JPS61265099A - 光学活性インドリン−２−カルボン酸の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、一般式 （式中、Ｒはヒドロキシル基とハロゲン原子で単独或い
は同時に置換されていても良い炭素数１〜１０個のアル
キル基又はアルケニル基、未置換又は置換脂環式炭化水
素基、未置換又は置換フェニル基又はベンジル基を表わ
す。）で示される（　Ｒ，Ｓ　）−インドリン−２−カ
ルボン酸エステルＩを不斉的に加水分解して、 学活性インドリンー２−カルボン酸を生成させる立体選
択的エステラーゼ活性を有する微生物を作用させること
により、ラセミ体ｌから加水分解物である光学活性イン
ドリン−２−カルボン酸ｌ米及び未反応物である光学活
性インドリン−２−カルボン酸エステル を生成させ、夫々の光学活性体を分陰、採取し、の対掌
体を生成させ、採取することを特徴とする光学分割によ
る光学活性インドリン−２−カルボン酸の製造方法に関
する。

本発明は、使用する微生物を選ぶことにより、（Ｒ１−
インドリン−２−カルボン酸と（８）−インドリン−２
−カルボン酸エステル、或いはこの逆の組み合わせであ
る（Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸と（綽−インド
リン−２−カルボン酸エステルを随意採取することがで
きる。

これら光学活性インドリン−２−カルボン酸類化合物は
涌々医薬品の原料となりうる。例えば（Ｓ）−インドリ
ン−２−カルボン酸は、アンジオテンシンＩ変換酵素の
阻害剤として有効な血圧降下剤である（Ｓ）−１−（（
Ｓ）−メルカプト−２−オキソプロビルシーインドリン
−２−カルボン酸に利用できる〔文献：ジャーナル・オ
ブ・メデイｖｔＡｔ・ケｌスト’）−ＣＪ、Ｍｅｄ、Ｏ
ｈｅｍ、）。

２６．３９４（１９８３）’）。

（従来の技術） これら光学活性なインドリン−２−カルボンＭ類の製造
については、下記に示すような光学分割剤を用いる方法
が知られている。

（文献：特開昭５７−８１４６０号公報）〔文献：　Ｍ
、　■１ｎｃｅｎｔ　ｅｔ　ａｌ、、　　テトラヘドロ
ン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｉ、ｅｔｔｅ
ｒｓ　）。

２３．１６７７（１９８２）） ■ （担し、母液側から（８）体を抽出） 〔文献：ジャーナル・オブ・メデイシナル・ケミストリ
ー（Ｊ、　Ｍｅｄ、　（３ｈｅｍ、　）　、　２６゜（
発明が解決しようとする問題点） これら分割剤を用いた光学分割法は操作が煩雑であり、
大量生産に適した簡便な方法により光学活性インドリン
−２−カルボン酸又は光学活性インドリン−２−カルボ
ン酸エステルを得る方法の開発が望まれていた。

（問題点を解決するための手段及び作用）本発明者らは
、インドリン−２−カルボン酸のカルボン酸部位を種々
アルコールを用いてエステル化し、このエステル体に微
生物を作用させて不斉加水分解を行えば光学活性体を取
得できると考え、検討を重ねてきた。その結果、 （１）アルスロバクタ−（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　
）属、サッカＯ”？イセス（９ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅ
ｓ　）属、アエロモナス（ムｅｒｏｍｏｎａｓ　）属、
アシデフイリウＡ　（Ａｃｉｄｉｐｈｉｌｉｕｍ）屑、
ブレビバクテリウム（ｎｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　
）属、コリネバクテリウム（（３ｏｒｙｎｅｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ　）属、トリコスポロン（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏ
ｒｏｎ　）属、シュードモナス（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ　）属に属する微生物を（Ｒ，８）−インドリン−２
〜カルボン酸エステルに作用させ、不斉的に加水分解し
、（Ｒ）−インドリン−２−カルボン酸と（８）−イン
ドリン−２−カルボン酸エステルを生成させた後、有機
溶媒で分離、抽出することにより（Ｔ６−イントリンー
２−カルボン酸（綽−１と（８）−インドリン−２−カ
ルボン酸エステル（８）−Ｉを夫々採取することができ
ること、更に採取した（Ｓ）−１をアルカリ加水分解又
は酵素分解を行って（Ｓ）−１を生成させ、採取するこ
とができること、 （２）　　７Ｊｌ／カリゲネｘ　（Ａｌｋａｌｉｇｅｎ
ｅｓ）　ｋ４、ナドソニア（Ｈａｄｏｓｏｎｉａ　）属
、ロドトルラ（ＩＬｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　）属、トル
ロプシス（’ｌ’ｏｒｕｌｏｐｓｉｓ　）　＠、プロタ
ミノバクタ−（ＰｒＯｔａｍｉｎＯｂａＣｔ６ｒ　）属
、シュードモナス（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　）属、ア
ルスリニウム（Ａｒｔｈｒｉｎｉｕｍ　）　＠、アスペ
ルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　）属、セファロス
ポリウム（ｏｅｐｈａｒｏｓｐｏｒｉｕｍ　）属、エキ
ノボトスポラ（Ｅｃｈｉｎｏｐｏｄｏｓｐｏｒａ　）属
、エメリセロプシス（Ｅｍｅｒｉｃｅｌｌｏｐｓｉｓ　
）属、ヒポフレア（Ｈｙｐｏｃｒｅａ　）属、イサリア
（Ｉｓａｒｉａ）祠、レピスタ（Ｌｅｐｉｓｔａ　）属
、ネクトリア（Ｎｅｃｔｏｒｉａ）属、フイアロフォー
ラ（ｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａ）属、ペスタロチオプシス
（ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ）Ｎ、ポドスぽう（Ｐ
ｏｄｏｓｐｏｒａ　）属、モリニエラ（Ｍｏｒｉｌｌｉ
ｅｌａ　）属、クルイベＯ”？イセス（Ｋｌｕｙｖｅｒ
ｏｍｙｃｅｓ　）属、シゾサッヵロマイセｘ　（Ｂｃｈ
ｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　）屑、ウイカーハ
ミャ（Ｗｉｃｈｅｒｈａｍｉａ　）属、アルスロバクタ
−（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　）属、ブレビバクテリ
ウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　）属、ポツリオ
アスカス（Ｂｏｔｒｙａｓｃｕｓ　）　Ｉ１４、キャン
デイダ（Ｑａｎｄｉｄａ　）　属、シテロマイセス（□
１ｔｅｒｏｒｎｙｃｅｓ　）属、デバリオマイセス（Ｔ
）ｅｂａｒｙｏｔｎｙｃｅｓ　）属、ホルモアスカス（
Ｈｏｒｍｏａｓｃｕｓ　）　ｗ４に属する微生物を（Ｒ
。

８）−インドリン−２−カルボン酸エステルに作用させ
、不斉的に加水分解し、前記（１）とは逆に（Ｓ）−イ
ンドリン−２−カルボン酸（８）−■と（ｆＯ−インド
リン−２−カルボン酸エステル（ｍ−１を生成させた後
、有機溶媒で分離、抽出することにより（８）−Ｉと（
１１）−１を夫々採取できること、更に採取した（綽−
１をアルカリ加水分解又は酵素分解を行って（２）−■
を生成させ、採取できること、 を見い出し、本発明を完成した。以下に、本発明を更に
詳細に説明する。

本発明の基質として用いられる、一般式れるインドリン
−２−カルボン酸エステルは、■がハロゲン原子とヒド
ロキシル基で単独或いは同時に置換されていてもよい炭
素数１〜１０個のアルキル基又はアルケニル基である化
合物であり、例えばメタノール、エタノール、プロパツ
ール、ブタノール、アミルアルコール、ヘキサノール、
ヘ−エタノール、オクタツール、エチレングリコール、
グリセロール、グリセロールα−モノクロルヒドリン、
２，３−ジクロル−１−プロパツール、１．３．５−ペ
ンタントリオール等とインドリン−２−カルボン酸との
エステルをあげることができる。

インドリン−２−カルボン酸エステル１は次のようにし
て得られる。即ち（ａＳＳ）−インドリン−２−カルボ
ン酸に溶媒と反応試剤とを兼ねたアルコールを加え、イ
ンドリン−２−カルボン酸の濃度５〜４０％（Ｗ／Ｖ）
の範囲で怖酸性下、５０゛Ｃ〜還流温度の範囲で１〜５
時間縮合反応を行う。次に、この反応液に飽和重炭酸ソ
ーダ水を加え、ｐＨ７に調整後、酢酸エチル、クロロホ
ルム、塩化メチレン、トルエン、ヘキサン等のような疎
水性有機溶媒を用いて抽出し、更に濃縮することにより
高純度の（）ＬＳＳ）−インドリン−２−カルボン酸エ
ステルＩが得られる。

成させる立体選択的なエステラーゼ活性を有する微生物
としては、例えばアルスロバクタ−（Ａｒｔｈｒｏｂａ
ｃｔｅｒ　）　Ｘ、サツカロマイセス（９ａｃｃｈａｒ
ｏｍｙｃｅｓ　）属、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａ
ｓ　）屑、アシデフイリウム（Ａｃｉｄｉｐｈｉｌｉｕ
ｍ　）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ　）属、　コリネバクテリウム（Ｏｏｒｙｎｅ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　）属、トリコスポロン（Ｔｒｉｃ
ｈｏｓｐｏｒｏｎ　）属、シュードモナス（ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ　）Ｎに祠する微生物があり、更に詳しく
はアルスロバクタ−パララフイネウス（Ａｒｔｈｒｏｔ
＋ａｃｔｅｒ　ｐａｒａｆｆｉｎｅｕｓ　）　ＡＴＯＣ
２１３１７、サツカロマイセス　セレビツシュ（５ａｃ
ｃｈａｒｏ＋ｏｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　）　
ｆ（［Ｊ　Ｔ７０１８、アエロモナス　ハイドロフイラ
（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ　ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）　ＩＦ
Ｏ３８２０、アシデフイリウム　クリプタム （Ａｃｉｄｉｐｈｉｌｉｕｍ　ｃｒｙｐｔｕｍ）　ＴＦ
Ｏ１４２４２、ブレビバクテリウム　プロトフォルミ （Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｐｒｏｔｏｐｈｏｒ
ｍｉａｅ　）ＩＦｏ　　１２１２８、コリネバクテリウ
ム　パウロメタボラＡ　（Ｏｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍｐａｕｒｏｍｅｔａｂｏｌｕｍ）　Ｉ　ＦＯ１２１
６０、トリコスポロン　　クタネウム（’Ｉ’ｒｉｃｈ
ｏｓｐｏｒｏｎｃｕｔａｎｅｕｍ　）　Ｉ　ＦＯ１２０
０、シュードモナスオキサラクチｘ　（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ　ｏｘａｌａｃｔｉｃｕｓ）ＩＰｏ　　１３５
９３等をあげることができる。

又、ラセミ体Ｉを不斉的に加水分解し、（８）−１を生
成させる立体選択的エステラーゼ活性を有する微生物と
しては、例えばアルカリゲネス（Ａｌｋａｌｉｇｅｎｅ
ｓ）属、ナト’）　、ニー　７　（Ｎａｄｏｓｏｎｉａ
）属、ロドトルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）　７Ｍ、
トルロプシｘ　（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ　）　ｆｉ４、
プロタミノバクタ−（ｐｒｏｔｏｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ
　）属、シュードモナス（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　）
　属、アルスリニウム（Ａｒｔｈｒｉｎｉｕｍ　）　）
Ｈ、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇ′ｉ　ｆｌｕｓ）　
＠、セファロスポリウム（□ｅｐｈａｒｏｓｐｏｒｉｕ
ｍ）　Ｒ，ｘキノポドスポラ（Ｅｃｈｉｎｏｐｏｄｏｓ
ｐｏｒａ　）属、エメリーｔｚｏプシス（Ｅｍｅｒｉｃ
ｅｌｌｏｐｓｉｓ　）ＩＬ　ｔ＝ボクレア（Ｈｙｐｏｃ
ｒｅａ　）　ｉｐ！　、　　イサリア（ｌ５ａｒｉａ）
　１４、レビスタ（■、ｅｐｉｓｔａ）１４４、ネクト
リア（Ｎｅｃｔｏｒｉａ　）属、マイアロフオーラ（Ｐ
ｈ１ａｌｏｐｈｏｒａ　）Ｎ、ペスタロチオプシス（Ｐ
ｅ５ｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ）属、ポドスポラ（ｐｏｄ
ｏｓｐｏｒａ　）　属、モリニエラ（八ｆｏｒｉｌｌｉ
ｅｌａ）属、クルイベロマイセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍ
ｙｃｅｓ　）属、シゾサツカロマイセス （［３ｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒａｍｙｃｅｓ　）属、
ウイカーハ（ヤ（Ｗｉ　ｃｈｅｒｈａｍｉ　ａ　）属、
アルスロバクタ−（１ｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　）属、
ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）
　ｘ、ポツリオアスカス（Ｂｏｔｒｙｐａｓｃｕｓ　）
属、キャンデイダ（０ａｎｄｊｄａ　）属、シテロマイ
セス（ｃ（ｔｅｒｏｍｙｃｅｓ　）Ｎ、デバリオマイセ
ス（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ　）　祠、ホルモアスカ
ス（Ｈｏｒｍｏａｓｃｕｓ　）属に属する微生物があり
、更に詳しくは、アルカリゲネス　ファエカリス（ｌｌ
ｋａｌｉｇｅｎｅｓ　　ｆａｅｃａｌｉｓ　）ＩＦＯ１
２６６９、ナドソニア　エロンガタ（Ｎａｄｏｓｏｎｉ
ａｅｌｏｎｇａｔａ　）ＩＦＯ０６６５、ロドトルラ　
グルチニス（Ｈｈｏｄｏｔｏｎｉｌａ　ｇｌｕｔｉｎｉ
ｃｓ　）ＩＡＭ　　４６４２、）ルロプシス　グロペン
ギエッセリ（’ｉ！ｏｒｕｌｏｐｓｉｓ　ｇｒｏｐｅｎ
ｇｉｅｓｓｅｒｔ　）ＩＦＯ０６５９，プロタミノバク
タ−アルボッラバ：ｘ、　（Ｐｒｏｔａｍｉｎｏｂａｃ
ｔｅｒ　ａｌｂｏｆｌａｖｕｓ　）ＩＦＯ３７０７、シ
ュードモナス　アシトポランス（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ　ａｃｉｄｏｖｏｒａｎｓ　）ＩＦ０１３５８２、　
　アルスリニウム　ファエオスペルマム（Ａｒｔｈｒｉ
ｎｉｕｍ　ｐｂａｅｏｓｐｅｒｍｕｍ　）　Ｉ　ＦＯ５
７０３、アスペルギルス　フイクム （ｌｓｐｅｒｇｉｌｌｅｅｓ　　ｆｉｃｕｕｍ　）ＩＦ
ｏ　　４２８０１セフアロスポリウム　マイコマイラム （Ｑｅｐｂａｒｏｓｐｏｒｉｕｍ　ｍｙｃｏｐｈｉｌｕ
ｍ　）　Ｉ　ＦＯ８５８０、エキノボトスポラ　ジャマ
イセンシス（Ｅｃｈｉｎｏｐｏｄｏｓｐｏｒａ　ｊａｍ
ａｉｃｅｎｓｉｓ　）　ＩＦｏ３０４０６、エメリセロ
プシス　グラブラ（Ｅｍｅｒｉｃｅｌｌｏｐｓｉｓ　ｇ
ｌａｂｒａ　）ＩＦＯ９０３１、ヒポフレア　ラクタ（
１Ｉｙｐｏｃｒｅａ　　１ａｃｔｅａ　、）ＴＦＯ８４
３４、イサリア　アチビコラ（ｌ５ａｒｉａ　ａｔｙｐ
ｉｃｏｌａ　）ＩＦＯ９２０５、レビスタ　ヌダ（Ｌｅ
ｐｉｓｔａ　ｎｕｄａ　）　ＩＦＯ８１０４、ネクトリ
ア　フラムメ（Ｎｅｃｔｒｉａ　ｆｌａｎｎｎｅａ、　
）ＩＦＯ３０３０６、マイアロフォーラ　ファステイギ
アタ（ｐｈｉａｔＯｐｈＯｒａ　　ｆａｓｔｉｇｉａｔ
ａ　）ＩＦｏ　６８５０、ペスタロチオプシス　ディス
ティンフタ（ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ　ｄｉｓｔ
ｉｎｃｔａ　）ＩＦＯ９９８１１ポドスポラ　カルボナ
リア（ｐｏｄｏｓｐｏｒａ　ｃａｒｂｏｎａｒｉａ　）
ＩＦＯ３０２９４、モニリエラ　トメントサ（八（ｏｎ
ｉｌｉｅｌｌａｔｏｍｅｎｔｏｓａ）ＯＢＳ　　２２０
．３２、クルイベロマイセス　フラギリス（Ｋｌｕｙｖ
ｅｒｏｍｙｃｅｓｆｒａｇｉ目５）ＩＦＯ０２８８、レ
ゾサツカロマイ４ｉス　　ボムベ（Ｂｃｈｔｚｏｓａｃ
ｃｈａｒｏｍｙＣｅｓｐｏｍｂｅ　）ＩＦＯ０３４７、
ウイカーハミア　フルオレセンス（Ｗｉｃｈｅｒｈａｍ
ｉａ　　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）ＩＦＯ１１１６、ア
ルスロバクタ−クリスタロポイエーテ：ｘ、　（Ａｒｃ
ｈｒｏｂａｃｔｅｒｃｒｙｓｔａｌｌｏｐｏｉｅｔｅｓ
　）Ｉ　ＦＯ１４２３５、ブレビバクテリウム　フラバ
ム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒ　ｉＬｌｌｎｆｒａｖｕｍ
）ＡＴＯ（３２１２６９、ポツリオアスカス　シンナエ
デンドラス（ＢＯｔｒｙＯａＳＣｕ８ｓｙｎｎａｅｄｅ
ｎｄｒｕｓ　）　Ｉ　ＦＯ１６０４、キャンディダ　デ
イベルサ（０ａｎｄｉｄａ　ｄｉｖｅｒｓａ　）ＩＦＯ
１０９０、シテロマイセス　マトリテンシス（Ｏｆ　ｔ
ｅｒｏｍｙｃｅｓ　ｍａｔｒｉｔｅｎｓｉｓ　）　Ｔ　
ＦＯ’０６５１、　デバリオマイセス　ハンセニー（１
）ｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ　Ｈａｎｓｅｎ目）ＩＦＯ０
０１５、中ルモアスカス　プラチボデイス （Ｈｏｒｍｏａｓｃｕｓ　ｐｌａｔｙｐｏｄｉｓ　）　
Ｉ　ＦＯ１４７１等がある。

上記菌株は、財団法人発酵研究所（ＩＦＯ：ｌＮ５ＴＩ
ＴＵＴＥ　　ＦＯＲＦＥＲＭＥＮＴＡＴＩＯＮ。

０８ＡＫＡ、ＪＡＰＡＮ）、　アメリカンタイプカルチ
ャーコレクション（ＡＴＯｆｌ：ＡＭＥＲＩＣＡＮＴＹ
ＰＥ　　０ＵＬＴＩＩＲＥ　　０ＯＬＬＥＯ’ｌ’ＩＯ
Ｎ。

ＲＯＯＫＶＩＬＴ、Ｅ、ＩＪ８Ａ）、シービーニス（Ｏ
ＢＳ：０ＥＮＴＩｔＡＡＬＢＩＴＲＥＡＶ　　ＶＯＯＲ
８０ＨＩＭＭＥＬＯｔＪＬＴＵＲＥ８．ＢＡＡＲＮ。

ＮＥＴＨＥＲＬＡＮＤ８　）、東京大学応用微生物研究
所（ＩＡＭ：ＩＮＳ’ｒ’Ｉ’ｌ’Ｖ’ｌ’Ｅ　ＯＦ　
ＡＰＰＬＩＥＩ）ＭＴＯＲＯＢＩＯＬＯＧＹ、ＵＮＩＶ
Ｅ）Ｌ８Ｉ’ｌ’Ｙ　ＯＦ’Ｉ’０ＫＹＯ，ＪＡＰＡＮ
）、　広島大学工学部発酵工学科（ＨＵＴ：ＦＡＯＵＬ
ＴＹ　ＯＦ　ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ。

ＨＩＲＯ８ＨＩＭＡ　ＵＮＩＶＥＲ８ＩＴＹ、ＨＩＲＯ
８ＨＩＭＡ。

ＪＡＰＡＮ　）の各機関に保存されているものである。

これら微生物の培養は、微生物が生育できる栄養培地で
あれば良く、例えばグルコース、ペプトン、酵母エキス
、肉エキス等から成る栄養培地が用いられる。培養温度
はｌＯ〜４０’０１好ましくは２５〜３５°Ｃであり、
培地のｌ）Ｈは３〜８、好ましくは６〜７であり、好気
的に培養し、通常、２４〜４８時間行えば良い。

インドリン−２−カルボン酸エステルの微生物による不
斉加水分解反応においては、培養の開始と同時に培地中
に基質即ち該化合物ｌを添加し、培養と並行して加水分
解を行う方法、培養により得られた菌体含有＠養液に化
合物ｌを添加する、あるいは培養後、遠心分離または濾
過を行って得た菌体をＭ＃液に懸濁させた菌体懸濁液中
で、化合物１と接触させて加水分解を行う方法等がある
が、望ましくは菌体を遠心分離あるいは濾過等で濃縮後
、高濃度菌体懸濁液とし、このものに化合物Ｉを添加す
る方法が反応後の生産物回収の点から秀れている。

化合物１の水に対する溶解度は低いものもあるが、攪拌
すれば本反応にとって支障とはならない。

又、例えばアセトン、メタノール等の有機溶媒や界面活
性剤等を反応に支障とならない程度加えても良い。

反応条件として温度は１０〜５０℃、好ましくは２５〜
３５°Ｃの範囲であり、ｐＨは５〜８、好ましくは６．
５〜７．５の範囲で行い、反応時間は基質及び菌体量の
比により変化するが、未反応のエステルと生成物のカル
ボン酸がモル比５０％に達したところで止めれば良い。

但し、菌体の反応活性の観点から通常１２〜４８時間で
５０％に達するように基質の添加量を決めるのが望まし
い。また、加水分解反応が進むに従い反応液中の１）ｉ
ｆが酸性側に傾くので、中和剤例えばＮａＯＨ溶液等で
ｐｌ（を６〜７に保持するのが望ましい。更に、上記の
不斉加水分解反応を、例えば微生物を固定化させること
にまり煤り返し行うこともできる。

微生物を用いて不斉加水分解した後、反応液中の１とＩ
７を分離する方法としては、反応液のｐＨを７に調整し
た険、酢酸エチル、クロロホルム、塩化メチレン、トル
エン、ヘキサン等の疎水性有機溶媒で光学活性インドリ
ン−２−カルボン酸エステル１７のみを抽出することに
よって、親水性の光学活性インドリン−２−カルボン酸
−７と容易に分離することができる。

分離して得られた光学活性インドリン−２−カルボン酸
エステルは、そのまま濃縮すれば高光学純度のエステル
陣で得られるが、更に次のようにして光学Ｙｓ性インド
リンー２−カルボン酸とすることができる。即ち、光学
活性インドリン−２−カルボン酸エステル（８）−１又
は（ｔ＋）−１を室温下、ｐＦＩ９〜１１の範囲でｌＯ
分〜２時間アルカリ加水分解を行えば、各々（Ｓ）−１
又は（Ｒ）−１１が生成す力を百する酵素、例えば（８
）−１に対してはリボプロティン　リパーゼ　アマノ３
（天野製某ＷＱ製）を、一方（Ｂ）−１に対してはステ
アプシン（和光純薬任１製）を作用させて、あるいは（
８）又は（旬に特異的な微生物による加水分解を行えば
、各々（８）−１又は（綽−置を得ることができる。

このようにして得られた加水分解液はｐＨを４〜６、好
ましくは５．０付近に調整後、塩化メチレン、酢酸エチ
ル、トルエン、ヘキサン等の有機溶媒で抽出し、濃縮後
、アセトン等の有機溶媒・中で晶析することにより高光
学純度の（８）−１又は（功−■が得られる。

一方、インドリン−２−カルボン酸エステル抽出分離の
際、水層側に残っている光学活性インドリン−２−カル
ボン酸も上記した如＜、ｐＨ４〜６、好ましくは５．０
付近に品格後、同様の抽出精製操作を行うことにより高
光学純度の（Ｒ）−１又は（８）−１を容易に得ること
ができる。

（実施例） 以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発
明はこれらの実施例に限定されるものではない。

実施例Ｉ Ｌ、Ｓ）−インドリン−２−カルボン醒グリセロールエ
ステル（Ｉａ）の製造 （Ｒ，８）−インドリン−２−カルボン酸Ｎ５０９とグ
リセロール２５０Ｆを混合し、・濃硫酸２０ｍ１を加え
て９５〜１００°Ｃの範囲で３時間、縮合反応を行った
。反応後、一旦冷却してから重炭酸ソーダ及び飽和重炭
酸ソーダ水を加えｐＨを７．０に調整した。次に酢酸エ
チル５００　ｍｌで３回（計ｔ５ｇ）抽出操作を行い、
酢酸エチル１−を水１００ｇ／で洗浄後、無水硫酸ソー
ダで脱水処理し、更に減圧濃縮したところ（Ｌ８）−１
ａが５７．７＆、７９％の収率で得られた。

同様の方法で（ｔＬ、８）−インドリン−２−カルボン
酸５（ｌに対し、５倍敏のアルコールを添加することに
より、以下の基質 （Ｉｌｔ、　Ｓ　）−インドリン−２−カルボン酸アミ
ル（Ｉｂ）　６０．８　ｇ、収率８５％（ｉｔ、　ｓ　
）−インドリン−２−カルボン酸エチレングリコールエ
ステル（ｌｃ）５０．２ｆ１収４に７９．０９１； （Ｒｅｄ）−インドリン−２−カルボン酸グリセロール
α−モノクロルヒドリンエステル（Ｉｄ）４５．４ｆ１
収率５８．０％ （Ｒ，８）−インドリン−２−カルボン酸２，３−ジク
ロルプロパツールエステル（Ｉｅ）　２８．１　Ｆ。

収率３８．４％ （’ａ、　ｓ　）−インドリン−２−カルボン酸１，３
゜５−ペンタントリオールエステル（Ｉｆ）　５９．５
　ｆ１収率７８．３％ （Ｒ，８）−インドリン−２−カルボン酸１．４−シク
ロヘキサンジオールエステル（Ｉｇ）　５６．４ｖ１収
率７０．３％ （Ｒ，８）−インドリン−２−カルボン酸ベンジルアル
コールエステル（ｌｈ）４９．７ｇ、収率６４．０％ を調製した。なお、ｌｃ、　ｌｄ、　Ｉｆ、　Ｉｇ、　
ｌｈ　の精製に際し、抽出溶剤として塩化メチレンを用
いた。

グルコース４％、イーストエキス０．３％、肉エキス０
．３％、ペプトン０．３％、リン酸ニアンモニウム０２
％、リン酸−カリウム０．１％（１）Ｈ６，８）からな
る栄養液体培地を調製し、２１坂１」フラスコに４００
ｍ１ずつ分注後、１２０°Ｃ％１５分間殺菌１７た。

これとは別に同じ組成の培地にて前培養をしたアルスロ
バクタ−ニコチア＊　ＩＦＯ１４２３４の種菌液１０ｇ
／を前記培養培地に接種し、３０″０１２４時間振とう
を行った。合計５本培養し、培養波計２１を得た。この
培養液を遠心分離し、菌体を集めた。この菌体を０．１
Ｍリン酸緩衝液（１）Ｈ７，０）２００ｇ／に懸濁し、
基質（Ｉｔ、　８　）−インドリン−２−カルボン酸グ
リセロールエステル（Ｉａ）を６．Ｏｆ添加した。これ
を５００ｇ／容器内で攪拌下、ＩＮ　　ＮａＯＨ溶液で
Ｉ）Ｔ（を７．０に調整しながら、３０”Ｃ！、１８時
間反応させた。反応後、遠心分離して得た土浦を各２０
０ｇ／の酢酸エチルで４回（計８００ｇ／）抽出分離を
行い、酢酸エチル層を無水硫酸ソーダで脱水後、減圧濃
縮したところ、比旋光度〔α）”　＋　１４．２°（Ｃ
＝１．０．エタノール）を有する粘稠なシロップ（８）
−１１が２．５３１　（（Ｒ，８）　−１ａからの収率
８４％）得られた。

ＩＨＮＭＲ（９０ＭＨ２）測定値は次の通りであった。

ＩＨＮＭＲ（ＭｅＯＨｄ４）δｐｐｍ：８．２〜８．４
５（２Ｈ）、８．５〜４．７（９Ｈ）、６．５〜７．１
（４Ｈ，ｍ、１ｒ−）。

得られた（８）　−１，ａ　２．５３　ｆｌに０．１　
Ｍリン酸水系二カリウム溶液２０ｇ／を加え、３３９Ｃ
で２ＮＮａＯＨを滴下することによってＩ）Ｈを１０に
保ち１時間加水分解を行った。その後、反応液をＩＮ塩
酸でｐＨ５，０に調整し、酢酸エチル１００ｇ／で３回
（計３００ｇ／）抽出操作を行った。更に無水硫酸ソー
ダで脱水処理後、減圧鎖線し、乾固物をアセトン−ヘキ
サン（５ｇ／−１ｇ１）で再結すると比旋光度〔α）　
　　＋３２．３°（Ｃ＝１．０．ジメチルホルムアミド
）〔文献値、ジャーナル・オブ・メデイシナル・ケミス
トリー（Ｊ、　Ｍｅｄ、　□ｈｅｍ、）。

２６．３９４（１９８３）、（ａ）”；＋３４．５°（
ｃ＝１．０．ジメチルホルムアミド）〕を有する白色の
粉末（８）−インドリン−２−カルボン酸（８）−１が
１．３９　ｆｌ（（Ｒ，８）　−１ａからの収率６７５
％）得られた。

”ＨＮＭＲ（９０ＭＨｚ）　　測定値は次の通りであっ
た。

ＩＴ（ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　　δｐＩ）ｍ　：　
２．８５〜８．４５（２Ｈ）、４．１０〜４．３５（Ｉ
Ｈ）、６．４０〜７．０５　（４Ｈ，ｍ、　Ａｒｙｌ　
）。

一方、最初の酢酸エチル抽出後の水層をＩＮ塩酸でｐＨ
５，０に調整し、酢酸エチルを２００νずつ用いて３回
（計６００５ｇ／）抽出を繰り返し、以下（８）−１ｆ
の場合と同様の操作を行い、（１１）−１が１．５８ｇ
（（Ｒ，Ｓ）−１ａからの収率７７９６）得うレタ。比
旋光度の値は（ａ）”−２４，ｆ（ｃ＝１．０．ジメチ
ルホルムアミド）であった。

実施例２ 菌株は、（８）体のエステルのみを加水分解する活性を
有するアルカリゲネス　ファエ力リス　ＩＦＯ１２６６
９を用い、ラセミ体基質を（几、Ｓ）−インドリン−２
−カルボン酸アミル（Ｉｔ））に変えて、実施例１に準
じて微生物による不斉加水分解反応及び抽出、精製を行
った。ただしラセミ体基質（Ｒ，８）−１ｂは６．（１
，不斉加水分解反応時間は２４時間とした。その結果、
比旋光度〔α〕２５一５．４°（Ｃ＝１．０．エタノー
ル）を有する（旬−１ｂ２．７７　ｆ　（（Ｒ，８）　
−１ｂからの収率９２％）を得、さらにアルカリ加水分
解処理を行うことによって比旋光度（ａ）”−３１３，
１°（Ｃ＝１−０　＋　ジメチルホルムアミド）を有す
る（旬−１を１．５９Ｆ（（Ｒ＃８）−１ｂからの収率
７６％）得た。一方、（８）−旧は１．３２　ｆ　（（
Ｒ，８）　−１ｂからの収率６３　’３６　）得られ、
その比旋光度は〔α’）”　＋２６．８゜（Ｃ＝１．０
．ジメチルホルムアミド）であった。

実施例３〜１２ 菌株を変えて実施例１と同様の操作を行い、表−１に示
す結果を得た。ただし、ラセミ体基質を（Ｌ８）−イン
ドリン−２−カルボン酸エチレングリコール（ＩＣ）に
変え、各反応とも６．Ｏｆずつ加えた。まｔコ不斉加水
分解反Ｌｃ時間は１８時間とした。表中、実施例３．４
．５．６．７は（１’ｌ）体のみを、８．９．１０．１
１，１２は（８）体のみを不斉加水分解した例である。

実施例１３〜３２ 菌株を変え、グルコース８．０％、ポリペプトン１．０
％、イーストエキス０．５％、リン酸ニアンモニウム０
．２％、リン酸−カリウム０．１％（１）Ｈ６，５）の
培地を用い、温度を２８°Ｃとして実施例１と同様にし
て培養を行った。

各菌株は、培養後、濾過して菌体を集め、０．１Ｍリン
酸緩衝液ｐＨ７，０に懸濁し、以下実施例１に準じて（
ｉｔｔｓ）−インドリン−２−カルボン酸グリセロール
ｌａの不斉加水分解反応及び抽出、精製を行い、表−２
に示す結果を得た。なお本実施例における菌株は、実施
例１３〜３０は（８）体のエステルを、３１．３２は（
神体のエステルを加水分解するものであった。

実施例３３〜３７ 基質及び菌株を変えて、実施例１と同様にして培養及び
反応を行い、表−３に示す結果を得た。

なお本火施例における菌株は、いずれも（８）体のエス
テルを加水分解する色のであった。

（発明の効果） 本発明によれば、立体選択的加水分解能を有する微生物
を適宜選んで使用することにより、（Ｒ９８）−インド
リン−２−カルボン酸エステルから該エステルの光学活
性体、（Ｉｌｌ）体もしくは（８）体を、あるいは光学
活性なインドリン−２−カルボン酸、（Ｒ）体もしくは
（Ｓ）体を、各々、任意に得ることが出来る。

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式■ ▲数式、化学式、表等があります▼■ （式中、Ｒはヒドロキシル基とハロゲン原 子で単独或いは同時に置換されていても良い炭素数１〜
   １０個のアルキル基又はアルケニル基、未置換又は置換
   脂環式炭化水素基、未置換又は置換フェニル基又はベン
   ジル基を表わす。） で示される（Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸エ
   ステル■を不斉的に加水分解して、構造式■＾＊ ▲数式、化学式、表等があります▼■＾＊ で表わされる光学活性なインドリン−２−カルボン酸を
   生成させる立体選択的エステラーゼ活性を有する微生物
   をラセミ体■に作用させることにより、ラセミ体■を光
   学活性な化合物インドリン−２−カルボン酸（■＾＊）
   と一般式■＾＊ ▲数式、化学式、表等があります▼■＾＊ （Ｒは前記と同じ）で表わされる光学活性インドリン−
   ２−カルボン酸エステルとに光学分割し、夫々の光学活
   性体を分離採取することを特徴とする光学分割による光
   学活性インドリン−２−カルボン酸の製造方法。
2. （２）光学活性インドリン−２−カルボン酸が、構造式
   （Ｒ）−■ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｒ）−■ で表わされる光学活性（Ｒ）−インドリン−２−カルボ
   ン酸であり、光学活性インドリン−２−カルボン酸エス
   テルが、一般式（Ｓ）−■▲数式、化学式、表等があり
   ます▼（Ｓ）−■ （Ｒは前記と同じ）で表わされる（Ｓ）−インドリン−
   ２−カルボン酸エステルである特許請求の範囲第１項記
   載の製造方法。
3. （３）微生物が、アルスロバクター （Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、サツカロマイセス（
   Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、アエロモナス（Ａｅ
   ｒｏｍｏｎａｓ）属、アシデフィリウム（Ａｃｉｄｉｐ
   ｈｉｌｉｕｍ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂ
   ａｃｔｅｒｉｕｍ）属、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙ
   ｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、トリコスポロン（Ｔｒｒ
   ｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ）属、シユードモナス（ｐｓｅｕ
   ｄｏｍｏｎａｓ）属に属する微生物である特許請求の範
   囲第１項または第２項記載の製造方法。
4. （４）光学活性インドリン−２−カルボン酸■＾＊が、
   構造式（Ｓ）−■ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｓ）−■ で表わされる光学活性（Ｓ）−インドリン−２−カルボ
   ン酸であり、光学活性インドリン−２−カルボン酸エス
   テル■＾＊が、一般式（Ｒ）−■▲数式、化学式、表等
   があります▼（Ｒ）−■ （Ｒは前記に同じ）で表わされる光学活性（Ｒ）−イン
   ドリン−２−カルボン酸エステルである特許請求の範囲
   第１項記載の製造方法。
5. （５）微生物が、アルカリゲネス （Ａｌｋａｌｉｇｅｎｅｓ）属、ナドソニア（Ｎａｄｏ
   ｓｏｎｉａ）属、ロドトルラ （Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）属、トルロプシス（Ｔｏｒ
   ｕｌｏＰｓｉｓ）属、プロタミノバクター（Ｐｒｏｔａ
   ｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ）属、シユードモナス（Ｐｓｅｕ
   ｄｏｍｏｎａｓ）属、アルスリニウム（Ａｒｔｈｒｉｎ
   ｉｕｍ）属、アスペルギルス（ＡｓＰｅｒｇｉｌｌｕｓ
   ）属、セフアロスポリウム（Ｃｅｐｈａｒｏｓｐｏｒｉ
   ｕｍ）属、エキノポドスポラ（Ｅｃｈｉｎｏｐｏｄｏｓ
   ｐｏｒａ）属、エメリセロプシス（Ｅｍｅｒｉｃｅｌｌ
   ｏｐｓｉｓ）属、ヒポクレア（Ｈｙｐｏｃｒｅａ）属、
   イサリア （Ｉｓａｒｉａ）属、レピスタ（Ｌｅｐｉｓｔａ）属、
   ネクトリア（Ｎｅｃｔｏｒｉａ）属、フイアロフオーラ
   （Ｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａ）属、ペスタロチオプシス（
   Ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ）属、ポドスポラ（Ｐｏ
   ｄｏｓｐｏｒａ）属、モリニエラ （Ｍｏｒｉｌｌｉｅｌａ）属、クルイベロマイセス（Ｋ
   ｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属、シゾサツカロマイセス
   （Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、ウイ
   カーハミヤ（Ｗｉｃｈｅｒｈａｍｉａ）属、アルスロバ
   クター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、ブレビバクテ
   リウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ボツリオ
   アスカス（Ｂｏｔｒｙｏａｓｃｕｓ）属、キヤンデイダ
   （Ｃａｎｄｉｄａ）属、シテロマイセス（Ｃｉｔｅｒｏ
   ｍｙｃｅｓ）属、デバリオマイセス（Ｄｅｂａｒｙｏｍ
   ｙｃｅｓ）属、ホルモアスカス（Ｈｏｒｍｏａｓｃｕｓ
   ）属に属する微生物である特許請求の範囲第１項または
   第４項記載の製造方法。
6. （６）一般式■ ▲数式、化学式、表等があります▼■ （式中、Ｒはヒドロキシル基とハロゲン原 子で単独或いは同時に置換されていても良い炭素数１〜
   １０個のアルキル基又はアルケニル基、未置換又は置換
   脂環式炭化水素基、未置換又は置換フェニル基又はベン
   ジル基を表わす。） で示される（Ｒ，Ｓ）−インドリン−２−カルボン酸エ
   ステル■を不斉的に加水分解して、構造式■＾＊ ▲数式、化学式、表等があります▼■＾＊ で表わされる光学活性なインドリン−２−カルボン酸を
   生成させる立体選択的エステラーゼ活性を有する微生物
   をラセミ体■に作用させることにより、ラセミ体■を光
   学活性な化合物インドリン−２−カルボン酸（■＾＊）
   と一般式■＾＊ ▲数式、化学式、表等があります▼■＾＊ （Ｒは前記と同じ）で表わされる光学活性インドリン−
   ２−カルボン酸エステルとに光学分割し、夫々の光学活
   性体を分離採取し、さらに■＾＊を加水分解して化合物
   ■＾＊の対掌体である光学活性インドリン−２−カルボ
   ン酸を生成させ、採取することを特徴とする光学活性イ
   ンドリン−２−カルボン酸の製造方法。
7. （７）光学活性インドリン−２−カルボン酸が、構造式
   （Ｒ）−■ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｒ）−■ で表わされる光学活性（Ｒ）−インドリン−２−カルボ
   ン酸であり、光学活性インドリン−２−カルボン酸エス
   テルが、一般式（Ｓ）−■▲数式、化学式、表等があり
   ます▼（Ｓ）−■ （Ｒは前記と同じ）で表わされる（Ｓ）−インドリン−
   ２−カルボン酸エステルである特許請求の範囲第６項記
   載の製造方法。
8. （８）微生物が、アルスロバクター （Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、サツカロマイセス（
   Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、アエロモナス（Ａｅ
   ｒｏｍｏｎａｓ）属、アシデフィリウム（Ａｃｉｄｉｐ
   ｈｉｌｉｕｍ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂ
   ａｃｔｅｒｉｕｍ）属、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙ
   ｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、トリコスポロン（Ｔｒｉ
   ｃｈｏｓｐｏｒｏｎ）属、シユードモナス（Ｐｓｅｕｄ
   ｏｍｏｎａｓ）属に属する微生物である特許請求の範囲
   第６項又は第７項記載の製造方法。
9. （９）光学活性インドリン−２−カルボン酸、■＾＊が
   、構造式（Ｓ）−■ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｓ）−■ で表わされる光学活性（Ｓ）−インドリン−２−カルボ
   ン酸であり、光学活性インドリン−２−カルボン酸エス
   テル■＾＊が、一般式（Ｒ）−■▲数式、化学式、表等
   があります▼（Ｒ）−■ （Ｒは前記に同じ）で表わされる光学活性（Ｒ）−イン
   ドリン−２−カルボン酸エステルである特許請求の範囲
   第６項記載の製造方法。
10. （１０）微生物が、アルカリゲネス （Ａｌｋａｌｉｇｅｎｅｓ）属、ナドソニア（Ｎａｄｏ
    ｓｏｎｉａ）属、ロドトルラ （Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）属、トルロプシス（Ｔｏｒ
    ｕｌｏｐｓｉｓ）属、プロタミノバクター（Ｐｒｏｔａ
    ｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ）属、シユードモナス（Ｐｓｅｕ
    ｄｏｌｎｏｎａｓ）属、アルスリニウム（Ａｒｔｈｒｉ
    ｎｉｕｍ）属、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
    ｓ）属、セフアロスポリウム（ＣｅＰｈａｒｏｓｐｏｒ
    ｉｕｍ）属、エキノポドスポラ（Ｅｃｈｉｎｏｐｏｄｏ
    ｓｐｏｒａ）属、エメリセロプシス（Ｅｍｅｒｉｃｅｌ
    ｌｏｐｓｉｓ）属、ヒポクレア（Ｈｙｐｏｃｒｅａ）属
    、イサリア（Ｉｓａｒｉａ）属、レピスタ（Ｌｅｐｉｓ
    ｔａ）属、ネクトリア（Ｎｅｃｔｏｒｉａ）属、フイア
    ロフオーラ（Ｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａ）属、ペスタロチ
    オプシス（Ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ）属、ポドス
    ポラ（Ｐｏｄｏｓｐｏｒａ）属、モリニエラ （Ｍｏｒｉｌｌｉｅｌａ）属、クルイベロマイセス（Ｋ
    ｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属、シゾサツカロマイセス
    （Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、ウイ
    カーハミヤ（Ｗｉｃｈｅｒｈａｍｉａ）属、アルスロバ
    クター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、ブレビバクテ
    リウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ボツリオ
    アスカス（Ｂｏｔｒｙｏａｓｃｕｓ）属、キヤンデイダ
    （Ｃａｎｄｉｄａ）属、シテロマイセス（Ｃｉｔｅｒｏ
    ｍｙｃｅｓ）属、デバリオマイセス（Ｄｅｂａｒｙｏｍ
    ｙｃｅｓ）属、ホルモアスカス（Ｈｏｒｍｏａｓｃｕｓ
    ）属に属する微生物である特許請求の範囲第６項又は第
    ９項記載の製造方法。