PT682664E - Compostos possuindo actividade potente como antagonistas do calcio e anti-oxidantes e sua utilizacao como agentes citoprotectores - Google Patents

Description

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DESCRICÃO “Compostos possuindo actlvldade potente como antagonistas do cálcio e anti-oxidantes e sua utilização como agentes citoprotectores”

Antecedentes da invenção 1. Campo da invenção A presente invenção é dirigida para proporcionar compostos possuindo uma actividade potente antagonista do cálcio e antioxidante, e à utilização desses compostos como agentes protectores celulares. A invenção é ainda dirigida para proporcionar métodos para a síntese dos compostos da invenção e a compostos formados como intermediários durante a síntese. A invenção é particularmente dirigida à utilização dos compostos da presente invenção para prevenir ou reduzir os danos celulares associados a doenças ou lesões oftalmológicas. 2, Discussão da arte relacionada

Num sistema biológico sob “stress” induzido por trauma, isquemia de reperfiisão, diminuição das defesas naturais, inflamação, danos por luz (especialmente laser ou luz operatória intensa) ou por condições degenerativas, ocorrem danos que podem resultar num aumento no cálcio celular livre e/ou num aumento dos danos oxidativos. Ambas estas modificações são componentes da via comum de morte celular. O resultado destas modificações é a iniciação de uma cascata de destruição celular, perda de função celular e finalmente perda celular. A perda de componentes celulares críticos pode resultar em danos nos órgãos e perda de função dos órgãos. A perda de função pode ser causada por um insulto agudo ou pode ser o resultado dos efeitos cumulativos de insulto crónico. Os textos seguintes podem ser referidos para detalhes adicionais relativamente a estes fenómenos.

Prog. Neuro-Psvchopharmacol. and Biol. Pvsch.· volume 17, páginas 21-70 (1993);

Age, volume 16, páginas 23-30 (1993);

Chem. Res. Tox.. volume 32, páginas 2-18 (1993); e

Ann. NeuroL. volume 32, S33-42 (1992). O fluxo de cálcio é uma parte necessária do normal funcionamento celular. O nível de cálcio intracelular livre é altamente regulado. Ambos os canais operados por receptor e sensíveis a voltagem controlam a sinalização celular e a resposta a estímulos. Os canais do 2 85 661 ΕΡ Ο 682 664 / ΡΤ cálcio sensíveis a voltagens múltiplas foram identificados. Estes incluem os canais de N, T, P e L. As publicações seguintes podem ser referidas para mais antecedentes relativamente A regulação dos níveis de cálcio intracelular livre:

Med. Res. Review. volume 9, páginas 123-80 (1989);

Pharmacol. Review. volume 38(4), páginas 321-416 (1986);

Cardiovasc. Drugs and Therapv. volume 6, páginas 35-39 (1992);

Science, volume 235, páginas 46-52 (1987);

Chem.-Biol. Interactions. páginas 1-23 (1991); e

Biochemical Pharmacol.. volume 43(1), páginas 39-46 (1992). A sobre-estimulação da célula ou sistema celular ou a regulação defeituosa do cálcio intracelular livre podem resultar em níveis aumentados de cálcio intracelular livre. Isto pode conduzir à iniciação de uma cadeia de processos bioquímicos que podem conduzir à morte celular. Os agentes que modulam os aumentos da concentração de cálcio intracelular livre podem moderar os efeitos nefastos da sobre-estimulação ou da regulação defeituosa. Ver PNAS. volume 89, páginas 435-39 (1992) e as referências citadas acima. Adicionalmente, um composto que actua como antagonista do cálcio pode proporcionar um efeito benéfico adicional por aumento do fluxo sanguíneo, reduzindo o insulto isquémico e facilitando a reparação. Ver Naunvn-Schmiedeberg's Acta Pharmacol.. volume 335, páginas 680-685 (1987). Tal como é aqui utilizado, o termo “antagonistas de cálcio” refere-se a moléculas orgânicas que inibem aumentos na concentração de cálcio intracelular livre.

Os agentes que actuam como anti-oxidantes podem proteger contra danos oxidativos associados ao “stress celular”. Essa protecção foi objecto de numerosas publicações científicas, incluindo as seguintes:

Arch. Pharmacol.. volume 325, páginas 129-146 (1992);

Free Rad. Biol. Med.. volume 6, páginas 209-224;

Free Rad. Biol. Med.. volume 11, páginas 215-232 (1991);

Eur. J. Pharmacol.. volume 210, páginas 85-90 (1992); J. Photochem. Photobiol. Biol.. volume 8, páginas 211-224 (1991);

Phaxmacol. and Tox.. volume 70, páginas 271-277 (1992); e

Medicinal Res. Rev,. volume 13(2), páginas 161-182 (1993). A utilização combinada de dois ou mais compostos possuindo actividade antagonista do cálcio e antioxidante, respectivamente, é discutida em Experimental Eve Research. volume 5, páginas 71-78 (1993). O proporcionar de compostos possuindo ambas as 3 85 001

ΕΡ 0 682 664/PT actividades antagonista do cálcio e antioxidante, é discutido nas seguintes publica^ patentes: EF 267 155 A e WO 89/05803 Al.

Em W087/05020 revelam-se derivados de 3,4-di-hidro-2H-benzopirano que a 5-lipoxigenase e inibem a aglutinação de plaquetas e que possuem um efeil alergénico, efeito anti-histamínico e o efeito de evitar a peroxidação de lípidos. como drogas para tratar a asma brônquica, doença alérgica, doença imunitária, inflamatória, Psoriases vulgaris, perturbação sanguínea cerebral, doença isqij trombose, etc. Destas utilizações pode-se ver que estes compostos actuam como antag do cálcio e possuem actividade antioxidante.

Em EP-A-0487510 revelam-se aminas bicíclicas que são capazes de actuaí antagonistas do cálcio e como anti-oxidantes, e que são úteis como agentes farmac para o tratamento de uma série de condições incluindo trauma espinal e lesão da cabei

Em GB-A-705979 revela-se uma série de 1,4-aralquilpiperazinas e um procel a sua preparação. Tais derivados são conhecidos como possuidores de propij terapêuticas notáveis.

Em DE-A-2900810 e em US-A-3868377 revelam-se N-benzidril-N’-p-hidroxl piperazinas substituídas e métodos para a sua preparação. Os compostos revelados e| sais farmacologicamente aceitáveis possuem propriedades farmacológicas valiosas.

Em EP-A-0159566 revelam-se derivados de l-benzil-4-benzidrilpiperd processos para a sua preparação que são úteis para melhorar doenças cerebrovascular

Em FR-A-2159369 revelam-se N-estiril-N-benzidrilpiperazinas substituída; sais farmacologicamente aceitáveis que são úteis para inibir a actividade de uma complexa de proteínas encontradas nos fluidos corporais, particularmente no soro saij que participa em reacções imunoquímicas e imunopatológicas.

Em EP-A-0152799 revela-se o composto l-(4,4’-difluoro-benzidril)-4-(3,4-d| cinamil)piperazina, processos para a sua preparação e de composições farmacêuticj contêm. Este composto exibe potentes actividades antagonistas do cálcio pe anticonvulsivas e eumetabólicas. 4 85 661 ΕΡ Ο 682 664 /ΡΤ

Um composto conhecido por possuir actividade antagonista do cálcio, a fhmarizina, foi também relatado como possuindo actividade inactivadora de radicais. Ver:

Arch. int. Pharmacodvn.. volume 272, páginas 283-295 (1984);

Eur. J. Pharmacol.. volume 204, páginas 315-322 (1991); e

Meth. And Find Exp. Clin. PharmacoL volume 11(10), páginas 607-612 (1989).

Adicionalmente, outras classes de antagonistas do cálcio foram relatadas como possuindo actividade antioxidante. Ver:

Free Rad. Biol. Med.. volume 2, páginas 183-187 (1992);

Res. Commun. in Chem. Path. and Pharmacol.. volume 76(3), págs. 367-370 (1992); J. Mol. Cell Cardiol., volume 22, páginas 1199-1208 (1990);

Circulation Res.. volume 66(5), páginas 1449-1452 (1990); J. Cardiovas. Pharmacol.. volume 18 (supl.), páginas S6-S10 (1991);

Basic Res. In Cardioloev. volume 87, páginas 148-160 (1992);

Free Rad. Res. Comms.. volume 15(2), páginas 91-100 (1991) e;

Biochem. Pharmacol.. volume 37(21) , página 4197 (1988).

No entanto, na maioria dos casos, o efeito antioxidante relatado é fraco e não clinicamente relevante. Isto é apontado em Biochem. Pharmacol.. volume 42(4), páginas 735-743 (1991) e em Biochem. Pharmacol.. volume 38(20), páginas 3601-3610 (1989). Além disso, crê-se que uma série de efeitos atribuídos ao efeito de inactivação de radicais livres da flunarizina podem ser, na realidade, um efeito da sua actividade antagonista do cálcio, uma vez que esta actividade era ffacamente entendida no início da década de oitenta. A presente invenção é dirigida a proporcionar novos compostos que possuem simultaneamente actividade antagonista do cálcio potente e actividade antioxidante potente, numa única molécula. A utilização de uma única entidade química, com actividade antioxidante potente e actividade antagonista do cálcio potente, proporciona uma protecção aumentada em relação à utilização de um composto com uma única actividade. A vantagem de um agente único com ambas as actividades sobre uma combinação de dois componentes, pode ser realizada pela administração uniforme de uma molécula activa, simplificando questões ligadas ao metabolismo e administração de droga. 5 85 601

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Sumário da invenção A presente invenção proporciona novos compostos, possuindo actividadc antagonista do cálcio e antioxidante potentes. A acção terapêutica dupla dos compostos proporciona uma vantagem distintiva sobre as terapias anteriores. As acções terapêuticas duplas actuam de forma complementar, para prevenir ou reduzir os danos celulares.

Os compostos da presente invenção são agentes citoprotectores efectivos. Estes compostos foram concebidos na sequência de modificações efectuadas em antagonistas do cálcio conhecidos que conferem actividade antioxidante, mantendo a actividade antagonista do cálcio. Mais especificamente, a invenção é baseada, em parte, na verificação de modificações estruturais apropriadas de compostos possuindo actividade antagonista do cálcio que mantêm a actividade antagonista do cálcio dos compostos enquanto adicionam actividade antioxidante potente. Tirando vantagem da substituição limitada permitida nos anéis de piperidina ou piperazina de antagonistas do cálcio conhecidos, foram efectuadas modificações para instilar actividade antioxidante potente, mantendo a actividade antagonista do cálcio.

Os compostos e composições farmacêuticas associadas, da presente invenção, podem ser utilizados para prevenir ou aliviar danos em vários tipos de tecidos. No entanto, a utilização dos compostos para prevenir ou aliviar danos em tecidos oftálmicos ao nível celular constitui um aspecto particularmente significativo da presente invenção. As condições que podem ser tratadas incluem cataratas, retinopatias, doenças heredodegenerativas, degeneração macular, isquemia ocular, doenças neovasculares, glaucoma e danos associados com lesões dos tecidos oftálmicos, tais como lesões por reperfusão de isquemia e lesões associadas com cirurgia ocular, particularmente lesões da retina, cómea ou outros tecidos, causadas por exposição à luz ou instrumentos cirúrgicos.

Os compostos da presente invenção são capazes de proteger contra danos celulares causados por uma vasta gama de insultos. Uma vez que os compostos proporcionam esta protecção pela diminuição dos danos provocados por radicais livres ou dos danos oxidativos, e por redução do aumento do cálcio intracelular livre, representam uma abordagem por duas vias à citoprotecção. Ambos estes mecanismos são responsáveis pela perda de viabilidade celular associada a “stress”, independentemente da fonte. Adicionalmente, o aumento esperado no fluxo sanguíneo, devido à actividade antagonista do cálcio, contribui para o efeito terapêutico. Entre outras coisas, a vantagem de um único composto sobre uma combinação de dois ou mais compostos é que uma única entidade oferece uma administração uniforme de uma molécula activa possuindo simultaneamente propriedades 6 85 661 ΕΡ Ο 682 664 / ΡΤ anti-oxidantes e antagonistas do cálcio. A utilização de ura único composto em vez de uma combinação de compostos simplifica grandemente questões ligadas à farmacocinética, metabolismo de droga e administração.

Descrição detalhada da invenção

De acordo com uma primeira concretização desta invenção é proporcionado um composto de fórmula (I)

A-Y-B em que A é um antioxidante seleccionado entre o grupo constituído por:

em que R é alquilo C| a C6; Y é (CH2)n ou CH=CH(CH2)„, em que n é um número inteiro compreendido entre 1 e 6; e B é seleccionado entre o grupo constituído por:

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em que η’ é um número inteiro compreendido entre 1 e 6; Z é H, CN ou OH; X é F, Cl, I, Br, OH, OR\ SH, S(0)mR’, CN ou N02, em que R’ é alquilo Ci a C6 e m é 0, 1 ou 2; e o é 0,1, 2 ou 3, ou um sal seu derivado farmaceuticamente aceitável.

De acordo com uma segunda concretização desta invenção é proporcionada uma composição farmacêutica para prevenir ou aliviar danos nos tecidos de mamíferos, compreendendo uma quantidade de um composto com a fórmula seguinte, eficaz para diminuir os danos radicalares ou oxidativos e controlar os níveis de cálcio intracelular livre nos referidos tecidos:

A-Y-B em que A é um antioxidante seleccionado entre o grupo constituído por:

8 85 661 ΕΡ Ο 682 664 / ΡΤ em que R é alquilo Ci a C&; Y é (CH2)n ou CH=CH(CH2)n, em que n é um número inteiro compreendido entre 1 e 6; e B é seleccionado entre o grupo constituído por:

em que n’ é um número inteiro compreendido entre 1 e 6; Z é H, CM ou OH; X é F, Cl, I, Br, OH, OR’, SH, S(0)mR\ CN ou NO2, em que R’ é alquilo Ci a Ce e m é 0, 1 ou 2; e o é 0, 1, 2 ou 3, ou um sal seu derivado farmaceuticamente aceitável; e um veículo farmaceuticamente aceitável para o mesmo. 9 85 661 ΕΡ Ο 682 664 / ΡΤ

Os compostos de Fórmula (I) são adicionalmente ilustrados pelas espécies representativas identificadas nas Tabelas seguintes, em que R é alquilo Ci a Cé ramificado ou linear, mas é preferivelmente metilo.

Tabela 1

X X’ n A H H 1 a H H 2 a H H 3 a H H 5 a 4-F 4-F 6 a 4-F 4-F 1 a 4-F 4-F 2 a 4-F 4-F 3 a 4-C1 H 4 a H H 1 b H H 3 b Cl Cl 2 b 4-F 4-F 2 b 4-OMe 4-OMe 3 b H H 2 c H H 3 c H H 4 c H H 6 c 4-F 4-F 5 c 4-F 4-F 2 c 3-Br 3-Br 3 c 10 85 661 ΕΡ Ο 682 664 / ΡΤ

Tabela 2

X X’ η Α Η Η 1 a Η Η 2 a Η Η 3 a Η Η 5 a 4-F 4-F 6 a 4-F 4-F 1 a 4-F 4-F 2 a 4-F 4-F 3 a 4-C1 Η 4 a Η Η 1 b Η Η 3 b C1 C1 2 b 4-F 4-F 2 b 4-OMe 4-OMe 3 b Η Η 2 c Η Η 3 c Η Η 4 c Η Η 6 c 4-F 4-F 5 c 4-F 4-F 2 c 3-Br 3-Br 3 c

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Tabela 3

X X’ η Α Η Η 2 a Η Η 4 a 4-F 4-F 3 a 4-Ν02 4-Ν02 1 b 4-CN 4-CN 2 b 3-Βγ 3-Βγ 2 b Η Η 1 c 4-F 4-F 2 c 3,4-F 3,4-F 3 c 3-C1 3-C1 4 c 12 85 661 ΕΡ Ο 682 664 /ΡΤ

Tabela 4

X X’ n A Z 4-F 4-F 3 a CN 4-Ν02 4-Ν02 1 b OH 4-CN 4-CN 2 b CN 3-Br 3-Br 2 b OH Η H 1 c CN 4-F 4-F 2 c CN 3,4-F 3,4-F 3 c OH 3-C1 3-C1 4 c OH Tabela 5 (X)- Λι V / W N—(CH2)n'A (X’)- K3) (’) X X’ n n’ A Η H 2 2 a Η H 4 1 a 4-F 4-F 3 2 a 4-ΝΟ2 4-NO2 1 4 b 4-CN 4-CN 2 5 b 3-Br 3-Br 2 5 b Η H 1 2 c 4-F 4-F 2 1 c 3,4-F 3,4-F 3 1 c 3-C1 3-C1 4 1 c 13 85 661 ΕΡ Ο 682 664/ΡΤ

Os critérios para a selecção de porções anti-oxidantes específicas e para a avaliação da actividade antioxidante e antagonista do cálcio, em relação a compostos de Fórmula (I), são descritos abaixo.

As porções anti-oxidantes dos compostos descritos acima são substâncias tais como uma molécula orgânica, que são conhecidas como sendo capazes de reagir com os radicais livres encontrados em sistemas fisiológicos. Para uma substância exibir um efeito protector como antioxidante num sistema fisiológico, tem que actuar de forma a evitar a actividade danosa dos radicais livres por: (i) inibição do processo conducente à sua geração, (ii) supressão da amplificação do processo por inactivação de radicais livres primários, ou (iii) inibição da amplificação dos danos iniciados por radicais livres por intercepção de radicais livres secundários. A actividade terapêutica de um antioxidante num sistema biológico depende da fonte e natureza do radical livre danoso, do local do dano e da administração de uma concentração terapeuticamente eficaz do antioxidante ao local apropriado. Esta invenção está relacionada com substâncias que demonstram actividade antioxidante, por reacção com radicais livres, para reduzir os danos causados por estas espécies. O componente antioxidante contribui para a actividade citoprotectora destes compostos por inactivação dos radicais livres primários ou dos radicais livres gerados à medida que o processo de danos primários é amplificado.

As porções anti-oxidantes preferidas nos compostos de Fórmula (I) são compostos fenólicos. Pensa-se que a actividade antioxidante destes compostos reside na sua capacidade para reagir com radicais livres e consequentemente terminar as reacções radicalares em cadeia. A reacção destes compostos fenólicos com radicais livres peroxilo em sistemas biológicos é particularmente importante. Os radicais fenoxilo, formados pela reacção de um radical livre com um fenol são estabilizados por ressonância e, tipicamente, não continuam a reacção em cadeia. Em sistemas biológicos, o fenol parente dos antioxidante fenólicos tais como α-tocoferol (vitamina E) pode ser regenerado a partir do radical livre fenoxilo pela vitamina C e/ou glutationa (GSH), proporcionando assim um meio para completar o processo de destoxificação. Ver Free Radical Biology & Medicine, volume 15, páginas 311-328 (1993). A actividade antioxidante dos compostos fenólicos é aumentada pela estabilização do radical livre fenoxilo ou pela facilitação da transferência do radical livre para outros componentes do mecanismo de destoxificação, tais como GSH ou vitamina C. Os substituintes alquilo estabilizam o radical livre fenoxilo por doação de electrões e o meio esteárico de substituintes orto reduz a propensão do radical fenoxilo para participar em reacções de radicais livres em cadeia.

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Um aumento nos grupos ortodimetilo do meio esteárico para grupos orto-di-íer/-butilo, diminui a reactividade devido à acumulação excessiva dos grupos hidroxifenólicos reactivos. Além disso, a acumulação reduz a velocidade de permuta com os mecanismos de destoxificação biológica, reduzindo assim a eficiência do antioxidante. A introdução de um para-substituinte tal como um grupo OH ou O-alquilo, aumenta a estabilidade do radical livre fenoxilo, por deslocalização da densidade electrónica através de sobreposição de orbitais p. Pela inclusão do oxigénio para num anel de cinco ou seis membros, a orbital p do oxigénio fica constrangida numa posição que se aproxima na perpendicular ao anel aromático, proporcionando uma sobreposição próxima da óptima e possibilitando uma deslocalização eficiente da densidade electrónica. A combinação de substituintes orto-metilo com um grupo para-alcoxi restringido num anel de cinco ou seis membros, proporciona um composto fenólico com actividade antioxidante potente. A actividade antioxidante pode ser aumentada pela incorporação selectiva de modificações tais como as descritas acima.

Com base nas considerações acima e nas relações estrutura-actividade conhecidas dos antagonistas do cálcio, os grupos fenólicos descritos acima são preferidos como a porção antioxidante dos presentes compostos. As porções anti-oxidantes mais preferidas são derivados de benzofurano, que proporcionam uma actividade antioxidante potente mas não interferem com a actividade antagonista do cálcio.

Os compostos da presente invenção possuem actividade inactivadora de radicais livres que pode ser medida pela capacidade das porções anti-oxidantes dos compostos, acima descritas, para extinguir um corante de radical livre estável, tal como l,l’-difenil-2-picril-hidrazina (DPPH), como descrito em Free Radical Research Communications, volume 15, páginas 91-100 (1991), ou pela capacidade do composto para proteger contra insultos oxidativos em lipossomas ou microssomas, como descrito em Biochimica, Biophysica Acta, volume 1081, páginas 181-187 (1991) eem Chemical and Biological Interactions, volume 74, páginas 233-252 (1990), respectivamente. Assim, as porções anti-oxidantes nos compostos da presente invenção irão 1) proporcionar uma inactivação superior a 20% do radical livre em concentrações de DPPH e do agente de teste iguais a IO-4 M, de acordo com o ensaio de DPPH acima citado; 2) demonstrar um IC50 inferior a 20 μΜ, de acordo com o ensaio de lipossomas acima citado; ou

85 661 ΕΡ0 682 664/ΡΤ 15 3) demonstrar um IC50 inferior a 20 μΜ, de acordo com 0 ensaio de microssomas do fígado acima citado.

As porções anti-oxidantes que satisfazem os critérios acima são referidas aqui como possuindo “actividade terapeuticamente significativa de inactivação de radicais livres”.

As porções antagonistas do cálcio dos compostos da presente invenção são compostos orgânicos que inibem aumentos da concentração de cálcio intracelular livre. O cálcio intracelular livre aumentado pode resultar do influxo de cálcio a partir de fontes extracelulares ou da libertação do cálcio sequestrado a partir de armazenamentos intracelulares. A concentração de cálcio intracelular livre é regulada por muitos mecanismos, incluindo, por exemplo, canais do cálcio operados por receptores, canais do cálcio sensíveis a voltagem, permutadores sódio-cálcio e fluxo de cálcio através de canais do sódio. Um aumento gradual no cálcio intracelular livre resulta em situações tais como a desregulação do metabolismo celular e a activação de enzimas catabólicas, tais como proteases e fosfolipases activadas pelo cálcio. Este processo pode ultimamente conduzir à perda celular. Os antagonistas do cálcio podem inibir o aumento no cálcio intracelular por vários mecanismos incluindo, mas não estando limitado a: a) prevenção do fluxo através de canais do cálcio sensíveis a voltagem (N, L, T, P); b) bloqueio do fluxo através de canais do cálcio operados por receptores; c) prevenção da libertação do cálcio sequestrado no retículo sarcoplásmico; ou d) bloqueio de canais não específicos (i.e., inversão dos permutadores sódio/cálcio ou bloqueio do fluxo de cálcio através de um canal de sódio).

Os compostos da presente invenção actuam como antagonistas do cálcio por inibição de aumentos do cálcio intracelular. A actividade antagonista do cálcio dos compostos pode ser determinada de acordo com um ou mais dos ensaios listados abaixo: 1) ensaios de ligação de radioligandos, nos quais nitrendipina radiomarcada é desalojada dos córtices de cérebro de rato (actividade mínima: IC50 inferior a 20 μΜ), como descrito em Life Science, volume 30, páginas 2191-2202 (1979) e

Procedures of the National Academv of Science. USA, volume 79, páginas 3656-3650 (1982);

85 661 ΕΡ Ο 682 664/ΡΤ 2) ensaios de ligação de antagonistas do cálcio, tais como o relaxamento de tiras aórticas de coelho pré-contraídas superior a 7,0, como descrito em Journal of Medicinal Chemistrv. volume 34, páginas 3011-3022 (1991) e nas referências aí citadas (actividade mínima: valor de IC50 inferior a 20 μΜ); 3) inibição do fluxo de cálcio num sistema celular, tal como medido por um corante fluorescente, de acordo com 0 procedimento descrito em Journal of Cardiovascular Pharmacology, volume 17, páginas 41-53 (1991) e nas referências aí citadas (actividade mínima: IC50 inferior a 100 nm); ou 4) inibição das contracções induzidas pelo cálcio de tiras de aorta torácica de coelho, de acordo com os procedimentos descritos em Journal Cardiovascular Pharmacology. volume 17, páginas 41-53 (1991) e nas referências aí citadas (actividade mínima: pA2 superior a 7).

Apesar das actividades acima descritas definirem os limites superiores para os compostos que se espera terem actividade citoprotectora conferida pelos mecanismos combinados antioxidante/antagonista do cálcio aqui descritos, é também necessário que os compostos sejam administrados ao tecido alvo e a níveis nos tecidos que atinjam níveis terapeuticamente efectivos, de forma a que os compostos demonstrem actividade citoprotectora. Deve também entender-se que cada um dos compostos de Fórmula (I) é útil para diferentes graus de tratamento de pacientes, afligidos por ou propensos a vários tipos de danos celulares. O sucesso do tratamento dependerá do tipo de insulto celular e da via de administração utilizada para tratar essas condições.

Os compostos preferidos são aqueles em que: a porção antioxidante A é a, b ou c e R, se presente, é metilo; n é 1 a 4; e a porção antagonista do cálcio é a’ ou d’, Z é H ou OH e X é F, Cl, CN, S(0)mR’ ou OR’ em que m é 1 ou 2 e R’ é alquilo Ci a C4 ramificado ou não ramificado.

Os compostos de fórmula A-Y-B, tal como definidos acima, podem ser preparados de acordo com os esquemas gerais que se seguem, bem como por modificações destes, as quais serão evidentes para os peritos na arte: Método 1

A-Y-L + B -» A-Y-B 17 85 661 ΕΡ Ο 682 664/ΡΤ

Aminas com a fonna gera] B, como definido acima, podem ser levadas a reagir com o derivado álcool activado A-Y-L, em que L é um grupo substituível tal como Cl, Br, I ou sulfonato orgânico (tal como mesilato ou tosilato) e A-Y são como descritos acima, sob condições padrão utilizando solventes tais como acetonitrilo, dimetilformamida, 1-butanol ou tetra-hidrofurano, na presença de uma base tal como carbonato de potássio, bicarbonato de potássio, carbonato de sódio ou bicarbonato de sódio. A utilização de certos grupos protectores e de passos de desprotecção pode ser necessária, conforme poderá ser apreciado pelos peritos na arte. Os compostos A-Y-L e B estão comercialmente disponíveis ou podem ser preparados usando reagentes e procedimentos conhecidos. Método 2

A-W-CHO + B -» A-W-CH2-B = A-Y-B

As aminas de fórmula geral B, como definido acima, podem ser condensadas com o aldeído A-W-CHO, em que W é (CH2)n-i ou CH=CH(CH2)n-i, nél aóeAé como descrito acima e, em seguida, as espécies resultantes podem ser reduzidas usando um agente redutor tal como boro-hidreto de sódio, cianoboro-hidreto de sódio, hidreto de alumínio e lítio ou Red-Al, para dar o produto A-Y-B. A utilização de certos grupos protectores e de passos de desprotecção pode ser necessária, conforme poderá ser apreciado pelos peritos na arte. Método 3

A-W-C02H + B -> A-W-CH2-B = A-Y-B

As aminas de fórmula geral B, como definido acima, podem ser acopladas com o ácido A-W-C02H, em que A e W são como definido acima, usando condições padrão tais como 1,3-diciclo-hexilcarbodiimida ou l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida e 1-hidroxibenzotriazol ou 4-dimetilaminopiridina, num solvente como dimetilformamida, acetonitrilo, cloreto de metileno ou uma mistura destes. A amida resultante pode ser reduzida usando um agente redutor tal como hidreto de alumínio e lítio, dimetilsulfureto de borano ou Red-Al. A utilização de certos grupos protectores e de passos de desprotecção pode ser necessária, conforme poderá ser apreciado pelos peritos na arte.

Os compostos de Fórmula (I) são tipicamente convertidos em sais de amina por reacção da amina com ácidos de força suficiente para produzir um sal orgânico ou inorgânico. Os aniões dos sais farmaceuticamente aceitáveis preferidos incluem acetato, brometo, cloreto, citrato, maleato, fumarato, mesilato, fosfato, sulfato c tartarato.

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Uma vez que existe um átomo de carbono assimétrico no anel benzofurano ou benzotiofeno, os compostos podem ocorrer na forma de enantiómeros R ou S, ou misturas destes. A prepararão dos enantiómeros individuais pode scr efectuada por resolução dos ácidos por meios convencionais tais como a utilização de sal diastereomérico com aminas opticamente activas. Os álcoois podem ser resolvidos por formação dos ésteres com ácidos carboxílicos opticamente activos, efectuando a resolução e, em seguida, hidrolisando os diastereómeros resolvidos.

Os compostos de Fórmula (I) podem ser contidos em vários tipos de composições farmacêuticas, de acordo com técnicas de formulação conhecidas dos peritos na arte. Por exemplo, os compostos podem ser incluídos em comprimidos, cápsulas, soluções, suspensões e outras formas de dosagem adaptadas para administração oral: soluções e suspensões adaptadas para utilização parentérica; e supositórios para utilização rectal. As soluções, suspensões e outras formas de dosagem adaptadas para aplicação tópica aos tecidos envolvidos, tais como soluções de irrigação de tecidos, são particularmente preferidas para o tratamento de condições agudas associadas a cirurgia ou outras formas de trauma. A presente invenção é particularmente dirigida ao proporcionar de composições adaptadas ao tratamento de tecidos oftálmicos. As composições oftálmicas da presente invenção incluirão um ou mais compostos de Fórmula (I) e um veículo farmaceuticamente aceitável para o(s) referido(s) composto(s). Podem ser utilizados vários tipos de veículos. Os veículos serão geralmente de natureza aquosa. As soluções aquosas são geralmente preferidas, tendo por base a facilidade de formulação e a capacidade dos pacientes para administrar facilmente tais composições por meio da instilação de uma ou duas gotas das soluções nos olhos afectados. No entanto, os compostos de Fórmula (I) podem também ser facilmente incorporados noutros tipos de composições, tais como suspensões, geles viscosos ou semi-viscosos ou outros tipos de composições sólidas ou semi-sólidas. As suspensões podem ser preferidas para os compostos de Fórmula (I) que sejam relativamente insolúveis em água. As composições oftálmicas da presente invenção podem também incluir vários outros ingredientes, tais como tampões, conservantes, co-solventes e agentes de desenvolvimento de viscosidade.

Um sistema tampão apropriado (e.g., fosfato de sódio, acetato de sódio ou borato de sódio) pode ser adicionado para evitar a variação do pH sob as condições de armazenagem.

Os produtos oftálmicos são tipicamente embalados em forma de multidose. São portanto necessários conservantes para evitar a contaminação microbiana durante a

85 661 ΕΡ Ο 682 664/ΡΤ 19 utilização. Conservantes adequados incluem cloreto de benzalcónio, timerosal, clorobutanol, metilparabeno, propilparabeno, álcool feniletílico, edetato dissódico, ácido sórbico, Onamer M ou outros agentes conhecidos dos peritos na arte. Tais conservantes são tipicamente empregues a um nível de 0,001% até 1,0% em peso.

Alguns dos compostos de Fórmula (I) podem ter solubilidade limitada em água e portanto podem requerer um tensioactivo ou outro co-solvente apropriado na composição. Esses co-solventes incluem: Polysorbate 20, 60 e 80; Pluronic F-68, F-84 e P-103; ciclodextrina; ou outros agentes conhecidos dos peritos na arte. Tais co-solventes são tipicamente empregues a um nível de 0,01% até 2% em peso.

Pode ser desejável uma viscosidade superior à de soluções aquosas simples, para aumentar a absorção ocular do composto activo, para diminuir a variabilidade na administração das formulações, para diminuir a separação física de componentes de uma suspensão ou emulsão da formulação e/ou para melhorar de outro modo a formulação oftálmica. Esses agentes de aumento de viscosidade incluem por exemplo álcool polivinílico, polivinilpirrolidona, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, hidroxietilcelulose, carboximetilcelulose, hidroxipropilcelulose ou outros agentes conhecidos dos peritos na arte. Tais agentes são tipicamente empregues a um nível de 0,01% até 2% em peso.

As composições farmacêuticas contendo um ou mais compostos de Fórmula (I) podem ser utilizadas para tratar pacientes afligidos ou propensos a vários tipos de danos celulares. As concentrações dos compostos nas composições dependerão de vários factores, incluindo a natureza das condições a tratar com as composições. No entanto, as composições conterão geralmente um ou mais dos compostos numa concentração desde cerca de 0,001 a cerca de 5 por cento em peso, com base no peso total da composição (“% em peso”). A via de administração (e.g., tópica, parentérica ou oral) e o regime de dosagem serão determinados por médicos experientes, com base em factores tais como a natureza exacta da condição a tratar, a severidade da condição, a idade e condição física geral do paciente, etc.

Como indicado acima, a utilização dos compostos de Fórmula (I) para prevenir ou reduzir danos em tecidos oftálmicos ao nível celular constitui um aspecto importante da presente invenção. As condições oftálmicas que podem ser tratadas incluem, mas não se limitam a, cataratas, retinopatias, doenças heredodegenerativas, degeneração macular, isquemia ocular, doenças neovasculares, glaucoma e danos associados com agressões a tecidos oftálmicos, tais como agressões por reperfusão de isquemia, agressões fotoquímicas

85 661 ΕΡ Ο 682 664 / ΡΤ 20 e agressões associadas com a cirurgia ocular, particularmente agressões à retina, cómea ou outros tecidos causadas por exposição à luz ou instrumentos cirúrgicos. Os compostos podem também ser utilizados como adjuvantes para cirurgia oftálmica, tal como por injecção vítrea ou subconjuntiva após cirurgia oftálmica. Os compostos podem ser utilizados para tratamento agudo de condições temporárias ou podem ser administrados cronicamente, especialmente no caso de doença degenerativa. Os compostos podem também ser utilizados profilacticamente, especialmente antes de cirurgia ocular ou de procedimentos oftálmicos não invasivos, ou de outros tipos de cirurgia. A utilização de soluções de irrigação fisiologicamente equilibradas como veículos farmacêuticos para os compostos de Fórmula (I), é preferida quando os compostos são administrados intraocularmente. Tal como aqui utilizado, o termo “solução de irrigação fisiologicamente equilibrada” significa uma solução que é adaptada para manter a estrutura física e função dos tecidos durante procedimentos médicos invasivos ou não invasivos. Este tipo de solução conterá tipicamente electrólitos, tais como sódio, potássio, cálcio, magnésio e/ou cloretos; uma fonte de energia, tal como dextrose; e um tampão para manter o pH da solução a, ou próximo de, níveis fisiológicos. São conhecidas várias soluções deste tipo (e.g., Solução de Ringer Láctica). BSS® Sterile Irrigating Solution e BSS Plus® Sterile Intraocular Irrigating Solution (Alcon Laboratories, Inc., Fort Worth, Texas, EUA), são exemplos de soluções de irrigação intraocular fisiologicamente equilibradas. O último tipo de solução é descrito na patente dos Estados Unidos N° 4,550,022 (de Garabedian, et al.), cujo conteúdo é incorporado na íntegra na presente descrição, como referência.

As doses utilizadas para qualquer dos fins acima descritos estarão geralmente entre cerca de 0,01 e cerca de 100 miligramas por quilograma de peso corporal (“mg/kg”), administradas de uma a quatro vezes por dia.

Formulações A formulação que se segue é apresentada para ilustrar mais completamente as composições da presente invenção, particularmente composições destinadas a administração tópica ao olho. Neste exemplo, o termo “Composto”, destina-se a representar qualquer um dos compostos de Fórmula (I). 21 85 661 ΕΡ Ο 682 664 / ΡΤ

Ingrediente Quantidade (% em peso) Finalidade Composto (base livre) LO Ingrediente activo Álcool polivinílico, USP 1,4 Excipiente Fosfato de sódio monobásico (mono-hidrato), USP 0,05 Agente tampão Fosfato de sódio dibásico (anidro), USP 0,15 Agente tampão Cloreto de sódio, USP 0,5 Agente tonicidade EDTA dissódico (Edetato dissódico), USP 0,01 Conservante Polysorbate 80, NF 0,05 Tensioactivo Solução de cloreto de benzalcónio, NF 0,01 +5 excesso Conservante Hidróxido de sódio, NF q.b. Ajustamento de pH Ácido clorídrico, NF q.b. Ajustamento de pH Água para injecção, USP q.b. 100 Veículo

Lisboa, ~6. £9R. 2001

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Rua das Flores, 74r4,s 1900-195 LISBOA

Claims (15)

1. (I) 85 661 ΕΡ Ο 682 664 / ΡΤ 1/5 REIVINDICAÇÕES 1. Composto <le fórmula A-Y-B em que A é um antioxidante seleccionado entre o grupo constituído por:

   em que R é alquilo Ci a Cf,; Y é (CH2)n ou CH=CH(CH2)n, em que n é um número inteiro compreendido entre 1 e 6; e B é seleccionado entre o grupo constituído por:

   85 661 ΕΡ Ο 682 664/ΡΤ 2/5 em que η’ é um número inteiro compreendido entre 1 e 6; Z é H, CN ou OH; X é F, Cl, I, Br, OH, OR’, SH, S(0)mR\ CN ou NO2, em que R’ é alquilo Ci a Cô e m é 0, 1 ou 2; e 0 é 0, 1, 2 ou 3, ou um sal seu derivado farmaceuticamente aceitável.
2. 2. Composição farmacêutica para prevenir ou aliviar danos dos tecidos de mamíferos, compreendendo uma quantidade de um composto com a fórmula seguinte, eficaz para diminuir os danos por radicais livres ou oxidativos e controlar os níveis de cálcio intracelular livre nos referidos tecidos: A-Y-B em que A é um antioxidante seleccionado de entre o grupo constituído por:

   a b c em que R é alquilo Q a Cô; Y é (CH2)n ou CH=CH(CH2)n, em que n é um número inteiro compreendido entre 1 e 6; e 85 061 ΕΡ 0 682 664 / PT 3/5 Β é seleccionado de entre:

   em que n’ é um número inteiro compreendido entre 1 e 6; Z é H, CN ou OH; X é F, Cl, I, Br, OH, OR’, SH, S(0)mR’, CN ou NO2, em que R’ é alquilo Ci a C6 e m é 0, 1 ou 2; e 0 é 0, 1, 2 ou 3, ou um sal seu derivado farmaceuticamente aceitável, e um veículo farmaceuticamente aceitável para o mesmo.
3. 3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou composição de acordo com a reivindicação 2, em que Z (se presente) é H ou OH; e X é F, Cl, CN, S(0)mR’ ou OR’ em que m é 1 ou 2 e R’ é alquilo Ci a C4.
4. 4. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou com a reivindicação 3, ou composição de acordo com a reivindicação 2 ou com a reivindicação 3, em que o antioxidante A é 85 661 ΕΡ Ο 682 664 / ΡΤ 4/5 R ΗΟ R

   R em que R é alquilo Ci a Có-
5. 5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 3 ou 4, ou composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 4, em que R é metilo.
6. 6. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou com qualquer uma das reivindicações 3 a 5, ou composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 5, em que B é

   COo (X)o
7. 7. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou com qualquer uma das reivindicações 3 a 6, ou composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 6, em que X é F, Cl, CN, S(0)mR’ ou OR’ em que m é 1 ou 2 e R’ é alquilo Ci a C4.
8. 8. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou com qualquer uma das reivindicações 3 a 7, ou composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 7, em que Y é (CH2)n e em que n é um número inteiro compreendido entre 1 e 6.
9. 9. Composto ou composição de acordo com a reivindicação 8, em que n é 1 ou 2.
10. 10. Composto ou composição de acordo com a reivindicação 9, em que o composto possui a fórmula seguinte: 85 661 ΕΡ Ο 682 664/ΡΤ 5/5 ΗΟ.

    F F
11. 11. Composto ou composição de acordo com a reivindicação 9, em que o composto possui a fórmula seguinte: ,F
12. 12. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 11, em que o veículo farmaceuticamente aceitável compreende uma solução de irrigação fisiologicamente equilibrada.
13. 13. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 3 a 11, ou composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 12, para utilização na prevenção ou alívio de danos em tecidos de mamíferos por diminuição de danos oxidativos ou provocados por radicais livres e controlo dos níveis de cálcio intracelular livre nos tecidos.
14. 14. Composto ou composição de acordo com a reivindicação 13 em que os tecidos de mamífero são tecidos oftálmicos.
15. 15. Composto ou composição de acordo com a reivindicação 14 em que a utilização é realizada por aplicação tópica, opcionalmente em conjunção com procedimento oftálmico cirúrgico. Lisboa, -4. f‘.W. 21.1 Por ALCON LABORATORIES, INC. - O AGENTE OFICIAL -