JPH0775595A - タキサン製造の中間体として有用な化合物のエナンチオマー混合物の酵素分割法 - Google Patents

タキサン製造の中間体として有用な化合物のエナンチオマー混合物の酵素分割法

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JPH0775595A
JPH0775595A JP6162145A JP16214594A JPH0775595A JP H0775595 A JPH0775595 A JP H0775595A JP 6162145 A JP6162145 A JP 6162145A JP 16214594 A JP16214594 A JP 16214594A JP H0775595 A JPH0775595 A JP H0775595A
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Ramesh N Patel
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Bristol Myers Squibb Co
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 本発明は、複素環式またはシクロアルキル基
を有するＣ−１３側鎖含有タキサンの製造中間体として
使用しうる、たとえばβ−ラクタム化合物のエナンチオ
マー混合物の酵素分割法を提供する。上記Ｃ−１３側鎖
含有タキサンは、医薬分野で有用である。 【構成】 本発明の酵素分割法は、出発物質エナンチオ
マー混合物を、立体選択的変換(たとえば立体選択的加
水分解、立体選択的エステル化、立体選択的トランスエ
ステル化または立体選択的脱ハロゲン化)を触媒しうる
酵素もしくは微生物と接触させて、該立体選択的変換を
行う工程から成ることを特徴とする。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、タキサン製造の中間体
として有用な化合物のエナンチオマー混合物の酵素分割
法、更に詳しくは、医薬分野で有用な複素環式またはシ
クロアルキル基を有するＣ−１３側鎖含有タキサンの製
造中間体として使用しうる、たとえばβ−ラクタム化合
物のエナンチオマー混合物の酵素分割法に関する。
【０００２】
【従来の技術と発明が解決しようとする課題】タキサン
はジテルペン化合物であって、医薬分野での有用性が知
られている。たとえば、Ｃ−１３側鎖に複素環式または
シクロアルキル基を有するタキソル類縁体は、抗癌剤と
して有用である。かかるタキソル類縁体は、半合成法を
介して、特にタキサンコア(taxane core)に対するβ−
ラクタムまたは開鎖中間体のカップリング反応でＣ−１
３の側鎖を形成することによって製造することができ
る。これら類縁体の立体化学は、その医薬活性に影響を
及ぼしうるので、当該分野において、中間体β−ラクタ
ムおよび開鎖化合物、並びに最終タキサン生成物の有効
な立体特異的製造を可能ならしめる方法が求められる。
【０００３】
【発明の構成と効果】本発明は、複素環式またはシクロ
アルキル基を有するＣ−１３側鎖含有タキサン製造の中
間体として有用な化合物のエナンチオマー混合物、好ま
しくはラセミ混合物の有効な分割法、すなわち、これら
化合物の立体特異的製造の有効な方法を提供するもので
ある。特に本発明は、式:
【化１３】 （式中、Ｒ1はヒドロキシル、ハロ、または−Ｏ−Ｃ
(Ｏ)−Ｒ4、ここでＲ4はアルキル、アルケニル、アルキ
ニル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニルま
たはヘテロシクロ;Ｒ2はヘテロシクロまたはシクロアル
キル;およびＲ3は水素、Ｒ4、−Ｃ(Ｏ)−ＯＲ4、または
−Ｃ(Ｏ)−Ｒ4、ここでＲ4は個別に上記Ｒ4で列挙した
基から選ばれるである)のエナンチオマー(Ｉａ)および
(Ｉｂ)からなり、両式ＩａおよびＩｂにおいてＲ1がＲ2
に対してシス位にあり、またはＲ1がＲ2に対してトラン
ス位にある混合物(Ｉ)の分割法であって、該混合物(Ｉ)
を、上記化合物(Ｉａ)または(Ｉｂ)の１種の非エナンチ
オマー体への立体選択的変換を触媒しうる酵素もしくは
微生物と接触させて、該立体選択的変換を行う工程から
成ることを特徴とする分割法を提供する。
【０００４】また本発明は、式: Ｒ2−Ｔa−Ｃ(Ｏ)−ＯＲ6 （ＩＶａ） および Ｒ2−Ｔb−Ｃ(Ｏ)−ＯＲ6 （ＩＶｂ） （式中、Ｔaは
【化１４】 およびＴbは
【化１５】 であるか;またはＴaは
【化１６】 およびＴbは
【化１７】 であり;Ｗは−ＮＨＲ3または−Ｎ3;Ｒ1はヒドロキシ
ル、ハロ、または−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ4、ここでＲ4はアル
キル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアル
キル、シクロアルケニルまたはヘテロシクロ;Ｒ2はヘテ
ロシクロまたはシクロアルキル;Ｒ3は水素、Ｒ4、−Ｃ
(Ｏ)−ＯＲ4、または−Ｃ(Ｏ)−Ｒ4、ここでＲ4は個別
に上記Ｒ4で列挙した基から選ばれる;およびＲ6は水
素、またはＲ4、ここでＲ4は個別に上記Ｒ4で列挙した
基から選ばれるである)のエナンチオマー(ＩＶａ)およ
び(ＩＶｂ)からなり、両式ＩＶａおよびＩＶｂにおいて
Ｒ1が基Ｗに対してエリトロ位にあり、またはＲ1が基Ｗ
に対してトレオ位にある混合物(ＩＶ)の分割法であっ
て、該混合物(ＩＶ)を、上記化合物(ＩＶａ)または(Ｉ
Ｖｂ)の１種の非エナンチオマー体への立体選択的変換
を触媒しうる酵素もしくは微生物と接触させて、該立体
選択的変換を行う工程から成ることを特徴とする分割法
を提供する。
【０００５】上記立体選択的変換の具体例としては、立
体選択的加水分解、立体選択的エステル化、立体選択的
トランスエステル化および立体選択的脱ハロゲン化、特
に立体選択的加水分解またはエステル化が挙げられる。
式ＩまたはＩＶの化合物の基、たとえばヒドロキシル基
は、本発明の分割法での使用に際して、必要に応じて保
護してもよく、またかかる基を必要に応じてその後に脱
保護してもよい。
【０００６】次に本発明方法について詳述する。シスエナンチオマー 式:
【化１８】 のシスエナンチオマー(Ｉａ(１))および(Ｉｂ(１))のペ
ア、すなわち、両式ＩａおよびＩｂにおいてＲ1がＲ2に
対してシス位にあるエナンチオマー(Ｉａ)および(Ｉｂ)
は、本発明の酵素法によって分離しうる。上記シスエナ
ンチオマーの混合物を、本発明方法に従って分割するこ
とが好ましい。
【０００７】トランスエナンチオマー 式：
【化１９】 のトランスエナンチオマー(Ｉａ(２))および(Ｉｂ(２))
のペア、すなわち、両式ＩａおよびＩｂにおいてＲ1が
Ｒ2に対してトランス位にあるエナンチオマー(Ｉａ)お
よび(Ｉｂ)は、本発明の酵素法によって分離しうる。
【０００８】エリトロエナンチオマー 式:
【化２０】 および
【化２１】 ;または
【化２２】 のエリトロエナンチオマー(ＩＶａ(１))および(ＩＶｂ
(１))または(ＩＶａ(２))および(ＩＶｂ(２))のペア、
すなわち、両式ＩＶａおよびＩＶｂにおいてＲ1が基Ｗ
に対してエリトロ位にあるエナンチオマー(ＩＶａ)およ
び(ＩＶｂ)は、本発明の酵素法によって分離しうる。
【０００９】式：
【化２３】 ；または
【化２４】 および
【化２５】 のトレオエナンチオマー(ＩＶａ(３))および(ＩＶｂ
(３))または(ＩＶａ(４))および(ＩＶｂ(４))のペア、
すなわち両式ＩＶａおよびＩＶｂにおいてＲ1が基Ｗに
対してトレオ位にあるエナンチオマー(ＩＶａ)および
(ＩＶｂ)は、本発明の酵素法によって分離しうる。
【００１０】混合物(Ｉ)の好ましい分割法 β−ラクタム(Ｉａ)および(Ｉｂ)のエナンチオマー混合
物からなる混合物(Ｉ)は好ましくは、立体選択的加水分
解、エステル化または脱ハロゲン化によって分割され
る。式：
【化２６】 のエナンチオマー（Ｉａ(１))および(Ｉｂ(１))からな
る混合物(Ｉ)を分割して、式:
【化２７】 の化合物(ＩＩａ(１))および(ＩＩｂ(１))からなる混合
物(ＩＩ)を形成し、該式中、Ｒ2はヘテロシクロまたは
シクロアルキル;およびＲ3は水素、Ｒ4、−Ｃ(Ｏ)−Ｏ
Ｒ4、または−Ｃ(Ｏ)−Ｒ4、ここでＲ4はアルキル、ア
ルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、シ
クロアルケニルまたはヘテロシクロである特に好ましい
方法は、(ｉ)Ｒ1が−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ4、ここでＲ4が個
別に前記Ｒ4で列挙した基から選ばれ;およびＲ1aまたは
Ｒ1bの一方がＲ1と同一で、他方がヒドロキシルである
場合、上記混合物(Ｉ)を水および／または有機アルコー
ルの存在下、混合物(Ｉ)の立体選択的加水分解を触媒し
うる酵素もしくは微生物と接触させて、上記混合物(Ｉ
Ｉ)を形成するか；または(ｉｉ)Ｒ1がヒドロキシル;お
よびＲ1aまたはＲ1bの一方がヒドロキシルで、他方がＲ
4−Ｃ(Ｏ)−Ｏ−、ここでＲ4が個別に前記Ｒ4で列挙し
た基から選ばれるものである場合、上記混合物(Ｉ)を
式: Ｒ4−Ｃ(Ｏ)−Ｌ （ＩＩＩ） （式中、Ｒ4は上記Ｒ1aまたはＲ1bの場合と同意義およ
びＬは脱離可能基である)の化合物(ＩＩＩ)の存在下、
混合物(Ｉ)の立体選択的エステル化を触媒しうる酵素も
しくは微生物と接触させて、上記混合物(ＩＩ)を形成す
るか；または(ｉｉｉ)Ｒ1がハロゲン原子;およびＲ1aま
たはＲ1bの一方がハロゲンで、他方がヒドロキシルであ
る場合、上記混合物(Ｉ)を水酸化物イオンドナーの存在
下、混合物(Ｉ)の立体選択的脱ハロゲン化を触媒しうる
酵素もしくは微生物と接触させて、上記混合物(ＩＩ)を
形成する工程の１つから成る。上記方法は本発明の他の
エナンチオマー混合物の分割に使用しうるが、上記シス
エナンチオマー(Ｉａ(１))および(Ｉｂ(１))の分割が好
ましい。
【００１１】混合物(ＩＶ)の好ましい分割法 混合物(ＩＶ)は好ましくは、立体選択的加水分解、エス
テル化、脱ハロゲン化またはトランスエステル化によっ
て分割される。式:
【化２８】 のエナンチオマー(ＩＶａ(１))および(ＩＶｂ(１))から
なる混合物(ＩＶ)を分割して、式：
【化２９】 の化合物（Ｖａ(１))および(Ｖｂ(１))からなる混合物
(Ｖ)を形成し、該式中、Ｒ2はヘテロシクロまたはシク
ロアルキル;Ｒ3は水素、Ｒ4、−Ｃ(Ｏ)−ＯＲ4、または
−Ｃ(Ｏ)−Ｒ4、ここでＲ4はアルキル、アルケニル、ア
ルキニル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニ
ルまたはヘテロシクロ;およびＲ6は水素またはＲ4、こ
こでＲ4は個別に前記Ｒ4で列挙した基から選ばれるもの
である特に好ましい方法は、(ｉ)Ｒ1が−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−
Ｒ4、ここでＲ4が個別に前記Ｒ4で列挙した基から選ば
れ;およびＲ1aまたはＲ1bの一方がＲ1と同一で、他方が
ヒドロキシルである場合、上記混合物(ＩＶ)を水および
／または有機アルコールの存在下、混合物(ＩＶ)の立体
選択的加水分解を触媒しうる酵素もしくは微生物と接触
させて、上記混合物(Ｖ)を形成するか；または(ｉｉ)Ｒ
1がヒドロキシル;およびＲ1aまたはＲ1bの一方がヒドロ
キシルで、他方がＲ4−Ｃ(Ｏ)−Ｏ、ここでＲ4が個別に
前記Ｒ4で列挙した基から選ばれるものである場合、上
記混合物(ＩＶ)を式: Ｒ4−Ｃ(Ｏ)−Ｌ （ＩＩＩ） （式中、Ｒ4は上記Ｒ1aまたはＲ1bの場合と同意義およ
びＬは脱離可能基である)の化合物(ＩＩＩ)の存在下、
混合物(ＩＶ)の立体選択的エステル化を触媒しうる酵素
もしくは微生物と接触させて、上記(Ｖ)を形成するか；
または(ｉｉｉ)Ｒ1がハロゲン原子;およびＲ1aまたはＲ
1bの一方がハロゲンで、他方がヒドロキシルである場
合、上記混合物(ＩＶ)を水酸化物イオンドナーの存在
下、混合物(ＩＶ)の立体選択的脱ハロゲン化を触媒しう
る酵素もしくは微生物と接触させて、上記混合物(Ｖ)を
形成する工程の１つから成る。
【００１２】さらに、式:
【化３０】 のエナンチオマー(ＩＶａ(１))および(ＩＶｂ(１))から
なる混合物(ＩＶ)を分割して、式:
【化３１】 の化合物(ＶＩａ(１))および(ＶＩｂ(１))からなる混合
物(ＶＩ)を形成し、該式中、Ｒ1はヒドロキシル、ハ
ロ、または−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ4、ここでＲ4はアルキル、
アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、
シクロアルケニルまたはヘテロシクロ;Ｒ2はヘテロシク
ロまたはシクロアルキル;およびＲ3は水素、Ｒ4、−Ｃ
(Ｏ)−ＯＲ4、または−Ｃ(Ｏ)−Ｒ4、ここでＲ4は個別
に前記Ｒ4で列挙した基から選ばれるものである特に好
ましい方法は、(ｉ)Ｒ6が水素；およびＲ6aまたはＲ6b
の一方が水素で、他方がＲ4、ここでＲ4が個別に前記Ｒ
4で列挙した基から選ばれるものである場合、上記混合
物(ＩＶ)を式: Ｒ4−ＯＨ (ＶＩＩ) （式中、Ｒ4は上記Ｒ6aまたはＲ6bの場合と同意義であ
る）の有機アルコール(ＶＩＩ)の存在下、混合物(ＩＶ)
の立体選択的エステル化を触媒しうる酵素もしくは微生
物と接触させて、上記混合物(ＶＩ)を形成するか;また
は(ｉｉ)Ｒ6がＲ4、ここでＲ4が個別に前記Ｒ4で列挙し
た基から選ばれ;およびＲ6aまたはＲ6bの一方がＲ6と同
一で、他方が水素である場合、上記混合物(ＩＶ)を水の
存在下、混合物(ＩＶ)の立体選択的加水分解を触媒しう
る酵素もしくは微生物と接触させて、上記混合物(ＶＩ)
を形成するか;または(ｉｉｉ)Ｒ6がＲ4、ここでＲ4が個
別に前記Ｒ4で列挙した基から選ばれ;およびＲ6aまたは
Ｒ6bの一方がＲ6と同一で、他方がＲ7、ここでＲ7がア
ルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロア
ルキル、シクロアルケニルまたはヘテロシクロ(但し、
Ｒ7はＲ6と同一でない)である場合、上記混合物(ＩＶ)
を式: Ｒ7−ＯＨ （ＶＩＩＩ） (式中、Ｒ7は前記と同意義である)の有機アルコール(Ｖ
ＩＩＩ)の存在下、混合物(ＩＶ)の立体選択的トランス
エステル化を触媒しうる酵素もしくは微生物と接触させ
て、上記混合物(ＶＩ)を形成する工程の１つから成る。
【００１３】上記方法は本発明の他のエナンチオマー混
合物の分割に使用しうるが、上記エナンチオマー(ＩＶ
ａ(１))および(ＩＶｂ(１))の分割が好ましい。このよ
うに製造された、化合物(ＩＩａ(１))および(ＩＩｂ
(１))などの化合物ペアは非エナンチオマーであって、
その後に分離して、光学的活性な、好ましくは光学的純
粋な化合物を生成しうる。９９％以上、特に９９.５％
の光学的純度が好ましい。また本発明は、他の異性体が
実質的に存在しない混合物(Ｉ)または(ＩＶ)の１化合物
を提供するものであり、該化合物は本発明方法によって
製造しうる。
【００１４】定義 本明細書で用いる各種語句の定義は、以下の通りであ
る。「立体選択的変換」とは、他に対する１エナンチオマ
ーの優先反応、すなわち、不斉エナンチオ選択的反応を
指称する。同様に、「立体選択的加水分解」、「立体選択
的エステル化」、「立体選択的脱ハロゲン化」および「立体
選択的トランスエステル化」とはそれぞれ、他に対する
１エナンチオマーの優先加水分解、エステル化、脱ハロ
ゲン化およびトランスエステル化を指称する。エナンチ
オマー化合物に関する「混合物」は、等量(ラセミ体)また
は異量のエナンチオマーを有する混合物を意味する。
「分割」は、部分的並びに好ましくは完全分割を意味す
る。
【００１５】「非エナンチオマー体」は、エナンチオマー
ペアの最初の化合物、すなわち、少なくとも１つの基が
変性されて、もはや元のエナンチオマーペアの他の化合
物の鏡像でなくなっている化合物の体系を意味する。
「酵素法」は、酵素もしくは微生物を用いる本発明方法を
意味する。単独または他の基の一部として用いる(以下
の定義において同様)「アルキル」、「アルカン」または「al
k」は、ノルマル鎖の炭素数１〜１５、好ましくは１〜６
の、必要に応じて置換された直鎖および分枝鎖炭化水素
基の両方を意味し、たとえばメチル、エチル、プロピ
ル、イソプロピル、ブチル、t−ブチル、イソブチル、
ペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、４,４
−ジメチルペンチル、オクチル、２,２,４−トリメチル
ペンチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、こ
れらの各種分枝鎖異性体等が挙げられる。置換基の具体
例としては、ハロ(特にクロロ)、トリハロメチル、アル
コキシ(たとえば２つのアルコキシ置換基がアセタール
を形成)、アリール、たとえば非置換アリール、アルキ
ル−アリールまたはハロアリール、シクロアルキル、た
とえば非置換シクロアルキルまたはアルキル−シクロア
ルキル、ヒドロキシまたは保護ヒドロキシ、カルボキシ
ル、アルキルオキシカルボニル、アルキルアミノ、アル
キルカルボニルアミノ、アミノ、アリールカルボニルア
ミノ、ニトロ、シアノ、チオールおよびアルキルチオの
群から選ばれる１個以上の基が包含される。
【００１６】「アルケニル」は、アルキルの場合に上述し
た必要に応じ置換された基であって、少なくとも１つの
炭素−炭素二重結合を有するものを意味する。置換基の
具体例は、１個以上の上記アルキル基、および／または
アルキル置換基として上述した１個以上の基である。
「アルキニル」は、アルキルの場合に上述した必要に応じ
置換された基であって、少なくとも１つの炭素−炭素三
重結合を有するものを意味する。置換基の具体例は、１
個以上の上記アルキル基、および／またはアルキル置換
基として上述した１個以上の基である。
【００１７】「シクロアルキル」は、１〜３個の環を含有
し、かつ環炭素数３〜１２、好ましくは３〜８の必要に
応じて置換された飽和環式炭化水素基を意味し、たとえ
ばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シ
クロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シク
ロデシル、シクロドデシル、およびアダマンチルが挙げ
られる。置換基の具体例は、１個以上の上記アルキル
基、および／またはアルキル置換基として上述した１個
以上の基である。「シクロアルケニル」は、シクロアルキ
ルの場合に上述した必要に応じ置換された基であって、
環系に少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有するも
のを意味する。置換基の具体例は、１個以上の上記アル
キル基、および／またはアルキル置換基として上述した
１個以上の基である。
【００１８】「アリール」または「ar」は、環部の炭素数６
〜１２の必要に応じて置換されたホモ環式芳香族基、好
ましくはモノ環式またはジ環式基を意味し、たとえばフ
ェニル、ビフェニル、ナフチル、置換フェニル、置換ビ
フェニルまたは置換ナフチルが挙げられる。置換基(好
ましくは３個以下)の具体例としては、アルキル、たと
えば非置換アルキル、ハロアルキルまたはシクロアルキ
ル−アルキル、ハロゲン、アルコキシ、たとえば非置換
アルコキシまたはハロアルコキシ、ヒドロキシ、アリー
ルオキシ、たとえばフェノキシ、Ｒ4−カルボニルオキ
シ(ここで、Ｒ4は前記と同意義)、アリル、シクロアル
キル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミド、た
とえばアルキルカルボニルアミノまたはアリールカルボ
ニルアミノ、アミノ、ニトロ、シアノ、アルケニル、チ
オール、Ｒ4−カルボニル(ここで、Ｒ4は前記と同意
義)、およびメチレンジオキシ(ここで、メチレン基は１
または２個の低級アルキル基、１または２個のアリール
アルケニル基、および／または１または２個のアルキル
チオ基で置換されてもよい)の群から選ばれる１個以上
の基が包含される。特に好ましいアリール基は、フェニ
ルおよび置換フェニル、殊に１個以上のヒドロキシル、
アルキルおよび／またはアルコキシ基で置換されたフェ
ニルである。
【００１９】「ハロゲン」または「ハロ」とは、塩素、臭
素、フッ素および沃素を指称する。「ヘテロシクロ」また
は「複素環式基」は、少なくとも１個の環に少なくとも１
個のヘテロ原子を有し、好ましくは各環に５または６個
の原子を有する、必要に応じて置換された完全飽和また
は不飽和の、モノ環式またはジ環式芳香族または非芳香
族炭化水素基を意味する。ヘテロシクロ基は好ましく
は、環中に１または２個の酸素原子、１または２個の硫
黄原子、および／または１〜４個の窒素原子を有し、ま
た１つの炭素またはヘテロ原子を介して、分子の残基に
結合しうる。置換基の具体例としては、ハロゲン、アル
コキシ、ヒドロキシ、アリール、たとえばフェニルまた
はハロフェニル、アルカノイルオキシ、アリールカルボ
ニルオキシ、たとえばベンゾイルオキシ、アルキル、た
とえばアラルキル、アルキルアミノ、アルカノイルアミ
ノ、アリールカルボニルアミノ、アミノ、ニトロ、シア
ノおよびチオールの群から選ばれる１個以上の基が包含
される。ヘテロシクロ基の具体例としては、チエニル、
フリル、ピロリル、ピリジル、イミダゾリル、ピロリジ
ニル、ピペリジニル、アゼピニル、インドリル、イソイ
ンドリル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾチアゾ
リル、ベンゾキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾ
キサジアゾリル、およびベンゾフラザニルが挙げられ
る。
【００２０】「ヒドロキシル保護基」は、遊離のヒドロキ
シル基(“保護されるヒドロキシル基")を保護しうる基
を意味し、該基は保護のために採用される反応の後に、
分子の残基を妨害せずに脱離することができるものであ
る。ヒドロキシル基の種々の保護基および保護のための
合成法については、Ｔ.Ｗ．グリーンの"有機合成におけ
る保護基"、ジョン・ウイレイ・アンド・サンズ、１９
８１年、またはフィザー・アンド・フィザーに記載され
ている。ヒドロキシル保護基の具体例としては、メトキ
シメチル、１−エトキシエチル、ベンジルオキシメチ
ル、(β−トリメチルシリルエトキシ)メチル、テトラヒ
ドロピラニル、２,２,２−トリクロロエトキシカルボニ
ル、t−ブチル(ジフェニル)シリル、トリアルキルシリ
ル、トリクロロメトキシカルボニルおよび２,２,２−ト
リクロロエトキシメチルが挙げられる。
【００２１】出発物質 本発明の分割法の出発物質は、後記実施例の記載に準じ
て得ることができ、あるいはＵ.Ｓ．特許出願Ｎo.０７
／８２２０１５(１９９２年１月１５日出願)に記載のも
のに類する方法によって得ることができる。出発混合物
(Ｉ)または(ＩＶ)はたとえば、化合物(Ｉa)および(Ｉb)
または(ＩＶa)および(ＩＶb)のジアステレオマーを含有
しうるが、かかる化合物は本発明の酵素分割法を行う前
に分離することが好ましい。
【００２２】好ましい化合物 式Ｉのシス化合物は、Ｃ−１３側鎖含有タキサンの製造
の中間体として用いる化合物において好ましい立体異性
配置を有する。３Ｒ,４Ｓ配置においてＲ1がアセチルオ
キシ、Ｒ2がフリルおよびＲ3が水素である化合物(Ｉa)
のそれに相当する、同じ絶対立体配置を有する混合物
(Ｉ)および(ＩＩ)の化合物が特に好ましい。
【００２３】式ＩＶのエリトロ化合物は、Ｃ−１３側鎖
含有タキサンの製造の中間体として用いる化合物におい
て好ましい立体異性配置を有する。２Ｒ,３Ｓ配置にお
いてＲ1がヒドロキシル、Ｒ2がフリル、Ｗが−ＮＨＲ3
およびＲ3が水素、およびＲ6が水素である化合物(ＩＶa
(１))のそれに相当する、同じ絶対立体配置を有する混
合物(ＩＶ)、(Ｖ)および(ＶＩ)の化合物が好ましい。混
合物(ＩＶ)において、Ｔa＝
【化３２】 およびＴb＝
【化３３】 が好ましい式Ｉのβ−ラクタムの分割が好ましい。
【００２４】本発明の化合物において、Ｒ1はアルカノ
イルオキシ、たとえば非置換アルカノイルオキシ(アセ
チルオキシなど)、またはヒドロキシが好ましく;Ｒ2は
フリルまたはチエニルが好ましく;およびＲ3は水素、フ
ェニル、置換フェニル、フェニルカルボニル、置換フェ
ニルカルボニル、アルキルカルボニル、アルケニルカル
ボニルまたはアルコキシカルボニル、たとえばt−ブト
キシカルボニルが好ましい。Ｒ6は水素またはＣ1〜6ア
ルキル、たとえばメチルが好ましい。
【００２５】酵素および微生物 本発明方法で用いる酵素もしくは微生物は、本明細書記
載の立体選択的変換を触媒しうる能力を有するものであ
れば、いずれの酵素もしくは微生物であってもよい。種
々の酵素、たとえばエステラーゼ、リパーゼおよびプロ
テアーゼは、起源または純度にかかわらず、本発明での
使用に好適である。酵素はたとえば、動物または植物酵
素もしくはそれらの混合物、微生物の細胞、粉砕細胞、
細胞の抽出物、あるいは合成起源の形状であってよい。
【００２６】微生物の使用に関して、本発明方法は、本
明細書記載の立体選択的変換を触媒しうる能力を有する
いずれの微生物細胞物質を使用しても行うことができ
る。細胞は、元のままの湿潤細胞あるいは凍結乾燥、噴
霧乾燥もしくは加熱乾燥細胞などの乾燥細胞の形状で使
用しうる。また細胞は、破壊細胞あるいは細胞抽出物な
どの処理細胞物質の形状でも使用しうる。酵素もしくは
微生物物質は、自由状態またはたとえば物理的吸着また
は閉じ込めによる支持体(たとえばポリマーレジン)への
固定状態で使用しうる。
【００２７】触媒酵素の源として好適な微生物の具体的
種としては、ムコール(Ｍucor)、エシェリヒア(Ｅscher
ichia)、スタフィロコッカス(Ｓtaphylococcus)、アグ
ロバクテリウム(Ａgrobacterium)、アシネトバクター
(Ａcinetobacter)、リゾプス(Ｒhizopus)、アスペルギ
ルス(Ａspergillus)、ノカルジア(Ｎocardia)、ストレ
プトミセス(Ｓtreptomyces)、トリコデルマ(Ｔrichoder
ma)、カンジダ(Ｃandida)、ロドトルラ(Ｒhodotorul
a)、トルロプシス(Ｔorulopsis)、プロテウス(Ｐroteu
s)、バシラス(Ｂacillus)、アルカリゲネス(Ａlcaligen
es)、シュードモナス(Ｐseudomonas)、ロードコッカス
(Ｒhodococcus)、ブレビバクテリウム(Ｂrevibacteriu
m)、ゲオトリクム(Ｇeotrichum)、エンテロバクター(Ｅ
nterobacter)、クロモバクテリウム(Ｃhromobacteriu
m)、アースロバクター(Ａrthrobacter)、ミクロバクテ
リウム(Ｍicrobacterium)、マイコバクテリウム(Ｍycob
acterium)、サッカロミセス(Ｓaccharomyces)、ペニシ
リウム(Ｐenicillium)、メタノバクテリウム(Ｍethanob
acterium)、ボトリテイス(Ｂotrytis)、シャトミウム
(Ｃhaetomium)、オピオボラス(Ｏphiobolus)、クラドス
ポリウム(Ｃladosporium)等が包含される。また遺伝学
的設計宿主細胞の使用も意図されている。
【００２８】本発明方法での使用に好適な特別の微生物
としては、クロモバクテリウム・ビスコスム(viscosu
m)、シュードモナス・エウリギノサ(aeuriginosa)、た
とえばＡＴＣＣ２５６１９、シュードモナス・フルオレ
センス(fluorescens)、シュードモナス・プチダ(putid
a)、たとえばＡＴＣＣ３１３０３、シュードモナス・オ
バリス(ovalis)、エシェリヒア・コリ(coli)、スタフィ
ロコッカス・オウレウス(aureus)、アルカリゲネス・フ
ェカリス(faecalis)、ストレプトミセス・グリセウス(g
riseus)、シュードモナス・セパシア(cepacia)、カンジ
ダ・ルゴサ(rugosa)、たとえばＡＴＣＣ１４８３０、ゲ
オトリクム・カンジダム(candidum)、たとえばＡＴＣＣ
３２３４５、ストレプトミセス・クラブリゲルス(clavu
ligerus)、ノカルジア・エルトロポリス(erthropoli
s)、ノカルジア・アステライデス(asteraides)、マイコ
バクテリウム・フレイ(phlei)、アグロバクテリウム・
ラジオバクター(radiobacter)、アスペルギルス・ニガ
ー(niger)、リゾプス・オリザ(oryzae)等が挙げられ
る。本発明方法の実施に際し、２種以上、並びに１種の
微生物を使用することができる。本明細書で用いる「Ａ
ＴＣＣ」とは、言及する微生物の寄託所である、メリー
ランド州２０８５２、ロックビル、パークラウン・ドラ
イブ１２３０１のザ・アメリカン・タイプ・カルチャー
・コレクション(the Ａmerican Ｔype ＣultureＣollec
tion)の受入番号を指称する。
【００２９】本発明の分割法は、使用する微生物の生長
の後に、またはそれと同時に行ってよく、すなわち、後
者の場合、その場で発酵と分割を行うことができる。微
生物の生長は、たとえば炭素および窒素源などの栄養素
および痕跡量の要素を含有する適当な培地の使用によ
り、通常の技術によって達成しうる。本発明での使用に
好適な、商業上入手しうる酵素の具体例としては、リパ
ーゼ、たとえばアマノ(Ａmano)ＰＳ−３０(シュードモ
ナス・セパシア)、アマノＧＣ−２０(ゲオトリクム・カ
ンジダム)、アマノＡＰＦ(アスペルギルス・ニガー)、
アマノＡＫ(シュードモナス属種)、シュードモナス・フ
ルオレセンス・リパーゼ(バイオキャタリスト・リミテ
ッド)、アマノリパーゼＰ−３０(シュードモナス属
種)、アマノＰ(シュードモナス・フルオレセンス)、ア
マノＡＹ−３０(カンジダ・シリンドラセア(cylindrace
a))、アマノＮ(リゾプス・ニベウス(niveus))、アマノ
Ｒ(ペニシリウム属種)、アマノＦＡＰ(リゾプス・オリ
ザ)、アマノＡＰ−１２(アスペルギルス・ニガー)、ア
マノＭＡＰ(ムコール・メイヘイ(meihei))、アマノＧＣ
−４(ゲオトリクム・カンジダム)、シグマ(Ｓigma)Ｌ−
０３８２およびＬ−３１２６(ブタ膵臓)、リパーゼＯＦ
(セプラコア(Ｓepracor))、エステラーゼ３００００(ジ
スト−ブロカーデ(Ｇist−Ｂrocarde))、ＫＩＤリパー
ゼ(ジスト−ブロカーデ)、リパーゼＲ(リゾプス属種、
アマノ)、シグマＬ−３００１(ホィート(Ｗheat)細
菌)、シグマＬ−１７５４(カンジダ・シリンドラセ
ア)、シグマＬ−０７６３(クロモバクテリウム・ビスコ
スム)およびアマノＫ−３０(アスペルギルス・ニガー)
が挙げられる。さらに、動物組織から誘導される酵素の
具体例としては、ブタ肝臓からのエステラーゼ、膵臓か
らのα−キモトリプシンおよびパンクレアチン、たとえ
ばブタ膵臓リパーゼ(シグマ)が挙げられる。本発明方法
の実施に際し、２種以上、並びに１種の酵素を使用しう
る。
【００３０】以下に示す反応工程において、本発明の好
ましい具体例をより詳しく説明する。なお、明瞭のた
め、これらの反応工程には、特定のシスエナンチオマー
混合物の分割を示すが、かかる記載の具体例が本発明の
他のエナンチオマー混合物の分割にも同様に適用される
ことが理解されるべきである。
【００３１】反応工程Ｉ:エステル化による分割
【化３４】 Ｒ1aまたはＲ1bの一方＝ＯＨ;他方＝
【化３５】
【化３６】 Ｒ1aまたはＲ1bの一方＝ＯＨ;他方＝
【化３７】
【化３８】 Ｒ6aまたはＲ6bの一方＝Ｈ;他方＝Ｒ4 反応工程ＩＩ ;トランスエステル化による分割
【化３９】 Ｒ6aまたはＲ6bの一方＝Ｒ6;他方＝Ｒ7 上記反応工程Ｉに示されるように、混合物(Ｉ)および
(ＩＶ)を立体選択的にエステル化することができ、また
反応工程ＩＩに示されるように、混合物(ＩＶ)を立体選
択的にトランスエステル化することができる。
【００３２】(Ａ)アシル化 式: Ｒ4−Ｃ(Ｏ)−Ｌ (ＩＩＩ) のアシル化剤(ＩＩＩ)の使用により、混合物(Ｉ)を選択
的にエステル化して混合物(ＩＩ)を形成し、また混合物
(ＩＶ)を選択的にエステル化して混合物(Ｖ)を形成する
ことができる。式ＩＩＩ中、Ｒ4はアルキル、アルケニ
ル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、シクロア
ルケニルまたはヘテロシクロ基であってよい。式ＩＩＩ
中の好ましいＲ4基は、アルキル基、たとえばＣ1〜6ア
ルキル基、特にメチルである。Ｌは、置換されてエステ
ル基を形成しうる脱離可能基である。Ｌ基の具体例とし
ては、ハロゲン原子、ヒドロキシル、アルコキシまたは
アルケニルオキシ基が挙げられる。好ましいＬ基はアル
ケニルオキシ基で、最も好ましくはＣ1〜6アルケニルオ
キシ基、たとえばＣＨ2＝ＣＨ−Ｏ−およびＣＨ2＝Ｃ
(ＣＨ3)−Ｏ−である。エステル化をもたらす式ＩＩＩ
のアシル化剤であればいずれも使用でき、酢酸イソプロ
ペニルおよび酢酸ビニルが特に好ましい。
【００３３】(Ｂ)アルコールによるエステル化 式: Ｒ4−ＯＨ (ＶＩＩ) の有機アルコール(ＶＩＩ)の使用により、混合物(ＩＶ)
を選択的にエステル化して、混合物(ＶＩ)を形成するこ
とができる。式ＶＩＩ中、Ｒ4はアルキル、アルケニ
ル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、シクロア
ルケニルまたはヘテロシクロ基であってよい。Ｒ4とし
て、アルキル基、特にＣ1〜6アルキル基が好ましい。
【００３４】(Ｃ)アルコールによるトランスエステル化 式: R7−ＯＨ (ＶＩＩＩ) のアルコール(ＶＩＩＩ)の使用により、混合物(ＩＶ)を
選択的にトランスエステル化して、混合物(ＶＩ)を形成
することができる。式ＶＩＩＩ中、Ｒ7はアルキル、ア
ルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、シ
クロアルケニルまたはヘテロシクロ基であってよく、但
し、Ｒ7はＲ6と同一でない。後に行うＲ7−Ｏ−Ｃ(Ｏ)
−基含有化合物とＲ6−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−基含有化合物の分
離を容易にするため、Ｒ7基とＲ6基はできるだけ異なっ
ていることが好ましい。すなわち、Ｒ7基がＲ6基に対し
て分子量の点で異なるか、あるいはその他としてＲ7基
がトランスエステル化したエステルに独特の物理的また
は化学的性質を付与する式ＶＩＩＩのアルコールを使用
することが好ましい。
【００３５】エステル化(アシル化)操作(Ａ)、並びにエ
ステル化およびトランスエステル化操作(Ｂ)および(Ｃ)
は、有機溶媒中で行うのが好ましい。これらの方法での
使用に好適な溶媒の具体例としては、１,１,２−トリク
ロロ−１,２,２−トリフルオロエタン、トルエン、シク
ロヘキサン、ベンゼン、ヘキサン、ヘプタン、イソオク
タン、オクタン、メチルエチルケトン、メチルイソブチ
ルケトン等が挙げられる。反応混合物に水を少量加える
ことが好ましい。反応混合物中に水が存在する場合、そ
の濃度は、溶媒の重量に対し約０.０１〜１％の範囲に
あるか、あるいは有機溶媒を飽和にする量に等しいかも
しくはそれ以下の濃度で水が存在することが好ましい。
水は最も好ましくは、溶媒の重量に対して約０.０５〜
０.５％の量で存在する。反応溶液は好ましくは、溶媒
１ml当り、約５〜２５０mgのエナンチオマー出発化合物
を含有する。これらの方法を実施するため、反応培地に
化合物(ＩＩＩ)、(ＶＩＩ)または(ＶＩＩＩ)を加える。
化合物(ＩＩＩ)と混合物(Ｉ)または(ＩＶ)の化合物の好
ましいモル比は約１:１〜４:１であり、化合物(ＶＩＩ)
と混合物(ＩＶ)の化合物の好ましいモル比は約１:１〜
４:１であり、また化合物(ＶＩＩＩ)と混合物(ＩＶ)の
化合物の好ましいモル比は約１:１〜４:１である。
【００３６】これらの操作で用いる酵素もしくは微生物
は好ましくは、リパーゼもしくはエステラーゼまたはこ
れらの酵素を産生しうる微生物である。これらの方法で
特に好ましい酵素もしくは微生物は、シュードモナス属
種からのリパーゼＰＳ−３０、シュードモナス属種から
のリパーゼＰ−３０、ペニシリウム属種からのリパーゼ
Ｒ、リパーゼＯＦ、リゾプス・ニベウスからのリパーゼ
Ｎ、アスペルギルス・ニガーからのリパーゼＡＰＦ、ゲ
オトリクム・カンジダムからのリパーゼＧＣ−２０、シ
ュードモナス属種からのリパーゼＡＫ、カンジダ属種か
らのリパーゼＡＹ−３０、およびシュードモナス・フル
オレセンス・リパーゼである。酵素はたとえば、その自
由状態または固定状態で使用しうる。本発明の好ましい
具体例は、酵素を適当な担体、たとえば珪藻土(多孔質
セライト・ハイフロ・スーパーセル(Ｃelite Ｈyflo Ｓ
upercel))、微孔質ポリプロピレン(エンカ・アキュレル
(Ｅnka Ａccurel、登録商標)ポリプロピレン粉末)、ま
たは非イオン性ポリマー吸着剤、たとえばローム・アン
ド・ハース・カンパニーからのアンバーライト(Ａmberl
ite、登録商標)ＸＡＤ−２(ポリエチレン)またはＸＡＤ
−７(ポリアクリレート)に吸着させる場合である。酵素
を固定して用いるとき、担体は酵素粒径を調節したり、
また有機溶媒中での使用時の酵素粒子の凝集を防止する
ことができる。固定はたとえば、酵素の水溶液をセライ
ト・ハイフロ・スーパーセルの存在下冷アセトンで沈殿
せしめた後、真空乾燥するか、または非イオン性ポリマ
ー吸着剤の場合、振とう器にて酵素溶液を吸着剤と共に
培養し、過剰の溶液を除去し、次いで減圧下酵素−吸着
剤レジンを乾燥することによって、達成することができ
る。酵素を反応溶液に加えて、溶媒１ml当り約５〜２０
０mg濃度の酵素となるようにするのが好ましい。できる
だけ最小量の酵素の使用が望ましいが、必要とされる酵
素量は、使用酵素の特異的活性に応じて変化するだろ
う。
【００３７】またこれらの方法は、立体選択的変換を触
媒しうる能力を持つ酵素含有の微生物細胞を使用しても
行うことができる。微生物を用いて分割を行うとき、こ
れらの操作は便宜上、所定の反応培地に、細胞と出発物
質のエナンチオマー混合物を加えることによって行う。
細胞は、元のままの細胞、凍結乾燥、噴霧乾燥あるいは
加熱乾燥細胞などの乾燥細胞、固定細胞、またはアセト
ンあるいはトルエンなどの有機溶剤で処理した細胞の形
状で使用しうる。また細胞は、破壊細胞あるいは細胞抽
出物などの処理細胞物質の形状でも使用しうる。さら
に、上述のセライト(Ｃelite、登録商標)またはアキュ
レル(Ａccurel、登録商標)ポリプロピレンに固定した細
胞抽出物も使用しうる。
【００３８】反応培地の培養温度は好ましくは、約４〜
６０℃で、最も好ましくは、約３０〜５０℃である。反
応時間は、使用酵素の量およびその特異的活性に応じて
適当に変化させることができる。反応時間は、反応温度
の上昇、および／または反応溶液に加える酵素量の増大
によって、短縮することができる。反応工程ＩＩＩ :加水分解による分割
【化４０】 Ｒ1aまたはＲ1bの一方＝
【化４１】 ;他方＝ＯＨ
【化４２】 Ｒ1aまたはＲ1bの一方＝
【化４３】 ;他方＝ＯＨ
【化４４】 Ｒ6aまたはＲ6bの一方＝Ｒ6;他方＝Ｈ
【００３９】上記反応工程ＩＩＩから明らかなように、
水および／または有機アルコールの使用により、混合物
(Ｉ)および(ＩＶ)を立体選択的に加水分解して、それぞ
れ混合物(ＩＩ)および(Ｖ)を形成することができ、また
水の使用により、混合物(ＩＶ)を立体選択的に加水分解
して、混合物(ＶＩ)を形成することができる。出発エナ
ンチオマー化合物においてＲ1、およびＲ6の一部を構成
するＲ4基はアルキルが好ましく、最も好ましくはＣ1〜
6アルキル、たとえばメチルである。有機アルコールと
して、式: Ｒ8−ＯＨ (ＩＸ) (式中、Ｒ8はアルキル、アルケニル、アルキニル、アリ
ール、シクロアルキル、シクロアルケニルまたはヘテロ
シクロ基であって、アルキル、たとえばメチルが好まし
い)の化合物(ＩＸ)を使用しうる。有機アルコール(Ｉ
Ｘ)の使用は、Ｒ4−Ｃ(Ｏ)−ＯＲ8の副生物エステルの
形成をもたらしうる。これらの酸性副生物が発生すると
きの安定したpＨを維持するために、水酸化アルカリ金
属などの塩基を加えてもよい。有機アルコール(ＩＸ)を
用いるとき、化合物(ＩＸ)と混合物(Ｉ)または(ＩＶ)の
化合物のモル比として約１:１〜４:１を付与する量で加
えるのが好ましい。
【００４０】これらの方法には、立体選択的加水分解を
触媒しうる水溶性酵素を用いることが好ましい。これら
の方法での使用に特に好適なものは、リパーゼおよびエ
ステラーゼ、並びにパンクレアチンおよびα−キモトリ
プシンである。これらの酵素の粗製または精製形状のい
ずれも、自由形状または支持体(たとえば、ＸＡＤ−
７、ＸＡＤ−２またはアキュレルレジンなどのレジン)
への固定形状で使用しうる。これらの方法において、特
に好ましいものは、シュードモナス属種(シュードモナ
ス・セパシア)からのリパーゼＰＳ−３０(アマノ・イン
ターナショナル)、シュードモナス属種からのリパーゼ
Ｐ−３０(アマノ)、リパーゼＧＣ−２０ゲオトリクム・
カンジダム(アマノ・インターナショナル)、リパーゼＮ
リゾプス・ニベウス(アマノ・インターナショナル)、リ
パーゼＡＰＦアスペルギルス・ニガー(アマノ・インタ
ーナショナル)、リパーゼＡＹ−３０カンジダ属種(アマ
ノ)、リパーゼＡＫシュードモナス属種(アマノ・インタ
ーナショナル)、シュードモナス・フルオレセンス・リ
パーゼ(バイオキャタリスト・リミテッド)、エステラー
ゼ３００００(ジスト−ブロカーデ)、リパーゼＯＦ(セ
プラコア)、ＫＩＤリパーゼ(ジスト−ブロカーデ)、リ
パーゼＲ(リゾプス属種、アマノ・インターナショナル)
およびブタ膵臓リパーゼ(シグマ・ケム)である。
【００４１】上記加水分解は、水性培地、たとえば緩衝
剤(たとえばリン酸塩緩衝剤)で処理した水性培地、また
は相溶性あるいは非相溶性の有機溶剤を含有する水性培
地で行うのが好ましい。たとえば、水に非相溶性の有機
相と水性相からなる二相溶媒系で反応を行うことができ
る。二相溶媒系の使用は、基質物質が水に不溶の場合の
かかる方法の効率を増大しうる。二相溶媒系の有機相用
の溶剤は、水に非相溶性の有機溶剤のいずれであっても
よく、たとえばトルエン、シクロヘキサン、キシレン、
トリクロロトリフルオロエタン等が挙げられる。水性相
は便宜上、水、好ましくは脱イオン水、または適当な緩
衝剤水溶液、特にリン酸塩緩衝剤水溶液の相である。二
相溶媒系は好ましくは、約１０〜９０容量％の有機相
と、約９０〜１０容量％の水性相から成る。反応溶液１
ml当り、約０.１〜１００mgの出発物質エナンチオマー
混合物の量、並びに加水分解される出発物質１mg当り、
約０.１〜１００mgの１種以上の酵素量が好ましい。
【００４２】反応混合物は、好ましくは水性水酸化アル
カリ金属、炭酸塩または重炭酸塩を用いて、約pＨ７.０
に調整され、かつ同pＨで維持されることが好ましい。
反応時間は、酵素、温度および酵素濃度に基づき選定さ
れてよい。約４〜６０℃の温度使用が好ましい。反応工程ＩＶ :脱ハロゲン化による分割
【化４５】 Ｒ1aまたはＲ1bの一方＝Ｘ;他方＝ＯＨ
【化４６】 Ｒ1aまたはＲ1bの一方＝Ｘ;他方＝ＯＨ
【００４３】上記反応工程ＩＶから明らかなように、混
合物(Ｉ)および(ＩＶ)を選択的に脱ハロゲン化して、そ
れぞれ混合物(ＩＩ)および(Ｖ)を形成することができ、
ここでＸはハロゲン原子を意味する。水酸化物イオンド
ナーとして、これらの反応をもたらしうるいずれの化合
物も使用しうる。かかる化合物の具体例は、水、水酸化
アルカリ金属もしくは水酸化アルカリ土類金属、たとえ
ば水酸化ナトリウムおよびカリウム、および第４水酸化
アンモニウム、たとえば式:(Ｒ9)4ＮＯＨ(式中、Ｒ9は
水素またはアルキルである)の化合物、特に水酸化カリ
ウムおよび水から選ばれる。水酸化物イオンドナーの添
加量は、水酸化物イオンドナーとエナンチオマー出発物
質の混合物(Ｉ)または(ＩＶ)のモル比として約１:１〜
４:１を付与する量が好ましい。
【００４４】水およびトルエンまたはヘキサンなどの有
機溶剤を含有する反応培地の使用が好ましい。エナンチ
オマー出発物質は好ましくは、溶剤１ｍｌ当り、約１〜
１００ｍｇの量で用いる。脱ハロゲン化反応で用いる酵
素もしくは微生物は好ましくは、シュードモナス、トリ
コデルマ、アシネトバクター、アルカリゲネス、ノカル
ジア、マイコバクテリウム、ロードコッカス、メタノバ
クテリウム、プロテウス属またはこれら微生物から誘導
される酵素から選ばれ、かつ脱ハロゲン化される出発物
質１ｍｇ当り、約０.１〜１０ｍｇ酵素の量で用いるこ
とが好ましい。約４〜５０℃の温度使用が好ましい。
【００４５】分離 立体選択的変換の生成物は、たとえば抽出、蒸留、結晶
化、カラムクロマトグラフィーなどの方法によって、単
離および精製することができる。本発明方法で形成され
る生成混合物の好ましい分離法は、液−液抽出による。
【００４６】実用性 タキサンは、式：
【化４７】 のタキサン炭素骨格を含有するジテルペン化合物であっ
て、該骨格はその環系にエチレン性不飽和を含有しう
る。特に興味のあるタキサンは、１１，１２−位がエチ
レン性結合を介して結合し、かつ１３−位が側鎖を有す
る上記炭素骨格を持つタキサンである。薬理学的活性な
タキサン、たとえばタキソル類縁体は、卵巣癌、黒色
腫、乳癌、結腸癌あるいは肺癌などの癌、および白血病
に苦しむ患者を治療する抗腫瘍剤として使用しうる。
【００４７】本発明方法によって得られる分割化合物は
特に、上記タキサン骨格上にＣ−１３側鎖を形成すると
きの中間体として有用である。かかる側鎖の付加は本質
的に、タキサン生成物に対し増大もしくはより望ましい
薬理学的活性を付与し、あるいは出発化合物に比べて、
増大もしくはより望ましい薬理学的活性を有するタキサ
ンへより容易に変換されるタキサン生成物を形成しう
る。本発明方法に従って分割された化合物は、側鎖形成
での使用に先立ち、変性されてもよい。たとえば、Ｗ基
としてアジド基Ｎ3を含有する分割化合物を還元剤で処
理して、置換されうるアミン基を形成することができ
る。
【００４８】側鎖形成のための方法、並びに該方法を用
いて形成されるタキサン生成物の具体例については、ヨ
ーロッパ特許出願Ｎo.５３４７０８;Ｕ.Ｓ．特許出願Ｎ
o.０８／０８０７０４(１９９３年６月２８日出願);Ｕ.
Ｓ．特許出願Ｎo.０８／０２９８１９(１９９３年３月
１１日出願);Ｕ.Ｓ．特許出願Ｎo.０７／９９６４５５
(１９９２年１２月２４日出願);Ｕ.Ｓ．特許出願Ｎo.０
８／０６２６８７(１９９３年５月２０日出願);Ｕ.Ｓ．
特許出願Ｎo.０７／９８１１５１(１９９２年１１月２
４日出願);およびＵ.Ｓ．特許出願Ｎo.０７／９９５４
４３(１９９２年１２月２３日出願)に記載のものが包含
される。本発明方法において適当または望ましい、反応
体または生成物の塩または溶媒化合物を使用したりある
いは製造することができる。
【００４９】
【実施例】次に実施例を挙げて、本発明方法をより具体
的に説明する、これらの実施例は単なる例示であって、
本発明の技術的範囲を制限するものでは決してない。 実施例１ 分割用基質,(±)−シス−３−アセトキシ−４−(２'−
フラニル)アゼチジン−２−オンの合成:− (Ａ)下式のＮ,Ｎ'−[(２'−フラニル)メチル]−２−フ
ランメタニミンの製造
【化４８】 温度計および機械式撹拌機を備えた３Ｌ二首丸底フラス
コに、２−フルアルデヒド(フルフラール、３１１ｍ
ｌ、３.７５モル、アルドリッチ(Ａldrich))および２−
プロパノール(ＩＰＡ、０.７５Ｌ、試薬級)を加える。
撹拌下、１.５Ｌの濃ＮＨ4ＯＨ(水溶液、〜３０％)(２
２.２モル)を一度に加える。最初の２時間で、発熱(〜
３５℃)が見られる。生成するベージュ色粉末を濾過(ウ
ォットマン(Ｗhatman)Ｎo.１)で単離し，、水(１.５Ｌ)
で洗い、３０℃にて一夜減圧乾燥する。これによって、
２５５.３ｇ(収率７６.１％)の標記Ａヒドロフラミドを
ベージュ色粉末(融点(ｍｐ)＝１１６〜１１７℃)で得
る。標記ＡヒドロフラミドのＲfは０.５[酢酸エチル(Ｅ
tＯＡc)／ヘキサン＝１:１、ＵＶ可視化]である。
【００５０】(Ｂ)(±)−シス−３−アセトキシ−４−
(２'−フラニル)アゼチジン−２−オンの製造 i)スタウジンガー(Ｓtaudinｇer)反応
【化４９】 式中、“Ａc"はアセチル(ＣＨ3−Ｃ(Ｏ)−)を意味し、
“(±)"はアゼチジン環上の３−および４−位置換基に
関し、シスエナンチオマーのラセミ体を意味する。温度
計、均圧滴下漏斗および機械式撹拌機を備えた２Ｌ三首
丸底フラスコに、上記Ａヒドロフラミド生成物(８０.４
８ｇ、０.３００モル)および酢酸エチル(１.０Ｌ、試薬
級)を加える。この混合物をアルゴン下４℃に冷却し、
この時点でトリエチルアミン(５０.２ｍｌ、０.３６０
モル、アルドリッチ)を一度に加える。滴下漏斗にアセ
トキシアセチルクロリド(３７.０ｍｌ、０.３４１モ
ル、アルドリッチ)と酢酸エチル(０.５Ｌ、試薬級)を充
填し、かかる溶液を１時間にわたって滴下する。さらに
２時間後、撹拌を止め、反応容器をシールして(パラフ
ィルム(Ｐarafilm)“Ｍ",登録商標を使用)、冷室(４℃)
に移し１５時間放置する。不均質反応混合物を撹拌下２
２℃まで加温せしめ(〜１時間)、４.０Ｌ分液漏斗に移
し、飽和ＮＨ4Ｃl水溶液(５００ｍｌ)で洗う。両層をガ
ラスミクロファイバー濾紙(ウォットマン)で濾過して、
微細な黒色浮遊を除去する。粒状物質の除去は、相分離
を助成する。濾過ケーキを酢酸エチル(５０ｍｌ)でリン
スし、濾液の元の分液漏斗へ移し、水性層(pＨ＝６.３)
を除去する。次いで有機層を、飽和ＮＨ4Ｃl水溶液(２
５０ｍｌ、pＨ＝５.９)、飽和ＮaＨＣＯ3水溶液(４００
ｍｌ、pＨ＝８.６)および飽和ＮaＣl水溶液(４００ｍ
ｌ、pＨ＝７.０)で洗う。有機層をガラスミクロファイ
バー濾紙(ウォットマン)で濾過し、２つの等量部(各７
５０ｍｌ)に分ける。これらの溶液をそのまま、次工程
に用いる。
【００５１】ii)脱保護
【化５０】 それぞれ１０％パラジウム／活性炭(２×６.００ｇ、ア
ルドリッチ)を含有する２つの２.０Ｌパール(Ｐarr)フ
ラスコに、上記Ｂ／(i)の有機層(２×７５０ｍｌ)を加
える。この混合物を周囲温度にて、水素(４気圧)で１日
間処理する。触媒をセライトパッドで濾去し、濾過ケー
キを酢酸エチル(１００ｍｌ)でリンスする。濾液を４.
０Ｌ分液漏斗に移し、１Ｎ−ＨＣl(５００ｍｌ、２５０
ｍｌ、pＨ＝０.７６)で２回洗う。水性洗液をコンバイ
ンし、酢酸エチル(５００ｍｌ)で再抽出し、有機層をコ
ンバインし、飽和ＮaＨＣＯ3水溶液(４００ｍｌ、pＨ＝
８.３４)および飽和ＮaＣl水溶液(４００ｍｌ、pＨ＝
７.５)で洗う。有機層をＭｇＳＯ4(〜１００ｇ)上で乾
燥し、脱色活性炭(３０ｇ、ＢＤＨ)で処理する。１５分
後、混合物をセライトパッドで濾過し、１６０ｍｌに減
圧濃縮し、一夜(４℃)冷却し、沈澱した固体を、濾紙
(ウォットマンＮo.１)による濾過で単離する。濾過ケー
キをそれぞれ１００ｍｌのジエチルエーテルおよびヘキ
サンでリンスし、減圧乾燥して、３５.９８ｇ(上記ヒド
ロフラミドからの収率６１.４％)の標記化合物,(±)−
シス−３−アセトキシ−４−(２'−フラニル)アゼチジ
ン−２−オンを白色針状晶で得る(ｍｐ１１８〜１１９
℃)。ＨＰＬＣ定量分析により、母液に８.１０ｇの標記
化合物が認められる。従って、上記ヒドロフラミドから
の活性収率は７５.３％であった。
【００５２】実施例２ (±)−シス−３−アセトキシ−４−(２'−フラニル)ア
ゼチジン−２−オンの立体選択的加水分解:−本例で用
いる基質は、実施例１の標記化合物と同様に製造した、
式:
【化５１】 のラセミ体(Ｉ)である。また、本例の立体選択的加水分
解の生成物は、２種の化合物、すなわち、式:
【化５２】 の(＋)−シス−３−アセトキシ−４−(２'−フラニル)
アゼチジン−２−オン(ＩＩa);および式：
【化５３】 の（−)−シス−３−ヒドロキシ−４−(２'−フラニル)
アゼチジン−２−オン(ＩＩb)である。立体選択的加水
分解は、以下の手順で行った。すなわち、１Ｌの２５ｍ
Ｍリン酸カリウム緩衝剤(pＨ７.０)に、１０ｇの基質と
１００ｇのシュードモナス属種からのリパーゼＰＳ−３
０(アマノ・インターナショナル・カンパニー)を含有す
る反応混合物を調製する。反応は、３０℃にて１５０回
転数／分(ＲＰＭ)の撹拌で行う。反応中、pＨスタット
(stat)を用い、５Ｎ−ＮaＯＨで反応混合物のpＨを７.
０に維持する。加水分解反応は、高圧液体クロマトグラ
フィー(ＨＰＬＣ)で監視する。定期的に、サンプル(１
ｍｌ)を採取し、１０ｍｌの酢酸エチルで抽出する。酢
酸エチル層を分離し、蒸発乾固し、基質および生成物濃
度並びに生成物の光学的純度をＨＰＬＣ(以下に記載)で
分析する。得られる結果を、下記表１に示す。
【００５３】
【表１】 反応時間 変換率 収 率 生成物IIaの (時間) (生成物IIb、％) (生成物IIa、％) 光学的純度(％) ４ １８ ８２ − ８ ３４ ６６ − １２ ４６ ５４ − １６ ５１ ４９ ＞９９.４操作におけるキラルＨＰＬＣ分析 上記反応中、定期的に１ｍｌサンプルを採取し、５０ｍ
ｌねじ込キャップチューブに入った１０ｍｌの酢酸エチ
ルで抽出する。酢酸エチル層(５ｍｌ)を取出し、穏やか
な窒素流下蒸発する。残渣を２ｍｌの移動相(ヘキサン
／無水エタノール＝９５:５)に溶解する。この移動相を
０.２μｍリデックス(Ｌydex)フィルターに通し、約１
ｍｌの濾液を、ＨＰＬＣ分析用のクリンプバイアルに移
す。 ＨＰＬＣ条件: ヒュレット・パッカード(Ｈewlett Ｐackard)１０９０
クロマトグラム カラム:キラルカル(Ｃhiralcal)ＡＤ 移動相:ヘキサン／無水エタノール＝９５:５ カラム温度:周囲温度 流速:１ｍｌ／分 検波:２１０ｎｍ ラセミアセテートの２エナンチオマーの保持時間はそれ
ぞれ２３.２分と２８.９分;ラセミアルコールの２エナ
ンチオマーの保持時間はそれぞれ６３.９分と７４.８分
【００５４】実施例３ 固定したリパーゼＰＳ−３０酵素を用いる(±)−シス−
３−アセトキシ−４−(２'−フラニル)アゼチジン−２
−オンの立体選択的加水分解:−用いる基質、および得
られる生成物は、上記実施例２のものである。酵素の固定 固定操作のため、３種の担体(支持体)、すなわち、ＸＡ
Ｄ−７(アンバーライトＸＡＤ−７、非イオン性ポリマ
ー吸着剤、２０〜６０メッシュポリアクリレートレジ
ン)、ＸＡＤ−２(アンバーライトＸＡＤ−２、非イオン
性ポリマー吸着剤、２０〜６０メッシュポリスチレンレ
ジン)およびアキュレルＰＰ(ポリプロピレンレジン、２
００〜４００ミクロン)を用いる。粗アマノＰＳ−３０
リパーゼ(１０ｇ)を２５ｍｌの蒸留水に溶解し、１００
０ＲＰＭで１０分間遠心分離して、透明上層液を得る。
２５ｍｌバイアル中の担体(１.３ｇ)をメタノールで５
回洗い、これをフラスコ内の酵素溶液に加え、回転式振
盪器にて室温で穏やかに撹拌する。酵素の担体への吸着
は、リパーゼ検定(基質としてシグマのオリーブ油エマ
ルジョン)および濾液中に残るプロティンで、定期的に
チェックした。ＸＡＤ−７、ＸＡＤ−２およびアキュレ
ルレジンを用いた場合、それぞれ６８％、７１％および
９８％の吸着効率が得られた。固定終了後(２０〜２４
時間)、担体−酵素スラリーをミリポアフィルターで濾
過し、担体を約３００ｍｌの蒸留水で洗う。次いで、固
定リパーゼを含有する担体を、真空オーブンにて室温で
乾燥する。
【００５５】固定酵素の使用 実施例２に記載の酵素加水分解反応を行うため、固定酵
素を用いる。３０ｍｌの２５ｍＭリン酸カリウム緩衝剤
(pＨ７.０)に、実施例２に記載の基質３００ｍｇ、およ
び上記製造した固定リパーゼＰＳ−３０(３００ｍｇ)を
含有する反応混合物を調製する。反応は実施例２の記載
に従って行う。得られる結果を下記表２に示す。
【表２】 固定用 反応時間 変換率 収 率 生成物IIaの支持体 (時間) (生成物IIb、％) (生成物IIa、％) 光学的純度(％) XAD-2 ３ ５３ ４７ ９９.０ XAD-7 ３ ５４ ４６ ９９.３ アキュレル ３ ５１ ４９ ９９.５ pp
【００５６】実施例４ (±)−シス−３−アセトキシ−４−(２'−フラニル)ア
ゼチジン−２−オンの立体選択的加水分解:−用いる基
質、および得られる生成物は、上記実施例２のものであ
る。本例において、種々の源からのリパーゼを用いて、
多くの反応を行った。各反応において、反応混合物は２
０ｍｌの２５ｍＭリン酸塩緩衝剤(pＨ７.０）中に、１
ｇの粗リパーゼおよび２００ｍｇの基質を含有する。反
応は、ｐＨ７.０のpＨスタットにて２５℃で行う。得ら
れる結果を下記表３に示す。
【００５７】
【表３】
【００５８】実施例５ (±)−シス−３−ヒドロキシ−４−(２'−フラニル)ア
ゼチジン−２−オンの立体選択的アセチル化(エステル
化):−本例で用いる基質は、対応するラセミアセテート
の化学的加水分解(Ｎa2ＣＯ3使用)で製造される、式:
【化５４】 のラセミ体である。また、本例の立体選択的アセチル化
の生成物は、２種の化合物、すなわち、式:
【化５５】 の(＋)−シス−３−ヒドロキシ−４−(２'−フラニル)
アゼチジン−２−オン(ＩＩa);および式：
【化５６】 の（−)−シス−３−アセトキシ−４−(２'−フラニル)
アゼチジン−２−オン(ＩＩb)である。
【００５９】本例において、種々の源からのリパーゼを
用いて多くの反応を行い、立体選択的アセチル化を達成
した。各反応において、反応混合物は２５ｍｌのトルエ
ン中に、１ｇの粗リパーゼと１００ｍｇの基質、８００
ｍｇの酢酸イソプロペニル、および０.０５％水を含有
する。反応は振盪器にて３０℃および１００ＲＰＭで行
う。生成物および基質をＨＰＬＣで分析する。得られる
結果を下記表４に示す。
【表４】
【００６０】実施例６ 立体選択的加水分解(各種酵素の評価):−用いる基質、
および得られる生成物は、上記実施例２のものである。
各立体選択的加水分解反応の場合、２０ｍｌの２５ｍＭ
リン酸カリウム緩衝剤(pＨ７.０)に、２００ｍｇの基質
および１ｇの酵素(下記表５の酵素参照)を含有する反応
混合物を調製する。反応は、３０℃、１５０ＲＰＭ撹拌
で行う。反応中、pＨスタットを用い、１Ｎ−ＮaＯＨ
で、反応混合物のpＨを７.０に維持する。加水分解反応
は、高圧液体クロマトグラフィーで監視する。定期的
に、サンプル(１ｍｌ)を採取し、４ｍｌの酢酸エチルで
抽出する。酢酸エチル層を分離し、蒸発乾固し、基質お
よび生成物濃度並びに生成物の光学的純度をＨＰＬＣで
分析する。得られる結果を表５に示す。
【００６１】
【表５】
【００６２】実施例７ 固定リパーゼＰＳ−３０による(±)−シス−３−アセト
キシ−４−(２'−フラニル)アゼチジン−２−オンの分
割の速度論:−用いる基質、および得られる生成物は、
上記実施例２のものと同じである。８.５Ｌの２５ｍＭ
リン酸カリウム緩衝剤(pＨ７.０)に、８５ｇの基質、お
よび８５ｇのシュードモナス属種からのリパーゼＰＳ−
３０(アマノ・インターナショナル・カンパニー)を含有
する反応混合物を調製する。リパーゼＰＳ−３０はアキ
ュラルポリプロピレンに固定して、反応混合物に使用す
る。反応は３０℃、１５０ＲＰＭ撹拌で行う。反応中、
pＨスタットを用い５Ｎ−ＮaＯＨで、反応混合物のpＨ
を維持する。加水分解反応は、高圧液体クロマトグラフ
ィーで監視する。定期的に、サンプル(１ｍｌ)を採取
し、４ｍｌの酢酸エチルで抽出する。酢酸エチル層を分
離し、蒸発乾固し、基質および生成物濃度並びに生成物
の光学的純度をＨＰＬＣで分析する。得られる結果を下
記表６に示す。
【００６３】
【表６】 表６中、“Ａ−アセテート"は式:
【化５７】 で示され、“Ｂ−アセテート"は式:
【化５８】 で示され、“Ａ−アルコール"は式:
【化５９】 で示され、“Ｂ−アルコール"は式:
【化６０】 で示される。
【００６４】実施例８ (±)−シス−３−ヒドロキシ−４−(２'−フラニル)ア
ゼチジン−２−オンの立体選択的エステル化:−本例に
おいて、用いる基質、および得られる生成物は、実施例
５のものと同じである。１０ｍｌのメチルエチルケトン
(ＭＥＫ)に、２０ｇの基質、１ｇの酵素(下記表７参照)
およびアシルドナーとしての酢酸イソプロペニル０.４
ｍｌを含有する反応混合物を調製する。反応は３０℃、
１５０ＲＰＭ撹拌で行う。エステル化反応を高圧液体ク
ロマトグラフィー(以下に記載)で監視して、基質および
生成物濃度並びに生成物の光学的純度を測定する。得ら
れる結果を下記表７に示す。
【表７】
【００６５】ＨＰＬＣ方法 上記実施例において、基質および生成物をＨＰＬＣで分
析する。ノバ・パック(Ｎova Ｐak)Ｃ１８逆相カラム
(３.９×１５０mm)を用いる。移動相は１５％アセトニ
トリル／水で、流速は１ｍｌ／分である。検波は２２７
ｎｍである。アルコールおよびアセテートの保持時間は
それぞれ、２.７分および１４.９分である。キラルアセ
テートの光学純度は、キラルＨＰＬＣで測定する。キラ
ルパック(Ｃhiralpak)ＡＳカラムを用いる。移動相はヘ
キサン／エタノール(９６:４)からなり、周囲温度にて
１ｍｌ／分で用いる。検波は２１０ｎｍである。ラセミ
アセテートの２エナンチオマーの保持時間は、それぞれ
２３.７分と２０.９分である。ラセミアルコールの２エ
ナンチオマーの保持時間は、それぞれ６３.９分と７４.
８分である。

Claims (14)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 式： 【化１】 （式中、Ｒ1はヒドロキシル、ハロ、または−Ｏ−Ｃ
    (Ｏ)−Ｒ4、ここでＲ4はアルキル、アルケニル、アルキ
    ニル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニルま
    たはヘテロシクロ;Ｒ2はヘテロシクロまたはシクロアル
    キル;およびＲ3は水素、Ｒ4、−Ｃ(Ｏ)−ＯＲ4、または
    −Ｃ(Ｏ)−Ｒ4、ここでＲ4は個別に上記Ｒ4で列挙した
    基から選ばれるである)のエナンチオマー(Ｉａ)および
    (Ｉｂ)からなり、両式ＩａおよびＩｂにおいてＲ1がＲ2
    に対してシス位にあり、またはＲ1がＲ2に対してトラン
    ス位にある混合物(Ｉ)の分割法であって、該混合物(Ｉ)
    を、上記化合物(Ｉａ)または(Ｉｂ)の１種の非エナンチ
    オマー体への立体選択的変換を触媒しうる酵素もしくは
    微生物と接触させて、該立体選択的変換を行う工程から
    成ることを特徴とする分割法。
  2. 【請求項２】 立体選択的変換が、立体選択的加水分解
    および立体選択的エステル化から選ばれる請求項１に記
    載の分割法。
  3. 【請求項３】 式： 【化２】 のエナンチオマー(Ｉａ(１))および(Ｉｂ(１))からなる
    混合物(Ｉ)を分割して、式： 【化３】 の化合物(ＩＩａ(１))および(ＩＩｂ(１))からなる混合
    物(ＩＩ)を形成する分割法であって、 (ｉ)Ｒ1が−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ4、ここでＲ4が個別に前記
    Ｒ4で列挙した基から選ばれ;およびＲ1aまたはＲ1bの一
    方がＲ1と同一で、他方がヒドロキシルである場合、上
    記混合物(Ｉ)を水および／または有機アルコールの存在
    下、混合物(Ｉ)の立体選択的加水分解を触媒しうる酵素
    もしくは微生物と接触させて、上記混合物(ＩＩ)を形成
    するか；または (ｉｉ)Ｒ1がヒドロキシル;およびＲ1aまたはＲ1bの一方
    がヒドロキシルで、他方がＲ4−Ｃ(Ｏ)−Ｏ−、ここで
    Ｒ4が個別に前記Ｒ4で列挙した基から選ばれるものであ
    る場合、上記混合物(Ｉ)を式: Ｒ4−Ｃ(Ｏ)−Ｌ （ＩＩＩ） （式中、Ｒ4は上記Ｒ1aまたはＲ1bの場合と同意義およ
    びＬは脱離可能基である)の化合物(ＩＩＩ)の存在下、
    混合物(Ｉ)の立体選択的エステル化を触媒しうる酵素も
    しくは微生物と接触させて、上記混合物(ＩＩ)を形成す
    るか；または (ｉｉｉ)Ｒ1がハロゲン原子;およびＲ1aまたはＲ1bの一
    方がハロゲンで、他方がヒドロキシルである場合、上記
    混合物(Ｉ)を水酸化物イオンドナーの存在下、混合物
    (Ｉ)の立体選択的脱ハロゲン化を触媒しうる酵素もしく
    は微生物と接触させて、上記混合物(ＩＩ)を形成する工
    程の１つから成る請求項１に記載の分割法。
  4. 【請求項４】 式: 【化４】 （式中、Ｒ1はアルカノイルオキシまたはヒドロキシ;Ｒ
    2はフリルまたはチエニル；およびＲ3は水素、フェニル
    または置換フェニルである)の化合物(Ｉａ(１))および
    (Ｉｂ(１))からなる混合物(Ｉ)を使用する請求項３に記
    載の分割法。
  5. 【請求項５】 リパーゼを使用する請求項４に記載の分
    割法。
  6. 【請求項６】 得られる非エナンチオマー化合物をさら
    に、分離工程で分離する請求項１に記載の分割法。
  7. 【請求項７】 分離工程が、抽出、蒸留、結晶化または
    カラムクロマトグラフィー工程である請求項６に記載の
    分割法。
  8. 【請求項８】 該分割法の生成物をさらに、Ｃ−１３側
    鎖含有タキサンの製造に使用する請求項１に記載の分割
    法。
  9. 【請求項９】 式: Ｒ2−Ｔa−Ｃ(Ｏ)−ＯＲ6 （ＩＶａ） および Ｒ2−Ｔb−Ｃ(Ｏ)−ＯＲ6 （ＩＶｂ） （式中、Ｔaは 【化５】 およびＴbは 【化６】 であるか;またはＴaは 【化７】 およびＴbは 【化８】 であり;Ｗは−ＮＨＲ3または−Ｎ3;Ｒ1はヒドロキシ
    ル、ハロ、または−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ4、ここでＲ4はアル
    キル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアル
    キル、シクロアルケニルまたはヘテロシクロ;Ｒ2はヘテ
    ロシクロまたはシクロアルキル;Ｒ3は水素、Ｒ4、−Ｃ
    (Ｏ)−ＯＲ4、または−Ｃ(Ｏ)−Ｒ4、ここでＲ4は個別
    に上記Ｒ4で列挙した基から選ばれる;およびＲ6は水
    素、またはＲ4、ここでＲ4は個別に上記Ｒ4で列挙した
    基から選ばれるである)のエナンチオマー(ＩＶａ)およ
    び(ＩＶｂ)からなり、両式ＩＶａおよびＩＶｂにおいて
    Ｒ1が基Ｗに対してエリトロ位にあり、またはＲ1が基Ｗ
    に対してトレオ位にある混合物(ＩＶ)の分割法であっ
    て、該混合物(ＩＶ)を、上記化合物(ＩＶａ)または(Ｉ
    Ｖｂ)の１種の非エナンチオマー体への立体選択的変換
    を触媒しうる酵素もしくは微生物と接触させて、該立体
    選択的変換を行う工程から成ることを特徴とする分割
    法。
  10. 【請求項１０】 式: 【化９】 のエナンチオマー(ＩＶａ(１))および(ＩＶｂ(１))から
    なる混合物(ＩＶ)を分割して、式： 【化１０】 の化合物（Ｖａ(１))および(Ｖｂ(１))からなる混合物
    (Ｖ)を形成する分割法であって、 (ｉ)Ｒ1が−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ4、ここでＲ4が個別に前記
    Ｒ4で列挙した基から選ばれ;およびＲ1aまたはＲ1bの一
    方がＲ1と同一で、他方がヒドロキシルである場合、上
    記混合物(ＩＶ)を水および／または有機アルコールの存
    在下、混合物(ＩＶ)の立体選択的加水分解を触媒しうる
    酵素もしくは微生物と接触させて、上記混合物(Ｖ)を形
    成するか；または (ｉｉ)Ｒ1がヒドロキシル;およびＲ1aまたはＲ1bの一方
    がヒドロキシルで、他方がＲ4−Ｃ(Ｏ)−Ｏ−、ここで
    Ｒ4が個別に前記Ｒ4で列挙した基から選ばれるものであ
    る場合、上記混合物(ＩＶ)を式: Ｒ4−Ｃ(Ｏ)−Ｌ （ＩＩＩ） （式中、Ｒ4は上記Ｒ1aまたはＲ1bの場合と同意義およ
    びＬは脱離可能基である)の化合物(ＩＩＩ)の存在下、
    混合物(ＩＶ)の立体選択的エステル化を触媒しうる酵素
    もしくは微生物と接触させて、上記混合物(Ｖ)を形成す
    るか；または (ｉｉｉ)Ｒ1がハロゲン原子;およびＲ1aまたはＲ1bの一
    方がハロゲンで、他方がヒドロキシルである場合、上記
    混合物(ＩＶ)を水酸化物イオンドナーの存在下、混合物
    (ＩＶ)の立体選択的脱ハロゲン化を触媒しうる酵素もし
    くは微生物と接触させて、上記混合物(Ｖ)を形成する工
    程の１つから成る請求項９に記載の分割法。
  11. 【請求項１１】 式: 【化１１】 のエナンチオマー(ＩＶａ(１))および(ＩＶｂ(１))から
    なる混合物(ＩＶ)を分割して、式: 【化１２】 の化合物(ＶＩａ(１))および(ＶＩｂ(１))からなる混合
    物(ＶＩ)を形成する分割法であって、 (ｉ)Ｒ6が水素；およびＲ6aまたはＲ6bの一方が水素
    で、他方がＲ4、ここでＲ4が個別に前記Ｒ4で列挙した
    基から選ばれるものである場合、上記混合物(ＩＶ)を
    式: Ｒ4−ＯＨ (ＶＩＩ) （式中、Ｒ4は上記Ｒ6aまたはＲ6bの場合と同意義であ
    る）の有機アルコール(ＶＩＩ)の存在下、混合物(ＩＶ)
    の立体選択的エステル化を触媒しうる酵素もしくは微生
    物と接触させて、上記混合物(ＶＩ)を形成するか;また
    は (ｉｉ)Ｒ6がＲ4、ここでＲ4が個別に前記Ｒ4で列挙した
    基から選ばれ;およびＲ6aまたはＲ6bの一方がＲ6と同一
    で、他方が水素である場合、上記混合物(ＩＶ)を水の存
    在下、混合物(ＩＶ)の立体選択的加水分解を触媒しうる
    酵素もしくは微生物と接触させて、上記混合物(ＶＩ)を
    形成するか;または (ｉｉｉ)Ｒ6がＲ4、ここでＲ4が個別に前記Ｒ4で列挙し
    た基から選ばれ;およびＲ6aまたはＲ6bの一方がＲ6と同
    一で、他方がＲ7、ここでＲ7がアルキル、アルケニル、
    アルキニル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケ
    ニルまたはヘテロシクロ(但し、Ｒ7はＲ6と同一でない)
    である場合、上記混合物(ＩＶ)を式: Ｒ7−ＯＨ （ＶＩＩＩ） (式中、Ｒ7は前記と同意義である)の有機アルコール(Ｖ
    ＩＩＩ)の存在下、混合物(ＩＶ)の立体選択的トランス
    エステル化を触媒しうる酵素もしくは微生物と接触させ
    て、上記混合物(ＶＩ)を形成する工程の１つから成る請
    求項９に記載の分割法。
  12. 【請求項１２】 得られる非エナンチオマー化合物をさ
    らに、分離工程で分離する請求項９に記載の分割法。
  13. 【請求項１３】 分離工程が、抽出、蒸留、結晶化また
    はカラムクロマトグラフィー工程である請求項１２に記
    載の分割法。
  14. 【請求項１４】 該分割法の生成物をさらに、Ｃ−１３
    側鎖含有タキサンの製造に使用する請求項９に記載の分
    割法。
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