JPH0533995B2

JPH0533995B2 -

Info

Publication number: JPH0533995B2
Application number: JP60132555A
Authority: JP
Inventors: Hidetoshi Kutsuki; Ikuo Sawa; Natsuki Mori; Junzo Hasegawa; Kyoshi Watanabe
Original assignee: Kanegafuchi Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Kanegafuchi Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1985-06-18
Filing date: 1985-06-18
Publication date: 1993-05-20
Also published as: JPS61289899A

Description

【発明の詳細な説明】

〔産業上の利用分野〕本発明は、一般式（Ｒ，Ｓ）−１（式中、Ｘはハロゲン原子、Ｒは炭素数１〜７
の脂肪族炭化水素を示す。）で示される（Ｒ，Ｓ）−２−ハロ−１−フエニル
エタノールの脂肪酸エステルに、不斉的に加水分
解するエステラーゼ活性を有する酵素を作用さ
せ、一般式（Ｓ）−２（式中、Ｘはハロゲン原子を示す）で示される（Ｓ）−２−ハロ−１−フエニルエタ
ノールと、一般式（Ｒ）−１で示される（Ｒ）−２−ハロ−１−フエニルエタ
ノールの脂肪酸エステルに分割し、各々を分離採
取することを特徴とする光学活性２−ハロ−１−
フエニルエタノールおよびそのエステルの製造法
に関するものである。光学活性２−ハロ−１−フエニルエタノール
は、医薬品、農薬、香料等の合成原料として汎用
性のある有用な物質である。また光学活性な２−
ハロ−１−フエニルエタノールの脂肪酸エステル
は化学的あるいは酵素的加水分解により光学活性
な２−ハロ−１−フエニルエタノールにすること
ができ、合成に利用できる。〔従来の技術〕光学活性（Ｒ）−２−ハロ−１−フエニルエタ
ノールの製法に関して、α−ハロアセトフエノン
を酵母により不斉還元してうる方法が報告されて
いる〔Herman Ziffer et.al.，ジヤーナル・オ
ブ・オルガニツク・ケミストリー（J.Organic
Chemistry），45，3352（1980）、Michael
Stralow et.al.，ジヤーナル・オブ・ケミカル・
ソサイテー，ケミカル・コミニユケーシヨン（J.
Chemical Society，Chemical Comminucation）
400（1975）〕が、大量の酵母を必要とし、生産設
備の点からも必ずしも有利な方法とは考え難い。
また、（Ｒ，Ｓ）−２−ハロ−１−フエニルエタノ
ールの脂肪酸エステルにリゾプス・ニグリカンス
（Rhizopus nigricans）を作用させ不斉加水分解
を行い、（Ｒ）−２−ハロ−１−フエニルエタノー
ルを得る方法〔テトラヘドロン・レターズ
（Tetrahedron Letters）22巻，（27），2527
（1981）〕が知られているが、（Ｓ）−体を加水分解
する酵素あるいは微生物は知られていなかつた。〔発明が解決しようとする問題点〕そこで本発明者らは、より簡便な設備で経済的
な生産法について種々検討を行つた結果、（Ｒ，
Ｓ）−２−ハロ−１−フエニルエタノールの脂肪
酸エステル〔（（Ｒ，Ｓ）−１〕を不斉的に加水分
解する酵素の存在を見い出し、本発明を完成させ
るに至つた。〔問題点を解決するための手段〕本発明の基質として用いられる、一般式（Ｒ，
Ｓ）−１で表わされる（Ｒ，Ｓ）−２−ハロ−１−フエニ
ルエタノールの脂肪酸エステルの置換基Ｘ，Ｒの
組み合わせは次の様なものが挙げられる。Ｘは例
えば塩素または臭素等のハロゲン基、Ｒは例えば
C₁〜C₇の脂肪族炭化水素基が挙げられるが、こ
の脂肪族炭化水素基の一部がハロゲン基または水
酸基に置換されていても差しつかえない。原料の（Ｒ，Ｓ）−１は次の様にして得られる。
例えばα−クロロアセトフエノン15.5部をメタノ
ール50部に溶解し、冷却下攪拌しつつ水素化ホウ
素ナトリウム1.9部を徐々に添加する。その後30
分間攪拌しつづけたのち、1N−塩酸で中和し、
メタノールを減圧除去する。次に酢酸エチルで抽
出し、残留シロツプを減圧蒸留（135℃／３mmＨ
ｇ）し、（Ｒ，Ｓ）−２−クロロ−１−フエニルエ
タノール11.6部を得る（収率75％）。（Ｒ，Ｓ）−２−クロロ−１−フエニルエタノ
ール42部、トリエチルアミン28部を塩化メチレン
に溶解し、冷却下攪拌しつつ塩化アセチル22部を
１時間にわたり滴下する。生成したトリエチルア
ミン塩酸塩を過により除去したのち、塩化メチ
レン層を飽和食塩水で洗浄する。次に塩化メチレ
ンを減圧除去したのち、減圧蒸留（93℃／２mmＨ
ｇ）し、（Ｒ，Ｓ）−２−クロロ−１−フエニルエ
タノールのアセチルエステルを39部得る（収率73
％）。同様に炭素数の異なる酸クロライドを用い
ることによりC₂〜C₈のエステルが収率70〜85％
で得られる。またα−クロロアセトフエノンの代
りにα−ブロムアセトフエノンを用いれば（Ｒ，
Ｓ）−２−ブロム−１−フエニルエタノールの脂
肪酸エステルが得られる。いずれも無色液状物質
である。ラセミ体の（Ｒ，Ｓ）−１を不斉的に加水分解
して（Ｓ）−２および（Ｒ）−１を生成させる立体
選択性のあるエステラーゼ活性を有する酵素であ
れば、微生物由来でも、動物臓器由来でもいずれ
でも用いることができる。本発明に使用できる酵
素としては、シユードモナス（Pseudomanas）
属、あるいはクロモバクテリウム
（Chromobacterium）属に属する微生物より得ら
れる酵素、更に詳しくはシユードモナス・スピシ
ーズ（Pseudomanas sp.）あるいはクロモバク
テリウム・ビスコスム（Chromobacterium
viscosum）から得られる酵素が挙げられる。こ
れらの酵素の市販品としてシユードモナス属の微
生物由来のリパーゼＰ「アマノ」（天野製薬(株)製）
あるいはクロモバクテリウム属由来のリパーゼ東
洋（東洋醸造(株)製）などがあり利用できる。これ
らの酵素はいずれも立体選択性がきびしく、基質
（Ｒ，Ｓ）−１に対し、ほぼ100％Ｓ体に特異的に
作用する。不斉加水分解反応は、基質（Ｒ，Ｓ）−１を0.1
〜50％（ｗ／ｖ）の範囲で水に懸濁し、適量の酵
素、例えば基質と酵素の重量比１：１ないし
500：１の割合で加え、温度10〜45℃、好ましく
は25〜35℃の範囲で攪拌しながら行なう。PHは
4.0〜8.0の範囲であれば良いが、加水分解反応の
進行に伴い、反応液のPHが酸性側に傾くので
NaOH等の適当なアルカリ水溶液等でPHを6.0〜
7.5に保持するのが好ましい。不斉識別の厳格な
酵素であれば、基質の２分の１当量のアルカリが
消費された時点で加水分解反応は停止し、反応が
終了した事を汁ことができる。従つて、この発明
に利用しうる酵素の検索もこの方法によつて行な
う事ができる。また酵素は適当な水不溶性担体、
例えばイオン交換樹脂等に固定化して行なうこと
もできる。次に不斉加水分解反応ののち、反応液から
（Ｓ）−２と（Ｒ）−１を分離採取する方法として
は、例えば酢酸エチル、塩化メチレン等の有機溶
剤で抽出し、減圧下溶剤除去シリカゲルクロマト
グラフイー、例えばワコーゲルＣ−300に負荷し
トルエンで溶出すれば両者は容易に分離できる。
（Ｓ）−２および（Ｒ）−１の光学純度は次の様に
して決定できる。（Ｓ）−２は表１の如き条件で高
速液体クロマトグラフイー（HPLC）にて行な
う。

〔発明の効果〕

本発明によれば、（Ｒ，Ｓ）−２−ハロ−１−フ
エニルエタノールの脂肪酸エステルに、不斉的に
加水分解するエステラーゼ活性を有する酵素を作
用させることにより光学活性な２−ハロ−１−フ
エニルエタノールおよびそのエステルを工業的に
有利に製造することができる。〔実施例〕以下実施例により本発明を具体的に示すが、本
発明は実施例のみに限定されるものではない。実施例１２−クロロ−１−フエニルエタノールのアセチ
ルエステル（（Ｒ，Ｓ）−１，Ｘ＝Cl，Ｒ＝CH₃）
１ｇ、リパーゼＰ「アマノ」あるいはリパーゼ東
洋200mgを50mMリン酸緩衝液（PH7.0）100mlに
添加し、34℃にて攪拌下、1N−NaOH水溶液で
PHを7.0に保持しつつ28時間反応させた。次に塩
化メチレン150mlで３回抽出し、塩化メチレン層
を芒硝で脱水後、減圧下溶剤除去をし油状物質を
得た。これをワコーゲルＣ−300 30ｇを詰めたカ
ラムに負荷し、トルエンにて溶出した。（Ｓ）−２
画分と（Ｒ）−１画分をそれぞれ集め、減圧下溶
剤を除去し、それぞれ無色油状物質を得た。それ
らの分析値は表２の如くであり、いずれも光学純
度100％e.e.の（Ｓ）−２−クロロ−１−フエニル
エタノール〔（Ｓ）−２〕、（Ｒ）−２−クロロ−１
−フエニルエタノールのアセチルエステル〔（Ｒ）
−１〕が得られた。

【表】実施例２２−ブロム−１フエニルエタノールのアセチル
エステル〔（Ｒ，Ｓ）−１，Ｘ＝Br，Ｒ＝CH₃〕
１ｇを用いて実施例１と同様に反応させ、表３の
結果を得た。

【表】実施例３２−クロロ−１−フエニルエタノールの脂肪酸
エステル〔（（Ｒ，Ｓ）−１，Ｘ＝Cl，Ｒ＝C₂H₅，
C₃H₇，C₄H₉，C₅H₁₁，C₆H₁₃，C₇H₁₅〕各々を１
ｇ、リパーゼＰ「アマノ」200mgを50mMリン酸緩
衝液（PH7.0）100mlに添加し、34℃にて攪拌下、
1N−NaOH水溶液でPHを7.0に保持しつつ100時
間反応させた。その後、実施例１と同様に処理
し、表４に示すように（Ｓ）−２−クロロ−１−
フエニルエタノール〔（Ｓ）−２〕および（Ｒ）−
２−クロロ−１−フエニルエタノールの脂肪酸エ
ステル〔（Ｒ）−１〕を得た。

【表】実施例４２−ブロム−１−フエニルエタノールの脂肪酸
エステル〔（Ｒ，Ｓ）−１，Ｘ＝Br，Ｒ＝C₂H₅，
C₃H₇，C₄H₉，C₅H₁₁，C₆H₁₃，C₇H₁₅〕各々１ｇ
を実施例３と同様にリパーゼＰ「アマノ」200mgを
用い反応させ、処理し表５に示すように（Ｓ）−
２−ブロム−１−フエニルエタノール〔（Ｓ）−
２〕および（Ｒ）−２−ブロム−１−フエニルエ
タノールの脂肪酸エステル〔（Ｒ）−１〕を得た。

【表】

Claims

【特許請求の範囲】１一般式（Ｒ，Ｓ）−１（式中、Ｘはハロゲン原子、Ｒは炭素数１〜７
の脂肪族炭化水素を示す）で示される（Ｒ，Ｓ）−２−ハロ−１−フエニル
エタノールの脂肪酸エステルに、シユードモナス
属又はクロモバクテリウム属に属する微生物が生
産し、不斉的に加水分解するエステラーゼ活性を
有する酵素を作用させ、一般式（Ｓ）−２（式中、Ｘはハロゲン原子を示す）で示される（Ｓ）−２−ハロ−１−フエニルエタ
ノールと、一般式（Ｒ）−１（式中のＸ，Ｒは前記と同じ）で示される（Ｒ）−２−ハロ−１−フエニルエタ
ノールの脂肪酸エステルに分割し、各々を分離採
取することを特徴とする光学活性２−ハロ−１−
フエニルエタノールおよびそのエステルの製造
法。２（Ｒ，Ｓ）−２−ハロ−１−フエニルエタノ
ールの脂肪酸エステルを不斉的に加水分解する酵
素の立体選択性がほぼ100％近く（Ｓ）体に特異
的である特許請求の範囲第１項記載の製造法。