JPS6192595A - 光学分割によるインドリン−２−カルボン酸の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） （式中、Ｒはｃ２−　ｃＢの脂肪族炭化水素基）で表わ
される（Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸エステ
ルＩを不斉的に加水分解して、 活性インドリン−２−カルボン酸を生成させる立体選択
的エステラーゼ活性を有する微生物或いは酵素を作用さ
せることにより、ラセミ休Ｉから加水分解物である光学
活性インドリン−２−カルボン酸■”及び未反応物であ
る光学活性インドリン−２−カルボン酸エステル を生成させ、夫々の光学活性体を分離、採取し、更に必
要に応じ、採取したＩ　を加水分解して■”の対掌体を
生成させ、採取することを特徴とする光学分割によるイ
ンドリン−２−カルボン酸エステルの製造方法に関する
。

本発明は、使用する立体選択的エステラーゼを選ぶこと
により、（Ｒ）−インドリン−２−カルボン酸と（Ｓ）
−インドリン−２−カルボン酸エステル、或いはこの逆
の組み合せである（Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸
と（８）−インドリン−２−カルボン酸エステルを随意
採取することができる。

これら光学活性インドリン−２−カルボン酸類化合物は
種々医県品の原料となりつる。例えば、（Ｓ）−インド
リン−２−カルボン酸はアンジオテンシンＩ変換酵素の
■書割として有効な血圧降下剤である（Ｓ）　−１−［
（Ｓ）−８−メルカプト−２−オキソプロピル］−イン
ドリン−２−カルボン酸（Ｓ） に利用できる［文献：　Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ、　
、　２６　。

８９４（１９８Ｂ）］。

（従来の技術） これら光学活性なインドリン−２−カルボン酸類の３１
１！造については、下記に示すような光学分割剤を用い
る方法が知られている。

（文献：特開昭５７−８１４６０号公報）【文献：　Ｍ
、　Ｖｉｎｃｅｎｔ　ｅｔａｌ、、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒ
ｏｎＬｅｔｔｅｒｓ　、　２８、．１６７７　（１９８
２）　）（但し、母液側から（Ｓ）体を抽出） 〔文献：　Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ、　　、　２６　
、１２６７（１９８８）］ （発明が解決しようとする問題点〕 これら分割剤を用いた光学分割法は操作が煩雑であり、
大量生産に適した簡便な方法により光学活性インドリン
−２−カルボン酸又は光学活性イノドリン−２−カルボ
ン酸エステルを得る方法の開発が包まれていた。

（間血点を解決するための手段及び作用）本発明者らは
、インドリン−２−カルボン酸のカルボン酪部位を種々
アルコールを用いてエステル化し、このエステル体に微
生物菌体或いは酵素を作用させて不斉加水分解を行えば
光学活性体を取得できると貴え、検討を重ねてきた。そ
の結果、（１）バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）居又はア
スペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）　ｒ４Ｉに屈
する微生物或いは該微生物から得られる酵素、又は哺乳
動物臓器由来の醇Ｅヲ（Ｒ，５）−インドリン−２−カ
ルボン酸エステルに作用させ不斉的に加水分解し、（Ｒ
）−インドリン−２−カルボン酸と（Ｓ）−インドリン
−２−カルボン酸エステルを生成させた後、有機溶媒で
分離１抽出することにより（８）−インドリン−２−カ
ルボ：／　Ｑ（Ｒ）　−ＩＩ　ト（Ｓ）−インドリン−
２−カルボン酸エステル（Ｓ）−Ｉを夫々採取すること
ができること、更に採取した（Ｓ）−Ｉをアルカリ加水
分解又は酵塁分解を行って（Ｓ）−ＩＩを生成させ、採
取することができること、（２）シュードモナス（Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏ−Ｈａｓ）属又はアスペルギルス（Ａｓｐ
ｃｒｇ　ｉ　１１ｕｓ　）　ｒに属する微生物或いは該
微生物から得られる酊緊を作用させ、不斉的に加水分解
し、前記（１）とは逆に（Ｓ）−インドリン−２−カル
ボン酸（Ｓ）−ｒｌと（Ｐ）−インドリン−２−カルボ
ン酸エステルＲ−Ｉを生成させた後、有機溶媒で分離、
抽出することにより（Ｓ）−ＩＩと（Ｒ）−１を夫々採
取でき、更に採取した（Ｒ）−Ｉをアルカリ加水分解、
又はｒ３素分解を行って（Ｒ）−１１を生成、採取でき
ることを見い出し、本発明を完成した。以下に、本発明
を更に詳細に説明する。

されるインドリン−２−カルボン酸エステルは、ＲがＣ
２〜Ｃ８の脂肪族炭化水素基の化合物であり、好ましく
は、エチル、ブチル、アミル、ヘキシル基からなるエス
テルである。

インドリン−２−カルボン酸エステルＩは次のようにし
てイワられる。即ち（Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カル
ボンａに溶媒と反応試剤とを兼ねたアルコールを加え、
インドリン−２−カルボン酸のＵ＞度５〜２０％（ｗ／
　ｖ　）の範囲で強酸性下、５０℃〜巡流温度の範囲で
１〜５時間間抜反応を行う。

更に、この反応液をＰＨ７，０に調整後、感圧濃縮によ
りＭ’ｌ’ｌのアルコールを除去する。濃縮液に水又は
飽和亜炭【？ソーダを加え、酢酸エチル又はヘキサン等
のような肺水性有機溶媒を用いて抽出し、更に濃縮すれ
ば高す度の（Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸エ
ステル■が得られる。

ラセミ休Ｉを不斉的に加水分解してＲ−１１を生成させ
る立体選択的なエステラーゼを有する微生物としては、
例えばバチルス（Ｂａ（ｉ　１ｌｕｓ）　ｒｌ或いはア
スペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）　ｆ、等に属
する微生物があり、更に詳しくは、バチルス・サブチリ
ス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ）　　Ｉ　Ｐ
　０　８０１８或いはアスペルギルス・メレウス（Ａｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓｍｅｌｌｅｕｓ）　　Ｉ　ＦＯ４’
４２０がある。又、ラセる立体選択的エステラーゼを有
する微生物としては、例えばシュードモナス属或いはア
スペルギルス属等に属する微生物があり、更に詳しくは
、シュードモナス・アエルギノサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）　　Ｉ　Ｐｏ　　８０８０
　、　Ｉ　ＦＯ１８１８０やアスペルギルス・ニガー（
ＡＳｐｅｒｇ−ｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ）　　Ｉ　Ｆ　
Ｏ４４０７がある。

これら微生物の培養は、微生物が生育できる栄養培地で
あれば良く、例えばグルコース、ペプトン、酵母エキス
、肉エキス等から成る栄養培地が用いられる。培地中の
培養温度は１０〜４０°Ｃ１好ましくは２６〜８５°Ｃ
であり、ｐＨは８〜８、好ましくは６〜７であり、好気
的に培養し、通當２４〜４８時間行えば良い。

インドリン−２−カルボン酸エステルの微生物による不
斉加水分解反応においては、培養の開始と同時に培地中
と基質即ち該化合物Ｉを添加し、培養と並行して加水分
解を行う方法、培養により得られた菌体含有培養液に化
合物■を添加する、あるいは培養後、遠心分離または濾
過を行って（ｇた菌体をｆｌ「１液にニ渇させた菌体［
湯液中で、化合物Ｉ　（！：　％　Ｔｈ’＋させて加水
分解を行う方法等があるが、Ｆ！ましくは、菌体を遠心
分離あるいは濾過等でｎｔ″！３後、高濃度菌体懸濁液
とし、このものに化合物Ｉを添加する方法が反応後の生
産物回収の立場から方れている。

化合物Ｉの水に対する溶解度は一般に低いが、撹拌すれ
ば本反応にとって支障とはならない。又、例えばアセト
ン、メタノール専の有機溶媒や界面活性剤等を反応に支
障とならない程度加えても良い。

反応条件は温度１０〜４０℃、好ましくは２５〜８５°
Ｃの範囲であり、ｐＨは５〜８、好ましくは６．５〜７
．１）の範囲で行い、反応時間は基質及び苗鉢への比に
より変化するが、未反応のエステルと生成物のカルボン
酸がモル比５０％に達したところで止めれば良い。但し
、菌体の反応活性の観点から適音２４〜７２時間で５０
％に達するように基質の添加へを決めるのが望ましい。

ｒｙ祭を用いる方法としては、該微生物菌体を破砕後、
硫安分画やアセトン処理してｆ６られる粗酵素、或いは
更にカラムクロマトグラフィー操作を行い、得られる精
製ｉｆｆ　ｇが使用できる。市販されている酵素として
は、（Ｒ１−ｎを生成させる場合、ピオフラーゼＡＬ−
１５（起源；バチルス・サブチリス、長瀬産業■製）、
プロテアーゼ「アマノ」Ｐ　Ｃ起源ｉアスペルギルス・
メレウス、大野＠薬■製）、ステアプシン（豚Ｍ＋麿、
和光純薬＠Ｊ製）、肺臓性消化酵素ＴＡ（大野製薬■製
）などが使用できる。更に（Ｓ）−ｎを生成させる場合
、例えばリボプロティンリパーゼ（Ｌ、　Ｐ、　Ｌ、ア
マノ８゜起源；シュードモナス・アエルギノサ、大野ｆ
ｌ■製）やリパーゼＡＰ−６（起源；アスペルギルス・
ニガー、大野製薬■製）等を使用することもできる。不
斉加水分解反応は、２ｉＳｆｆのラセミ休■を濃度２〜
８０％（ｗ／ｖ）の範囲で反応液に５淘し、酵素を適量
、例えば酵素と基ｙＨの重量比として１：５ないしｔ：
ｔｏｏｏの割合で加え、温度１０〜４０℃、好ましくは
２５〜８５°Ｃの範囲で反応を行い、高速液体クロマト
グラフィーによってカルボンρの生成Ｅ及びカルボン酸
エステルの減少只を測定し、反応液中のｌ　と■　のモ
ル比５０％になった時点で反応を止めれば良い。また加
水分解を行う際のｐＨ範囲は４〜８．５であれば良いが
、加水分解反応が進むに従い、反応液中のｐｌ（が酸性
側に傾くので、中和剤例えばＮａＯＨ溶液等でｐＨを６
〜７に保持するのが望ましい。更に、上記の不斉加水分
解反応を、例えば微生物菌体或いは酵素を固定化させる
ことにより繰り返し行うこともできる。

微生物或いは酵素を用いて不斉加水分解した後、反応液
中の■パとＩ　を分離する方法としては、疎水性の有↑
ゝ゛１溶剤例えばヘキサン、シクロヘキサン、トルエン
等で吐水性の光学活性インドリン−２−カルボンｔ′、
１ニスアルＩ　のみを抽出し、親水性の光学活性インド
リン−２−カルボン酸■　と容易に分１３することがで
きる。

分間［シて９チ゛られた光学活性インドリン−２−カル
ボン酸エステルは、そのまま濃縮すれば高光学糺度のエ
ステル体で得られるが、更に次のようにして光学活性イ
ンドリン−２−カルボン酸とすることができる。即ち、
光学活性インドリン−２−カルボン酸エステル（Ｓ）−
Ｉ又は（Ｒ１−Ｉを室温下、ＰＨＩＯ〜１８．６の範囲
で２〜５時間アルカリ加水分解を行えば、各々（Ｓ）−
１１又は（８）−■が生成する。

また、（Ｓ）−Ｉまたは（Ｒ１−Ｉを加水分解する能力
を有する酵素、例えば（Ｓ）−Ｉに対しては、リポプロ
ティン　リパーゼ　アマノ８を、一方（Ｒ）　−Ｉ　ニ
ガしてはステアプシンを作用させて前記酵素による加水
分解条件下に加水分解を行えば、各々（Ｓ）−■又は（
８）−■を得ることができる。

このようにして得られた加水分解液はｐＨを４〜６、好
ましくは５．０付近に調整後、塩化メチレン、酢酸エチ
ル等の有機溶媒で抽出し、濃縮後、アセトン等の有機溶
媒中で晶析することにより高光学純度の（Ｓ）−ＩＩ又
は（Ｒ）−１’Ｔがｆ３られる。

一方、抽出分にｔの際、水層側に残っている光学活性イ
ンドリン−２−カルボン酸も上記した如く、ＰＨ４〜６
、好ましくは５．０付近に門１ｒ後、同様の抽出０製拌
作を行うことにより高光学純度の（Ｒ）−ｎ又は（Ｓ）
−１１を容易に得ることができる。

なお微生物日体を用いる不斉加水分解反応では、有４１
溶黙で抽出分離した後、水層側に菌体が残るが、引き続
きｐＨを下げて有機溶媒抽出操作を行えば、目的物光学
活性インドリン−２−カルボン酸を採取するのに支障と
はならない。また微生物日体を遠心もしくは一過等によ
って除去した後、前記の方法に基づいて、インドリン−
２−カルボン酸とインドリン−２−カルボン酸エステル
とを分際、抽出することができる。

（実施例） 以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発
明はこれらの実施例に限定されるものではない。

実施例１ （Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸アミルのルＩ
Ｌ造 （Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸（Ｒ，５）−
Ｈ５０ｆをアミルアルコール５００胛？に溶解シ、更に
儂塩酸１００Ｍ／を添加し、９５〜１００°Ｃの範囲で
８時間、綜合反応を行った。反応役、一旦冷却してから
１０％苛性ソーダ液でｐ　Ｉ−Ｉを７．０に調整した。

更に過剰量のアミルアルコール及び氷を減圧濃縮操作に
より除去した。ＣＰｉ液中には目的物の（Ｒ，Ｓ）−イ
ンドリン−２−カルボン酸アミル−（Ｒ，Ｓ）　−ｉａ
及び無Ｃ１Ｓ　ｆａが含まれている。

この濃縮液に酢酸エチル１１を加え、飽和重炭酸ソーダ
水２００ｇ／で２回（計４００ガｔ）洗滌後、酢酸エチ
ル廐を濃縮したところ（Ｒ，Ｓ）　−Ｉａが６０．８Ｎ
、８５％の収率で得られた。

実施例２ １００肩ｌの０．１Ｍリン配配向内液ＰＨ７，０）に、
ステアプシンを１．Ｏｙ及び基質（Ｒ，Ｓ）−インドリ
ン−２−カルボン酸アミル１ａ ＩＮ　　ＮａＯＨ溶液でｐＨを７．０に調！、（シなが
ら、撹拌下、８０℃で２４時間不斉加水分解反応を行つ
た。この反応液を１００１１／のヘキサンで２回抽出打
作を行い、ヘキサン月を無水硫酸ソーダで脱水後、減圧
０５（したところ、比旋光度［α］′Ｄｓ＋５．８　（
ｃ　＝１．０　、エタノール）を有するシロップ（Ｓ）
−Ｉａが４．７１　（（Ｒ，Ｓ）　−Ｉａからの収率９
４％）得られた。ＩＨＮＭＲ（９０Ｍ庵）測定値は次の
通りであった。

！）１　　ＮＨＲ（ＣＤＣＩ１９）　　δｐｐｍ　：　
０．８〜１．８（９１１、ｍ　、　ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２
ＣＨ２−）　、　８．２〜８．４５（２Ｈ、ｄ　、　−
ＣＨ２０−）　、　４．０〜４−４　（４Ｈ）　。

６．４５〜７．０５　（４Ｈ、ｍ　、Ａｒ−）得られた
（Ｓ）−Ｉａの４．７ｆを２５ｔｔｌのｌＮＮａσ（溶
液に添加し、室温下、約８時間加水分解を行い、反応液
をＩＮ川用でＰＨ５，０に調整後、酢酸エチル５０Ｆｔ
で４回抽出を噴作を行った。更に無水硫酸ソーダで脱水
処理後、間圧濃縮し、乾固物をアセトン−ヘキサン（５
ｒｔ−１ｙｓｌ　）で再結すると比旋光度［αＩＤ＋３
２．４（Ｃ＝１．０．ジメチルホルムアミド）（文０（
値、Ｊ、　Ｒｌｅｄ、　Ｃｈｅｍ、　、　２６　。

８９４（１９８８）、（α）　Ｄ　＋　８４．５　（ｃ
　＝１．０゜ジメチルホルムアミド）を有する白色の粉
末（Ｓ）　−インドリン−２−カルボン酸（Ｓ）−ｒｌ
が２．４５９（（Ｒ，Ｓ）　−Ｉａよりの収率６９％）
？３られた。

’ＨＮＭＲ（９０Ｍｌ−１ｚ　）測定値は次の通りであ
った。

’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｃ１６）　　　７ｐｐｍ：２．
８５〜８．４５（２Ｈ）、４．１０〜４Ｊ５（ＩＨ）。

６．４０〜７．０５　（４Ｈ、ｍ、Ａｒｙｌ）　、　７
．２〜９．０（２Ｈ，ｂｒｏａｄ　）。

一方、ヘキサン抽出後の水層をＩ　Ｎｔｅ酸でＰＨ５，
０に調整し、酢酸エチルを１００ｒ／づつ用いて４回抽
出を繰返し、以下（Ｓ）−Ｈの場合と同様の掃作を行い
、（Ｒ）−１１が２．６９　（（Ｒ，Ｓ）　−Ｉａから
の収率７４％）得られた。比旋光度の値は［α１Ｄ−８
８，１７（ｃ　＝１．０　、ジメチルホルムアミド）で
あった。

実施例８〜９ 基質及び酵素をかえて、実施例１と同様の操作を行い、
表１の結里を得た。

表中実施例８，４，５，８．９はＲ体のみを、６．７は
３体のみを不斉加水分解した例である。

なお実施例８のＭ−Ｅである。インドリン−２−カルボ
ン酸ブチルＩｂの’ＨＮＭＲ（９０Ｍｌ−［ｙ、　）測
定値は以下の通りであった。

’ＨＮＭＲ（ＣＤＣｊ？ｓ　）　　ｉ　ｐｐｍ　：　０
．８〜１．８（７１１、’ｍ　、　ＣＨ３ＣＨ２Ｃ１１
２−）　、　８．２５〜８．４　（２）ｉ。

ｄ　、−ＣＨ２０−）　、　４．０５〜４．４５（４１
（）。

６．５５〜７．１　（４１Ｔ　、　ｍ　、　Ａｒ−）。

また実施例９の基質である・ｒノドリン−２−カルボ”
／（Ｊ工ｆルｉｃ　（７）　ＩＨＮＭＲ（９０ＭＨｚ）
　ｆｉｉＪ定値は以下の通りであつ−た。

ＩＣ：　　ｌＩＩ　　ＮＭＲ（ＣＤＣｈ）　　δｐｐｍ
：１．１〜１．４　（８Ｈ、ｔ　、　Ｃｌ−１８）　、
　８．２〜８．４（２Ｈ，ｄ。

ＣＨ３ＣＨ２０−）　、　４．０〜４．４　（４Ｈ）　
、　６．５５〜７．１　（４Ｈ，ｍ、Ａｒ　−）。

実施例１０ 下記の組成からなるツ１２養液体培地を調ｖ’＋　ｔ、
、２４坂ロア’−７スコに４００ｐｇｔずつ分注後、１
２０°Ｃ１１５分殺菌した。

〔培地組成１ グルコース４％、イーストエキス０．８％、肉エキス０
．８％、ペプトン０．８％、リン酸ニアンモニウｌ、０
．２％、リンＣ゛？−カリウム０．１％（ｐｉ（ｅ、ａ
　）これとは別に同じ組ＤｇＪの培地にて前培養をした
シュードモナス・アエルギノサ　ＩＦｏ　　８０８０の
種Ｆｉ液１０Ｗｔを前記培養培地に接種し、３０°Ｃ１
２４時間振とうを行った。合計５本培養し、培養散財２
４をｔひた。この培養液を遠心分離し、菌体を集めた。

この菌体を０．１　Ｍ　！Ｊン酸ＲＭｊ液（Ｐ）（７，
０）２０（ｈｖｔに６勾し、基ｆｉ（Ｒ，Ｓ）−インド
リン−２−カルボン酸アミルＩａを２．０り添加した。

これを５００ｙｌ容器内で撹拌下、Ｉ　Ｎ　ＮａＯＨ溶
液でｐＨを７．０にＷ１整しながら、８０℃、１８時間
反応させた。反応後、遠心分離して得た上清を各２００
にｆのヘキサンで４回抽出分離を行い、次いで実施例１
に準じて間柱の操作を行い、表２に示す結果を得た。

実施例１１〜１４ 実施例１１のシュードモナス・アエルギノザＩＦ０　１
８１８０、実施例１８のバチルス・サブチリスは、実施
例９と同ｎ：に培養し、実ｈ１・［す１２及び１４のア
スペルギルス屈の？”２　生物の培′７℃はグルコース
８．０％、ポリペプトンｌ、θ％、イーストエキス０．
５％、リン酸ニアンモニウム０．２％、リン酸−カリウ
ム０．１％（Ｐａｌ　６．５　）の培地を用い、温度を
２８°Ｃとした他は実ｈ１＋ｉ例９と同様に行った。

各菌株は、培養後、シュードモナス・アエルギノサとバ
チルス・サブチリスは遠心分離にて、アスペルギルス属
の微生物はＤｉ過で、それぞれ菌体を集め、０．１Ｍリ
ン酸綾伊ｉ液Ｉ’）ｆ７．０にＦ／、ヱ潤し、以下実施
例１Ｏに準じて微生物による不斉加水分解反応及び抽出
、精り・Ｖを行い、表−２に示す結果を得た。

実施ｆｉｊｌ　１５ シュードモナス・アエルギノサ　ＩＦＯ３０８０を用い
て前記実施例１０と同様にして得た培養液２１を遠心分
離し、菌体を集めた。このＤｉ体ヲ０．１　Ｍ　ＩＪ　
：４ｆｇ百液（ＰＨ７，０）２００ｇ／にＷ’ｆｉｌ、
氷冷しながらブラウンホモジナイザーで［゛１体破砕し
、遠心分離して無細胞抽出酵素液を得た。この扉素液に
基質（Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸アミル■
３を１０ｆ添加し、ｌＮＮａＯＨ溶液てｐＨを７．０に
調整しながら撹拌下、８０°Ｃ１４８時間不斉加水分解
を行った。

以下、実施例１０に準じて抽出荀製を行い、比旋光度（
αＩＤ−２２，４°（ｃ＝１．０．ジメチルホルムアミ
ド）を有する（Ｒ）−ｎが１．９ｆと比旋光度２５　　
　　　。

［αｌ　Ｄ＋　８．８　（ｃ　＝Ｌ　Ｏ、エタノール）
を有する（Ｓ）−Ｉａ　４．２　Ｆを得た。

（発明の効寒） 本発明によれば、立体逆捩性をもつ加水分解酵素エステ
ラーゼ又は、同加水分解能を有する微生物をＦｉ宜司ん
で使用することにより、（Ｒ，Ｓ）　−インドリン−２
−カルボン酸エステルから該エステルの光学活性体、（
Ｒ）休もしくは（Ｓ）体を、あるいは光学活性なインド
リン−２−カルボン酸、（Ｒ１休もしくは（Ｓ）体を、
各々、任意にｔυることか出来る。

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式■ ▲数式、化学式、表等があります▼■ （式中、ＲはＣ＿２〜Ｃ＿８の脂肪族炭化水素基）で表
   わされる（Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸エス
   テルを不斉的に加水分解して、構造式■＾＊ ▲数式、化学式、表等があります▼■＾＊ で表わされる光学活性なインドリン−２−カルボン酸を
   生成させる立体選択的エステラーゼ活性を有する微生物
   或いは酵素を作用させることにより、ラセミ体■を光学
   活性な化合物インドリン−２−カルボン酸（■＾＊）と
   一般式■＾＊ ▲数式、化学式、表等があります▼■＾＊ （Ｒは前記と同じ）で表わされる光学活性 インドリン−２−カルボン酸エステルとに光学分割し、
   夫々の光学活性体を分離採取することを特徴とする光学
   分割によるインドリン−２−カルボン酸の製造方法。
2. （２）光学活性インドリン−２−カルボン酸が構造式（
   Ｒ）−■ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｒ）−■ で表わされる光学活性（Ｒ）−インドリン−２−カルボ
   ン酸であり、光学活性インドリン−２−カルボン酸エス
   テルが一般式（Ｓ）−■ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｓ）−■ （Ｒは前記と同じ）で表わされる（Ｓ）−インドリン−
   ２−カルボン酸エステルである特許請求の範囲第１項記
   載の方法。
3. （３）微生物或いは酵素が、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕ
   ｓ）属又はアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）
   属に属する微生物或いは該微生物由来の酵素である特許
   請求の範囲第１項又は第２項記載の方法。
4. （４）酵素が哺乳動物臓器由来の酵素である特許請求の
   範囲第１項又は第２項記載の方法。
5. （５）光学活性インドリン−２−カルボン酸■＾＊が構
   造式（Ｓ）−■ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｓ）−■ で表わされる光学活性（Ｓ）−インドリン−２−カルボ
   ン酸であり、光学活性インドリン−２−カルボン酸エス
   テル I ＾＊が一般式（Ｒ）−■▲数式、化学式、表等
   があります▼（Ｒ）−■ （Ｒは前記に同じ）で表わされる光学活性 （Ｒ）−インドリン−２−カルボン酸エステルである特
   許請求の範囲第１項記載の方法。
6. （６）微生物或いは酵素がシユードモナス （Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属又はアスペルギルス（Ａ
   ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属に属する微生物或いは該微生
   物由来の酵素である特許請求の範囲第１項又は第５項記
   載の方法。
7. （７）一般式■ ▲数式、化学式、表等があります▼■ （式中、ＲはＣ＿２−Ｃ＿８の脂肪族炭化水素基）で表
   わされる（Ｒ，Ｓ）−２−インドリン−カルボン酸エス
   テルを不斉的に加水分解して、構造式■＾＊ ▲数式、化学式、表等があります▼■＾＊ で表わされる光学活性なインドリン−２−カルボン酸を
   生成させる立体選択的エステラーゼ活性を有する微生物
   或いは酵素を作用させることにより、ラセミ体■を光学
   活性な化合物インドリン−２−カルボン酸■＾＊と一般
   式■＾＊ ▲数式、化学式、表等があります▼■＾＊ （Ｒは前記と同じ）で表わされる光学活性 インドリン−２−カルボン酸エステルとに光学分割し、
   夫々の光学活性体を分離、採取し、さらに■＾＊を加水
   分解して化合物■＾＊の対掌体である光学活性インドリ
   ン−２−カルボン酸を生成させ、採取することを特徴と
   する光学活性インドリン−２−カルボン酸の製造法。
8. （８）光学活性インドリン−２−カルボン酸■＾＊が構
   造式（Ｒ）−■ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｒ）−■ で表わされる（Ｒ）−インドリン−２−カルボン酸であ
   り、光学活性インドリン−２−カルボン酸エステルが一
   般式（Ｓ）−■ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｓ）−■ （式中、Ｒは前記に同じ）で表わされる（Ｓ）−インド
   リン−２−カルボン酸エステルである特許請求の範囲第
   ７項記載の製造法。
9. （９）微生物或いは酵素がバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
   ）属又はアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属
   に属する微生物或いは該微生物由来の酵素である特許請
   求の範囲第７項又は第８項記載の製造法。
10. （１０）酵素が哺乳動物臓器由来の酵素である特許請求
    の範囲第７項又は第８項記載の製造法。
11. （１１）光学活性インドリン−２−カルボン酸■＾＊が
    構造式（Ｓ）−■ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｓ）−■ で表わされる（Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸であ
    り、光学活性インドリン−２−カルボン酸エステル■＾
    ＊が一般式（Ｒ）−■ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｒ）−■ （Ｒは前記と同じ）で表わされる（Ｒ）−インドリン−
    ２−カルボン酸エステルである特許請求の範囲第７項記
    載の製造法。
12. （１２）微生物或いは酵素がシユードモナス（Ｐｓｅｕ
    ｄｏｍｏｎａｓ）属又はアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇ
    ｉｌｌｕｓ）属に属する微生物或いは該微生物由来の酵
    素である特許請求の範囲第７項又は第１１項記載の製造
    法。