JP2000245495A - Ｒ−３−キヌクリジノールの製造方法 - Google Patents
Ｒ−３−キヌクリジノールの製造方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 生理活性又は薬理活性成分（医薬品、農薬な
ど）の重要中間体であるＲ−３−キヌクリジノールを効
率よく製造する。 【解決手段】 ３−キヌクリジノンからＲ−３−キヌク
リジノールを生成する能力を有するアルカリゲネス（Ａ
ｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属、コリネバクテリウム（Ｃｏ
ｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、アースロバクター
（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、フィロバシディウム
（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属、ロドトルラ（Ｒｈｏ
ｄｏｔｏｒｕｌａ）属、オーレオバシディウム（Ａｕｒ
ｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属、ヤロウィア（Ｙａｒｒｏｗ
ｉａ）属に属する微生物の菌体及び／または該菌体処理
物の存在下、水性媒体中で３−キヌクリジノンを光学選
択的に還元させて該水性媒体中にＲ−３−キヌクリジノ
ールを生成蓄積せしめ、ついで該水性媒体からＲ−３−
キヌクリジノールを採取することを特徴とするＲ−３−
キヌクリジノールの製造方法。
ど）の重要中間体であるＲ−３−キヌクリジノールを効
率よく製造する。 【解決手段】 ３−キヌクリジノンからＲ−３−キヌク
リジノールを生成する能力を有するアルカリゲネス（Ａ
ｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属、コリネバクテリウム（Ｃｏ
ｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、アースロバクター
（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、フィロバシディウム
（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属、ロドトルラ（Ｒｈｏ
ｄｏｔｏｒｕｌａ）属、オーレオバシディウム（Ａｕｒ
ｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属、ヤロウィア（Ｙａｒｒｏｗ
ｉａ）属に属する微生物の菌体及び／または該菌体処理
物の存在下、水性媒体中で３−キヌクリジノンを光学選
択的に還元させて該水性媒体中にＲ−３−キヌクリジノ
ールを生成蓄積せしめ、ついで該水性媒体からＲ−３−
キヌクリジノールを採取することを特徴とするＲ−３−
キヌクリジノールの製造方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、微生物の菌体及び
／または該菌体処理物の存在下３−キヌクリジノンに、
該化合物のカルボニルを光学選択的に還元してＲ−３−
キヌクリジノールを製造する方法に関する。
／または該菌体処理物の存在下３−キヌクリジノンに、
該化合物のカルボニルを光学選択的に還元してＲ−３−
キヌクリジノールを製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】Ｒ−３
−キヌクリジノールは生理活性又は薬理活性成分（医薬
品、農薬など）の中間原料として有用な化合物である。
この光学活性Ｒ−３−キヌクリジノールの化学的製造法
においては、３−キヌクリジノンと光学活性フェネチル
アミンから調製したイミンを原料とし、ソディウムボロ
ハイトレイトで還元して製造する方法｛（Ｓｙｎｔｈ．
Ｃｏｍｍｕｎ．２２（１３），ｐｐ１８９５−１９１１
（１９９２）｝、ラセミのアセチル体を酒石酸で分割し
加水分解して製造する方法｛Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍ．Ｓ
ｕｅｃ．１６（４），ｐｐ２８１−２８３（１９７
９）｝が知られている。また、生物学的製造法として、
ブチルエステルのラセミ体を原料として、馬血清のエス
テラーゼで光学分割して製造する方法｛ＬｉｆｅＳｃ
ｉ．，２１（９），ｐｐ１２９３−１３０２（１９７
７）｝、ラセミ体を原料とし、ズブチリシンプロテアー
ゼを用いるアシル化反応によって光学分割して製造する
方法（米国特許第５２１５９１８号公報）、ラセミ体を
原料としてビニル酪酸とズブチリシンプロテアーゼの存
在下にＳ体をキヌクリジニル酪酸に変換させてＲ体を得
る方法（独国公開特許第１９７１５４６５号公報）、ラ
セミ体３−キヌクリジノールエステルにＡｓｐｅｒｇｉ
ｌｌｕｓ属またはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する微
生物由来のエステル分解酵素を作用させてＲ体を取得す
る方法（特開平１０−２１０９９７号公報）などが知ら
れている。しかしながらこれらの方法は、いずれもＲ−
３−キヌクリジノールを経済的に有利に製造する方法と
はいいがたい。また、３−キヌクリジノンに微生物を作
用させる方法（特開平１０−２４３７９５号公報）が提
案されたが、本法において例示されているＲ−３−キヌ
クリジノール生成例は、ナカザワエ（Ｎａｋａｚａｗａ
ｅ）属、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）属、キャンディ
ダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物を用いた方法で
あるが、生成収率、光学純度とも工業的に充分とは言い
難い。
−キヌクリジノールは生理活性又は薬理活性成分（医薬
品、農薬など）の中間原料として有用な化合物である。
この光学活性Ｒ−３−キヌクリジノールの化学的製造法
においては、３−キヌクリジノンと光学活性フェネチル
アミンから調製したイミンを原料とし、ソディウムボロ
ハイトレイトで還元して製造する方法｛（Ｓｙｎｔｈ．
Ｃｏｍｍｕｎ．２２（１３），ｐｐ１８９５−１９１１
（１９９２）｝、ラセミのアセチル体を酒石酸で分割し
加水分解して製造する方法｛Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍ．Ｓ
ｕｅｃ．１６（４），ｐｐ２８１−２８３（１９７
９）｝が知られている。また、生物学的製造法として、
ブチルエステルのラセミ体を原料として、馬血清のエス
テラーゼで光学分割して製造する方法｛ＬｉｆｅＳｃ
ｉ．，２１（９），ｐｐ１２９３−１３０２（１９７
７）｝、ラセミ体を原料とし、ズブチリシンプロテアー
ゼを用いるアシル化反応によって光学分割して製造する
方法（米国特許第５２１５９１８号公報）、ラセミ体を
原料としてビニル酪酸とズブチリシンプロテアーゼの存
在下にＳ体をキヌクリジニル酪酸に変換させてＲ体を得
る方法（独国公開特許第１９７１５４６５号公報）、ラ
セミ体３−キヌクリジノールエステルにＡｓｐｅｒｇｉ
ｌｌｕｓ属またはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する微
生物由来のエステル分解酵素を作用させてＲ体を取得す
る方法（特開平１０−２１０９９７号公報）などが知ら
れている。しかしながらこれらの方法は、いずれもＲ−
３−キヌクリジノールを経済的に有利に製造する方法と
はいいがたい。また、３−キヌクリジノンに微生物を作
用させる方法（特開平１０−２４３７９５号公報）が提
案されたが、本法において例示されているＲ−３−キヌ
クリジノール生成例は、ナカザワエ（Ｎａｋａｚａｗａ
ｅ）属、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）属、キャンディ
ダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物を用いた方法で
あるが、生成収率、光学純度とも工業的に充分とは言い
難い。
【０００３】
【課題を解決するための手段】本発明者は、経済的に優
れ、簡便にＲ−３−キヌクリジノールを製造する方法を
提供することを鋭意検討した結果、ある種の微生物を３
−キヌクリジノンに作用させることにより、Ｒ−３−キ
ヌクリジノールが高収率、高光学純度で得られることを
見い出し、本発明を完成した。
れ、簡便にＲ−３−キヌクリジノールを製造する方法を
提供することを鋭意検討した結果、ある種の微生物を３
−キヌクリジノンに作用させることにより、Ｒ−３−キ
ヌクリジノールが高収率、高光学純度で得られることを
見い出し、本発明を完成した。
【０００４】すなわち本発明は、３−キヌクリジノンか
らＲ−３−キヌクリジノールを生成する能力を有するア
ルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属、コリネバ
クテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ア
ースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、フィ
ロバシディウム（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属、ロド
トルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）属、オウレオバシデ
ィウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属、ヤロウィア
（Ｙａｒｒｏｗｉａ）属に属する微生物の菌体及び／ま
たは該菌体処理物の存在下、水性媒体中で３−キヌクリ
ジノンを光学選択的に還元させて該水性媒体中にＲ−３
−キヌクリジノールを生成蓄積せしめ、ついで該水性媒
体からＲ−３−キヌクリジノールを採取することを特徴
とするＲ−３−キヌクリジノールの製造方法を提供する
ものである。
らＲ−３−キヌクリジノールを生成する能力を有するア
ルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属、コリネバ
クテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ア
ースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、フィ
ロバシディウム（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属、ロド
トルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）属、オウレオバシデ
ィウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属、ヤロウィア
（Ｙａｒｒｏｗｉａ）属に属する微生物の菌体及び／ま
たは該菌体処理物の存在下、水性媒体中で３−キヌクリ
ジノンを光学選択的に還元させて該水性媒体中にＲ−３
−キヌクリジノールを生成蓄積せしめ、ついで該水性媒
体からＲ−３−キヌクリジノールを採取することを特徴
とするＲ−３−キヌクリジノールの製造方法を提供する
ものである。
【０００５】
【発明の実施の形態】本発明に用いられる微生物は、ア
ルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属、コリネバ
クテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ア
ースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、フィ
ロバシディウム（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属、ロド
トルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）属、オーレオバシデ
ィウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属、ヤロウィア
（Ｙａｒｒｏｗｉａ）属に属する微生物であって３−キ
ヌクリジノンからＲ−３−キヌクリジノールを生成する
能力を有する微生物である。具体的な種としては、例え
ばアルカリゲネス ユウトロフス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎ
ｅｓ ｅｕｔｒｏｐｈｓ）、アルカリゲネス エポキシ
リティカス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｐｏｘｙｌｙ
ｔｉｃｕｓ）、アルカリゲネス マルガリタエ（Ａｌｃ
ａｌｉｇｅｎｅｓ ｍａｒｇａｒｉｔａｅ）、コリネバ
クテリウム メディオラナム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍｍｅｄｉｏｌａｎｕｍ）、フィロバシディウム
カプシュリゲナム（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｃａ
ｐｓｕｌｉｇｅｎｕｍ）、ロドトルラ アウランティア
カ（Ｒｈｏｄｏｔｒｕｌａ ａｕｒａｎｔｉａｃａ）、
ヤロビア リポリティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏ
ｌｙｔｉｃａ）、アウレオバシディウム マンソニー
（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｍａｎｓｏｎｉｉ）が
挙げられる。
ルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属、コリネバ
クテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ア
ースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、フィ
ロバシディウム（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属、ロド
トルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）属、オーレオバシデ
ィウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属、ヤロウィア
（Ｙａｒｒｏｗｉａ）属に属する微生物であって３−キ
ヌクリジノンからＲ−３−キヌクリジノールを生成する
能力を有する微生物である。具体的な種としては、例え
ばアルカリゲネス ユウトロフス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎ
ｅｓ ｅｕｔｒｏｐｈｓ）、アルカリゲネス エポキシ
リティカス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｐｏｘｙｌｙ
ｔｉｃｕｓ）、アルカリゲネス マルガリタエ（Ａｌｃ
ａｌｉｇｅｎｅｓ ｍａｒｇａｒｉｔａｅ）、コリネバ
クテリウム メディオラナム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍｍｅｄｉｏｌａｎｕｍ）、フィロバシディウム
カプシュリゲナム（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｃａ
ｐｓｕｌｉｇｅｎｕｍ）、ロドトルラ アウランティア
カ（Ｒｈｏｄｏｔｒｕｌａ ａｕｒａｎｔｉａｃａ）、
ヤロビア リポリティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏ
ｌｙｔｉｃａ）、アウレオバシディウム マンソニー
（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｍａｎｓｏｎｉｉ）が
挙げられる。
【０００６】これら微生物の中で、好適に用いられる具
体的菌株としては、例えばアルカリゲネス ユウトロフ
ス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｕｔｒｏｐｈｓ）ＡＴ
ＣＣ１７６９９、コリネバクテリウム メディオラナム
（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍｅｄｉｏｌａｎ
ｕｍ）ＡＴＣＣ １４００４、フィロバシディウムカプ
シュリゲナム（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｃａｐｓｕ
ｌｉｇｅｎｕｍ）ＩＦＯ １１１９、ロドトルラ アウ
ランティアカ（Ｒｈｏｄｏｔｒｕｌａ ａｕｒａｎｔｉ
ａｃａ）ＩＦＯ ０７５４、ヤロビア リポリティカ
（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）ＩＦＯ
１５４８、オウレオバシディウム マンソニー（Ａｕｒ
ｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｍａｎｓｏｎｉｉ）ＩＦＯ ６
４２１が挙げられる。
体的菌株としては、例えばアルカリゲネス ユウトロフ
ス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｕｔｒｏｐｈｓ）ＡＴ
ＣＣ１７６９９、コリネバクテリウム メディオラナム
（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍｅｄｉｏｌａｎ
ｕｍ）ＡＴＣＣ １４００４、フィロバシディウムカプ
シュリゲナム（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｃａｐｓｕ
ｌｉｇｅｎｕｍ）ＩＦＯ １１１９、ロドトルラ アウ
ランティアカ（Ｒｈｏｄｏｔｒｕｌａ ａｕｒａｎｔｉ
ａｃａ）ＩＦＯ ０７５４、ヤロビア リポリティカ
（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）ＩＦＯ
１５４８、オウレオバシディウム マンソニー（Ａｕｒ
ｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｍａｎｓｏｎｉｉ）ＩＦＯ ６
４２１が挙げられる。
【０００７】これらの菌株のうち、ＩＦＯ番号の付され
ているものは大阪発酵研究所、またＡＴＣＣ番号の付さ
れているものはＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔ
ｕｒｅ Ｃｏｌｅｃｔｉｏｎに保管されている菌株であ
り、いずれも容易に入手可能である。また、上記微生物
の変異株、あるいは細胞融合もしくは遺伝子組換え法な
どの遺伝学的手法により誘導される組換え株などのいず
れの株であっても３−キヌクリジンからＲ−３−キヌク
リジノールを生成する能力を有するかぎり本発明で用い
られる微生物に包含される。
ているものは大阪発酵研究所、またＡＴＣＣ番号の付さ
れているものはＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔ
ｕｒｅ Ｃｏｌｅｃｔｉｏｎに保管されている菌株であ
り、いずれも容易に入手可能である。また、上記微生物
の変異株、あるいは細胞融合もしくは遺伝子組換え法な
どの遺伝学的手法により誘導される組換え株などのいず
れの株であっても３−キヌクリジンからＲ−３−キヌク
リジノールを生成する能力を有するかぎり本発明で用い
られる微生物に包含される。
【０００８】本発明の製造方法においては、上記微生物
の１種あるいは２種以上が菌体及び／または菌体処理物
として用いられる。具体的には、上記微生物を培養して
得られた菌体をそのまま、あるいは培養して得られた菌
体を公知の手法で処理したもの、即ち、アセトン処理し
たもの（アセトン処理物）、凍結乾燥処理したもの（凍
結乾燥処理物）、菌体を物理的または酵素的に破砕した
もの等を用いることができる。また、菌体、アセトン処
理物又は凍結乾燥処理物から、３−キヌクリジノンに作
用しＲ−３−キヌクリジノールに変換する能力を有する
酵素画分を粗製物あるいは精製物として取り出して用い
ることも可能である。さらには、このようにして得られ
た菌体又は菌体処理物を通常の固定化技術を用いて、す
なわち、ポリアクリルアミド、カラギーナンゲル等の担
体に固定化したもの等を用いることも可能である。
の１種あるいは２種以上が菌体及び／または菌体処理物
として用いられる。具体的には、上記微生物を培養して
得られた菌体をそのまま、あるいは培養して得られた菌
体を公知の手法で処理したもの、即ち、アセトン処理し
たもの（アセトン処理物）、凍結乾燥処理したもの（凍
結乾燥処理物）、菌体を物理的または酵素的に破砕した
もの等を用いることができる。また、菌体、アセトン処
理物又は凍結乾燥処理物から、３−キヌクリジノンに作
用しＲ−３−キヌクリジノールに変換する能力を有する
酵素画分を粗製物あるいは精製物として取り出して用い
ることも可能である。さらには、このようにして得られ
た菌体又は菌体処理物を通常の固定化技術を用いて、す
なわち、ポリアクリルアミド、カラギーナンゲル等の担
体に固定化したもの等を用いることも可能である。
【０００９】本明細書において、「菌体及び／または該
菌体処理物」の用語は、上述の菌体、アセトン処理物、
凍結乾燥処理物、酵素画分、及びそれらの固定化物全て
を包含する。次に、本発明の製造方法について具体的に
説明する。本発明においては、原料として３−キヌクリ
ジノンを用い、これに前述した微生物の菌体及び／又は
該菌体処理物を作用させて、Ｒ−３−キヌクリジノール
を製造する。本発明の製造方法において微生物は、通
常、培養して用いられるが、この培養については定法通
り行うことができる。本微生物の培養の為に用いられる
培地には本微生物が資化しうる炭素源、窒素源、及び無
機イオン等が含まれる。炭素源としては、グルコース、
フルクトース、サッカロース等の炭水化物、グリセロー
ル、マンニトール、キシリトール、リビトール等のポリ
アルコール類、有機酸その他が適宜使用される。窒素源
としては、ＮＺアミン、トリプトース、酵母エキス、ポ
リペプトン、肉エキス、大豆抽出物などの有機窒素源、
あるいは硫酸アンモニウム塩、硝酸アンモニウム塩など
の無機窒素源、その他などが適宜使用される。無機イオ
ンとしては、リン酸イオン、マグネシウムイオン、鉄イ
オン、マンガンイオン、モリブデンイオンその他が必要
に応じ適宜使用される。更に、培地にキヌクリジノール
を添加して馴化培養することも有効である。培養は好気
的条件下に、ｐＨ約５〜９、好ましくはｐＨ６〜８、温
度４〜５０℃、好ましくは２５〜４０℃の適当な範囲に
制御しつつ１〜１００時間行う。
菌体処理物」の用語は、上述の菌体、アセトン処理物、
凍結乾燥処理物、酵素画分、及びそれらの固定化物全て
を包含する。次に、本発明の製造方法について具体的に
説明する。本発明においては、原料として３−キヌクリ
ジノンを用い、これに前述した微生物の菌体及び／又は
該菌体処理物を作用させて、Ｒ−３−キヌクリジノール
を製造する。本発明の製造方法において微生物は、通
常、培養して用いられるが、この培養については定法通
り行うことができる。本微生物の培養の為に用いられる
培地には本微生物が資化しうる炭素源、窒素源、及び無
機イオン等が含まれる。炭素源としては、グルコース、
フルクトース、サッカロース等の炭水化物、グリセロー
ル、マンニトール、キシリトール、リビトール等のポリ
アルコール類、有機酸その他が適宜使用される。窒素源
としては、ＮＺアミン、トリプトース、酵母エキス、ポ
リペプトン、肉エキス、大豆抽出物などの有機窒素源、
あるいは硫酸アンモニウム塩、硝酸アンモニウム塩など
の無機窒素源、その他などが適宜使用される。無機イオ
ンとしては、リン酸イオン、マグネシウムイオン、鉄イ
オン、マンガンイオン、モリブデンイオンその他が必要
に応じ適宜使用される。更に、培地にキヌクリジノール
を添加して馴化培養することも有効である。培養は好気
的条件下に、ｐＨ約５〜９、好ましくはｐＨ６〜８、温
度４〜５０℃、好ましくは２５〜４０℃の適当な範囲に
制御しつつ１〜１００時間行う。
【００１０】Ｒ−３−キヌクリジノールを製造する方法
として、本微生物を培養し、得られた菌体及び／または
該菌体処理物に３−キヌクリジノンを添加し、反応させ
３−キヌクリジノールを得る方法、培地に３−キヌクリ
ジノンを添加し培養と反応を同時に行う方法、あるいは
培養終了後該培養液に３−キヌクリジノンを添加して更
に反応を行う方法等を適宜用いることができる。
として、本微生物を培養し、得られた菌体及び／または
該菌体処理物に３−キヌクリジノンを添加し、反応させ
３−キヌクリジノールを得る方法、培地に３−キヌクリ
ジノンを添加し培養と反応を同時に行う方法、あるいは
培養終了後該培養液に３−キヌクリジノンを添加して更
に反応を行う方法等を適宜用いることができる。
【００１１】反応は温度４〜７０℃、好ましくは２０〜
５０℃の範囲で行い、ｐＨは４〜１０、好ましくは６〜
９の範囲で行う。３−キヌクリジノンの濃度は０．００
０１〜５０％、好ましくは０．０１〜５％の範囲が望ま
しく、必要に応じて反応の間、３−キヌクリジノンは追
補添加される。培養及び反応で得られたＲ−３−キヌク
リジノールの採取方法としては、常法通り微生物などの
固形分を遠心分離、フィルタープレス、限外濾過などの
通常の分離装置により除去した後に反応液を有機溶媒に
よる抽出、晶析、カラムクロマトグラフィー、濃縮、蒸
留などの分離精製手段に供することにより分離すること
ができ、分離精製手段は単独でまたは複数の手段を組み
合わせて利用できる。前記有機溶媒としては、例えばブ
タノールなどのアルコール類、ヘキサン、シクロヘキサ
ン、トルエン等の炭化水素類、クロロホルム、塩化メチ
レンなどのハロゲン化炭化水素類、酢酸エチル、酢酸メ
チルなどのエステル類、ケトン類、エーテル類、これら
の混合溶媒などが利用できる。
５０℃の範囲で行い、ｐＨは４〜１０、好ましくは６〜
９の範囲で行う。３−キヌクリジノンの濃度は０．００
０１〜５０％、好ましくは０．０１〜５％の範囲が望ま
しく、必要に応じて反応の間、３−キヌクリジノンは追
補添加される。培養及び反応で得られたＲ−３−キヌク
リジノールの採取方法としては、常法通り微生物などの
固形分を遠心分離、フィルタープレス、限外濾過などの
通常の分離装置により除去した後に反応液を有機溶媒に
よる抽出、晶析、カラムクロマトグラフィー、濃縮、蒸
留などの分離精製手段に供することにより分離すること
ができ、分離精製手段は単独でまたは複数の手段を組み
合わせて利用できる。前記有機溶媒としては、例えばブ
タノールなどのアルコール類、ヘキサン、シクロヘキサ
ン、トルエン等の炭化水素類、クロロホルム、塩化メチ
レンなどのハロゲン化炭化水素類、酢酸エチル、酢酸メ
チルなどのエステル類、ケトン類、エーテル類、これら
の混合溶媒などが利用できる。
【００１２】
【実施例】以下に実施例を示し、本発明を具体的に説明
するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものでは
ない。 実施例１ リン酸水素１カリウム０．１重量％、硫酸マグネシウム
０．０５重量％、酵母エキス０．３重量％、ポリペプト
ン０．５重量％、硫酸アンモニウム０．２重量％、グル
コース２重量％、肉エキス０．３重量％（ｐＨ７．０）
の組成からなる培地５０ｍｌを仕込んだ５００ｍｌ容三
角フラスコを１２０℃、１５分間滅菌処理後、アルカリ
ゲネス ユウトロフス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｕ
ｔｒｏｐｈｓ）ＡＴＣＣ １７６９９を１白金耳量接種
し、３０℃で２４時間好気的に培養した。培養終了後、
培養液（１０ｍｌ）を集め、遠心分離後、菌体に反応液
（グルコース２重量％、３−キヌクリジノン・ＨＣｌ
５０ｍＭ、ＮａＯＨでｐＨ７に調整）３ｍｌに懸濁し、
炭酸カルシウム０．２ｇを加えて３０℃で７２ｈｒ振と
う反応させた。反応終了後、遠心分離により菌体を除
き、炭酸ナトリウムを飽和濃度に添加後、酢酸エチルで
２ｍｌで２度抽出し、酢酸エチル層を集めて蒸発乾固さ
せることによりＲ−３−キヌクリジノール粗結晶１６ｍ
ｇを取得した。Ｒ−３−キヌクリジノールの定量は、Ｔ
ＬＣ（アセトン：クロロホルム：５Ｎアンモニア水＝
８：１：１でシリカゲルプレートを展開後、ヨウ素で発
色）並びにＨＰＬＣ（ダイセル社キラルパックＯＤ、移
動相ｎ−ヘキサン：イソプロパノール＝９０：１０）に
て行った。また、光学純度の検定は、以下の通りアセチ
ル化した後、ＨＰＬＣ（ダイセル社キラルパックＯＤ−
Ｈ、移動相ｎ−ヘキサン：イソプロパノール：トリエチ
ルアミン＝９０：１０：０．１、移動相の流速は０．５
ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度４０℃、示差屈折計により検
出）にて分析した。アセチル化は以下の通り行った。酢
酸エチル抽出後乾固させサンプルに、無水酢酸：ピリジ
ン＝５：１液を加え６０℃で２０分処理し、しかる後に
蒸発乾固させ、残査をイソプロパノールに溶解して分析
に供した。本条件で、Ｒ−３−キヌクリジノール（関東
化学製、製品番号２９３７３−１Ａ）は１６分後に溶出
した。生成したＲ−３−キヌクリジノールの濃度は５．
７ｇ／ｌ（反応液１リットル換算）、変換率９０％、光
学純度はＲ体９８％以上であった。
するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものでは
ない。 実施例１ リン酸水素１カリウム０．１重量％、硫酸マグネシウム
０．０５重量％、酵母エキス０．３重量％、ポリペプト
ン０．５重量％、硫酸アンモニウム０．２重量％、グル
コース２重量％、肉エキス０．３重量％（ｐＨ７．０）
の組成からなる培地５０ｍｌを仕込んだ５００ｍｌ容三
角フラスコを１２０℃、１５分間滅菌処理後、アルカリ
ゲネス ユウトロフス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｕ
ｔｒｏｐｈｓ）ＡＴＣＣ １７６９９を１白金耳量接種
し、３０℃で２４時間好気的に培養した。培養終了後、
培養液（１０ｍｌ）を集め、遠心分離後、菌体に反応液
（グルコース２重量％、３−キヌクリジノン・ＨＣｌ
５０ｍＭ、ＮａＯＨでｐＨ７に調整）３ｍｌに懸濁し、
炭酸カルシウム０．２ｇを加えて３０℃で７２ｈｒ振と
う反応させた。反応終了後、遠心分離により菌体を除
き、炭酸ナトリウムを飽和濃度に添加後、酢酸エチルで
２ｍｌで２度抽出し、酢酸エチル層を集めて蒸発乾固さ
せることによりＲ−３−キヌクリジノール粗結晶１６ｍ
ｇを取得した。Ｒ−３−キヌクリジノールの定量は、Ｔ
ＬＣ（アセトン：クロロホルム：５Ｎアンモニア水＝
８：１：１でシリカゲルプレートを展開後、ヨウ素で発
色）並びにＨＰＬＣ（ダイセル社キラルパックＯＤ、移
動相ｎ−ヘキサン：イソプロパノール＝９０：１０）に
て行った。また、光学純度の検定は、以下の通りアセチ
ル化した後、ＨＰＬＣ（ダイセル社キラルパックＯＤ−
Ｈ、移動相ｎ−ヘキサン：イソプロパノール：トリエチ
ルアミン＝９０：１０：０．１、移動相の流速は０．５
ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度４０℃、示差屈折計により検
出）にて分析した。アセチル化は以下の通り行った。酢
酸エチル抽出後乾固させサンプルに、無水酢酸：ピリジ
ン＝５：１液を加え６０℃で２０分処理し、しかる後に
蒸発乾固させ、残査をイソプロパノールに溶解して分析
に供した。本条件で、Ｒ−３−キヌクリジノール（関東
化学製、製品番号２９３７３−１Ａ）は１６分後に溶出
した。生成したＲ−３−キヌクリジノールの濃度は５．
７ｇ／ｌ（反応液１リットル換算）、変換率９０％、光
学純度はＲ体９８％以上であった。
【００１３】実施例２ 菌株としてコリネバクテリウム メディオラナム（Ｃｏ
ｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍｅｄｉｏｌａｎｕｍ）
ＡＴＣＣ １４００４を用いた以外は実施例１と同様の
実験を行った。反応液中に生成したＲ−３−キヌクリジ
ノールは５．３ｇ／ｌ、該反応液から採取したＲ−３−
キヌクリジノール粗結晶は１５ｍｇであった。変換率８
５％、光学純度は９２％であった。
ｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍｅｄｉｏｌａｎｕｍ）
ＡＴＣＣ １４００４を用いた以外は実施例１と同様の
実験を行った。反応液中に生成したＲ−３−キヌクリジ
ノールは５．３ｇ／ｌ、該反応液から採取したＲ−３−
キヌクリジノール粗結晶は１５ｍｇであった。変換率８
５％、光学純度は９２％であった。
【００１４】実施例３ 酵母エキス０．３重量％、ポリペプトン０．５重量％、
麦芽エキス０．３重量％、グルコース２重量％（ｐＨ
６．０）の組成からなる培地５０ｍｌを仕込んだ５００
ｍｌ容三角フラスコを１２０℃、１５分間滅菌処理後、
ロドトルラ オウランティアカ（Ｒｈｏｄｏｔｒｕｌａ
ａｕｒａｎｔｉａｃａ）ＩＦＯ ０７５４を１白金耳
量接種し、３０℃で２４時間好気的に振とう培養した。
反応および分析は、実施例１と同様に行った。生成した
Ｒ−３−キヌクリジノールの濃度は５．３ｇ／ｌ（反応
液１リットル換算）、該反応液から採取したＲ−３−キ
ヌクリジノール粗結晶は１５ｍｇであった。変換率８５
％、光学純度は９４％であった。
麦芽エキス０．３重量％、グルコース２重量％（ｐＨ
６．０）の組成からなる培地５０ｍｌを仕込んだ５００
ｍｌ容三角フラスコを１２０℃、１５分間滅菌処理後、
ロドトルラ オウランティアカ（Ｒｈｏｄｏｔｒｕｌａ
ａｕｒａｎｔｉａｃａ）ＩＦＯ ０７５４を１白金耳
量接種し、３０℃で２４時間好気的に振とう培養した。
反応および分析は、実施例１と同様に行った。生成した
Ｒ−３−キヌクリジノールの濃度は５．３ｇ／ｌ（反応
液１リットル換算）、該反応液から採取したＲ−３−キ
ヌクリジノール粗結晶は１５ｍｇであった。変換率８５
％、光学純度は９４％であった。
【００１５】実施例４ 菌株としてヤロウィア リポリティカ（Ｙａｒｒｏｗｉ
ａ ｌｙｐｏｌｙｔｉｃａ）ＩＦＯ １５４８を用いた
以外は、実施例３と同様の実験を行った。Ｒ−３−キヌ
クリジノールの生成濃度は、５．４ｇ／ｌ（反応液１リ
ットル換算）、採取した粗結晶は１５ｍｇであった。変
換率８６％、光学純度は９４％であった。
ａ ｌｙｐｏｌｙｔｉｃａ）ＩＦＯ １５４８を用いた
以外は、実施例３と同様の実験を行った。Ｒ−３−キヌ
クリジノールの生成濃度は、５．４ｇ／ｌ（反応液１リ
ットル換算）、採取した粗結晶は１５ｍｇであった。変
換率８６％、光学純度は９４％であった。
【００１６】実施例５ 菌株としてオウレオバシディウム マンソニー（Ａｕｒ
ｅｏｂａｓｉｄｉｕｍｍａｎｓｏｎｉｉ）ＩＦＯ ６４
２１を用いた以外は、実施例３と同様の実験を行った。
Ｒ−３−キヌクリジノールの生成濃度は、５．２ｇ／ｌ
（反応液１リットル換算）、採取した粗結晶は、１４ｍ
ｇであった。変換率８３％、光学純度は９３％であっ
た。
ｅｏｂａｓｉｄｉｕｍｍａｎｓｏｎｉｉ）ＩＦＯ ６４
２１を用いた以外は、実施例３と同様の実験を行った。
Ｒ−３−キヌクリジノールの生成濃度は、５．２ｇ／ｌ
（反応液１リットル換算）、採取した粗結晶は、１４ｍ
ｇであった。変換率８３％、光学純度は９３％であっ
た。
【００１７】実施例６ 菌株としてフィロバシディウム カプシュリゲナム（Ｆ
ｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｃａｐｓｕｌｉｇｅｎｕｍ）
ＩＦＯ １１１９を用いた以外は、実施例３と同様の実
験を行った。Ｒ−３−キヌクリジノールの生成濃度は、
５．５ｇ／ｌ（反応液１リットル換算）、採取した粗結
晶は、１５ｍｇであった。変換率８９％、光学純度は９
３％であった。
ｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｃａｐｓｕｌｉｇｅｎｕｍ）
ＩＦＯ １１１９を用いた以外は、実施例３と同様の実
験を行った。Ｒ−３−キヌクリジノールの生成濃度は、
５．５ｇ／ｌ（反応液１リットル換算）、採取した粗結
晶は、１５ｍｇであった。変換率８９％、光学純度は９
３％であった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） (Ｃ１２Ｐ 17/12 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 17/12 Ｃ１２Ｒ 1:05）
Claims (1)
- 【請求項１】 ３−キヌクリジノンからＲ−３−キヌク
リジノールを生成する能力を有するアルカリゲネス（Ａ
ｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属、コリネバクテリウム（Ｃｏ
ｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、アースロバクター
（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、フィロバシディウム
（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属、ロドトルラ（Ｒｈｏ
ｄｏｔｏｒｕｌａ）属、オーレオバシディウム（Ａｕｒ
ｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属、ヤロウィア（Ｙａｒｒｏｗ
ｉａ）属に属する微生物の菌体及び／または該菌体処理
物の存在下、水性媒体中で３−キヌクリジノンを光学選
択的に還元させて該水性媒体中にＲ−３−キヌクリジノ
ールを生成蓄積せしめ、ついで該水性媒体からＲ−３−
キヌクリジノールを採取することを特徴とするＲ−３−
キヌクリジノールの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5794399A JP3858505B2 (ja) | 1999-03-05 | 1999-03-05 | Ｒ−３−キヌクリジノールの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5794399A JP3858505B2 (ja) | 1999-03-05 | 1999-03-05 | Ｒ−３−キヌクリジノールの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000245495A true JP2000245495A (ja) | 2000-09-12 |
| JP3858505B2 JP3858505B2 (ja) | 2006-12-13 |
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ID=13070128
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5794399A Expired - Fee Related JP3858505B2 (ja) | 1999-03-05 | 1999-03-05 | Ｒ−３−キヌクリジノールの製造方法 |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3858505B2 (ja) |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002153293A (ja) * | 2000-11-21 | 2002-05-28 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | 光学活性３−キヌクリジノールの製造法 |
| EP1318200A3 (en) * | 2001-12-07 | 2004-04-07 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | Methods for producing optically active alcohols |
| JP2007124922A (ja) * | 2005-11-01 | 2007-05-24 | Nagase & Co Ltd | ３−キヌクリジノン還元酵素およびこれを用いる（ｒ）−３−キヌクリジノールの製造方法 |
| JP2008212144A (ja) * | 2007-02-08 | 2008-09-18 | Nagase & Co Ltd | アルコール脱水素酵素、これをコードする遺伝子、およびそれを用いた光学活性（ｒ）−３−キヌクリジノールの製造方法 |
| JP2009201373A (ja) * | 2008-02-26 | 2009-09-10 | Yuki Gosei Kogyo Co Ltd | （ｒ）−３−キヌクリジノールの製造方法 |
| US7645599B2 (en) | 2001-12-07 | 2010-01-12 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | Methods for producing optically active alcohols |
| JP2010130912A (ja) * | 2008-12-02 | 2010-06-17 | Kaneka Corp | 光学活性３−キヌクリジノールの製造方法 |
| WO2010123062A1 (ja) | 2009-04-23 | 2010-10-28 | 株式会社カネカ | (ｒ)-３-キヌクリジノールの製造方法 |
| WO2012007965A1 (en) | 2010-07-14 | 2012-01-19 | Cadila Healthcare Limited | Enzyme for the production of optically pure 3 - quinuclidinol |
| DE102013104418B4 (de) | 2013-04-30 | 2018-09-27 | Cambrex Iep Gmbh | Biokatalytisches Verfahren für die Herstellung von (R)-3-Chinuclidinol |
-
1999
- 1999-03-05 JP JP5794399A patent/JP3858505B2/ja not_active Expired - Fee Related
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|---|---|---|---|---|
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| US7645599B2 (en) | 2001-12-07 | 2010-01-12 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | Methods for producing optically active alcohols |
| JP2007124922A (ja) * | 2005-11-01 | 2007-05-24 | Nagase & Co Ltd | ３−キヌクリジノン還元酵素およびこれを用いる（ｒ）−３−キヌクリジノールの製造方法 |
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| JP2009201373A (ja) * | 2008-02-26 | 2009-09-10 | Yuki Gosei Kogyo Co Ltd | （ｒ）−３−キヌクリジノールの製造方法 |
| JP2010130912A (ja) * | 2008-12-02 | 2010-06-17 | Kaneka Corp | 光学活性３−キヌクリジノールの製造方法 |
| WO2010123062A1 (ja) | 2009-04-23 | 2010-10-28 | 株式会社カネカ | (ｒ)-３-キヌクリジノールの製造方法 |
| JP5761641B2 (ja) * | 2009-04-23 | 2015-08-12 | 株式会社カネカ | （ｒ）−３−キヌクリジノールの製造方法 |
| WO2012007965A1 (en) | 2010-07-14 | 2012-01-19 | Cadila Healthcare Limited | Enzyme for the production of optically pure 3 - quinuclidinol |
| DE102013104418B4 (de) | 2013-04-30 | 2018-09-27 | Cambrex Iep Gmbh | Biokatalytisches Verfahren für die Herstellung von (R)-3-Chinuclidinol |
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| JP3858505B2 (ja) | 2006-12-13 |
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