JPH08507546A

JPH08507546A - 有力なカルシウム拮抗活性および酸化防止活性の両方を有する化合物および細胞保護剤としてのその使用

Info

Publication number: JPH08507546A
Application number: JP7516312A
Authority: JP
Inventors: ヘルベルグ，マーク; バーネス，ジョージ; ジェイ．，ジュニアコーリアー，ロバート
Original assignee: アルコンラボラトリーズ，インコーポレイテッド
Priority date: 1993-12-08
Filing date: 1994-12-07
Publication date: 1996-08-13
Anticipated expiration: 2016-03-26
Also published as: CA2153979A1; JP3150155B2; ES2156934T3; DE69426871D1; HK1011685A1; DK0682664T3; CA2153979C; NO953093D0; BR9406080A; DE69426871T2; FI953748A; PT682664E; GR3035971T3; NO953093L; FI953748A0; WO1995015958A1; AU1336895A; ATE199716T1; CN1117292A; EP0682664B1

Abstract

(57)【要約】カルシウム拮抗活性及び酸化防止活性の両方を有する化合物が開示される。本化合物は細胞水準での組織への傷害を防止するかまたは軽減するのに有用である。これらの性質の化合物および対応する製薬組成物を使用する治療方法がまた開示される。

Description

【発明の詳細な説明】有力なカルシウム拮抗活性および酸化防止活性の両方を有する化合物および細胞保護剤としてのその使用発明の背景発明の分野本発明は、有力なカルシウム拮抗活性および酸化防止活性を有する化合物の提供に向けられておりそして細胞保護剤としてのそれらの化合物の使用に向けられている。本発明はさらに本発明の化合物の合成のための方法の提供に向けられておりそして合成中の中間体として形成される化合物に向けられている。本発明は特に眼の疾患または損傷に伴う細胞傷害を防ぐためのまたは減少させるための本発明の化合物の使用に向けられている。関連技術の記載外傷、虚血性再灌流（ischemia-reperfusion）、自然防御の枯渇（depletion ）：炎症、光傷害（特にレーザーまたは手術室の強い光）または退行変性症状（ degenerative condition）により誘導されたストレス下に生物学系統において細胞の遊離カルシウムの増大及び（又は）酸化性障害の増大を生ずる可能性がある傷害を生ずる。これらの両方の変化は、細胞死の通常の経路の要素である。これらの変化の結果は多段（cascade）の細胞破壊、細胞機能の損失および究極的には細胞損失の開始である。重大な細胞成分の損失は結果として器官傷害および器官機能の損失となる可能性がある。機能の損失は急性傷害によって生ずる可能性がありあるいは慢性的傷害の蓄積作用の結果である可能性がある。次のテキスト類はこれらの現象に関するさらに詳細について言及しているだろう： Prog．Neuro-Psychopharmacol．and Biol．Pysch．第１７巻第２１頁〜第７０頁（１９９３）；Ａｇｅ，第１６巻第２３頁〜第３０頁（１９９３）； Chem．Res．Tox．第３２巻第２頁〜第１８頁（１９９３）；及び Ann．Neurol.，第３２巻第Ｓ３３頁〜第Ｓ４２頁（１９９２）。カルシウム流れ（flux）は正常な細胞機能の必要な役目である。細胞内の遊離カルシウムの水準が高度に調整される。受容体作動性チャネル（receptor-opera ted channel）および電圧感受性チャネル（voltage-sensitive channel）は細胞シグナル（signaling）および剌激応答をコントロールする。多重電圧感受性カルシウムチャネル（multiple voltage-sensitive calcium channels）は同定確認された。これらはＮチャネル、Ｔチャネル、ＰチャネルおよびＬチャネルを包含する。次の刊行物は細胞内遊離カルシウムの水準の調整に関する追加の背景について言及しているだろう： Med．Res．Review，第９巻第１２３頁〜第１８０頁（１９８９）； Pharmacol．Review，第３８（４）巻第３２１頁〜第４１６頁（１９８６）； Cardiovasc．Drugs and Therapy第６巻第３５頁〜第３９頁（１９９２）； Science，第２３５巻第４６頁〜第５２頁（１９８７）； Chem．-Biol．Interactions第１頁〜第２３頁（１９９１）；および Biochemical Pharmacol．第４３（１）巻第３９頁〜第４６頁（１９９２）．細胞または細胞系統の刺激過度あるいは細胞内遊離カルシウムの欠陥のある調整は増大した細胞内遊離カルシウム水準を生ずる可能性がある。これは細胞死に導く可能性がある生化学的連鎖反応工程の開始に導く可能性がある。細胞内遊離カルシウム濃度の増大を調節する薬剤は剌激過度または欠陥のある調整の有害な作用を和らげることができる。ＰＮＡＳ，第８９巻第４３５頁〜第４３９頁（１９９２）および上記文献参照。さらに、カルシウム拮抗質として働く化合物は血液の流れを改良し、虚血傷害を減少しそして修復を容易にすることによる追加の遊離な効果を提供することが出来る。Naunyn-Schmiedeberg's Acta Pharmacol. ，第３３５巻第６８０頁〜第６８５頁（１９８７）参照。本明細書において用いられるものとして、“カルシウム拮抗剤”とは細胞内遊離カルシウムの濃度における増大を阻止する有機分子について言う。酸化防止剤として働く薬剤は、細胞ストレスに伴う酸化性傷害に対して保護することが出来る。そのような保護は以下の刊行物を含む多くの科学刊行物の主題である： Arch．Pharmacol．第３２５巻第１２９頁〜第１４６頁（１９９２）； Free Rad．Biol．Med．第６巻第２０９頁〜第２２４頁； Free Rad．Biol．Med．第１１巻第２１５頁〜第２３２頁（１９９１）； Eur．J．Pharmacol．第２１０巻第８５頁〜第９０頁（１９９２）； J．Photochem．Photobiol．Biol．第８巻第２１１頁〜第２２４頁（１９９１）； Pharmacol．and Tox．第７０巻第２７１頁〜第２７７頁（１９９２）；および Medicinal Res．Rev．第１３（２）巻第１６１頁〜第１８２頁（１９９３）。カルシウム拮抗活性および酸化防止活性のそれぞれを有する２種またはそれ以上の化合物の組み合わされた使用はExperimental Eye Research第５巻第７１頁〜第７８頁（１９９３）に論じられている。カルシウム拮抗活性および酸化防止活性の両方を有する化合物の提供は次の特許公報において論じられている：ＥＰ２６７１５５ＡおよびＷＯ８９／０５８０３Ａ１。カルシウム拮抗活性を有するとして知られている１つの化合物フルナリジン（ flunarizine）はまた遊離基捕捉活性を有すると報告された： Arch．int．Pharmacodyn．第２７２巻第２８３頁〜第２９５頁（１９８４）； Eur．J．Pharmacol．第２０４巻第３１５頁〜第３２２頁（１９９１）；および Meth．and Find Exp．Clin．Pharmacol．第１１（１０）巻第６０７頁〜第６１２頁（１９８９）。さらに、他のクラスのカルシウム拮抗剤は酸化防止活性を有すると報告された： Free Rad．Biol．and Med．第１２巻第１８３頁〜第１８７頁（１９９２）； Res．Commun．in Chem．Path．and Pharmacol．第７６（３）巻第３６７頁〜第３７０頁（１９９２）； J．Mol．Cell Cardiol．第２２巻第１１９９頁〜第１２０８頁（１９９０）； Circulation Res．第６６（５）巻第１４４９頁〜第１４５２頁（１９９０）； J．Cardiovas．Pharmacol．第１８巻（補巻１）第Ｓ６頁〜第Ｓ１０頁（１９９１）； Basic Res．in Cardiology第８７巻第１４８頁〜第１６０頁（１９９２）； Free Rad．Res．Comms．第１５（２）巻第９１頁〜第１００頁（１９９１）；および Biochem．Pharmacol．第３７（２１）巻第４１９７頁（１９８８）。しかしながら、多くの場合において、報告された酸化防止効果は弱くそして臨床的に関連がない。このことはBiochem．Pharmacol．第４２（４）巻第７３５頁〜７４３頁（１９９１）並びに第３８（２０）巻第３６０１頁〜第３６１０頁（１９８９）において指摘されている。さらに、フルナリジンの遊離基捕捉効果に起因する多くの効果はこの活性が１９８０年代の初期に不十分に理解されたので実際はそのカルシウム拮抗活性の効果であるかも知れない。本発明は、単一の分子内に有力なカルシウム拮抗活性と有力な酸化防止活性との両方を有する新規な化合物の提供に向けられている。有力な酸化防止活性とカルシウム拮抗活性とを有する単一化学的本質体の使用は、単一の活性を有する化合物の使用と比較して増大した保護を提供する。２つの成分の組み合わせ以上の両方の活性を有する単一薬剤の利点は、薬剤の代謝および分配の問題点を簡単化する活性分子の均一な送達により実現されるだろう。本発明の概要本発明は有力なカルシウム拮抗活性と酸化防止活性とを有する新規な化合物を提供する。本化合物の二重の治療作用は従来の治療法以上の顕著な利点を提供する。二重の治療作用は細胞傷害を防止するかまたは減少させるのに相補う方法で働く。本発明の化合物は有効な細胞保護剤である。これらの化合物はカルシウム拮抗活性を維持しながら酸化防止活性を提供する公知のカルシウム拮抗剤において変性を行うことにより考えられた。さらに特定的には、本発明は、有力な酸化防止活性を加える一方で化合物のカルシウム拮抗活性を維持するカルシウム拮抗活性を有する化合物の適当な構造的変性の発見に、一部分基づいている。公知のカルシウム拮抗剤のピペリジンまたはピペラジン環中に限られた許容される置換の利点を取り入れることにより、カルシウム拮抗性を維持しながら有力な酸化防止活性を浸透させる変性が行われた。本発明の化合物および関連する本発明の製薬組成物は種々のタイプの組織に対する傷害を防止するかまたは軽減させるために用いられることができる。しかしながら、細胞レベルでの眼の組織への傷害を防止するかまたは減少させるための本化合物の使用は本発明の特に重要な面である。治療されることができる症状は白内障、網膜傷害、遺伝変性的な疾患、黄斑部変性、眼球虚血（ocularischemia ）、血管新生疾患（neovascular disease）、緑内障そして虚血再灌流損傷（isc hemiareperfusioninjuries）、光化学的損傷および眼の手術に伴う損傷、特に光または外科手術器具に曝らされることにより生じた網膜、角膜またはたの組織に対する損傷を包含する。本発明の化合物は、広い範囲の傷害により生じる細胞傷害に対して保護することが出来る。本化合物は遊離基または酸化性傷害を減少させることによりそして細胞内遊離カルシウムにおける増大を減少させることによりこの保護を提供するので、本化合物は細胞保護への２つの主要なアプローチを表す。両方のこれらの機構は、ストレスの原因に関係なく、ストレスに伴う細胞生存能力の損失に対して応答することが出来る。さらに、カルシウム拮抗活性に起因する血液流における予想される増大は治療効果に寄与する。取り分け、２種またはそれ以上の化合物の組み合わせに対する単一種化合物の利点は単一の本質体が酸化防止の性質およびカルシウム拮抗の性質の両方を有する活性な分子の均一な送達を提供することである。複数の化合物の組み合わせよりもむしろ単一化合物の使用は薬物速度論、薬剤代謝および送達の問題を非常に簡単化する。本発明の詳細な記載本発明の化合物は次の式を有する：Ａ−Ｙ−Ｂ〔式中、Ａは酸化防止剤であり、Ｙは（ＣＨ₂）_nまたはＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ₂）_n（但し、ｎは１〜６である）でありそしてＢは次のグループから選ばれる：（但し、ｎ’は１〜６であり、ＺはＨ、ＣＮまたはＯＨであり、ＸはＦ、Ｃｌ、Ｉ、Ｂｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）_mＲ’、ＣＮまたはＮＯ₂（但し、Ｒ’は分枝されたまたは分枝されていないＣ₁〜Ｃ₆アルキルであり、ｍは０、１、または２である）でありそしてｏは０〜３である）〕。ＹおよびＢが上記と同じ意味を有し、そしてＲが分枝されたまたは分枝されていないＣ₁〜Ｃ₆アルキルである、以下のグループは式（Ｉ）の化合物の酸化防止剤部分として使用されることが出来るグループの代表的な例である：式（Ｉ）の化合物は、Ｒが存在するならば（即ち、もし酸化防止剤部分Ａがａ、ｅ、ｄ、ｊ、ｋまたはｐであるならば）、ＲがＣ₁〜Ｃ₆の分枝されたまたは分枝されていないアルキルであるが、しかしメチルが好ましい、次の表１において同定される代表的な種（species）によってさらに例示される。式（Ｉ）の化合物に関連する特定の酸化防止剤部分を選ぶための基準および酸化防止活性およびカルシウム拮抗活性を評価する基準は下に記載される。上記化合物の酸化防止剤部分は生理学的系で出会う遊離基と反応することが出来ると知られている有機分子の様な物質である。生理学的系において酸化防止剤としての保護作用を有する物質にとっては、（ｉ）遊離基生成に導く過程を阻止する、（ii）一次遊離基（primary free r adical）を捕捉することにより該過程の増幅を抑制する、あるいは（iii）二次遊離基（secondary free radical）を遮断することにより遊離基開始傷害の増幅を抑制する：ことにより遊離基の傷害活性を防止するように働かなければならない。生物学的系における酸化防止剤の治療的活性は傷害性遊離基の発生源および種類、傷害の部位および適当な部位への酸化防止剤の治療的に有効な濃度の送達により左右される。本発明は、遊離基と反応してこれらの種（species）により起こされる傷害を減少させることにより酸化防止活性を示す物質に関する。酸化防止剤の構成要素は、一次遊離基または一次傷害過程（primary damage process ）が増幅されるとき生成された遊離基をクエンチする（quenching）ことによりこれらの化合物の細胞保護活性に寄与する。式（Ｉ）の化合物において好ましい酸化防止剤部分はフェノール系化合物である。これらの化合物の酸化防止活性は遊離基と反応してそしてしたがってラジカル連鎖反応を終わらせるそれらの能力に在ると考えられる。生物学的系においてのペルオキシ遊離基とのこれらのフェノール系化合物の反応は特に重要である。フェノールとの遊離基の反応により形成されるフェノキシ基は共鳴安定化され（ be resonance stabilized）そして典型的には連鎖反応を続けない。生物学的系において、α−トコフェロール（ビタミンＥ）のようなフェノール系酸化防止剤からの親フェノールは、ビタミンＣおよび（または）グルタチオン（ＧＳＨ）によりフェノキシ遊離基から再生され、それにより解毒工程を完成させる１つの道を提供する。Free Radical Biology & Medicine第１５巻第３１１頁〜第３２８頁（１９９３）参照。フェノール系化合物の酸化防止活性はフェノキシ遊離基を安定化させることによりあるいはＧＳＨまたはビタミンＣのような、解毒メカニズムの他の成分への遊離基の移行を容易にすることにより高められる。アルキル置換基は電子供与によりフェノキシ遊離基を安定化しそしてオルト置換基のステアリンバルク（stea ric bulk）は遊離基連鎖反応に関与するフェノキシ基の傾向を減少させる。オルトジメチルからオルトジｔｅｒｔブチル基へのステアリンバルクにおける増大は、反応性フェノールのヒドロキシル基の過剰の密集化（excessive crowding）に起因する反応性を減少させる。さらに過剰の密集化は生物学的解毒メカニズムとの交換の速度を減少させ、それにより酸化防止剤の効率を減少させる。ＯＨ基またはＯ−アルキル基のようなパラ置換基の導入はｐ軌道重なりによる電子密度を非局在化する事によりフェノキシ遊離基の安定性を増大させる。５または６員環中にパラ酸素を包含させることにより、芳香族環に垂直であり、最適に近い重なりを提供しそして電子密度の有効な非局在化を可能にし易くする位置に、酸素のｐ軌道が拘束される。５または６員環に拘束されているパラアルコキシ基とのオルトメチル置換基の組み合わせは有力な酸化防止活性を有するフェノール系化合物を提供する。酸化防止活性は、上記変性のような変性を選択的に導入することにより高められることが出来る。上記考慮およびカルシウム拮抗剤の公知の構造−活性関係に基づいて、上記フェノール系グループは本化合物の酸化防止剤部分として好ましい。最も好ましい酸化防止剤部分は、有力な酸化防止活性を提供するがしかしカルシウム拮抗活性を妨げない、ベンゾフラン誘導体およびベンゾピラン誘導体である。本発明の化合物は、Free Radical Research Communications第１５巻第９１頁〜第１００頁（１９９１）に記載されているとおりにして１，１’−ジフェニル −２−ピクリルヒドラジン（ＤＰＰＨ）のような安定な遊離基染料をクェンチするための、化合物の上記酸化防止部分の能力によりあるいはBiochimica，Biophy sica Acta第１０８１巻第１８１頁〜第１８７頁（１９９１）およびChamical an d Biological Interactions第７４巻第２３３頁〜第２５２頁（１９９０）それぞれに記載されているとおりにしてリポソームまたはミクロソームにおける酸化性傷害に対して保護するための、化合物の能力により測定されることが出来る遊離基捕捉活性を有している。したがって本発明の化合物における酸化防止剤部分は：１）上に挙げたＤＰＰＨアッセイにしたがって１０^-4Ｍに等しいＤＰＰＨおよび試験薬剤の濃度で、遊離基の２０％より大きいクェンチを提供し；２）上に挙げたリポソームアッセイにしたがって２０μＭ未満のＩＣ₅₀を示し；または３）上に挙げた肝臓ミクロソームアッセイにしたがって、２０μＭ未満のＩＣ₅₀ を示すだろう。上記基準を満足させる酸化防止剤部分は、“治療的に有意義な遊離基捕捉活性（ therapeutically significant free radical scavenging activity）”を有するとして本明細書において言及される。本発明の化合物のカルシウム拮抗剤部分は細胞内遊離カルシウムにおける増大を阻止する有機化合物である。増大した細胞内遊離カルシウムは、細胞外源からのカルシウムの流れ込み（influx）または細胞内蓄積場所からの封鎖カルシウムの放出から生ずる可能性がある。細胞内遊離カルシウム濃度は例えば受容体作動性カルシウムチヤネル（receptor-operated calcium channels）、電圧感受性カルシウムチャネル（voltage-sensitive calsium channels）、ナトリウム−カルシウム交換およびナトリウムチャネル中のカルシウムの流れ（ｆlux）を包含する、多くのメカニズムにより調整される。細胞内遊離カルシウムにおける持続した増大は、細胞代謝の調節不能（deregulation）およびカルシウム活性化プロテアーゼおよびホスホリパーゼのような異化（catabolic）酵素の活性化のような結果となる。この過程は究極的には細胞損失に導びく。カルシウム拮抗質は下記のメカニズムを包含するがしかしそれらに限定されない種々のメカニズムにより細胞内カルシウムの増大を阻止することが出来る；ａ）電圧感受性カルシウムチャネル（Ｎ、Ｌ、Ｔ、Ｐ）中の流れ（flux）を防止する；ｂ）受容体作動性カルシウムチャネル中の流れを遮断する；ｃ）筋小胞体（sarcoplasmic reticulum）において封鎖されたカルシウムの放出を防止する；あるいはｄ）非特異性チャネルを遮断する（即ち、ナトリウム／カルシウム交換を逆転させるかまたはナトリウムチャネル中のカルシウムの流れを遮断する）。本発明の化合物は細胞内カルシウムの増大を阻止することによりカルシウム拮抗剤として働く。本化合物のカルシウム拮抗活性は下に挙げられた１種またはそれ以上のアッセイにしたがって測定されることが出来る：１）Life Science第３０巻第２１９１頁〜第２２０２頁（１９７９）およびPr ocedures of the National Academy of Science，USA第７９巻第３６５６頁〜第３６５０頁（１９８２）において記載されている通りにしてねずみの脳皮質から放射線標識化ニトレンジピン（nitrendipin）を取り出す放射性配位子結合アッセイ（最小活性：２０μＭ未満のＩＣ₅₀）；２）Journal of Medicinal Chemistry第３４巻第３０１１頁〜第３０２２頁（１９９１）およびその中で引用されている文献において記載されている通りにして、７．０より大きい予め収縮されたうさぎ大動脈細片の弛緩のようなカルシウム拮抗結合アッセイ（最小活性：２０μＭ未満のＩＣ₅₀値）；３）Journal of Cardiovascular Pharmacology第１７巻第４１頁〜第５３頁（１９９１）およびその中で引用されている文献において記載された方法に従って、蛍光染料により測定された細胞系統におけるカルシウム流れ（flux）の阻止（最小活性：１００ｎｍ未満のＩＣ₅₀）；または４）Journal Cardiovascular Pharmacology第１７巻第４１頁〜第５３頁（１９９１）およびその中で引用されている文献において記載された方法にしたがって、うさぎ胸大動脈細片のカルシウム誘導収縮の阻止（最小活性：７より大のｐＡ₂）。上記活性は、本明細書において記載された組み合わされた酸化防止／カルシウム拮抗メカニズムにより提供された細胞保護活性を有すると予想される化合物のための上限を規定しているけれども、化合物が細胞保護活性を示すためには、化合物が目的の組織に送られることそして組織水準が治療的に有効な水準に到達することがまた必要である。式（Ｉ）の化合物の各々は、種々のタイプの細胞傷害を患っているかまたはその傾向にある患者を治療するために異なる種々の程度に有用であることがまた理解されるべきである。首尾の良い治療は、細胞傷害のタイプまたはそれらの症状を治療するために用いられる投与の経路により左右されるだろう。好ましい化合物は、酸化防止剤部分Ａがａ、ｂ、ｃ、ｄまたはｐであり、もし存在するならば、Ｒはメチルであり、ｎは１〜４でありそしてカルシウム拮抗剤部分がａ’またはｄ’であり、ＺがＨまたはＯＨでありそしてＸはＦ、Ｃｌ、ＣＮ、Ｓ（Ｏ）_mＲ’またはＯＲ’（但し、ｍは１または２でありそしてＲ’は分枝されたまたは分枝されていないＣ₁〜Ｃ₄アルキルである）である化合物である。次の化合物が特に好ましい：化合物Ｎｏ．１１−（４，４’−ジフルオロベンズヒドリル）−４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−エチル）ピペラジン二塩酸塩半水和物。化合物Ｎｏ．２１−（４，４’−ジフルオロベンズヒドリル）−４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−メチル）ピペラジン二マレイン酸塩半水和物。化合物Ｎｏ．３１−ベンズヒドリル−４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−エチル）ピペラジン塩酸塩半水和物。化合物Ｎｏ．４１−（４−クロロベンズヒドリル）−４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８− テトラメチルクロマン−２−エチル）ピペラジン塩酸塩半水和物。化合物Ｎｏ．５１−ベンズヒドリル-４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−メチル）ピペラジン二塩酸塩。化合物Ｎｏ．６Ｅ−３−（４−（４’，４”−ジフルオロベンズヒドリル）ピペラジン）−１− 〔４−ヒドロキシ−３，５−ビス（１，１−ジメチルエチル）フェニル〕プロペン二マレイン酸塩。化合物Ｎｏ．７１−（４，４’−ジフルオロベンズヒドリル−４−−（３，５−ビス（１，１− ジメチルエチル）−４−ヒドロキシフェニル）ピペラジン二マレイン酸塩一水和物。上に定義した通りの式Ａ−Ｙ−Ｂの化合物は次の一般図式にしたがって造られることが出来そしてその変性は当業者に明らかであろう。方法１上に定義したとおりの一般形Ｂのアミンは炭酸カリウム、重炭酸カリウム、炭酸ナトリウムまたは重炭酸ナトリウムのような塩基の存在下に、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、１−ブタノールまたはテトラヒドロフランのような溶媒を用いて標準の条件下、活性化アルコール誘導体Ａ−Ｙ−Ｌ（但し、ＬはＣｌ、Ｂｒ、Ｉまたは（メシラートまたはトシラートのような）有機スルホネートのような脱離性基でありそしてＡ−Ｙは上に定義したとおりである）と反応されることが出来る。或る種の保護基の使用および脱保護工程の使用は当業者に認識されているように必要であろう。化合物Ａ−Ｙ−ＬおよびＢは市販されているかまたは公知の反応体および方法を用いて造られることが出来る。方法２上に定義したとおりの一般式ＢのアミンはアルデヒドＡ−Ｗ−ＣＨＯ（但しＷは（ＣＨ₂）_n-1またはＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ₂）_n-1であり、ｎは１〜６でありそしてＡは上に定義したとおりである）と縮合されそして次に、得られた種（species ）は、水素化ホウ素ナトリウム、水素化シアノホウ素ナトリウム、水素化アルミニウムリチウムまたはＲｅｄ−Ａ１のような還元剤を用いて還元して生成物Ａ− Ｙ−Ｂを提供することが出来る。或る種の保護基の使用および脱保護工程の使用は当業者により認識されているように、必要であろう。方法３上に定義したとおりの一般式Ｂのアミンは、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、塩化メチレンまたはそれらの混合物のような溶媒中の１−３−ジシクロヘキシルカルボジイミドまたは１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドと１−ヒドロキシベンゾトリアゾールまたは４−ジメチルアミノピリジンとのような標準の条件を用いて、酸，Ａ−Ｗ−ＣＯ₂Ｈ（但しＡおよびＷは上に定義した通りである）とカップリングされることができる。得られるアミドは水素化アルミニウムリチウム、ボラン−硫化ジメチルまたはＲｅｄ−Ａ１のような還元剤を用いて還元されることが出来る。或る種の保護基の使用および脱保護工程の使用は、当業者に認識されているように必要であろう。式（Ｉ）の化合物を合成する方法は、次の反応図式およびその書かれた記載によりさらに例示される：図式１図式２図式３図式４図式５ J．Amer．Oil Chem．Soc．第５１巻第２００頁〜第２０３頁（１９７４）において略述されている一般的方法を用いてヒドロキノン（ＩＩ、図式１）はオルト蟻酸トリエチル、メタノールおよび酸の存在下にメチルビニルケトンと縮合されてベンゾピラン誘導体，ＩＩＩを提供する。アセチル化（無水酢酸およびピリジン）及び穏やかな加水分解はヘミアセタール，Ｖを提供する。ウィッテイッヒまたはホルナー−エモンスのタイプの反応を用いるヘミケタール，Ｖの反応はＶＩを提供する。そのジエステルの加水分解はフェノール−カルボン酸，ＶＩＩを提供する。ｎ＝０である化合物，ＶＩＩは米国ウィスコン州ミルウォーキーのAldr ich Chemical Company（“Aldrich”）から市販されている。カルボン酸，ＶＩＩは標準の方法を用いて適当なアミン（ＶＩＩＩ）にカップリングすることが出来る（図式２）。その好ましい方法は、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、塩化メチレンまたはそれらの混合物のような溶媒中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドまたは１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドと１−ヒドロキシベンゾトリアゾールまたは４− ジメチルアミノピリジンとを用いることを包含する。（好ましくはテトラヒドロフラン中のボラン−硫化ジメチルを用いての）得られたアミド（ＩＸ）の還元は式（Ｉ）の化合物を提供する。これは式（Ｉ）の化合物を造る好ましい方法である。式（Ｉ）の化合物はまた、図式３において記載された通りにして造られてもよい。（好ましくは水素化アルミニウムリチウムを用いての）ジエステル，ＶＩの還元はフェノール−アルコール，Ｘを提供する。そのアルコール類はまたヨーロッパ特許公開第０３６９０８２Ａに記載された通りにして直接形成されてもよい。（例えばトリフェニルホスフィン、臭素および四塩化炭素を用いることにより）ハロゲン化物へのまたは有機スルホネート（メシラートまたはトシラート）への転換によるアルキルアルコールの活性化および標準の方法を用いる適当なアミン（ＶＩＩＩ）との反応は式（Ｉ）の化合物の生成を生ずる。前記文章において言及した標準の方法は、２０〜１２０℃の温度で典型的には炭酸カリウムまたはジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下にアセトニトリルまたはジメチルホルムアミドのような有機溶媒中で等モル量のハロゲン化物またはスルホネートとアミンとの反応を包含する。適当なアミン類（ＶＩＩＩ、Ｚ＝Ｎ）は市販されており（例えば４，４’−ジフルオロベンズヒドリルピペラジンは米国カリフォルニア州ガーディーナのSpec trum Chemical Manufacturing Company（“Spectrum”）から市販されておりそしてジフェニルベンズヒドリルピペラジンはＡｌｄｒｉｃｈから市販されている）または市販のベンゾフェノン誘導体を用いて公知の方法（例えば図式４）により造られることが出来る。ベンゾフェノン類は、例えば水素化ホウ素ナトリウムを用いることにより又は接触水素添加により、ベンズヒドリル誘導体，ＸＩＩに還元されることが出来る。（例えば塩化チオニルまたは塩化メタンスルホニルを用いる）ハロゲン化物への転換による、得られたアルコールの活性化および次のピペラジンとの反応は所望のアミン（Ｉ）を提供することが出来る。式ＸＶのアミンはJ．Med．Chem．第３４（１０）巻第３０１１頁〜第３０２２頁（１９９１）およびその中に引用されている文献のような科学文献において記載された方法を用いて当業者により造られることが出来る。式ＸＸＩＶの化合物は、図式５に略述された経路により造られることが出来る。フェノールのＯＨ基はＸＶＩＩを提供するためにｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエーテルまたはベンジルエーテル又は同様な基により保護されることが出来る。（例えば水素化アルミニウムリチウムを用いての）カルボン酸の還元はアルコール，ＸＶＩＩＩを提供する。（好ましくはＳｗｅｒｎ酸化方法：塩化オキサリル、ジメチルスルホキシドおよびトリエチルアミンを用いての）アルコールの酸化はアルデヒド，ＸＩＸを提供する。そのアルデヒドのウィッティッヒまたはホルナーエモンスタイプの反応は同族体エステルを提供する。そのエステルはエタノールと水との混合物中で水酸化ナトリウムを用いることにより加水分解されることが出来る。遊離カルボン酸は標準の方法を用いてアミン，ＸＩにカップリングされてアミドＸＸＩＩを提供する。その好ましい方法は、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、塩化メチレンまたはそれらの混合物のような溶媒中の1，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドまたは１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドと１−ヒドロキシベンゾトリアゾール又は４−ジメチルアミノピリジンとを用いることを包含する。好ましくは−７８℃〜２３℃ の温度でテトラヒドロフラン中のアミドの溶液にエーテル中の水素化アルミニウムリチウムの溶液を加えることによるアミドの還元はアミン，ＸＸＩＩＩを提供することが出来る。使用される保護基に依存して変化させることが出来る標準条件下のフェノール性酸素の脱保護はアミンＸＸＩＶを提供する。図式６において略述されている経路により、下記式（ＸＸＶＩ）の化合物が造られることが出来る：図式６市販されている式（ＸＸＶＩＩ）のカルボン酸（Aldrich）は標準の方法を用いて適当なアミン（ＶＩＩＩ）にカップリングすることが出来る。その好ましい方法は、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、塩化メチレン又はそれらの混合物のような溶媒中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド又は１−（３− ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドと１−ヒドロキシベンゾトリアゾール又は４−ジメチルアミノピリジンとを用いることを包含する。好ましくはテトラヒドロフラン中のボラン−硫化ジメチルを用いる、得られたアミド（ＸＸＶＩＩＩ）の還元は式（ＸＸＶＩ）の化合物を提供する。別法として、本化合物は市販のアルデヒド（XXIX、Aldrich）を適当なアミン（ＶＩＩＩ）と反応させそして次に形成された中間体を還元することにより造られることが出来る（図式６）。反応体は、１２〜３５時間溶媒、好ましくはトルエン中で温められる（温度４０〜１２０℃）ことが出来る。反応混合物は濃縮されそして残留物は溶媒、最も好ましくは無水テトラヒドロフラン中に溶解されることが出来る。中間体は（例えば水素化アルミニウムリチウムを用いて）還元されて式（ＸＸＶＩ）の化合物を提供することが出来る。下記の式（ＸＸＸＩＩ）の化合物および式（ＸＸＸＩＩＩ）の化合物は図式７に略述されている方法により造られることが出来る：図式７市販のベンズアルデヒド（XXIX、Aldrich）は、（トルエンのような）不活性溶媒中でマロン酸および（ピペリジンのような）塩基および（酢酸のような）酸と反応される。反応中生成した水の除去はJ．Med．Chem．第３４巻第５１８頁〜第５２５頁（１９９１）に記載されているとおりにして、分子ふるい又は最も好ましくはディーンスタークトラップを用いることにより達成されることが出来る。カルボン酸（ＸＸＸ）は標準方法を用いて適当なアミン（ＶＩＩＩ）にカップリングされることが出来る。好ましい方法はジメチルホルムアミド、アセトニトリル、塩化メチレンまたはそれらの混合物の様な溶媒中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドまたは１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドと１−ヒドロキシベンゾトリアゾールまたは４−ジメチルアミノピリジンとを用いることを包含する。得られたアミド（ＸＸＸＩ）は、−７８℃〜２０℃の温度でテトラヒドロフランのような溶媒中のアミドの溶液に水素化アルミニウムリチウムの溶液を加えることにより還元されて化合物ＸＸＸＩＩを提供する。−１０℃〜３５℃での水素化アルミニウムリチウムのスラリにアミドの溶液を加えることによるアミドの還元は式（ＸＸＸＩＩＩ）の化合物を生成する。式（Ｉ）の化合物は典型的には、アミンを、有機塩又は無機塩を生成するのに十分な強度の酸と反応させることによりアミン塩に転換されることができる。好ましい製薬的に許容出来る塩の陰イオンは酢酸イオン、臭素イオン、塩素イオン、くえん酸イオン、マレイン酸イオン、フマル酸イオン、メシラート（mesylate ）、燐酸イオン、硫酸イオンおよび酒石酸イオンを包含する。ベンゾピラン環の２位置で不斉炭素原子が存在するので、本化合物はまた、ＲまたはＳの鏡像異性体（エナンチオマー）のいずれかとしてまたはそれらの混合物として生ずる可能性がある。それぞれの鏡像異性体形の製造は、光学的に活性なアミンとともにジアステレオ異性体塩の使用のような従来の手段により式（ＶＩＩ）の酸を分割することにより行われてもよい。式（ＸＶＩＩＩ）のアルコールは光学的に活性なカルボン酸を用いてエステルを形成し、分割を行いそして次に分割されたジアステレオ異性体を加水分解することにより分割されることが出来るだろう。式（Ｉ）の化合物は当業者に公知の配合技術にしたがって、種々のタイプの製薬組成物中に含有させることが出来る。例えば、本化合物は経口投与に適した錠剤、カプセル、溶液、懸濁液及び他の投与形;非経口的使用に適した溶液および懸濁液；及び経直腸用のための座薬に包含させることが出来る。組織洗浄（灌注： irrigating）用溶液のような、包含された組織への局所適用に適合した溶液、懸濁液および他の投与形態が、手術または他の形態の外傷に伴う急性症状の治療のために特に好ましい。本発明は、特に眼の組織の治療に適した組成物を提供することに向けられている。本発明の眼科用組成物は式（Ｉ）の１種またはそれ以上の化合物および前記化合物のための製薬的に許容できるビヒクルを含む。種々のタイプのビヒクルが使用されてよい。ビヒクルは一般に性質において水性である。水溶液は配合の容易性ならびに患者の能力に基づいて、患っている眼中に１〜２滴の溶液を滴下する手段によりそのような組成物を容易に投与するために一般に好ましい。しかしながら、式（Ｉ）の化合物はまた懸濁液、粘稠または半粘稠なゲルあるいは他のタイプの固体または半固体組成物のような他のタイプの組成物中に容易に導入されることが出来る。懸濁液は水中に比較的に不溶である式（Ｉ）の化合物のために好ましい。本発明の眼科用組成物は緩衝剤、保存料、共溶媒および増粘剤のような種々の他の成分をまた包含してもよい。適当な緩衝システム（例えば燐酸ナトリウム、酢酸ナトリウムまたは硼酸ナトリウム）が貯蔵条件下のｐＨ変化（drift）を防ぐために加えられてもよい。眼科用製品は典型的には多投与形態で容器に入れられる。したがって保存料は使用中の微生物感染を防止するために必要である。適当な保存料は塩化ベンザルコニウム、チメロサル（thimerosal）、クロロブタノール、メチルパラペン、プロピルパラベン、フェニルエチルアルコール、エデト酸二ナトリウム（edetated isodium）、ソルビン酸、Onamer M又は当業者に公知の他の薬剤を包含する。そのような保存料は典型的には０．００１〜１．０重量％の水準で使用される。幾種類かの式（Ｉ）の化合物は水中において限られた溶解度を有している可能性がありそしてしたがって本組成物中において界面活性剤または他の適当な共溶媒を必要とするだろう。そのような共溶媒は、Polysorbate２０、６０および８０；Pluronic F−６８、Ｆ−８４およびＰ−１０３；シクロデキストリン（cycl odextrin）；あるいは当業者に公知の他の化学剤を包含する。そのような共溶媒は典型的には０．０１〜２重量％の水準で使用される。単一水溶液の粘度より大きい粘度は、活性化合物の眼球吸収性を増大させるために、配合薬の調合するのに多様性を減少させるために、配合薬の懸濁液または乳濁液の成分の物理的分離を減少させるためにそして（または）眼科用配合薬を他のように改良するために、望ましいだろう。そのような増粘剤は、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース又は当業者に公知の他の化学剤を包含する。そのような化学剤は典型的には０．０１〜２重量％の水準で使用される。式（Ｉ）の１種またはそれ以上の化合物を含有する製薬組成物は種々のタイプの細胞傷害を患っているかまたはその傾向にある患者を治療するために使用されることが出来る。組成物中の本化合物の濃度は、組成物で治療されるべき症状の性質を包含する種々の要因により左右されるだろう。しかしながら、本組成物は、一般に本組成物の合計重量に基づいて、約０．００１〜約５重量パーセント（ “重量％”）の濃度で１種またはそれ以上の本化合物を含有するだろう。投与の経路（例えば、局所、非経口または経口）および投与方式は治療される症状の正確な種類、症状の重症度、患者の年齢および一般的身体の状態等のようなファクターに基づいて当該の臨床医師によって決定されるだろう。上に示したように、細胞レベルでの眼の組織に対する傷害を防止するためのまたは減少させるための式（Ｉ）の化合物の使用は本発明の特に重要な面である。治療されることが出来る眼の症状は下記を包含するがしかしそれらに限定されない：白内障、網膜障害、遺伝変性的な疾患（heredodegenerative disease）、黄斑部変性、眼球虚血、血管新生疾患（neovascular disease）、緑内障、そして虚血再灌流障害、光化学的障害および眼球手術に伴う障害、特に光または手術器具に曝されることにより生じた網膜、角膜または他の組織に対する傷害。本化合物はまた眼の手術後の硝子体（vitreal）又は結膜下注射によるような眼科手術への補助剤として使用されてもよい。本化合物は一時的症状の緊急治療のために使用されてよくあるいは特に退行変性疾患（degenerative disease）の場合において、連続的に投与されてよい。本化合物はまた、特に眼球手術または非観血的（noninvasive）眼の処置あるいは他のタイプの手術の前に予防的に使用されてもよい。式（Ｉ）の化合物の為の製薬的ビヒクルとして生理的にバランスのとれた洗浄（灌注）用溶液の使用は、本化合物が眼の中に投与される場合に好ましい。本明細書において使用されるときに，用語“生理的にバランスのとれた洗浄（灌注）用溶液”とは観血的（浸入的：invasive）または非観血的（無血的）の医療処置中に物理的（身体的）構造および組織の機能を維持するのに適している溶液を意味する。このタイプの溶液は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよび（または）塩素イオンのような電解質；デキストロースのようなエネルギー源；および生理的水準のまたは生理的水準に近い溶液のｐＨを維持するための緩衝剤を典型的には含有するだろう。このタイプの種々の溶液が知られている（例えばラクテーテッドリンゲル溶液（Lactated Ringers Solution））。ＢＳＳ^R無菌洗浄（灌注）用溶液およびＢＢＳＰｌｕｓ^R無菌眼内洗浄（灌注）用溶液（米国、テキサス州、フォートワースのAlcon Laboratories Inc．）は生理的にバランスのとれた眼内洗浄（灌注）用溶液の例である。後者のタイプの溶液は米国特許第４，５５０，０２２号（Garabedian等）に記載されており、その全体的内容を参照することにより本明細書に組み入れる。任意の上記目的のために使用される投与量は１日あたり１〜４回投与されて一般に体重１キログラムあたり約０．０１〜約１００ミリグラム（ｍｇ／ｋｇ）であろう。本発明は以下の例によりさらに例示される。例１〜５は式（Ｉ）の化合物の合成を例示する；例６は本化合物の生理的活性およびその活性を測定するための方法を示す；そして例７は本発明の製薬組成物をさらに例示する。例１１−ベンズヒドリル−４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−メチル）ピペラジン二塩酸塩（化合物５）の製造氷／水浴中で冷却された塩化メチレン（２００ミリリットル）中の１−（ジフェニルメチル）−ピペラジン（Spectrum、５．００ｇ、１９．８１ミリモル）、Ｔｒｏｌｏｘ^R（Aldrichから市販、米国ニュージャージー州ナットリーのホフマンラロッシュの登録商標：４．９６ｇ、１９．８１ミリモル）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（Aldrich、３．２０ｇ、２３．７７ミリモル）の攪拌溶液に、塩化メチレン（５０ミリリットル）中のジシクロヘキシルカルボジイミド（Aldrich、４．９０ｇ、２３．７７ミリモル）の溶液を、２０分にわたって滴下して加えた。１時間後に、反応混合物の温度を放置して周囲の温度に温めた。周囲の条件下一夜かき混ぜた後、反応混合物を濾過しそして濾液を水で洗浄（２ｘ１００ミリリットル）し、（ＭｇＳＯ₄上で）乾燥しそして真空濃縮した。残留物をクロマトグラフィ（フラッシュ、シリカゲル、塩化メチレン／メタノールの９８：２）により精製して油状物の８．１０ｇを得、これを放置した際結晶化した。酢酸エチル／ヘキサンから固体を再結晶化して白色固体としてベンズヒドリル６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン− ２−ホルミル４−（ベンズヒドリル）ピペラジンの７．２ｇ（7５％収率）を得た。¹ H NMR(CDCl₃)δ7.4-7.1(m,10H),4.3(s,1H),4.1(s,1H),4.1-3.2(m,4H）2.9-2.5( m,4H),2.1(s,3H),2.0(bs,6H),1.8-1.7(m,2H),1.5(s,3H). IR(KBr)v3421(bs,2928(s),1596(s),1453(s),1241(s),1214(s),1189(s),1116(s), 1097(s)cm^-1 質量スペクトル：ｍ／ｅ４８５（Ｍ⁺＋１，１００），２０９，１６７元素分析：Ｃ₃₁Ｈ₃₆Ｎ₂Ｏ₃について計算して理論値：Ｃ，７６．８２；Ｈ，７．４９；Ｎ，５．７８実測値：Ｃ，７６．８７；Ｈ，７．４６；Ｎ，５．７６融点：１３３〜１３５℃ テトラヒドロフラン中のボラン−硫化ジメチルの溶液（Aldrich ２Ｍ、２５．８ミリリットル、５１．６９ミリモル）をテトラヒドロフラン中のベンズヒドリル６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−ホルミル４− （ベンズヒドリル）ピベラジン（８．３５ｇ、１７．２３ミリモル）のかき混ぜた溶液に滴下して加えた。添加が完了したとき、反応混合物を還流下温めた。硫化ジメチルおよびテトラヒドロフランを、ディーンスタークトラップを用いて除去した。反応混合物を６時間還流下温めそして次に１４時間周囲の温度でかき混ぜた。反応混合物を氷／水浴中で冷却しそして濃塩酸を用心深く滴下して加えた。添加が完了したとき、反応混合物を１時間還流下温めた。反応混合物を周囲の温度に冷却しそして３００ミリリットルの水を加えた。得られたスラリを塩化メチレン（３ｘ２００ミリリットル）で抽出した。合併した有機液体を水（２００ミリリットル）で洗浄し、（ＭｇＳＯ₄上で）乾燥しそして真空濃縮した。残留物をクロマトグラフィ（フラッシュ、シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサンの３：７）にかけることにより精製して油状物として遊離塩基の７．２ｇ（８８．８％収率）を得た。遊離塩基の２．５ｇサンプルをエタノール／エーテル混合物中に溶解しそして得られた混合物を濾過した。濾液をエーテル性塩化水素（Aldrich 、２Ｍ）で処理しそして得られた溶液を室温で一夜放置した。生成した白色固体を濾過により集めて白色固体として化合物Ｎｏ．５の２．１９ｇ（８１％収率、還元のための７１％全体的収率）を得た。¹ H NMR(d₆-DMSO)δ8.1-7.2(bm,10H),4.0-3.2(m,10H),3.38(q,2H ethanol),2.7-2 .5(m,4H),2.03(s,3H),2.01(s,3H),1.96(s,3H),1.9-1.8(m,2H),1.2(s,3H),1.0(,3 H ethanol). IR(KBr)v3388(s),2930(s),2495(s),2421(s),1455(s),1381(s),1259(s),1113(s), 1089(s). 質量スペクトル：ｍ／ｅ４７１（Ｍ⁺＋１，１００），３９３，２６５元素分析：Ｃ₃₃Ｈ₃₈Ｎ₂Ｏ₃・２ＨＣｌ・ＥｔＯＨについて計算して、理論値：Ｃ，６７．２２；Ｈ，７．６８；Ｎ，４．７５実測値：Ｃ，６７．４１；Ｈ，７．９６；Ｎ，４．６７融点：２１０〜２１２℃例２（４−（４，４’−ジフルオロベンズヒドリル）ピペラジン）−３−（４−ヒドロキシ−３，５−ビス（１，１−ジメチルエチル）フェニル）−２−プロペン，二マレイン酸塩（化合物Ｎｏ．６）の製造トルエン（１００ミリリットル）中のマロン酸（Ａｌｄｒｉｃｈ、４．３６ｇ、４１．９ミリモル）、３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（Ａｌｄｒｉｃｈ、５．００ｇ、２０．９ミリモル）、ピペリジン（Ａｌｄｒｉｃｈ、０．１８ｇ、２．１０ミリモル）および酢酸（０．１３ｇ、２．１０ミリモル）の溶液を還流下温めた（水はディーンスタークトラップを用いて除去）。５．５時間後に、マロン酸（４．３６ｇ、４１．９ミリモル）を加えそして反応混合物を１２時間還流下温めた。反応混合物を周囲の温度に冷却しそして真空濃縮した。残留物をクロマトグラフィ（ＳｉＯ₂、フラッシュ、メタノール−塩化メチレンの５：９５）にかけて、白色固体として（Ｅ）−１−（３，５ −ビス（１，１−ジメチルエチル）−４−ヒドロキシフェニルプロペン酸の２．４３ｇ（４２．１％収率）を得た。¹ H NMR(CDCl₃)δ8.0(d,1H),7.4(s,2H),6.3(d,1H),5.6(bs,1H),1.46(s,18H). 質量スペクトル：ｍ／ｅ２７７（Ｍ⁺＋１，１００）塩化メチレン（４０ミリリットル）中のジシクロヘキシルカルボジイミド（Ａｌｄｒｉｃｈ、２．３５ｇ、１１．４ミリモル）の溶液を、１０分間かき混ぜた４，４−ジフルオロベンズヒドリルピペラジン（米国ニュージャージー州サウスプレーンフィールドのSchweizerhall，Inc．（以後Schweizerhallと本明細書で称する）、１．４５ｇ、５．０２ミリモル）、（Ｅ）−１−（３，５−ビス（１，１−ジメチルエチル）−４−ヒドロキシフェニルプロペン酸（２．４３ｇ、８．７９ミリモル）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（Aldrich、１．５４ｇ、１１．４ミリモル）の溶液に加えた。反応混合物を２４時間かき混ぜそして次に濾過した。濾液を真空濃縮しそして残留物をクロマトグラフィ（ＳｉＯ₂、フラッシュ、メタノール・塩化メチレン１：９９）にかけた。適当な分画の濃縮の際に生成した固体を酢酸エチルから再結晶化して白色固体として３− （４−ヒドロキシ−３，５−ビス（１，１−ジメチルエチル）プロペノイル４− （４，４’−ジフルオロベンズヒドリル）ピペラジンの１．６５ｇ（収率６０．２％）を得た。融点２４０〜２４２℃¹ H NMR(CDCl₃)δ7.6(d,1H),7.4(m,4H),7.3(s,2H),7.0(m,4H),6.7(d,1H),5.5(s,1 H),4.3(bs,1H),3.7(m,4H),2.4(m,4H),1.5(s,18H). IR(KBr)v3450.5,2960.9,1642.4,1597.6,1505.4,1436.9,1222.2,1099.7cm^-1 質量スペクトル：ｍ／ｅ５４７（Ｍ⁺＋１，１００），２０３元素分析：Ｃ₃₄Ｈ₄₀Ｎ₂Ｏ₂Ｆ₂について計算して、理論値：Ｃ，７６．６９；Ｈ，７．３８：Ｎ，５．１２実測値：Ｃ，７４．６３；Ｈ，７．３６；Ｎ，５．１５融点：２４０〜２４２℃ テトラヒドロフラン（１００ミリリットル）中の３−（４−ヒドロキシ−３，５−ビス（１，１−ジメチルエチル）プロペノイル４−（４，４’−ジフルオロベンズヒドリル）ピペラジン（７．４０ｇ、１３．５３ミリモル）の溶液を、− ７０℃に冷却した。ジエチルエーテル中の水素化アルミニウムリチウムの溶液（ Aldrich、１Ｍ、１４．９ミリリットル、１４．９ミリモル）を５分間にわたって滴下して加えた。添加が完了した後に反応混合物を２時間−７５℃でかき混ぜた。次に溶液を放置して周囲の温度に到達させそして４時間周囲の温度でかき混ぜた。反応混合物を水／氷浴中で冷却しそして１０％水性テトラヒドロフランの５ミリリットル、１５％水性水酸化ナトリウムの０．５ミリリットルおよび水の１．５ミリリットルを順次添加することによりクェンチした。混合物を３０分間かき混ぜ、Ｃｅｌｉｔｅ^TM濾過用パッド（Johns-Manville Corporation）中に通して濾過しそして真空濃縮した。残留物を水（１００ミリリットル）と塩化メチレン（１００ミリリットル）との間に分配した。層を分離させそして有機層を（ＭｇＳＯ₄上で）乾燥しそして真空濃縮した。残留物をシリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィ（９９：１の塩化メチレン：メタノール）にかけることにより精製して油状物として遊離塩基の２．５０ｇ（３６．０％）を得た。油状物をエタノール中に溶解しそしてエタノール中のマレイン酸（１．２４ｇ、１０．７ミリモル）の溶液で処理した。生成した固体を濾過により集めそしてエタノールから再結晶化して灰色がかった白色の粉末として化合物Ｎｏ．６の１．４０ｇを得た。融点１８２〜１８６℃¹ H NMR(d₆-DMSO)δ7.4(dd,4H),7.1(dd,4H),6.7(d,2H),6.1(s,4H),4.5(s,1H),3.8 (bd,2H),3.5-2.1(bm,8H),1.4(s,18H). IR(KBr)v3640(m),3433(bm),3044(s),2956(bm),1702(s),1619(s),1573(s),1511(s ),1469(s),1384(s),1355(s),1308(s),1233(s),1161(s),1080(s)cm^-1 質量スペクトル：ｍ／ｅ５３３（Ｍ⁺＋１，１００），３２９，３０１，２８９元素分析：Ｃ₄₂Ｈ₅₀Ｎ₂Ｏ₉Ｆ₂について計算して、理論値：Ｃ，６５．９５；Ｈ，６．５９；Ｎ，３．６６実測値：Ｃ，６５．７０；Ｈ，６．７０；Ｎ，３．５９融点：１８２〜１８６℃例３１−（４，４’−ジフルオロベンズヒドリル−４−（３，５−ビス（１，１−ジメチルエチル）−４−ヒドロキシフェニル）メチル）ピペラジン二マレイン酸塩一水和物（化合物Ｎｏ．７）の製造水の除去を容易にするためにディーンスタークトラップを備えた２５０ミリリットルの丸底フラスコ中でトルエン（１００ミリリットル）中の４，４’−ジフルオロベンズヒドリルピペラジン（Schweizerhall、２．００ｇ、６．９３ミリモル）および３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（Aldrich、１．６２ｇ、６．９３ミリモル）の混合物を還流下温めた。２７時間還流下温めた後に、反応混合物を真空濃縮した。残留物をテトラヒドロフラン（５０ミリリットル）中に溶解しそして得られた溶液を、氷／水浴により冷却された水素化アルミニウムリチウム（Ａｌｄｒｉｃｈ、０．５２ｇ、１３．８６ミリモル）のかき混ぜられているスラリに滴下して加えた。添加を完了した後に、反応混合物を１時間かき混ぜた。テトラヒドロフランの水溶液（テトラヒドロフラン中５％の水、１０ミリリットル）、５０％水性水酸化ナトリウム（０．５ミリリットル）及び水（１．５ミリリットル）の順次添加により反応をクェンチした。反応混合物をＣｅｌｉｔｅ^TM濾過用パッド中に通して濾過しそして濾液を真空濃縮した。残留物を水（５０ミリリットル）と塩化メチレン（１００ミリリットル）との間に分配した。層を分離しそして有機層を水（５０ミリリットル）で洗浄し、（ＭｇＳＯ₄上で）乾燥しそして真空濃縮した。得られた油状物をクロマトグラフィ（フラッシュ、ＳｉＯ₂、Ｍｅｒｋ、９：０．２の塩化メチレン／メタノール）にかけて所望のアミン２．３８ｇを得た。アミンを酢酸エチルの３０ミリリットル中に溶解しそしてこの溶液を酢酸エチル（３０ミリリットル）中のマレイン酸（Ａｌｄｒｉｃｈ、１．３３ｇ、１１．５ミリモル）の溶液に加えた。固体が生成しそして濾過により集めた。酢酸エチルから再結晶化して白色固体として化合物Ｎｏ．７（１．５９g、３１．０％収率）を得た。融点１４０〜１４３℃¹ H NMR(d₆-DMSO,200mHz)δ11.0(bs,2H),7.4(m,4H),7.2(m,6H),6.1(s,4H),4.6(s, 1H),4.2(s,1H),3.4-3.0(m,8H),3.0-2.8(m,2H),2.2(m,2H),1.4(s,l8H). IR(KBr)v3629.9,3568.2,3428.2,2960.5,1710.7,1605.7,1580.0,1510.0,1472.0,1 391.5,1353.2,1236.9,1163.6,1122.5,1096.2cm^-1 ^{質量スペクトル：ｍ／ｅ５０７（Ｍ} ⁺ ＋１），３０１，２８９，２１９，１１７（１００）．元素分析：Ｃ₃₂Ｈ₄₀Ｎ₂ＯＦ₂・２Ｃ₄Ｈ₄Ｏ₄・Ｈ₂Ｏについて計算、理論値：Ｃ，６３．４８；Ｈ，６．６６；Ｎ，３．７０実測値：Ｃ，６３．５０；Ｈ，６．５７；Ｎ，３．６５融点：１４０〜１４３℃例４１−（４，４’−ジフルオロベンズヒドリル）−４−（６−ヒドロキシ−２，５，６，８−テトラメチルクロマン−２−メチル）ピペラジン二マレイン酸塩半水和物（化合物Ｎｏ．２）の製造塩化メチレン（２０ミリリットル）中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（Ａｌｄｒｉｃｈ、６．８１ｇ、２３．６２ミリモル）を、氷／水浴により冷却された塩化メチレン（１６０ミリリットル）中のＴｒｏｌｏｘ^R（１０．００ｇ、３９．９５ミリモル）、４，４’−ジフルオロベンズヒドリルピペラジン（Schweizerhall、１１．５２ｇ、３９．９５ミリモル）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（Aldrich、７．０２ｇ、５１．９４ミリモル）のかき混ぜられたスラリに加えた。５分後塩化メチレン中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（Aldrich、３．９０ｇ、１３．５４ミリモル）の追加の溶液を加えた。３時間後に、反応混合物を放置して周囲の温度に温めた。３．５時間周囲の温度でかき混ぜた後、反応混合物を濾過した。濾液を水（２ｘ１００ミリリットル）で洗浄し、（ＭｇＳＯ₄上で）乾燥しそして真空濃縮した。得られた残留物をクロマトグラフィ（フラッシュ、シリカゲル、Ｍｅｒｃｋ、９９：１〜９５：５の塩化メチレン対メタノール）にかけて所望のアミドの６．４２ｇ（３１．０％収率）を得た。２．４ｇのサンプルを塩化メチレン（２００ミリリットル）中に溶解しそして３．７％水性塩酸の１００ミリリットルを加えた。生成した固体を濾過により集めた。固体をエタノールから再結晶化して白色固体として６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−ホルミル４−（４，４’−ジフルオロベンズヒドリル）ピペラジンの１．７８ｇ（７６．８％）を得た。融点２２０℃、２２３℃で分解¹ H NMR(d₆-DMSO,200mHz)δ12.7(s,1H).7.9(m,4H),7.3(m,4H),5.7(s,1H),5.0-3.0 (m,l2H),2.5(m,3H),2.0(s,3H),1.9(s,3H),1.5(bs,3H). IR(KRr)v3385.5,3065.4,2993.7,2370.4,1606.2,1241.5,1189.2,1164.3,1103.9,1 089.5cm^-1 質量スペクトル：ｍ／ｅ５２１（Ｍ⁺＋１，１００），２４５，２０３．元素分析：Ｃ₃₁Ｈ₃₄Ｎ₂Ｏ₃Ｆ₂−ＨＣｌについて計算して、理論値：Ｃ，６６．８３；Ｈ，６．３３；Ｎ，５．０２実測値：Ｃ，６６．４７；Ｈ，６．２０；Ｎ，４．９５融点：２２０℃、２２３℃で分解無水テトラヒドロフラン中の６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−ホルミル４−（４，４’−ジフルオロベンズヒドリル）ピペラジン（３．９１ｇ、７．５１ミリモル）の溶液を、ボラン／硫化ジメチル（Aldric h、ＴＨＦ中の２Ｍ、１６．３３ミリリットル、３３２．６７ミリモル）のかき混ぜた溶液に滴下して加えた。添加を完了した後に、反応混合物を還流下温めた。硫化ジメチルをディーンスタークトラップ中に集めた。反応混合物を６時間還流下温めた後に、それを放置して周囲の温度に冷却した。濃塩酸（２１．６ミリリットル）を用心して滴下して加えそして反応混合物を０．５時間還流下温めた。周囲の温度に冷却した後に、反応混合物を水（４００ミリリットル）と塩化メチレン（１００ミリリットル）との混合物に加えた。５０％水性水酸化ナトリウムを用いて、この混合物のｐＨを７〜８に調節した。層を分離しそして水性層を塩化メチレン（２ｘ１００ミリリットル）で抽出した。合併した有機抽出液を飽和水性塩化ナトリウム（１００ミリリットル）で洗浄し、（ＭｇＳＯ₄上で）乾燥しそして真空濃縮した。残留物をクロマトグラフィ（フラッシュ、２００ｇ、ＳｉＯ₂、８：２のヘキサン対酢酸エチル）にかけて所望のアミン３．１８ｇ（８３．７％）を得た。アミンを５０ミリリットルの酢酸エチルに溶解しそしてこの溶液を酢酸エチル中のマレイン酸（Aldrich、１．６０ｇ、１３．８ミリモル）の溶液に加えた。固体が形成しそして濾過により集めた。酢酸エチルからこの固体を再結晶化して黄色固体として化合物Ｎｏ．２の２．５１ｇ（４６．２％）を得た。融点９５〜１００℃¹ H NMR(d₆-DMSO,200mHz)δ11.0(bs,2H),7.5(m,4H),7.1(m,4H),6.1(s,4H),4.6(s. 1H),3.3(m,10H),2.6(m,2H),2.1(s,3H),2.0(d,3H),1.9(s,3H),1.8(m,2H),1.2(s,3 H). IR(KBr)v3420.6,2938.8,2570.7,1909.1,1711.4,1584.2,1501.7,1363.1,1230.8, 質量スペクトル：ｍ／ｅ５０７（Ｍ⁺＋１，１００），２０３元素分析：Ｃ₃₁Ｈ₃₆Ｎ₂Ｏ₂Ｆ₂・２Ｃ₄Ｈ₄Ｏ₄・５Ｈ₂Ｏについて計算して、理論値：Ｃ，６２．６３；Ｈ，６．０７；Ｎ，３．７実測値：Ｃ，６２．６４；Ｈ，６．１２；Ｎ，３．７４融点：９５〜１００℃例５１−（４，４’−ジフルオロベンズヒドリル）−４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−エチル）ピペラジン（化合物Ｎｏ．１）の製造この化合物は下に記載されたとおりにして多工程合成により造られた。６−ヒドロキシ−２−メトキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマンの製造メタノール（２００ミリリットル）中のオルト蟻酸トリメチル（Aldrich、４８．５ｇ、４５７．０ミリモル）およびトリメチルヒドロキノン（Aldrich、５０．０g、３２８．５モル）の溶液に濃硫酸（０．８ミリリットル）を滴下して加え、水／氷浴により冷却した。反応混合物を氷／水浴により冷却しながら、メチルビニルケトン（Ａｌｄｒｉｃｈ、４６．０５ｇ、６５７．０ミリモル）を反応混合物にゆっくり（１．５時間）加えた。ペースト状スラリが形成した。反応混合物を放置して周囲の温度に到達させそして４８時間周囲の温度でかき混ぜた。反応混合物をジエチルエーテル（６００ミリリットル）で希釈しそして得られた溶液を水（２ｘ２００ミリリットル）および飽和水性重炭酸ナトリウム（２ｘ１００ミリリットル）で抽出した。有機溶液を（硫酸ナトリウム上で）乾燥しそして真空濃縮して黄褐色固体を得た。その固体をメタノールから再結晶化して、黄褐色固体として所望の生成物の７１．８ｇ（９２．６％）を得た。¹ H NMR(CDCl₃,200mHz)δ4.3(s,1H),3.2(s,3H),2.9-2.5(m,2H),2.15(s,3H),2.14( s,3H),2.11(s,3H),1.9-1.7(m,2H),1.5(s,3H).６−アセトキシ−２−メトキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマンの製造氷／水浴により冷却されたピリジン（９０ミリリットル）中の６−ヒドロキシ −２−メトキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン（７１．８ｇ、３０３．８５ミリモル）の溶液に、無水酢酸（１３５ミリリットル）を滴下して加えた。添加が完了した後に、反応混合物を放置して周囲の温度に温めた。１８時間周囲の温度でかき混ぜた後に、反応混合物を１リットルの氷水に加えた。この混合物を２時間かき混ぜそして次にジエチルエーテル（３ｘ２００ミリリットル）で抽出した。合併した有機液を、２ＮＨＣｌ（２００ミリリットル）、塩水（２００ミリリットル）、飽和重炭酸ナトリウム（２００ミリリットル）および塩水（２００ミリリットル）で洗浄した。有機溶液を（硫酸ナトリウム上で）乾燥しそして真空濃縮して黄色固体の７４．１１ｇ（８７％粗製生成物収率）を得、これは次の反応で組成物として使用された。¹ H NMR(CDCl₃)δ3.2(s,3H),2.8-2.5(m,2H),2.3(s,3H),2.1(s,3H),2.0(s,3H),1.9 (s,3H),1.9-1.7(m,2H),1.6(s,3H). 質量スペクトル：ｍ／ｅ２７８（Ｍ⁺＋１），２４７（ｍ／ｚ），２３６６−アセトキシ−２−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマンの製造アセトン（３７５ミリリットル）と水（３００ミリリットル）との混合物中の６−アセトキシ−２−メトキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン（７４．１１ｇ、２６６．２５ミリモル）および濃硫酸（２．５ミリリットル）の溶液を、蒸留装置に加えそして還流下に温めた。蒸留器頭部温度が９２℃に達するまで（約１．５時間）留出液（distillant）を集めた。スラリを放置して７０℃に冷却しそして２４０ミリリットルのアセトンを加えた。得られた混合物を放置して周囲の温度に冷却しそして生成した固体を濾過により集めた。固体をアセトンから再結晶化しそして６０℃で真空オーブン中で乾燥して黄褐色固体として所望の生成物の５３．９ｇ（７６．７％収率）を得た。¹ H NMR(CDCl₃)δ2.8(bs.1H),2.8-2.5(m,2H),2.3(s,3H),2.1(s,3H),2.0(s,3H),1. 98(s,3H),1.9-1.7(m,2H),1.6(s,3H). 質量スペクトル：ｍ／ｅ２６５（Ｍ⁺＋１），２４７（ｍ／ｚ），２２２，２０５，１７７エチル６−アセトキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−アセテートの製造テトラヒドロフラン（１５０ミリリットル）中のホスホノ酢酸トリエチル（Al drich、３３．９１ｇ、１５１．３ミリモル）の溶液を水素化ナトリウム（Aldri ch、６０％オイル懸濁液、６．０５ｇ、１５１．３ミリモル）のかき混ぜたスラリに滴下して加え、氷／水浴により冷却されたヘキサン（３ｘ３０ミリリットル）で洗浄した。添加を完了した後に、反応混合物を１時間周囲の温度でかき混ぜた。テトラヒドロフラン（１５０ミリリットル）中の６−アセトキシ− ２−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン（２０．００ｇ、１５１．３ミリモル）の溶液を周囲の温度で滴下して加えた。反応混合物を１８時間周囲の温度でかき混ぜた後に、４時間還流加熱した。反応混合物を周囲の温度に冷却しそして水（２００ミリリットル）を加えた。この混合物を真空濃縮し（テトラヒドロフランの除去）そして残留物をジエチルエーテル（３ｘ２００ミリリットル）で抽出した。合併した有機抽出液を水で洗浄し、（硫酸ナトリウム上で）乾燥しそして真空濃縮して褐色油状物として所望の生成物の２７．６ｇ（粗製生成物収率＞１００％）を得、これをさらに精製することなしに用いた。¹ H NMR(CDCl₃)δ4.1(q,2H),2.7-2.5(m,5H),2.3(s,3H),2.1(s,3H),2.0(s,3H),2.0 (s,3H),1.9(s,3H),1.9-1.8(m,2H),1.4(s,3H),1.3(t,3H). 質量スペクトル：ｍ／ｅ３３５（Ｍ⁺＋１，１００），２９３，２８９，２２５６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−酢酸の製造エタノール（５００ミリリットル）と水（５００ミリリットル）との混合物中のエチル６−アセトキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−アセテート（３６．５ｇ、〜１０８ミリモル）および５０％水性水酸化ナトリウム（１１０ミリリットル）の溶液を、７時間周囲の温度でかき混ぜた。反応混合物をヘキサン（２ｘ２００ミリリットル）で抽出した。濃塩酸を用いて、得られた溶液のｐＨを〜２に調節した。水（〜２００ミリリットル）を加えそして反応混合物を氷／水浴中で冷却した。ガラス棒で引っかくことにより結晶化を誘導しそして生成した固体を濾過により集めた。エタノール／水混合物から固体を再結晶化して黄褐色固体として所望の生成物の２０．２ｇ（７０．９％収率）を得た。¹ H NMR(CDCl₃+d₆-DMSO)δ7.7(bs,2H),2.7-2.5(m,4H),2.14(s,3H),2.10(s,3H),2. 06(s,3H),2.0-1.8(m,2H),1.4(s,3H). 質量スペクトル：ｍ／ｅ２６４（Ｍ⁺＋１，１００），２３０，１６４．６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−アセチル４−（４，４’−ジフルオロベンズヒドリル）−ピペラジンの製造塩化メチレン（５０ミリリットル）中のジシクロヘキシルカルボジイミド（Al drich、３．５５ｇ、１７．２３ミリモル）の溶液を、氷／水浴により冷却された塩化メチレン（１５０ミリリットル）中の６−ヒドロキシ−２，５，７，８− テトラメチルクロマン−２−酢酸（４．１４ｇ、１５．６６ミリモル）、４，４ ’−ジフルオロベンズヒドリルピペラジン（Schweizerhall、４．５１ｇ、１５．６６ミリモル）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（Aldrich、２．３３ｇ、１７．２３ミリモル）からなるスラリに滴下して加えた。添加が完了した後に、反応混合物を放置して周囲の温度に到達させそして１２時間周囲の温度でかき混ぜた。反応混合物を濾過しそして濾液を真空濃縮した。残留物をクロマトグラフィ（フラッシュ、シリカゲル、９５：５の塩化メチレン／メタノール）にかけて油状物を得、これを酢酸エチルとヘキサンとの混合物から結晶化させた。固体をエタノールから再結晶化して白色固体として所望の生成物の３．６７ｇ（４３．８％収率）を得た。¹ H NMR(CDCl₃)δ7.3(m,4H),6.9(m,4H),4.1(s,1H),3.9-3.5(m,4H),28-2.6(m,4H), 2.5-2.3(m,4H),2.15(s,3H),2.10(s,3H),2.0(s,3H),2.0-1.8(m,2H),1.3(s,3H). IR(KBr)υ3400(bs),1621(s),1505(s),1419(s),1262(s),1218(s),1204(s),1089(s ). 質量スペクトル：ｍ／ｅ５３５（Ｍ⁺＋１，１００），３３１，２４５，２０３元素分析：Ｃ₃₂Ｈ₃₆Ｎ₂Ｏ₃Ｆ₂について計算して、理論値：Ｃ，７１．８８；Ｈ，６．７９；Ｎ，５．２４実測値：Ｃ，７１．７３；Ｈ，６．８１；Ｎ，５．２６融点：２０８〜２１０℃１−（４，４’−ジフルオロベンズヒドリル）−４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−エチル）ピペラジン三マレイン酸塩の製造テトラヒドロフラン（２５ミリリットル）中のボラン：硫化ジメチル（Aldric h、１０．５Ｍ、２．３７ミリリットル、２３．６６ミリモル）の溶液を、テトラヒドロフラン（７５ミリリットル）中の６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−アセチル４−（４，４’−ジフルオロベンズヒドリル）ピペラジン（２．５３ｇ、４．７３ミリモル）の溶液に滴下して加えた。添加が完了した後に、反応混合物を還流下温めた。ディーンスタークトラップを用いて硫化ジメチルおよびテトラヒドロフランを集めた。３時間還流下に温めた後に、反応混合物を１２時間周囲の温度でかき混ぜた。濃塩酸（２．３ミリリットル）を注意深く加えそして反応混合物を１．５時間還流下温めた。反応混合物を放置して周囲の温度に冷却させ、そして水（１００ミリリットル）を加えた。１Ｎ水酸化ナトリウムを用いて、得られた混合物のｐＨを７に調節した。水溶液を塩化メチレン（３ｘ１００ミリリットル）で抽出した。合併した有機液体を塩水及び水で洗浄し、（硫酸マグネシウム上で）乾燥しそして真空濃縮した。残留物をクロマトグラフィ（フラッシュ、シリカゲル、９５：５の塩化メチレン／メタノール）にかけて灰白色泡状物の２．３ｇを得た。この泡状物の１．５ｇをクロマトグラフィ（フラッシュ、シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサンの１：１）にかけて遊離塩基の０．５５ｇ（１．０ミリモル）を得た。その遊離塩基を酢酸エチルに溶解しそして酢酸エチル中のマレイン酸（０．２７ｇ、２．３ミリモル）の溶液で処理した。生成した固体を濾過により集めて白色固体として化合物Ｎｏ．１の０．８ｇ（3４％収率）を得た。¹ H NMR(d₆-DMSO)δ7.4(m,4H),7.1(m,4H),6.2(s,6H),4.5(bs,1H),3.6-3.0(m,8H), 2.8-2.6(m,2H),2.3-2.1(m,2H),2.03(s,3H),1.99(s,3H),1.9(s,3H),1.9-1.7(m,2H ),1.2(s,3H). IR(KBr)υ3427(bs),2935(s),2569(s),1727(s),1694(s),1607(s),1235(s),1192(s ),1162(s),864(s). 質量スペクトル：ｍ／ｅ５２１（Ｍ⁺＋１），１１７（１００）元素分析：Ｃ₃₂Ｈ₃₈Ｎ₂Ｏ₂Ｆ₂・３Ｃ₄Ｈ₄Ｏ₄について計算して、理論値：Ｃ，６０．８２；Ｈ，５．５７；Ｎ，３．２２実測値：Ｃ，６０．８１：Ｈ，５．８６；Ｎ，３．２３融点：１３７〜１４０℃１−（４，４’−ジフルオロベンズヒドリル）−４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−エチル）ピペラジン二塩酸塩半水和物の製造エーテル中のＨＣｌの溶液（Aldrich、１Ｍ）を、エーテル（５０ミリリットル）中の化合物Ｎｏ．１（１．８ｇ、３．４６ミリモル）からの遊離塩基からなる溶液に加えた。白色固体が形成しそしてそれを濾過により集めて白色固体として半水和物の１．７７ｇ（８５％収率）を得た。¹ H NMR(d₆-DMSO)δ7.5-7.4(m,4H),7.2-7.1(m,4H),4.7(s,1H),4.3-2.8(bm,15H),2 .0(s,3H),1.97(s,3H),1.95(s,3H),2.0-1.8(m,2H),1.75(t,2H),1.15(s,3H). 質量スペクトル：５２１（Ｍ⁺＋１，１００），３１９，２０３元素分析：Ｃ₃₂Ｈ₃₈Ｎ₂Ｏ₂・２ＨＣｌ・５Ｈ₂Ｏについて計算して、理論値：Ｃ，６３．７８；Ｈ，６．８６；Ｎ，４．６５実測値：Ｃ，６４．０６；Ｈ，７．０６；Ｎ，４．６５例６活性次の表に示されるデータは公知の化合物と比較しての本発明の化合物のカルシウム拮抗活性および酸化防止活性を示す。ＤＰＰＨアッセイは遊離基捕捉活性を測定するために用いられた化学アッセイである。網膜片、肝臓ミクロソームおよび燐脂質酸化モデルは酸化防止活性を測定する。カルシウム結合アッセイはカルシウム拮抗結合部位に対する本化合物の親和力の測定である。試験方法は下に非常に詳細に記載されている。遊離基捕捉活性は遊離基染料である１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）のエタノール溶液をクェンチする試験化合物の能力を測定することにより決定された。試験薬剤を９５％エタノール中に溶解しそして９５％エタノール中のＤＰＰＨの溶液に加えた。試験化合物およびＤＰＰＨの両方の最終濃度は０．４ミリモルであった。Perkin-Elmer Lamba４Ｂ分光光度計上で吸光度を連続的に記録した。２つの溶液を組み合わせた後３０分にパーセントクェンチを測定した（Free Rad．Res，Comms．第１５巻第９１頁〜第１００頁（１９９１））。酸化防止活性は燐脂質酸化アッセイを用いて測定された。ジリネオレオリルホスホコリン（dilineoleolyl phosphocholine）から形成されたリポソームをＦｅ⁺³ ／ＥＤＴＡ（１６７μＭ）およびアスコルビン酸イオン（ascorbate）（１６７μＭ）に曝露した。ＵＶ分光を用いて監視された共役ジエン形成により酸化を測定した（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ第１０８１巻第１８１頁〜第１８７頁（１９９１）。ＩＣ₅₀は次の非線型回帰算法（non-linearregres sion algorithm）：Ｙ＝Ａ／〔１＋（Ｂ／Ｘ）^c〕（式中、Ａは最大、ＢはＩＣ₅₀そしてｃは共動性（cooperativity）、即ち曲線の相対的広さを表す）を用いて計算された。最小はゼロであると想定される。酸化防止活性はまた肝臓ミクロソームアッセイを用いて測定された（Chem．Bi ol．Interactions．第７４巻第２３３頁〜第２５２頁（１９９０））。ミクロソームをＫＰｉ緩衝液中でインキュベートした。脂質酸化はＮＡＤＰ⁺を含有するＡＤＰ（１ミリモル）／ＦｅＣｌ₃（１０μモル）およびＮＡＤＰＨ再生システムを用いて開始された。脂質過酸化はＴＢＡ試験によりアッセイされた。マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）がチオバルビツル酸−反応性物質の形成により評価された。ＭＤＡ−均等性（equivalent）は、 ε＝１５６ｍＭ^-1ｃｍ^-1を用いて計算された。ＩＣ_50Sは回帰線を用いて計算された。放射性配位子結合アッセイ（radioligand binding assay）を用いてカルシウム結合を測定した。脳皮質をねずみから取り出しそして標準の技術により膜分画（membrane fraction）を造った。膜標本（preparation）を放射線標識化ニトレンジピン（nitrendipine）でインキュベートした。非特異性結合を非標識化ニトレンジピンの存在下に評価した。膜を濾過しそして洗浄しそしてAcad．Sci.，US A第７９巻第３６５６頁〜第３６６０頁（１９８２）およびLife Sci．第３０巻第２１９１頁〜第２２０２頁（１９８２）における放射線標識化ニトレンジピナルシウムチャネルを測定するために濾材を計数した。カルシウム拮抗剤結合活性は電圧感受性膜（voltage sensitive membrane）中のカルシウム流れ上への本化合物の効果を測定することにより測定された（J．C ardiovascular Pharmacology第１７巻第４１頁〜第５３頁（１９９１）およびその中で引用されている文献参照）。ねずみ副腎phenochromocytoma（ＰＣ１２、A merican Type Culture Collection）またはＮＧ１０８細胞を、標準の技術を用いて培養した。蛍光カルシウム指示薬，Ｆｕｒａ−２ＡＭを用いて細胞内遊離カルシウム濃度を測定した。細胞内遊離カルシウムの非局在化誘導剌激上への試験薬剤の効果を、バランスのとれた塩溶液（細胞培養用塩類溶液：balanced sal t solution）において決定した。剌激前、試験薬剤を含有する緩衝液で細胞を３回洗浄した。１時間インキュベーション後、塩化カリウムを加えて５０ミリモルの最終濃度にした。データは、控除された基礎水準を用いて薬剤の不存在下において得られた細胞内遊離カルシウムの百分率として表されることが出来る。ＩＣ₅₀値は薬剤の少なくとも６つの濃度についての競合曲線の分析により決定されることが出来る。競合曲線データはＨｉｌl方程式へのデータの非線型最小二乗最良適合（nonlinear，least-squares best fit）を用いて分析されることが出来る。カルシウム拮抗効果はまた、兎胸部大動脈の内皮剥落らせん断片（endotheliu m-denuded spiral segments）の塩化カルシウム誘導収縮を阻止することにより測定されることが出来る（J．Cardiovascular Pharmacology第１７巻第４１頁〜第５３頁（１９９１）及びBr．J．Pharmacal，第６巻第５４９頁〜第５６０頁（１９６９）参照）。組織を２５分間、試験されるべき化合物を含有するKrebs緩衝液中でインキュベートした。ｐＡ₂値は３つの組織への応答を平均化しそしてA rch．Int．Pharmacodyn，第３巻第２９９頁〜第３３０頁（１９６３）において記載された方法を用いることにより測定された。本化合物の細胞保護作用はウシ網膜片を用いて測定された。網膜組織を１時間低酸素媒体中でインキュベートした。低酸素（hypoxia）の５０分間の後、再酸素化の前に、試験薬剤を媒体に加えて、その薬剤を１０分間組織中に拡散させた。非薬剤のグループにビヒクルを加えた。インキュベーション期間後、組織を１時間再酸素化した。脂質過酸化をチオバルビツル酸反応性物質（ＴＢＡＲＳ）の形成により評価した。組織をホモジナイズし、そしてＴＣＡ−ＴＢA試薬に加えてそしてＢＨＴの存在下に加熱した。ホモジェネート（homogenate）を濾過しそして上澄みの吸光度を分光測光的に測定した。各々のサンプル中のＴＢＡＲＳ存在濃度を計算するために二重誘導体（double derivative）技術を用いた。定量化（quantitation）は、１．５６ｘ１０⁵のモル吸光係数に基づいている。本化合物の網膜保護の性質は光傷害モデルにおいて測定された。１回４８時間連続広帯域蛍光可視光線曝露により、自由に運動している麻酔されていない白子ねずみ（albino rat）において光化学的損傷を誘導した。曝露前４８時間および暴露前２４時間、曝露中２４時間毎にそして２４時間回復期に一回、ねずみに腹腔内注射により投与した。光への曝露後２４時間で眼球組織を得た。顕微鏡に取り付けられた定量的コンピューター画像分析装置を用いて組織を分析した。網膜層の厚さ、網膜下のスペース中のマクロファージの数、外顆粒層（outer nuclea r layer）における核濃縮核（pyknotic nuclei）の数および網膜層の面積は測定され且つ統計的に分析されたパラメータであった。網膜電図記録法（electroretinography）を用いて眼球機能を測定した。暗所で４日回復期間後にねずみを麻酔した。ガンツフイールド（ganzfield）を調べることによりフラッシュＥＲＧ（複数）を引き出した。強度において増大させる一連の光フラッシュへの電気的応答が応答電圧−対数強度関係を分析するためにデジタル化された。正常の１２時間光／１２時間暗所の光サイクル上で残っている対照ねずみは顕微鏡検査の際に網膜損傷がなくそして正常の網膜の機能を有するとして評価された。しかしながら４８時間連続蛍光広帯域可視光への曝露は光受容体細胞の不可逆的損失、ＲＰＥ元死及び血液-網膜障壁の破壊を生じた。化合物Ｎｏ．１を用いて治療されたねずみにおいて、光受容体細胞への傷害が非常に少なくなりそしてＲＰＥ傷害が非常に減少された。網膜下スペースにおけるマクロファージは対照の値より大きくなかったそして非投与の光曝露ねずみと比較したときに非常に減少した。光受容体長さの分析は化合物Ｎｏ．１が外側および内側分節の損傷を防止したことを示した。核濃縮（pyknotic）光受容体核の数は非投与動物に比較して外顆粒層（outer nuclear layer）において５０％だけ減少した。網膜機能は４８時間光曝露後に網膜電図を測定することにより評価された。ＥＲＧは光受容体活性（ａ−波）および網膜の形態学的変化に相関される内顆粒層（inner nuclear layer）機能（ｂ−波）の示差的検査を可能にする。光曝露後に、ＥＲＧａ−波およびｂ−波増幅は約８０％だけ非常に減少させる。網膜機能の有意義な保留は化合物Ｎｏ．１で投与されたねずみで測定された。一重項酸素クェンチ活性は次の方法で研究された。一重項酸素（singlet oxyg en）はエンドペルオキシド３，３′−（１，４−ナフタリデンジプロピオネート），ＮＰＤＯ₂の熱解離を用いることにより化学的に生成された。３７℃で、３ミリリットルのエタノール／クロロホルム（５０：５０）を定温化キューベット中に入れた。５ミリモルのＮＤＰＯ₂を注入することにより反応を開始させた。一重項酸素クェンチ定数はＳ_o／Ｓ＝１＋（Ｋｑ＋ＫＲ）^*〔Ｑ｝^*Ｉ（但し、Ｓ_oはクェンチ剤の不存在下の化学発光（１２７０ｎｍ）強度であり、Ｓはクェンチ剤の存在下の化学発光（１２７０ｎｍ）強度であり、〔Ｑ｝はクェンチ剤濃度でありそしてＩは一重項酸素の存在時間（life time）である）からのStern-Volmerプロットにしたがって計算された（J．Amer．Chem．第１１１巻第２９０４頁〜第２９１４頁（１９８９）参照）。例７次の処方は、本発明の製薬組成物、特に眼への局所適用のために意図された組成物をさらに例示するために提供される。この例において、用語“化合物”は上記式（Ｉ）の任意の化合物を表すために意図される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 31/495 ＡＤＳ 9454−4ＣＣ０７Ｄ 295/08 Ａ 9283−4Ｃ 307/81 8217−4Ｃ 307/87 8217−4Ｃ 311/72 9360−4Ｃ 327/04 9455−4Ｃ 401/06 ２０９ 7602−4Ｃ 405/06 ２１１ 7602−4Ｃ 411/06 7602−4Ｃ 471/04 １０２ 7602−4Ｃ (72)発明者コーリアー，ロバートジェイ．，ジュニアアメリカ合衆国 76016 テキサス州アーリントン，ビッグベアーレイクドライブ 3701

Claims

【特許請求の範囲】１．式Ａ−Ｙ−Ｂ〔式中、Ａは治療的に有意義な遊離基捕捉活性を有する酸化防止剤であり、Ｙは（ＣＨ₂）_nまたはＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ₂）_n（但し、ｎは１〜６の整数である）であり、そしてＢは（但し、ｎ’は１〜６の整数であり、ＺはＨ、ＣＮまたはＯＨであり、ＸはＦ、Ｃｌ、Ｉ、Ｂｒ、ＯＨ、ＯＲ’、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）_mＲ’、ＣＮまたはＮＯ₂（但し、Ｒ’はＣ₁〜Ｃ₆アルキルでありそしてｍは０、１または２である）であり、そしてｏは０、１、２または３である）からなる群からえらばれる〕の化合物であって、しかしＡがａであり、Ｙが（ＣＨ₂）_n（但しｎが１である）であり、そしてＢがａ’（但しＸはＣｌであり、ｏが１でありそしてＣｌが４位置にある）である化合物を排除しての、化合物およびその製薬的に許容出来る塩。２．酸化防止剤がフェノール系化合物である、請求項１に記載の化合物。３．酸化防止剤がベンゾフラン誘導体またはベンゾピラン誘導体である、請求項２に記載の化合物。４．酸化防止剤がからなる群から選ばれる請求項１に記載の化合物。５．酸化防止剤が、ａ、ｂ、ｃ、ｄおよびｐからなる群から選ばれる、請求項４に記載の化合物。６．Ｒがメチルである、請求項５に記載の化合物。７．Ｂがａ’及びｄ’からなる群から選ばれる、請求項１に記載の化合物。８．ＺがＨまたはＯＨでありそしてＸがＦ、Ｃｌ、ＣＮ、Ｓ（Ｏ）_mＲ’またはＯＲ’（但し、ｍが１または２でありそしてＲ’がＣ₁〜Ｃ₄アルキルである）である、請求項７に記載の化合物。９．酸化防止剤が、ａ、ｂ、ｃ、ｄおよびｐからなる群から選ばれそしてＲがメチルである、請求項８に記載の化合物。 10．化合物が次の式を有する、請求項１に記載の化合物。 11．化合物が次の式を有する、請求項１に記載の化合物。 12．化合物が次の式を有する、請求項１に記載の化合物。 13．化合物が次の式を有する、請求項１に記載の化合物。 14．化合物が次の式を有する、請求項１に記載の化合物。 15．化合物が次の式を有する、請求項１に記載の化合物。 16．化合物が次の式を有する、請求項１に記載の化合物。 17．哺乳動物の組織における遊離基または酸化性傷害を減少させそして細胞内遊離カルシウム水準をコントロールするのに有効な量の下記式の化合物またはその製薬的に許容出来る塩およびそのための製薬的に許容出来るビヒクルを含む、哺乳動物組織への傷害を防止するかまたは軽減するための製薬組成物：Ａ−Ｙ−Ｂ〔式中、Ａは治療的に有意義な遊離基捕捉活性を有する酸化防止剤であり、Ｙは（ＣＨ₂）_nまたはＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ₂）_n（但し、ｎは１〜６の整数である）であり、そしてＢは（但し、ｎ’は１〜６の整数であり、ＺはＨ、ＣＮ、またはＯＨであり、ＸはＦ、Ｃｌ、Ｉ、Ｂｒ、ＯＨ、ＯＲ’、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）_mＲ’、ＣＮまたはＮＯ₂（但し、Ｒ’はＣ₁〜Ｃ₆アルキルでありそしてｍは０、１または２である）であり、そしてｏは０、１、２、または３である）からなる群から選ばれる〕。 18．酸化防止剤がフェノール系化合物である、請求項１７に記載の組成物。 19．酸化防止剤ガベンゾフラン誘導体またはベンゾピラン誘導体である、請求項１８に記載の組成物。 20．酸化防止剤がからなる群から選ばれる、請求項１７に記載の組成物。 21．酸化防止剤が、ａ、ｂ、ｃ、ｄおよびｐからなる群から選ばれる、請求項２０に記載の組成物。 22．Ｒがメチルである、請求項２１に記載の組成物。 23．Ｂがａ’およびｄ’からなる群から選ばれる、請求項２０に記載の組成物。 24．ＺがＨまたはＯＨでありそしてＸがＦ、Ｃｌ、ＣＮ、Ｓ（Ｏ）_mＲ’またはＯＲ’（但し、ｍは１または２でありそしてＲ’はＣ₁〜Ｃ₄アルキルである）である、請求項２３に記載の組成物。 25．酸化防止剤が、ａ、ｂ、ｃ、ｄおよびｐからなる群から選ばれそしてＲがメチルである、請求項２４に記載の組成物。 26．化合物が次の式を有する、請求項１７に記載の組成物。 27．化合物が次の式を有する、請求項１７に記載の組成物。 28．化合物が次の式を有する、請求項１７に記載の組成物。 29．化合物が次の式を有する、請求項１７に記載の組成物。 30．化合物が次の式を有する、請求項１７に記載の組成物。 31．化合物が次の式を有する、請求項１７に記載の組成物。 32．化合物が次の式を有する、請求項１７に記載の組成物。 33．製薬的に許容出来るビヒクルが生理的にバランスのとれた洗浄（灌注）用溶液からなる、請求項１７に記載の組成物。 34．哺乳動物の組織における遊離基または酸化性傷害を減少させそして細胞内遊離カルシウム水準をコントロールするのに有効な量の下記式の化合物またはその製薬的に許容出来る塩およびそのための製薬的に許容出来るビヒクルを含む組成物の治療的に有効な量を哺乳動物に投与することを包含する、哺乳動物組織への傷害を防止するかまたは軽減する方法：Ａ−Ｙ−Ｂ〔式中、Ａは治療的に有意義な遊離基捕捉活性を有する酸化防止剤であり、Ｙは（ＣＨ₂）_nまたはＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ₂）_n（但しｎは１〜６の整数である）であり、そしてＢは（但し、ｎ’は１〜６の整数であり、ＺはＨ、ＣＮまたはＯＨであり、ＸはＦ、Ｃｌ、Ｉ、Ｂｒ、ＯＨ、ＯＲ’、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）_mＲ’、ＣＮまたはＮＯ₂（但し、Ｒ’はＣ₁〜Ｃ₆アルキルでありそしてｍは０、１または２である）であり、そしてｏは０、１、２または３である）からなる群から選ばれる〕。 35．酸化防止剤がフェノール系化合物である、請求項３４に記載の方法。 36．酸化防止剤がベンゾフラン誘導体またはベンゾピラン誘導体である、請求項３５に記載の方法。 37．酸化防止剤がからなる群から選ばれる、請求項３４に記載の方法。 38．酸化防止剤が、ａ、ｂ、ｃ、ｄおよびｐからなる群から選ばれる、請求項３７に記載の方法。 39．Ｒがメチルである、請求項３８に記載の方法。 40．Ｂがａ’及びｄ’からなる群から選ばれる、請求項３４に記載の方法。 41．ＺがＨまたはＯＨでありそしてＸがＦ、Ｃｌ、ＣＮ、Ｓ（Ｏ）_mＲ’またはＯＲ’（但し、ｍが１または２でありそしてＲ’がＣ₁〜Ｃ₄アルキルである）である、請求項４０に記載の方法。 42．酸化防止剤がａ、ｂ、ｃ、ｄおよびｐからなる群から選ばれそしてＲがメチルである、請求項４１に記載の方法。 43．化合物が式を有する、請求項３４に記載の方法。 44．化合物が式を有する、請求項３４に記載の方法。 45．化合物が式を有する、請求項３４に記載の方法。 46．化合物が式を有する、請求項３４に記載の方法。 47．化合物が式を有する、請求項３４に記載の方法。 48．化合物が式を有する、請求項３４に記載の方法。 49．化合物が式を有する、請求項３４に記載の方法。 50．組成物がヒトの患者に投与される、請求項３４に記載の方法。 51．組成物が眼の組織の傷害を防止するかまたは軽減するために投与される、請求項５０に記載の方法。 52．組成物が眼の組織に局所的に投与される、請求項５１に記載の方法。 53．組成物が眼の外科処置と組み合わせて患者に投与される、請求項５２に記載の方法。 54．製薬的に許容出来るビヒクルが生理的にバランスのとれた洗浄（灌注）用溶液からなる、請求項５３に記載の方法。