JP4818507B2

JP4818507B2 - 光学活性３−キヌクリジノールの製造法

Info

Publication number: JP4818507B2
Application number: JP2000354126A
Authority: JP
Inventors: 伸哉伊藤
Original assignee: Mitsubishi Chemical Corp; Mitsubishi Rayon Co Ltd
Current assignee: Mitsubishi Chemical Corp; Mitsubishi Rayon Co Ltd
Priority date: 2000-11-21
Filing date: 2000-11-21
Publication date: 2011-11-16
Anticipated expiration: 2020-11-21
Also published as: JP2002153293A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、酵素の作用により３−キヌクリジノン（塩を含む）から光学活性３−キヌクリジノール（塩を含む）を製造する方法に関する。これらの光学活性３−キヌクリジノールは種々の医農薬品等の原料として有用である。
【０００２】
【従来の技術】
光学活性３-キヌクリジノールの製法として、これまでに、例えば、光学活性酒石酸等を分割剤とする優先晶析法により光学活性３−キヌクリジノール誘導体に導く方法［Ａｃｔａ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｕｅｃ．，１６，２８１−３（１９７９）］が報告されている。微生物や酵素を利用する方法としては、３−キヌクリジノールの低級脂肪酸エステルを酵素により不斉加水分解して光学活性３−キヌクリジノールに分割する方法［米国特許５，２１５，９１８、特開平１０−１３６９９５、特開平１０−２１０９９７号及びＬｉｆｅＳｉｃ．２１，１２９３−１３０２（１９７７）］が知られている。しかし、これらの方法は、ラセミ体を出発原料とし、光学分割して目的の光学異性体を得る手法であり、目的としない対掌体が残存すため、生産コストが高くなる傾向にある。
一方、ルイス酸付加物をロジウム錯化合物を触媒として不斉還元により、３−キヌクリジノンから、光学活性３−キヌクリジノールを製造する方法［特開平９−１９４４８０号］が報告されているが、この方法は光学純度が低く、工業的に有利な製造方法とは言い難い。
また、より効率的な方法として、微生物学的な不斉還元反応を利用して光学活性３−キヌクリジノールを製造する方法［特開平１０−２４３７９５号、特開平１１−１９６８９０号及び特開２０００−２４５４９５号］が提案されている。しかし、これらの方法で使用されている微生物学的触媒は、特開平１０−２４３７９５号では、Ｎａｋａｚａｗａｅａ属、Ｃａｎｄｉｄａ属、Ｐｒｏｔｅｕｓ属、Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属およびＲｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ属由来の酵素のみであり、特開平１１−１９６８９０ではＲｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ属、Ｃａｎｄｉｄａ属、Ｓｐｏｒｉｄｉｏｂｏｌｕｓ属、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ属、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ属、Ｇｏｒｄｏｎａ属、Ｐｉｃｈｉａ属およびＮｏｃａｒｄｉａ属由来の酵素のみであり、また、特開２０００−２４５４９５ではＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ属、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ属、Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ属、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ属、Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ属およびＹａｒｒｏｗｉａ属由来の酵素のみである。
【０００３】
【本発明が解決しようとする課題】
したがって、本発明は、さらに有効な微生物学的触媒による不斉還元反応により３−キヌクリジノンから光学活性３−キヌクリジノールを工業的に有利に製造する方法を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、前記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、本反応を触媒することがこれまでに知られていない微生物において、本反応を触媒するものが多数存在することを新たに見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００５】
すなわち、本発明は、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ属、Ｔｓｕｋａｍｕｒｅｌｌａ属、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｋｕｒｔｈｉａ属、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ属又はＭｕｃｏｒ属に属し、一般式（Ｉ）
【化３】
［式中、（Ｈ⁺）は鉱酸又は有機酸と塩を形成した状態であってもよいことを表す］で示される３−キヌクリジノンを
一般式（II）
【化４】
［式中、＊は光学活性を表し、（Ｈ⁺）は前記と同様］で示される光学活性３−キヌクリジノールに不斉還元する能力を有する微生物の培養物又は該培養物から回収した菌体もしくはその処理物を上記一般式（Ｉ）の３−キヌクリジノンに作用せしめ、上記一般式（II）の光学活性３−キヌクリジノールを得ることを特徴とする光学活性３−キヌクリジノールの製造法、である。
【０００６】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
一般式(Ｉ) で示される３−キヌクリジノン及び一般式（II）で示される３−キヌクリジノールにおいて、（Ｈ⁺）で表される窒素原子の部分は、意図的に有機酸又は鉱酸等の塩を形成させたものであっても構わない。具体的には、鉱酸塩として塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等が、また、有機酸塩として酢酸塩、プロピオン酸塩、酪酸塩、フマル酸、マロン酸、シュウ酸等の脂肪族有機酸塩、安息香酸等の芳香族有機酸塩等が例示される。
【０００７】
本発明において使用する一般式（Ｉ）で示される３−キヌクリジンを一般式（II）で示される光学活性３−キヌクリジノールに不斉還元する能力を有する微生物は、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ属、Ｔｓｕｋａｍｕｒｅｌｌａ属、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｋｕｒｔｈｉａ属、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ属及びＭｕｃｏｒ属等に属する微生物である。
【０００８】
Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ属に属する微生物としてはＧｅｏｔｒｉｃｈｕｍｃａｎｄｉｄｕｍＩＦＯ４５９９、ＧｅｏｔｒｉｃｈｕｍｃａｎｄｉｄｕｍＩＦＯ９５３９、ＧｅｏｔｒｉｃｈｕｍｆｒａｇｒｅｎｓＪＣＭ１７４９、Ｔｓｕｋａｍｕｒｅｌｌａ属に属する微生物としてはＴｓｕｋａｍｕｒｅｌｌａｐａｕｒｏｍｅｔａｂｏｌａＩＦＯ１２１６０、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する微生物としてはＭｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓｌｕｔｅｕｓＩＦＯ１２７０８、Ｋｕｒｔｈｉａ属に属する微生物としてはＫｕｒｔｈｉａｚｏｐｆｉｉＩＦＯ１２０８３、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属に属する微生物としてはＭｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｅｓｔｅｒａｒｏｍａｔｉｃｕｍＩＦＯ３７５１、ＭｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｒａｂｉｎｏｇａｌａｃｔａｎｏｌｙｔｉｃｕｍＪＣＭ９１７１、ＭｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｕｔｅｏｌｕｍＪＣＭ９１７４、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属に属する微生物としてはＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓｍａｒｘｉａｎｕｓＩＡＭ１２２３７、ＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓｐｏｌｙｓｐｏｒｕｓＪＣＭ３７０５、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ属に属する微生物としてはＡｃｒｅｍｏｎｉｕｍｓｐ．１２５０１（FERM P-18082）、及びＭｕｃｏｒ属に属する微生物としてはＭｕｃｏｒｓｐ．１４０２１(FERM P-18083)等が例示される。
【０００９】
Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍｓｐ．１２５０１及びＭｕｃｏｒｓｐ．１４０２１は本発明者らが新たに土壌中より分離したもので、上記寄託番号にて通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託されており、その菌学的性質は以下の通りである。
【００１０】
Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍｓｐ．１２５０１(FERM P-18082)；
オートミール寒天培地（ＯＡ）及び麦芽エキス寒天培地上での７日間培養を行ったところ、共に生育は速く、それぞれ直径７０ｍｍ及び６０ｍｍに達した。菌糸は白色で、ＯＡ上コロニーは培地が桃色〜橙色であった。分生子はフィアロ型で栄養菌糸から単生エレクトしたフィアライドの先端から生じる。透明。鎖状にはならず、フィアライド先端に集合する場合がある。大部分１細胞だが２細胞も見られる。大分生子及び厚壁胞子は形成しない。分生子のＬ／Ｗ＝３．０−６．０。フィアライドは基部に隔壁を有し、長さ２０−４５μｍ、最大幅３．５μｍ程度、細胞壁は栄養菌糸と同等の厚さ。栄養菌糸は幅３．２−３．５μｍ、透明、束になる傾向がある。以上、フィアライドが菌糸から直接立ち上がり、基部に隔壁を有すること、分生子は１０−１８×３．０−３．５μｍであること、最大で１隔壁を有することより、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ属と決定した（類似のＦｕｓａｒｉｕｍｕ属、Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃａｒｐｏｎ属とは多隔壁の大分生胞子を形成しない点で異なる）。
【００１１】
Ｍｕｃｏｒｓｐ．１４０２１(FERM P-18083)；
ポテトデキストロース寒天培地（ＰＤＡ）上における２５℃（７日間）では生育が早く、プレート全面に広がった。白色菌糸及び暗褐色の胞子嚢が観察された。同じくＰＤＡ上における３７℃（７日間）では生育は悪く、直径２−３ｍｍのクリーム色となった。胞子嚢は球形、直径３９−４３μｍ。内部に多数の胞子嚢胞子を含む。胞子嚢柄は透明であり、コルメラは球形、アポファシスを欠く。仮根は観察されず、胞子嚢胞子は球形から楕円形、直径３．５−４．４μｍ程度であった。以上に示す理由よりＭｕｃｏｒ属と決定した。
【００１２】
なお、ＩＦＯ番号、ＪＣＭ番号及びＩＡＭ番号が付された菌株は公知で、それぞれ財団法人発酵研究所、理化学研究所微生物系統保存施設及び東京大学分子細胞生物学研究所から容易に入手することができる。
【００１３】
また、これらの微生物から単離した酵素遺伝子を各種宿主ベクター系に導入した遺伝子操作微生物の利用も可能である。
【００１４】
これらの微生物は、微生物を培地中で培養して得られる培養物をそのまま、又は該培養物から回収した菌体もしくはその処理物として使用できる。菌体処理物としては、菌体の破砕物、菌体を破砕したて得た無細胞抽出物、アセトン、トルエン等で処理した菌体、菌体から分離された粗酵素又は精製酵素、固定化処理された菌体・酵素などが挙げられる。
酵素の使用に当たっては、酵素を適当な担体に固定化して使用することにより、反応終了後の反応液からの酵素の分離・回収が容易になるとともに、酵素の再利用も可能となる。
【００１５】
本発明においては、これら菌体培養液物、微生物菌体及び菌体処理物を通常１種類用いるが、同様な能力を有するものを２種以上混合して用いることも可能である。
【００１６】
上記微生物を培養するための培地としては、通常これらの微生物が生育し得るものであれば何れのものでも使用できる。炭素源としては、例えば、グルコース、シュークロースやマルトース等の糖類、酢酸、クエン酸やフマル酸等の有機酸あるいはその塩、エタノールやグリセロール等のアルコール類等が使用できる。窒素源としては、例えば、ペプトン、肉エキス、酵母エキスやアミノ酸等の一般天然窒素源の他、各種無機、有機酸アンモニウム塩等が使用できる。その他、無機塩、微量金属塩、ビタミン等が必要に応じて適宜添加される。また、高い酵素活性を得るために、例えば、キヌクリジン、キヌクリジノン、キヌクリジノール等のキヌクリジン骨格もつ化合物あるいはカルボニル基、ケトン基を置換基に持つ化合物等を酵素産生の誘導物質として培地に添加することも有効である。
【００１７】
培養は常法に従って行えばよく、例えば、ｐＨ４〜１０、温度１５〜４０℃の範囲にて好気的に６〜９６時間培養する。また、静置培養で同様に培養することで高い酵素活性を得ることができる場合がある。
【００１８】
本発明において、不斉還元反応による一般式（II）の光学活性３−キヌクリジノールの生産は、以下の方法で行うことができる。必要に応じて補酵素（ＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨ、ＮＡＤ^＋、ＮＡＤＰ^＋）及び／又はグルコース、シュークロース、エタノール、メタノール等のエネルギー源の存在下、水又は緩衝液等の反応溶媒中で一般式（Ｉ）の３−キヌクリジノンに上記の菌体培養物、微生物菌体又は菌体処理物を接触させることにより行うことができる。そして、反応温度、必要により反応液のｐＨを制御しながら反応を行う。場合によっては反応の途中で反応基質（３−キヌクリジノンあるいはその塩）及び／又は前記補酵素、エネルギー源を適宜加え、反応を継続させてもよい。補酵素（ＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨ、ＮＡＤ^＋、ＮＡＤＰ^＋）及び／又はグルコース、シュークロース、エタノール、メタノール等のエネルギー源等を加えることで目的化合物の収率が向上する場合が多い。
【００１９】
反応液の基質濃度は、０．０１〜５０重量％の間で特に制限はないが、生産性等を考慮すると０．１〜３０重量％が好ましい。
反応液中の微生物等の濃度は、通常、０．０１〜２０重量％であり、好ましくは０．０１〜１０重量％である。
【００２０】
反応液のｐＨは用いる酵素の至適ｐＨ等を考慮し、総合的に決定され、特に制限はないが、一般的にはｐＨ４〜１１の範囲であり、好ましくはｐＨ５〜９である。また、反応が進行するに従いｐＨが変化してくるが、この場合は適当なｐＨ調整剤を添加して最適ｐＨに調整することが望ましい。
反応温度は０〜６０℃が好ましく、５〜５０℃がより好ましい。
【００２１】
反応溶媒は、通常イオン交換水、緩衝液等の水性媒体を使用するが、３−キヌクリジノンあるいはその塩の溶解を促進させるために有機溶媒あるいは界面活性剤を含んだ系でも反応を行うことができる。
【００２２】
有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール、t-ブチルアルコール、t-アミルアルコール等のアルコール系溶媒、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン等の脂肪族炭化水素系溶媒、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素系溶媒、塩化メチレン、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素系溶媒、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル等のエステル系溶媒、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン等のケトン系溶媒、その他アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等を適宜使用できる。
【００２３】
界面活性剤としては、例えば、アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキル硫酸塩等のアニオン界面活性剤、アルキルピリジニウム塩、ドデシルトリメチルアンモニウムクロリド等のカチオン界面活性剤、ポリオキシエチレンアルキル（フェニル）エーテル、ポリオキシエチレンアルキル（フェニル）エステル、ソルビタン脂肪酸エステル（スパン系界面活性剤）、ポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル（トゥイーン系界面活性剤）、ポリオキシエチレングリコールｐ−ｔ−オクチルフェニルエーテル（トリトン系界面活性剤）、ショ糖脂肪酸エステル等の非イオン性界面活性剤、Ｎ−アルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムベタイン、レシチン、ホスファチジルエタノールアミン、リゾレシチン等の両性界面活性剤等を適宜使用できる。
【００２４】
また、これらの有機溶媒あるいは界面活性剤を水への溶解度以上に加えて２層系で反応を行うことも可能である。有機溶媒を反応系に共存させることで、選択率、変換率、収率などが向上することも多い。
【００２５】
反応時間は、通常、１時間〜１週間、好ましくは１〜７２時間であり、そのような時間で反応が終了する反応条件を選択することが好ましい。
【００２６】
尚、以上のような基質濃度、補酵素濃度、酵素濃度、ｐＨ、温度、溶媒、反応時間及びその他の反応条件はその条件における反応収率等を考慮して目的とする光学活性３−キヌクリジノールが最も多く採取できる条件を適宜選択することが望ましい。
【００２７】
反応終了混合液からの目的物の単離は除菌後、濃縮、抽出、カラム分離、結晶化等通常の公知の方法によって行うことができる。
例えば、ｐＨをアルカリ性に調整後、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル等のエーテル類、酢酸エチル等のエステル類、ヘキサン、ベンゼン、トルエン等の炭化水素類、塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素類、ブタノール、イソブタノール、t-アミルアルコール等のアルコール系溶媒等一般的な溶媒により抽出分離することができる。
【００２８】
【実施例】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例の範囲に限定されるものではない。
【００２９】
実施例１
トリプトン（Ｂａｃｔｏ製）１０ｇ／Ｌ、酵母エキス５．０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ５．０ｇ／Ｌ、グリセロール３．０ｇ／Ｌからなる培地１００ｍｌ（ｐＨ７．０）を５００ｍｌ容坂口フラスコに分注し、１２１℃、１５分間加熱滅菌した後、表１に示す菌株を接種し、３０℃で２４時間振とう培養した。培養終了後、遠心分離にて集菌した。
０．５％３−キヌクリジノン、１．０％グルコース、０．５ｍＭＮＡＤ^＋、０．５ｍＭＮＡＤＰ^＋）を含む５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）１５ｍｌに表１に示す集菌菌体をそれぞれ懸濁させ、３０℃で４８時間反応させた。反応終了後、反応液にＮａＣｌを加え、ＮａＯＨ水溶液でｐＨ１２に調製し、ｎ−ブタノール１５ｍｌで３−キヌクリジノールを抽出した。芒硝で抽出液を乾燥後、ガスクロマトグラフィー（ＣＰ−ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ−Ｎ１９カラム、０．２５ｍｍＩＤ×２５ｍ）で３−キヌクリジノールの光学純度を測定した。
結果を表１に示す。
【００３０】
【表１】
【００３１】
実施例２
グルコース２０ｇ／Ｌ、酵母エキス２．０ｇ／Ｌ、グルタミン酸ナトリウム１．０ｇ／Ｌ、麦芽エクス５．０ｇ／Ｌからなる培地１００ｍｌ（ｐＨ５．６）を５００ｍｌ容坂口フラスコに分注し、１２１℃、１５分間加熱滅菌した後、表２に示す菌株を接種し、３０℃で２４時間振とう培養した。培養終了後、遠心分離にて集菌した。実施例１と同様に反応及び分析を行い、生成物である３−キヌクリジノールの光学純度を測定した。
結果を表２に示す。
【００３２】
【表２】
【００３３】
実施例３
実施例２と同様の培地２０００ｍｌでＧｅｏｔｒｉｃｈｕｍｃａｎｄｉｄｕｍＩＦＯ４５９９を３０℃で２４時間振とう培養した。培養終了後、遠心分離にて集菌した。この菌体を磨砕用酸化アルミナで破砕し、０．５ｍＭのフェニルメタンスルフォニルフルオライド（ＰＭＳＦ）を含む３０ｍｌの２０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）で抽出後、遠心し上清を粗酵素液とした。粗酵素液を透析後、ＤＥＡＥ−Ｔｏｙｏｐｅａｌカラムにより精製し、活性画分を得た。これを用い、１００ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）、１０ｍＭ３−キヌクリジノン、１．０ｍＭＮＡＤＨ、２００ｍＭギ酸ナトリウム、０．２単位ギ酸脱水素酵素（ベーリンガー・マンハイム社製）を含む２ｍｌの条件で３０℃で１２時間酵素反応したところ、反応液中に（Ｓ）１００％ｅｅの３−キヌクリジノール０．５ｍｍｏｌ／Ｌを得た。
【００３４】
実施例４
１．５％ペプトン、０．５％酵母エキス、１．０％スクロース、０．５％ＮａＣｌ、０．３％Ｌ−グルタミン酸ナトリウムを含む培地でＭｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｕｔｅｏｌｕｍＪＣＭ９１７４を３０℃で２４時間振とう培養した。培養終了後、遠心分離にて集菌し、５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）で洗浄した。１％３−キヌクリジノン、１．０％グルコース、０．５ｍＭＮＡＤ^＋、０．５ｍＭＮＡＤＰ^＋を含む５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）１ｍｌに、培養液１ｍｌ分の洗浄菌体を懸濁させ、激しく振盪し２５℃で４８時間反応したところ、反応液中に（Ｒ）１００％ｅｅの３−キヌクリジノール５０ｍｍｏｌ／Ｌを得た。
【００３５】
実施例５
反応に加える菌体量を培養液３ｍｌ分とし、実施例４と同様に反応を行ったところ、反応液中に（Ｒ）１００％ｅｅの３−キヌクリジノール６５ｍｍｏｌ／Ｌを得た。
【００３６】
【発明の効果】
新たに見出された微生物による不斉還元反応により、医農薬合成中間体として有用な光学活性３−キヌクリジノールあるいはその塩を工業的に有利な方法で製造することが可能である。

Claims

ゲオトリクム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ）属、ツカムレラ（Ｔｓｕｋａｍｕｒｅｌｌａ）属、ミクロコッカス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、クルチア（Ｋｕｒｔｈｉａ）属、ミクロバクテリウム（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、クリベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属、アクレモニウム（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）属又はムコール（Ｍｕｃｏｒ）属に属し、一般式（Ｉ）
［式中、（Ｈ⁺）は鉱酸又は有機酸と塩を形成した状態であってもよいことを表す］で示される３−キヌクリジノンを
一般式（II）
［式中、＊は光学活性を表し、（Ｈ⁺）は前記と同様］で示される光学活性３−キヌクリジノールに不斉還元する能力を有する微生物の培養物又は該培養物から回収した菌体もしくはその処理物を上記一般式（Ｉ）の３−キヌクリジノンに作用せしめ、
ゲオトリクム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ）属に属する前記微生物により、上記一般式（II）の（R）又は（S）−３−キヌクリジノールを得るか、
ツカムレラ（Ｔｓｕｋａｍｕｒｅｌｌａ）属に属する前記微生物により、上記一般式（II）の（R）−３−キヌクリジノールを得るか、
ミクロコッカス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する前記微生物により、上記一般式（II）の（S）−３−キヌクリジノールを得るか、
クルチア（Ｋｕｒｔｈｉａ）に属する前記微生物により、上記一般式（II）の（R）−３−キヌクリジノールを得るか、
ミクロバクテリウム（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する前記微生物により、上記一般式（II）の（R）−３−キヌクリジノールを得るか、
クリベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属に属する前記微生物により、上記一般式（II）の（R）−３−キヌクリジノールを得るか、
アクレモニウム（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）属に属する前記微生物により、上記一般式（II）の（R）−３−キヌクリジノールを得るか、又は
ムコール（Ｍｕｃｏｒ）属に属する前記微生物により、上記一般式（II）の（R）−３−キヌクリジノールを得る
ことを特徴とする光学活性３−キヌクリジノールの製造法。