JP2002153293A - 光学活性３−キヌクリジノールの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 新規微生物の不斉還元反応による光学活性３
−キヌクリジノールの製法の提供。 【解決手段】 Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ属、Ｔｓｕｋａｍ
ｕｒｅｌｌａ属、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ属 、Ｋｕｒ
ｔｈｉａ属、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｋｌｕ
ｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ属又は
Ｍｕｃｏｒ属に属し、３−キヌクリジノンを光学活性３
−キヌクリジノールに不斉還元する能力を有する微生物
の作用により光学活性３−キヌクリジノールを得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、酵素の作用により
３−キヌクリジノン（塩を含む）から光学活性３−キヌ
クリジノール（塩を含む）を製造する方法に関する。こ
れらの光学活性３−キヌクリジノールは種々の医農薬品
等の原料として有用である。

【０００２】

【従来の技術】光学活性３-キヌクリジノールの製法と
して、これまでに、例えば、光学活性酒石酸等を分割剤
とする優先晶析法により光学活性３−キヌクリジノール
誘導体に導く方法［Ａｃｔａ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｕｅ
ｃ．，１６，２８１−３（１９７９）］が報告されてい
る。微生物や酵素を利用する方法としては、３−キヌク
リジノールの低級脂肪酸エステルを酵素により不斉加水
分解して光学活性３−キヌクリジノールに分割する方法
［米国特許５，２１５，９１８、特開平１０−１３６９
９５、特開平１０−２１０９９７号及びＬｉｆｅ Ｓｉ
ｃ．２１，１２９３−１３０２（１９７７）］が知られ
ている。しかし、これらの方法は、ラセミ体を出発原料
とし、光学分割して目的の光学異性体を得る手法であ
り、目的としない対掌体が残存すため、生産コストが高
くなる傾向にある。一方、ルイス酸付加物をロジウム錯
化合物を触媒として不斉還元により、３−キヌクリジノ
ンから、光学活性３−キヌクリジノールを製造する方法
［特開平９−１９４４８０号］が報告されているが、こ
の方法は光学純度が低く、工業的に有利な製造方法とは
言い難い。また、より効率的な方法として、微生物学的
な不斉還元反応を利用して光学活性３−キヌクリジノー
ルを製造する方法［特開平１０−２４３７９５号、特開
平１１−１９６８９０号及び特開２０００−２４５４９
５号］が提案されている。しかし、これらの方法で使用
されている微生物学的触媒は、特開平１０−２４３７９
５号では、Ｎａｋａｚａｗａｅａ属、Ｃａｎｄｉｄａ
属、Ｐｒｏｔｅｕｓ属、Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ属、
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属およびＲｈｏｄｏｓｐｏｒｉ
ｄｉｕｍ属由来の酵素のみであり、特開平１１−１９６
８９０ではＲｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ属、Ｃａｎｄｉｄａ
属、Ｓｐｏｒｉｄｉｏｂｏｌｕｓ属、Ｒｈｏｄｏｓｐｏ
ｒｉｄｉｕｍ属、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃ
ｅｓ属、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｔｒｉｃｈｏｓ
ｐｏｒｏｎ属、Ｇｏｒｄｏｎａ属、Ｐｉｃｈｉａ属およ
びＮｏｃａｒｄｉａ属由来の酵素のみであり、また、特
開２０００−２４５４９５では Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅ
ｓ属、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、 Ａｒｔｈ
ｒｏｂａｃｔｅｒ属、Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ属、Ｒ
ｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ属、Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ
属およびＹａｒｒｏｗｉａ属由来の酵素のみである。

【０００３】

【本発明が解決しようとする課題】したがって、本発明
は、さらに有効な微生物学的触媒による不斉還元反応に
より３−キヌクリジノンから光学活性３−キヌクリジノ
ールを工業的に有利に製造する方法を提供することを目
的とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記課題
を解決すべく鋭意検討を行った結果、本反応を触媒する
ことがこれまでに知られていない微生物において、本反
応を触媒するものが多数存在することを新たに見出し、
本発明を完成させるに至った。

【０００５】すなわち、本発明は、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕ
ｍ属、Ｔｓｕｋａｍｕｒｅｌｌａ属、Ｍｉｃｒｏｃｏｃ
ｃｕｓ属 、Ｋｕｒｔｈｉａ属、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ属、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属、Ａｃｒｅ
ｍｏｎｉｕｍ属又はＭｕｃｏｒ属に属し、一般式（Ｉ）

【化３】 ［式中、（Ｈ⁺）は鉱酸又は有機酸と塩を形成した状態
であってもよいことを表す］で示される３−キヌクリジ
ノン を一般式（II）

【化４】 ［式中、＊は光学活性を表し、（Ｈ⁺）は前記と同様］
で示される光学活性３−キヌクリジノールに不斉還元す
る能力を有する微生物の培養物又は該培養物から回収し
た菌体もしくはその処理物を上記一般式（Ｉ）の３−キ
ヌクリジノンに作用せしめ、上記一般式（II）の光学活
性３−キヌクリジノールを得ることを特徴とする光学活
性３−キヌクリジノールの製造法、である。

【０００６】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
一般式(Ｉ) で示される３−キヌクリジノン及び一般式
（II）で示される３−キヌクリジノールにおいて、（Ｈ
⁺）で表される窒素原子の部分は、意図的に有機酸又は
鉱酸等の塩を形成させたものであっても構わない。具体
的には、鉱酸塩として塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、
硝酸塩、リン酸塩等が、また、有機酸塩として酢酸塩、
プロピオン酸塩、酪酸塩、フマル酸、マロン酸、シュウ
酸等の脂肪族有機酸塩、安息香酸等の芳香族有機酸塩等
が例示される。

【０００７】本発明において使用する一般式（Ｉ）で示
される３−キヌクリジンを一般式（II）で示される光学
活性３−キヌクリジノールに不斉還元する能力を有する
微生物は、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ属、Ｔｓｕｋａｍｕｒ
ｅｌｌａ属、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｋｕｒｔｈｉ
ａ属、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｋｌｕｙｖｅ
ｒｏｍｙｃｅｓ属、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ属及びＭｕｃ
ｏｒ属等に属する微生物である。

【０００８】Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ属に属する微生物と
してはＧｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ ＩＦ
Ｏ ４５９９、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃａｎｄｉｄｕ
ｍＩＦＯ ９５３９、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｆｒａｇ
ｒｅｎｓ ＪＣＭ １７４９、Ｔｓｕｋａｍｕｒｅｌｌ
ａ属に属する微生物としてはＴｓｕｋａｍｕｒｅｌｌａ
ｐａｕｒｏｍｅｔａｂｏｌａ ＩＦＯ １２１６０、
Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する微生物としてはＭｉ
ｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｔｅｕｓ ＩＦＯ１２７０８
、Ｋｕｒｔｈｉａ属に属する微生物としてはＫｕｒｔ
ｈｉａ ｚｏｐｆｉｉ ＩＦＯ １２０８３、Ｍｉｃｒ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属に属する微生物としてはＭｉｃ
ｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｅｓｔｅｖｏａｒｏｍａｔｉ
ｃｕｍ ＩＦＯ ３７５１、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ ａｒａｂｉｎｏｇａｌａｃｔａｎｏｌｙｔｉｃｕ
ｍ ＪＣＭ ９１７１、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｌｕｔｅｏｌｕｍ ＪＣＭ ９１７４、Ｋｌｕｙｖｅ
ｒｏｍｙｃｅｓ属に属する微生物としてはＫｌｕｙｖｅ
ｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓ ＩＡＭ１２２３
７、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｌｙｓｐｏｒｕ
ｓ ＪＣＭ３７０５、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ属に属する
微生物としてはＡｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ．１２５０
１（FERM P-18082）、及びＭｕｃｏｒ属に属する微生物
としてはＭｕｃｏｒ ｓｐ．１４０２１(FERM P-18083)
等が例示される。

【０００９】Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ．１２５０１
及びＭｕｃｏｒ ｓｐ．１４０２１は本発明者らが新た
に土壌中より分離したもので、上記寄託番号にて通商産
業省工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託されてお
り、その菌学的性質は以下の通りである。

【００１０】Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ．１２５０１
(FERM P-18082)；オートミール寒天培地（ＯＡ）及び麦
芽エキス寒天培地上での７日間培養を行ったところ、共
に生育は速く、それぞれ直径７０ｍｍ及び６０ｍｍに達
した。菌糸は白色で、ＯＡ上コロニーは培地が桃色〜橙
色であった。分生子はフィアロ型で栄養菌糸から単生エ
レクトしたフィアライドの先端から生じる。透明。鎖状
にはならず、フィアライド先端に集合する場合がある。
大部分１細胞だが２細胞も見られる。大分生子及び厚壁
胞子は形成しない。分生子のＬ／Ｗ＝３．０−６．０。
フィアライドは基部に隔壁を有し、長さ２０−４５μ
ｍ、最大幅３．５μｍ程度、細胞壁は栄養菌糸と同等の
厚さ。栄養菌糸は幅３．２−３．５μｍ、透明、束にな
る傾向がある。以上、フィアライドが菌糸から直接立ち
上がり、基部に隔壁を有すること、分生子は１０−１８
×３．０−３．５μｍであること、最大で１隔壁を有す
ることより、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ属と決定した（類似
のＦｕｓａｒｉｕｍｕ属、Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃａｒｐｏ
ｎ属とは多隔壁の大分生胞子を形成しない点で異な
る）。

【００１１】Ｍｕｃｏｒ ｓｐ．１４０２１(FERM P-18
083)；ポテトデキストロース寒天培地（ＰＤＡ）上にお
ける２５℃（７日間）では生育が早く、プレート全面に
広がった。白色菌糸及び暗褐色の胞子嚢が観察された。
同じくＰＤＡ上における３７℃（７日間）では生育は悪
く、直径２−３ｍｍのクリーム色となった。胞子嚢は球
形、直径３９−４３μｍ。内部に多数の胞子嚢胞子を含
む。胞子嚢柄は透明であり、コルメラは球形、アポファ
シスを欠く。仮根は観察されず、胞子嚢胞子は球形から
楕円形、直径３．５−４．４μｍ程度であった。以上に
示す理由よりＭｕｃｏｒ属と決定した。

【００１２】なお、ＩＦＯ番号、ＪＣＭ番号及びＩＡＭ
番号が付された菌株は公知で、それぞれ財団法人発酵研
究所、理化学研究所微生物系統保存施設及び東京大学分
子細胞生物学研究所から容易に入手することができる。

【００１３】また、これらの微生物から単離した酵素遺
伝子を各種宿主ベクター系に導入した遺伝子操作微生物
の利用も可能である。

【００１４】これらの微生物は、微生物を培地中で培養
して得られる培養物をそのまま、又は該培養物から回収
した菌体もしくはその処理物として使用できる。菌体処
理物としては、菌体の破砕物、菌体を破砕したて得た無
細胞抽出物、アセトン、トルエン等で処理した菌体、菌
体から分離された粗酵素又は精製酵素、固定化処理され
た菌体・酵素などが挙げられる。酵素の使用に当たって
は、酵素を適当な担体に固定化して使用することによ
り、反応終了後の反応液からの酵素の分離・回収が容易
になるとともに、酵素の再利用も可能となる。

【００１５】本発明においては、これら菌体培養液物、
微生物菌体及び菌体処理物を通常１種類用いるが、同様
な能力を有するものを２種以上混合して用いることも可
能である。

【００１６】上記微生物を培養するための培地として
は、通常これらの微生物が生育し得るものであれば何れ
のものでも使用できる。炭素源としては、例えば、グル
コース、シュークロースやマルトース等の糖類、酢酸、
クエン酸やフマル酸等の有機酸あるいはその塩、エタノ
ールやグリセロール等のアルコール類等が使用できる。
窒素源としては、例えば、ペプトン、肉エキス、酵母エ
キスやアミノ酸等の一般天然窒素源の他、各種無機、有
機酸アンモニウム塩等が使用できる。その他、無機塩、
微量金属塩、ビタミン等が必要に応じて適宜添加され
る。また、高い酵素活性を得るために、例えば、キヌク
リジン、キヌクリジノン、キヌクリジノール等のキヌク
リジン骨格もつ化合物あるいはカルボニル基、ケトン基
を置換基に持つ化合物等を酵素産生の誘導物質として培
地に添加することも有効である。

【００１７】培養は常法に従って行えばよく、例えば、
ｐＨ４〜１０、温度１５〜４０℃の範囲にて好気的に６
〜９６時間培養する。また、静置培養で同様に培養する
ことで高い酵素活性を得ることができる場合がある。

【００１８】本発明において、不斉還元反応による一般
式（II）の光学活性３−キヌクリジノールの生産は、以
下の方法で行うことができる。必要に応じて補酵素（Ｎ
ＡＤＨ、ＮＡＤＰＨ、ＮＡＤ^＋、ＮＡＤＰ^＋）及び／又
はグルコース、シュークロース、エタノール、メタノー
ル等のエネルギー源の存在下、水又は緩衝液等の反応溶
媒中で一般式（Ｉ）の３−キヌクリジノンに上記の菌体
培養物、微生物菌体又は菌体処理物を接触させることに
より行うことができる。そして、反応温度、必要により
反応液のｐＨを制御しながら反応を行う。場合によって
は反応の途中で反応基質（３−キヌクリジノンあるいは
その塩）及び／又は前記補酵素、エネルギー源を適宜加
え、反応を継続させてもよい。補酵素（ＮＡＤＨ、ＮＡ
ＤＰＨ、ＮＡＤ^＋、ＮＡＤＰ^＋）及び／又はグルコー
ス、シュークロース、エタノール、メタノール等のエネ
ルギー源等を加えることで目的化合物の収率が向上する
場合が多い。

【００１９】反応液の基質濃度は、０．０１〜５０重量
％の間で特に制限はないが、生産性等を考慮すると０．
１〜３０重量％が好ましい。反応液中の微生物等の濃度
は、通常、０．０１〜２０重量％であり、好ましくは
０．０１〜１０重量％である。

【００２０】反応液のｐＨは用いる酵素の至適ｐＨ等を
考慮し、総合的に決定され、特に制限はないが、一般的
にはｐＨ４〜１１の範囲であり、好ましくはｐＨ５〜９
である。また、反応が進行するに従いｐＨが変化してく
るが、この場合は適当なｐＨ調整剤を添加して最適ｐＨ
に調整することが望ましい。反応温度は０〜６０℃が好
ましく、５〜５０℃がより好ましい。

【００２１】反応溶媒は、通常イオン交換水、緩衝液等
の水性媒体を使用するが、３−キヌクリジノンあるいは
その塩の溶解を促進させるために有機溶媒あるいは界面
活性剤を含んだ系でも反応を行うことができる。

【００２２】有機溶媒としては、例えば、メタノール、
エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノ
ール、イソブタノール、t-ブチルアルコール、t-アミル
アルコール等のアルコール系溶媒、ペンタン、ヘキサ
ン、ヘプタン、オクタン等の脂肪族炭化水素系溶媒、ベ
ンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素系溶
媒、塩化メチレン、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロ
ロエタン等のハロゲン化炭化水素系溶媒、ジエチルエー
テル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、
ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル、酢酸プロ
ピル、酢酸ブチル等のエステル系溶媒、アセトン、メチ
ルエチルケトン、メチルイソブチルケトン等のケトン系
溶媒、その他アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルム
アミド等を適宜使用できる。

【００２３】界面活性剤としては、例えば、アルキルベ
ンゼンスルホン酸塩、アルキル硫酸塩等のアニオン界面
活性剤、アルキルピリジニウム塩、ドデシルトリメチル
アンモニウムクロリド等のカチオン界面活性剤、ポリオ
キシエチレンアルキル（フェニル）エーテル、ポリオキ
シエチレンアルキル（フェニル）エステル、ソルビタン
脂肪酸エステル（スパン系界面活性剤）、ポリオキシエ
チレングリコールソルビタンアルキルエステル（トゥイ
ーン系界面活性剤）、ポリオキシエチレングリコールｐ
−ｔ−オクチルフェニルエーテル（トリトン系界面活性
剤）、ショ糖脂肪酸エステル等の非イオン性界面活性
剤、Ｎ−アルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムベタ
イン、レシチン、ホスファチジルエタノールアミン、リ
ゾレシチン等の両性界面活性剤等を適宜使用できる。

【００２４】また、これらの有機溶媒あるいは界面活性
剤を水への溶解度以上に加えて２層系で反応を行うこと
も可能である。有機溶媒を反応系に共存させることで、
選択率、変換率、収率などが向上することも多い。

【００２５】反応時間は、通常、１時間〜１週間、好ま
しくは１〜７２時間であり、そのような時間で反応が終
了する反応条件を選択することが好ましい。

【００２６】尚、以上のような基質濃度、補酵素濃度、
酵素濃度、ｐＨ、温度、溶媒、反応時間及びその他の反
応条件はその条件における反応収率等を考慮して目的と
する光学活性３−キヌクリジノールが最も多く採取でき
る条件を適宜選択することが望ましい。

【００２７】反応終了混合液からの目的物の単離は除菌
後、濃縮、抽出、カラム分離、結晶化等通常の公知の方
法によって行うことができる。例えば、ｐＨをアルカリ
性に調整後、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテ
ル等のエーテル類、酢酸エチル等のエステル類、ヘキサ
ン、ベンゼン、トルエン等の炭化水素類、塩化メチレン
等のハロゲン化炭化水素類、ブタノール、イソブタノー
ル、t-アミルアルコール等のアルコール系溶媒等一般的
な溶媒により抽出分離することができる。

【００２８】

【実施例】以下、本発明を実施例により具体的に説明す
るが、本発明の範囲はこれらの実施例の範囲に限定され
るものではない。

【００２９】実施例１ トリプトン（Ｂａｃｔｏ製）１０ｇ／Ｌ、酵母エキス
５．０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ５．０ｇ／Ｌ、グリセロール
３．０ｇ／Ｌからなる培地１００ｍｌ（ｐＨ７．０）を
５００ｍｌ容坂口フラスコに分注し、１２１℃、１５分
間加熱滅菌した後、表１に示す菌株を接種し、３０℃で
２４時間振とう培養した。培養終了後、遠心分離にて集
菌した。０．５％３−キヌクリジノン、１．０％グルコ
ース、０．５ｍＭ ＮＡＤ^＋、０．５ｍＭ ＮＡＤ
Ｐ^＋）を含む５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．
０）１５ｍｌに表１に示す集菌菌体をそれぞれ懸濁さ
せ、３０℃で４８時間反応させた。反応終了後、反応液
にＮａＣｌを加え、ＮａＯＨ水溶液でｐＨ１２に調製
し、ｎ−ブタノール１５ｍｌで３−キヌクリジノールを
抽出した。芒硝で抽出液を乾燥後、ガスクロマトグラフ
ィー（ＣＰ−ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ−Ｎ１９カラ
ム、０．２５ｍｍＩＤ×２５ｍ）で３−キヌクリジノー
ルの光学純度を測定した。結果を表１に示す。

【００３０】

【表１】

【００３１】実施例２ グルコース２０ｇ／Ｌ、酵母エキス２．０ｇ／Ｌ、グル
タミン酸ナトリウム１．０ｇ／Ｌ 、麦芽エクス５．０
ｇ／Ｌからなる培地１００ｍｌ（ｐＨ５．６）を５００
ｍｌ容坂口フラスコに分注し、１２１℃、１５分間加熱
滅菌した後、表２に示す菌株を接種し、３０℃で２４時
間振とう培養した。培養終了後、遠心分離にて集菌し
た。実施例１と同様に反応及び分析を行い、生成物であ
る３−キヌクリジノールの光学純度を測定した。結果を
表２に示す。

【００３２】

【表２】

【００３３】実施例３ 実施例２と同様の培地２０００ｍｌでＧｅｏｔｒｉｃｈ
ｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ ＩＦＯ ４５９９を３０℃で
２４時間振とう培養した。培養終了後、遠心分離にて集
菌した。この菌体を磨砕用酸化アルミナで破砕し、０．
５ｍＭのフェニルメタンスルフォニルフルオライド（Ｐ
ＭＳＦ）を含む３０ｍｌの２０ｍＭトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ７．０）で抽出後、遠心し上清を粗酵素液とし
た。粗酵素液を透析後、ＤＥＡＥ−Ｔｏｙｏｐｅａｌカ
ラムにより精製し、活性画分を得た。これを用い、１０
０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）、１０ｍＭ３
−キヌクリジノン、１．０ｍＭ ＮＡＤＨ、２００ｍＭ
ギ酸ナトリウム、０．２単位ギ酸脱水素酵素（ベーリン
ガー・マンハイム社製）を含む２ｍｌの条件で３０℃で
１２時間酵素反応したところ、反応液中に（Ｓ）１００
％ｅｅの３−キヌクリジノール０．５ｍｍｏｌ／Ｌを得
た。

【００３４】実施例４ １．５％ペプトン、０．５％酵母エキス、１．０％スク
ロース、０．５％ＮａＣｌ、０．３％Ｌ−グルタミン酸
ナトリウムを含む培地でＭｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｌｕｔｅｏｌｕｍ ＪＣＭ ９１７４を３０℃で２４
時間振とう培養した。培養終了後、遠心分離にて集菌
し、５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）で洗
浄した。１％３−キヌクリジノン、１．０％グルコー
ス、０．５ｍＭ ＮＡＤ^＋、０．５ｍＭ ＮＡＤＰ^＋を
含む５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）１ｍ
ｌに、培養液１ｍｌ分の洗浄菌体を懸濁させ、激しく振
盪し２５℃で４８時間反応したところ、反応液中に
（Ｒ）１００％ｅｅの３−キヌクリジノール５０ｍｍｏ
ｌ／Ｌを得た。

【００３５】実施例５ 反応に加える菌体量を培養液３ｍｌ分とし、実施例４と
同様に反応を行ったところ、反応液中に（Ｒ）１００％
ｅｅの３−キヌクリジノール６５ｍｍｏｌ／Ｌを得た。

【００３６】

【発明の効果】新たに見出された微生物による不斉還元
反応により、医農薬合成中間体として有用な光学活性３
−キヌクリジノールあるいはその塩を工業的に有利な方
法で製造することが可能である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｒ 1:01） Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 17/18 (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:265） Ｃ１２Ｒ 1:265） (Ｃ１２Ｐ 17/18 (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:645） Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 17/18 (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:785） Ｃ１２Ｒ 1:785） (Ｃ１２Ｎ 1/14 (Ｃ１２Ｎ 1/14 Ａ Ｃ１２Ｒ 1:645） Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｎ 1/16 (Ｃ１２Ｎ 1/16 Ｇ Ｃ１２Ｒ 1:785） Ｃ１２Ｒ 1:785） (Ｃ１２Ｎ 1/20 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ａ Ｃ１２Ｒ 1:01） Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｎ 1/20 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ａ Ｃ１２Ｒ 1:265） Ｃ１２Ｒ 1:265）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ属、Ｔｓｕｋａｍ
   ｕｒｅｌｌａ属、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ属 、Ｋｕｒ
   ｔｈｉａ属、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｋｌｕ
   ｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ属又は
   Ｍｕｃｏｒ属に属し、一般式（Ｉ） 【化１】 ［式中、（Ｈ⁺）は鉱酸又は有機酸と塩を形成した状態
   であってもよいことを表す］で示される３−キヌクリジ
   ノン を一般式（II） 【化２】 ［式中、＊は光学活性を表し、（Ｈ⁺）は前記と同様］
   で示される光学活性３−キヌクリジノールに不斉還元す
   る能力を有する微生物の培養物又は該培養物から回収し
   た菌体もしくはその処理物を上記一般式（Ｉ）の３−キ
   ヌクリジノンに作用せしめ、上記一般式（II）の光学活
   性３−キヌクリジノールを得ることを特徴とする光学活
   性３−キヌクリジノールの製造法。