JPH0662892A - 光学分割によるインドリン−２−カルボン酸の製造方法 - Google Patents
光学分割によるインドリン−２−カルボン酸の製造方法Info
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- JPH0662892A JPH0662892A JP13953493A JP13953493A JPH0662892A JP H0662892 A JPH0662892 A JP H0662892A JP 13953493 A JP13953493 A JP 13953493A JP 13953493 A JP13953493 A JP 13953493A JP H0662892 A JPH0662892 A JP H0662892A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 （Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸エ
ステルを不斉的に加水分解して、光学活性（Ｓ）−イン
ドリン−２−カルボン酸を生成させる立体選択的エステ
ラーゼ活性を有するシュードモナス（Pseudomonas)属に
属する微生物或いはシュードモナス（Pseudomonas)属も
しくはアスペルギルス(Aspergillus) 属に属する微生物
由来の酵素を作用させることにより、前記ラセミ体を光
学活性な化合物インドリン−２−カルボン酸（Ｓ）−II
と光学活性インドリン−２−カルボン酸エステル（Ｒ）
−Ｉとに光学分割し、夫々の光学活性体を分を分離、採
取し、更に必要に応じ、採取した（Ｒ）−Ｉを加水分解
して（Ｓ）−IIの対掌体（Ｒ）−IIを生成させ、採取す
る。 【効果】 （Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸エ
ステルから該エステルの光学活性体の（Ｒ）体を、ある
いは光学活性なインドリン−２−カルボン酸の（Ｒ）体
もしくは（Ｓ）体を得ることが出来る。
ステルを不斉的に加水分解して、光学活性（Ｓ）−イン
ドリン−２−カルボン酸を生成させる立体選択的エステ
ラーゼ活性を有するシュードモナス（Pseudomonas)属に
属する微生物或いはシュードモナス（Pseudomonas)属も
しくはアスペルギルス(Aspergillus) 属に属する微生物
由来の酵素を作用させることにより、前記ラセミ体を光
学活性な化合物インドリン−２−カルボン酸（Ｓ）−II
と光学活性インドリン−２−カルボン酸エステル（Ｒ）
−Ｉとに光学分割し、夫々の光学活性体を分を分離、採
取し、更に必要に応じ、採取した（Ｒ）−Ｉを加水分解
して（Ｓ）−IIの対掌体（Ｒ）−IIを生成させ、採取す
る。 【効果】 （Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸エ
ステルから該エステルの光学活性体の（Ｒ）体を、ある
いは光学活性なインドリン−２−カルボン酸の（Ｒ）体
もしくは（Ｓ）体を得ることが出来る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、一般式Ｉ
【０００２】
【化７】
【０００３】（式中、ＲはＣ2 〜Ｃ8 の脂肪族炭化水素
基）で表わされる（Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボ
ン酸エステルを不斉的に加水分解して、構造式（Ｓ）−
II
基）で表わされる（Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボ
ン酸エステルを不斉的に加水分解して、構造式（Ｓ）−
II
【０００４】
【化８】
【０００５】で表わされる光学活性（Ｓ）−インドリン
−２−カルボン酸を生成させる立体選択的エステラーゼ
活性を有するシュードモナス（Pseudomonas)属に属する
微生物或いはシュードモナス（Pseudomonas)属もしくは
アスペルギルス(Aspergillus)属に属する微生物由来の
酵素を作用させることにより、ラセミ体Ｉを光学活性な
化合物インドリン−２−カルボン酸（Ｓ）−IIと一般式
（Ｒ）−Ｉ
−２−カルボン酸を生成させる立体選択的エステラーゼ
活性を有するシュードモナス（Pseudomonas)属に属する
微生物或いはシュードモナス（Pseudomonas)属もしくは
アスペルギルス(Aspergillus)属に属する微生物由来の
酵素を作用させることにより、ラセミ体Ｉを光学活性な
化合物インドリン−２−カルボン酸（Ｓ）−IIと一般式
（Ｒ）−Ｉ
【０００６】
【化９】
【０００７】（Ｒは前記と同じ）で表わされる光学活性
インドリン−２−カルボン酸エステルとに光学分割し、
夫々の光学活性体を分を分離、採取し、更に必要に応
じ、採取した（Ｒ）−Ｉを加水分解して（Ｓ）−IIの対
掌体（Ｒ）−IIを生成させ、採取することを特徴とする
光学分割によるインドリン−２−カルボン酸エステルの
製造方法に関する。
インドリン−２−カルボン酸エステルとに光学分割し、
夫々の光学活性体を分を分離、採取し、更に必要に応
じ、採取した（Ｒ）−Ｉを加水分解して（Ｓ）−IIの対
掌体（Ｒ）−IIを生成させ、採取することを特徴とする
光学分割によるインドリン−２−カルボン酸エステルの
製造方法に関する。
【０００８】本発明は、使用する立体選択的エステラー
ゼを選ぶことにより、（Ｓ）−インドリン−２−カルボ
ン酸エステル及び（Ｒ）−インドリン−２−カルボン酸
エステルを随意採取することができる。これら光学活性
インドリン−２−カルボン酸類化合物は種々医薬品の原
料となりうる。例えば、（Ｓ）−インドリン−２−カル
ボン酸はアンジオテンシンＩ変換酵素の阻害剤として有
効な血圧降下剤である（Ｓ）−１−〔（Ｓ）−３−メル
カプト−２−オキソプロピル〕−インドリン−２−カル
ボン酸
ゼを選ぶことにより、（Ｓ）−インドリン−２−カルボ
ン酸エステル及び（Ｒ）−インドリン−２−カルボン酸
エステルを随意採取することができる。これら光学活性
インドリン−２−カルボン酸類化合物は種々医薬品の原
料となりうる。例えば、（Ｓ）−インドリン−２−カル
ボン酸はアンジオテンシンＩ変換酵素の阻害剤として有
効な血圧降下剤である（Ｓ）−１−〔（Ｓ）−３−メル
カプト−２−オキソプロピル〕−インドリン−２−カル
ボン酸
【０００９】
【化１０】
【００１０】等に利用できる〔文献 J.Med. Chem., 2
6,394(1983)〕。
6,394(1983)〕。
【００１１】
【従来の技術】これら光学活性なインドリン−２−カル
ボン酸類の製造については、下記に示すような光学分割
剤を用いる方法が知られている。
ボン酸類の製造については、下記に示すような光学分割
剤を用いる方法が知られている。
【００１２】
【化１１】
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】これら分割剤を用いた
光学分割法は操作が煩雑であり、大量生産に適した簡便
な方法により光学活性インドリン−２−カルボン酸又は
光学活性インドリン−２−カルボン酸エステルを得る方
法の開発が望まれていた。
光学分割法は操作が煩雑であり、大量生産に適した簡便
な方法により光学活性インドリン−２−カルボン酸又は
光学活性インドリン−２−カルボン酸エステルを得る方
法の開発が望まれていた。
【００１４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、インドリ
ン−２−カルボン酸のカルボン酸部位を種々アルコール
を用いてエステル化し、このエステル体に微生物菌体或
いは酵素を作用させて不斉加水分解を行えば光学活性体
を取得できると考え、検討を重ねてきた。その結果、シ
ュードモナス（Pseudomonas)属又はアスペルギルス（As
pergillus)属に属する微生物或いは該微生物から得られ
る酵素を作用させ、不斉的に加水分解し、（Ｓ）−イン
ドリン−２−カルボン酸（Ｓ）−IIと（Ｒ）−インドリ
ン−２−カルボン酸エステルＲ−Ｉを生成させた後、有
機溶媒で分離、抽出することにより（Ｓ）−IIと（Ｒ）
−Ｉを夫々採取でき、更に採取した（Ｒ）−Ｉをアルカ
リ加水分解、又は酵素分解を行って（Ｒ）−IIを生成、
採取できることを見い出し、本発明を完成した。以下
に、本発明を更に詳細に説明する。
ン−２−カルボン酸のカルボン酸部位を種々アルコール
を用いてエステル化し、このエステル体に微生物菌体或
いは酵素を作用させて不斉加水分解を行えば光学活性体
を取得できると考え、検討を重ねてきた。その結果、シ
ュードモナス（Pseudomonas)属又はアスペルギルス（As
pergillus)属に属する微生物或いは該微生物から得られ
る酵素を作用させ、不斉的に加水分解し、（Ｓ）−イン
ドリン−２−カルボン酸（Ｓ）−IIと（Ｒ）−インドリ
ン−２−カルボン酸エステルＲ−Ｉを生成させた後、有
機溶媒で分離、抽出することにより（Ｓ）−IIと（Ｒ）
−Ｉを夫々採取でき、更に採取した（Ｒ）−Ｉをアルカ
リ加水分解、又は酵素分解を行って（Ｒ）−IIを生成、
採取できることを見い出し、本発明を完成した。以下
に、本発明を更に詳細に説明する。
【００１５】本発明の基質として用いられる、一般式
【００１６】
【化１２】
【００１７】で表わされるインドリン−２−カルボン酸
エステルは、ＲがＣ2 〜Ｃ8 の脂肪族炭化水素基の化合
物であり、好ましくはエチル、ブチル、アミル、ヘキシ
ル基からなるエステルである。
エステルは、ＲがＣ2 〜Ｃ8 の脂肪族炭化水素基の化合
物であり、好ましくはエチル、ブチル、アミル、ヘキシ
ル基からなるエステルである。
【００１８】インドリン−２−カルボン酸エステルＩは
次のようにして得られる。即ち（Ｒ，Ｓ）−インドリン
−２−カルボン酸に溶媒と反応試剤とを兼ねたアルコー
ルを加え、インドリン−２−カルボン酸の濃度５〜２０
％（ｗ／ｖ）の範囲で、強酸性下、５０℃〜還流温度の
範囲で１〜５時間縮合反応を行う。更に、この反応液を
ｐＨ７．０に調整後、減圧濃縮により過剰のアルコール
を除去する。濃縮液に水又は飽和重炭酸ソーダを加え、
酢酸エチル又はヘキサン等のような疎水性有機溶媒を用
いて抽出し、更に濃縮すれば高純度の（Ｒ，Ｓ）−イン
ドリン−２−カルボン酸エステルＩが得られる。
次のようにして得られる。即ち（Ｒ，Ｓ）−インドリン
−２−カルボン酸に溶媒と反応試剤とを兼ねたアルコー
ルを加え、インドリン−２−カルボン酸の濃度５〜２０
％（ｗ／ｖ）の範囲で、強酸性下、５０℃〜還流温度の
範囲で１〜５時間縮合反応を行う。更に、この反応液を
ｐＨ７．０に調整後、減圧濃縮により過剰のアルコール
を除去する。濃縮液に水又は飽和重炭酸ソーダを加え、
酢酸エチル又はヘキサン等のような疎水性有機溶媒を用
いて抽出し、更に濃縮すれば高純度の（Ｒ，Ｓ）−イン
ドリン−２−カルボン酸エステルＩが得られる。
【００１９】ラセミ体Ｉを不斉的に加水分解し、（Ｓ）
−IIを生成させる立体選択的エステラーゼを有する微生
物としては、例えばシュードモナス属或いはアスプルギ
ル属等に属する微生物があり、更に詳しくは、シュード
モナス・アエルギノサ（Pseudomonas aeruginosa) IFO
3080, IFO 13130 やアスペルギルス・ニガー（Aspergil
lus niger) IFO 4407 がある。これら微生物の培養は、
微生物が生育できる栄養培地であれば良く、例えばグル
コース、ペプトン、酵母エキス、肉エキス等から成る栄
養培地が用いられる。培地中の培養温度は１０〜４０
℃、好ましくは２５〜３５℃であり、ｐＨは３〜８、好
ましくは６〜７であり、好気的に培養し、通常２４〜４
８時間行えば良い。
−IIを生成させる立体選択的エステラーゼを有する微生
物としては、例えばシュードモナス属或いはアスプルギ
ル属等に属する微生物があり、更に詳しくは、シュード
モナス・アエルギノサ（Pseudomonas aeruginosa) IFO
3080, IFO 13130 やアスペルギルス・ニガー（Aspergil
lus niger) IFO 4407 がある。これら微生物の培養は、
微生物が生育できる栄養培地であれば良く、例えばグル
コース、ペプトン、酵母エキス、肉エキス等から成る栄
養培地が用いられる。培地中の培養温度は１０〜４０
℃、好ましくは２５〜３５℃であり、ｐＨは３〜８、好
ましくは６〜７であり、好気的に培養し、通常２４〜４
８時間行えば良い。
【００２０】インドリン−２−カルボン酸エステルの微
生物による不斉加水分解反応においては、培養の開始と
同時に培地中と基質即ち該化合物Ｉを添加し、培養と並
行して加水分解を行う方法、培養により得られた菌体含
有培養液に化合物Ｉを添加する、あるいは培養後、遠心
分離または濾過を行って得た菌体を緩衝液に懸濁させた
菌体懸濁液中で、化合物Ｉと接触させて加水分解を行う
方法等があるが、望ましくは、菌体を遠心分離あるいは
濾過等で濃縮後、高濃度菌体懸濁液とし、このものに化
合物Ｉを添加する方法が反応後の生産物回収の立場から
秀れている。
生物による不斉加水分解反応においては、培養の開始と
同時に培地中と基質即ち該化合物Ｉを添加し、培養と並
行して加水分解を行う方法、培養により得られた菌体含
有培養液に化合物Ｉを添加する、あるいは培養後、遠心
分離または濾過を行って得た菌体を緩衝液に懸濁させた
菌体懸濁液中で、化合物Ｉと接触させて加水分解を行う
方法等があるが、望ましくは、菌体を遠心分離あるいは
濾過等で濃縮後、高濃度菌体懸濁液とし、このものに化
合物Ｉを添加する方法が反応後の生産物回収の立場から
秀れている。
【００２１】化合物Ｉの水に対する溶解度は一般に低い
が、攪拌すれば本反応にとって支障とはならない。又、
例えばアセトン、メタノール等の有機溶媒や界面活性剤
等を反応に支障とならない程度加えても良い。
が、攪拌すれば本反応にとって支障とはならない。又、
例えばアセトン、メタノール等の有機溶媒や界面活性剤
等を反応に支障とならない程度加えても良い。
【００２２】反応条件は温度１０〜４０℃、好ましくは
２５〜３５℃の範囲であり、ｐＨは５〜８、好ましくは
６．５〜７．５の範囲で行い、反応時間は基質及び菌体
量の比により変化するが、未反応のエステルと生成物の
カルボン酸がモル比５０％に達したところで止めれば良
い。但し、菌体の反応活性の観点から通常２４〜７２時
間で５０％に達するように基質の添加量を決めるのが望
ましい。
２５〜３５℃の範囲であり、ｐＨは５〜８、好ましくは
６．５〜７．５の範囲で行い、反応時間は基質及び菌体
量の比により変化するが、未反応のエステルと生成物の
カルボン酸がモル比５０％に達したところで止めれば良
い。但し、菌体の反応活性の観点から通常２４〜７２時
間で５０％に達するように基質の添加量を決めるのが望
ましい。
【００２３】酵素を用いる方法としては、該微生物菌体
を破砕後、硫安分画やアセトン処理して得られる粗酵
素、或いは更にカラムクロマトグラフィー操作を行い、
得られる精製酵素が使用できる。市販されている酵素と
しては、例えばリポプロテインリパーゼ（Ｌ．Ｐ．Ｌ．
アマノ３，起源；シュードモナス・アエルギノサ、天野
製薬株式会社製）やリパーゼＡＰ−６（起源；アスペル
ギルス・ニガー、天野製薬株式会社製）等を使用するこ
ともできる。
を破砕後、硫安分画やアセトン処理して得られる粗酵
素、或いは更にカラムクロマトグラフィー操作を行い、
得られる精製酵素が使用できる。市販されている酵素と
しては、例えばリポプロテインリパーゼ（Ｌ．Ｐ．Ｌ．
アマノ３，起源；シュードモナス・アエルギノサ、天野
製薬株式会社製）やリパーゼＡＰ−６（起源；アスペル
ギルス・ニガー、天野製薬株式会社製）等を使用するこ
ともできる。
【００２４】不斉加水分解反応は、基質のラセミ体Ｉを
濃度２〜８０％（ｗ／ｖ）の範囲で反応液に懸濁し、酵
素を適量、例えば酵素と基質の重量比として１：５ない
し１：１０００の割合で加え、温度１０〜４０℃、好ま
しく２５〜３５℃の範囲で反応を行い、高速液体クロマ
トグラフィーによってカルボン酸の生成量及びカルボン
酸エステルの減少量を測定し、反応液中の（Ｒ）−Ｉと
（Ｓ）−IIのモル比５０％になった時点で反応を止めれ
ば良い。また加水分解を行う際のｐＨ範囲は４〜８．５
であれば良いが、加水分解反応が進むに従い、反応液中
のｐＨが酸性側に傾くので、中和剤例えばNaOH溶液等で
ｐＨを６〜７に保持するのが望ましい。更に、上記の不
斉加水分解反応を、例えば微生物菌体或いは酵素を固定
化させることにより繰り返し行うこともできる。
濃度２〜８０％（ｗ／ｖ）の範囲で反応液に懸濁し、酵
素を適量、例えば酵素と基質の重量比として１：５ない
し１：１０００の割合で加え、温度１０〜４０℃、好ま
しく２５〜３５℃の範囲で反応を行い、高速液体クロマ
トグラフィーによってカルボン酸の生成量及びカルボン
酸エステルの減少量を測定し、反応液中の（Ｒ）−Ｉと
（Ｓ）−IIのモル比５０％になった時点で反応を止めれ
ば良い。また加水分解を行う際のｐＨ範囲は４〜８．５
であれば良いが、加水分解反応が進むに従い、反応液中
のｐＨが酸性側に傾くので、中和剤例えばNaOH溶液等で
ｐＨを６〜７に保持するのが望ましい。更に、上記の不
斉加水分解反応を、例えば微生物菌体或いは酵素を固定
化させることにより繰り返し行うこともできる。
【００２５】微生物或いは酵素を用いて不斉加水分解し
た後、反応液中の（Ｓ）−IIと（Ｒ）−Ｉを分離する方
法としては、疎水性の有機溶剤例えばヘキサン、シクロ
ヘキサン、トルエン等で疎水性の光学活性インドリン−
２−カルボン酸エステル（Ｒ）−Ｉのみを抽出し、親水
性の光学活性インドリン−２−カルボン酸（Ｓ）−IIと
容易に分離することができる。
た後、反応液中の（Ｓ）−IIと（Ｒ）−Ｉを分離する方
法としては、疎水性の有機溶剤例えばヘキサン、シクロ
ヘキサン、トルエン等で疎水性の光学活性インドリン−
２−カルボン酸エステル（Ｒ）−Ｉのみを抽出し、親水
性の光学活性インドリン−２−カルボン酸（Ｓ）−IIと
容易に分離することができる。
【００２６】分離して得られた光学活性インドリン−２
−カルボン酸エステルは、そのまま濃縮すれば高光学純
度のエステル体で得られるが、更に次のようにして光学
活性インドリン−２−カルボン酸とすることができる。
即ち、光学活性インドリン−２−カルボン酸エステル
（Ｒ）−Ｉを室温下、ｐＨ１０〜１３．５の範囲で２〜
５時間アルカリ加水分解を行えば、（Ｒ）−IIが生成す
る。また、（Ｒ）−Ｉを加水分解する能力を有する酵
素、例えばステアプシンを作用させて前記酵素による加
水分解条件下に加水分解を行えば、（Ｒ）−IIを得るこ
とができる。
−カルボン酸エステルは、そのまま濃縮すれば高光学純
度のエステル体で得られるが、更に次のようにして光学
活性インドリン−２−カルボン酸とすることができる。
即ち、光学活性インドリン−２−カルボン酸エステル
（Ｒ）−Ｉを室温下、ｐＨ１０〜１３．５の範囲で２〜
５時間アルカリ加水分解を行えば、（Ｒ）−IIが生成す
る。また、（Ｒ）−Ｉを加水分解する能力を有する酵
素、例えばステアプシンを作用させて前記酵素による加
水分解条件下に加水分解を行えば、（Ｒ）−IIを得るこ
とができる。
【００２７】このようにして得られた加水分解液はｐＨ
を４〜６、好ましくは５．０付近に調整後、塩化メチレ
ン、酢酸エチル等の有機溶媒で抽出し、濃縮後、アセト
ン等の有機溶媒中で晶析することにより高光学純度の
（Ｒ）−IIが得られる。一方、抽出分離の際、水層側に
残っている光学活性インドリン−２−カルボン酸も上記
した如く、ｐＨ４〜６、好ましくは５．０付近に調整
後、同様の抽出精製操作を行うことにより高光学純度の
（Ｓ）−IIを容易に得ることができる。
を４〜６、好ましくは５．０付近に調整後、塩化メチレ
ン、酢酸エチル等の有機溶媒で抽出し、濃縮後、アセト
ン等の有機溶媒中で晶析することにより高光学純度の
（Ｒ）−IIが得られる。一方、抽出分離の際、水層側に
残っている光学活性インドリン−２−カルボン酸も上記
した如く、ｐＨ４〜６、好ましくは５．０付近に調整
後、同様の抽出精製操作を行うことにより高光学純度の
（Ｓ）−IIを容易に得ることができる。
【００２８】なお微生物菌体を用いる不斉加水分解反応
では、有機溶媒で抽出分離した後、水層側に菌体が残る
が、引き続きｐＨを下げて有機溶媒抽出操作を行えば、
目的物光学活性インドリン−２−カルボン酸を採取する
のに支障とはならない。また微生物菌体を遠心もしくは
濾過によって除去した後、前記の方法に基づいて、イン
ドリン−２−カルボン酸とインドリン−２−カルボン酸
エステルとを分離、抽出することができる。
では、有機溶媒で抽出分離した後、水層側に菌体が残る
が、引き続きｐＨを下げて有機溶媒抽出操作を行えば、
目的物光学活性インドリン−２−カルボン酸を採取する
のに支障とはならない。また微生物菌体を遠心もしくは
濾過によって除去した後、前記の方法に基づいて、イン
ドリン−２−カルボン酸とインドリン−２−カルボン酸
エステルとを分離、抽出することができる。
【００２９】
【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。 参考例１ （Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸アミルの製造 （Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸（Ｒ，Ｓ）−
II５０ｇをアミルアルコール５００mlに溶解し、更に濃
塩酸１００mlを添加し、９５〜１００℃の範囲で３時
間、縮合反応を行った。反応後、一旦冷却してから１０
％苛性ソーダ液でｐＨを７．０に調整した。更に過剰量
のアミルアルコール及び水を減圧濃縮操作により除去し
た。濃縮液中には、目的物の（Ｒ，Ｓ）−インドリン−
２−カルボン酸アミル−（Ｒ，Ｓ）−Ｉａ及び無機塩が
含まれている。この濃縮液に酢酸エチル１リットルを加
え、飽和重炭酸ソーダ水２００mlで２回（計４００ml）
洗浄後、酢酸エチル層を濃縮したところ（Ｒ，Ｓ）−Ｉ
ａが６０．８ｇ、８５％の収率で得られた。
るが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。 参考例１ （Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸アミルの製造 （Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸（Ｒ，Ｓ）−
II５０ｇをアミルアルコール５００mlに溶解し、更に濃
塩酸１００mlを添加し、９５〜１００℃の範囲で３時
間、縮合反応を行った。反応後、一旦冷却してから１０
％苛性ソーダ液でｐＨを７．０に調整した。更に過剰量
のアミルアルコール及び水を減圧濃縮操作により除去し
た。濃縮液中には、目的物の（Ｒ，Ｓ）−インドリン−
２−カルボン酸アミル−（Ｒ，Ｓ）−Ｉａ及び無機塩が
含まれている。この濃縮液に酢酸エチル１リットルを加
え、飽和重炭酸ソーダ水２００mlで２回（計４００ml）
洗浄後、酢酸エチル層を濃縮したところ（Ｒ，Ｓ）−Ｉ
ａが６０．８ｇ、８５％の収率で得られた。
【００３０】参考例２ １００mlの０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に、ス
テアプシンを１．０ｇ及び基質（Ｒ，Ｓ）−インドリン
−２−カルボン酸アミルＩａ
テアプシンを１．０ｇ及び基質（Ｒ，Ｓ）−インドリン
−２−カルボン酸アミルＩａ
【００３１】
【化１３】
【００３２】１０ｇを添加し、１Ｎ NaOH溶液でｐＨを
７．０に調整しながら、攪拌下、３０℃で２４時間不斉
加水分解反応を行った。この反応液を１００mlのヘキサ
ンで２回抽出操作を行い、ヘキサン層を無水硫酸ソーダ
で脱水後、減圧濃縮したところ、比旋光度〔α〕25 D ＋
５．８°（ｃ＝１．０、エタノール）を有するシロップ
（Ｓ）−Ｉａが４．７ｇ（（Ｒ，Ｓ）−Ｉａからの収率
９４％）得られた。 1ＨＮＭＲ（９０MHz)測定値は次の
通りであった。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δｐｐｍ：０．８〜 １．
８(9H, m, CH3CH2CH2CH2−），３．２〜３．４５(2H,
d, −CH 2O−),４．０〜４．４（４H), ６．４５〜７．
０５(4H, m, Ar−） 得られた（Ｓ）−Ｉａの４．７ｇを２５mlの１ＮNaOH溶
液に添加し、室温下、約３時間加水分解を行い、反応液
を１Ｎ塩酸でｐＨ５．０に調整後、酢酸エチル５０mlで
４回抽出操作を行った。更に無水硫酸ソーダで脱水処理
後、減圧濃縮し、乾固物をアセトン−ヘキサン（５ml−
１ml）で再結すると比旋光度〔α〕25 D＋３２．４°
（ｃ＝１．０、ジメチルホルムアミド）（文献値、J. M
ed. Chem.,26, 394 (1983), 〔α〕25 D ＋３４．５°
（ｃ＝１．０、ジメチルホルムアミド）を有する白色の
粉末（Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸（Ｓ）−IIが
２．４５ｇ（（Ｒ，Ｓ）−Ｉａよりの収率６９％）得ら
れた。1Ｈ ＮＭＲ（９０MHz)測定値は次の通りであっ
た。1 Ｈ ＮＭＲ（DMSO−d6) δｐｐｍ：２．８５ 〜３．
４５（２Ｈ），４．１０〜４．３５（１Ｈ），６．４０
〜７．０５（4H, m, Aryｌ），７．２〜９．０（２H, b
road) 。 一方、ヘキサン抽出後の水層を１Ｎ塩酸でｐＨ５．０に
調整し、酢酸エチルを１００mlづつ用いて４回抽出を繰
返し、以下（Ｓ）−IIの場合と同様の操作を行い、
（Ｒ）−IIが２．６ｇ（（Ｒ，Ｓ）−Ｉａからの収率７
４％）得られた。比旋光度〔α〕25 D −３３．１°（ｃ
＝１．０、ジメチルホルムアミド）であった。
７．０に調整しながら、攪拌下、３０℃で２４時間不斉
加水分解反応を行った。この反応液を１００mlのヘキサ
ンで２回抽出操作を行い、ヘキサン層を無水硫酸ソーダ
で脱水後、減圧濃縮したところ、比旋光度〔α〕25 D ＋
５．８°（ｃ＝１．０、エタノール）を有するシロップ
（Ｓ）−Ｉａが４．７ｇ（（Ｒ，Ｓ）−Ｉａからの収率
９４％）得られた。 1ＨＮＭＲ（９０MHz)測定値は次の
通りであった。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δｐｐｍ：０．８〜 １．
８(9H, m, CH3CH2CH2CH2−），３．２〜３．４５(2H,
d, −CH 2O−),４．０〜４．４（４H), ６．４５〜７．
０５(4H, m, Ar−） 得られた（Ｓ）−Ｉａの４．７ｇを２５mlの１ＮNaOH溶
液に添加し、室温下、約３時間加水分解を行い、反応液
を１Ｎ塩酸でｐＨ５．０に調整後、酢酸エチル５０mlで
４回抽出操作を行った。更に無水硫酸ソーダで脱水処理
後、減圧濃縮し、乾固物をアセトン−ヘキサン（５ml−
１ml）で再結すると比旋光度〔α〕25 D＋３２．４°
（ｃ＝１．０、ジメチルホルムアミド）（文献値、J. M
ed. Chem.,26, 394 (1983), 〔α〕25 D ＋３４．５°
（ｃ＝１．０、ジメチルホルムアミド）を有する白色の
粉末（Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸（Ｓ）−IIが
２．４５ｇ（（Ｒ，Ｓ）−Ｉａよりの収率６９％）得ら
れた。1Ｈ ＮＭＲ（９０MHz)測定値は次の通りであっ
た。1 Ｈ ＮＭＲ（DMSO−d6) δｐｐｍ：２．８５ 〜３．
４５（２Ｈ），４．１０〜４．３５（１Ｈ），６．４０
〜７．０５（4H, m, Aryｌ），７．２〜９．０（２H, b
road) 。 一方、ヘキサン抽出後の水層を１Ｎ塩酸でｐＨ５．０に
調整し、酢酸エチルを１００mlづつ用いて４回抽出を繰
返し、以下（Ｓ）−IIの場合と同様の操作を行い、
（Ｒ）−IIが２．６ｇ（（Ｒ，Ｓ）−Ｉａからの収率７
４％）得られた。比旋光度〔α〕25 D −３３．１°（ｃ
＝１．０、ジメチルホルムアミド）であった。
【００３３】実施例１〜２ 酵素をかえて、参考例２と同様の操作を行い、表１の結
果を得た。
果を得た。
【００３４】
【表１】
【００３５】実施例３ 下記の組成からなる栄養液体培地を調製し、２リットル
坂口フラスコに４００mlずつ分注後、１２０℃、１５分
殺菌した。 〔培地組成〕グルコース４％、イーストエキス０．３
％、肉エキス０．３％、ペプトン０．３％、リン酸二ア
ンモニウム０．２％、リン酸一カリウム０．１％（ｐＨ
６．８）
坂口フラスコに４００mlずつ分注後、１２０℃、１５分
殺菌した。 〔培地組成〕グルコース４％、イーストエキス０．３
％、肉エキス０．３％、ペプトン０．３％、リン酸二ア
ンモニウム０．２％、リン酸一カリウム０．１％（ｐＨ
６．８）
【００３６】これとは別に同じ組成の培地にて前培養を
したシュードモナス・アエルギノサIFO 3080 の種菌液
１０mlを前記培養培地に接種し、３０℃、２４時間振と
うを行った。合計５本培養し、培養液計２リットルを得
た。この培養液を遠心分離し、菌体を集めた。この菌体
を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）２００mlに懸濁
し、基質（Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸アミ
ルＩａを２．０ｇ添加した。これを５００ml容器内で攪
拌下、１Ｎ NaOH溶液でｐＨを７．０に調整しながら、
３０℃、１８時間反応させた。反応後、遠心分離して得
た上清を各２００mlのヘキサンで４回抽出分離を行い、
次いで参考例２に準じて同様の操作を行い、表２に示す
結果を得た。
したシュードモナス・アエルギノサIFO 3080 の種菌液
１０mlを前記培養培地に接種し、３０℃、２４時間振と
うを行った。合計５本培養し、培養液計２リットルを得
た。この培養液を遠心分離し、菌体を集めた。この菌体
を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）２００mlに懸濁
し、基質（Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸アミ
ルＩａを２．０ｇ添加した。これを５００ml容器内で攪
拌下、１Ｎ NaOH溶液でｐＨを７．０に調整しながら、
３０℃、１８時間反応させた。反応後、遠心分離して得
た上清を各２００mlのヘキサンで４回抽出分離を行い、
次いで参考例２に準じて同様の操作を行い、表２に示す
結果を得た。
【００３７】実施例４〜５ 実施例４のシュードモナス・アエルギノサ IFO 13130
の培養は実施例４と同様に培養し、実施例５のアスペル
ギルス属の微生物の培養はグルコース８．０％、ポリペ
プトン１．０％、イーストエキス０．５％、リン酸二ア
ンモニウム０．２％、リン酸一カリウム０．１％（ｐＨ
６．５）の培地を用い、温度を２８℃とした他は実施例
３と同様に行った。各菌株は、培養後、シュードモナス
・アエルギノサは遠心分離にて、アスペルギルス層の微
生物は濾過で、それぞれ菌体を集め、０．１Ｍリン酸緩
衝液ｐＨ７．０に懸濁し、以下実施例４に準じて微生物
による不斉加水分解反応及び抽出、精製を行い、表２に
示す結果を得た。
の培養は実施例４と同様に培養し、実施例５のアスペル
ギルス属の微生物の培養はグルコース８．０％、ポリペ
プトン１．０％、イーストエキス０．５％、リン酸二ア
ンモニウム０．２％、リン酸一カリウム０．１％（ｐＨ
６．５）の培地を用い、温度を２８℃とした他は実施例
３と同様に行った。各菌株は、培養後、シュードモナス
・アエルギノサは遠心分離にて、アスペルギルス層の微
生物は濾過で、それぞれ菌体を集め、０．１Ｍリン酸緩
衝液ｐＨ７．０に懸濁し、以下実施例４に準じて微生物
による不斉加水分解反応及び抽出、精製を行い、表２に
示す結果を得た。
【００３８】
【表２】
【００３９】実施例６ シュードモナス・アエルギノサ IFO 3080 を用いて前記
実施例４と同様にして得た培養液２リットルを遠心分離
し、菌体を集めた。この菌体を０．１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ７．０）２００mlに懸濁し、氷冷しながらブラウ
ンホモジナイザーで菌体破砕し、遠心分離して無細胞抽
出酵素液を得た。この酵素液に基質（Ｒ，Ｓ）−インド
リン−２−カルボン酸アミルＩａを１０ｇ添加し、１Ｎ
NaOH溶液でｐＨを７．０に調整しながら攪拌下、３０
℃、４８時間不斉加水分解を行った。以下、実施例３に
準じて抽出精製を行い、比旋光度〔α〕25 D ＋２２．４
°（ｃ＝１．０、ジメチルホルムアミド）を有する
（Ｓ）−IIが１．９ｇと比旋光度〔α〕25 D −３．３°
（ｃ＝１．０、エタノール）を有する（Ｒ）−Ｉａ４．
２ｇを得た。
実施例４と同様にして得た培養液２リットルを遠心分離
し、菌体を集めた。この菌体を０．１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ７．０）２００mlに懸濁し、氷冷しながらブラウ
ンホモジナイザーで菌体破砕し、遠心分離して無細胞抽
出酵素液を得た。この酵素液に基質（Ｒ，Ｓ）−インド
リン−２−カルボン酸アミルＩａを１０ｇ添加し、１Ｎ
NaOH溶液でｐＨを７．０に調整しながら攪拌下、３０
℃、４８時間不斉加水分解を行った。以下、実施例３に
準じて抽出精製を行い、比旋光度〔α〕25 D ＋２２．４
°（ｃ＝１．０、ジメチルホルムアミド）を有する
（Ｓ）−IIが１．９ｇと比旋光度〔α〕25 D −３．３°
（ｃ＝１．０、エタノール）を有する（Ｒ）−Ｉａ４．
２ｇを得た。
【００４０】
【発明の効果】本発明によれば、立体選択性をもつ加水
分解酵素エステラーゼ又は、同加水分解能を有する微生
物を適宜選んで使用することにより、（Ｒ，Ｓ）−イン
ドリン−２−カルボン酸エステルから該エステルの光学
活性体の（Ｒ）体を、あるいは光学活性なインドリン−
２−カルボン酸の（Ｒ）体もしくは（Ｓ）体を得ること
が出来る。
分解酵素エステラーゼ又は、同加水分解能を有する微生
物を適宜選んで使用することにより、（Ｒ，Ｓ）−イン
ドリン−２−カルボン酸エステルから該エステルの光学
活性体の（Ｒ）体を、あるいは光学活性なインドリン−
２−カルボン酸の（Ｒ）体もしくは（Ｓ）体を得ること
が出来る。
フロントページの続き (72)発明者 久津木 英俊 兵庫県神戸市垂水区塩屋町１−５−８ 2207号 (72)発明者 大橋 武久 兵庫県神戸市灘区篠原伯母野山町３−９− 14 (72)発明者 渡辺 清 兵庫県明石市松ケ丘５丁目15の41 (72)発明者 高原 謙治 兵庫県加古川市上荘町都台１−13−２
Claims (2)
- 【請求項１】 一般式Ｉ 【化１】 （式中、ＲはＣ2 〜Ｃ8 の脂肪族炭化水素基）で表わさ
れる（Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸エステル
を不斉的に加水分解して、構造式（Ｓ）−II 【化２】 で表わされる光学活性（Ｓ）−インドリン−２−カルボ
ン酸を生成させる立体選択的エステラーゼ活性を有する
シュードモナス（Pseudomonas)属に属する微生物或いは
シュードモナス（Pseudomonas)属もしくはアスペルギル
ス(Aspergillus)属に属する微生物由来の酵素を作用さ
せることにより、ラセミ体Ｉを光学活性な化合物インド
リン−２−カルボン酸（Ｓ）−IIと一般式（Ｒ）−Ｉ 【化３】 （Ｒは前記と同じ）で表わされる光学活性インドリン−
２−カルボン酸エステルとに光学分割し、夫々の光学活
性体を分離採取することを特徴とする光学分割によるイ
ンドリン−２−カルボン酸の製造方法。 - 【請求項２】 一般式Ｉ 【化４】 （式中、ＲはＣ2 〜Ｃ8 の脂肪族炭化水素基）で表わさ
れる（Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸エステル
を不斉的に加水分解して、構造式（Ｓ）−II 【化５】 で表わされる光学活性（Ｓ）−インドリン−２−カルボ
ン酸を生成させる立体選択的エステラーゼ活性を有する
シュードモナス（Pseudomonas)属に属する微生物或いは
シュードモナス（Pseudomonas)属もしくはアスペルギル
ス(Aspergillus)属に属する微生物由来の酵素を作用さ
せることにより、ラセミ体Ｉを光学活性な化合物インド
リン−２−カルボン酸（Ｓ）−IIと一般式（Ｒ）−Ｉ 【化６】 （Ｒは前記と同じ）で表わされる光学活性インドリン−
２−カルボン酸エステルとに光学分割し、夫々の光学活
性体を分離、採取し、さらに（Ｒ）−Ｉを加水分解して
化合物（Ｓ）−IIの対掌体である光学活性インドリン−
２−カルボン酸（Ｒ）−IIを生成させ、採取することを
特徴とする光学活性インドリン−２−カルボン酸の製造
方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13953493A JPH0779711B2 (ja) | 1993-05-17 | 1993-05-17 | 光学分割によるインドリン−２−カルボン酸の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13953493A JPH0779711B2 (ja) | 1993-05-17 | 1993-05-17 | 光学分割によるインドリン−２−カルボン酸の製造方法 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21198684A Division JPS6192595A (ja) | 1984-10-09 | 1984-10-09 | 光学分割によるインドリン−２−カルボン酸の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0662892A true JPH0662892A (ja) | 1994-03-08 |
| JPH0779711B2 JPH0779711B2 (ja) | 1995-08-30 |
Family
ID=15247519
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13953493A Expired - Fee Related JPH0779711B2 (ja) | 1993-05-17 | 1993-05-17 | 光学分割によるインドリン−２−カルボン酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0779711B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001032847A1 (en) * | 1999-11-01 | 2001-05-10 | Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology | Novel esterases derived from pseudomonas aeruginosa, its gene and process for production of optically active carboxylic acids using them |
| EP1687270A4 (en) * | 2003-11-26 | 2009-05-20 | Sk Holdings Co Ltd | PROCESS FOR THE PREPARATION OF (S) -INDOLIN-2-CARBOXYLIC ACID AND (S) -INDOLIN-2-CARBOXYLIC ACID METHYLENE USING A HYDROLYTIC ENZYME |
-
1993
- 1993-05-17 JP JP13953493A patent/JPH0779711B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001032847A1 (en) * | 1999-11-01 | 2001-05-10 | Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology | Novel esterases derived from pseudomonas aeruginosa, its gene and process for production of optically active carboxylic acids using them |
| EP1687270A4 (en) * | 2003-11-26 | 2009-05-20 | Sk Holdings Co Ltd | PROCESS FOR THE PREPARATION OF (S) -INDOLIN-2-CARBOXYLIC ACID AND (S) -INDOLIN-2-CARBOXYLIC ACID METHYLENE USING A HYDROLYTIC ENZYME |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0779711B2 (ja) | 1995-08-30 |
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