JP2001514615A

JP2001514615A - 生物活性剤の送達方法

Info

Publication number: JP2001514615A
Application number: JP53338698A
Authority: JP
Inventors: アンガー，エバン・シー
Original assignee: イマアーレクス・フアーマシユーチカル・コーポレーシヨン
Priority date: 1997-03-21
Filing date: 1998-02-27
Publication date: 2001-09-11
Also published as: EP0988061A1; US6143276A; EP0988061A4; AU6679198A; WO1998042384A1

Abstract

(57)【要約】患者の体の特定の部位または組織に生物活性剤を送達するための新規な方法が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】生物活性剤の送達方法発明の背景発明の分野本発明は生物活性剤の送達方法、特に、患者の体の特定の部位に生物活性剤を送達するための方法に関する。発明の背景ある種の疾病の処置方法は、非罹病部位または組織のような体の他の部位または組織への生物活性剤の作用を最小限にするかまたは防ぎながら、患者の体の罹病部位または組織に生物活性剤を向ける能力にしばしば依存する。患者の体の特定の部位に向け得る生物活性剤の例は製薬及び診断薬を含む。生物活性剤の選択的送達の一般に用いられている方法は、例えば、Ｃｒｏｎｓｔｅｉｎ及びＷｅｉｓｓｍａｎ、「ＴａｒｇｅｔｓｆｏｒＡｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＤｒｕｇｓ」、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３５：４４９−６２（１９９５）中に概説されている。ある方法は送達手段としてリポソームの使用を含み、その場合、リポソームの脂質部分は約４２℃で相転移を受ける。相転移を引き起こすために必要な温度上昇を生じるために外部熱が用いられる。生物活性剤の選択的送達のためのリポソームの使用の特定の用途は、眼の疾患の処置（例えば、Ｋｈｏｏｂｅｈｉ等、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｍｏｌ．３３：４０５−４１２（１９８９）を参照）及び腫瘍の処置（例えば、Ｍａｅｋａｗａ等、ＣａｎｃｅｒＴｒｅａｔｍｅｎｔＲｅｐｏｒｔｓ７１：１０５３−５９（１９８７）を参照）を含む。しかしながら、Ｍａｇｉｎ等、ＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙ３：２２３−３７（１９８６）中に説明されるように、選択的薬剤送達のためのリポソームの使用は、リポソームが細網内皮系を通り抜けることができないことにより限定される。その方法のさらなる制限は４２℃またはそれより高い温度を得るために外部熱を用いることの必要性である。また、腫瘍抗原のような構造的特徴も特定の部位または組織への生物活性剤のターゲッティング送達に用いられる。しかしながら、そのような構造的特徴は１つまたはせいぜい少数の疾病状態と関係する。さらに、そのような構造的特徴の不完全または不規則な発現は、生物活性剤の選択的送達におけるそれらの有用性をさらに限定する可能性がある。従って、患者の体の特定の部位または組織を標的とし、そして標的部位または組織へ生物活性剤を送達するための新規なそして／または改善された方法に対する必要性が引き続きある。本発明はこれら及び他の重要な目的に関する。発明の要約本発明は、一つには、生物活性剤を送達するための新規なそして／または改善された方法、特に、患者の体の特定の部位に生物活性剤を送達するための方法に関する。本発明は、特に、例えば、疾病、感染または損傷の部位への生物活性剤の特異的ターゲッティング及び送達を可能にするためにそれらの部位の高い体温の存在を利用する点で非常に独特である。具体的には、一つの態様として、生物活性剤及び患者の高い温度の部位で気体への相転移を受けることができる気体前駆体を含んでなる組成物を患者に投与することを含んでなる患者のある部位へ生物活性剤を送達するための方法が提供される。必要な場合、組成物は安定化物質をさらに含んでなることができる。安定化物質は、必要な場合、小胞の形態であってもよく、そしてまた、必要な場合、非小胞であってもよい。本発明の別の態様として、患者の高い温度の部位で気体への相転移を受けることができる気体前駆体を含んでなる組成物を患者に投与し、そして診断画像形成を用いて患者を走査することを含んでなる患者のある部位を画像形成するための方法が提供される。必要な場合、組成物は安定化物質をさらに含んでなることができ、安定化物質は適切なように小胞または非小胞である。また、診断薬のような生物活性剤をさらに含んでもよい。さらなる態様として、本発明は診断薬及び患者の高い温度の部位で気体への相転移を受けることができる気体前駆体を含んでなる組成物を患者に投与し、そして診断画像形成を用いて患者を走査することを含んでなる患者のある部位における罹病組織の存在を診断するための方法に関する。必要な場合、組成物は安定化物質をさらに含んでなることができ、安定化物質は適切なように小胞または非小胞の形態である。また、診断薬のような生物活性剤をさらに含んでもよい。なおさらに、本発明は製薬及び患者の高い温度の部位で気体への相転移を受けることができる気体前駆体を含んでなる組成物を患者に投与することを含んでなる患者の処置方法に関する。本発明のこれら及び他の態様はまとめて本願により明らかにされる。図面の簡単な説明図１は気体前駆体の中心コア及び安定化物質の壁及び包埋された薬剤を有するナノ粒子の図である。図１に示されるように、高い温度の部位に入ると粒子直径の実質的な増加がある。粒子からの薬剤解離は高い温度を有する組織の部位内で起こる。図２は蒸気圧と温度の間の関係の図示である。Ｋｅｌｌｙ等、Ｉｎｄ．Ｅｎｇ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．（１９８８）２７：１７３２−１７３５からのデータ。図３は時間に対してプロットした水中の１−ブロモペルフルオロブタンの分散液の音響活性の表示である。トレース（ｔｒａｃｅ）は超音波エネルギーでの走査に対する応答として増加するｄＢ反響率（ｒｅｆｌｅｃｔｉｖｉｔｙ）を示す。図４は気体ペルフルオロプロパンを含有する充填空積を有する６９．７％ＤＰＰＣ、６．８％ＤＰＰＡ、８．５％ＤＰＰＥ−ＰＥＧ−５０００中１５％のデキサメタゾンプロドラッグの分散液の音響散乱の表示である。０−５分から１分間隔でデータを集めた。発明の詳細な説明本明細書及び本開示を通して用いられる場合、以下の用語は他に示されないかぎり以下の意味を有すると理解される。「脂質」は一般に両親媒性である天然に存在するか、合成、または半合成の（すなわち、改変された天然の）化合物をさす。脂質は典型的には親水性成分及び疎水性成分を含んでなる。代表的な脂質は例えば脂肪酸、中性脂肪、ホスファチド、油、糖脂質、フルオロ脂質、界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｅ−ａｃｔｉｖｅａｇｅｎｔｓ）（界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ））、脂肪族アルコール、ロウ、テルペン及びステロイドを含む。半合成の（または改変された天然の）という語句は、本明細書において用いられる場合、何らかの方法で化学的に改変されている天然化合物を表す。「タンパク質」は、本明細書において用いられる場合、ペプチド結合中にα− アミノ酸を含んでなり、好ましくは本質的にそれらからなる分子をさす。「タンパク質」という用語の範囲内に含まれるものは、アルブミン、グロブリン及びヒストンのような球状タンパク質、並びにコラーゲン、エラスチン及びケラチンのような繊維状タンパク質である。また含まれるものは核タンパク質、ムコタンパク質、リポタンパク質及び金属タンパク質のような、タンパク質分子が非タンパク質分子と結合している「複合タンパク質」である。それらのタンパク質は天然に存在するか、合成または半合成であってもよい。「ポリマー」または「ポリマーの」は、本明細書に用いられる場合、２個またはそれ以上の反復単位の化学結合から形成される分子をさす。従って、「ポリマー」という用語の範囲内に含まれるものは、例えば、ダイマー、トリマー及びオリゴマーであってもよい。ポリマーは天然に存在するか、合成または半合成であってもよい。好ましい形態として、「ポリマー」という用語は１０個またはそれ以上の反復単位を含んでなる分子をさす。「安定化物質」または「安定化化合物」は、本明細書に用いられる場合、例えば、混合物、懸濁液、エマルション、分散液、小胞組成物等を初めとする、本明細書に記述されるような気体前駆体及び生物活性剤を含有する組成物の安定性を向上することができるあらゆる物質をさす。向上した安定性は例えば比較的均衡の取れた状態の維持を含み、例えば、破壊、分解、崩壊等に対する組成物の増加した耐性により例示することができる。気体前駆体及び／または生物活性剤を充填した小胞を含む好ましい態様の場合、安定化化合物は小胞を形成するかまたは小胞を安定させるかのいずれかのために働くことができ、いずれの場合でも小胞からの気体前駆体及び／または生物活性剤の漏出を該放出が所望されるまで最小限にするかまたは（完全にを含んで）実質的に防ぐために役立つ。「実質的に」という用語は、該小胞からの気体前駆体及び／または生物活性剤の漏出を防ぐという本文脈において用いられる場合、放出が所望されるまで約５０％より多くが小胞中に閉じ込められたままであり、好ましくは６０％より多く、より好ましくは約７０％より多く、さらにより好ましくは約８０％より多く、なおさらにより好ましくは約９０％より多くが放出が所望されるまで小胞中に閉じ込められたままであることを意味する。特に好ましい態様として、放出が所望されるまで約９５％より多くの気体前駆体及び／または生物活性剤が閉じ込められたままである。また、放出が所望されるまで、気体前駆体及び／または生物活性薬剤は完全に閉じ込められたままであってもよい（すなわち、約１００％が閉じ込められたままである）。代表的な安定化物質は例えば脂質、タンパク質、ポリマー、炭水化物及び界面活性剤を含む。得られる混合物、懸濁液またはエマルション等は、必要な場合、生物活性剤及び／または気体前駆体の周りに壁（すなわち、フィルム、膜等）を含んでなってもよく、または壁または膜を実質的に欠いていてもよい。安定化物質は、必要な場合、液滴を形成してもよい。また、安定化物質は塩及び／または糖を含んでなることもできる。ある態様として、安定化物質は（完全にを含んで）実質的に架橋されていてもよい。「架橋」、「架橋された」及び「架橋する」という用語は、本明細書に用いられる場合、一般に、１個またはそれ以上のブリッジによる、脂質、タンパク質、ポリマー、炭水化物及び界面活性剤安定化物質を初めとする２個またはそれ以上の安定化物質の結合をさす。１個またはそれ以上の元素、基または化合物からなってもよいブリッジは、通例、第一の安定化物質分子からの原子を第二の安定化物質分子の原子につなぐように働く。架橋ブリッジは共有結合的及び／または非共有結合的会合を含むことができる。様々な元素、基及び／または化合物のいずれも架橋のブリッジを形成することができ、安定化物質を自然にまたは合成手段により架橋することができる。例えば、ケラチン、インシュリン及び他のタンパク質におけるように、シスチン残基のジスルフィド結合によりつながれるペプチド鎖から調合された物質では架橋は自然に起こる可能性がある。あるいはまた、例えば、安定化物質のような化合物と架橋剤として働くことができる化学物質を化合させることによるような適当な化学修飾により架橋をもたらすことができ、例えば熱、高エネルギー放射、超音波放射等にさらすことによりそれらを反応させることができる。例としてジスルフィド結合を形成するための硫黄による架橋、有機過酸化物を用いた架橋、高エネルギー放射を用いた不飽和物質の架橋、カルバミン酸ジメチロールでの架橋等を含む。必要な場合、安定化化合物を実質的に架橋してもよい。「実質的に」という用語は、架橋された安定化化合物に関連して用いられる場合、約５０％より多くの安定化化合物が架橋ブリッジを含有することを意味する。必要な場合、約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％より多くまたは１００％さえの安定化化合物がそのような架橋ブリッジを含有する。あるいはまた、安定化物質は架橋されていなくてもよく、すなわち、約５０％より多くの安定化化合物が架橋ブリッジを欠いており、そして必要な場合、約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％より多くまたは１００％さえの安定化化合物が架橋ブリッジを欠いている。「小胞」は一般に１つまたはそれ以上の内部空間を形成する１つまたはそれ以上の壁または膜の存在を特徴とする存在をさす。例えば、本明細書に記述される様々な脂質を初めとする脂質、本明細書に記述される様々なタンパク質を初めとするタンパク質物質、本明細書に記述される様々なポリマー物質を初めとするポリマー物質のような安定化物質から小胞を調合することができる。本明細書に説明されるように、必要な場合、炭水化物、界面活性剤及び他の安定化物質から小胞を調合してもよい。脂質、タンパク質、ポリマー及び／または他の小胞形成安定化物質は天然、合成または半合成であってもよい。好ましい小胞は脂質から調合される壁または膜を含んでなるものである。壁または膜は同心またはそうでなくてもよい。安定化化合物は単層または二重層の形態であってもよく、そして１つまたはそれ以上の単層または二重層を形成するために単層または二重層の脂質を用いることができる。１つより多くの単層または二重層の場合、必要な場合、単層または二重層は同心であってもよい。（１つの単層もしくは二重層からなる）一枚膜小胞、（約２もしくは約３の単層もしくは二重層からなる）オリゴ層小胞または（約３より多くの単層もしくは二重層からなる）多重層小胞を形成するために安定化化合物を用いることができる。小胞の壁または膜は実質的に固体（均質）であってもよく、またはそれらは多孔性もしくは半多孔性であってもよい。本明細書に記述される小胞は、例えば、リポソーム、ミセル、バブル、微小バブル、微小球、脂質−、ポリマー−及び／またはタンパク質で被覆されたバブル、微小バブル及び／または微小球体、ナノ球体、微小中空球、マイクロカプセル、エーロゲル、包接化合物結合小胞、六角Ｈ II相構造等と一般に呼ばれるような存在を含む。小胞の内部空間を気体前駆体及び生物活性剤、必要な場合、及び／または他の物質で満たすことができる。また、必要な場合、小胞はターゲッティングリガンドを含んでなってもよい。「リポソーム」は一般に、典型的には１枚またはそれ以上の同心層、例えば二重層の形態の、脂質化合物を初めとする両親媒性化合物の球状またはほぼ球状の集団または集合体をさす。また、それらは本明細書において脂質小胞と呼ばれる場合もある。例えば、イオン性脂質及び／または非イオン性脂質からリポソームを調合することができる。非イオン性脂質から調合されるリポソームを「ニオソーム（ｎｉｏｓｏｍｅ）」と呼んでもよい。「ミセル」は脂質から調合されるコロイド状の存在をさす。ある好ましい態様として、ミセルは単層または六角Ｈ II相配置を含んでなる。他の好ましい態様として、ミセルは二重層配置を含んでなることができる。「エーロゲル」は一般に、多数の小さい内部空間を特徴とする球状またはほぼ球状の存在をさす。合成物質（例えば、レソルシノール及びホルムアルデヒドをベークすることから調製される泡状物）並びに炭水化物（多糖類）またはタンパク質のような天然物質からエーロゾルを調合することができる。「包接化合物」は小胞と結合することができる固体の半多孔性または多孔性粒子をさす。好ましい形態として、包接化合物は小胞を含んで成る空洞を含有する籠様構造を形成することができる。必要な場合、１個またはそれ以上の小胞を包接化合物に結合させることができる。必要な場合、包接化合物と小胞の結合を促進するために安定化物質を包接化合物と会合させてもよい。包接化合物を調合することができる適当な物質は、例えば、カルシウムヒドロキシアパタイトのような多孔性アパタイト、及びカルシウム塩と沈殿させたアルギン酸のようなポリマーと金属イオンの沈殿物を含む。「エマルション」は２つまたはそれ以上の一般に不混和性の液体の混合物をさし、通例、コロイドの形態である。混合物は脂質のものであってもよく、例えば、それらはエマルション中にわたって均一にまたは不均一に分散されていてもよい。あるいはまた、脂質は、例えば、単または二重層を初めとするクラスターまたは層の形態で集められてもよい。「懸濁液」または「分散液」は、例えば、液体中の液体、固体中の固体、液体中の気体等のような２つまたはそれ以上の相（固体、液体または気体）の好ましくは細かく分けられた混合物をさし、それは好ましくは長い期間の間安定なままであることができる。「六角Ｈ II相構造」は一般に液体媒質、例えば水性媒質中の脂質の管状集合をさし、その場合、通例、脂質の親水性部分は管の内部の水性液体環境と会合して内側に向く。脂質の疎水性部分は、通例、外側に放射状に広がり、複合体は六角管の形状をとる。通例、多数の管が一緒に六角相構造に集められる。以下に詳細に説明するように、本発明の組成物及び製剤を患者に投与することができる。本明細書に用いられる場合、「患者」は哺乳類を初めとする動物、好ましくはヒトをさす。「患者の部位」という語句は、本明細書に用いられる場合、患者の特定の領域または部分、そしてある場合には全患者にわたる部位をさす。代表的なそのような部位は胃腸部位、（心筋組織を初めとする）心臓血管部位、腎臓部位、並びに血管系及び循環系を初めとする他の体の部位、組織、器官等、並びに癌性組織を初めとする罹病組織である。患者の部位は、例えば、生物活性剤の送達のための標的とされる部位、診断画像形成を用いて画像が形成される部位及び高い温度の部位を含む。患者の部位は好ましくは内部であるが、必要な場合、それは外部であってもよい。「心臓血管部位」という語句は心臓（心筋層）と心臓へそして心臓から直接つながる血管系により特定される患者の部位をさす。「血管系」という語句は（動脈、静脈等を初めとする）血管を表す。「胃腸部位」という語句は食道、胃、小及び大腸、並びに直腸により特定される部位を含む。「腎臓部位」という語句は、本明細書に用いられる場合、腎臓と腎臓へそして腎臓から直接つながる血管系により特定される部位を表し、腹部大動脈を含む。患者に関連して本明細書において用いられる「高い温度の部位」は、その領域の正常体温のものより上の高い温度の状態を示している部位をさす。高い温度状態は、例えば、疾病、感染、損傷等に起因する可能性があり、そして熱及び炎症状態を含む。例として、バクテリア、ウイルス、真菌、寄生虫または他の微生物侵入は、特に感染の部位で高い温度をもたらす可能性がある。また、関節炎、癌及び心臓血管プラークの存在も高い温度状態をもたらす可能性がある。例えば、熱傷状態をもたらす熱、放射線、火等への露出も高い温度部位を生じる可能性がある。組織外傷、かきむしること（ｔｅａｒｓ）、骨折等のような局所的身体損傷も高い温度の局部化状態をもたらす可能性がある。「標的とされる部位」または「標的部位」は生物活性剤の送達が所望される患者の部位をさす。「画像が形成される部位」または「画像形成部位」は診断画像形成が所望される患者の部位を表す。「生物活性剤」は、例えば、患者の疾病の有無を診断するための方法または患者の疾病の処置のための方法におけるような事実上治療または診断である用途と関連して用いることができる物質をさす。本明細書に用いられる場合、「生物活性剤」はインビトロ及び／またはインビボで生物学的作用を及ぼすことができる物質もさす。生物活性剤は中性であるかまたは正もしくは負に荷電していてもよい。適当な生物活性剤の例は薬剤、合成有機分子、タンパク質、ペプチド、ビタミン、ステロイド、ステロイド類似体を初めとする診断薬及び製薬；並びにヌクレオシド、ヌクレオチド及びポリヌクレオチドを初めとする遺伝物質を含む。「診断薬」は患者の内部部位を画像形成するため及び／または患者の疾病の有無を診断するための方法と関連して用いることができるあらゆる薬剤をさす。代表的な診断薬は、例えば、患者の超音波画像形成、磁気共鳴画像形成またはコンピューター断層撮影と関連した用途のための造影剤を含む。また、診断薬は画像形成方法論を用いるにせよ用いないにせよ、患者の疾病または他の状態の診断を容易にすることに有用なあらゆる他の薬剤も含むことができる。「製薬」または「薬剤」は患者の不調、苦痛、疾病または損傷の（予防、診断、軽減または治癒を初めとする）処置に用いることができるあらゆる治療または予防薬をさす。治療的に有用なペプチド、ポリペプチド及びポリヌクレオチドを製薬または薬剤という用語の意味の範囲内に含むことができる。「ターゲッティングリガンド」は本発明の組成物でのインビトロまたはインビボでの組織及び／または受容体のターゲッティングを促進することができるあらゆる材料または物質をさす。ターゲッティングリガンドは合成、半合成または天然に存在してもよい。ターゲッティングリガンドとして用いることができる材料または物質は、例えば、抗体、抗体フラグメント、ホルモン、ホルモン類似体、糖タンパク質及びレクチンを初めとするタンパク質、ペプチド、ポリペプチド、アミノ酸、単糖及び多糖を初めとする糖類のような糖、並びに炭水化物、ビタミン、ステロイド、ステロイド類似体、ホルモン、補因子、生物活性剤、並びにヌクレオシド、ヌクレオチド、ヌクレオチド酸構築物及びポリヌクレオチドを初めとする遺伝物質を含む。「増粘剤」は、本明細書に記述される脂質、ポリマー、タンパク質並びに／または小胞組成物及び／もしくは配合物中に混和した場合に、粘度調整剤、乳化剤及び／または可溶化剤、沈殿防止剤及び張性上昇剤として作用することができる様々な一般に親水性の物質のいずれかをさす。増粘剤はそのような特性のために組成物の安定性の維持を促進することができると考えられる。「分散剤」は、例えば、本明細書に記述されるある種の脂質、ポリマー、タンパク質及び／または小胞組成物を初めとするコロイド粒子の懸濁媒質に添加した場合に粒子の均一な分離を促進することができる界面活性剤をさす。ある好ましい態様として、分散剤は例えばポリジメチルシロキサン（すなわち、シメチコン（ｓｉｍｅｔｈｉｃｏｎｅ））のようなポリマーシロキサン化合物を含んでなることができる。「遺伝物質」は一般にデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）及びリボ核酸（ＲＮＡ）を初めとするヌクレオチド及びポリヌクレオチドをさす。当業者に知られている合成化学方法論によるかまたは組み換えもしくは他の技術の使用によるかまたはそれらの組み合わせにより遺伝物質を製造することができる。ＤＮＡ及びＲＮＡは場合により非天然のヌクレオチドを含んでいてもよく、そして一本または二本鎖であってもよい。また、「遺伝物質」はセンス及びアンチセンスＤＮＡ及びＲＮＡ、すなわち、ＤＮＡ及び／またはＲＮＡのヌクレオチドの特定配列に相補的なヌクレオチド配列、並びに触媒ＲＮＡもさす。「投与される」及び「投与」という用語は一般に、例えば、本明細書に記述される脂質、ポリマー、タンパク質及び／または小胞組成物を初めとする生体適合性物質の患者への投与をさす。「生体適合性の」は一般に生物学的機能に対して有害ではなく且つアレルギー反応及び疾病状態を初めとするいかなる程度の許容できない毒性ももたらさない物質をさす。本発明に用いられる組成物及び（安定化物質、気体前駆体及び生物活性剤等のような）それらの成分は典型的に生体適合性である。「液滴」は、本明細書に用いられる場合、実質的に液体であってもよいかまたは液体と固体、液体と気体もしくは液体、固体と気体を含んでなってもよい球状またはほぼ球状の存在をさす。液滴内の固体物質は例えば粒子、ポリマー、脂質またはタンパク質であってもよい。「ナノ」または「ナノ粒子」は、本明細書に用いられる場合、約１μｍ未満の直径を有する粒子等をさす。「微小」または「微小粒子」は、本明細書に用いられる場合、約１μｍまたはそれ以上、典型的には約１０μｍまでの直径を有する粒子等をさす。「ナノ液滴」及び「微小液滴」という用語は、本明細書において用いられる場合、それぞれ、約１μｍ未満または１μ ｍもしくはそれ以上の直径を有する液滴をさす。同様に、「ナノ球体」及び「微小球体」という用語は、それぞれ約１μｍ未満または１μｍもしくはそれ以上の直径を有するほぼ球状の構造をさすために用いることができる。「組み合わせて」は気体前駆体（及び必要な場合、安定化物質）と生物活性剤の共投与をさす。様々な異なる方法のいずれかで生物活性剤を気体前駆体（及び安定化薬剤）と組み合わせることができる。例えば、安定化物質が形成する小胞の場合、生物活性剤及び／または気体前駆体を小胞の内部空間内に閉じ込めることができる。さらに、例えば、小胞層または壁を形成する安定化物質の間に散在させることにより、小胞の層または壁内に生物活性剤を組み込むことができる。また、生物活性剤を小胞または非小胞安定化物質の表面上に置くこともできると考えられる。この場合、生物活性剤は小胞の内部または外部表面と化学的に相互作用することができ、そして実質的にそこに接着したままである。そのような相互作用は、いったん本開示が与えられると、当業者に容易に明らかなように、例えば、非共有結合的会合もしくは結合、イオン相互作用、静電相互作用、双極子 −双極子相互作用、水素結合、ファンデルワールス力、共有結合的会合もしくは結合、架橋またはあらゆる他の相互作用の形態をとることができる。また、生物活性剤は小胞または非小胞安定化物質の内部または外部表面と限られたように相互作用してもよい。そのような限られた相互作用は、例えば、第一の小胞の表面から第二の小胞の表面へ、または第一の非小胞安定化物質の表面から第二の非小胞安定化物質への生物活性剤の移動を可能にする。本発明の文脈内の「気体前駆体」は、好ましくは製造または貯蔵の温度で液体であるが、（患者の高い温度の部位におけるような）生理的条件下の高い温度で気体を形成する。しかしながら、製造または貯蔵の温度で固体であるが、生理的条件下の高い温度で気体を形成する化合物も本発明の範囲内である。そのような液体または固体物質は本明細書において「温度により活性化される気体前駆体」とも呼ばれる場合がある。また、液体から気体への相転移温度は本明細書において沸点とも呼ばれる。本発明の方法に用いられる小胞は好ましくは気体前駆体を含有する。「気体前駆体封入小胞」は包膜化された気体前駆体が中にある小胞をさす。ある好ましい態様として、小胞に気体前駆体を（完全にを含んで）実質的に封入することができる。「実質的に」という用語は、気体前駆体封入小胞中の気体前駆体の量に関連して用いられる場合、小胞の内部空間体積の約３０％より多くが気体前駆体からなることを意味する。ある態様として、好ましくは、実質的に封入された小胞の内部空間の約４０％より多くが気体前駆体からなり、約５０％より多くがより好ましい。さらにより好ましくは、実質的に封入された小胞の内部空間の約６０％より多くが気体前駆体からなり、約７０％より多くがさらにより好ましい。ある特に好ましい態様として、小胞の内部空間の約７５％、８５％または９５％さえより多くが気体前駆体からなる。必要な場合、実質的に封入された小胞は完全に満たされていてもよい（すなわち、約１００％の気体前駆体を封入している）。本発明の好ましい態様を考慮しないが、必要な場合、小胞は気体前駆体を全くまたは実質的に全く含有しなくてもよい。操作のいかなる特定の理論により拘束されることを意図するものではないが、本発明の方法は本明細書に説明されるように、典型的には疾病、炎症、感染等と関係する高い局所的温度という現象にある程度依存する。生理的ストレス状態とも呼ぶことができるそのような状態は、１度の端数または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくはそれ以上の度と同じ程度で患者のある部位で体温を上げる可能性がある。例えば、正常ヒト体温は約３７℃であるが、疾病、炎症、感染等により冒された組織は例えば約４０℃のような約３７℃より高い温度を有する可能性がある。正常な生理的体温（すなわち、正常な状況下での特定の哺乳類の体温）で液体であり、そして高い温度で相転移を受けて気体を形成する物質を取り入れることにより、本発明の方法は冒された組織に生物活性剤を効果的に送達し、その部位で都合よく放出させることができる。例えば、気体前駆体が液体または固体から気体へ相転移を受けると、気体前駆体内に保有される生物活性剤を組織のその部位に放出することができ、それにより必要な部位への生物活性剤の送達をもたらす。従って、本発明により、高い温度という局所化状態により影響を受けていない患者の他の部位は迂回され、生物活性剤は必要な部位に選択的に送達される。実際、本発明は温度に対する気体前駆体の感受性及び特定の温度で相転移を受けて気体を形成するそれらの能力を利用することが意図される。この相転移が起こるにつれて、本発明の組成物から患者の適切な部位に生物活性剤が放出される。本発明は高い温度という基本的な物理的性質を用いるので、そのような高い温度状態を示す様々な疾病、感染、損傷、熱、炎症を起こした状態等への幅広い範囲の用途を有する。本発明は抗体またはペプチドのような、体の特定の部位を標的とするためのターゲッティングリガンドを用いることができるが、気体前駆体は生理的に引き起こされる体温変化と関係する温度の局所的上昇によって送達及びターゲッティングを成し遂げるので、通例、ターゲッティングリガンドは必要ない。本発明における使用のための生物活性剤は気体前駆体に可溶性であってもよい。例えば、周囲温度で気体前駆体内に生物活性剤を溶解し、それらの物質を撹拌し、そして／または押し出して生物活性剤の粒子を調製することにより、可溶性生物活性剤を利用する組成物を形成することができる。粒子は好ましくはナノ粒子または微小粒子である。生物活性剤及び気体前駆体の粒子の形成は、疎水性生物活性剤に対して都合よく働く。本発明における使用のための気体前駆体は好ましくは生体適合性であり、好ましくは生体適合性気体を形成する。好ましい気体前駆体は、適切な状況においてより大きい鎖の化合物を用いてもよいが、１個から約８個までの炭素原子、より好ましくは約２個から約６個までの炭素原子を含有する有機化合物を含む。適当な気体前駆体は酸素原子、ハロゲン原子等のような１個またはそれ以上のヘテロ原子を含有してもよい。本発明における使用のために適当な、混合ハロゲンを含有する代表的な化合物は１−クロロ−１−フルオロ−１ブロモメタン、１，１，１−トリクロロ−２，２，２−トリフルオロエタン、１，２−ジクロロ−２，２−ジフルオロエタン、１，１−ジクロロ−１，２−ジフルオロエタン、１，２−ジクロロ−１，１，３ −トリフルオロプロパン、１，１，２，２，３，３，４，４，−オクタフルオロブタン、１，１，１，３，３−ペンタフルオロブタン、１−ブロモペルフルオロブタン、１−ブロモ−２，４−ジフルオロベンゼン、２−ヨード−１，１，１−トリフルオロエタン、５−ブロモバレリルクロリド、１，３−ジクロロテトラフルオロアセトン、五フッ化臭素、１−ブロモ−１，１，２，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン、２−クロロ−１，１，１，４，４，４−ヘキサフルオロ−２−ブテン、２−クロロペンタフルオロ− １，３−ブタジエン、ヨードトリフルオロエチレン、１，１，２−トリフルオロ −２−クロロエタン、１，２−ジフルオロクロロエタン、１，１−ジフルオロ− ２−クロロエタン、１，１−ジクロロフルオロエタン及びヘプタフルオロ−２− ヨードプロパンを含む。本発明に有用なフッ素化化合物は３−フルオロベンズアルデヒド、２−フルオロ−５−ニトロトルエン、３−フルオロスチレン、ペルフルオロ−２−メチル−２−ペンテン、３，５−ジフルオロアニリン、２，２，２ −トリフルオロエチルアクリレート、３０（トリフルオロメトキシ）−アセトフェノン、１，１，２，２，３，３，４，４−オクタフルオロブタン、１，１，１，３，３−ペンタフルオロブタン、ペルフルオロシクロヘキサン、ペルフルオロメチル−ｎ−ブチルエーテル、ペルフルオロメチルイソプロピルエーテル、ペルフルオロメチル−ｔ−ブチルエーテル、１−フルオロブタン、１−ブロモノナフルオロブタン、４−トリフルオロメチルペルフルオロテトラヒドロフラン、ペルフルオロテトラヒドロピラン及びペルフルオロペンタンを含む。本発明に有用な臭素化化合物は１−ブロモエタン、６−ブロモ−１−ヘキセン、２−ブロモ−２ −ニトロプロパン、２−ブロモ−５−ニトロチオフェン及び２−ブロモプロペンを含む。本発明に有用な塩素化化合物は３−クロロ−５，５−ジメチル−２−シクロヘキセン及び２−クロロ− ２−メチル−プロパンを含む。さらに、構造Ｃ_nＦ_yＨ_xＯＢｒを有し、ここで、ｎは１から６までの整数であり、ｙは０から１３までの整数であり、そしてｘは０から１３までの整数である化合物は気体前駆体として有用である。この式を有する有用な気体前駆体の例はペルフルオロプロピルオキシブロミド及び２−ブロモオキシペルフルオロプロパンを含む。また、本発明における気体前駆体として有用なものは、好ましくは約３６℃から約６０℃までの沸点を有する、部分的または完全にフッ素化されたエーテルである。フッ素化エーテルは１個またはそれ以上の水素原子がフッ素原子で置換されているエーテルである。本発明の目的のためには、フッ素化エーテルは一般式ＣＸ₃（ＣＸ₂）_n−Ｏ−（ＣＸ₂）_nＣＸ₃を有し、式中、ＸはＨ、Ｆまたは別のハロゲンであり、ただし、少なくとも１個のＸはフッ素である。適切な状況においてより小さいかまたはより大きい鎖のフッ素化エーテルを用いてもよいが、通例、約４個ないし約６個の炭素原子を含有するフッ素化エーテルが本発明の好ましい範囲内の沸点を有する。代表的なフッ素化エーテルは式ＣＦ₃ＣＦ₂ＯＣＦ₂ＣＦ₃、ＣＦ₃Ｏ（ＣＦ₂）₂ＣＦ₃及びＣＦ₃ＯＣＦ（ＣＦ₃）₂を有する化合物を含む。好ましい気体前駆体は約３７℃より高くから約５２℃まで、好ましくは約３８ ℃から約５０℃まで、より好ましくは約３８℃から約４８℃まで、さらにより好ましくは約３８℃から約４６℃まで、なおさらにより好ましくは約３８℃から約４４℃まで、さらになおより好ましくは約３８℃から約４２℃までの温度で、そして最も好ましくは約３９℃、４０ ℃または４１℃の温度で気体への相転移を受ける。当業者により認識されるように、特定の用途における使用のための気体前駆体の最適な相転移温度は、例えば、特定の患者、標的とされる組織、高い温度をもたらす生理的ストレス状態の性質（すなわち、疾病、感染もしくは炎症等）、用いられる安定化物質及び／または送達される生物活性剤の性質のような考慮すべき事柄により決まる。また、当業者が認識するように、化合物の相転移温度は、例えば、局部圧力（例えば、隙間、界面またはその部位における他の圧力）のような組織内の局所的条件により影響を受ける可能性がある。例として、組織内の圧力が周囲圧力より高い場合、これは相転移温度を上げると考えられる。シャルルの法則及びボイルの法則のような標準気体法則予測を用いてそのような影響の程度を概算することができる。概算として、約３０℃ないし約５０℃の間の液体から気体への相転移温度を有する化合物は、２５ｍｍＨｇの圧力の増加毎に相転移温度の約１℃の上昇を示すと考えることができる。特定の例として、ドデカフルオロペンタン（ペルフルオロペンタン）の液体から気体への相転移温度（沸点）は標準圧力（すなわち、７６０ｍｍＨｇ）で２９．５℃で測定されるが、７９５ｍｍＨｇの隙間圧力では、沸点は約３０．５℃である。本明細書においてより完全に説明される、気体前駆体の安定化に用いられる物質も気体前駆体の相転移温度に影響を及ぼす可能性がある。通例、安定化物質は気体前駆体の相転移温度を上げると考えられる。特に、例えばポリシアノメタクリレートのような比較的硬質のポリマー物質は、気体前駆体の相転移温度に対して著しい影響を有する可能性がある。気体前駆体及び安定化物質の選択においてそのような影響を考慮しなければならない。本発明によれば、好ましくは、気体前駆体は、必要な場合、１つまたはそれ以上の内部空間を取り囲む壁または膜を形成する（すなわち、小胞を形成する）ことができる可能性がある１つまたはそれ以上の生体適合性物質により安定化される。本発明の目的のために、空間は好ましくは１つまたはそれ以上の気体前駆体及び場合により１つまたはそれ以上の生物活性剤を含有する。壁または膜を形成することができる代表的な化合物は脂質、タンパク質、ポリマー、炭水化物及び界面活性剤を含む。そのような壁または膜形成化合物はガラクトース及びフッ素化糖も含むことができる。あるいはまた、通例、壁を形成することができないが、例えば、周囲の媒質の粘度または浸透圧を上げることにより作用する安定化物質を用いてもよい。壁を形成しない安定化物質の例は塩類及び糖類を含む。これらの壁を形成しない物質を単独でかまたは壁もしくは膜を形成することができる型のものであってもよい他の安定化物質と組み合わせて用いることができる。当業者により認識されるように、先に挙げた壁を形成する物質を、適切な状況において、壁を形成しない安定化剤として用いてもよく、またその逆の場合でもよい。従って、本発明の方法及び組成物に用いることができる安定化化合物は、例えば、（フッ素化脂質を初めとする）脂質、タンパク質、ポリマー、炭水化物及び（フッ素化糖を初めとする）糖を含み、そのような安定化化合物が好ましい。もちろん、いったん本開示の教示が与えられると当業者に明らかなように、上記の種類の化合物に加えて他の安定化化合物ももちろん利用することができる。大まかに言って、例えばアパタイトを初めとする粒状物質のような例えば固体物質、または油のような液体物質、界面活性剤等を初めとする多種多様な有機及び無機物質のいずれを本発明の方法及び組成物における安定化物質として用いることができる。用いられる安定化化合物は好ましくは界面活性剤、テンシド（ｔｅｎｓｉｄｅ）、沈殿防止剤、乳化剤、張性調整剤、粘度調整剤、泡消剤、増粘剤、分散剤、溶媒、希釈剤等を含む。本発明がいずれかの理論または複数の理論により拘束されることを意図するものではないが、安定化物質、特に壁を形成する安定化物質の使用は、用いられる気体前駆体とあらゆる生物活性剤の間の会合を促進し、増大すると考えられる。しかしながら、必要な場合、安定剤の必要なしに１つまたはそれ以上の気体前駆体と生物活性剤を会合させることができる。生物活性剤及び気体前駆体が単独で（すなわち、安定剤なしに）用いられる場合、例えば、機械的方法で混合することにより組成物を調製することができる。好ましくは、機械的方法は気体前駆体及び生物活性剤に「微小液滴」または「ナノ液滴」を形成させる。生物活性剤及び気体前駆体を混合することができる機械的方法の例は、かきまぜ、超音波処理、ボルテックス、振盪、微小乳化及び押し出しを初めとする方法による撹拌を含む。撹拌の機械的方法は本明細書においてより完全に説明される。もちろん、安定化物質も含む組成物を形成するためにそのような方法を用いてもよい。気体前駆体及び生物活性剤の安定化物質として脂質を含んでなる組成物が特に好ましい。脂質組成物は小胞の形態であってもよく、そして望ましくはそうである。好ましくは、組成物の物理的性質にかかわらず小胞または非小胞安定化物質組成物に気体前駆体を混和する。従って、例えば、脂質が任意に集められる脂質組成物、並びにミセル及びリポソームのような脂質から調合される小胞組成物を初めとする小胞組成物中に気体前駆体を混和することができると考えられる。脂質及び／または小胞組成物中への気体前駆体の混和を多数の方法のいずれかを用いて成し遂げることができる。例えば、脂質に基づく小胞の場合、気体前駆体及び１つまたはそれ以上の脂質を含んでなる水性混合物を振盪するか、乳化するかまたはそうでなければ撹拌することにより気体前駆体を含有する小胞の形成を成し遂げることができる。これは気体前駆体が内部に包膜化されている安定化小胞の形成を促進する。少なくとも微量、例えば、用いられる脂質の全量に基づいて約１ないし約１０モルパーセントの負に荷電した脂質を脂質組成物中に混和することにより、脂質から調合される小胞の安定性を高めることができる可能性がある。適当な負に荷電した脂質は、例えば、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸及び脂肪酸を含む。操作のいかなる理論または複数の理論により拘束されることを意図するものではないが、そのような負に荷電した脂質は、一緒に融合することで小胞の破裂する傾向と拮抗することにより、付加された安定性を与えることができる。従って、負に荷電した脂質は小胞の外側表面上に均一な負に荷電した層を樹立するように作用することができ、それはそれに隣接していてもよい他の小胞上の同様に荷電した外層により反発される。このように、小胞の膜または表層の破裂及び接触する小胞の単一のより大きい小胞への統合をもたらす可能性がある、小胞が相互に隣接して接触するようになる傾向が低い可能性がある。この統合工程の連続はもちろん小胞の著しい崩壊をもたらす。多種多様な脂質が脂質または小胞組成物中への混和のために適当であると考えられる。小胞組成物、例えば、ミセル及び／またはリポソームに特に関連して、それらの調製のために適当であるとして当業者に知られている物質またはそれらの組み合わせのいずれを用いてもよい。用いられる脂質は天然、合成または半合成起源のものであってもよい。上記のように、適当な脂質は一般に、例えば、脂肪酸、中性脂肪、ホスファチド、糖脂質、脂肪族アルコール及びロウ、テルペン並びにステロイドを含む。また、脂質は場合によりフッ素化されてもよく、そしてフッ素化される場合、脂質は部分的にフッ素化されることが好ましく、最も好ましくは、それらは脂質の極性（親水性）頭部基から最も遠いアルキル鎖の部分でフッ素化される。脂質組成物を調製するために用いることができる代表的な脂質は、例えば、脂肪酸；リゾ脂質；油；ホスホコリン；ジオレオイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジペンタデカノイルホスファチジルコリン、ジラウロイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）及びジアラキドニルホスファチジルコリン（ＤＡＰＣ）を初めとする、飽和及び不飽和脂質の両方を含むホスファチジルコリン；ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）及びジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）のようなホスファチジルエタノールアミン；ホスファチジルセリン；ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）を初めとするホスファチジルグリセロール；ホスファチジルイノシトール；スフィンゴミエリンのようなスフィンゴ脂質；ガングリオシドＧＭ１及びＧＭ２のような糖脂質；グルコ脂質；スルファチド；スフィンゴ糖脂質：ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）及びジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）のようなホスファチジン酸；パルミチン酸；ステアリン酸；アラキドン酸；オレイン酸；キチン、ヒアルロン酸、ポリビニルピロリドンまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような生体適合性ポリマーを保有する脂質、最後のものは本明細書において「ペジル化（ｐｅｇｙｌａｔｅｄ）脂質」とも呼ばれ、ポリマーを保有する好ましい脂質は、例えば、約５０００の中間平均分子量を有するＰＥＧポリマーが結合しているＤＰＰＥをさすＤＰＰＥ−ＰＥＧ５０００を初めとする、ＰＥＧポリマーが結合している脂質ＤＰＰＥをさすＤＰＰＥ−ＰＥＧを含む；スルホン化された単糖、二糖、オリゴ糖または多糖を保有する脂質；コレステロール、コレステロール硫酸塩及びコレステロールヘミコハク酸塩；トコフェロールヘミコハク酸塩；エーテル及びエステル結合した脂肪酸を有する脂質；重合脂質（多種多様なものが当該技術分野でよく知られている）；リン酸ジアセチル；リン酸ジセチル；ステアリルアミン；カルジオリピン；約６個ないし約８個の炭素の長さの短い鎖の脂肪酸を有するリン脂質；例えば、約６個の炭素の１本のアシル鎖と約１２個の炭素のもう１本のアシル鎖のような非対称のアシル鎖を有する合成リン脂質；セラミド；ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪アルコール、ポリオキシエチレン脂肪アルコールエーテル、ポリオキシエチル化ソルビタン脂肪酸エステルを初めとする（例えば、ＩＣＩＡｍｅｒｉｃａｓ．Ｉｎｃ．、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＤＥから市販されている、ＴＷＥＥＮ^TM（商標）と呼ばれる化合物の種類のような）ポリオキシアルキレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセロールポリエチレングリコールオキシステアレート、グリセロールポリエチレングリコールリシノレエート、エトキシル化ダイズステロール、エトキシル化ひまし油、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンポリマー及びポリオキシエチレン脂肪酸ステアレートのようなニオソーム（ｎｉｏｓｏｍｅ）を初めとする非イオン性リポソーム；コレステロールステアレート、コレステロールブチレート、コレステロールイソ−ブチレート、コレステロールパルミテート、コレステロールステアレート、ラノステロールアセテート、エルゴステロールパルミテート及びフィトステロールｎ−ブチレートを初めとするステロール脂肪酸エステル；コレステロールグルクロニド、ラノステロールグルクロニド、７−デヒドロコレステロールグルクロニド、エルゴステロールグルクロニド、コレステロールグルコネート、ラノステロールグルコネート及びエルゴステロールグルコネートを初めとする糖酸のステロールエステル；ラウリルグルクロニド、ステアロイルグルクロニド、ミリストイルグルクロニド、ラウリルグルコネート、ミリストイルグルコネート及びステアロイルグルコネートを初めとする、糖酸とアルコールのエステル；ショ糖ラウレート、フルクトースラウレート、ショ糖パルミテート、ショ糖ステアレート、グルクロン酸、グルコン酸及びポリウロン酸を初めとする、糖と脂肪酸のエステル；サルササポゲニン、スミラゲニン、ヘデラゲニン、オレアノール酸及びジギトキシゲニンを初めとするサポニン；グリセロールジラウレート、グリセロールトリラウレート、グリセロールジパルミテート、グリセロールを初めとするグリセロール並びにグリセロールトリパルミテート、グリセロールジステアレート、グリセロールトリステアレート、グリセロールジミリステート及びグリセロールトリミリステートのようなグリセロールエステル；ｎ−デシルアルコール、ラウリルアルコール、ミリスチルアルコール、セチルアルコール及びｎ−オクタデシルアルコールを初めとする長鎖アルコール；６−（５−コレステン−３β−イルオキシ）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；ジガラクトシルジグリセリド：６−（５−コレステン−３β−イルオキシ）ヘキシル−６−アミノ−６−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；６−（５−コレステン−３β−イルオキシ）ヘキシル−６−アミノ−６ −デオキシル−１−チオ−α−Ｄ−マンノピラノシド；１２−（（（７’−ジエチルアミノクマリン−３−イル）カルボニル）メチルアミノ）−オクタデカン酸：Ｎ−［１２−（（（７’−ジエチルアミノクマリン−３−イル）カルボニル）メチルアミノ）−オクタデカノイル］−２−アミノパルミチン酸：コレステリル）４’−トリメチルアンモニオ）ブタノエート；Ｎ−スクシニルジオレオイルホスファチジルエタノールアミン；１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロール；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−３−スクシニルグリセロール；１，３−ジパルミトイル−２−スクシニルグリセロール；１−ヘキサデシル−２−パルミトイル −グリセロホスホエタノールアミン及びパルミトイルホモシステイン及び／またはそれらの組み合わせを含む。壁を形成する非小胞の安定化物質を場合により重合してもよく、そのようにして気体前駆体を取り囲む安定な不透過性外殻を作製するか、またはそうでなければ組成物中に混和してもよい。この目的のために用いられる物質は一般に両親媒性であり、重合できる基を含有する。例として約５０個までの炭素原子を含有するアルケニルまたはアルキニルのような不飽和親油性鎖を含む。さらなる例は重合できる基を保有するホスホグリセリド及びスフィンゴ脂質のようなリン脂質；並びにひまし油及び麦角油を初めとする、例えばｄ−１２−ヒドロキシオレイン酸のトリグリセリドのような、ヒドロキシル基を有する飽和及び不飽和の脂肪酸誘導体である。分散性を高めるためにカルボキシルまたはヒドロキシル基のような親水性置換基を含むように重合を設計することができ、その結果、生物分解から生じる主鎖残基は水溶性である。本発明の組成物中に利用することができる代表的な重合可能な脂質化合物を以下に例示する。両親媒性脂質、すなわち、疎水性及び親水性の両方のドメインを含有し、ラメラ構造を形成することができる脂質は、本発明の壁及び小胞を形成するため並びに非小胞組成物において特に好ましい物質である。特に本発明における壁を形成する安定化物質としての使用のためにはこれらのうちでリン脂質が好ましい脂質である。リン脂質は飽和、モノ不飽和、ポリ不飽和であってもよく、または例えば１本の飽和鎖と１本の不飽和鎖のような混合鎖を含有してもよい。より好ましいものは約１４個から約２２個までの炭素原子のアルキル鎖を有するリン脂質であり、最も好ましいものは約１６個の炭素原子から約２０個の炭素原子までのアルキル鎖を有するリン脂質である。特に好ましいリン脂質はジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）である。特に、脂質に基づく小胞組成物に関連して、本明細書に記述されるある種の組成物に用いられる脂質物質は好ましくは柔軟である。これは、例えば、脂質に基づく小胞組成物の場合、例えば、小胞の直径より小さい直径を有する開口部を通過するために小胞がそれらの形状を変えることができることを意味する。必要な場合、例えば、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］ −Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１，２−ジオレオイルオキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）；及び１，２−ジオレオイル−３−（４’−トリメチルアンモニオ）−ブタノイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＯＴＢ）のような陽イオン脂質を用いてもよい。陽イオン脂質を脂質組成物中に用いる場合、陽イオン脂質対非陽イオン脂質のモル比は、例えば、約１：１０００から約１：１００までであってもよい。好ましくは、陽イオン脂質対非陽イオン脂質のモル比は約１：２から約１：１０までであってもよく、約１：１から約１：２．５までの比率が好ましい。さらにより好ましくは、陽イオン脂質対非陽イオン脂質のモル比は約１：１であってもよい。陽イオン及び非陽イオン脂質の両方を含有する脂質組成物の場合、非陽イオン脂質として多種多様な脂質を用いることができる。好ましくは、この非陽イオン脂質は１個またはそれ以上のＤＰＰＣ、ＤＰＰＥ及びジオレオイルホスファチジルエタノールアミンを含んでなる。また、上に挙げた陽イオン脂質の代わりに、ポリリシンまたはポリアルギニンのような陽イオンポリマー並びにホスホン酸アルキル、ホスフィン酸アルキル及び亜リン酸アルキルを保有する脂質を脂質組成物中に用いてもよい。本明細書に記述される脂質組成物中に飽和及び不飽和脂肪酸を用いてもよく、そのような飽和及び不飽和脂肪酸は好ましくは線状または分枝状型の約１２個の炭素から約２２個の炭素までを含有する。イソプレノイド単位及び／またはプレニル基からなる炭化水素も同様に用いることができる。適当な飽和脂肪酸の例は、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸及びステアリン酸を含む。用いることができる適当な不飽和脂肪酸は、例えば、ラウロレイン酸、フィセテリン酸（ｐｈｙｓｅｔｅｒｉｃ）、ミリストレイン酸、リノール酸、リノレン酸、パルミトレイン酸、ペトロセリン酸及びオレイン酸を含む。用いることができる分枝状脂肪酸の例は、例えば、イソラウリン酸、イソミリスチン酸、イソパルミチン酸及びイソステアリン酸を含む。好ましくは、本発明に用いられる脂質は気体前駆体の相転移温度でまたはそれより下でゲルから液晶への相転移温度を有する。必要な場合、場合により１つまたはそれ以上の中性脂質と会合した、１つまたはそれ以上のポリマー保有脂質と会合した１つまたはそれ以上の荷電脂質の集合体を構築することができる。荷電脂質は陰イオンまたは陽イオンのいずれであってもよい。典型的には、荷電脂質に対して電荷が反対の対イオンのような多価の種の存在下で脂質を集める。インビボでの選択的部位への生物活性剤の送達のために、好ましくは２ミクロン未満、より好ましくは０．５ミクロン未満、さらにより好ましくは２００ｎｍ未満の集合体が適切である。最も好ましくは、脂質集合体は大きさが２００ｎｍ未満であり、大きさが５− １０ｎｍほど小さくてもよい。代表的な陰イオン脂質はホスファチジン酸及びホスファチジルグリセロール及びそれらの脂肪酸エステル、アナンダミド（ａｎａｎｄａｍｉｄｅ）及びメタナンダミド（ｍｅｔｈａｎａｎｄａｍｉｄｅ）のようなホスファチジルエタノールアミンのアミド、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール及びその脂肪酸エステル、カルジオリピン、ホスファチジルエチレングリコール、酸性リゾ脂質、スルホ脂質及びスルファチド、飽和及び不飽和の両方の遊離脂肪酸及びそれらの負に荷電した誘導体を含む。ホスファチジン酸及びホスファチジルグリセロール及びそれらの脂肪酸エステルが好ましい陰イオン脂質である。荷電脂質が陰イオンである場合、集合体を形成するために多価（二価、三価等）の陽イオン物質を用いることができる。有用な陽イオンは、例えば、ベリリウム（Ｂｅ⁺²）、マグネシウム（Ｍｇ⁺²）、カルシウム（Ｃａ⁺²）、ストロンチウム（Ｓｔ⁺²）及びバリウム（Ｂａ⁺²）のようなアルカリ土類金属から得られる陽イオン；アルミニウム（Ａｌ⁺³）、ガリウム（Ｇａ⁺³）、ゲルマニウム（Ｇｅ⁺³ ）、スズ（Ｓｎ⁺⁴）及び鉛（Ｐｂ⁺²及びＰｂ⁺⁴）のような両性イオン；チタン（Ｔｉ⁺³及びＴｉ⁺⁴）、バナジウム（Ｖ⁺²及びＶ⁺³）、クロム（Ｃｒ⁺²及びＣｒ⁺³ ）、マンガン（Ｍｎ⁺²及びＭｎ⁺³）、鉄（Ｆｅ⁺²及びＦｅ⁺³）、コバルト（Ｃｏ⁺²及びＣｏ⁺³ ）、ニッケル（Ｎｉ⁺²及びＮｉ⁺³）、銅（Ｃｕ⁺²）、亜鉛（Ｚｎ⁺²）、ジルコニウム（Ｚｒ⁺⁴）、ニオブ（Ｎｂ⁺³）、モリブデン（Ｍｏ⁺²及びＭｏ⁺³）、カドミウム（Ｃｄ⁺²）、インジウム（Ｉｎ⁺³）、タングステン（Ｗ⁺²及びＷ⁺⁴）、オスミウム（Ｏｓ⁺²、Ｏｓ⁺³及びＯｓ⁺⁴）、イリジウム（Ｉｒ⁺²、Ｉｒ⁺³及びＩｒ⁺⁴ ）、水銀（Ｈｇ⁺²）並びにビスマス（Ｂｉ⁺³）のような遷移金属；ランタン（Ｌａ⁺³）及びガドリニウム（Ｇｄ⁺³）のような希土類ランタニドを含む。全てのそれらの通常原子価状態の陽イオンが集合体及び架橋脂質を形成するために適当であると考えられる。好ましい陽イオンはカルシウム（Ｃａ⁺²）、マグネシウム（Ｍｇ⁺²）及び亜鉛（Ｚｎ⁺²）並びにマンガン（好ましくはＭｎ⁺²）及びガドリニウム（Ｇｄ⁺³）のような常磁性陽イオンを含む。特に好ましいものはカルシウム（Ｃａ⁺²）である。当業者に明らかなように、上記のイオンのいくつか（特に鉛及びニッケル）は付随する毒性を有することがあり、従って、インビボでの使用のために不適切である可能性がある。荷電脂質が陽イオンである場合、集合体を形成するために例えば陰イオン物質を用いることができる。好ましくは、陰イオン物質は例えば二価のような多価である。有用な陰イオン物質の例は、カルボキシレートイオン、スルフィドイオン、亜硫酸イオン、硫酸イオン、酸化物イオン、ニトリドイオン、炭酸イオン及びリン酸イオンのような単原子及び多原子陰イオンを含む。また、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）及び１，４，７，１０−テトラアゾシクロドデカン−Ｎ’，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”−四酢酸（ＤＯＴＡ）の陰イオンを用いてもよい。有用な陰イオン物質のさらなる例は、アクリル酸、メタクリル酸、他のポリアクリレート及びメタクリレートのポリマー及びコポリマー、スルホン化ポリスチレンのようなＳＯ₃Ｈ側基を有するポリマー、並びにカルボン酸基を含有するポリスチレンの陰イオンを含む。陽イオン脂質の例は先に挙げたものを含む。集合体の形成のために好ましい陽イオン脂質はＮ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（「ＤＯＴＭＡ」）である。また、合成陽イオン脂質を用いてもよい。これらは１個またはそれ以上の塩基性官能基を含有するように誘導化された一般の天然脂質を含む。そのように改変することができる脂質の例は、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド、スフィノ脂質、スフィンゴミエリン、リゾ脂質、ガングリオシドＧＭ１のような糖脂質、スルファチド、スフィンゴ糖脂質、コレステロール及びコレステロールエステル及び塩、Ｎ−スクシニルジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロール、１，３−ジパルミトイル−２−スクシニルグリセロール、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−３−スクシニルグリセロール、１− ヘキサデシル−２−パルミトイルグリセロホスファチジルエタノールアミン及びパルミトイルホモシステインを含む。特別に合成された陽イオン脂質も本発明の態様において機能する。これらの中には係属中の米国特許出願第０８／３９１，９３８号中に開示されたものがあり、その開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれ、そして例えば、Ｎ，Ｎ’−ビス（ドデシアミノカルボニルメチレン）−Ｎ，Ｎ’−ビス（β−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムエチル−アミノカルボニルメチレンエチレンジアミンテトラヨージド；Ｎ，Ｎ”− ビスヘキサデシルアミノカルボニルメチレン）−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”−トリス（β− Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム−エチルアミノカルボニルメチレンジエチレントリアミンヘキサヨージド；Ｎ，Ｎ’−ビス（ドデシルアミノカルボニルメチレン）−Ｎ，Ｎ”−ビス（β−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムエチルアミノカルボニルメチレン）シクロヘキシレン−１，４−ジアミンテトラヨージド；１，１，７，７−テトラ−（β−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチルアンモニウム −エチルアミノカルボニルメチレン）−３−ヘキサデシルアミノカルボニル−メチレン−１，３，７−トリアアザヘプタン（ｔｒｉａａｚａｈｅｐｔａｎｅ）ヘプタヨージド：及びＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラホスホエタノールアミノカルボニルメチレン）ジエチレントリアミンテトラヨージドを含む。いったん本開示が与えられると当業者は、正電荷部分を保有する他の天然及び合成の変種も本発明において機能することを認識する。脂質から調合される脂質組成物及び小胞組成物に加えて、本発明の方法はタンパク質またはそれらの誘導体から調合される組成物及び小胞も含むことができる。タンパク質から調合され、そして本発明の方法における使用のために適当な組成物及び小胞は、例えば、Ｆｅｉｎｓｔｅｉｎ、米国特許第４，５７２，２０３号、第４，７１８，４３３号及び第４，７７４，９５８号並びにＣｅｒｎｙ等、米国特許第４，９５７，６５６号中に記述されており、それらの開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。いったん本開示が与えられると、上記の特許中に記述されたものに加えて、他のタンパク質に基づく小胞及び組成物は当業者に明らかである。脂質及び／またはタンパク質から調合される組成物に加えて、本発明の方法はポリマーから調合される組成物及び小胞も含むことができる。本発明における使用のために適当な代表的な天然ポリマーは、天然に存在する炭水化物または多糖を含む。そのような多糖は、例えば、アミロース、プルラン、グリコーゲン、アミロペクチン、セルロース、デキストラン、デキストリン、デキストロース、ポリデキストロース、プスツラン、キチン、アガロース、ケラタン、コンドロイタン、デルマタン、ヒアルロン酸、アルギン酸、キサンタンゴム、澱粉、（例えば、ヘパリン硫酸またはヘパリチン硫酸を初めとする）ヘパリンを初めとする、アラビナン、フルクタン、フカン、ガラクタン、ガラクツロナン、グルカン、マンナン、（例えば、イヌリンのような）キシラン、レバン、フコイダン、カラギーナン、ガラトカロロース、ペクチン酸、ペクチンのポリマーまたはそれらから形成されるポリマー、並びに１つまたはそれ以上の以下のアルドース、ケトース、酸またはアミン：エリトロース、トレオース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、タロース、エリトルロース、リブロース、キシルロース、プシコース、フルクトース、ソルボース、タガトース、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、ショ糖、トレハロース、マルトース、セロビオース、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、ヒスチジン、グルクロン酸、グルコン酸、グルカル酸、ガラクツロン酸、マンヌロン酸、グルコサミン、ガラクトサミン及びノイラミン酸及び天然に存在するそれらの誘導体を含有するもののような様々な他の天然ホモポリマーまたはヘテロポリマーを含む。従って、適当な天然ポリマーは例えばアルブミン及びウロキナーゼのようなタンパク質を含む。代表的な半合成ポリマーはカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース及びメトキシセルロースを含む。本発明における使用のために適当な代表的な合成ポリマーは（例えば、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレン及びポリエチレンテレフタレート（ｔｅｒｅｐｈｔｈｌａｔｅ）のような）ポリエチレン、（例えば、ポリプロピレングリコールのような）ポリプロピレン、ポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンのブロックコポリマーを初めとするポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンのコポリマー、（例えば、ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪから市販されているＰｌｕｒｏｎｉｃｓ^TM（商標）と呼ばれる化合物の種類のような）ポリエチレングリコールのポリオキシアルキレン誘導体、（例えば、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルクロリド及びポリビニルピロリドンのような）ポリウレタン、ナイロンを初めとするポリアミド、ポリスチレン、ポリ乳酸、フッ素化炭化水素、（例えば、ポリテトラフルオロエチレンのような）フッ素化炭素及びポリメチルメタクリレート並びにそれらの誘導体を含む。好ましいものは、組み合わせを含んで、アクリル酸、メタクリル酸、エチレンイミン、クロトン酸、アクリルアミド、アクリル酸エチル、メタクリル酸メチル、メタクリル酸２−ヒドロキシエチル（ＨＥＭＡ）、乳酸、グリコール酸、ε−カプロラクトン、アクロレイン、シアノアクリレート、ビスフェノールＡ、エピクロルヒドリン、ヒドロキシアルキルアクリレート、シロキサン、ジメチルシロキサン、エチレンオキシド、エチレングリコール、ヒドロキシアルキルメタクリレート、Ｎ−置換されたアクリルアミド、Ｎ−置換されたメタクリルアミド、Ｎ−ビニル−２−ピロリドン、２，４−ペンタジエン−１−オール、酢酸ビニル、アクリロニトリル、スチレン、ｐ−アミノ−スチレン、ｐ−アミノ−ベンジル−スチレン、スルホン酸スチレンナトリウム、２−スルホキシエチルメタクリル酸ナトリウム、ビニルピリジン、メタクリル酸アミノエチル、ラクチド、２−メタクリロイルオキシ−トリメチルアンモニウムクロリド及びポリビニリデンのようなモノマー、並びにＮ，Ｎ’−メチレンビスアクリルアミド、エチレングリコールジメタクリレート、２，２’−（ｐ− フェニレンジオキシ）−ジエチルジメタクリレート、ジビニルベンゼン、トリアリルアミン及びメチレンビス−（４−フェニル−イソシアネート）のような多官能架橋モノマーから調製される生体適合性の合成ポリマーまたはコポリマーである。好ましい合成ポリマーはポリアクリル酸、ポリエチレンイミン、ポリメタクリル酸、ポリメチルメタクリレート、ポリシロキサン、ポリジメチルシロキサン、ポリ乳酸、ポリ（ε−カプロラクトン）、エポキシ樹脂、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレングリコール）及びポリアミド（ナイロン）ポリマーを含む。好ましいコポリマーは以下のもの：ポリビニリデン−ポリアクリロニトリル、ポリビニリデン−ポリアクリロニトリル−ポリメチルメタクリレート、ポリスチレン−ポリアクリロニトリル、（ポリ−ｄ−Ｌ−ラクチドコ−グリコリドポリマーのような）ポリラクチドコグリコリドポリマー及びナイロンを含む。特に好ましいコポリマーはポリビニリデン−ポリアクリロニトリルである。他の適当な生体適合性モノマー及びポリマーは、いったん本開示が与えられると当業者に容易に明らかである。必要な場合、例えば、小胞壁の安定性を高めるために、ポリマーは場合により架橋されていてもよい。ポリマーを含んでなる組成物及び小胞の製造方法は、全部引用することにより開示が本明細書に組み込まれるＵｎｇｅｒ、米国特許第５，２０５，２９０号中に記述され詳細に述べられているような、当該技術分野で知られている情報と本開示を結び付けて考える場合、いったん本開示が与えられると当業者に容易に明らかである。通常の化学的架橋または重合の代わりのものとして、モノマー、オリゴマーまたはポリマーをイオン結合の使用により一緒に結合させることができる。例えば、カルシウムで「架橋する」（すなわち、イオンまたは塩橋を作り出す）ことによりアルギン酸を含んでなる小胞を調製することができる。いったん本開示が与えられると当業者が認識するように、二価またはそれより高い原子価のものである反対に荷電した陽イオンまたは陰イオンの使用により様々な荷電物質を同様に小胞中に安定化することができる。本発明の方法における使用のための脂質、タンパク質、ポリマー等から得られる小胞は好ましくは低密度である。「低密度」という用語は、小胞の全体積の少なくとも約７５％である内部空間（空洞）体積を有する小胞をさす。好ましくは、小胞は小胞の全体積の少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約８５％、さらにより好ましくは少なくとも約９０％、さらにより好ましくは少なくとも約９５％、さらにより好ましくは約１００％の空間体積を有する。本発明における使用のための気体前駆体は、安定化物質と会合した場合に、ほぼ液滴の形態または他の適当な形態であってもよい。安定化物質が壁を形成できる場合、液滴は小胞の形態であってもよい。いかなる理論により拘束されることを意図するものではないが、液体から気体への相転移の間の気体前駆体の膨張はそれが含まれる液滴または小胞からのあらゆる生物活性剤の放出を機械的に引き起こすように働くと考えられる。さらに、相転移中に、液滴、小胞等の直径は増加することが認められる。気体前駆体が気体への相転移を受ける前に気体前駆体を含有する液滴、小胞等の直径を意味する、液滴、小胞等の初期直径は、約３ナノメートル（ｎｍ）から約１０マイクロメートル（μｍ）まで様々であってもよい。本発明の目的のために、液滴または小胞をそれぞれ「ナノ液滴」または「微小液滴」と呼んでもよい。好ましくは、本発明における使用のための液滴または小胞は約３０ｎｍから約３μｍまで、より好ましくは約５０ｎｍから約２μｍまで、最も好ましくは約７５ｎｍから約１μｍまでの初期直径を有する。特定の用途、例えば、患者の特定の型の組織または特定の部位における診断または治療用途のために液滴または小胞の初期直径を選択することができる。必要な場合、例えば、本明細書により完全に説明される、振盪、微小乳化、ボルテックス、押し出し、濾過、超音波処理、均質化、繰り返された凍結融解サイクル、特定の大きさの細孔を通した圧力下での押し出し及び類似した方法を初めとする方法により大きさを調整することができる。ある態様として、気体前駆体、生物活性剤組成物の安定性を高めるために（単独でかまたは他の安定剤に加えて）安定剤として液体または固体状態であってもよい、ペルフッ素化化合物を初めとするフッ素化化合物を用いることが望ましいことがある。適当なフッ素化化合物は、例えば、アルキル界面活性剤を初めとするフッ素化界面活性剤及び両親媒性化合物を含む。例えば、末端リン酸または硫酸基を有する、ＺＯＮＹＬ^R（商標）リン酸塩及びＺＯＮＹＬ^R硫酸塩を初めとするＺＯＮＹＬ^Rフルオロ界面活性剤（ＤｕＰｏｎｔＣｏｍｐａｎｙ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＤＥ）として市販されている化合物の種類を初めとする多種多様なそのような化合物を用いることができる。代表的な化合物は例えば米国特許第５，２７６，１４５号中に開示されており、その開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。また、適当なＺＯＮＹＬ^R界面活性剤は、例えば、ＤｕＰｏｎｔＣｏｍｐａｎｙから入手可能なＰＥＧ−ＴｅｌｏｍｅｒＢとしても知られている、ペジル化されている（すなわち、少なくとも１個のポリエチレングリコール基が結合している）ＴｅｌｏｍｅｒＢ界面活性剤を初めとする、ＴｅｌｏｍｅｒＢとして同定されるＺＯＮＹＬ^R界面活性剤も含む。また適当なものは、例えば、ペルフルオロオクチルブロミド（ＰＦＯＢ）、ペルアルオロデカリン、ペルフルオロドデカリン、ペルフルオロオクチルヨージド、ペルフルオロトリプロピルアミン及びペルフルオロトリブチルアミンのような液体ペルフルオロカーボン並びにＱｕａｙ、欧州特許出願、ＥＰＡ０７２７２２５中に開示されたもののようなフッ素を含有する炭水化物であり、その開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。通例、約６個またはそれ以上の炭素原子を含んでなるペルフルオロカーボンは正常ヒト体温で液体である。これらのペルフルオロカーボンの中で、室温で液体であるペルフルオロオクチルブロミド及びペルフルオロヘキサンが好ましい。操作のいかなる理論または複数の理論により拘束されることを意図するものではないが、特に小胞組成物の場合、液体フッ素化化合物は気体前駆体と小胞の膜または壁表面の間の界面に位置することができると考えられる。従って、安定化化合物、例えば、小胞を形成するために用いられる生体適合性脂質の内部表面上に液体フッ素化化合物のさらなる安定化相を形成することができる。「安定な」または「安定した」という用語は、小胞に関して本明細書に用いられる場合、有用な期間、例えばそのような放出が所望されるまで、例えば、小胞構造または包膜化されるかもしくは閉じ込められた気体前駆体もしくは生物活性剤の損失を初めとする分解に対して小胞が実質的に耐性であることができることを意味する。典型的に、本発明に用いられる小胞は望ましい貯蔵寿命を有し、そのような長い貯蔵寿命が本発明のためには必要とされないが、しばしば、通常の周囲条件下で少なくとも約２ないし３週の期間その最初の構造の体積で少なくとも約９０％を保持する。好ましい形態として、小胞は望ましくは少なくとも約１カ月、より好ましくは少なくとも約２カ月、さらにより好ましくは少なくとも約６カ月、さらにより好ましくは約１８カ月、さらにより好ましくは約３年までの期間安定である。また、本明細書に記述される小胞は不都合な条件下でさえ安定であることができる。本明細書に記述される小胞の安定性は、例えば、上記の脂質、ポリマー及びタンパク質を初めとする、小胞を作製する物質に少なくともある程度起因する可能性があり、付加安定化物質を用いることはしばしば必要ではないが、そうすることは任意であり、望ましい可能性がある。そのような付加安定化物質及びそれらの特性を以下により完全に記述する。上に説明した脂質、タンパク質、ポリマー等の化合物に加えてまたはそれらの代わりに、本明細書に記述される組成物は１つまたはそれ以上の付加または基礎安定化物質を含んでなることができる。代表的なそのような安定化物質は例えば他の生体適合性ポリマーである。小胞の形成を望ましく助けるためまたは気体前駆体及び生物活性剤の実質的包膜化を確実なものにするために安定化物質を用いることができる。これらの安定化物質は小胞の大きさ、形状及び／または他の特質に関してそれらの安定性及び完全な状態を向上することに役立つ可能性がある。本発明の特に好ましい態様は３つの成分：（１）中性脂質、例えば、非イオン性または両性イオン性脂質、（２）負に荷電した脂質及び（３）安定化物質、例えば親水性ポリマーを保有する脂質を含んでなる小胞を含む。好ましくは、負に荷電した脂質の量は存在する全脂質の約１モルパーセントより大きく、親水性ポリマーを保有する脂質の量は存在する全脂質の約１モルパーセントより大きい。代表的な好ましい負に荷電した脂質はホスファチジン酸を含む。親水性ポリマーを保有する脂質は望ましくはポリマーに共有結合的に連結された脂質であり、ポリマーは好ましくは約４００から約１００，０００までの重量平均分子量を有する。適当な親水性ポリマーは好ましくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール及びポリビニルピロリドン並びにそれらのコポリマーよりなる群から選択され、ＰＥＧポリマーが好ましい。好ましくは、ＰＥＧポリマーは約１０００から約７５００までの分子量を有し、約２０００から約５０００までの分子量がより好ましい。ＰＥＧまたは他のポリマーをアミド、カルバメートまたはアミン結合のような共有結合により脂質、例えばＤＰＰＥに結合させることができる。さらに、ＰＥＧまたは他のポリマーを例えば、アミド、エステル、エーテル、チオエステル、チオアミドまたはジスルフィド結合を初めとする共有結合でターゲッティングリガンドまたは他のリン脂質に連結することができる。親水性ポリマーがＰＥＧである場合、そのようなポリマーを保有する脂質は「ペジル化されている」と記述される。好ましい形態として、親水性ポリマーを保有する脂質は、例えば、約５０００の中間重量平均分子量のポリエチレングリコールが結合しているＤＰＰＥ（ＤＰＰＥ−ＰＥＧ５０００）をさすＤＰＰＥ−ＰＥＧ５００を初めとするＤＰＰＥ−ＰＥＧであってもよい。別の適当なペジル化脂質はジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ポリエチレングリコール５０００（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００）である。上記の物質に加えて他の物質から小胞組成物を調製することができ、ただし、そのように調製される小胞は本明細書に記述される安定性及び他の規準を満たす。これらの物質は基本的及び基礎的であってもよく、安定した気体前駆体封入小胞を作製するかまたは樹立するための主基礎原料を形成することができる。一方、それらは補助であってもよく、基礎安定化物質もしくは複数の物質の機能性を高めるか、または基礎安定化物質によりもたらされるものに加えていくらかの適切な特性を与えることができる補助または補足剤として働くことができる。基礎及び補助物質がどのように機能することができるかの例として、生体適合性脂質及び水または食塩水の単純な組み合わせが、振盪した場合、滅菌のためにオートクレーブした後にしばしば濁った溶液を与えることが観察されている。ある用途には、濁った溶液が望ましくないことがあり；例えば、そのような濁った溶液は溶解されないかまたは分散されない脂質粒子の形態の不安定性を伴う可能性がある。例えば、滅菌濾過のような製造工程は溶解されない粒状物質を含有する溶液では問題がある可能性があるので、そのような溶液は望ましくないことがある。従って、脂質粒子の分散または溶解を容易にすることで濁りを取り除くためにプロピレングリコールを添加することができる。また、プロピレングリコールは小胞膜または表層上の表面張力を増加することにより小胞形成及び安定化を高めることができる湿潤剤としても機能することができる。また、プロピレングリコールは小胞の膜を被覆することができるさらなる層としても機能でき、従って、安定化も与える。そのようなさらなる基礎または補助安定化物質の他の例は、例えば、Ｄ’Ａｒｒｉｇｏ、米国特許第４，６８４，４７９号及び第５，２１５，６８０号中に記述された通例の界面活性剤を含み、それらの開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。さらなる補助及び基礎安定化物質は、ラッカセイ油、カノラ油、オリーブ油、ベニバナ油、トウモロコシ油、ダイズ油または本明細書における教示による安定化化合物としての使用のために適当である摂取できることが一般に知られているあらゆる他の油のような試剤を含む。実際、これらの油は小胞系内に疎水性の薬剤を維持するために有用である可能性がある。様々な補助及び基礎安定化物質が、例えば、１９９５年５月１９日に出願された米国出願第０８／４４４，５７４号中に記述されており、その開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。さらに、混合ミセル系を作製するために用いられる化合物は、基礎または補助安定化物質としての使用のために適当である可能性があり、これらは例えばラウリルトリメチルアンモニウムブロミド（ドデシル−）、セチルトリメチルアンモニウムブロミド（ヘキサデシル−）ミリスチルトリメチルアンモニウムブロミド（テトラデシル−）、（アルキルがＣ₁₂、Ｃ₁₄もしくはＣ₁₆である場合の）アルキルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ベンジルジメチルドデシルアンモニウムブロミド／クロリド、ベンジルジメチルヘキサデシルアンモニウムブロミド／クロリド、ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウムブロミド／クロリド、セチルジメチルエチルアンモニウムブロミド／クロリドまたはセチルピリジニウムブロミド／クロリドを含む。また、本明細書に記述される様々な付加または補助安定化物質の中から選択することにより、本発明に用いられる気体前駆体封入小胞及び安定化物質を大きさ、溶解性及び熱安定性により制御することができる。付加または補助物質は、小胞膜とそれらの物理的相互作用によるだけでなく、気体前駆体封入小胞の表面の粘度及び表面張力を改変するそれらの能力によっても小胞等、特に脂質から調合される小胞のこれらのパラメーターに影響を及ぼすことができる。従って、例えば、多種多様な（ａ）例えば、炭水化物及びそれらのリン酸化及びスルホン化誘導体；好ましくは４００ないし１００，０００の間の範囲の分子量を有するポリエーテル；並びに好ましくは２００ないし５０，０００の分子量を有するジー及びトリヒドロキシアルカン及びそれらポリマーを初めとする粘度調整剤；（ｂ）例えば、アカシア、コレステロール、ジエタノールアミン、グリセリルモノステアレート、ラノリンアルコール、レシチン、モノー及びジ−グリセリド、モノ− エタノールアミン、オレイン酸、オレイルアルコール、ポロキサマー、例えばポロキサマー１８８、ポロキサマー１８４及びポロキサマー１８１、ポリオキシエチレン５０ステアレート、ポリオキシ３５ひまし油、ポリオキシ１０オレイルエーテル、ポリオキシ２０セトステアリルエーテル、ポリオキシ４０ステアレート、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、プロピレングリコールジアセテート、プロピレングリコールモノステアレート、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ソルビタンモノ−ラウレート、ソルビタンモノ−オレエート、ソルビタンモノ−パルミテート、ソルビタンモノステアレート、ステアリン酸、トロラミン（ｔｒｏｌａｍｉｎ）及び乳化ロウを初めとする乳化剤及び／または可溶化剤；（ｃ）例えば、アカシア、寒天、アルギン酸、アルミニウムモノ−ステアレート、ベントナイト、マグマ、カーボマー（ｃａｒｂｏｍｅｒ）９３４Ｐ、カルボキシメチルセルロース、カルシウム及びナトリウム及びナトリウム１２、カラギーナン、セルロース、デキストラン、ゼラチン、グアルゴム、イナゴマメゴム、ビーガム（ｖｅｅｇｕｍ）、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マグネシウム−アルミニウム−ケイ酸塩、Ｚｅｏｌｉｔｅｓ^R（商標）、メチルセルロース、ペクチン、ポリエチレンオキシド、ポビドン、プロピレングリコールアルギネート、シリコンジオキシド、アルギン酸ナトリウム、トラガカントゴム、キサンタンゴム、α−ｄ−グルコノラクトン、グリセロール及びマンニトールを初めとする沈殿防止剤及び／または粘度増加剤；（ｄ）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）及びポリソルベートのような合成沈殿防止剤；並びに（ｅ）例えば、ソルビトール、マンニトール、トレハロース、ショ糖、プロピレングリコール及びグリセロールを初めとする、安定させ張性を付加する張性上昇剤の１つまたはそれ以上の添加により、本発明に用いられる気体前駆体封入小胞を例えば好ましく改変し、さらに安定させることができる。小胞及び非小胞の両方の、脂質、タンパク質及び／またはポリマー等組成物の調製のために多種多様な方法が利用できる。これらの方法の中に含まれるものは、例えば、振盪、乾燥、気体注入（ｇａｓ−ｉｎｓｔａｌｌａｔｉｏｎ）、噴霧乾燥等である。脂質からの小胞組成物の適当な製造方法は、例えば、Ｕｎｇｅｒ等、米国特許第５，４６９，８５４号中に記述されており、その開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。ミセル組成物の製造に特に関連して、以下の説明を与える。当業者に明らかな様々なミセル製造常法のいずれかを用いてミセルを製造することができる。これらの方法は典型的に有機溶媒における１つまたはそれ以上の化合物の懸濁、溶媒の蒸発、水性媒質における再懸濁、超音波処理及び遠心分離を含む。上記の方法及び他のものは、例えば、Ｃａｎｆｉｅｌｄ等、ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１８９巻、ｐｐ．４１８−４２２（１９９０）；Ｅｌ−Ｇｏｒａｂ等、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、３０６巻、ｐｐ．５８− ６６（１９７３）；ＣｏｌｌｏｉｄａｌＳｕｒｆａｃｔａｎｔ、Ｓｈｉｎｏｄａ、Ｋ．、Ｎａｋａｇａｎａ、Ｔａｍａｍｕｓｈｉ及びＩｓｅｊｕｒａ、ＡｃａｄａｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、ＮＹ（１９６３）（特に、「ＴｈｅＦｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＭｉｃｅｌｌｅｓ」、Ｓｈｉｎｏｄａ、第１章、ｐｐ１−８８）；ＣａｔａｌｙｓｉｓｉｎＭｉｃｅｌｌａｒａｎｄＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒＳｙｓｔｅｍｓ、ＦｅｎｄｌｅｒａｎｄＦｅｎｄｌｅｒ、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、ＮＹ（１９７５）中に説明されている。上記の公開の各々の開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。上記のように、小胞組成物はリポソームを含んでなることができる。リポソーム組成物の製造に関連して多種多様な方法が利用できる。従って、当業者に明らかな様々な通例のリポソーム製造技術のいずれかを用いてリポソームを製造することができる。これらの技術は、例えば、溶媒透析、フレンチプレス、（凍結融解するかまたはしない）押し出し、逆相蒸発、単純な凍結融解、超音波処理、キレート透析、均質化、溶媒注入、微小乳化、自然形成、溶媒気化、溶媒透析、フレンチ圧力細胞技術、制御された洗剤透析等を含み、各々様々な方法の小胞の製造を含む。例えば、Ｍａｄｄｅｎ等、ＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＰｈｙｓｉｃｓｏｆＬｉｐｉｄｓ、１９９０５３：３７−４６を参照、その開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。適当な凍結融解技術は、例えば、１９８９年１１月８日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ第８９／０５０４０号中に記述されており、その開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。リポソームの製造に関連して凍結融解技術を含む方法が好ましい。リポソームの製造を食塩水溶液、リン酸バッファー水溶液または滅菌水のような溶液中で実施することができる。また、振盪またはボルテックスを含む様々な方法によりリポソームを製造してもよい。例えば、Ｗｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇ^TM（商標）（ＣｒｅｓｃｅｎｔＤｅｎｔａｌ、Ｌｙｏｎｓ、ＩＬ）、Ｍｉｘｏｍａｔ（ＤｅｇｕｓｓａＡＧ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｃａｐｍｉｘ（ＥｓｐｅＦａｂｒｉｋＰｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｃｈｅｒＰｒａｅｐａｒａｔｅＧＭＢＨ＆Ｃｏ．、Ｓｅｅｆｅｌｄ、ＯｂｅｒａｙＧｅｒｍａｎｙ）、ＳｉｌａｍａｔＰｌｕｓ（Ｖｉｖａｄｅｎｔ、Ｌｅｃｈｔｅｎｓｔｅｉｎ）またはＶｉｂｒｏｓ（ＱｕａｙｌｅＤｅｎｔａｌ、Ｓｕｓｓｅｘ、Ｅｎｇｌａｎｄ）のような機械的振盪装置の使用によりこれを成し遂げることができる。Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ^TM（商標）（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ、Ｗｏｂｕｒｎ、ＭＡ）のような通例の微小乳化装置を用いてもよい。小胞組成物の製造における使用のために適応させることができる多数のリポソーム製造技術は、例えば、米国特許第４，７２８，５７８号；英国特許出願ＧＢ２１９３０９５Ａ；米国特許第４，７２８，５７５号；米国特許第４，７３７，３２３号；国際出願ＰＣＴ／ＵＳ第８５／０１１６１号；Ｍａｙｅｒ等、ＢｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａ、８５８巻、ｐｐ．１６１−１６８（１９８６）；Ｈｏｐｅ等、ＢｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａ、８１２巻、ｐｐ．５５−６５（１９８５）；米国特許第４，５３３，２５４号；Ｍａｙｈｅｗ等、ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１４９巻、ｐｐ．６４−７７（１９８７）；Ｍａｙｈｅｗ等、ＢｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａ、７５５巻、ｐｐ１６９−７４（１９８４）；Ｃｈｅｎｇ等、ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅＲａｄｉｏｌｏｇｙ、２２巻、ｐｐ４７−５５（１９８７）；国際出願ＰＣＴ／ＵＳ第８９／０５０４０号；米国特許第４，１６２，２８２号；米国特許第４，３１０，５０５号；米国特許第４，９２１，７０６号；並びにＬｉｐｏｓｏｍｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ、Ｇ．、編集、巻、ｐｐ．２９−３１、５１−６７及び７９−１０８（ＣＲＣＰｒｅｓｓＩｎｃ．、ＢｏｃａＲａｔｏｎ、ＦＬ１９８４）中に説明されており、それらの各々の開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。上に説明したように、本発明における使用のための液滴及び小胞並びに本発明の他の組成物形態を撹拌により製造することができる。「撹拌」という用語は、本明細書に用いられる場合、局所的周囲環境から水溶液中に気体を導入することができるような水溶液の振盪のようなあらゆる動きを意味する。脂質が用いられる場合、好ましくは、脂質のゲルから液晶への相転移温度より下の温度でこの撹拌を実施する。溶液の撹拌に関係する振盪は、好ましくは、小胞組成物、特に気体前駆体封入小胞を含んでなる小胞組成物を初めとする組成物の形成をもたらすために十分な力のものである。振盪はボルテックスによるような回転運動、左右または上下運動によってもよい。異なる型の動きを組み合わせてもよい。また、液体水溶液を入れている容器を振盪することによるか、または容器自体を振盪せずに容器内の水溶液を振盪することにより振盪が起こってもよい。振盪は手動でまたは機械により起こってもよい。用いることができる機械的振盪機は、例えば、ＶＷＲＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＣｏ．（Ｃｅｒｒｉｔｏｓ、ＣＡ）振盪台のような振盪台及び上記の振盪装置の全てを含み、Ｃａｐｍｉｘ（ＥｓｐｅＦａｂｒｉｋＰｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｈｅｒＰｒａｅｐａｒａｔｅＧＭＢＨ＆Ｃｏ．、Ｓｅｅｆｅｌｄ、ＯｂｅｒａｙＧｅｒｍａｎｙ）が好ましい。好ましい大きさの範囲内の小胞を製造するために振盪またはボルテックスのある形態を使用できることが見いだされている。振盪が好ましく、ＥｓｐｅＣａｐｍｉｘ機械的振盪機を用いて振盪を実施することが好ましい。この好ましい方法により、往復運動を利用して脂質組成物、特に小胞組成物を作製することが好ましい。運動が弧の形態で往復することがさらにより好ましい。往復運動の速度及びその弧は小胞の形成に関連して特に重要であると考えられる。好ましくは、往復運動または全周期振動の数は１分当たり約１０００から約２０，０００までであってもよい。より好ましくは、往復運動または振動の数は１分当たり約２５００から約８，０００までであってもよく、１分当たり約３３００から約５０００までの往復運動または振動がさらにより好ましい。もちろん、振動の数は撹拌される中身の質量により決まることができる。一般的に言えば、より大きい質量はより少ない振動を必要とすることができる。振盪を生じるための別の方法は高速または圧力下で出される気体の作用を含む。また、好ましくは、より大きい体積の水溶液を用いて、力の全量を付随して増加できることも理解される。強い振盪は１分当たり少なくとも約６０振盪運動として定義され、そしてそれが好ましい。１分当たり約６０ないし約３００回転のボルテックスがより好ましい。１分当たり約３００ないし約１８００回転のボルテックスがさらにより好ましい。上記の単純な振盪方法に加えて、より複雑な方法を用いることもできる。そのような複雑な方法は、例えば、特許及び特許出願、１９９３年６月１１日に出願された米国第０８／０７６，２３９号（米国特許第５，４６９，８５４号）、１９９３年６月１１日に出願された米国第０８／０７６，２５０号（米国特許第５，５８０，５７５号）、１９９３年１１月３０日に出願された米国第０８／１５９，６８７号（米国特許第５，５８５，１１２号）、１９９３年１１月３０日に出願された米国第０８／１６０，２３２号（米国特許第５，５４２，９３５号）、１９９４年９月１６日に出願された米国第０８／３０７，３０５号中に記述されたもののような、液晶振盪気体注入法及び真空乾燥気体注入法を含み、それらの開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。また、本発明による組成物の製造にエマルション法を用いてもよい。そのような乳化法は、例えば、Ｑｕａｙ、米国特許第５，５５８，０９４号、第５，５５８，８５３号、第５，５５８，８５４号、第５，５７３，７５１号中に記述されており、それらの開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。また、気体前駆体封入小胞を製造するために噴霧乾燥を用いてもよい。この方法を利用して、脂質を水性環境中で予備混合し、次に、噴霧乾燥させて気体前駆体封入小胞を製造することができる。小胞を適切な気体の充填空積下で貯蔵することができる。多数の様々な技術のいずれも用いることができるが、本発明に用いられる小胞組成物は好ましくは振盪技術を用いて製造される。好ましくは、振盪技術は、例えば、１９９３年１１月３０日に出願された米国出願第１６０，２３２号中に開示された技術を用いて、ＥｓｐｅＣａｐｍｉｘ（Ｓｅｅｆｅｌｄ、ＯｂｅｒａｒｙＧｅｒｍａｎｙ）のような機械的振盪装置での撹拌を含み、その開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。さらに、以下に詳細に説明する押し出し及び滅菌手続きの後に、撹拌または振盪により、溶液の残りに実質的に全く残留する無水脂質相を含有しないかまたは最小限のものを含有することができる小胞組成物を得ることができる。（Ｂａｎｇｈａｍ、Ａ．Ｄ．、Ｓｔａｎｄｉｓｈ、Ｍ．Ｍ．＆Ｗａｔｋｉｎｓ、Ｊ．Ｃ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３巻、ｐｐ．２３８−２５２（１９６５）。）他の製造技術はＵｎｇｅｒ、米国特許第５，２０５，２９０号中に記述されたものを含み、その開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。必要な場合、例えば、微小乳化、ボルテックス、押し出し、濾過、超音波処理、噴霧乾燥、均質化、繰り返された凍結融解サイクル、特定の大きさの細孔を通した圧力下での押し出し及び類似した方法を初めとする様々な方法により気体前駆体封入小胞の大きさを調整することができる。本明細書に記述される方法により製造される気体前駆体封入小胞は、約１μｍ未満から約１００μｍより大きいまでの大きさであってもよい。さらに、以下に詳細に説明する押し出し及び滅菌手続きの後に、撹拌または振盪により、溶液の残りに実質的に全く残留する無水脂質相を含有しないかまたは最小限のものを含有することができる小胞組成物を得ることができる。（Ｂａｎｇｈａｍ、Ａ．Ｄ．、Ｓｔａｎｄｉｓｈ、Ｍ．Ｍ．＆Ｗａｔｋｉｎｓ、Ｊ．Ｃ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３巻、ｐｐ．２３８−２５２（１９６５）。）必要な場合、小胞の大きさのさらなる改変をいかようにも試みずに、小胞が形成されるとそれらを用いることができる。血管内用途には、小胞は好ましくは約３０μｍ未満、より好ましくは約１２μｍ未満の直径を有する。例えば、癌性組織のようなある組織への結合を初めとする選択的血管内用途のためには、小胞は著しくより小さい、例えば、約１００ｎｍ未満の直径であってもよい。腸または胃腸用途には、小胞は著しくより大きい、例えば、大きさが１ミリメートルまでであってもよい。好ましくは、小胞は約２μｍから約１００μｍまでの直径を有することができる。例えば、準弾性（ｑｕａｓｉｅｌａｓｔｉｃ）光散乱または光学顕微鏡検査により液滴の大きさの測定を成し遂げることができる。フィルターを通した押し出しという簡単な方法により気体前駆体封入小胞を分粒することができ、その場合、フィルター孔径が得られる気体前駆体封入小胞の大きさ分布を制御する。２枚またはそれ以上の段階的または積み重ねたフィルター組、例えば、１０μmフィルターに続いて８μｍのフィルターを用いることにより、約７ないし９μｍに非常に狭い大きさ分布を有するように気体前駆体封入小胞を選択することができる。濾過後に、これらの気体前駆体封入小胞は２４時間以上の間安定なままであることができる。組成物が使用前に滅菌バイアルから取り出される場合、例えば、フィルター組立品の使用により分粒または濾過工程を成し遂げることができ、またはより好ましくは、フィルター組立品を使用中に注射器中に組み込むことができる。次に、小胞を分粒する方法はバレルを含んでなる注射器、少なくとも１枚のフィルター及び針を用いることを含んでなり；そしてバレルと針の間で注射器に取り付けたフィルターを通してバレルから小胞を押し出し、それにより患者に小胞を投与する前にそれらを分粒することを含んでなる抽出の工程によりそれを実施することができる。また、抽出の工程は小胞を注射器中に引き込むことを含んでなってもよく、その場合、フィルターは注射器中への侵入時に小胞を分粒するように同様に機能することができる。別の代わりのものはなんらかの他の方法ですでに分粒されている小胞をそのような注射器に入れることであり、その場合、フィルターは適切な大きさの範囲内または適切な最大の大きさの小胞のみが注射器からの押し出しにより続いて投与されることを確実にするように機能することができる。ある好ましい態様として、振盪する前に小胞組成物を熱滅菌またはフィルター滅菌し、フィルターを通して押し出すことができる。一般的に言えば、好ましくは、気体前駆体を含んでなる小胞組成物をフィルター滅菌する。いったん気体前駆体封入小胞が形成されると、上記のように分粒のためにそれらを濾過することができる。気体前駆体封入小胞の形成前にこれらの工程を実施することにより、すぐに患者に投与できる滅菌した気体前駆体封入小胞を得ることができる。例えば、濾過した脂質等及び／または小胞組成物をバイアルまたは注射器のような混合容器に入れることができ、そして例えばオートクレーブすることにより混合容器内で組成物を滅菌することができる。好ましくは、気体前駆体封入小胞が患者と接触する前にフィルターを通過するように配置されたフィルターを滅菌容器は備えている。脂質等化合物の溶液をフィルターを通して押し出す工程は、あらゆる乾燥物質を粉々に砕き、水和のためにより大きい表面積を露出させることで水和していない物質の量を減らす。好ましくは、フィルターは約０．１ないし約５μｍ、より好ましくは約０．１ないし約４μｍ、さらにより好ましくは約０．１ないし約２ μｍ、なおより好ましくは約１μｍの孔径を有する。一般に望ましくない水和していない化合物は不均一な大きさの非晶質塊として生じる。滅菌工程は患者にすぐに投与できる組成物を与える。ある好ましい態様として、熱滅菌により、好ましくは少なくとも約１００℃の温度で溶液をオートクレーブすることにより、より好ましくは約１００℃ないし約１３０℃で、さらにより好ましくは約１１０℃ないし約１３０℃、なおより好ましくは約１２０℃ないし約１３０℃、さらにより好ましくは約１３０℃でオートクレーブすることにより滅菌を成し遂げることができる。好ましくは、加熱は少なくとも約１分間、より好ましくは約１ないし約３０分、さらにより好ましくは約１０ないし約２０分、なおより好ましくは約１５分間起こる。必要な場合、上に略述したような押し出し及び加熱工程を逆にしてもよく、またはそれら２つの工程のうちの片方のみを用いることができる。例えば、γ放射線への露出を初めとする他の滅菌方法を用いてもよい。本発明は正常体温より上の温度にさらされると気体を形成する、液滴または小胞中の気体前駆体を利用する。この方法は同時係属中の特許出願、１９９３年１１月３０日に出願された第０８／１６０，２３２号及び１９９３年１１月３０日に出願された第０８／１５９，６８７号中に詳細に記述されており、それらの開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。気体前駆体を活性化する好ましい方法は高い体温にさらすことによる。活性化または転移温度等の用語は、固体または液体から気体への気体前駆体の相転移が起こる温度である、気体前駆体の沸点をさす。上に説明したように、有用な気体前駆体は約３６℃ないし約５６℃の範囲に沸点を有する物質である。活性化温度は各気体前駆体に特有である。本発明に関連する気体前駆体には約３７℃より上またはほぼヒト体温より上の活性化温度が好ましい。従って、好ましい形態として、液体気体前駆体は約３７℃より上で活性化されて気体になる。従って、転移温度により、標的組織または体液中でインサイチューで気体を形成するように気体前駆体を選択することができる。好ましくは、例えば、液体を小胞中に混和するために気体前駆体の沸点より下で気体前駆体封入小胞の製造方法を実施する。従って、液体から気体への相転移が製造中に起こらないように気体前駆体を小胞内に閉じ込めることができ、気体前駆体封入小胞は気体前駆体の液相で製造される。低温沸点を有する気体前駆体では、低温に冷やした微小流動化装置を用いて液体前駆動体を乳化することができる。また、液体形態の前駆体を利用するために液体媒質の溶媒を用いて沸点を下げてもよい。しかしながら、本明細書に説明されるように、本発明は標的組織への気体前駆体の送達に関し、その場合、気体前駆動体は好ましくは気体を形成するので、通例、貯蔵及び製造温度で液体または固体である気体前駆体を利用することが好ましい。温度が前駆体の沸点を越えると相転移の活性化はいつでも起こることができる。本発明のさらなる態様として、液体状態の気体前駆体を水性エマルションに予備成形し、そして小胞中に含まれる気体前駆体の量が分かることにより、いったん気体状態への転移がもたらされると、理想気体の法則を用いることにより小胞の最大の大きさを概算することができる。気体前駆体から気体封入小胞を作製する目的のために、気体相は即座に形成すると仮定することができ、そして新しく形成された小胞中の実質的にいかなる気体も通例事実上水性である液体中への拡散のために激減していないと仮定することができる。従って、エマルション中の既知の液体体積から、気体封入小胞の大きさの上限を予測することができる。液体から気体状態への転移時の気泡の体積の増加を計算するために用いることができる理想気体の法則は以下の通りである：ＰＶ＝ｎＲＴここで、Ｐは気圧（ａｔｍ）単位の圧力であり；Ｖはリットル（Ｌ）単位の体積であり；ｎは気体のモルであり；Ｔはケルビン度（Ｋ）単位の温度であり；そしてＲは理想気体定数（２２．４Ｌ−ａｔｍ／Ｋ−モル）である。液体の混合物中の液体の体積、密度及び温度が分かると、気体に転化された場合に既知の体積の小胞中に膨張することができる液体前駆体の例えばモル単位の量及び体積を計算することができる。気体封入小胞中への即座の膨張及び膨張の期間にわたる無視できる気体の拡散を仮定して、計算された体積は気体封入小胞の大きさに対する上限を表すことができる。従って、前駆体液滴が球状である混合物中の液体状態の前駆体の安定化では、前駆体液滴の体積を式：体積（球状小胞）＝４／３πｒ³ 式中、ｒは球の半径である、により決定することができる。従って、いったん体積が予測され、所望する温度での液体の密度が分かると、液滴中の液体気体前駆体の量を決定することができる。より説明的に言えば、以下のもの：Ｖ_gas＝４／３π（ｒ_gas）³ を理想気体の法則、ＰＶ＝ｎＲＴにより適用することができ、代入することにより、Ｖ_gas＝ｎＲＴ／Ｐ_gas になり、または、（Ａ）ｎ＝４／３［πｒ_gas ³］Ｐ／ＲＴ量ｎ＝４／３［πｒ_gas ³Ｐ／ＲＴ］・ＭＷ_n 液体体積に変換し戻すと、（Ｂ）Ｖ_lip＝［４／３［πｒ_gas ³］Ｐ／ＲＴ］・ＭＷ_n／Ｄ］ここで、Ｄは前駆体の密度である。液滴の直径に関して解くと、（Ｃ）直径／２＝［３／４π［４／３・［πｒ_gas ³］Ｐ／ＲＴ］ＭＷ_n／Ｄ］^1/3 それは直径＝２［［ｒ_gas ³］Ｐ／ＲＴ［ＭＷ_n／Ｄ］］^1/3 になる。本発明の態様として、特定の温度、例えば気体前駆体の沸点に達すると液滴が特定の大きさの気体封入小胞中に膨張できるように、例えば、特定の大きさの液滴を含有する、脂質化合物と気体前駆体の混合物を調合することができる。通例、理想気体の法則は溶液中への気体拡散、大気への気体の損失及び増加した圧力の影響のような因子を説明することができないので、特定の大きさは実際の大きさの上限を表すことができる。特定の大きさ、例えば１０μｍ直径の小胞を形成するために代表的な気体前駆体を用いることができる。この例として、ヒトの血流中に小胞を形成することができ、従って、典型的な温度は３７℃または３１０Ｋである。１気圧の圧力で、（Ａ）の式を用いて、１０μｍ直径の小胞の体積を満たすために７．５４ｘ１０^-17 モルの気体前駆体を必要とすることができる。気体前駆体の上の計算量並びに７６．１１の分子量、３２．５℃の沸点及び２０℃で０．７７８９ｇ／ｍＬの密度を有する１−フルオロブタンを用いて、さらに計算すると、１０μｍ小胞には５．７４ｘ１０^-15グラムのこの前駆体を必要とすることができると予測される。さらに推定し、密度が分かると、式（Ｂ）によりさらに、１０μｍの上限を有する小胞を形成するために８．４７ｘ１０^-16 ｍＬの液体前駆体を必要とすることができると予測される。最後に、式（Ｃ）を用いて、１０μｍ小胞の上限を有する気体前駆体封入小胞を製造するために混合物、例えば０．０２７２μｍの半径または０．０５４４μ ｍの対応する直径を有する液滴を含有するエマルションを形成することができる。適切な分粒フィルターの使用によりこの特定の大きさのエマルションを容易に得ることができるはずである。さらに、特定の大きさの気体前駆体液滴を形成するために必要なフィルターの大きさにより分かるように、フィルターの大きさはあらゆる可能な細菌混入物を除くためにも十分であることができ、従って、滅菌濾過としても用いることができる。適切な溶媒系の選択を同様に物理的方法により決定することができる。本明細書において溶質と呼ばれる物質、固体または液体を水に基づくバッファーのような溶媒中に溶解させる場合、溶液の組成により決まる量により凝固点を下げることができる。従って、Ｗａｌｌにより定義されたように、溶媒の凝固点降下を以下の式：Ｉｎｘ_a＝Ｉｎ（１−ｘ_b）＝ΔＨ_fus／Ｒ（１／Ｔ₀−１／Ｔ）式中、ｘ_aは溶媒のモル分率であり；ｘ_bは溶質のモル分率であり； ΔＨ_fusは溶媒の融解の熱であり；そしてＴ₀は溶媒の標準凝固点である、により表すことができる。式を解くことにより溶媒の標準凝固点を得ることができる。ｘ_bがｘ_aに比較して小さい場合、上の式を以下のように書き直すことができる。ｘ^b＝ΔＨ_fus／Ｒ［Ｔ−Ｔ₀／Ｔ₀Ｔ］〜ΔＨ_fusΔＴ／ＲＴ₀ ² 上の式は温度の変化ΔＴがＴ₂に比較して小さいと仮定する。溶質の濃度をモル濃度、ｍ（１０００ｇの溶媒当たりの溶質のモル）に換算して表すことによりこの式をさらに簡略化することができる。従って、式を以下のように書き直すことができる。Ｘ_b＝ｍ／［ｍ＋１０００／ｍ_a］〜ｍＭ_a／１０００ここで、Ｍ_aは溶媒の分子量である。従って、分率ｘ_bに代入すると： ΔＴ＝［Ｍ_aＲＴ₀ ²／１０００ΔＨ_fus］ｍまたは ΔＴ＝Ｋ_fｍ、ここで、Ｋ_f＝Ｍ_aＲＴ₀ ²／１０００ΔＨ_fus Ｋ_fはモル凝固点であり、１大気圧で水のモル濃度の１単位当たり１．８６度に等しい。気体前駆体封入小胞の溶液のモル凝固点を正確に決定するために上の式を用いることができる。従って、凝固点降下を見積もるため及び適切な値まで溶媒の凝固温度を下げるために必要な液体または固体溶質の適切な濃度を決定するために上の式を用いることができる。温度により活性化される気体前駆体封入小胞（及び非小胞調合物）の製造方法は：（ａ）気体前駆体並びに例えば安定化物質、増粘剤及び／または分散剤を初めとする必要な付加物質の水性混合物をボルテックス及び／または振盪すること。この方法の任意の変形は、ボルテックスまたは振盪する前にオートクレーブすること；気体前駆体の水性混合物を加熱すること；混合物／懸濁液を含有する容器をガス抜きすること；振盪するかまたは気体前駆体封入小胞を自然に形成させ、気体前駆体封入小胞の懸濁液を冷却すること；そして約０．２２μｍのフィルターを通して気体前駆体の水性懸濁液を押し出すことを含む。あるいはまた、約０．２２μｍのフィルターを用いるように小胞のインビボ投与中に濾過を実施してもよい；（ｂ）微小乳化、それにより気体前駆体の水性混合物を撹拌で乳化させ、そして加熱して患者への投与前に例えば小胞を形成する；（ｃ）撹拌するかまたはせずに混合物中の気体前駆体を加熱すること、それにより、膨張して容器中の他の小胞を追い出し、そして空気を除くために容器をガス抜きすることで、より密度の低い気体前駆体封入小胞が溶液の最上部に浮かぶことができる；及び（ｄ）上記の方法のいずれかにおいて気体前駆体の水性懸濁液を入れるために密封容器を利用し、そして気体前駆体の相転移温度より下の温度で懸濁液を保ち、続いて、場合により振盪しながら、温度を相転移温度より上に上げるためにオートクレーブするか、または気体前駆体小胞を自然に形成させ、それにより、密封容器中の膨張した気体前駆体が容器中の圧力を上げ、そして気体封入小胞懸濁液を冷却し、その後、振盪を実施してもよいことを含む。振盪注入法の前に水及び有機物質を除くために凍結乾燥は有用であることがある。小胞から水を除くために乾燥注入法を用いることができる。温めた後で気体前駆体を乾燥小胞中に前以て閉じ込めることにより（すなわち、乾燥前に）、気体前駆体は膨張して小胞を満たすことができる。また、気体前駆体を真空に供した後にそれらを用いて乾燥小胞を満たすこともできる。乾燥小胞をそれらのゲル状態から液晶への温度より下の温度で保つ場合、気体状態の気体前駆体で乾燥室をゆっくりと満たすことができる。例えば、４℃（ペルフルオロブタンの沸点）より上の温度で乾燥小胞を満たすためにペルフルオロブタンを用いることができる。上に説明したように、温度活性化気体前駆体封入小胞の好ましい製造方法は、気体前駆体の相転移温度より下の温度で気体前駆体の存在下で脂質化合物を含んでなる水溶液を振盪することを含んでなる。好ましくは、振盪は約３０分、好ましくは約２０分以内、より好ましくは約１０分以内のような短い期間内に泡状物が形成されるために十分な力のものである。振盪は微小乳化、微小流動化、（ボルテックスによるような）回転運動、左右または上下運動を含むことができる。液体状態の気体前駆体の添加の場合、上に記述した振盪法に加えて超音波処理を用いることができる。さらに、異なる型の動きを組み合わせてもよい。上記のように、これらの工程が注入工程の前または組成物内の温度感受性気体前駆体の温度によりもたらされる転化の前に実施される場合、非小胞及び／または小胞組成物をオートクレーブまたは滅菌濾過により滅菌することができる。あるいはまた、安息香酸ナトリウム、第四級アンモニウム塩、アジ化ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン、ソルビン酸、アスコルビルパルミテート、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、クロロブタノール、デヒドロ酢酸、エチレンジアミン、モノチオグリセロール、安息香酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、ソルビン酸カリウム、重亜硫酸ナトリウム、二酸化硫黄及び有機水銀塩のような、１つまたはそれ以上の殺菌剤及び／または防腐剤を組成物の調合に含むことができる。放射線照射によるような他の常法により実施してもよいそのような滅菌は、侵入した状況下、例えば血管内または腹腔内での画像形成のために安定化小胞を用いる場合に必要である可能性がある。本開示に基づくと、滅菌の適切な方法は当業者に明らかである。いったん本開示が与えられると当業者に容易に明らかであるように、非小胞タンパク質組成物ができるように、様々な常法によりアルブミン小胞のようなタンパク質から調合される小胞を含んでなる小胞組成物（タンパク質包膜化微小バブルとも呼ばれる）を製造することができる。適当な方法は、例えば、Ｆｅｉｎｓｔｅｉｎ、米国特許第４，５７２，２０３号、第４，７１８，４３３号及び第４，７７４，９５８号並びにＣｅｒｎｙ等、米国特許第４，９５７，６５６号中に記述されたものを含み、それらの開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。タンパク質に基づく小胞及び非小胞組成物の製造のための上記の特許中に記述される方法の中に含まれるものは、タンパク質の溶液を超音波処理することを含む方法である。好ましい形態として、出発原料は熱変性できる水溶性の生体適合性タンパク質の水溶液であってもよい。包膜化するタンパク質は好ましくは熱感受性であり、それ故、超音波処理中に加熱によりそれをある程度不溶化できる。適当な熱感受性タンパク質は、例えば、アルブミン、ヘモグロビン、コラーゲン等を含む。好ましくは、タンパク質はヒトタンパク質であり、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）がより好ましい。ＨＳＡは滅菌した５％水溶液として市販されており、それはタンパク質に基づく小胞の製造における使用のために適当である。もちろん、当業者に明らかなように、小胞を製造するために他の濃度のアルブミン及び熱で変性できる他のタンパク質を用いることができる。溶液中のＨＳＡの濃度は変わってもよく、重量で約０．１から約２５％まで、並びにその中の範囲の全ての組み合わせ及び準組み合わせであってもよい。タンパク質に基づく小胞の製造のためのある方法と関連して、希薄水溶液の形態のタンパク質を利用することが好ましいことがある。アルブミンでは、重量で約０．５から約７．５％までのアルブミンを含有する水溶液を利用することが好ましい可能性があり、重量で約５％未満、例えば、重量で約０．５から約３％までの濃度が好ましい。市販されている装置を用いてタンパク質に基づく小胞及び非小胞組成物を製造することができる。例えば、Ｃｅｒｎｙ等、米国特許第４，９５７，６５６号中に開示されたような供給製造操作と関連して、ＷａｌｋｅｒＳｔａｉｎｌｅｓｓＥｑｕｉｐｍｅｎｔＣｏ．（ＮｅｗＬｉｓｂｏｎ、ＷＩ）から市販されているステンレス鋼タンク及びＭｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）から市販されている加工フィルターを利用することができる。超音波処理操作は熱交換機及び超音波処理容器を通した流れの両方を連続して利用することができる。この型の熱交換機装置をＩＴＴＳｔａｎｄａｒｄ（Ｂｕｆｆａｌｏ、ＮＹ）から購入することができる。熱交換機は媒質の組成により約６５℃から約８０℃までの範囲の温度制御で、超音波処理工程の操作温度を保つ。超音波処理装置の振動周波数は広い範囲にわたって、例えば、約５から約４０キロヘルツ（ｋＨｚ）まで変わってもよく、大多数の市販されている超音波処理装置は約１０または２０ｋＨｚで作動する。適当な超音波処理装置は、例えば、Ｓｏｎｉｃｓ＆Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，Ｉｎｃ．（Ｄａｎｂｕｒｙ、ＣＴ）から市販されている、平らな先端の超音波処理装置ホーン（ｆｌａｔ−ｔｉｐｐｅｄｓｏｎｉｃａｔｏｒｈｏｒｎ）を備えたＳｏｎｉｃｓ＆ＭａｔｅｒｉａｌｓＶｉｂｒａ−Ｃｅｌｌを含む。Ｓｏｎｉｃｓ＆ＭａｔｅｒｉａｌｓＶｉｂｒａ−ＣｅｌｌモデルＶＬ１５００での場合、超音波処理装置ホーンにかける動力を製造業者により１から１０までの一定基準で決められた動力設定にわたって変えることができる。中間の動力設定、例えば５から９までを用いることができる。与えられる振動周波数及び動力は超音波処理される液体中にキャビテーションを生じるために十分であることが好ましい。供給流速は約５０ｍＬ／分から約１０００ｍＬ／分まで、並びにその中の範囲の全ての組み合わせ及び準組み合わせであってもよい。超音波処理容器中の滞留時間は約１秒から約４分までの範囲であってもよく、そして気体流体添加速度は約１０立方センチメートル（ｃｃ）／分から約１００ｃｃ／分まで、または５％ないし２５％の供給流速、並びにその中の範囲の全ての組み合わせ及び準組み合わせであってもよい。溶液の発泡、特に激しい発泡を生じるように超音波処理を実施することが好ましいことがある。一般的に言えば、激しい発泡及びエーロゾル化は高い濃度及び安定性を有する組成物を得るために重要である。発泡を促進するために、超音波処理装置ホーンへの動力入力を増やしてもよく、そして穏やかな圧力、例えば、約１ないし約５ｐｓｉ下で工程を実施してもよい。溶液の濁った外観により、そして生じた気泡により発泡を容易に検出することができる。また、タンパク質に基づく組成物の適当な製造方法は、タンパク質またはタンパク質誘導体を変性するかまたは固定するために水溶液中のそれらの物質を物理的または化学的に改変することを含んでもよい。例えば、超音波処理による造影剤の形成後または形成中に加熱することにより、タンパク質に基づく小胞をＨＳＡの５％水溶液から製造することができる。化学的改変はグルタルアルデヒド（ｇｌｕｔｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ）のような二官能基アルデヒドでタンパク質を結合することにより化学的に変性または固定することを含むことができる。例えば、ｐＨ４．５でタンパク質のＩｇ当たり０．２５ｇの５０％グルタルアルデヒド水と小胞を６時間反応させることができる。次に、未反応のグルタルアルデヒドをタンパク質から洗浄して除くことができる。いったん本開示が与えられると当業者に容易に明らかなように、非小胞ポリマー組成物ができるように、様々な常法によりポリマーから調合される小胞を含んでなる小胞組成物を製造することができる。代表的な方法は、例えば、界面重合、相分離及び液滴形成、マルチオリフィス遠心調製並びに溶媒蒸発を含む。ポリマーから小胞を製造するために本開示により用いるかまたは改変することができる適当な方法は、Ｇａｒｎｅｒ等、米国特許第４，１７９，５４６号、Ｇａｒｎｅｒ、米国特許第３，９４５，９５６号、Ｃｏｈｒｓ等、米国特許第４，１０８，８０６号、日本公開特許公報６２２８６５３４、英国特許第１，０４４，６８０号、Ｋｅｎａｇａ等、米国特許第３，２９３，１１４号、Ｍｏｒｅｈｏｕｓｅ等、米国特許第３，４０１，４７５号、Ｗａｌｔｅｒｓ、米国特許第３，４７９，８１１号、Ｗａｌｔｅｒｓ等、米国特許第３，４８８，７１４号、Ｍｏｒｅｈｏｕｓｅ等、米国特許第３，６１５，９７２号、Ｂａｋｅｒ等、米国特許第４，５４９，８９２号、Ｓａｎｄｓ等、米国特許第４，５４０，６２９号、Ｓａｎｄｓ等、米国特許第４，４２１，５６２号、Ｓａｎｄｓ、米国特許第４，４２０、４４２号、Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ等、米国特許第４，８９８，７３４号、Ｌｅｎｃｋｉ等、米国特許第４，８２２，５３４号、Ｈｅｒｂｉｇ等、米国特許第３，７３２，１７２号、Ｈｉｍｍｅｌ等、米国特許第３，５９４，３２６号、Ｓｏｍｍｅｒｖｉｌｌｅ等、米国特許第３，０１５，１２８号、Ｄｅａｓｙ、ＭｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎａｎｄＲｅｌａｔｅｄＤｒｕｇＰｒｏｃｅｓｓｅｓ、２０巻、第９及び１０章、ｐｐ．１９５−２４０（ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎ．Ｙ．、１９８４）、Ｃｈａｎｇ等、ＣａｎａｄｉａｎＪ．ｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、４４巻、ｐｐ．１１５−１２９（１９６６）及びＣｈａｎｇ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１４６巻、ｐｐ．５２４−５２５（１９６４）中に開示される方法を含み、それらの各々の開示は全部引用することにより本明細書に取り込まれる。好ましい合成プロトコルに従って、例えば、Ｇａｒｎｅｒ等、米国特許第４，１７９，５４６号、Ｇａｒｎｅｒ、米国特許第３，９４５，９５６号、Ｃｏｈｒｓ等、米国特許第４，１０８，８０６号、英国特許第１，０４４，６８０号及び日本公開特許公報６２２８６５３４中に記述された方法のような熱膨張法を用いて小胞を製造することができる。一般的に言えば、空間（空洞）中に揮発性の液体（気体前駆体）を含有することができる膨張可能なポリマーまたはコポリマーの小胞を製造することにより熱膨張法を実施することができる。次に、小胞を加熱し、小胞を可塑化し、そして揮発性の液体を気体に転化し、小胞をその最初の大きさの約数倍まで膨張させる。熱を取り除くと、熱可塑性ポリマーは少なくともその膨張した形状のいくらかを保持する。この方法により製造される小胞は特に低密度のものである傾向があり、従って好ましい。上記の方法は当該技術分野でよく知られており、低密度小胞を製造するための熱膨張法と呼ぶことができる。熱膨張法に有用なポリマーは当業者に容易に明らかであり、上記のモノマーの多数のポリマーまたはコポリマーを初めとする熱可塑性ポリマーまたはコポリマーを含む。上記のポリマー及びコポリマーの好ましいものは以下のコポリマー：ポリビニリデン−ポリアクリロニトリル、ポリビニリデン−ポリアクリロニトリル−ポリメチルメタクリレート及びポリスチレン−ポリアクリロニトリルを含む。最も好ましいコポリマーはポリビニリデン−ポリアクリロニトリルである。また、熱膨張法に有用な揮発性の液体も当業者によく知られており、エタン、エチレン、プロパン、プロペン、ブタン、イソブタン、ネオペンタン、アセチレン、ヘキサン、ヘプタンのような脂肪族炭化水素；ＣＣｌ₃Ｆ、ＣＣｌ₂Ｆ₃、ＣＣｌＦ₃、ＣＣｌＦ₂−ＣＣｌ₂Ｆ₂、クロロヘプタフルオロシクロブタン及び１，２−ジクロロヘキサフルオロシクロブタンのようなクロロフルオロカーボン；テトラメチルシラン、トリメチルエチルシラン、トリメチルイソプロピルシラン及びトリメチルｎ−プロピルシランのようなテトラアルキルシラン；並びに上記のペルフルオロカーボンを初めとするペルフルオロカーボンを含む。通例、揮発性の液体は利用されるポリマーまたはコポリマーの溶媒ではないことが重要である。また、揮発性の液体が関係するポリマーまたはコポリマーの軟化点より下である沸点を有することも好ましい。様々な揮発性の液体の沸点並びに様々なポリマー及びコポリマーの軟化点を当業者は容易に確かめることができ、そしてポリマーまたはコポリマーと揮発性の液体の適当な組み合わせは当業者に容易に明らかである。手引きとして、そして当業者が認識するように、通例、揮発性の液体の炭素鎖の長さが増すにつれて、その液体の沸点も上がる。また、最終的な加熱及び膨張の前に過酸化水素の存在下で水中の小胞を穏やかに予熱することにより、膨張がより容易に起こるように小胞を前以て軟化することができる。例えば、合成ポリマーから小胞を製造するために、１つまたはそれ以上の上記の改変または未改変の文献方法を用いてイソブタン液体の媒質中でビニリデン及びアクリロニトリルを共重合することができ、その結果、イソブタンが小胞内に閉じ込められるようになる。次に、そのような小胞を約８０℃から約１２０℃までの温度に加熱すると、イソブタン気体が膨張し、それは次に小胞を膨張させる。熱を取り除いた後、膨張したポリビニリデン及びアクリロニトリルコポリマー小胞はそれらの膨張した位置に実質的に固定されたままである。得られた低密度小胞は乾燥及び水性媒質中に懸濁した両方で非常に安定である。本明細書では単に例示的な液体としてイソブタンを利用し、そしてこれらの小胞の合成及び加熱時に非常に低密度の小胞を形成するために有用な温度で液体／気体転移を受ける他の液体でイソブタンを置き換えることができると理解される。同様に、ビニリデン及びアクリロニトリル以外のモノマーを小胞の製造に用いてもよい。ある好ましい態様として、合成ポリマーから調合され、そして本発明の方法に用いることができる小胞は、ＥＸＰＡＮＣＥＬ５５１ＤＥ^TM（商標）微小球を初めとして、Ｅｘｐａｎｃｅｌ，ＮｏｂｅｌＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（Ｓｕｎｄｓｖａｌｌ、Ｓｗｅｄｅｎ）から市販されている。ＥＸＰＡＮＣＥＬ５５１ＤＥ^TM微小球体はビニリデンとアクリロニトリルのコポリマーからなり、その中にイソブタン液体を包膜化している。そのような微小球体は乾燥組成物として販売され、約５０ミクロンの大きさである。ＥＸＰＡＮＣＥＬ５５１ＤＥ^TM 微小球体は水の密度の１／５０ないし１／２０の間である０．０２ないし０．０５のみの比重を有する。安定化化合物と共に生物活性剤及び気体前駆体を組成物中に混和するために、製造工程中に生物活性剤及び気体前駆体を単に添加することにより上記のように組成物を製造することができる。あるいはまた、安定化物質及び気体前駆体からまず組成物を予備成形することができ、次に、生物活性剤を使用前に組成物に添加してもよい。例えば、リポソームと気体前駆体の水性混合物を調製することができ、それに生物活性剤を添加してもよく、そしてそれを撹拌してリポソーム調合物を得る。溶液を加熱し、それにより気体前駆体を気体に転化させ、封入リポソーム小胞を水溶液の最上部に浮かせることによりリポソーム調合物を容易に単離することができる。過剰の生物活性剤を残りの水溶液から回収することができる。また、必要な場合、小胞を多孔性またはそうでなければ液体前駆体及び／または生物活性剤を吸収できるようにしてもよい。もちろん、単に化合物を混合することにより安定剤を含まずに生物活性剤及び気体前駆体の組成物を調合してもよい。いったん本開示が与えられると、本発明の範囲内の組成物の変形の全てのためのこれら及び他の製造技術は当業者に容易に明らかである。当業者が認識するように、脂質、タンパク質、ポリマー等及び／または小胞組成物のいずれも貯蔵のために凍結乾燥することができ、そして強い撹拌を用いて、例えば（滅菌水、リン酸緩衝溶液または食塩水溶液のような）水性媒質で元に戻すことができる。凍結乾燥の結果として脂質が凝集または融合することを防ぐために、そのような融合または凝集が起こるのを防ぐ添加剤を含むことが有用であることがある。有用である可能性がある添加剤はソルビトール、マンニトール、塩化ナトリウム、グルコース、トレハロース、ポリビニルピロリドン及びポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、例えば、約４００から約１０，０００までの分子量を有するＰＥＧポリマーを含み、約１０００、（ＰＥＧ３３５０のような）３０００及び５０００の分子量を有するＰＥＧポリマーが好ましい。これら及び他の添加剤は米国薬局方、ＵＳＰＸＸII、ＮＦＸＶII、ＴｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＰｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ，ＴｈｅＮａｔｉｏｎａｌＦｏｒｍｕｌａｒｙ、ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＰｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌＣｏｎｖｅｎｔｉｏｎＩｎｃ．、１２６０１ＴｗｉｎｂｒｏｏｋＰａｒｋｗａｙ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ２０８５２中のような文献中に記述されており、その開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。通例、凍結乾燥調製物はより長い貯蔵寿命という利点を有する。上記のように、本発明の組成物及び方法は患者の選択した組織、体液、部位等を標的とするために有用である。ターゲッティングは適切な組織、体液または部位に生物活性剤を送達する目的のためであってもよい。生物活性剤は治療用、診断用であってもよく、または診断画像形成を容易にするかまたは向上する薬剤であってもよい。遺伝物質及び薬剤または製薬とも呼ばれる治療薬を本発明の方法を用いて送達することができる。従って、本発明の方法を用いて送達することができる生物活性剤は、例えば、合成有機分子、タンパク質、ペプチド、抗生物質、ホルモン、ビタミン、血管作動性化合物、抗寄生虫薬、抗マラリア薬、抗毒素、抗蛇毒素血清、抗凝血薬、神経筋遮断薬、循環薬、局部及び全身麻酔薬、抗血栓症薬、化学療法薬、生物活性ペプチド、遺伝子及びアンチセンス遺伝物質を含む。本発明の方法により送達することができる製薬の特定の例は：ビンカアルカロイドのような有糸分裂阻害剤、放射性ヨウ素、リン及びコバルト同位体のような放射性医薬品：プロゲスチン、エストロゲン及び抗エストロゲンのようなホルモン；抗寄生虫薬、抗マラリア薬及び抗結核薬；免疫血清、抗毒素及び抗蛇毒素血清のような生物学的製剤；狂犬病予防製品；細菌ワクチン；ウイルスワクチン；アミノグリコシド；キサンチン誘導体、テオフィリン及びアミノフィリンのような呼吸器製品；ヨウ素塩及び抗甲状腺薬のような甲状腺治療薬；キレート化薬及び水銀利尿薬及び強心配糖体を初めとする心臓血管製品：グルカゴン；非経口鉄、ヘミン、ヘマトポルフィリン及びそれらの誘導体のような血液製品；ペプチド、抗体及び抗体フラグメントのようなターゲッティングリガンド；ムラミルジペプチド、ムラミルトリペプチド、微生物細胞壁成分、リンホカインのような生物学的反応調節剤（例えば、リポ多糖のような細菌内毒素及びマクロファージ活性化因子）；（マイコバクテリア及びコルネバクテリアのような）細菌のサブユニット；合成ジペプチドＮ− アセチル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン；ケトコナゾール、ニスタチン、グリセオフルビン、フルシトシン（５−ｆｃ）、ミコナゾール及びアムホテリシンＢのような抗真菌薬；リシンのような毒素；サイクロスポリンのような免疫抑制剤；並びにβ−ラクタム及びスルファゼシンのような抗生物質；成長ホルモン、メラニン細胞刺激ホルモン、エストラジオール、ベクロメタゾンジプロピオネート、ベタメタゾン、ベタメタゾンアセテート、ベタメタゾンリン酸ナトリウム、ベタメタゾンリン酸二ナトリウム、ベタメタゾンリン酸ナトリウム、コルチゾンアセテート、デキサメタゾン、デキサメタゾンアセテート、デキサメタゾンリン酸ナトリウム、フルニソリド、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンアセテート、ヒドロコルチゾンシピオネート（ｃｙｐｉｏｎａｔｅ）、ヒドロコルチゾンリン酸ナトリウム、ヒドロコルチゾンコハク酸ナトリウム、メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロンアセテート、メチルプレドニゾロンコハク酸ナトリウム、パラメタゾンアセテート、プレドニゾロン、プレドニゾロンアセテート、プレドニゾロンリン酸ナトリウム、プレドニゾロンテブテート（ｔｅｂｕｔａｔｅ）、プレドニゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンジアセテート、トリアムシノロンヘキサアセトニド、フルドロコルチゾンアセテート、オキシトシン及びバソプレシン並びにそれらの誘導体のようなホルモン；シアノコバラミンネイオニックアシッド（ｎｅｉｏｎｉｃａｃｉｄ）のようなビタミン；レチノールパルミテート及びα−トコフェロールのようなレチノイド及び誘導体；マンガンスーパーオキシドジスムターゼ及びアルカリホスファターゼのようなペプチド及び酵素；アメレキサノクス（ａｍｅｌｅｘａｎｏｘ）のような抗アレルゲン；フェンプロクモン及びヘパリンのような抗凝血薬；組織プラスミノゲンアクチベーター（ＴＰＡ）、ストレプトキナーゼ及びウロキナーゼ；プロプラノロールのような循環薬；グルタチオンのような代謝強化物質；ｐ−アミノサリチル酸、イソニアジド、カプレオマイシン硫酸シクロセリン、エタンブトール塩酸塩エチオナミド、ピラジナミド、リファンピン、ストレプトマイシン硫酸ダプソン、クロラムフェニコール、ネオマイシン、セフラコア（ｃｅｆｌａｃｏｒ）、セファドロキシル、セファレキシン、セファドリンエリトロマイシン、クリンダマイシン、リンコマイシン、アモキシシリン、アンピシリン、バカンピシリン、カルベニシリン、ジクロキシシリン、シクラシリン、ピクロキシシリン、ヘタシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリン（Ｇ及びＶ）、チカルシリンリファンピン及びテトラサイクリンのような抗生物質；アシクロビル、ＤＤＩ、フォスカルネット（Ｆｏｓｃａｒｎｅｔ）、ジドブジン、リバビリン及びビダラビン１水和物のような抗ウイルス薬；ジリアゼム、ニフェジピン、ベラパミル、エリトリトール四硝酸塩、二硝酸イソソルビド、ニトログリセリン（三硝酸グリセリル）及び三硝酸ペンタエリトリトールのような抗狭心症薬；ジフルイサル、イブプロフィン、インドメタシン、メクロフェナメート、メフェナム酸、ナプロキセン、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチン、アスピリン及びサリチレートのような抗炎症薬；クロラキン（ｃｈｌｏｒａｑｕｉｎｅ）、ヒドロキシクロラキン、メトラニダゾール、キニン及びメグルミンアンチモネートのような抗原虫薬；ペニシラミンのような抗リウマチ薬；鎮痛剤のような麻薬；コデイン、ヘロイン、メタドン、モルヒネ及びアヘンのような鎮静剤；デスラノシド、ジギトキシン、ジゴキシン、ジギタリン及びジギタリスのような強心配糖体；アトラクリウムネシレート、ガラミントリェチオジド、ヘキサフロレニウムブロミド、メトロクリンヨージド、パンクリウムブロミド、スクシニルコリンクロリド（スキサメトニウムクロリド）、ツボクラリンクロリド及びベクロニウムブロミドのような神経筋遮断薬；アモルバリタール、アモバルビタールナトリウム、アプロバルビタール、ブタバルビタールナトリウム、クロラール水和物、エトクロルビノール、エチナメート、フルラゼパム塩酸塩、グルテチミド、メトトリメプラジン塩酸塩、メチプリロン、ミダゾラム塩酸塩、パラアルデヒド、ペントバルビタール、ペントバルビタールナトリウム、セコバルビタールナトリウム、ツルブタール、テマゼパム及びトリゾラムのような鎮静剤；ブピバカイン塩酸塩、クロロプロカイン塩酸塩、エチドカイン塩酸塩、リドカイン塩酸塩、メピバカイン塩酸塩、プロカイン塩酸塩及びテトラカイン塩酸塩のような局部麻酔薬；ドロペリドール、エタミン塩酸塩、メトヘキシタールナトリウム及びチオペンタールナトリウムのような全身麻酔薬；メトトレキセート、フルオロウラシル、アドリアマイシン、マイトマイシン、アンサマイトマイシン、ブレオマイシン、システインアラビノシド、アラビノシルアデニン、メルカプトポリリシン、ビンクリスチン、ブスルファン、クロラムブシル、アジドチミジン、メルファラン（例えば、ＰＡＭ、Ｌ−ＰＡＭまたはフェニルアラニンマスタード）、メルカプトプリン、ミトテン、プロカルバジン塩酸塩ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダノルビシン塩酸塩、ドソルビシン塩酸塩、タキソール、プリカマイシン（ミトラマイシン）、アミノグルテチミド、エストラムスチンリン酸ナトリウム、フルタミド、ロイプロリドアセテート、ロイプロリドアセテート、メゲストロールアセテート、タモキシフェンシトレート、テストラクトン、トリロスタン、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）、アスパラギナーゼ、エトポシド（ＶＰ−１６）、インターフェロンα− ２ａ、インターフェロンα−２ｂ、テニポシド（ＶＭ−２６）、ビンブラスチン硫酸塩（ＶＬＢ）、ビンクリスチン硫酸塩、ヒドロキシ尿素、プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｘｉｎｅ）及びダカルバジンのような抗腫瘍薬を含むがそれらに限定されない。診断薬は超音波画像形成、磁気共鳴画像形成、コンピューター断層撮影等において用いられる多数の造影剤のいずれかのような、診断画像形成を容易にするかまたは向上することに有用な多種多様な薬剤の全てを含む。また、診断薬は画像形成方法論を用いても用いなくても、患者の疾病または他の状態の診断を容易にすることに有用なあらゆる他の薬剤も含むことができる。そのような薬剤は当業者によく知られている。本発明を実施するために、気体前駆体を含有する、脂質、タンパク質もしくはポリマー組成物または小胞中に１つまたはそれ以上の生物活性剤を混和することができる。上記のように、生物活性剤が気体前駆体に可溶性である場合、気体前駆体及び生物活性剤を撹拌し、次に、押し出して適当に分粒された気体前駆体／生物活性剤液滴を調製することによりそれを容易に混和することができる。例えば、超音波処理、ボルテックス、微小流動化または振盪のような常法により撹拌を成し遂げることができる。ある部位または組織に送達される生物活性剤は気体前駆体に可溶性であることが好ましい。しかしながら、生物活性剤が気体前駆体に不溶性である場合、気体前駆体中の可溶性を上げるために生物活性剤を誘導化することができる。誘導化された治療薬を例えば油または他の生体適合性の非極性溶媒に溶解することができる。送達時に生物活性剤の活性に不都合に作用しない誘導化のあらゆる方法が適当であることを当業者は理解する。あるいはまた、安定化及び／または壁形成物質の所でまたはその近くで安定されるようになる誘導体を形成するように生物活性剤を誘導化することができる。気体前駆体に可溶性ではなく且つ誘導化されていない生物活性剤を本発明の方法に用いることができる。例えば、気体前駆体に不溶性であるある種の生物活性剤は結晶を形成することができ、それは安定化及び／または壁形成物質と会合するようになることができる。それらの結晶を乳化して気体前駆体内のそれらの分散を高めることができる。また、ある種の生物活性剤は安定化物質との親和性も生じる。これらの生物活性剤は気体前駆体封入液滴の壁または表面と会合するようになることができる。例えば、ＤＮＡは陽イオン脂質または陽イオンポリマーと会合するようになることができる。体の適切な組織または部位への生物活性剤の送達は、局部温度が気体前駆体の相転移温度またはそれより上である場合に活性化される。気体前駆体を含有する小胞または非小胞組成物または調合物が患者の体を通って循環する場合、それは血管系により組織を通過する。気体前駆体の相転移温度である組織または部位を気体前駆体が通過すると、それは気体状態への転移を受ける。操作のいかなる特定の理論により拘束されることを意図するものではないが、相転移中の気体前駆体の膨張により生物活性剤は小胞または非小胞組成物から押し出され、それは患者の適切な部位に落ち着くことができると考えられる。本発明の好ましい態様として、単に、組織または部位内の疾病、感染、炎症等と関係する組織または部位における温度の上昇により生物活性剤の送達は成し遂げられる。好ましくは、疾病、感染、炎症等により、正常体温に比較した場合に高い温度である可能性がある、体の適切な組織または部位で気体前駆体は気体を形成する。しかしながら、必要な場合、患者の部位または組織内の温度を上げるために外部熱（すなわち、部位の高い生理的温度以外の起源からの熱）を用いてもよい。例えば、マイクロ波、高周波、超音波及び熱の他の局部利用のような当該技術分野で知られているあらゆる手段により外部熱をかけることができる。例えば、水浴またはブランケットにより熱の局部利用を成し遂げることができる。振動磁場または超音波エネルギーの利用と組み合わせて、隙間プローブ（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｐｒｏｂｅ）の移植またはカテーテルの挿入により体の適切な組織または部位における温度上昇を実施することができる。超音波エネルギーを用いる場合、超音波エネルギーは気体前駆体及び／または安定化物質と相互作用することもでき、気体への気体前駆体の転化及び／または生物活性剤の放出を促進することができる。当業者に明らかなように、気体前駆体及び安定化物質との相互作用を容易にするために、用いる超音波エネルギーを律動的に送ったり、取り除いたりまたは変えることができる。気体が形成される場合に気体前駆体を視覚化するため及び目的の組織または部位を視覚化するために診断用超音波を用いることができる。当業者が認識するように、本明細書に記述される脂質及び／または小胞組成物の投与を非経口的、経口的または腹腔内を初めとする様々な方法で実施することができる。非経口投与が好ましく、以下の経路：静脈内；筋肉内；間質；動脈内；皮下；眼内；滑液内；経皮的を初めとする経上皮的；吸入による肺；眼；舌下及び頬；眼を初めとして局所的；皮膚；眼；直腸；吹き入れによる鼻吸入による投与を含む。非経口投与の経路の中で静脈内投与が好ましい。投与される有用な投与量及び特定の投与形態は年齢、体重及び特定の哺乳類及び走査されるその部位、並びに用いられる特定の造影剤により変わる。典型的には、投与量を低い方のレベルで開始し、適切な対比強化が得られるまで増やす。粘度、浸透圧モル濃度または風味よさを初めとする、特性を適切なように改変するために脂質組成物の様々な組み合わせを用いることができる。画像形成を含む本発明の態様を実施する際に、生物活性剤を単独でまたは診断薬、治療薬もしくは他の薬剤と組み合わせて用いることができる。そのような他の薬剤は香料または着色物質のような賦形剤を含む。超音波画像形成、磁気共鳴画像形成及びコンピューター断層撮影のような診断用途の場合、標的組織の画像を形成するために超音波エネルギー（超音波画像形成の場合）のようなエネルギーを患者の少なくとも一部に用いることができる。次に、患者の内部部位の目に見える画像または他の有用なデータ読みだしもしくは画像を得ることができ、その結果、罹病組織の有無を確かめることができる。超音波に関して、二次調波画像形成（ｓｅｃｏｎｄｈａｒｍｏｎｉｃｉｍａｇｉｎｇ）及びゲーテッド画像形成（ｇａｔｅｄｉｍａｇｉｎｇ）を含むがそれらに限定されない超音波画像形成技術は当該技術分野でよく知られており、例えば、Ｕｈｌｅｎｄｏｒｆ、「ＰｈｙｓｉｃｓｏｆＵｌｔｒａｓｏｕｎｄＣｏｎｔｒａｓｔＩｍａｇｉｎｇ：ＳｃａｔｔｅｒｉｎｇｉｎｔｈｅＬｉｎｅａｒＲａｎｇｅ」、ＩＥＥＥＴｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓｏｎＵｌｔｒａｓｏｎｉｃｓ，Ｆｅｒｒｏｅｌｅｃｔｒｉｃｓ，ａｎｄＦｒｅｑｕｅｎｃｙＣｏｎｔｒｏｌ、１４（１）巻、ｐｐ．７０−７９（１９９４）及びＳｕｎｔｈｅｒｌａｎｄ等、「ＣｏｌｏｒＤｏｐｐｌｅｒＭｙｏｃａｒｄｉａｌＩｍａｇｉｎｇ：ＡＮｅｗＴｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｔｈｅＡｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆＭｙｏｃａｒｄｉａｌＦｕｎｃｔｉｏｎ」、ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＳｏｃｉｅｔｙｏｆＥｃｈｏｃａｒｄｉｏｇｒａｐｈｙ、７（５）巻、ｐｐ．４４１− ４５８（１９９４）中に記述されており、それらの開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。用いることができるコンピューター断層撮影は一般的であり、例えば、ＣｏｕｍｐｕｔｅｄＢｏｄｙＴｏｍｏｇｒａｐｈｙ、Ｌｅｅ、Ｊ．Ｋ．Ｔ．、Ｓａｇｅｌ、Ｓ．Ｓ．及びＳｔａｎｌｅｙ、Ｒ．Ｊ．、編集、１９８３、ＲａｖｅｎｓＰｒｅｓｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、特に、「ＰｈｙｓｉｃａｌＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ」、Ｔｅｒ−Ｐｏｇｏｓｓｉａｎ、Ｍ．Ｍ．及び「Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ａｒｏｎｂｅｒｇ、Ｄ．Ｊ．という表題のその最初の２章中に記述されており、それらの開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。磁気共鳴画像形成技術は、例えば、Ｄ．Ｍ．Ｋｅａｎ及びＭ．Ａ．Ｓｍｉｔｈ、ＭａｇｎｅｔｉｃＲｅｓｏｎａｎｃｅＩｍａｇｉｎｇ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、（ＷｉｌｌｉａｍａｎｄＷｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，１９８６）中に記述されており、その開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。意図される磁気共鳴画像形成技術は核磁気共鳴画像形成及び電子スピン共鳴を含むがそれらに限定されない。これら及び他の診断画像形成技術は当業者によく知られている。診断及び治療の両方の目的のために超音波を用いることができる。診断用超音波では、超音波波動または超音波の一続きのパルスを変換器でかけることができる。必要な場合、超音波は連続的であってもよいが、通例、連続的よりむしろ律動的に送る。従って、診断用超音波は、通例、エコーのパルスの利用を含み、その後、聴音期間中に超音波変換器が反響シグナルを受け取る。調波、超調波または分数調波を用いることができる。二次調波形態を有益に用いることができ、その場合、２ｘ周波数を受け取ることができ、ここで、ｘは入射周波数である。これはバックグラウンド物質からのシグナルを減らし、そして適切な部位を標的とすることができる本発明の標的造影剤を用いて変換器からのシグナルを増大するように働くことができる。この方法を用いて奇数調波調波シグナル、例えば、３ｘまたは５ｘのような他の調波シグナルを同様に受け取ることができる。また、分数調波シグナル、例えば、ｘ／２及びｘ／３を受け取り、画像を生じるように処理してもよい。パルス法に加えて、連続波超音波、例えば、パワー・ドップラー（ＰｏｗｅｒＤｏｐｐｌｅｒ）を用いることができる。これは硬質小胞、例えば、ポリメチルメタクリレートまたはシアノメタクリレートから調合される小胞を用いる場合に特に有用であることがある。この場合、小胞を共鳴させるためにパワー・ドップラーの比較的高い方のエネルギーを作ることができ、それによりそれらの破裂を促進する。これは分数調波もしくは超調波範囲またはある場合には用いた超音波と同じ周波数であってもよい音響放出を生み出すことができる。この工程では放出される様々な音響シグネチャーがある可能性があり、そのように用いられる変換器は音響放出を受け取って、例えば、クロットの存在を検出することができると考えられる。さらに、小胞破裂の工程を用いて例えばクロットの表面に運動エネルギーを移してクロット溶解を促進することができる。従って、診断用及び治療用超音波の組み合わせ中に治療的血栓溶解を成し遂げることができる。また、スペクトラル・ドップラー（ＳｐｅｃｔｒａｌＤｏｐｐｌｅｒ）を用いてもよい。通例、診断用超音波からのエネルギーのレベルは小胞の破裂を促進するため並びに生物活性剤の放出及び細胞取り込みを容易にするためには不十分である。上記のように、診断用超音波は１つまたはそれ以上のパルスの音の利用を含むことができる。パルス間の中断により反響音シグナルを受け取り分析することができる。診断用超音波に用いられる限られた数のパルスは調べられている組織に送達される有効なエネルギーを制限する。より高エネルギー超音波、例えば、治療用超音波装置により作製される超音波は、通例、小胞種の破裂を引き起こすことができる。通例、治療用超音波の装置は、超音波で処置される組織の部分により、約１０から約１００％までの使用周期を用いる。一般に多量の筋肉塊を特徴とする体の部分、例えば、背部及び大腿部、並びに心臓組織のような非常に血管を発達させた組織はより大きい使用周期、例えば約１００％までを必要とする可能性がある。小胞が正常体温で完全なままであり、そして高い温度でのみ破裂することが所望される場合、より高いエネルギー超音波の使用は好ましくない。脂質から調合される小胞組成物の場合、適切な安定化小胞レベルを生じるために必要な脂質の濃度は用いる脂質の型により変わる可能性があり、通常の実験によりそれを容易に決定することができる。例えば、好ましい態様として、本発明の方法により安定化小胞を形成するために用いられる１，２− ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）の濃度は約０．１ｍｇ／ｍＬから約３０ｍｇ／ｍＬ食塩水溶液まで、より好ましくは約０．５ｍｇ／ｍＬから約２０ｍｇ／ｍＬ食塩水溶液まで、さらにより好ましくは約１ｍｇ／ｍＬから約１０ｍｇ／ｍＬ食塩水溶液までであってもよい。好ましい態様に用いられるジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）の濃度は約０．１ｍｇ／ｍＬから約３０ｍｇ／ｍＬ食塩水溶液まで、より好ましくは約０．５ｍｇ／ｍＬから約２０ｍｇ／ｍＬ食塩水溶液まで、さらにより好ましくは約１ｍｇ／ｍＬから約１０ｍｇ／ｍＬ食塩水溶液までであってもよい。患者に投与される組成物の量は変わってもよい。典型的には、静脈内投与量は７０Ｋｇの患者に対して約１０ｍＬ未満であってよく、より低い投与量が好ましい。上記のように、様々な剤形を用いて、本明細書に記述される組成物の投与を血管内、経口的、直腸に等のような様々な方法で実施することができる。画像形成を含む本発明の態様として、適切な画像形成技術により目的の組織または部位を走査することができる。走査される部位が心臓血管部位である場合、好ましくは造影剤の投与を血管内に実施する。走査される部位が胃腸部位である場合、好ましくは造影剤の投与を経口的または直腸に実施する。投与される有用な投与量及び特定の投与形態は年齢、体重及び特定の哺乳類及び標的とされるその部位、並びに送達される特定の生物活性剤により変わる。典型的には、投与量を低い方のレベルで開始し、適切な対比強化が得られるまで増やすことができる。媒質の緩和作用を改変するため及び粘度、浸透圧モル濃度または（経口的に投与される物質の場合）風味よさのような特性を変えるために非小胞及び小胞組成物の様々な組み合わせを用いることができる。本発明のある好ましい態様に従って、気体前駆体を含んでなる脂質、タンパク質、ポリマー等及び／または小胞組成物が投与される割合を以下のように決定し、調節することができる。例えば、患者の体重１キログラム（Ｋｇ）当たり約１０マイクロリットル（１０μＬ）の組成物（１０μＬ／Ｋｇ）の投与量で患者に組成物を投与することができる。ある好ましい態様として、組成物は患者の体重１キログラム（Ｋｇ）当たり約１ｘ１０^-4から約５ｘ１０³立方センチメートル（ｃｃ）の範囲並びにその中の範囲の全ての組み合わせ及び準組み合わせの気体の投与量を与える濃度で気体前駆体を含有することができる。この気体投与量を用いて、本明細書において「気体投与率」と呼ばれる、患者への気体の投与率を得ることができる。組成物をある期間にわたって投与することができ、それは変わることができ、そして例えば、投与される組成物の体積、患者の年齢及び体重、例えば脂質、ポリマー、タンパク質、小胞、気体及び／または気体前駆体を初めとする組成物中に用いられる特定の物質、投与の目的（例えば、診断用または治療用）、目的の部位、投与の形態、小胞の大きさ（小胞組成物の場合）等を初めとする様々な因子により決まるる。上記の組成物の代表的投与時間は約５秒である。気体投与量をこの期間で割ることによりｃｃ気体／Ｋｇ-秒として表すことができる気体投与率が得られる。従って、例えば、約１ｘ１０^-4ｃｃ気体／Ｋｇの気体投与量及び５秒の投与時間から約２ｘ１０^-5ｃｃ気体／Ｋｇ-秒の気体投与率が得られる。あるいはまた、持続注入を用いることができる。上記の特定の気体濃度、組成物投与量、投与時間及び投与率は例示の目的のためだけであり、限定のためではないことが理解される。本発明の好ましい態様に関連して、約１ｘ１０^-7から約３ｘ１０^-3ｃｃ気体/ Ｋｇ-秒まで、並びに例えば約４ｘ１０^-7、８ｘ１０^-7、１ｘ１０^-6、２ｘ１０^- ⁶ または約３ｘ１０^-6から約３Ｘ１０^-3ｃｃ気体/Ｋｇ-秒までを初めとするその中の範囲の全ての組み合わせ及び準組み合わせである気体投与率を与えるように脂質、タンパク質、ポリマー等及び／または小胞組成物を患者に投与することができる。より好ましくは、約４ｘ１０^-6から約２ｘ１０^-3ｃｃ気体/Ｋｇ-秒までの気体投与率を与えるように脂質、タンパク質、ポリマー及び／または小胞組成物を投与することができ、約５ｘ１０^-6、６ｘ１０^-6、７ｘ１０^-6または８ｘ１０^-6から約２ｘ１０^-3ｃｃ気体/Ｋｇ-秒までの気体投与率がさらにより好ましい。なおより好ましくは、約９ｘ１０^-6または１ｘ１０^-5から約１ｘ１０^-3ｃｃ気体/Ｋｇ-秒までの気体投与率を与えるように脂質、タンパク質、ポリマー及び／または小胞組成物を投与することができ、約２ｘ１０^-5、３ｘ１０^-5、４ｘ１０^-5 または５ｘ１０^-5から約１ｘ１０^-3ｃｃ気体/Ｋｇ-秒までの気体投与率がさらにより好ましい。さらにより好ましくは、約６ｘ１０^-5、７ｘ１０^-5、８ｘ１０^-5 または９ｘ１０^-5から約１ｘ１０^-3ｃｃ気体/Ｋｇ-秒未満までの気体投与率で脂質、タンパク質、ポリマー及び／または小胞組成物を患者に投与することができ、約１ｘ１０^-4から約９ｘ１０^-4ｃｃ気体/Ｋｇ-秒までの気体投与率がさらになおより好ましい。本明細書に記述される組成物中に混和される気体前駆体は、高い温度である組織または部位において、投与後に（すなわち、インビボで）気体に転化される例えば液体または固体であってもよい。いったん本開示が与えられると、当業者に明らかなように、気体前駆体の濃度を組成物に用いることができ、そして気体前駆体を含有する組成物の投与率を用いることができ、それらは気体への気体前駆体の転化時に上記の気体投与率を与える。上記のように、小胞組成物は本発明の方法に用いられる組成物の好ましい形態である。また、上記のように、小胞組成物中の小胞の濃度は好ましくは小胞組成物１ｍＬ当たり少なくとも約１．５ｘ１０⁸小胞（小胞／ｍＬ）、より好ましくは少なくとも約１ｘ１０⁹小胞／ｍＬ、さらにより好ましくは少なくとも約１．５ｘ１０⁹小胞／ｍＬである。この小胞濃度を用いて、本明細書において「小胞投与率」と呼ばれる、患者への小胞の投与率を得ることができる。これに関連して、例えば、患者の体重の１キログラム（Ｋｇ）当たり約１０マイクロリットル（μＬ）の小胞組成物（１０μＬ／Ｋｇ）の投与量で小胞組成物を患者に投与することができる。小胞濃度（小胞／ｍＬ）と小胞組成物の投与量（μＬ／Ｋｇ）の積は小胞／Ｋｇとして表すことができる小胞投与量を与える。従って、上記の非常に好ましい小胞濃度（１．５ｘ１０⁹小胞／ｍＬ）及び小胞組成物投与量（１０μＬ／Ｋｇ）から約１．５ｘ１０⁷小胞／Ｋｇの小胞投与量が得られる。通例、小胞組成物はある期間にわたって投与され、それは変わる可能性があり、そして例えば、投与される小胞組成物の体積、患者の体重、組成物中に用いられる特定の脂質、ポリマー、タンパク質、小胞、気体または気体前駆体、投与の目的（例えば、診断用または治療用）、目的の部位、投与の形態、小胞の大きさ等を初めとする様々な因子により決まる。小胞組成物の代表的な投与時間は約５秒である。小胞投与量をこの期間で割ることにより小胞／Ｋｇ-秒として表すことができる投与率が得られる。従って、上記の小胞投与量（１．５ｘ１０⁷小胞／Ｋｇ）及び投与時間（５秒）から約３ｘ１０⁶小胞／Ｋｇ-秒の小胞投与率が得られる。好ましい投与形態は注入による。上記の特定の小胞濃度、組成物投与量、投与時間及び投与率は例示の目的のためだけであり、限定のためではないことが理解される。本発明の画像形成用途のために、別個に添加された診断用生物活性剤を必ずしも気体前駆体及び／または安定化物質と共に用いる必要はない。実際、多数の用途（例えば、超音波）において、高い温度の部位での気体への気体前駆体の転化は、それ自体がその部位の視覚化を可能にし、そして／または容易にし、その部位またはその部位のあらゆる罹病組織の目に見える画像及び／もしくは強化された目に見える画像、または他の有用なデータ読み出しもしくは画像をもたらす。もちろん、必要な場合、付加診断用生物活性剤を用いてもよい。付加診断薬として有用な適当な造影剤は当業者に容易に明らかである。以下の実施例は本発明の実例であり、決して本発明の範囲を限定すると考えられるべきではない。実施例１、３−５、９、１１、１２及び１７は実際の実施例であり、一方、実施例２、６−８、１０、１３−１６、１８及び１９は予測である。実施例に用いた全ての脂質はＡｖａｎｔｉＰｏｌａｒＬｉｐｉｄｓ、Ａｌａｂａｓｔｅｒ、Ａｌａｂａｍａから購入した。実施例実施例１２ミリリットル（ｍｌ）のペルフルオロヘキサン（ＰＣＲ，Ｉｎｃ．、Ｇａｉｎｅｓｖｉｌｌｅ、ＦＬ）を１ミリグラム（ｍｇ）のデキサメタゾン−２１アセテート（ＳｉｇｍａｎＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）と混合した。５の動力レベル設定でＨｅａｔＳｙｓｔｅｍｓ（Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ、ＮＹ）ＰｒｏｂｅＳｏｎｉｃａｔｏｒを用いて混合物を超音波処理した。デキサメタゾンがペルフルオロヘキサン内に沈殿して小さい微小結晶を生じることが認められた。混合物を３７℃の水浴内に置いた。ペルフルオロヘキサンは気化せず、超音波でいかなる音響変化も見られなかった。実施例２８２モルパーセントのジパルミトイルホスファチジルコリン、８モルパーセントのジパルミトイルホスファチジン酸及び１０モルパーセントのジパルミトイルホルファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ５０００からなる脂質ブレンドをデキサメタゾン−２１アセテートとメタノール中で合わせて、メタノール中１ｍＬ当たり１０ｍｇの脂質及び１ｍＬ当たり１０ｍｇのデキサメタゾンの濃度を生ぜしめる。それらの物質を完全に混合し、次に濃縮乾固し、凍結乾燥する。滅菌し、濾過した脱イオン水中にデキサメタゾンを含む脂質ブレンドを再懸濁し、次に、完全に混合した後、再び凍結乾燥する。得られた脂質ブレンドを次に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で正常食塩水中に懸濁する。次に、より大きい小胞を除くために１０００ｐｓｉ窒素下で物質を押出機（ＬｉｐｅｘＢｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、Ｂ．Ｃ．Ｃａｎａｄａ）に通す。２マイクロメートル（μｍ）フィルター、次に０．４μｍフィルターに５回物質を通す。次に、濾過した物質を準弾性光散乱装置（ＰａｒｔｉｃｌｅＳｉｚｉｎｇＳｙｔｅｍｓ、ＳａｎｔａＢａｒｂａｒａ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）により分粒する。粒子の平均直径は約２００−５００ナノメートルである。実施例３ジパルミトイルエチルホスホコリン（ＤＰＥＰＣ）をジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）と１：１のモル比で混合した。脂質を滅菌脱イオン水中で混合し、次に混合物を凍結乾燥した。脂質を１．０ｍｇ／ｍｌの濃度で再び滅菌脱イオン水中に再懸濁し、次に、１０μｌ／ｍＬの濃度でペルフルオロヘキサンと混合した。次に、実施例２において記述したように物質を押し出した。トランスフェクションを実施するために、カリフラワーモザイクウイルスプロモーター（ＣＭＶ）（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を有するＤＮＡ（クロラムフェニコールトランスアセチラーゼ遺伝子（ＣＡＴ）、Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を１．０ｍｇ／ｍＬの濃度で脂質粒子と混合し、ＨｅＬａ細胞に用いた。発現されたクロラムフェニコールトランスアセチラーゼのタンパク質アッセイによりＣＭＶの濃度を測定した。結果を以下に要約する。濃度はナノグラム／ｍＬ単位で表される。サンプルＣＭＶ濃度（標準偏差）ＨｅＬａ細胞（コントロール） −３８．１４７（７．７８）ＤＰＥＰＣ／ＤＯＰＥ６６５．８６（９７．１２）ＤＰＥＰＣ／ＤＯＰＥ／ペルフルオロヘキサン１４２４．０４３（５６．４７）示されるように、ＤＰＥＰＣ／ＤＯＰＥ／ペルフルオロヘキサンはペルフルオロヘキサンを含まない脂質と比較した場合に効率の割合を二倍より大きくした。実施例４ペルフルオロヘキサンを１−ブロモペルフルオロブタンで置き換えたことを除いて、実施例１の方法を繰り返した。混合物を超音波処理して小粒子を形成した。光学顕微鏡観察（５００Ｘ倍率）下で、デキサメタゾン−２１の結晶集合体が見られた。実施例５実施例２において記述した脂質ブレンド５ｍＬと５０マイクロリットル（μｌ）の１−ブロモペルフルオロブタンを混合し、エタノール中１−ブロモペルフルオロブタンの１．０％（Ｖ／Ｖ）の濃度の懸濁液を生ぜしめた。混合物をＷｉｇ −Ｌ−Ｂｕｇ（ＣｒｅｓｃｅｎｔＤｅｎｔａｌ、Ｌｙｏｎｓ、ＩＬ）で振盪し、次に、押し出し装置（ＬｉｐｅｘＢｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、Ｂ．Ｃ．、Ｃａｎａｄａ）により押し出した。振盪及び押し出し中、氷水浴中に浸すことにより混合物を約０−５℃の温度で保った。９９．５ｎｍ及び９０６．４ｎｍの最大値で並数大きさ分布を有する粒子の分散液が形成された。持続超音波走査下で、通常の診断用超音波に用いられる動力の約１０パーセントの動力レベルにより１．０ｄｂ音響散乱反応が得られた。図３に１−ブロモナノフルオロブタンの音響活性を示す。実施例６（ｄ−ラクチド及びＬ−ラクチドのモノマー単位から調製した）ポリ−ｄ−Ｌ −ラクチドのコポリマーを１０ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度でジエチルエーテルに溶解する。コポリマージエチルエーテル混合物にペルフルオロヘキサンを添加して２ｍｇ／ｍＬのペルフルオロヘキサン濃度を生ぜしめる。混合物を氷水浴中に保ち、約５分間の超音波処理により強く撹拌する。次に、１の割合のエーテル毎に約１０の割合の水を生ぜしめるように水を添加する。次に、混合物をＷｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇ中で振盪し、水中油中油型エマルションに等しい水中エーテル中ペルフルオロヘキサンエマルションを生じる。温度を２５℃から３０℃まで徐々に上げ、エーテル相の蒸発をもたらす。ポリ−ｄ−Ｌ−ラクチドコポリマーがペルフルオロヘキサンの表面上に沈殿し、ポリ−ｄ−Ｌ−ラクチドのポリマー外殻で被覆されたペルフルオロヘキサン微小球体の懸濁液をもたらす。実施例７デキサメタゾンをペルフルオロヘキサン中で結晶化させ、そして実施例６におけるようにポリ−ｄ−Ｌ−ラクチドコポリマーをジエチルエーテルに溶解する。次に、コポリマージエチルエーテル混合物にデキサメタゾンペルフルオロヘキサン混合物を添加して１．０ｍｇ／ｍＬのペルフルオロヘキサン濃度を生ぜしめる。エーテル相の蒸発はペルフルオロヘキサンの表面上のポリ−ｄ−Ｌ−ラクチドコポリマーの沈殿及びペルフルオロヘキサン内に含まれるナノメートル直径範囲のデキサメタゾン結晶（ナノ結晶）をもたらす。実施例８ポリ−ｄ−Ｌ−ラクチドのコポリマーを１０ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度でメチルエチルエーテル（ｂ．ｐ．１０．８℃）に溶解する。混合物に１−ブロモペルフルオロブタンを添加して２ｍｇ／ｍＬのペルフルオロヘキサン濃度を生ぜしめる。実施例６におけるように、混合物を氷水浴中で保ち、超音波処理により強く撹拌する。次に、１の割合のエーテル毎に約１０の割合の水を生じるように水を添加する。次に、混合物をＷｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇ中で振盪し、水中油中油型エマルションに等しい水中ェーテル中１−ブロモペルフルオロブタンエマルションを生じる。温度を徐々に上げ、圧力を下げ、エーテル相の蒸発をもたらす。ポリ−ｄ−Ｌ−ラクチドコポリマーが１−ブロモペルフルオロブタンの表面上に沈殿し、ポリ−ｄ−Ｌ−ラクチドのポリマー外殻で被覆された１−ブロモペルフルオロブタン微小球体の懸濁液をもたらす。実施例９以下の方法により脂質集合体を形成した：以下のモルパーセンテージ比：７０モルパーセントのジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）／２０モルパーセントのジミリストイルホスファチジン酸（ＤＭＰＡ）／５０００分子量（５０００ダルトン単位）のポリエチレン基が結合しているジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）１０モルパーセント（ＤＭＰＥ−ＰＥＧ５０００）で、加熱及び撹拌により乾燥（凍結乾燥した）脂質を脱イオン水中で水和させた。約５ミリグラムの凍結乾燥した脂質ブレンドを約４５−５０℃に１時間加熱し、ＡｑｕａｓｏｎｉｃｃｌｅａｎｅｒＭｏｄｅｌ７５ＨＴ（ＶＷＲＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＣｏ．、Ｃｅｒｒｉｔｏｓ、ＣＡ）で室温で３０分間超音波処理した。次に、超音波処理をもう３０分間再開した。混合物にペルフルオロヘキサン（１０ｍｇ／ｍｌ）を添加し、次に、混合物をＷｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇ中で撹拌した。超音波処理及び撹拌の結果として、脂質粒子の大きさは約０．５ないし約１０ミクロンの範囲から２ミクロン未満の粒子の全集団まで減少された。次に、溶液の半分を２．２マイクロメートルフィルターを通して三重に濾過した等容量の２０ミリモルＣａＣｌ₂ と合わせ、０．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度の脂質及び１０ｍＬのＣａＣｌ₂を生ぜしめた。標準修正（ｓｔａｎｄａｒｄｍｏｄｉｆｉｅｄ）ＮＮＬＳ／ＣＯＮＴＩＮアルゴリズムを用いて、ＮＩＣＯＭＰＣ３７０（ＰａｒｔｉｃｌｅＳｉｚｉｎｇＳｙｓｔｅｍｓ、ＳａｎｔａＢａｒｂａｒａＣＡ）を用いて粒子の大きさを測定した。実施例１０加熱及び超音波処理工程の前に１−ブロモペルフルオロブタンを脂質混合物に添加することを除いて、実施例９の方法によりナノメートルの大きさの脂質集合体（ナノ集合体）を形成する。集合体を凍結乾燥し、それは多孔性の固体構造をもたらす。空気またはペルフルオロプロパンもしくは六フッ化硫黄のような不溶性気体の充填空積下でそれらの構造を保存することができ、多孔性気体封入粒子を生じる。再構成（再水和）前または中または後のいずれかで適切な量の生物活性剤を添加することにより生物活性剤を粒子中に混和することができる。実施例１１栓をしたガラスバイアル中で乾燥粉末形態の脂質を以下のモルパーセンテージ比：６７．８％ＤＰＰＣ／６．８％ＤＰＰＡ／８．５％ＤＰＰＥ−ＰＥＧ −５０００／１５％デキサメタゾンプロドラッグで合わせた。脂質を完全に混合し、次に濃縮乾固し、凍結乾燥し、次に、滅菌して濾過した脱イオン水中に再懸濁した。完全に混合した後、混合物を再び凍結乾燥した。次に、脂質ブレンドを１０ｍｇ／ｍＬの脂質濃度で正常食塩水／プロピレングリコール／グルセロール溶液（８：１：１）中に懸濁した。混合物の上の充填空積を満たすようにペルフルオロブタンを添加した。次に、溶液をＷｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇ中で振盪し、１０００ｐｓｉ窒素下で押し出した（ＬｉｐｅｘＢｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、Ｂ．Ｃ．、Ｃａｎａｄａ）。押し出された物質を２マイクロメートルフィルター、次に１マイクロメートルフィルター、次に０．４マイクロメートルフィルターに５回通した。脂質粒子の大きさを準弾性光散乱（ＰａｒｔｉｃｌｅＳｉｚｉｎｇＳｙｓｔｅｍｓ、ＳａｎｔａＢａｒｂａｒａ、ＣＡ）により測定した。平均直径は６８０ナノメートルの標準偏差で約３４４０ｎｍであった。音響散乱をプロットし（図４）、３ＭＨｚで６．５ｄｂのピーク減衰を示した。実施例１２栓をしたガラスバイアル中で乾燥粉末形態の脂質を以下のモルパーセンテージ：６７．８％ＤＰＰＣ、６．８％ＤＰＰＡ、８．５％ＤＰＰＥ−ＰＥＧ− ５０００及び１５％デキサメタゾンで合わせた。ブレンドを完全に混合し、次に濃縮乾固し、凍結乾燥し、滅菌して濾過した脱イオン水中に再懸濁した。完全に混合した後、混合物を再び凍結乾燥し、次に、８：１：１の正常食塩水／プロピレングリコール／グルセロール溶液中に再懸濁し、１０ｍｇ／ｍＬの脂質濃度を生ぜしめた。混合物の上の充填空積を満たすためにペルフルオロブタンを添加した。次に、実施例１１における方法により混合物をＷｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇ中で振盪し、押し出し、濾過し、より高密度の均質な液相から実質的に分離した軽い泡状の上部バブル相を生ぜしめた。紫外線分光測定によるアッセイにより、上部バブル相と会合しているデキサメタゾンの量は下部液相と会合しているものの２．７２倍であることが示され、ペルフルオロブタンバブルで被覆された脂質内にデキサメタゾンが効果的に閉じ込められることが確かめられた。実施例１３栓をしたガラスバイアル中で脂質を以下のモルパーセンテージ比：６７．８％ＤＰＰＣ／６．８％ＤＰＰＡ／８．５％ＤＰＰＥ−ＰＥＧ−５０００／１５％デキサメタゾンプロドラッグで合わせる。脂質を完全に混合し、次に濃縮乾固し、凍結乾燥し、次に、滅菌して濾過した脱イオン水中に再懸濁する。完全に混合した後、混合物を再び凍結乾燥する。次に、脂質ブレンドを１０ｍｇ／ｍＬの脂質濃度で正常食塩水／プロピレングリコール／グルセロール溶液（８：１：１）中に懸濁する。混合物の上の充填空積を満たすために１−ブロモペルフルオロブタンを添加した。次に、溶液をＷｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇ中で振盪し、１０００ｐｓｉ窒素下で押し出す（ＬｉｐｅｘＢｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、Ｂ．Ｃ．、Ｃａｎａｄａ）。押し出された物質を２マイクロメートルフィルター、次に１マイクロメートルフィルター、次に０．４マイクロメートルフィルターに５回通す。脂質粒子の大きさを準弾性光散乱（ＰａｒｔｉｃｌｅＳｉｚｉｎｇＳｙｓｔｅｍｓ、ＳａｎｔａＢａｒｂａｒａ、ＣＡ）により測定する。実施例１４実施例１３におけるように脂質及び１−ブロモペルフルオロブタンの混合物を形成し、１０ｍｇ／ｍＬの脂質濃度及び２．５ｍｇ／ｍＬの１−ブロモペルフルオロブタン濃度を生ぜしめる。８０００ｐｓｉの圧力で２０通過（ｐａｓｓ）微小流動化装置（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ、Ｎｅｗｔｏｎ、ＭＡ）を用いて混合物を微小乳化する。微小流動化中、混合物を氷水浴中に浸して約０−５℃の温度を保つ。実施例１５デキサメタゾンプロドラッグをペルフルオロヘキサン中に懸濁して約１．わｍｇ／ｍＬのペルフルオロヘキサン濃度を生ぜしめ、デキサメタゾンプロドラッグを安定化するために約１０重量パーセントのプルロニックＦ５０（ＳｐｅｃｔｒｕｍＣｈｅｍｉｃａｌ、Ｇａｒｄｅｎａ、ＣＡ）（ヒドロキシポリ（オキシエチレン）ポリオキシプロピレンのコポリマー）を添加する。ポリ−ｄ−Ｌ−ラクチドのコポリマーを１０ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度でジエチルエーテルに溶解する。混合物にデキサメタゾンプロドラッグのペルフルオロヘキサン懸濁液を添加し、２ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度を生ぜしめる。混合物を氷水浴中で保ち、超音波処理により強く撹拌する。次に、１の割合のエーテル毎に約１０の割合の水を生じるように水を添加する。次に、実施例６におけるように混合物をＷｉｇ−Ｌ −Ｂｕｇ中で振盪する。温度を徐々に上げ、圧力を下げ、エーテル相の蒸発をもたらす。ポリ−ｄ−Ｌ−ラクチドコポリマーがペルフルオロヘキサンの表面上に沈殿し、ポリ−ｄ−Ｌ−ラクチドのポリマー外殻で被覆されたペルフルオロヘキサン微小球体内のデキサメタゾンプロドラッグの懸濁液をもたらす。実施例１６４℃の低温室で、窒素フード下で、デキサメタゾンプロドラッグを１−ブロモペルフルオロブタン中に懸濁して１．０ｍｇ／ｍＬの１−ブロモペルフルオロブタン濃度を生ぜしめ、デキサメタゾンプロドラッグを安定化するために約１０重量パーセントのプルロニックＦ５０（ＳｐｅｃｔｒｕｍＣｈｅｍｉｃａｌ、Ｇａｒｄｅｎａ、ＣＡ）を添加する。ポリ−ｄ−Ｌ−ラクチドのコポリマーを１０ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度でメチルエチルエーテル（ｂ．ｐ．１０．８℃）に溶解する。混合物にデキサメタゾンプロドラッグの１−ブロモペルフルオロブタン懸濁液を添加し、２ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度を生ぜしめる。混合物を氷水浴中で保ち、超音波処理により強く撹拌する。次に、１の割合のエーテル毎に約１０の割合の水を生じるように水を添加する。次に、実施例６におけるように混合物をＷｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇ中で振盪する。温度を徐々に上げ、圧力を下げ、エーテル相の蒸発をもたらす。ポリ−ｄ−Ｌ −ラクチドコポリマーが１−ブロモペルフルオロブタンの表面上に沈殿し、ポリ −ｄ−Ｌ−ラクチドのポリマー外殻で被覆された１−ブロモペルフルオロブタン微小球体内のデキサメタゾンプロドラッグの懸濁液をもたらす。エチル−エーテルよりむしろ低く沸騰するメチルエチルエーテルの使用により、エーテルの蒸発中にポリ−ｄ−Ｌ−ラクチド外殻内のペルフルオロカーボンの増加した保持ができる。実施例１７アンホテリシンＢ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）を２ｍｇ／ｍｌでダイズ油に溶解した。実施例１３からの脂質混合物１．５ｍｌを８０μｌのアンホテリシン−Ｂ溶液と混合し、７．５μｌのプルロニックＦ−６８（ＳｐｅｃｔｒｕｍＣｈｅｍ．、Ｇａｒｄｅｎａ、ＣＡ）を添加した。バイアルの充填空積を真空により吸い出し、ペルフルオロブタンで置き換えた。混合物をＥＳＰＥ−Ｃａｐｍｉｘで１分間振盪した。目に見えるバブルがそれらの黄色の外観により示されるようにアンホテリシンを含んだ。それらは音響的に活性があり、１．５μｍの加重平均サイズを有した。実施例１８ペルフルオロブタンの代わりに１−ブロモノナフルオロブタンを用いて実施例１７を繰り返す。実施例１９微小球体に気体を注ぎ込むために５０℃で振盪を実施してアンホテリシンＢをインドメタシン（Ｍｅｒｃｋ，Ｉｎｃ．、Ｒａｈｗａｙ、ＮＪ）で置き換えて実施例１８を繰り返す。本明細書に引用されるかまたは記述される各々の特許、特許出願及び公開の開示は全部引用することにより本明細書に組み込まれる。本明細書に記述されるものに加えて、様々な改変が上記の説明から当業者に明らかである。そのような改変も付加される請求の範囲の範囲内に入ると考えられる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 45/00 Ａ６１Ｋ 45/00 47/24 47/24 47/30 47/30 47/42 47/42 48/00 48/00 49/00 49/00 Ｃ

Claims

【特許請求の範囲】１．生物活性剤及び患者の高い温度の部位で気体への相転移を受けることができる気体前駆体を有する組成物を患者に投与することを含んでなる患者のある部位への生物活性剤の送達方法。２．該気体前駆体が有機ハロゲン化物である請求の範囲１の方法。３．該気体前駆体中の該ハロゲン化物がフッ素、塩素及び臭素よりなる群から選択される請求の範囲２の方法。４．該気体前駆体中のハロゲン化物がフッ素である請求の範囲３の方法。５．該気体前駆体が３−フルオロベンズアルデヒド、２−フルオロ−５−ニトロトルエン、３−フルオロスチレン、ペルフルオロ−２−メチル−２−ペンテン、３，５−ジフルオロアニリン、２，２，２−トリフルオロエチルアクリレート、３−（トリフルオロメトキシ）−アセトフェノン、１，１，２，２，３，３，４，４−オクタフルオロブタン、１，１，１，３，３−ペンタフルオロブタン、ペルフルオロシクロヘキサン、ペルフルオロメチル−ｎ−ブチルエーテル、ペルフルオロメチルイソプロピルエーテル、ペルフルオロメチル−ｔ−ブチルエーテル、１−フルオロブタン、１−ブロモノナフルオロブタン、４−トリフルオロメチルペルフルオロテトラヒドロフラン、ペルフルオロテトラヒドロピラン及びペルフルオロペンタンよりなる群から選択される請求の範囲４の方法。６．該気体前駆体中の該ハロゲン化物が臭素である請求の範囲３の方法。７．該気体前駆体が：１−ブロモエタン、６−ブロモ−１−ヘキセン、２−ブロモ−２−ニトロプロパン、２−ブロモ−５−ニトロチオフェン及び２−ブロモプロペンよりなる群から選択される請求の範囲６の方法。８．該気体前駆体中の該ハロゲン化物が塩素である請求の範囲３の方法。９．該気体前駆体が３−クロロ−５，５−ジメチル−２−シクロヘキセン及び２−クロロ−２−メチル−プロパンよりなる群から選択される請求の範囲８の方法。１０．該気体前駆体が１−クロロ−１−フルオロ−１−ブロモメタン、１，１，１−トリクロロ−２，２，２−トリフルオロエタン、１，２−ジクロロ−２，２−ジフルオロエタン、１，１−ジクロロ−１，２−ジフルオロエタン、１，２−ジクロロ−１，１，３−トリフルオロプロパン、１，１，２，２，３，３，４，４−オクタフルオロブタン、１，１，１，３，３−ペンタフルオロブタン、１−ブロモペルフルオロブタン、１−ブロモ−２，４−ジフルオロベンゼン、２ −ヨード−１，１，１−トリフルオロエタン、５−ブロモバレリルクロリド、１，３−ジクロロテトラフルオロアセトン、五フッ化臭素、１−ブロモ−１，１，２，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン、２−クロロ−１，１，１，４，４，４−ヘキサフルオロ−２−ブテン、２−クロロペンタフルオロ−１，３−ブタジエン、ヨードトリフルオロエチレン、１，１，２−トリフルオロ−２−クロロエタン、１，２−ジフルオロクロロエタン、１，１−ジフルオロ−２−クロロエタン、１，１−ジクロロフルオロエタン及びヘプタフルオロ−２−ヨードプロパンよりなる群から選択される請求の範囲２の方法。１１．該気体前駆体の相転移温度が約２８．５℃から約５６℃までである請求の範囲１の方法。１２．該気体前駆体の相転移温度が約３５℃から約５２℃までである請求の範囲１１の方法。１３．該気体前駆体の相転移温度が約３７℃から約４８℃までである請求の範囲１２の方法。１４．該気体前駆体の相転移温度が約３８℃から約４２℃までである請求の範囲１３の方法。１５．安定化物質をさらに含んでなり、その場合に該安定化物質が脂質、ポリマー、タンパク質及び界面活性剤よりなる群から選択される請求の範囲１の方法。１６．該安定化物質が脂質を含んでなる請求の範囲１５の方法。１７．該脂質がリン脂質を含んでなる請求の範囲１６の方法。１８．該リン脂質がホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン及びホスファチジン酸よりなる群から選択される請求の範囲１７の方法。１９．該ホスファチジルコリンがジオレオイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン及びジステアロイルホスファチジルコリンよりなる群から選択される請求の範囲１８の方法。２０．該ホスファチジルコリンがジパルミトイルホスファチジルコリンを含んでなる請求の範囲１９の方法。２１．該ホスファチジルエタノールアミンがジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−スクシニルジオレオイルホスファチジルエタノールアミン及び１−ヘキサデシル−２−パルミトイルグリセロホスホエタノールアミンよりなる群から選択される請求の範囲１８の方法。２２．該ホスファチジルエタノールアミンがジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンを含んでなる請求の範囲１８の方法。２３．該ホスファチジン酸がジパルミトイルホスファチジン酸を含んでなる請求の範囲１８の方法。２４．該安定化物質がタンパク質を含んでなる請求の範囲１５の方法。２５．該タンパク質がアルブミンを含んでなる請求の範囲２４の方法。２６．該安定化物質がポリマーを含んでなる請求の範囲１５の方法。２７．該ポリマーが親水性ポリマーを含んでなる請求の範囲２６の方法。２８．該親水性ポリマーがポリエチレングリコールを含んでなる請求の範囲２７の方法。２９．該ポリマーがアクリル酸、メタクリル酸、エチレンイミン、クロトン酸、アクリルアミド、アクリル酸エチル、メタクリル酸メチル、メタクリル酸２ −ヒドロキシエチル、乳酸、グリコール酸、ε−カプロラクトン、アクロレイン、シアノアクリレート、シアノメタクリレート、ビスフェノールＡ、エピクロルヒドリン、ヒドロキシアルキルアクリレート、シロキサン、ジメチルシロキサン、エチレンオキシド、エチレングリコール、ヒドロキシアルキルメタクリレート、Ｎ−置換されたアクリルアミド、Ｎ−置換されたメタクリルアミド、Ｎ−ビニル−２−ピロリドン、２，４−ペンタジエン−１−オール、酢酸ビニル、アクリロニトリル、スチレン、ｐ−アミノ−スチレン、ｐ−アミノベンジルスチレン、スルホン酸スチレンナトリウム、２−スルホキシエチル−メタクリル酸ナトリウム、ビニルピリジン、メタクリル酸アミノエチル、ラクチド及び２−メタクリロイルオキシトリメチル−アンモニムクロリドよりなる群から選択されるモノマーから調製される合成ポリマーまたはコポリマーを含んでなる請求の範囲２６の方法。３０．該ポリマーがポリアクリル酸、ポリエチレンイミン、ポリメタクリル酸、ポリメチルメタクリレート、ポリシアノメタクリレート、ポリシロキサン、ポリジメチルシロキサン、ポリ乳酸、ポリ（ε−カプロラクトン）、エポキシ樹脂、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレングリコール）、ポリアミド、ポリビニリデン−ポリアクリロニトリル、ポリビニリデン−ポリアクリロニトリル −ポリメチルメタクリレート、ポリラクチドコグリコリド、ナイロン及びポリスチレン−ポリアクリロニトリルよりなる群から選択される合成ポリマーまたはコポリマーを含んでなる請求の範囲２９の方法。３１．該ポリマーがポリシアノメタクリレートを含んでなる請求の範囲３０の方法。３２．該安定化物質が界面活性剤を含んでなる請求の範囲１５の方法。３３．界面活性剤がペルフッ素化アルキル化界面活性剤及びフッ素含有炭水化物よりなる群から選択される請求の範囲３２の方法。３４．該安定化物質が小胞の形態である請求の範囲１５の方法。３５．該小胞がミセル及びリポソームよりなる群から選択される請求の範囲３４の方法。３６．該小胞が脂質から調合される請求の範囲３４の方法。３７．該脂質がリン脂質を含んでなる請求の範囲３６の方法。３８．該リン脂質がホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン及びホスファチジン酸よりなる群から選択される請求の範囲３７の方法。３９．該ホスファチジルコリンがジオレオイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン及びジステアロイルホスファチジルコリンよりなる群から選択される請求の範囲３８の方法。４０．該ホスファチジルコリンがジパルミトイルホスファチジルコリンを含んでなる請求の範囲３９の方法。４１．該ホスファチジルエタノールアミンがジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−スクシニルジオレオイルホスファチジルエタノールアミン及び１−ヘキサデシル−２− パルミトイルグリセロホスホエタノールアミンよりなる群から選択される請求の範囲３８の方法。４２．該ホスファチジルエタノールアミンがジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンを含んでなる請求の範囲４１の方法。４３．該ホスファチジン酸がジパルミトイルホスファチジン酸を含んでなる請求の範囲３８の方法。４４．該脂質がポリマーをさらに含んでなる請求の範囲３８の方法。４５．該ポリマーが親水性ポリマーを含んでなる請求の範囲４４の方法。４６．該親水性ポリマーがポリエチレングリコールを含んでなる請求の範囲４５の方法。４７．該小胞がタンパク質を含んでなる請求の範囲３４の方法。４８．該タンパク質がアルブミンを含んでなる請求の範囲４７の方法。４９．該小胞がポリマーを含んでなる請求の範囲３４の方法。５０．該ポリマーがアクリル酸、メタクリル酸、エチレンイミン、クロトン酸、アクリルアミド、アクリル酸エチル、メタクリル酸メチル、メタクリル酸２ −ヒドロキシエチル、乳酸、グリコール酸、ε−カプロラクトン、アクロレイン、シアノアクリレート、ビスフェノールＡ、エピクロルヒドリン、ヒドロキシアルキルアクリレート、シロキサン、ジメチルシロキサン、エチレンオキシド、エチレングリコール、ヒドロキシアルキルメタクリレート、Ｎ−置換されたアクリルアミド、Ｎ−置換されたメタクリルアミド、Ｎ−ビニル−２−ピロリドン、２，４−ペンタジエン−１−オール、酢酸ビニル、アクリロニトリル、スチレン、ｐ−アミノ−スチレン、ｐ−アミノベンジルスチレン、スルホン酸スチレンナトリウム、２−スルホキシエチル−メタクリル酸ナトリウム、ビニルピリジン、メタクリル酸アミノエチル、ラクチド及び２−メタクリロイルオキシトリメチル− アンモニムクロリドよりなる群から選択されるモノマーから調製される合成ポリマーまたはコポリマーを含んでなる請求の範囲４９の方法。５１．該ポリマーがポリアクリル酸、ポリエチレンイミン、ポリメタクリル酸、ポリメチルメタクリレート、ポリシロキサン、ポリジメチルシロキサン、ポリ乳酸、ポリ（ε−カプロラクトン）、エポキシ樹脂、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレングリコール）、ポリアミド、ポリビニリデン−ポリアクリロニトリル、ポリビニリデン−ポリアクリロニトリル−ポリメチルメタクリレート、ポリラクチドコグリコリド、ナイロン及びポリスチレン−ポリアクリロニトリルよりなる群から選択される合成ポリマーまたはコポリマーを含んでなる請求の範囲５０の方法。５２．該小胞が一枚膜小胞を含んでなる請求の範囲３４の方法。５３．該小胞が１枚の単層を含んでなる請求の範囲５２の方法。５４．該小胞がオリゴ層及び多重層小胞よりなる群から選択される請求の範囲３４の方法。５５．該生物活性剤が製薬及び診断薬よりなる群から選択される請求の範囲１の方法。５６．該生物活性剤が製薬である請求の範囲５５の方法。５７．製薬が抗生物質、ホルモン、血管作動性化合物、抗血栓症薬、化学療法薬、生物活性ペプチド、有糸分裂阻害剤、抗寄生虫薬、抗マラリア薬、抗結核薬、免疫血清、抗毒素、抗蛇毒素血清、ワクチン、ビタミン、抗凝血薬、抗炎症薬、ＲＮＡ及びＤＮＡよりなる群から選択される請求の範囲５６の方法。５８．部位への外部熱の使用をさらに含んでなる請求の範囲１の方法。５９．患者の高い温度の部位で気体への相転移を受けることができる気体前駆体を含んでなる組成物を患者に投与し、そして診断画像形成を用いて患者を走査することを含んでなる患者のある部位を画像形成するための方法。６０．診断薬をさらに含んでなる請求の範囲５９の方法。６１．該診断画像形成が超音波画像形成である請求の範囲５９の方法。６２．患者の高い温度の部位で気体への相転移を受けることができる気体前駆体を含んでなる組成物を患者に投与し、そして診断画像形成を用いて患者を走査することを含んでなる患者のある部位における罹病組織の存在を診断するための方法。６３．診断薬をさらに含んでなる請求の範囲６２の方法。６４．該診断画像形成が超音波である請求の範囲６２の方法。６５．製薬及び患者の高い温度の部位で気体への相転移を受けることができる気体前駆体を含んでなる組成物を患者に投与することを含んでなる患者の処置方法。