選択される脂質物質か らなる請求項１５４に記載の薬物送達システム。 １５６．前記リポソームが脂肪酸；リゾリピド：ホスファチジルコリン；ジレ オイルホスファチジルコリン；ジミリストイルホスファチジルコリン；ジペンタ デカノイルホスファチジル−コリン；ジラウロイルホスファチジルコリン；ジオ レオイルホスファチジル−コリン；ジパルミトイルホスファチジルコリン；ジス テアロイルホスファチジルコリン；ホスファチジルエタノールアミン；ジオレオ イルホスファチジルエタノールアミン；ホスファチジルセリン；ホスファチジル グリセロール；ホスファチジルイノシトール；スフィンゴリピド；スフィンゴミ エリン；グリコリピド；ガングリオシドＧＭ１；ガングリオシドＧＭ２；グルコ リピド；スルファチド；グリコスフィンゴリピド；ホスファチジン酸；パルミチ ン酸；ステアリン酸；アラキドン酸；オレイン酸；ポリエチレングリコール、キ チン、ヒアルロン酸もしくはポリビニルピロリドンの ような重合体をもつ脂質；スルホン化モノ、ジ、オリゴもしくはポリサッカリド をもつ脂質；コレステロール；コレステロールサルフェート；コレステロールヘ ミスクシナート；トコフェロールヘミスクシナート、エーテル結合とエステル結 合した脂肪酸をもつ脂質、重合化脂質、ジアセチルホスフェート、ステアリルア ミン、カルジオリピン、６−８炭素長の短鎖脂肪酸をもつホスフォリピド、不齊 アシル鎖をもつ合成ホスホリピド、６−（５−コレステン−３β−イロキシ）− １−チオ−βーＤ−ガラクトピラノシド、ジガラクトシルジグリセリド、６−（ ５−コレステン−３β−イロキシ）ヘキシル−６−アミノ−６−デオキシ−１− チオ−βーＤ−ガラクトピラノシド、６−（５−コレステン−３β−イロキシ） ヘキシル−６−アミノ−６−デオキシ−１−チオ−αーＤ−マンノピラノシド、 １２−（（（７′−ジエチルアミノコウマリン３−イル）カルボニル）メチルア ミノ）−オクタデカン酸；Ｎ−［１２−（（（７′−ジエチルアミノコウマリン −３−イル）カルボニル）メチル−アミノ）オクタデカノイル］−２−アミノパ ルミチン酸；コレステリル（４′−トリメチル−アンモニオ）ブタンノアート； ｎ−スクシニルジオレオイルホスファチジルエタノール−アミン；１，２−ジオ レオイル−ｓｎ−グリセロール；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−３−スクシニ ルグリセロール；１，３−ジパルミトイル−２−スクシニルグリセロール；１− ヘキサデシル−２−パルミトイルグリセロホスホエタノールアミン；パルミトイ ルホモシステイン；および／またはそれらの組合せ；ラウリルトリメチルアンモ ニウムブロミド、セチルトリメチルアンモニウムブロミド、ミリスチルトリメチ ルアンモニウムブロミド、アルキルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ベ ンジルジメチルドデシルアンモ ニウムブロミド、ベンジルジメチルヘキサデシルアンモニウムブロミド、ベンジ ルジメチルテトラデシルアンモニウムブロミド、セチルジメチルエチルアンモニ ウムブロミド、またはセチルピリジニウムブロミド；ペンタフルオロオクタデシ ルヨージド、ペルフルオロオクチルブロミド、ペルフルオロデカリン、ペルフル オロドデカリン、ペルフルオロオクチルヨージド、ペルフルオロトリプロピルア ミン、およびペルフルオロトリブチルアミンよりなる群から選択される脂質から なる請求項１５４に記載の薬物送達システム。 １５７．前記リポソームが、１−フルオロブタン、２−メチルブタン、２−メ チル−１−ブテン、２−メチル−２−ブテン、１−ブテン３−イン−２−メチル 、および３−メチル−１−ブチンよりなる群から選択されるガスで充填される請 求項１５４に記載の薬物送達システム。 １５８．前記リポソームが１−フルオロブタンで充填される請求項１５４に記 載の薬物送達システム。 １５９．前記リポソームが水性溶媒中で懸濁させて貯蔵される請求項１５４に 記載の薬物送達システム。 １６０．前記リポソームが乾燥して貯蔵される請求項１５４に記載の薬物送達 システム。 １６１．前記リポソームが少なくとも約３週間の保存寿命の安定性を有する請 求項１５４に記載の薬物送達システム。 １６２．前記リポソームが少なくとも約２ｄＢの反射能を有する請求項１５４ に記載の薬物送達システム。 １６３．前記リポソームが約２ｄＢと約２０ｄＢの間の反射能を有する請求項 １５４に記載の薬物送達システム。 １６４．発泡性先駆物質が、フッ素、ペルフルオロメタン、ペルフルオロエタ ン、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロペンタン、ペル フルオロヘキサン、サルファヘキサフルオリド、ヘキサフルオロプロピレン、ブ ロモクロロフルオロメタン、オクタフルオロプロパン、１，１ジクロロ，フルオ ロエタン、ヘキサフルオロエタン、ヘキサフルオロ−２−ブチン、ペルフルオロ ペンタン、ペルフルオロブタン、オクタフルオロ−２−ブテン、ヘキサフルオロ ブタ−１，３−ジエン、オクタフルオロシクロペンテン、ヘキサフルオロアセト ン、イソプロピルアセチレン、アレン、テトラフルオロアレン、ボロントリフル オリド、１，２−ブタジエン、１，３−ブタジエン、１，２，３−トリクロロ− ２−フルオロ−１，３−ブタジエン、２−メチル−１，３−ブタジエン、ヘキサ フルオロ−１，３−ブタジエン、ブタジエン、１−フルオロ−ブタン、２−メチ ル−ブタン、デカフルオロブタン、１−ブテン、２−ブテン、２−メチル−１− ブテン、３−メチル−１−ブテン、ペルフルオロ−１−ブテン、ペルフルオロ− ２−ブテン、４−フェニル−３−ブテン−２−オン、２−メチル−１−ブテン− ３−イン、ブチルニトレート、１−ブチン、２−ブチン、２−クロロ−１，１， １，４，４，４−ヘキサフルオロ−ブチン、３−メチル−１−ブチン、ペルフル オロ−２−ブチン、２−ブロモ−ブチルアルデヒド、カルボニルサルフィド、ク ロトノニトリル、シクロブタン、メチル−シクロブタン、オクタフルオロ−シク ロブタン、ペルフルオロ−シクロブテン、３−クロロ−シクロペンテン、シクロ プロパン、１，２−ジメチル−シクロプロパン、１，１−ジメチル−シクロプロ パン、１，２−ジメチル−シクロプロパン、エチルシクロプロパン、メチルシク ロプロパン、ジアセチレン、３ −エチル−３−メチルジアジリジン、１，１，１−トリフルオロ−ジアゾエタン 、ジメチルアミン、ヘキサフルオロ−ジメチルアミン、ジメチルエチルアミン、 ビス−（ジメチルホスフィン）アミン、２，３−ジメチル−２−ノルボルナン、 ペルフルオロ−ジメチルアミン、ジメチルオキソニウムクロリド、１，３−ジオ キソラン−２−オン、４−メチル−１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１ ，１，１−トリフルオロエタン、１，１，２，２−テトラフルオロエタン、１， １，２−トリクロロ−１，２，２−トリフルオロエタン、１，１−ジクロロエタ ン、１，１−ジクロロ−１，２，２，２−テトラフルオロエタン、１，２−ジフ ルオロエタン、１−クロロ−１，１，２，２，２−ペンタフルオロエタン、２− クロロ−１，１−ジフルオロエタン、１−クロロ−１，１，２，２−テトラフル オロエタン、２−クロロ−１，１−ジフルオロエタン、クロロエタン、クロロペ ンタフルオロエタン、ジクロロトリフルオロエタン、フルオロエタン、ヘキサフ ルオロエタン、ニトロペンタフルオロエタン、ニトロソペンタフルオロエタン、 ペルフルオロエタン、ペルフルオロエチルアミン、エチルビニルエーテル、１， １−ジクロロエチレン、１，１−ジクロロ−１，２−ジフルオロエチレン、１， ２−ジフルオロエチレン、メタン、メタン−スルフォニルクロリド−トリフルオ ロ、メタン−スルフォニルフルオリド−トリフルオロ、メタン−（ペンタフルオ ロチオ）トリフルオロ、メタンブロモジフルオロニトロソ、メタンブロモフルオ ロ、メタンブロモクロロ−フルオロ、メタン−ブロモ−トリフルオロ、メタン− クロロジフルオロニトロ、メタンクロロジニトロ、メタンクロロフルオロ、メタ ン−クロロトリフルオロ、メタン−クロロ−ジフルオロ、メタン−ジブロモジフ ルオロ、メタン−ジクロロジフル オロ、メタン−ジクロロ−フルオロ、メタン−ジフルオロ、メタン−ジフルオロ −ヨード、メタン−ジシラノ、メタン−フルオロ、メタン−ヨード−トリフルオ ロ、メタン−ニトロ−トリフルオロ、メタン−ニトロソ−トリフルオロ、メタン −テトラフルオロ、メタン−トリクロロフルオロ、メタン−トリフルオロ、メタ ンスルフェニルクロリド−トリフルオロ、２−メチルブタン、メチルエーテル、 メチルイソプロピルエーテル、メチルラクタート、メチルニトリット、メチルス ルフィド、メチルビニルエーテル、ネオン、ネオペンタン、窒素、亜酸化窒素、 １，２，３−ノナデカントリカルボン酸−２−ヒドロキシトリメチルエステル、 １−ノネン−３−イン、酸素、１，４−ペンタジエン、ｎ−ペンタン、ペンタン −ペルフルオロ、２−ペンタノン−４−アミノ−４−メチル、１−ペンテン、２ −テンテン｛シス｝、２−ペンテン｛トランス｝、１−ペンテン−３−ブロモ、 １−ペンテン−ペルフルオロ、フタル酸−テトラクロロ、ピペリジン−２，３， ６−トリメチル、プロパン、プロパン１，１，１，２，２，３−ヘキサフルオロ 、プロパン−１，２−エポキシ、プロパン−２，２−ジフルオロ、プロパン−２ −アミノ、プロパン−２−クロロ、プロパン−ヘプタフルオロ−１−ニトロ、プ ロパン−ヘプタフルオロ−１−ニトロソ、プロパン−ペルフルオロ、プロペン、 プロピル−１，１，１，２，３，３−ヘキサフルオロ−２，３−ジクロロ、プロ ピレン−１−クロロ、プロピレン−クロロ−｛トランス｝、プロポピレン−２− クロロ、プロピレン−３−フルオロ、プロピレン−ペルフルオロ、プロピン、プ ロピン−３，３，３−トリフルオロ、スチレン−３−フルオロ、サルファヘキサ フルオリド、サルファ（ジ）−デカフルオロ（Ｓ２Ｆ１０）、トルエン−２，４ −ジアミン、トリフルオロ アセトニトリル、トリフルオロメチルペルオキシド、トリフルオロメチルスルフ ィド、タングステンヘキサフルオリド、ビニルアセチレン、ビニルエーテル、お よびキセノンよりなる群から選択される請求項１５４に記載の薬物送達システム 。 １６５．マイクロスフェアがペルフルオロブタンで充填される請求項１５４に 記載の薬物送達システム。 １６６．共有結合させた重合体を持つリピドをさらに含む請求項１５４に記載 の薬物送達システム。 １６７．前記重合体が４００と２００，０００の間の分子量である請求項１６ ６に記載の薬物送達システム。 １６８．前記重合体が１，０００と２００，０００の間の分子量である請求項 １６６に記載の薬物送達システム。 １６９．前記重合体が２，０００と８，０００の間の分子量である請求項１６ ６に記載の薬物送達システム。 １７０．前記共有結合させた重合体を持つ前記脂質が式ＸＣＨＹ−（ＣＨ₂） ｎ−Ｏ−（ＣＨ₂）ｎ−ＹＣＨＸ（式中、Ｘはアルコール基であり、ＹはＯＨま たはアルキル基であり、かつｎは０から１０，０００である）の化合物を含む請 求項１６６に記載の薬物送達システム。 １７１．前記重合体がポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリ ビニルアルコールおよびポリプロピレングリコールよりなる群から選択される請 求項１６６に記載の薬物送達システム。 １７２．前記重合体がポリエチレングリコールである請求項１６６に記載の薬 物送達システム。 １７３．前記脂質が約１モル％から約２０モル％を含む請求項１６６ に記載の薬物送達システム。 １７４．前記リピドが食塩水、グリセロールおよびプロピルグリコールの混合 溶媒システムからなる請求項１６６に記載の薬物送達システム。 １７５．陰電荷リピドを含む請求項１６６に記載の方法。 １７６．前記陰電荷リピドがホスファチジン酸およびホスファチジルグリセロ ールを含む請求項１６６に記載の薬物送達システム。 １７７．前記陰電荷リピドがホスファチジン酸を含む請求項１６６に記載の薬 物送達システム。 １７８．前記陰電荷リピドが約１モル％から約２０モル％を含む請求項１６６ に記載の薬物送達システム。 １７９．前記リポソームが生体内で活性化される請求項１５４に記載の薬物送 達システム。 １８０．（ｉ）その中に薬物を封入したリポソームを負の圧力下に置く工程； （ｉｉ）前記リポソームからの実質的にすべての水を除去するのに十分な時間の 間、前記リポソームを前記負の圧力下でインキュベートする工程； （ｉｉｉ）周囲圧力に達するまで前記リポソーム中にガスを徐々に添加し、前記 ガスは発泡性先駆物質によって供給される工程； の諸工程を含む薬物送達システムの製造方法。 １８１．前記リポソームを工程（ｉ）の前および間に約−１０℃と約−２０℃ の間の温度に冷却すること、前記リポソームを工程（ｉｉ）の間に約１０℃と約 ２０℃の間の温度に加温すること、および前記リポソームを工程（ｉｉｉ）の間 に周囲温度にまで加温することをさらに含む請求項１８０に記載の薬物送達シス テム。 １８２．前記負の圧力が約７００ｐｍｍＨｇと約７６０ｍｍＨｇの間であり、 かつ約２４時間から約７２時間の間に適用される請求項１８０に記載の方法。 １８３．前記ガスが約４時間から約８時間の期間に亙って前記リポソーム中に 徐々に添加される請求項１８０に記載の方法。 １８４．ガスが、フッ素、ペルフルオロメタン、ペルフルオロエタン、ペルフ ルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロペンタン、ペルフルオロヘ キサン、サルファヘキサフルオリド、ヘキサフルオロプロピレン、ブロモクロロ フルオロメタン、オクタフルオロプロパン、１，１ジクロロ，フルオロエタン、 ヘキサフルオロエタン、ヘキサフルオロ−２−ブチン、ペルフルオロペンタン、 ペルフルオロブタン、オクタフルオロ−２−ベテン、ヘキサフルオロブタ−１， ３−ジエン、オクタフルオロシクロペンテン、ヘキサフルオロアセトン、イソプ ロピルアセチレン、アレン、テトラフルオロアレン、ボロントリフルオリド、１ ，２−ブタジエン、１，３−ブタジエン、１，２，３−トリクロロ−２−フルオ ロ−１，３−ブタジエン、２−メチル−１，３−ブタジエン、ヘキサフルオロ− １，３−ブタジエン、ブタジエン、１−フルオロ−ブタン、２−メチル−ブタン 、デカフルオロブタン、１−ブテン、２−ブテン、２−メチル−１−ブテン、３ −メチル−１−ブテン、ペルフルオロ−１−ブテン、ペルフルオロ−２−ブテン 、４−フェニル−３−ブテン−２−オン、２−メチル−１−ブテン−３−イン、 ブチルニトレート、１−ブチン、２−ブチン、２−クロロ−１，１，１，４，４ ，４−ヘキサフルオロ−ブチン、３−メチル−１−ブチン、ペルフルオロ−２− ブチン、２−ブロモ−ブチルアルデヒド、カルボニルサルフィド、クロトノニト リル、シクロブタン、メチル−シクロブタン、オクタフルオロ−シクロブタン、 ペルフルオロ−シクロブテン、３−クロロ−シクロペンテン、シクロプロパン、 １，２−ジメチル−シクロプロパン、１，１−ジメチル−シクロプロバン、１， ２−ジメチル−シクロプロパン、エチルシクロプロパン、メチルシクロプロパン 、ジアセチレン、３−エチル−３−メチルジアジリジン、１，１，１−トリフル オロ−ジアゾエタン、ジメチルアミン、ヘキサフルオロ−ジメチルアミン、ジメ チルエチルアミン、ビス−（ジメチルホスフィン）アミン、２，３−ジメチル− ２−ノルボルナン、ペルフルオロージメチルアミン、ジメチルオキソニウムクロ リド、１，３−ジオキソラン−２−オン、４−メチル−１，１，１，２−テトラ フルオロエタン、１，１，１−トリフルオロエタン、１，１，２，２−テトラフ ルオロエタン、１，１，２−トリクロロ−１，２，２−トリフルオロエタン、１ ，１−ジクロロエタン、１，１−ジクロロ−１，２，２，２−テトラフルオロエ タン、１，２−ジフルオロエタン、１−クロロ−１，１，２，２，２−ペンタフ ルオロエタン、２−クロロ−１，１−ジフルオロエタン、１−クロロ−１，１， ２，２−テトラフルオロエタン、２−クロロ−１，１−ジフルオロエタン、クロ ロエタン、クロロペンタフルオロエタン、ジクロロトリフルオロエタン、フルオ ロエタン、ヘキサフルオロエタン、ニトロペンタフルオロエタン、ニトロソペン タフルオロエタン、ペルフルオロエタン、ペルフルオロエチルアミン、エチルビ ニルエーテル、１，１−ジクロロエチレン、１，１−ジクロロ−１，２−ジフル オロエチレン、１，２−ジフルオロエチレン、メタン、メタン−スルフォニルク ロリド−トリフルオロ、メタン−スルフォニルフルオリド−トリフルオロ、メタ ン−（ペンタフルオロチオ）トリフル オロ、メタンブロモジフルオロニトロソ、メタンブロモフルオロ、メタンブロモ クロロ−フルオロ、メタン−ブロモ−トリフルオロ、メタン−クロロジフルオロ ニトロ、メタンクロロジニトロ、メタンクロロフルオロ、メタン−クロロトリフ ルオロ、メタン−クロロ−ジフルオロ、メタン−ジブロモジフルオロ、メタン− ジクロロジフルオロ、メタン−ジクロロ−フルオロ、メタン−ジフルオロ、メタ ン−ジフルオロ−ヨード、メタン−ジシラノ、メタン−フルオロ、メタン−ヨー ド−トリフルオロ、メタン−ニトロ−トリフルオロ、メタン−ニトロソ−トリフ ルオロ、メタン−テトラフルオロ、メタン−トリクロロフルオロ、メタン−トリ フルオロ、メタンスルフェニルクロリド−トリフルオロ、２−メチルブタン、メ チルエーテル、メチルイソプロピルエーテル、メチルラクタート、メチルニトリ ット、メチルスルフィド、メチルビニルエーテル、ネオン、ネオペンタン、窒素 、亜酸化窒素、１，２，３−ノナデカントリカルボン酸−２−ヒドロキシトリメ チルエステル、１−ノネン−３−イン、酸素、１，４−ペンタジエン、ｎ−ペン タン、ペンタン−ペルフルオロ、２−ペンタノン−４−アミノ−４−メチル、１ −ペンテン、２−テンテン｛シス｝、２−ペンテン｛トランス｝、１−ペンテン −３−ブロモ、１−ペンテン−ペルフルオロ、フタル酸−テトラクロロ、ピペリ ジン−２，３，６−トリメチル、プロパン、プロパン１，１，１，２，２，３− ヘキサフルオロ、プロパン−１，２−エポキシ、プロパン−２，２−ジフルオロ 、プロパン−２−アミノ、プロパン−２−クロロ、プロパン−ヘプタフルオロ− １−ニトロ、プロパン−ヘプタフルオロ−１−ニトロソ、プロパン−ペルフルオ ロ、プロペン、プロピル−１，１，１，２，３，３−ヘキサフルオロ−２，３− ジクロロ、プロピレン−１−クロロ、 プロピレン−クロロ−｛トランス｝、プロポピレン−２−クロロ、プロピレン− ３−フルオロ、プロピレン−ペルフルオロ、プロピン、プロピン−３，３，３− トリフルオロ、スチレン−３−フルオロ、サルファヘキサフルオリド、サルファ （ジ）−デカフルオロ（Ｓ２Ｆ１０）、トルエン−２，４−ジアミン、トリフル オロアセトニトリル、トリフルオロメチルペルオキシド、トリフルオロメチルス ルフィド、タングステンヘキサフルオリド、ビニルアセチレン、ビニルエーテル 、およびキセノンよりなる群から選択される請求項１８０に記載の方法。 １８５．前記ガスが１−フルオロブタンである請求項１８０に記載の方法。 １８６．工程（ｉｉｉ）の後、選択された細孔径をもつ少なくとも一つのフィ ルターを通して前記リポソームを押出すことをさらに含む請求項１８０に記載の 方法。 １８７．（ｉ）その中に薬物を封入したリポソームを約−１０℃と約−２０℃ の間の温度にまで冷却する工程； （ｉｉ）前記リポソームを約７００ｍｍＨｇから約７６０ｍｍＨｇの間の負の圧 力下に置く工程； （ｉｉｉ）前記リポソームを負の圧力下に約２４時間から約７２時間の間インキ ュベートして前記リポソームから実質的にすべての水を除去し、その間前記リポ ソームを約１０℃と約２０℃の間の温度にまで加温する工程； （ｉｖ）周囲圧力に達するまで約４時間から約８時間の期間に亙って前記ガスを 前記リポソーム中に徐々に添加し、その間前記ガスは発泡性先駆物質によって供 給される工程； の諸工程を含む薬物送達システムの製造方法。 １８８．ガスが、フッ素、ペルフルオロメタン、ペルフルオロエタン、ペルフ ルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロペンタン、ペルフルオロヘ キサン、サルファヘキサフルオリド、ヘキサフルオロプロピレン、ブロモクロロ フルオロメタン、オクタフルオロプロパン、１，１ジクロロ，フルオロエタン、 ヘキサフルオロエタン、ヘキサフルオロ−２−ブチン、ペルフルオロペンタン、 ペルフルオロブタン、オクタフルオロ−２−ベテン、ヘキサフルオロブタ−１， ３−ジエン、オクタフルオロシクロペンテン、ヘキサフルオロアセトン、イソプ ロピルアセチレン、アレン、テトラフルオロアレン、ボロントリフルオリド、１ ，２−ブタジエン、１，３−ブタジエン、１，２，３−トリクロロ−２−フルオ ロ−１，３−ブタジエン、２−メチル−１，３−ブタジエン、ヘキサフルオロ− １，３−ブタジエン、ブタジエン、１−フルオロ−ブタン、２−メチルーブタン 、デカフルオロブタン、１−ブテン、２−ブテン、２−メチル−１−ブテン、３ −メチル−１−ブテン、ペルフルオロ−１−ブテン、ペルフルオロ−２−ブテン 、４−フェニル−３−ブテン−２−オン、２−メチル−１−ブテン−３−イン、 ブチルニトレート、１−ブチン、２−ブチン、２−クロロ−１，１，１，４，４ ，４−ヘキサフルオロ−ブチン、３−メチル−１−ブチン、ペルフルオロ−２− ブチン、２−ブロモ−ブチルアルデヒド、カルボニルサルフィド、クロトノニト リル、シクロブタン、メチル−シクロブタン、オクタフルオロ−シクロブタン、 ペルフルオロ−シクロブテン、３−クロロ−シクロペンテン、シクロプロパン、 １，２−ジメチル−シクロプロパン、１，１−ジメチル−シクロプロパン、１， ２−ジメチル−シクロプロパン、エチルシク ロプロパン、メチルシクロプロパン、ジアセチレン、３−エチル−３−メチルジ アジリジン、１，１，１−トリフルオロ−ジアゾエタン、ジメチルアミン、ヘキ サフルオロ−ジメチルアミン、ジメチルエチルアミン、ビス−（ジメチルホスフ ィン）アミン、２，３−ジメチル−２−ノルボルナン、ペルフルオロ−ジメチル アミン、ジメチルオキソニウムクロリド、１，３−ジオキソラン−２−オン、４ −メチル−１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，１，１−トリフルオロ エタン、１，１，２，２−テトラフルオロエタン、１，１，２−トリクロロ−１ ，２，２−トリフルオロエタン、１，１−ジクロロエタン、１，１−ジクロロ− １，２，２，２−テトラフルオロエタン、１，２−ジフルオロエタン、１−クロ ロ−１，１，２，２，２−ペンタフルオロエタン、２−クロロ−１，１−ジフル オロエタン、１−クロロ−１，１，２，２−テトラフルオロエタン、２−クロロ −１，１−ジフルオロエタン、クロロエタン、クロロペンタフルオロエタン、ジ クロロトリフルオロエタン、フルオロエタン、ヘキサフルオロエタン、ニトロペ ンタフルオロエタン、ニトロソペンタフルオロエタン、ペルフルオロエタン、ペ ルフルオロエチルアミン、エチルビニルエーテル、１，１−ジクロロエチレン、 １，１−ジクロロ−１，２−ジフルオロエチレン、１，２−ジフルオロエチレン 、メタン、メタン−スルフォニルクロリド−トリフルオロ、メタン−スルフォニ ルフルオリド−トリフルオロ、メタン−（ペンタフルオロチオ）トリフルオロ、 メタンブロモジフルオロニトロソ、メタンブロモフルオロ、メタンブロモクロロ −フルオロ、メタン−ブロモ−トリフルオロ、メタン−クロロジフルオロニトロ 、メタンクロロジニトロ、メタンクロロフルオロ、メタン−クロロトリフルオロ 、メタン−クロロ−ジフルオロ、メタ ン−ジブロモジフルオロ、メタン−ジクロロジフルオロ、メタン−ジクロロ−フ ルオロ、メタン−ジフルオロ、メタン−ジフルオロ−ヨード、メタン−ジシラノ 、メタン−フルオロ、メタン−ヨード−トリフルオロ、メタン−ニトロ−トリフ ルオロ、メタン−ニトロソ−トリフルオロ、メタン−テトラフルオロ、メタン− トリクロロフルオロ、メタン−トリフルオロ、メタンスルフェニルクロリド−ト リフルオロ、２−メチルブタン、メチルエーテル、メチルイソプロピルエーテル 、メチルラクタート、メチルニトリット、メチルスルフィド、メチルビニルエー テル、ネオン、ネオペンタン、窒素、亜酸化窒素、１，２，３−ノナデカントリ カルボン酸−２−ヒドロキシトリメチルエステル、１−ノネン−３−イン、酸素 、１，４−ペンタジエン、ｎ−ペンタン、ペンタン−ペルフルオロ、２−ペンタ ノン−４−アミノ−４−メチル、１−ペンテン、２−テンテン｛シス｝、２−ペ ンテン｛トランス｝、１−ペンテン−３−ブロモ、１−ペンテン−ペルフルオロ 、フタル酸−テトラクロロ、ピペリジン−２，３，６−トリメチル、プロパン、 プロパン１，１，１，２，２，３−ヘキサフルオロ、プロパン−１，２−エポキ シ、プロパン−２，２−ジフルオロ、プロパン−２−アミノ、プロパン−２−ク ロロ、プロパン−ヘプタフルオロ−１−ニトロ、プロパン−ヘプタフルオロ−１ −ニトロソ、プロパン−ペルフルオロ、プロペン、プロピル−１，１，１，２， ３，３−ヘキサフルオロ−２，３−ジクロロ、プロピレン−１−クロロ、プロピ レン−クロロ−｛トランス｝、プロポピレン−２−クロロ、プロピレン−３−フ ルオロ、プロピレン−ペルフルオロ、プロピン、プロピン−３，３，３−トリフ ルオロ、スチレン−３−フルオロ、サルファヘキサフルオリド、サルファ（ジ） −デカフルオロ（Ｓ２Ｆ１０）、トル エン−２，４−ジアミン、トリフルオロアセトニトリル、トリフルオロメチルペ ルオキジド、トリフルオロメチルスルフィド、タングステンヘキサフルオリド、 ビニルアセチレン、ビニルエーテル、およびキセノンよりなる群から選択される 請求項１８７に記載の方法。 １８９．前記ガスが１−フルオロブタンである請求項１８７に記載の方法。 １９０．工程（ｉｖ）の後、選択された細孔径をもつ少なくとも一つのフィル ターを通して前記リポソームを押出すことを含む請求項１８７に記載の方法。 １９１．（ｉ）薬物を封入したリポソームを含有する容器； （ｉｉ）容器中に含有されるリポソームを冷却する手段； （ｉｉｉ）容器に負の圧力をを適用して容器中に含有するリポソームから水を引 き出す手段； （ｉｖ）負圧にする手段を容器に連結する導管； （ｖ）導管中を流れる水を収集する手段； （ｖｉ）容器中に含有されるリポソーム中にガスを導入する手段； （ｖｉｉ）容器の温度を調節する手段； からなる薬物送達システムを製造する装置。 １９２．負圧にする手段が真空ポンプである請求項１９１に記載の装置。 １９３．容器中に含有されるリポソームを冷却する手段をさらに含む請求項１ ９１に記載の装置。 １９４．冷却手段が容器中に含有されるリポソームを約−６０℃と約−２０℃ の間に冷却する手段を有する請求項１９１に記載の装置。 １９５．冷却手段が氷浴を含む請求項１９１に記載の装置。 １９６．導管中を流れる水を収集する手段をさらに含む請求項１９１に記載の 装置。 １９７．収集手段がトラップである請求項１９１に記載の装置。 １９８．トラップを冷却する手段をさらに含む請求項１９１に記載の装置。 １９９．トラップが液体がそこを通って流動するように適応された第一と第二 部材を含み、部材は互いにかつ導管によって流路連結し、第二部材は第一部材の 周りを螺旋状に配置され、トラップは冷却手段を含み、冷却手段は第一と第二部 材の少なくとも一部を取り囲んでいる氷浴を含む請求項１９８に記載の装置。 ２００．（ａ）真空乾燥ガス徐添加法によって製造されかつ薬物を封入したガ ス充填リポソームを含む薬物送達システムを患者に投与し、前記ガスは発泡性先 駆物質によって供給されること； （ｂ）発泡性先駆物質の液体から気体への相転移を決定しかつ患部中の前記リポ ソームの存在を決定するため、超音波を使用してリポソームを監視すること； （ｃ）超音波を使用してリポソームを破裂させ薬物を患部に放出すること； からなる患者の体内の患部へ薬物を制御送達する方法。 ２０１．薬物が患者の左心臓の区域に送達される請求項２００に記載の方法。 ２０２．請求項１８０に記載の方法によって製造された生産物。 ２０３．請求項１８７に記載の方法によって製造された生産物。 ２０４．（ｉ）薬物を封入したリポソームを負の圧力下に置く工程； （ｉｉ）前記リポソームからの実質的にすべての水を除去するのに十分な時間の 間、前記リポソームを前記負の圧力下でインキュベートする工程； （ｉｉｉ）周囲圧力に達するまで前記リポソーム中にガスを徐々に添加し、前記 ガスは発泡性先駆物質によって供給される工程； の諸工程を含む方法によって製造された薬物送達システム。 ２０５．前記方法が発泡性先駆物質の活性化温度で実施される請求項２０４に 記載の方法。 ２０６．（ａ）薬物を封入したガス充填マイクロスフェアを含む薬物送達シス テムを患者の標的部位に投与し、前記ガスは約体温の活性化温度を有する発泡性 先駆物質によって供給されること； （ｂ）前記標的部位でのマイクロスフェアの蓄積と発泡性先駆物質の液体から気 体への相転移を決定し、かつ患部中の前記マイクロスフェアの存在を決定するた めに、エネルギーを使用してマイクロスフェアを監視すること； （ｃ）エネルギーを使用してマイクロスフェアを破裂させ薬物を患部に放出する こと； からなる虚血性組織および病変組織を画像化する方法。 ２０７．前記ガスが約体温の活性化温度を有する発泡性先駆物質によって供給 される、一つ以上の薬物を封入したガス充填マイクロスフェアを含む薬物送達シ ステムを患者の標的部位に送達することからなる虚血性組織および病変組織への 薬物の投与方法。 ２０８．前記薬物送達システムが標的部位への送達されるエネルギー によって活性化される請求項２０７に記載の方法。 ２０９．（ａ）薬物を封入したガス充填マイクロスフェアを含む薬物送達シス テムを患者の標的部位に投与し、前記ガスは約体温またはそれ以上の活性化温度 を有する発泡性先駆物質によって供給されること； （ｂ）前記標的部位でのマイクロスフェアの蓄積および発泡性先駆物質の液体か ら気体への相転移を決定して、選択された温度での前記マイクロスフェアの活性 化を決定するために、エネルギーを使用してマイクロスフェアを監視すること； からなる発熱症中の温度を測定する非侵入的方法。 ２１０．前記容器を加圧する工程をさらに含む請求項９５に記載の方法。 ２１１．前記水溶液を冷却する手段が前記水溶液中の脂質のゲルから液晶への 相転移温度以下に前記水溶液を冷却する手段を含む請求項１１７に記載の装置。 ２１２．前記容器を加圧する手段をさらに含む請求項２１１に記載の装置。 ２１３．前記マイクロスフェアがジパルミトイルホスファチジルコリン、ジパ ルミトイルホスファチジン酸、およびポリエチレングリコールに共有結合したジ パルミトイルホスファチジルエタノールアミンを含む請求項１に記載の治療薬送 達システム。 ２１４．前記マイクロスフェアがジパルミトイルホスファチジルコリン、ジパ ルミトイルホスファチジン酸、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン 、およびポリエチレングリコールよりなる群から選択される脂質を含む請求項１ に記載の治療薬送達システム。 ２１５．前記マイクロスフェアが少なくとも一つのジパルミトイルリピドを含 む請求項１に記載の治療薬送達システム。 ２１６．前記治療薬が炭水化物、ペプチド、グリコペプチド、グリコリピド、 レシチン、グリコ複合体よりなる群から選択され、前記治療薬は前記マイクロス フェアの表面中に取込まれる請求項１に記載の治療薬送達システム。 ２１７．前記治療薬が前記マイクロスフェアの表面中に前記治療薬のホスホリ ピドへの結合によって取込まれる請求項１に記載の治療薬送達システム。 ２１８．前記単クローン抗体が前記マイクロスフェアの表面中に前記治療薬の ホスホリピドへの結合によって取込まれる請求項４２に記載の治療薬送達システ ム。 ２１９．前記容器がシリンジのバレルであり、前記シリンジも少なくとも一つ のフィルターと針を含み；取出す工程は前記リポソームを前記フィルターを通し て前記バレルから押出すことによって前記ガス充填リポソームを分粒することを 含む請求項９３に記載の方法。 ２２０．前記容器がシリンジのバレルである請求項９３に記載の方法。 ２２１．前記シリンジも少なくとも一つのフィルターと針を含み；取出す工程 は前記リポソームを前記フィルターを通して前記バレルから押出すことによって 前記ガス充填リポソームを分粒することを含む請求項２２０に記載の方法。 ２２２．前記リポソームをシリンジ中に引出すことからなり、前記シリンジは バレル、少なくとも一つのフィルターおよび針を含み；前記フィルターは前記リ ポソームを前記シリンジ中に引き出すとき前記リポソー ムを分粒することを含む請求項９８に記載の方法。 ２２３．前記リポソームをシリンジのバレル中に押出すことからなり、前記シ リンジも少なくとも一つのフィルターと針を含み；前記フィルターは前記リポソ ームを前記シリンジ中に押出すとき前記リポソームを分粒することを含む請求項 ９３に記載の方法。 ２２４．前記取出す工程が前記泡含有のガス充填リポソームをシリンジ中に引 き出すことを含み、前記シリンジはバレル、少なくとも一つのフィルターおよび 針を含み；前記リポソームを分粒する請求項９３に記載の方法。 ２２５．前記容器がシリンジのバレルであり、前記シリンジも少なくとも一つ のファルターと針を含み；前記取出す手段は前記バレルと前記針の間に前記シリ ンジに備えた前記フィルターを通して前記ガス充填リポソームを前記バレルから 押出すことを含み、前記リポソームを分粒する請求項１１８に記載の装置。 ２２６．前記容器がシリンジのバレルである請求項１１８に記載の装置。 ２２７．前記シリンジがバレル、少なくとも一つのフィルターおよび針を含み ；前記取出す工程は前記リポソームを前記バレルから前記フィルターを通して押 出すことによって前記ガス充填リポソームを分粒する手段を含む請求項２２６に 記載の装置。 ２２８．前記容器がシリンジのバレルであり、前記シリンジも少なくとも一つ のフィルターと針を含み；前記フィルターは前記リポソームを前記バレル中に引 き出すとき前記リポソームを分粒する手段である請求項１１２に記載の装置。 ２２９．前記容器がシリンジのバレルであり、前記シリンジも少なくとも一つ のフィルターと針を含み；前記フィルターは前記リポソームを前記バレルから押 出すとき前記リポソームを分粒する手段である請求項１１８に記載の装置。 ２３０．前記取出す手段が前記泡含有のガス充填リポソームをシリンジ中に引 き出すことを含み、前記シリンジはバレル、少なくとも一つのフィルターおよび 針を含み；前記リポソームを分粒する請求項１１８に記載の装置。 ２３１．治療薬の位置が前記マイクロスフェア内、前記マイクロスフェアの外 側に結合しておよび前記マイクロスフェアの前記壁内に封入されてよりなる群か ら選択される請求項１に記載の標的指向治療薬送達システム。 ２３２．前記治療薬が前記マイクロスフェアの内側に在る請求項８４に記載の 方法。 ２３３．前記治療薬が前記マイクロスフェアの外側に結合している請求項８４ に記載の方法。 ２３４．前記マイクロスフェアが内部と壁を含み、前記治療薬は前記マイクロ スフェアの前記壁中に封入されている請求項８４に記載の方法。 ２３５．バレル、フィルターアセンブリーおよび針を有するシリンジを含み、 前記フィルターアセンブリーは前記バレルと前記針の間に備えられかつ少なくと も一つのフィルターを含み、前記バレルは温度活性化発泡性先駆物質充填マイク ロスフェアを含む標的指向型治療薬送達システムを含有し、前記発泡性先駆物質 充填マイクロスフェアは治療薬化合物を含む標的指向型治療薬送達装置。 ２３６．前記フィルターアセンブリーがカスケード型フィルターアセンブリー であり、針向きの側面とバレル向きの側面を有する第一フィルター、第二フィル ター、前記第一フィルターの前記針向き側面と前記バレル向き側面の上の夫々第 一と第二金属網円板、前記第二金属網円板と前記第二フィルターの間のＯリング を含み、前記第二フィルターは前記第一フィルターのバレル向き側面から約１５ ０μｍの間隔がある請求項２３５に記載の装置。 ２３７．前記第一フィルターと第二フィルターが細孔を有し、前記第二フィル ターが約１０μｍの細孔径を有し、前記第一フィルターが約８μｍの細孔径を有 する請求項２３６に記載の装置。 ２３８．前記フィルターが細孔を有し、前記細孔が約３０ｎｍから約２０ミク ロンの範囲の大きさを有する請求項２３５に記載の装置。 ２３９．前記フィルターが細孔を有し、前記細孔が約８μｍの大きさを有する 請求項２３５に記載の装置。 ２４０．前記フィルターが細孔を有し、前記細孔が約０．２２μｍの大きさを 有する請求項２３５に記載の装置。 ２４１．第一フィルターと第二フィルターを有し、前記第一フィルターと第二 フィルターが細孔を有し、前記第二フィルターが約１０μｍの細孔径を有し、前 記第一フィルターが約８μｍの細孔径を有する請求項２２９に記載の装置。 ２４２．前記フィルターが細孔を有し、前記細孔が約３０ｎｍから約２０ミク ロンの範囲の大きさを有する請求項２２９に記載の装置。 ２４３．前記フィルターが細孔を有し、前記細孔が約８μｍの大きさを有する 請求項２２９に記載の装置。 ２４４．前記フィルターが細孔を有し、前記細孔が約０．２２μｍの大きさを 有する請求項２２９に記載の装置。 ２４５．前記第一フィルターと第二フィルターが細孔を有し、前記第二フィル ターが約１０μｍの細孔径を有し、前記第一フィルターが約８μｍの細孔径を有 する請求項２３０に記載の装置。 ２４６．第一フィルターと第二フィルターを有し、前記フィルターが細孔を有 し、前記細孔が約３０ｎｍから約２０ミクロンの範囲の大きさを有する請求項２ ３０に記載の装置。 ２４７．前記フィルターが細孔を有し、前記細孔が約８μｍの大きさを有する 請求項２３０に記載の装置。 ２４８．前記フィルターが細孔を有し、前記細孔が約０．２２μｍの大きさを 有する請求項２３０に記載の装置。 ２４９．前記マイクロスフェアを噴霧器を介して投与する請求項４７に記載の 方法。 ２５０．前記マイクロスフェアが肺臓を標的とする請求項２４９に記載の方法 。 ２５１．前記治療薬がアンチセンスｒａｓ／ｐ５３である請求項２５０に記載 の方法。 ２５２．周囲圧力以上の圧力で実施される請求項７７に記載の方法。 ２５３．周囲圧力以上の圧力で実施される請求項８４に記載の方法。 ２５４．周囲圧力以上の圧力で実施される請求項９１に記載の方法。 ２５５．周囲圧力以上の圧力で実施される請求項９２に記載の方法。 ２５６．前記ガス充填マイクロスフェアが治療薬とフッ素化ガスを含むガス充 填マイクロスフェアからなる薬物送達システム。 ２５７．前記フッ素化ガスが、フッ素ガス、１−フルオロブタン、ヘキサフル オロアセトン、テトラフルオロアレン、ボロントリフルオリド、１，２，３−ト リクロロ，２−フルオロ−１，３−ブタジエン、ヘキサフルオロ−１，３−ブタ ジエン、１−フルオロ−ブタン、１，２，３−トリクロロ，２−フルオロ−１、 ３−ブタジエン；ヘキサフルオロ−１，３−ブタジエン；１−フルオロ−ブタン ；デカフルオロブタン；ペルフルオロ−１−ブテン；ペリフルオロ−１−ブテン ；ペルフルオロ−２−ブテン；１−クロロ−１，１，１，４，４，４−ヘキサフ ルオロ−ブチン；ペルフルオロ−２−ブチン；オクタフルオロ−シクロブタン； ペルフルオロ−シクロブテン；ペルフルオロエタン；ペルフルオロプロパン；ペ ルフルオロブタン；ペルフルオロペンタン；ペルフルオロヘキサン；１，１，１ −トリフルオロジアゾエタン；ヘキサフルオロ−ジメチルアミン；ペルフルオロ ジメチルアミン；４−メチル−１，１，１，２，−テトラフルオロエタン；１， １，１−トリフルオロエタン；１，１，２，２−テトラフルオロエタン；１，１ ，２−トリクロロ−１，２，２−トリフルオロエタン；１，１−ジクロロ−１， ２，２，２−テトラフルオロエタン；１，２−ジフルオロエタン；１−クロロ− １，１，２，２，２−ペンタフルオロエタン；２−クロロ，１，１−ジフルオロ エタン；１−クロロ−１，１，２，２−テトラフルオロエタン；２−クロロ，１ ，１−ジフルオロエタン；クロロペンタフルオロエタン；ジクロロトリフルオロ エタン；フルオロエタン；ヘキサフルオロ−エタン；ニトロ−ペンタフルオロエ タン；ニトロ−ソペンタフルオロエタン；ペルフルオロエタン；ペルフルオロエ チルアミン；１，１−ジクロロ−１，２−ジフルオロエチレン；１，２−ジフル オロエチレン；メタン−スルフォ ニルクロリド−トリフルオロ；メタンスルフォニルフルオリドトリフルオロ；メ タン−（ペンタフルオロチオ）トリフルオロ；メタン−ブロモジフルオロニトロ ソ；メタンブロモフルオロ；メタン−ブロモクロロ−フルオロ；メタン−ブロモ −トリフルオロ；メタン−クロロジフルオロニトロ；メタン−クロロフルオロ； メタン−クロロトリフルオロ；メタンクロロ−ジフルオロ；メタン−ジブロモジ フルオロ；メタン−ジクロロジフルオロ；メタン−ジクロロ−フルオロ；メタン ジフルオロ；メタン−ジフルオロ−ヨード；メタンフルオロ；メタン−ヨード− トリフルオロ；メタン−ニトロ−トリフルオロ；メタン−ニトロソ−トリフルオ ロ；メタン−テトラフルオロ；メタン−トリクロロフルオロ；メタン−トリフル オロ；メタンスルフェニルクロリド−トリフルオロ；ペンタンペルフルオロ；１ −ペンタン−ペルフルオロ；プロパン−１，１，１，２，２，３−ヘキサフルオ ロ；プロパン−２，２−ジフルオロ；プロパン−ヘプタフルオロ−１−ニトロ； プロパン−ヘプタフルオロ−１−ニトロソ；プロパン−ペリフルオロ；プロピル −１，１，１，２，３，３−ヘキサフルオロ−２，３−ジクロロ；プロピレン− ３−フルオロ；プロピレン−ペルフルオロ；プロピン−３，３，３−トリフルオ ロ；スチレン−３−フルオロ；サルファヘキサフルオリド；サルファ−（ジ）− デカフルオロ；トリフルオロアセトニトリル；トリフルオロメチルペリオキシド ；トリフルオロメチルスルフィド；タングステンヘキサフルオリド、ペンタフル オロオクタデシルヨージド、ペルフルオロオクチルブロミド、ペルフルオロデカ リン、ペルフルオロドデカリン、ペルフルオロオクチルヨージド、ペルフルオロ トリプロピルアミン、ペルフルオロトリブチルアミン、ヘキサフルオロプロピレ ン、ブロモクロロフルオロ メタン、オクタフルオロプロパン、１，１−ジクロロ、フルオロエタン、ヘキサ フルオロエタン、ヘキサフルオロ−２−ブチン、ペルフルオロペンタン、ペルフ ルオロブタン、オクタフルオロ−２−ブテン、ヘキサフルオロブタ−１，３−ジ エン、オクタフルオロシクロペンテンよりなる群から選択される請求項２５６に 記載の薬物送達システム。 ２５８．前記フッ素化ガスが、フッ素ガス、ペルフルオロメタン、ペルフルオ ロエタン、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロペンタン 、ペルフルオロヘキサン、サルファヘキサフルオリド、ヘキサフルオロプロピレ ン、オクタフルオロプロパン、ペルフルオロシクロブタン、オクタフルオロシク ロペンテン、ドデカフルオロペンタン、およびオクタフルオロシクロブタンより なる群から選択される請求項２５７に記載の薬物送達システム。 ２５９．前記フッ素化ガスが、ペルフルオロメタン、ペルフルオロエタン、ペ ルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロシクロブタン、および サルファヘキサフルオリドよりなる群から選択される請求項２５８に記載の薬物 送達システム。 ２６０．前記フッ素化ガスが、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロシクロブ タン、およびペルフルオロブタンよりなる群から選択される請求項２５９に記載 の薬物送達システム。 ２６１．前記ガスがペルフルオロプロパンである請求項２６０に記載の薬物送 達システム。 ２６２．前記フッ素化ガスがペルフルオロカーボンガスである請求項である２ ５６に記載の薬物送達システム。 ２６３．前記ペルフルオロカーボンガスが、ペルフルオロメタン、ペ ルフルオロエタン、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、およびペルフ ルオロシクロブタンよりなる群から選択される請求項２６２に記載の薬物送達シ ステム。 ２６４．前記ペルフルオロカーボンガスが、ペルフルオロプロパン、ペルフル オロシクロブタン、およびペルフルオロブタンよりなる群から選択される請求項 ２６３に記載の薬物送達システム。 ２６５．前記ペルフルオロカーボンガスがペルフルオロプロパンである請求項 ２６４に記載の薬物送達システム。 ２６６．フッ素化ガスの存在で、リピドのゲルから液晶への相転移温度以下の 温度で、リピドと治療薬を含む水溶液を振盪する工程からなる、ガス充填リポソ ームを含む薬物送達システムの製造方法。 ２６７．前記フッ素化ガスが、フッ素ガス、１−フルオロブタン、ヘキサフル オロアセトン、テトラフルオロアレン、ボロントリフルオリド、１，２，３−ト リクロロ，２−フルオロ−１，３−ブタジエン、ヘキサフルオロ−１，３−ブタ ジエン、１−フルオロ−ブタン、１，２，３−トリクロロ，２−フルオロ−１、 ３−ブタジエン；ヘキサフルオロ−１，３−ブタジエン；１−フルオロ−ブタン ；デカフルオロブタン；ペルフルオロ−１−ブテン；ペリフルオロ−１−ブテン ；ペルフルオロ−２−ブテン；１−クロロ−１，１，１，４，４，４−ヘキサフ ルオロ−ブチン；ペルフルオロ−２−ブチン；オクタフルオロ−シクロブタン； ペルフルオロ−シクロブテン；ペルフルオロエタン；ペルフルオロプロパン；ペ ルフルオロブタン；ペルフルオロペンタン；ペルフルオロヘキサン；１，１，１ −トリフルオロジアゾエタン；ヘキサフルオロ−ジメチルアミン；ペルフルオロ ジメチルアミン；４−メチル−１，１，１，２， −テトラフルオロエタン；１，１，１−トリフルオロエタン；１，１，２，２− テトラフルオロエタン；１，１，２−トリクロロ−１，２，２−トリフルオロエ タン；１，１−ジクロロ−１，２，２，２−テトラフルオロエタン；１，２−ジ フルオロエタン；１−クロロ−１，１，２，２，２−ペンタフルオロエタン；２ −クロロ，１，１−ジフルオロエタン；１−クロロ−１，１，２，２−テトラフ ルオロエタン；２−クロロ，１，１−ジフルオロエタン；クロロペンタフルオロ エタン；ジクロロトリフルオロエタン；フルオロエタン；ヘキサフルオロ−エタ ン；ニトロ−ペンタフルオロエタン；ニトロ−ソペンタフルオロエタン；ペルフ ルオロエタン；ペルフルオロエチルアミン；１，１−ジクロロ−１，２−ジフル オロエチレン；１，２−ジフルオロエチレン；メタン−スルフォニルクロリド− トリフルオロ；メタンスルフォニルフルオリドトリフルオロ；メタン−（ペンタ フルオロチオ）トリフルオロ；メタン−ブロモジフルオロニトロソ；メタン−ブ ロモフルオロ；メタン−ブロモクロロ−フルオロ；メタン−ブロモ−トリフルオ ロ；メタン−クロロジフルオロニトロ；メタン−クロロフルオロ；メタン−クロ ロトリフルオロ；メタン−クロロ−ジフルオロ；メタン−ジブロモジフルオロ； メタン−ジクロロジフルオロ；メタン−ジクロロ−フルオロ；メタン−ジフルオ ロ；メタン−ジフルオロ−ヨード；メタン−フルオロ；メタン−ヨード−トリフ ルオロ；メタン−ニトロ−トリフルオロ；メタン−ニトロソ−トリフルオロ；メ タン−テトラフルオロ；メタントリクロロフルオロ；メタントリフルオロ；メタ ンスルフェニルクロリド−トリフルオロ；ペンタン−ペルフルオロ；１−ペンタ ン−ペルフルオロ；プロパン−１，１，１，２，２，３−ヘキサフルオロ；プロ パン−２，２−ジフルオロ；プ ロパン−ヘプタフルオロ−１−ニトロ；プロパン−ヘプタフルオロ−１−ニトロ ソ；プロパン−ペリフルオロ；プロピル−１，１，１，２，３，３−ヘキサフル オロ−２，３−ジクロロ；プロピレン−３−フルオロ；プロピレン−ペルフルオ ロ；プロピン−３，３，３−トリフルオロ；スチレン−３−フルオロ；サルファ ヘキサフルオリド；サルファ−（ジ）−デカフルオロ；トリフルオロアセトニト リル；トリフルオロメチルペリオキシド；トリフルオロメチルスルフィド；タン グステンヘキサフルオリド、ペンタフルオロオクタデシルヨージド、ペルフルオ ロオクチルブロミド、ペルフルオロデカリン、ペルフルオロドデカリン、ペルフ ルオロオクチルヨージド、ペルフルオロトリプロピルアミン、ペルフルオロトリ ブチルアミン、ヘキサフルオロプロピレン、ブロモクロロフルオロメタン、オク タフルオロプロパン、１，１−ジクロロ、フルオロエタン、ヘキサフルオロエタ ン、ヘキサフルオロ−２−ブチン、ペルフルオロペンタン、ペルフルオロブタン 、オクタフルオロ−２−ブテン、ヘキサフルオロブタ−１，３−ジエン、オクタ フルオロシクロペンテンよりなる群から選択される請求項２６６に記載の方法。 ２６８．前記フッ素化ガスが、フッ素ガス、ペルフルオロメタン、ペルフルオ ロエタン、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロペンタン 、ペルフルオロヘキサン、サルファヘキサフルオリド、ヘキサフルオロプロピレ ン、オクタフルオロプロパン、ペルフルオロシクロブタン、オクタフルオロシク ロペンテン、ドデカフルオロペンタン、およびオクタフルオロシクロブタンより なる群から選択される請求項２６７に記載の方法。 ２６９．前記フッ素化ガスが、ペルフルオロメタン、ペルフルオロエ タン、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロシクロブタン 、およびサルファヘキサフルオリドよりなる群から選択される請求項２６８に記 載の方法。 ２７０．前記フッ素化ガスが、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロシクロブ タン、およびペルフルオロブタンよりなる群から選択される請求項２６９に記載 の方法。 ２７１．前記ガスがペルフルオロプロパンである請求項２６６に記載の方法。 ２７２．前記フッ素化ガスがペルフルオロカーボンガスである請求項２７１に 記載の方法。 ２７３．前記ペルフルオロカーボンガスが、ペルフルオロメタン、ペルフルオ ロエタン、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、およびペルフルオロシ クロブタンよりなる群から選択される請求項２７２に記載の方法。 ２７４．前記ペルフルオロカーボンガスが、ペルフルオロプロパン、ペルフル オロシクロブタン、およびペルフルオロブタンよりなる群から選択される請求項 ２７３に記載の方法。 ２７５．前記ペルフルオロカーボンガスがペルフルオロプロパンである請求項 ２７４に記載の方法。 ２７６．フッ素化ガスの存在で、リピドのゲルから液晶への相転移温度以下の 温度で、リピドと治療薬を含む水溶液を振盪してガス充填リポソームを生成する 工程；および前記リポソームに治療薬を添加する工程からなる、ガス充填リポソ ームを含む薬物送達システムの製造方法。 ２７７．前記フッ素化ガスが、フッ素ガス、１−フルオロブタン、ヘ キサフルオロアセトン、テトラフルオロアレン、ボロントリフルオリド、１，２ ，３−トリクロロ，２−フルオロ−１，３−ブタジエン、ヘキサフルオロ−１， ３−ブタジエン、１−フルオロ−ブタン、１，２，３−トリクロロ，２−フルオ ロ−１、３−ブタジエン；ヘキサフルオロ−１，３−ブタジエン；１−フルオロ −ブタン；デカフルオロブタン；ペルフルオロ−１−ブテン；ペリフルオロ−１ −ブテン；ペルフルオロ−２−ブテン；１−クロロ−１，１，１，４，４，４− ヘキサフルオロ−ブチン；ペルフルオロ−２−ブチン；オクタフルオロ−シクロ ブタン；ペルフルオロ−シクロブテン；ペルフルオロエタン；ペルフルオロプロ パン；ペルフルオロブタン；ペルフルオロペンタン；ペルフルオロヘキサン；１ ，１，１−トリフルオロジアゾエタン；ヘキサフルオロ−ジメチルアミン；ペル フルオロジメチルアミン；４−メチル−１，１，１，２，−テトラフルオロエタ ン；１，１，１−トリフルオロエタン；１，１，２，２−テトラフルオロエタン ；１，１，２−トリクロロ−１，２，２−トリフルオロエタン；１，１−ジクロ ロ−１，２，２，２−テトラフルオロエタン；１，２−ジフルオロエタン；１− クロロ−１，１，２，２，２−ペンタフルオロエタン；２−クロロ，１，１−ジ フルオロエタン；１−クロロ−１，１，２，２−テトラフルオロエタン；２−ク ロロ，１，１−ジフルオロエタン；クロロペンタフルオロエタン；ジクロロトリ フルオロエタン；フルオロエタン；ヘキサフルオロ−エタン；ニトロ−ペンタフ ルオロエタン；ニトロ−ソペンタフルオロエタン；ペルフルオロエタン；ペルフ ルオロエチルアミン；１，１−ジクロロ−１，２−ジフルオロエチレン；１，２ −ジフルオロエチレン；メタン−スルフォニルクロリド−トリフルオロ；メタン −スルフォニルフルオリドトリフ ルオロ；メタン−（ペンタフルオロチオ）トリフルオロ；メタン−ブロモジフル オロニトロソ；メタン−ブロモフルオロ；メタン−ブロモクロロ−フルオロ；メ タン−ブロモ−トリフルオロ；メタン−クロロジフルオロニトロ；メタンクロロ フルオロ；メタン−クロロトリフルオロ；メタンクロロ−ジフルオロ；メタンジ ブロモジフルオロ；メタンジクロロジフルオロ；メタン−ジクロロ−フルオロ； メタンジフルオロ；メタン−ジフルオロ−ヨード；メタン−フルオロ；メタン− ヨード−トリフルオロ；メタン−ニトロ−トリフルオロ；メタン−ニトロソ−ト リフルオロ；メタン−テトラフルオロ；メタン−トリクロロフルオロ；メタント リフルオロ；メタンスルフェニルクロリド−トリフルオロ；ペンタン−ペルフル オロ；１−ペンタン−ペルフルオロ；プロパン−１，１，１，２，２，３−ヘキ サフルオロ；プロパン−２，２−ジフルオロ；プロパンヘプタフルオロ−１−ニ トロ；プロパン−ヘプタフルオロ−１−ニトロソ；プロパン−ペリフルオロ；プ ロピル−１，１，１，２，３，３−ヘキサフルオロ−２，３−ジクロロ；プロピ レン−３−フルオロ；プロピレン−ペルフルオロ；プロピン−３，３，３−トリ フルオロ；スチレン−３−フルオロ；サルファヘキサフルオリド；サルファ−（ ジ）−デカフルオロ；トリフルオロアセトニトリル；トリフルオロメチルペリオ キシド；トリフルオロメチルスルフィド；タングステンヘキサフルオリド、ペン タフルオロオクタデシルヨージド、ペルフルオロオクチルブロミド、ペルフルオ ロデカリン、ペルフルオロドデカリン、ペルフルオロオクチルヨージド、ペルフ ルオロトリプロピルアミン、ペルフルオロトリブチルアミン、ヘキサフルオロプ ロピレン、ブロモクロロフルオロメタン、オクタフルオロプロパン、１，１−ジ クロロ、フルオロエタン、 ヘキサフルオロエタン、ヘキサフルオロ−２−ブチン、ペルフルオロペンタン、 ペルフルオロブタン、オクタフルオロ−２−ブテン、ヘキサフルオロブタ−１， ３−ジエン、オクタフルオロシクロペンテンよりなる群から選択される請求項２ ７６に記載の方法。 ２７８．前記フッ素化ガスが、フッ素ガス、ペルフルオロメタン、ペルフルオ ロエタン、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロペンタン 、ペルフルオロヘキサン、サルファヘキサフルオリド、ヘキサフルオロプロピレ ン、オクタフルオロプロパン、ペルフルオロシクロブタン、オクタフルオロシク ロペンテン、ドデカフルオロペンタン、およびオクタフルオロシクロブタンより なる群から選択される請求項２７７に記載の方法。 ２７９．前記フッ素化ガスが、ペルフルオロメタン、ペルフルオロエタン、ペ ルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロシクロブタン、および サルファヘキサフルオリドよりなる群から選択される請求項２７８に記載の方法 。 ２８０．前記フッ素化ガスが、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロシクロブ タン、およびペルフルオロブタンよりなる群から選択される請求項２７９に記載 の方法。 ２８１．前記ガスがペルフルオロプロパンである請求項２８０に記載の方法。 ２８２．前記フッ素化ガスがペルフルオロカーボンガスである請求項２８１に 記載の方法。 ２８３．前記ペルフルオロカーボンガスが、ペルフルオロメタン、ペルフルオ ロエタン、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、およ びペルフルオロシクロブタンよりなる群から選択される請求項２７６に記載の方 法。 ２８４．前記ペルフルオロカーボンガスが、ペルフルオロプロパン、ペルフル オロシクロブタン、およびペルフルオロブタンよりなる群から選択される請求項 ２８３に記載の方法。 ２８５．前記ペルフルオロカーボンガスがペルフルオロプロパンである請求項 ２８４に記載の方法。 ２８６．フッ素化ガスの存在でリピドと治療用化合物を含む水溶液を振盪する 工程；および得られた治療用のガス充填リポソームを分離する工程からなるガス 充填リポソームを含む標的指向型治療薬送達システムの製造方法。 ２８７．前記フッ素化ガスが、フッ素ガス、１−フルオロブタン、ヘキサフル オロアセトン、テトラフルオロアレン、ボロントリフルオリド、１，２，３−ト リクロロ，２−フルオロ−１，３−ブタジエン、ヘキサフルオロ−１，３−ブタ ジエン、１−フルオロ−ブタン、１，２，３−トリクロロ，２−フルオロ−１、 ３−ブタジエン；ヘキサフルオロ−１，３−ブタジエン；１−フルオロ−ブタン ；デカフルオロブタン；ペルフルオロ−１−ブテン；ペリフルオロ−１−ブテン ；ペルフルオロ−２−ブテン；１−クロロ−１，１，１，４，４，４−ヘキサフ ルオロ−ブチン；ペルフルオロ−２−ブチン；オクタフルオロ−シクロブタン； ペルフルオロ−シクロブテン；ペルフルオロエタン；ペルフルオロプロパン；ペ ルフルオロブタン；ペルフルオロペンタン；ペルフルオロヘキサン；１，１，１ −トリフルオロジアゾエタン；ヘキサフルオロ−ジメチルアミン；ペルフルオロ ジメチルアミン；４−メチル−１，１，１，２， −テトラフルオロエタン；１，１，１−トリフルオロエタン；１，１，２，２− テトラフルオロエタン；１，１，２−トリクロロ−１，２，２−トリフルオロエ タン；１，１−ジクロロ−１，２，２，２−テトラフルオロエタン；１，２−ジ フルオロエタン；１−クロロ−１，１，２，２，２−ペンタフルオロエタン；２ −クロロ，１，１−ジフルオロエタン；１−クロロ−１，１，２，２−テトラフ ルオロエタン；２−クロロ，１，１−ジフルオロエタン；クロロペンタフルオロ エタン；ジクロロトリフルオロエタン；フルオロエタン；ヘキサフルオロ−エタ ン；ニトロ−ペンタフルオロエタン；ニトロ−ソペンタフルオロエタン；ペルフ ルオロエタン；ペルフルオロエチルアミン；１，１−ジクロロ−１，２−ジフル オロエチレン；１，２−ジフルオロエチレン；メタン−スルフォニルクロリド− トリフルオロ；メタンスルフォニルフルオリドトリフルオロ；メタン−（ペンタ フルオロチオ）トリフルオロ；メタン−ブロモジフルオロニトロソ；メタンブロ モフルオロ；メタン−ブロモクロロ−フルオロ；メタン−ブロモ−トリフルオロ ；メタン−クロロジフルオロニトロ；メタン−クロロフルオロ；メタン−クロロ トリフルオロ；メタンクロロ−ジフルオロ；メタン−ジブロモジフルオロ；メタ ン−ジクロロジフルオロ；メタン−ジクロロ−フルオロ；メタンジフルオロ；メ タン−ジフルオロ−ヨード；メタンフルオロ；メタン−ヨード−トリフルオロ； メタン−ニトロ−トリフルオロ；メタン−ニトロソ−トリフルオロ；メタン−テ トラフルオロ；メタン−トリクロロフルオロ；メタン−トリフルオロ；メタンス ルフェニルクロリド−トリフルオロ；ペンタンペルフルオロ；１−ペンタン−ペ ルフルオロ；プロパン−１，１，１，２，２，３−ヘキサフルオロ；プロパン− ２，２−ジフルオロ；プロパ ン−ヘプタフルオロ−１−ニトロ；プロパン−ヘプタフルオロ−１−ニトロソ； プロパン−ペリフルオロ；プロピル−１，１，１，２，３，３−ヘキサフルオロ −２，３−ジクロロ；プロピレン−３−フルオロ；プロピレン−ペルフルオロ； プロピン−３，３，３−トリフルオロ；スチレン−３−フルオロ；サルファヘキ サフルオリド；サルファ−（ジ）−デカフルオロ；トリフルオロアセトニトリル ；トリフルオロメチルペリオキシド；トリフルオロメチルスルフィド；タングス テンヘキサフルオリド、ペンタフルオロオクタデシルヨージド、ペルフルオロオ クチルブロミド、ペルフルオロデカリン、ペルフルオロドデカリン、ペルフルオ ロオクチルヨージド、ペルフルオロトリプロピルアミン、ペルフルオロトリブチ ルアミン、ヘキサフルオロプロピレン、ブロモクロロフルオロメタン、オクタフ ルオロプロパン、１，１−ジクロロ、フルオロエタン、ヘキサフルオロエタン、 ヘキサフルオロ−２−ブチン、ペルフルオロペンタン、ペルフルオロブタン、オ クタフルオロ−２−ブテン、ヘキサフルオロブタ−１，３−ジエン、オクタフル オロシクロペンテンよりなる群から選択される請求項２８６に記載の方法。 ２８８．前記フッ素化ガスが、フッ素ガス、ペルフルオロメタン、ペルフルオ ロエタン、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロペンタン 、ペルフルオロヘキサン、サルファヘキサフルオリド、ヘキサフルオロプロピレ ン、オクタフルオロプロパン、ペルフルオロシクロブタン、オクタフルオロシク ロペンテン、ドデカフルオロペンタン、およびオクタフルオロシクロブタンより なる群から選択される請求項２８７に記載の方法。 ２８９．前記フッ素化ガスが、ペルフルオロメタン、ペルフルオロエ タン、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロシクロブタン 、およびサルファヘキサフルオリドよりなる群から選択される請求項２８８に記 載の方法。 ２９０．前記フッ素化ガスが、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロシクロブ タン、およびペルフルオロブタンよりなる群から選択される請求項２８９に記載 の方法。 ２９１．前記ガスがペルフルオロプロパンである請求項２９０に記載の方法。 ２９２．前記フッ素化ガスがペルフルオロカーボンガスである請求項２８６に 記載の方法。 ２９３．前記ペルフルオロカーボンガスが、ペルフルオロメタン、ペルフルオ ロエタン、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、およびペルフルオロシ クロブタンよりなる群から選択される請求項２９２に記載の方法。 ２９４．前記ペルフルオロカーボンガスが、ペルフルオロプロパン、ペルフル オロシクロブタン、およびペルフルオロブタンよりなる群から選択される請求項 ２９３に記載の方法。 ２９５．前記ペルフルオロカーボンガスがペルフルオロプロパンである請求項 ２９４に記載の方法。 ２９６．フッ素化ガスの存在で、リピドのゲルから液晶への相転移温度以下の 温度で、リピドを含む水溶液を振盪してガス充填リポソームを生成する工程；お よび治療薬化合物を添加する工程；および得られた治療用のガス充填リポソーム を分離する工程の諸工程からなるガス充填リポソームを含む標的指向型薬物送達 システムの製造方法。 ２９７．前記フッ素化ガスが、フッ素ガス、１−フルオロブタン、ヘキサフル オロアセトン、テトラフルオロアレン、ボロントリフルオリド、１，２，３−ト リクロロ，２−フルオロ−１，３−ブタジエン、ヘキサフルオロ−１，３−ブタ ジエン、１−フルオロ−ブタン、１，２，３−トリクロロ，２−フルオロ−１、 ３−ブタジエン；ヘキサフルオロ−１，３−ブタジエン；１−フルオロ−ブタン ；デカフルオロブタン；ペルフルオロ−１−ブテン；ペリフルオロ−１−ブテン ；ペルフルオロ−２−ブテン；１−クロロ−１，１，１，４，４，４−ヘキサフ ルオロ−ブチン；ペルフルオロ−２−ブチン；オクタフルオロ−シクロブタン； ペルフルオロ−シクロブテン；ペルフルオロエタン；ペルフルオロプロパン；ペ ルフルオロブタン；ペルフルオロペンタン；ペルフルオロヘキサン；１，１，１ −トリフルオロジアゾエタン；ヘキサフルオロ−ジメチルアミン；ペルフルオロ ジメチルアミン；４−メチル−１，１，１，２，−テトラフルオロエタン；１， １，１−トリフルオロエタン；１，１，２，２−テトラフルオロエタン；１，１ ，２−トリクロロ−１，２，２−トリフルオロエタン：１，１−ジクロロ−１， ２，２，２−テトラフルオロエタン；１，２−ジフルオロエタン；１−クロロ− １，１，２，２，２−ペンタフルオロエタン；２−クロロ，１，１−ジフルオロ エタン；１−クロロ−１，１，２，２−テトラフルオロエタン；２−クロロ，１ ，１−ジフルオロエタン；クロロペンタフルオロエタン；ジクロロトリフルオロ エタン；フルオロエタン；ヘキサフルオロ−エタン；ニトロ−ペンタフルオロエ タン；ニトロ−ソペンタフルオロエタン；ペルフルオロエタン；ペルフルオロエ チルアミン；１，１−ジクロロ−１，２−ジフルオロエチレン；１，２−ジフル オロエチレン；メタン−スルフォ ニルクロリド−トリフルオロ；メタンスルフォニルフルオリドトリフルオロ；メ タン−（ペンタフルオロチオ）トリフルオロ；メタン−ブロモジフルオロニトロ ソ；メタンブロモフルオロ；メタン−ブロモクロロ−フルオロ；メタン−ブロモ −トリフルオロ；メタン−クロロジフルオロニトロ；メタン−クロロフルオロ； メタン−クロロトリフルオロ；メタンクロロ−ジフルオロ；メタン−ジブロモジ フルオロ；メタン−ジクロロジフルオロ；メタン−ジクロロ−フルオロ；メタン ジフルオロ；メタン−ジフルオロ−ヨード；メタンフルオロ；メタン−ヨード− トリフルオロ；メタン−ニトロ−トリフルオロ；メタン−ニトロソ−トリフルオ ロ；メタン−テトラフルオロ；メタン−トリクロロフルオロ；メタン−トリフル オロ；メタンスルフェニルクロリド−トリフルオロ；ペンタンペルフルオロ；１ −ペンタン−ペルフルオロ；プロパン−１，１，１，２，２，３−ヘキサフルオ ロ；プロパン−２，２−ジフルオロ；プロパン−ヘプタフルオロ−１−ニトロ； プロパン−ヘプタフルオロ−１−ニトロソ；プロパン−ペリフルオロ；プロピル −１，１，１，２，３，３−ヘキサフルオロ−２，３−ジクロロ；プロピレン− ３−フルオロ；プロピレン−ペルフルオロ；プロピン−３，３，３−トリフルオ ロ；スチレン−３−フルオロ；サルファヘキサフルオリド；サルファ−（ジ）− デカフルオロ；トリフルオロアセトニトリル；トリフルオロメチルペリオキシド ；トリフルオロメチルスルフィド；タングステンヘキサフルオリド、ペンタフル オロオクタデシルヨージド、ペルフルオロオクチルブロミド、ペルフルオロデカ リン、ペルフルオロドデカリン、ペルフルオロオクチルヨージド、ペルフルオロ トリプロピルアミン、ペルフルオロトリブチルアミン、ヘキサフルオロプロピレ ン、ブロモクロロフルオロ メタン、オクタフルオロプロパン、１，１−ジクロロ、フルオロエタン、ヘキサ フルオロエタン、ヘキサフルオロ−２−ブチン、ペルフルオロペンタン、ペルフ ルオロブタン、オクタフルオロ−２−ブテン、ヘキサフルオロブタ−１，３−ジ エン、オクタフルオロシクロペンテンよりなる群から選択される請求項２９６に 記載の方法。 ２９８．前記フッ素化ガスが、フッ素ガス、ペルフルオロメタン、ペルフルオ ロエタン、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロペンタン 、ペルフルオロヘキサン、サルファヘキサフルオリド、ヘキサフルオロプロピレ ン、オクタフルオロプロパン、ペルフルオロシクロブタン、オクタフルオロシク ロペンテン、ドデカフルオロペンタン、およびオクタフルオロシクロブタンより なる群から選択される請求項２９７に記載の方法。 ２９９．前記フッ素化ガスが、ペルフルオロメタン、ペルフルオロエタン、ペ ルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロシクロブタン、および サルファヘキサフルオリドよりなる群から選択される請求項２９８に記載の方法 。 ３００．前記フッ素化ガスが、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロシクロブ タン、およびペルフルオロブタンよりなる群から選択される請求項２９９に記載 の方法。 ３０１．前記ガスがペルフルオロプロパンである請求項３００に記載の方法。 ３０２．前記フッ素化ガスがペルフルオロカーボンガス請求項２９６に記載の 方法。 ３０３．前記ペルフルオロカーボンガスが、ペルフルオロメタン、ペ ルフルオロエタン、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、およびペルフ ルオロシクロブタンよりなる群から選択される請求項３０２に記載の方法。 ３０４．前記ペルフルオロカーボンガスが、ペルフルオロプロパン、ペルフル オロシクロブタン、およびペルフルオロブタンよりなる群から選択される請求項 ３０３に記載の方法。 ３０５．前記ペルフルオロカーボンガスがペルフルオロプロパンである請求項 ３０４に記載の方法。