HU217790B - Enzimes eljárások taxánok előállításánál intermedierként használható vegyületek enantiomerkeverékeinek rezolválására - Google Patents

Enzimes eljárások taxánok előállításánál intermedierként használható vegyületek enantiomerkeverékeinek rezolválására Download PDF

Info

Publication number
HU217790B
HU217790B HU9402096A HU9402096A HU217790B HU 217790 B HU217790 B HU 217790B HU 9402096 A HU9402096 A HU 9402096A HU 9402096 A HU9402096 A HU 9402096A HU 217790 B HU217790 B HU 217790B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
mixture
formula
lipase
enantiomeric
hydroxy
Prior art date
Application number
HU9402096A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT69958A (en
HU9402096D0 (en
Inventor
Ramesh N. Patel
Original Assignee
Bristol-Myers Squibb Co.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bristol-Myers Squibb Co. filed Critical Bristol-Myers Squibb Co.
Publication of HU9402096D0 publication Critical patent/HU9402096D0/hu
Publication of HUT69958A publication Critical patent/HUT69958A/hu
Publication of HU217790B publication Critical patent/HU217790B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D205/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D205/02—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D205/06—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D205/08—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with one oxygen atom directly attached in position 2, e.g. beta-lactams
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/04—Oxygen as only ring hetero atoms containing a five-membered hetero ring, e.g. griseofulvin, vitamin C
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/16—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
    • C12P41/003—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions
    • C12P41/004—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions by esterification of alcohol- or thiol groups in the enantiomers or the inverse reaction
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
    • C12P41/003—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions
    • C12P41/005—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions by esterification of carboxylic acid groups in the enantiomers or the inverse reaction
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/874—Pseudomonas
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/911—Microorganisms using fungi
    • Y10S435/921—Candida
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/911—Microorganisms using fungi
    • Y10S435/939—Rhizopus

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

A találmány tárgya eljárás (Ia) és (Ib) általános képletűsztereoizomereket tartalmazó (I) elegy – ahol R1 mind az (Ia), mind az(Ib) általános képletben R2-re vonatkoztatva cisz-helyzetben van, vagyR1 mind az (Ia), mind az (Ib) általános képletben R2-re vonatkoztatvatransz-helyzetben van; és R1 hidroxicsoport, halogénatom vagy–O–C(O)–R4 általános képletű csoport; R2 heterociklusos vagycikloalkilcsoport; R3 hidrogénatom, R4 csoport, –C(O)–OR4 vagy–C(O)–R4 általános képletű csoport; R4 alkil-, alkenil-, alkinil-,aril-, cikloalkil-, cikloalkenil- vagy heterociklusos csoport –rezolválására az (I) enantiomerelegy víz és/vagy egy alkohol vagy egy(III) általános képletű vegyület vagy egy hidroxidion-donorjelenlétében mikrobiális vagy sertéspankreász eredetű enzimmel valóérintkezésbe hozásával végzett[IIa(1)] és[IIb(1)] nem enantiomerformába való sztereoszelektív konverziójával. A kapott termékek C-13-helyzetben megfelelő oldalláncot tartalmazó taxánok előállításánálalkalmazhatók. ŕ

Description

A találmány tárgyát taxánok, különösen a C-13-helyzetben heterociklusos vagy cikloalkilcsoportból álló oldalláncot tartalmazó taxánok előállításánál intermedierként használható vegyületek enantiomerkeverékeinek rezolválására szolgáló enzimatikus eljárások képezik.
A taxánok a gyógyászat területén felhasználást nyerő diterpénvegyületek. A taxolnak olyan analógjai például, amelyek a C-13-helyzetű oldalláncban heterociklusos vagy cikloalkilcsoportokat tartalmaznak, daganatellenes szerként nyernek alkalmazást. Az ilyen taxolanalógokat félszintetikus úton állíthatjuk elő, különösen β-laktám vagy nyílt láncú intermediereknek a taxánmaghoz való kapcsolásával és így a C-13 oldallánc képzésével. Minthogy ezeknek az analógoknak a sztereokémiája befolyásolhatja azok gyógyászati hatékonyságát, a szaktudomány keresi azokat az eljárásokat, amelyek lehetővé teszik a β-laktám és nyílt láncú intermediereknek, valamint a végső taxántermékeknek a sztereospecifikus előállítását.
A találmány hatásos eljárásokkal szolgál a C-13 helyzetű oldalláncban heterociklusos vagy cikloalkilcsoportot tartalmazó taxánok előállításánál intermedierként felhasználható vegyületek enantiomer, előnyösen racém keverékeinek rezolválására és így ezeknek a vegyületeknek a sztereospecifikus előállítására.
Közelebbről meghatározva, a találmány eljárással szolgál az la és lb általános képletű enantiomereket tartalmazó I elegy rezolválására, ahol R1 mind az la, mind az lb általános képletben R2-re vonatkoztatva cisz-helyzetben van, vagy R1 mind az la, mind az lb általános képletben R2-re vonatkoztatva transz-helyzetben van, és ahol
R1 jelentése hidroxicsoport, halogénatom vagy
-O-C(O)-R4 általános képletű csoport, amelyben
R4 jelentése alkil-, alkenil-, alkinil-, aril-, cikloalkil-, cikloalkenil- vagy heterociklusos csoport;
R2 jelentése heterociklusos vagy cikloalkilcsoport; és R3 jelentése hidrogénatom, R4 csoport, -C(O)-OR4 vagy -C(O)-R4 általános képletű csoport, amelyben R4 jelentése az R4-re a fentiekben megadott csoportok közül egymástól függetlenül választható; amely eljárás az említett I enantiomerkeverék olyan enzimmel való érintkezésbe hozásából áll, amely képes az említett la vagy lb általános képletű vegyületek egyikének nem enantiomer formába való sztereoszelektív konverzióját katalizálni, és így ennek a konverziónak a végrehajtására.
A fent említett sztereoszelektív konverziók példaként szolgáló megvalósításai közé tartozik a sztereoszelektív hidrolízis, sztereoszelektív észterezés, sztereoszelektív átészterezés és sztereoszelektív dehalogénezés, különösen a sztereoszelektív hidrolízis és észterezés.
Az I enantiomerelegy egyes csoportjait, így a hidroxicsoportokat adott esetben a rezolválási eljárásokban való felhasználás céljaira védhetjük, majd ezekről a csoportokról azután adott esetben a védőcsoportot eltávolíthatjuk.
A találmány szerinti eljárásokat részletesebben a következőkben írjuk le.
Cisz-enantiomerek
A találmány szerinti enzimatikus eljárásokkal elválaszthatjuk egymástól az Ia(l) és Ib(l) általános képletű enantiomerpárokat, vagyis az olyan la és lb általános képletű enantiomereket, amelyekben R1 az R2-re vonatkoztatva cisz-helyzetben van mind az la, mind az lb általános képletben.
A találmány szerinti eljárásokkal előnyös a fent leírt cisz-enantiomerek keverékét rezolválni.
T ransz-enantiomerek
A találmány szerinti enzimatikus eljárásokkal elválaszthatjuk egymástól az Ia(2) és Ib(2) általános képletű tamsz-enantiomerpárokat, vagyis az olyan la és lb általános képletű enantiomereket, amelyekben R1 az R2-re vonatkoztatva transz-helyzetben van mind az la, mind az lb általános képletben.
Az I enantiomerelegy rezolválásának előnyös eljárásai :
Az la és lb általános képletű β-laktámok enantiomerkeverékét tartalmazó I elegyet előnyösen sztereoszelektív hidrolízissel, észterezéssel vagy dehalogénezéssel rezolváljuk. Az Ia(l) és Ib(2) általános képletű enantiomereket tartalmazó I elegy rezolválásának egy különösen előnyös módja a Ila(l) és llb(2) általános képletű vegyületeket tartalmazó II keverék képzése, ahol
R2 jelentése heterociklusos vagy cikloalkilcsoport; és R3 jelentése hidrogénatom, R4 csoport, -C(O)-OR4 vagy -C(O)-R4 általános képletű csoport, amelyben
R4 jelentése alkil-, alkenil-, alkinil-, aril-, cikloalkil-, cikloalkenil- vagy heterociklusos csoport;
amely módszer az (i), (ii) vagy (iii) lépések valamelyikéből áll, ahol:
(i) olyan esetben, ha
R1 jelentése -O-C(O)-R4 általános képletű csoport, amelyben
R4 jelentése a fentiekben R4-re megadott csoportok közül egymástól függetlenül választható; és
Rla és Rlb közül az egyiknek a jelentése azonos R1ével, és Rla és R,b közül a másiknak a jelentése hidroxicsoport;
az említett I enantiomerelegyet víz és/vagy valamilyen alkohol jelenlétében egy olyan enzimmel hozzuk érintkezésbe, amely képes az I enantiomerelegynek az említett II elegyhez vezető sztereoszelektív hidrolízisét katalizálni; vagy (ii) olyan esetben, ha
R1 jelentése hidroxicsoport; és
Rla és Rlb közül az egyiknek a jelentése hidroxicsoport, és Rla és Rlb közül a másiknak a jelentése R4-C(O)-O- általános képletű csoport, amelyben R4 jelentése a fentiekben R4-re megadott csoportok közül egymástól függetlenül választható;
az említett I enantiomerelegyet egy III általános képletű vegyület a képletben
R4 jelentése azonos a fentiekben Rla-ra vagy Rlb-re megadottakkal, és
L jelentése kilépőcsoport 2
HU 217 790 Β jelenlétében egy olyan enzimmel hozzuk érintkezésbe, amely képes az I elegynek az említett II elegyhez vezető sztereoszelektív észterezését katalizálni, vagy (iii) olyan esetben, ha
R1 jelentése halogénatom; és ru és Rib közül az egyiknek a jelentése halogénatom, és Rla és Rlb közül a másiknak a jelentése hidroxicsoport;
az említett I enantiomerkeveréket valamilyen hidroxidion-donor jelenlétében egy olyan enzimmel hozzuk érintkezésbe, amely képes az I enantiomerkeveréknek az említett II keverékhez vezető sztereoszelektív dehalogénezését katalizálni.
A fenti eljárásokat alkalmazhatjuk a találmány szerinti más enantiomerelegyek rezolválására is, bár előnyös a fenti Ia( 1) és Ib( 1) általános képletű cisz-enantiomerek rezolválása.
Az így előállított vegyületpárok, mint például a I]a(l) és I]b(l) nem enantiomerek, és ezt követően szétválaszthatok optikailag aktív, előnyösen optikailag tiszta vegyületekké. Előnyös a 99%-nál, különösen a 99,5%-nál nagyobb optikai tisztaság.
A találmány az I elegynek más izomerektől lényegében mentes valamelyik vegyületét is szolgáltatja, amely vegyület a találmány szerinti eljárásokkal előállítható.
A kifejezések meghatározásai:
A „sztereoszelektív konverzió” kifejezés az itt használt értelemben az egyik enantiomemek a másikra vonatkoztatott kedvezményezett reakcióját jelenti, vagyis aszimmetriás, enantioszelektív reakciót. Hasonlóképpen, a „sztereoszelektív hidrolízis”, „sztereoszelektív észterezés”, „sztereoszelektív dehalogénezés” és „sztereoszelektív átészterezés” kifejezések az egyik enantiomemek a másikra vonatkoztatott kedvezményezett hidrolízisét, észterezését, dehalogénezését, illetve átészterezését jelenti.
Az „elegy/keverék” kifejezés, amiként az illető kifejezést enantiomervegyületekkel kapcsolatban itt használjuk, az enantiomerek azonos (racém) vagy nem azonos mennyiségeit tartalmazó elegyeket jelenti.
A „rezolválás” kifejezés az itt használt értelemben részleges, valamint előnyösen teljes rezolválást jelent.
A „nem enantiomer forma” kifejezés az itt használt értelemben egy vegyületnek, az eredetileg az enantiomer vegyületpár egyik tagjának azt a szerkezetét jelenti, amelyben legalább az egyik csoportot úgy módosítottuk, hogy az említett vegyület már nem tükörképe az eredeti enantiomerpár másik vegyületének.
Az „enzimatikus eljárás” vagy „enzimatikus módszer” kifejezések az itt használt értelemben a találmány szerinti olyan eljárást vagy módszert jelentenek, amelyekben valamilyen enzimet alkalmazunk.
Az „alkil” kifejezés önmagában vagy egy másik csoport részeként, az itt használt értelemben mind egyenes, mind elágazó szénláncú, adott esetben szubsztituált, a normál láncban 1-15, előnyösen 1-6 szénatomot tartalmazó szénhidrogéncsoportot jelent, így metil-, etil-, propil-, izopropil-, butil-, terc-butil-, izobutil-, pentil-, hexil-, izohexil-, heptil-, 4,4-dimetil-pentil-, oktil-, 2,2,4-trimetil-pentil-, nonil-, decil-, undecil-, dodecilcsoportot, ezek különböző elágazó láncú izomerjeit és hasonlókat. A szubsztituensek példáiként a következő csoportok közül egy vagy több szolgálhat: halogénatom (különösen klóratom), trihalogénezett metilcsoport, alkoxicsoport (például ahol két alkoxiszubsztituens acetált képez); arilcsoport, így szubsztituálatlan arilcsoport, alkilcsoporttal szubsztituált arilcsoport vagy halogénezett arilcsoport; cikloalkilcsoport, így szubsztituálatlan cikloalkilcsoport vagy alkilcsoporttal szubsztituált cikloalkilcsoport; hidroxicsoport vagy védett hidroxicsoport, karboxicsoport, alkoxi-karbonilcsoport, alkil-amino-, alkil-karbonil-amino-, amino-, aril-karbonil-amino-, nitro-, ciano-, merkapto- vagy alkil-tio-csoport.
Az „alkenil” kifejezés önmagában vagy valamilyen másik csoport részeként, az itt használt értelemben olyan, adott esetben szubsztituált, a fentiekben leírt alkilcsoportot jelent, amely még tartalmaz legalább egy szén-szén kettős kötést is. A példaként szolgáló szubsztituensek közé sorolhatunk egy vagy több, a fentiekben leírt alkilcsoportot és/vagy egy vagy több, a fentiekben az alkilcsoportok szubsztituenseiként leírt csoportot.
Az „alkinil” kifejezés önmagában vagy valamilyen másik csoport részeként, az itt használt értelemben olyan, adott esetben szubsztituált, a fentiekben alkilcsoportként leírt csoportot jelent, amely még tartalmaz legalább egy szén-szén hármas kötést is. A példaként szolgáló szubsztituensek közé sorolhatunk egy vagy több, a fentiekben leírt alkilcsoportot és/vagy az alkilcsoportok szubsztituenseiként a fentiekben leírt egy vagy több csoportot.
A „cikloalkil” kifejezés önmagában vagy valamilyen másik csoport részeként, az itt használt értelemben 1-3 gyűrűt és gyűrűnként 3-12, előnyösen 3-8 szénatomot tartalmazó, adott esetben szubsztituált telített ciklusos szénhidrogéncsoportot jelent, így ciklopropil-, ciklobutil-, ciklopentil-, ciklohexil-, cikloheptil-, ciklooktil-, ciklodecil-, ciklododecil- és adamantilcsoportot. A példaként szolgáló szubsztituensek közé sorolhatunk egy vagy több, a fentiekben leírt alkilcsoportot és/vagy egy vagy több, az alkilcsoportok szubsztituenseiként leírt csoportot.
A „cikloalkenil” kifejezés önmagában vagy valamilyen másik csoport részeként, az itt használt értelemben olyan, adott esetben szubsztituált, a fentiekben cikloalkilként leírt csoportot jelent, amely a gyűrűrendszerben még legalább egy szén-szén kettős kötést is tartalmaz. A példaként megemlíthető szubsztituensek közé tartozik egy vagy több, a fentiekben leírt alkilcsoport és/vagy egy vagy több, az alkilcsoportok szubsztituenseiként a fentiekben leírt csoport.
Az „aril” vagy „ar” kifejezések önmagukban vagy valamilyen másik csoport részeként, az itt használt értelemben a gyűrűben 6-12 szénatomot tartalmazó, előnyösen monociklusos vagy biciklusos, adott esetben szubsztituált, homociklusos aromás csoportokat jelentenek, így fenil-, bifenilil-, naftil-, szubsztituált fenil-, szubsztituált bifenilil- vagy szubsztituált naftilcsoportot. A példaként szolgáló szubsztituensek között szerepel az
HU 217 790 Β alábbiak közül egy vagy több (előnyösen három vagy kevesebb) csoport: alkilcsoport, így szubsztituálatlan alkilcsoport, halogénezett alkilcsoport vagy cikloalkilcsoporttal szubsztituált alkilcsoport; halogénatom; alkoxicsoport, így szubsztituálatlan alkoxicsoport vagy halogénezett alkoxicsoport; hidroxicsoport; aril-oxi-csoport, így fenoxicsoport; R4-karbonil-oxi-csoport, ahol R4 jelentése azonos a fentiekben megadottakkal; allilcsoport, cikloalkil-, alkil-amino-, dialkil-amino-csoport; aminocsoport, így alkil-karbonil-amino-csoport vagy aril-karbonil-amino-csoport; amino-, nitro-, ciano-, alkenil-, merkaptocsoport; R4-karbonilcsoport, ahol R4 jelentése azonos a fentiekben megadottakkal, vagy metilén-dioxicsoport, ahol a metiléncsoport szubsztituálva lehet 1 vagy 2 rövid szénláncú alkilcsoporttal, 1 vagy 2 aralkenilcsoporttal és/vagy 1 vagy 2 alkil-tio-csoporttal. Különösen előnyös arilcsoportok a fenilcsoport és a szubsztituált fenilcsoport, különösen az egy vagy több hidroxicsoporttal, alkilcsoporttal és/vagy alkoxicsoporttal szubsztituált fenilcsoport.
A „halogén” vagy „haló” kifejezések önmagukban vagy valamilyen másik csoport részeként klór-, bróm-, fluor- vagy jódatomot jelentenek.
A „heterociklo” vagy „heterociklusos” kifejezések önmagukban vagy az itt használt értelemben olyan, adott esetben szubsztituált, teljesen telített vagy telítetlen, monociklusos vagy biciklusos, aromás vagy nem aromás szénhidrogéncsoportokat jelentenek, amelyek legalább egy gyűrűhöz kapcsolódva legalább egy halogénatomot és minden egyes gyűrűben előnyösen 5 vagy 6 atomot tartalmaznak. A heterociklusos csoport a gyűrűben előnyösen 1 vagy 2 oxigénatomot, 1 vagy 2 kénatomot és/vagy 1-4 nitrogénatomot tartalmaz, és a molekula többi részéhez egy szénatomon vagy heteroatomon keresztül kapcsolódhat. A példaként szolgáló szubsztituensek az alábbi három csoportok közül egyet vagy többet jelentenek: halogénatom, alkoxi-, hidroxicsoport, arilcsoport, így fenilcsoport vagy halogénezett fenilcsoport; alkanoil-oxi-, arilkarbonil-oxi-csoport, így benzoil-oxi-csoport; alkilcsoport, így aralkilcsoport; alkil-amino-, alkanoilamino-, aril-karbonil-amino-csoport; amino-, nitro-, ciano- és merkaptocsoport. A példaként szolgáló heterociklusos csoportok között szerepel a tienil-, furil-, pirrolil-, piridil-, imidazolil-, pirrolidinil-, piperidil-, azepinil-, indolil-, izoindolil-, kinolil-, izokinolil-, benztiazolil-, benzoxazolil-, benzimidazolil-, benzoxadiazolil- és benzo-fürazanil-csoport.
A „hidroxi-védőcsoport” kifejezés az itt használt értelemben olyan csoportot jelent, amely képes a szabad hidroxicsoportot megvédeni („védett hidroxicsoport”), és amely a reakció után, amely miatt a védelmet alkalmaztuk, eltávolítható a molekula többi részének megkárosítása nélkül. Többféle hidroxi-védőcsoportot (szintézissel együtt) találunk T. W. Greene „Protective Groups in Organic Synthesis” című könyvében (John Wiley and Sons, 1981) vagy L. F. Fieser and Mary Fieser „Organic Chemistry” című könyvében. A hidroxi-védőcsoportok példáiként megemlítjük a metoximetil-, 1-etoxi-etil-, benzil-oxi-metil-, (β-trimetilszilil-etoxi)-metil-, tetrahidropiranil-, 2,2,2-triklóretoxi-karbonil-, terc-butil-(difenil)-szilil-, trialkilszilil-, triklór-metoxi-karbonil- és 2,2,2-triklór-etoximetil-csoportot.
Kiindulási anyagok:
A találmány szerinti rezolválási eljárások kiindulási anyagait az itteni példákban leírtak szerint nyerhetjük, vagy az 1992. január 15-én benyújtott 07/822,015 sorozatszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés megosztásával kapott 5,567,614 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban hivatkozott 400,971 számú európai szabadalmi bejelentésben leírtakhoz hasonló eljárásokkal.
Az I kiindulási elegyek tartalmazhatják például az la és lb általános képletű vegyületek diasztereomeijeit, bár előnyös a találmány szerinti enzimes rezolválási eljárások elvégzése előtt ezeket a vegyületeket elválasztani egymástól.
Előnyös vegyületek:
Az I enantiomerkeverék cisz-vegyületeinek olyan, a sztereoizomer konfigurációja, amely előnyös a C-13 helyzetben oldalláncot tartalmazó taxánok előállításánál intermedierként való felhasználásra. Különösen előnyösek az olyan la általános képletű vegyületnek megfelelő, azonos abszolút sztereokonfigurációjú I és II elegyek 3R,4S konfigurációjú vegyületei, ahol R1 jelentése acetoxicsoport;
R2 jelentése fűrilcsoport;
R3 jelentése hidrogénatom.
Előnyös az I elegy β-laktámszármazékainak rezolválása.
A találmány szerinti vegyületekben R1 jelentése előnyösen alkanoil-oxi-csoport, így szubsztituálatlan alkanoil-oxi-csoport (például acetoxicsoport) vagy hidroxicsoport;
R2 jelentése előnyösen furil- vagy tienilcsoport;
R3 jelentése előnyösen hidrogénatom, fenilcsoport, szubsztituált fenilcsoport, benzoilcsoport, szubsztituált benzoilcsoport, alkil-karbonil-, alkenil-karbonil- vagy alkoxi-karbonil-csoport, így terc-butoxikarbonil-csoport;
R6 jelentése előnyösen hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport, így metilcsoport.
Enzimek és mikroorganizmusok:
A találmány szerinti eljárásnál alkalmazott enzim vagy mikroorganizmus lehet bármely olyan enzim vagy mikroorganizmus, amely képes katalizálni az itt leírt sztereoszelektív konverziókat. A találmány szerinti felhasználásra, eredetüktől vagy tisztaságuktól függetlenül, különböző enzimek, így észterázok, lipázok és proteázok alkalmasak. Az enzim lehet például állati vagy növényi eredetű enzim vagy ezek keveréke, mikroorganizmussejtek, összezúzott sejtek, sejtextraktumok vagy szintetikus eredetű enzim formájában.
Ami a mikroorganizmusok használatát illeti, a találmány szerinti eljárások végrehajthatók bármely olyan mikrobiális sejtanyag használatával, amely képes az itt leírt sztereoszelektív átalakításokat katalizálni. A sejteket felhasználhatjuk ép nedves sejtek vagy szárított sejtek formájában, így liofilizált, porlasztva szárított vagy
HU 217 790 Β hővel szárított sejtek formájában. A sejteket alkalmazhatjuk valamilyen módon kezelt sejtek, így szétrepesztett sejtek vagy sejtextraktumok formájában is.
Az enzimek vagy mikrobiális anyagok alkalmazhatók szabad állapotban vagy valamilyen hordozón (így valamilyen polimer gyantán), például fizikai adszorpcióval vagy zárványképzéssel immobilizált állapotban is.
A katalizáló enzimek forrásaiként alkalmas mikroorganizmusnemzetségek példáiként megemlíthetjük a következőket : Mucor, Escherichia, Staphylococcus, Agrobacterium, Acinetobacter, Rhizopus, Aspergillus, Nocardia, Streptomyces, Trichoderma, Candida, Rhodotorula, Torulopsis, Proteus, Bacillus, Alcaligenes, Pseudomonas, Rhodococcus, Brevibacterium, Geotrichum, Enterobacter, Chromobacterium, Arthrobacter, Microbacterium, Mycobacterium, Saccharamyces, Penicillium, Methanobacterium, Botrytis, Chaetomium, Ophiobolus, Cladosporium és hasonlók. A génsebészeti módszerekkel kezelt gazdasejtek használatát is számításba vehetjük.
A találmány szerinti eljárásoknál felhasználásra alkalmas speciális mikroorganizmusok közé tartoznak a következők: Chromobacterium viscosum, Pseudomonas aeruginosa, így az ATCC 25619 letéti számú törzs, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas putida, így az ATCC 31303 letéti számú törzs, Pseudomonas ovális, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Alcaligenes faecalis, Streptomyces griseus, Pseudomonas cepacia, Candida rugósa, így az ATCC 14830 letéti számú törzs, Geotrichum candidum, így az ATCC 32345 letéti számú törzs, Streptomyces clavuligerus, Nocardia erthropolis, Nocardia steraides, Mycobacterium pheli, Agrobacterium radiobacter, Aspergillus niger, Rhizopus oryzae és hasonlók. A találmány szerinti eljárások kivitelezésénél két vagy több, de akár egyetlen mikroorganizmusfaj is felhasználható.
Az „ATCC” megjelölés az itt használt értelemben az American Type Culture Collection (12 301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20 852), az illető mikroorganizmus letétbe helyezési intézményének bejegyzési számát jelenti.
A találmány szerinti rezolválási eljárások elvégezhetők a felhasznált mikroorganizmus(ok) tenyésztése után vagy azzal egyidejűleg, vagyis az utóbbi esetben in situ fermentációval és rezolválással. A mikroorganizmusok tenyésztését végrehajthatja a szakterületen átlagos jártassággal bíró személy, például tápanyagokat, így szén- és nitrogénforrásokat, valamint nyomelemeket tartalmazó megfelelő táptalaj felhasználásával.
A találmány szerinti felhasználásra alkalmas, a kereskedelemben kapható enzimek példái közé tartoznak a következők: lipázok, így Amano PS-30 (Pseudomonas cepaciából), Amano GC-20 (Geotrichum candidumból), Amano APF (Aspergillus nigerből), Amano AK (Pseudomonas speciesből), Pseudomonas fluorescens lipáz (Biocatalyst Ltd.), Amano Lipase P-30 (Pseudomonas sp.-ből), Amano P (Pseudomonas fluorescensből), Amano AY-30 (Candida clyndraceából), Amano N (Rhizopus niveusból), Amano R (Penicillium sp.-ből), Amano FAP (Rhizopus oryzae-ből), Amano
AP-12 (Aspergillus nigerből), Amano MAP (Mucer meiheiből), Amano GC-4 (Geotrichum candidumból), Sigma L-0382 és L-3126 (sertéspankreászból), Lipase OF (a Seprecortól), Esterase 30,000 (a Gist-Brocarde cégtől), KID Lipase (a Gist-Brocardes cégtől), Lipasse R (Rhizopus sp.-ből, az Amano cégtől), Sigma L-3001 (búzacsírából), Sigma L-1754 (Candida cylindraceából), Sigma L-0763 (Chromobacterium viscosumból) és Amano K-30 (Aspergillus nigerből). Példaként szolgáló, állati szövetekből származó enzimek közé tartoznak továbbá a sertésmájból nyert észteráz, akimotripszin és a pankreászból nyert pankreatin, így a sertéspankreász lipáza (Porcine Pancreatic Lipase, Sigma). A találmány szerinti eljárások végrehajtásánál alkalmazhatunk két vagy több vagy akár egyetlen enzimet is.
A találmány szerinti előnyös megvalósítások további leírását az [A]-[B] reakcióvázlatok adják. Bár ezek a reakcióvázlatok az érthetőség kedvéért egyes ciszenantiomer-elegyek rezolválását szemléltetik, meg kell jegyeznünk, hogy a megvalósítások a leírtak szerint vonatkoznak más enantiomerelegyek rezol válására is.
Az I enantiomerelegyek sztereoszelektív módon észterezhetők, miként azt az [A] reakcióvázlat szemlélteti.
(A) Acilezés:
Az I enantiomerelegyet a II elegy - ahol Ria és Rlb közül az egyiknek a jelentése hidroxicsoport, a másiknak a jelentése R4 -C(O)-O- általános képletű csoport képzése közben szelektív módon észterezhetjük valamilyen III általános képletű acilezőszer felhasználásával.
A III általános képletben R4 jelentése alkil-, alkenil-, alkinil-, aril-, cikloalkil-, cikloalkenil- vagy heterociklusos csoport. A III általános képletben előnyös R4 csoportok az alkilcsoportok, így az 1-6 szénatomos alkilcsoportok, különösen a metilcsoport. L valamilyen kilépőcsoportot jelent, amelyet észtercsoport képzése közben kiszoríthatunk. A példaként szolgáló L csoportok közé tartoznak a halogénatomok, hidroxicsoport, alkoxi- vagy alkenil-oxi-csoportok. Előnyös L csoportok az alkenil-oxi-csoportok, a legelőnyösebbek az 1-6 szénatomos alkenil-oxi-csoportok, így a vinil-oxiés izopropenil-oxi-csoport. Felhasználható bármely olyan III általános képletű acilezőszer, amely észterezést eredményez, különösen előnyös az izopropenil-acetát és a vinil-acetát.
Az (A) észterezési (acilezési) eljárást és (C) észterezési és átészterezési eljárásokat előnyösen valamilyen szerves oldószerben hajtjuk végre. Az ezeknél az eljárásoknál felhasználható oldószerek példáiként megemlítjük az 1,2,2-trifluor-1,1,2-triklór-etánt, a toluolt, a ciklohexánt, benzolt, hexánt, heptánt, izooktánt, oktánt, etilmetil-ketont, izobutil-metil-ketont és hasonlókat. A reakcióelegyhez előnyösen kis mennyiségben vizet is adunk. Ha a víz jelen van, koncentrációja a reakcióelegyben előnyösen az oldószer tömegére vonatkoztatott körülbelül 0,01% és körülbelül 1% között van, vagy a szerves oldószer telítéséhez szükséges mennyiségnél kisebb vagy azzal azonos koncentrációban. Legelőnyösebb, ha a víz az oldószer tömegére vonatkoztatott kö5
HU 217 790 Β rülbelül 0,05% és körülbelül 0,5% közötti mennyiségben van jelen. A reakcióoldat az oldószer egy ml-ében a kiindulási enantiomervegyületekből előnyösen körülbelül 5 mg és körülbelül 250 mg közötti mennyiséget tartalmaz.
Ezeknek az eljárásoknak a végrehajtásánál a III általános képletű vegyületet adagoljuk a reakcióközeghez. Előnyös mólarányok, ha a III általános képletű vegyület :I enantiomerelegy vegyületei körülbelül 1:1 és körülbelül 4:1 között vannak.
Az ezekben az eljárásokban alkalmazott enzimek előnyösen lipázok vagy észterázok. Az ezekben az eljárásokban különösen előnyösen alkalmazott enzimek a következők: Lipase PS-30 a Pseudomonas speciesből, Lipase P-30 a Pseudomonas speciesből, Lipase R a Penicillium speciesből, Lipase OF, Lipase N a Rhizopus niveusból, Lipase APF az Aspergillus nigerből, Lipase GC-20 a Geotrichum candidumból, Lipase AK a Pseudomons speciesből, Lipase AY-30 a Candida speciesből és a Pseudomonas fluorescens Lipase.
Egy enzimet alkalmazhatunk például szabad állapotban vagy immobilizált alakban. A találmány egy előnyös megvalósításánál az enzimet valamilyen megfelelő hordozón, például diatómaföldön (porózus Celite Hyfle Supercel), mikroporózus polipropilén (Enka Accurel® polipropilénpor), vagy valamilyen nemionos polimer abszorbensen, így a Rohm and Haas Co. által gyártott Amberlite® XAD-2-η (polisztirol) vagy XAD-7-en (poliakrilát) adszorbeáltatjuk. Ha a hordozót valamilyen enzim immobilizálására használjuk, akkor a hordozó szabályozhatja az enzim részecskeméretét, és megakadályozhatja az enzimrészecskék aggregálódását oldószer használata esetén. Az immobilizációt végrehajthatjuk például úgy, hogy az enzim vizes oldatát Celite Hyflo Supercel jelenlétében hideg acetonnal kicsapjuk, majd vákuumban beszárítjuk, vagy nemionos polimer adszorbens esetében az enzimoldatot az adszorbenssel rázógépen inkubáljuk, az oldószer feleslegét eltávolítjuk, és az enzimadszorbens gyantaelegyet vákuumban beszárítjuk. Az enzimet a reakcióoldathoz körülbelül 5 és körülbelül 200 mg enzim/ml oldószer-koncentrációban adjuk. Bár kívánatos a lehető legkisebb enzimmennyiséget alkalmazni, az enzim szükséges mennyisége függ az alkalmazott enzim fajlagos aktivitásától.
Ezeket az eljárásokat úgy is végrehajthatjuk, hogy sztereoszelektív konverziókat katalizáló képességgel rendelkező enzimet tartalmazó mikrobasejteket alkalmazunk. Ha a rezolválás elvégzése céljából valamilyen mikroorganizmust használunk, úgy ezeket az eljárásokat alkalmas módon elvégezhetjük úgy, hogy a sejteket és a kiindulási anyagokat tartalmazó enantiomerelegyet a kívánt reakcióközeghez adjuk. A sejteket alkalmazhatjuk ép sejtek, beszárított, így liofilizált, porlasztva szárított vagy hőközléssel beszárított sejtek, immobilizált sejtek vagy szerves oldószerekkel, így acetonnal vagy toluollal kezelt sejtek alakjában. Használhatjuk a sejteket kezelt sejtanyag, így megrepesztett sejtek vagy sejtextraktumok alakjában is. Úgyszintén alkalmazhatunk Celite®-en vagy Accurel® polipropilénen az előzőekben leírt módon immobilizált sejtextraktumokat is.
A reakcióközeg inkubálását előnyösen körülbelül 4 °C és körülbelül 60 C° közötti, a legelőnyösebben körülbelül 30 °C és körülbelül 50 °C közötti hőmérsékleten végezzük. A reakcióidő az alkalmazott enzimmenynyiség és annak fajlagos aktivitása szerint megfelelően változhat. A reakcióidőket csökkenthetjük a reakcióhőmérséklet emelésével és/vagy a reakcióoldathoz adott enzim mennyiségének növelésével.
Amint a [C] reakcióvázlatból látható, az I kiindulási enantiomerelegyek - ahol
Rla és Rlb közül az egyiknek a jelentése R4-C(O)-Oáltalános képletű csoport, a másiknak a jelentése hidroxicsoport képzése közben sztereoszelektív módon hidrolizálhatók víz és/vagy valamilyen alkohol felhasználásával.
Alkoholként a IX általános képletű vegyületet alkalmazhatjuk, ahol
R6 jelentése alkil-, alkenil-, alkinil-, aril-, cikloalkil-, cikloalkenil- vagy heterociklusos csoport, előnyösen alkilcsoport, így metilcsoport.
A IX általános képletű alkohol alkalmazása az R4-C(O)-OR8 általános képletű észter melléktermék képződését eredményezheti. Hidrolizálószerként vizet használva az R4-C(O)-OH általános képletű mellékterméket kaphatjuk. Hogy e savas melléktermékek képződése közben is állandó pH-értéket tarthassunk fenn, valamilyen bázist, így valamilyen alkálifém-hidroxidot adhatunk a reakcióelegyhez. Ha valamilyen IX általános képletű alkoholt alkalmazunk, akkor azt előnyösen olyan mennyiségben adagoljuk, hogy a IX általános képletű vegyület :I enantiomerelegyek vegyületei mólaránya körülbelül 1:1 és körülbelül 4:1 között legyen.
Ezeknél az eljárásoknál olyan vízoldékony enzimeket alkalmazunk, amelyek képesek a sztereoszelektív hidrolízist katalizálni. Különösen alkalmasak ezeknél az eljárásoknál való felhasználásra a lipázok és észterázok, valamint a pankreatin és az α-kimotripszin. Ezeknek az enzimeknek akár nyers, akár a tisztított formáit alkalmazhatjuk szabad vagy valamilyen hordozón (például valamilyen gyantán, így XAD-7, XAD-2 vagy Accurel® gyantán) immobilizált formában. Különösen előnyös enzimek ezeknél az eljárásoknál a következők: Lipase PS-30 Pseudomonas fajokból (Pseudomonas cepacia, Amane Int.’l), Lipase P-30 Pseudomonas fajokból (Amano), Lipase GC-20 Geotrichum candidumból (Amano Int.’l), Lipase APF Aspergillus nigerből (Amano Int.’), Lipase AY-30 Candida fajokból (Amano), Lipase AK Pseudomonas fajokból (Amano Int.’l), Pseudomonas fluorescens Lipase (Biocatalyst Ltd.), Esterase 3000 (Gist-Brocarde), Lipase OF (Sepracor), KID Lipase (Gist-Brocarde), Lipase R (Rhizopus speciesekből, Amano Int.) és sertéspankreász lipáz (Percine Pancreatic Lipase, Sigma Chem.).
A fenti hidrolíziseket előnyösen vizes, így pufferolt (például foszfátpufferrel pufferolt) vizes közegben, vagy vízzel elegyedő vagy nem elegyedő szerves oldószert tartalmazó vizes közegben hajtjuk végre. A reakciót vezethetjük például valamilyen vízzel nem elegyedő szerves fázist és vizes fázist tartalmazó kétfázisú ol6
HU 217 790 Β dószerrendszerben. Kétfázisú oldószerrendszer alkalmazása növelheti az olyan eljárások hatásosságát, ahol a szubsztrátumanyag nem oldódik vízben.
A kétfázisú oldószerrendszer szerves fázisaként szolgáló oldószer lehet bármely vízzel nem elegyedő szerves oldószer, így toluol, ciklohexán, xilol, trifluortriklór-etán és hasonlók. A vizes fázis célszerűen víz, előnyösen ionmentesített víz vagy valamilyen alkalmas vizes pufferoldat, különösen foszfát-pufferoldat. A kétfázisú oldószerrendszer előnyösen körülbelül 10 és 90 térfogat% közötti mennyiségű szerves fázist és körülbelül 90 és 10 térfogat% közötti mennyiségű vizes fázist tartalmaz.
Előnyös a kiindulási enantiomerelegynek a körülbelül 0,1 és körülbelül 100 mg/ml reakcióoldat közötti mennyisége és egy vagy több enzimnek a körülbelül 0,1 és körülbelül 100 mg/mg hidrolizálandó kiindulási anyag közötti mennyisége.
A reakcióelegy pH-ját előnyösen beállítjuk és tartjuk körülbelül 7,0 értéken, előnyösen valamilyen vizes alkálifém-hidroxid, -karbonát vagy -hidrogén-karbonát-oldattal.
A reakcióidőt az enzimre, hőmérsékletre és az enzimkoncentrációra alapozva választjuk meg. Előnyösen körülbelül 4 °C és körülbelül 60 °C közötti hőmérsékleteket alkalmazunk.
Miként a [D] reakcióvázlatból látható, az I enantiomerelegyek - ahol X jelentése halogénatom szelektív módon dehalogénezhetők a II termékelegyek - ahol
Rla és Rlb közül az egyiknek a jelentése X csoport, a másiknak a jelentése hidroxicsoport képzése közben.
Bármely olyan vegyület, amellyel lehetséges ezeknek a reakcióknak a végrehajtása, alkalmazható hidroxidion-donorként. Példaként szolgáló ilyen vegyületek lehetnek a következők: víz, alkálifém- vagy alkáliföldfém-hidroxidok, így nátrium- és kálium-hidroxid, és ammónium-hidroxidok, így kvatemer ammóniumhidroxidok, például az (R9)4NOH általános képletűek, ahol R9 jelentése hidrogénatom vagy alkilcsoport, különösen a kálium-hidroxid és víz. Az adagolt hidroxidion-donor mennyiségei előnyösen olyanok, hogy a hidroxidion-donor: I kiindulási enantiomerelegy mólaránya körülbelül 1:1 és körülbelül 4:1 között legyen.
Előnyösen vizet és valamilyen szerves oldószert, így toluolt vagy hexánt tartalmazó reakcióköteget alkalmazunk. Az enantiomer kiindulási anyagokat előnyösen körülbelül 1 mg és körülbelül 100 mg/ml oldószer közötti mennyiségben alkalmazzuk.
A dehalogénezési reakcióban alkalmazott enzimek előnyösen a következő nemzetségekből származók: Pseudomonas, Trichoderma, Acinetobacter, Alcaligenes, Nocardia, Mycobacterium, Rhodococcus, Methanobacterium, Proteus vagy az ezekből származó enzimek, és előnyösen körülbelül 0,1 mg és körülbelül 10 mg/mg dehalogénezendő kiindulási anyag közötti enzimmennyiséget használunk.
Előnyösen körülbelül 4 °C és körülbelül 50 °C közötti hőmérsékleteket alkalmazunk.
Elválasztás:
A sztereoszelektív konverziók termékeit izolálhatjuk és tisztíthatjuk olyan módszerekkel, mint az extrakció, desztilláció, kristályosítás, oszlopkromatográfia és hasonlók.
A találmány szerinti eljárásokkal képezett termékelegyek elválasztásának egy előnyös módja a folyadékfolyadék extrakció.
A termékek felhasználhatósága:
A taxánok az A taxánvázt (lásd képletrajzok) tartalmazó diterpénvegyületek, amely váz a gyűrűrendszerében tartalmazhat viniléntelítettséget. Különösen fontosak az olyan taxánok, amelyek a fenti szénvázat úgy tartalmazzák, hogy a 11- és 12-helyzetet viniléncsoport köti össze, és a 13-helyzetben oldalláncot tartalmaznak. A gyógyászatilag hatásos taxánokat, így a taxol analógjait daganatellenes szerként használhatjuk rákban, így petefészekrákban, melanomában, mell-, vastagbélvagy tüdőrákban és leukémiában szenvedő betegek kezelésére.
A találmány szerinti eljárásokkal kapott rezolvált vegyületek különösen alkalmasak a taxánvázon a fent említett C-13-helyzetű oldallánc kialakításánál intermedierek céljára. Egy ilyen oldalláncnak a molekulához való hozzákapcsolása önmagában megnövelt vagy kívánatosabb gyógyászati hatékonyságot kölcsönözhet a taxánterméknek, vagy olyan taxánterméket képezhet, amely könnyebben átalakítható olyan taxánná, amely a kiindulási anyaghoz képest megnövelt vagy kívánatosabb gyógyászati hatékonysággal rendelkezik.
A találmány szerinti eljárásokkal rezolvált vegyületeket az oldalláncképzésben való felhasználás előtt módosíthatjuk. Például a W csoportként N3 azidocsoportot tartalmazó rezolvált vegyületeket kezelhetjük valamilyen redukálószerrel, így aminocsoportot kialakítva, amelyet azután szubsztituálhatunk.
A példaként szolgáló oldalláncképző eljárások és az ilyen eljárások alkalmazásával előállítható taxántermékek közé tartoznak azok, amelyeket az 534,708 számú nyilvánosságra hozott európai szabadalmi bejelentésben, továbbá a 08/080,704, 08/029,819, 07/996,455, 08/062,687, 07/981,151 és 07/995,443 sorozatszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi iratokban írnak le, amely fent említett valamennyi iratot itt referenciaként kezelünk.
A reaktánsok vagy termékek sóit vagy szolvátjait is alkalmazhatjuk vagy előállíthatjuk, miként az a találmány szerinti eljárásokban alkalmas vagy kívánatos.
A találmány szerinti eljárások részletesebb leírását az alábbi példákban adjuk meg. Ezek a példák pusztán a szemléltetés céljait szolgálják, és semmiképpen sem tekinthetők a szabadalmi igénypontok oltalmi köre korlátozásának.
1. példa
Szubsztrátum szintézise a rezolváláshoz (± )-cisz-3-Acetoxi-4-(2-furil)-azetidin-2-on (1 Bii képletű vegyület) szintézise
HU 217 790 Β (A) Az 1A képletű N,N’-furfurilidén-(2-furil)-metilén-diamin előállítása
Hőmérővel és mechanikus keverővei ellátott 3 literes, kétnyakú gömblombikba 311 ml (3,75 mól) furfurolt (az Aldrich cégtől) és 0,75 liter reagens tisztaságú (reagens grade) izopropil-alkoholt (IPA) mérünk be. Keverés közben egy részletben 1,5 liter (22,2 mól) koncentrált vizes ammónium-hidroxidoldatot (körülbelül 30%-os) adunk hozzá. Az első két órában körülbelül 35 °C-ra emelkedik a hőmérséklet. A keletkező nyersgyapjú színű port Whatman No. 1 szűrőpapíron végzett szűréssel izoláljuk, majd 1,5 liter vízzel mossuk és egy éjszakán keresztül 30 °C-on, vákuumban megszárítjuk. így nyersgyapjú színű por alakjában 255,3 g cím szerinti hidrofuramidot kapunk.
Kitermelés: 76,1%.
Olvadáspont: 116-117°C.
A cím szerinti hidrofuramid Rrértéke etil-acetát: hexán (1:1) rendszerben 0,5 (láthatóvá tétel UV-fénnyel).
(B) (±)-cisz-3-Acetoxi-4-(2-furil)-azetidin-2-on (IBii) előállítása (i) Staudinger-reakció:
Az IBi általános képletű 3-acetoxi-4-(2-furil)-l-{(2íuril)-[(2-furil)-metilén-amino]-metil} -azetidin-2-on előállítása [Ac acetilcsoportot jelent; a (±) jel az azetidingyűrű 3- és 4-helyzetű szubsztituensei szempontjából a ciszenantiomerek racemátját jelzi.]
Hőmérővel, nyomáskiegyenlítős csepegtetőtölcsérrel és mechanikus keverővei felszerelt 2 literes, háromnyakú gömblombikba 80,48 g-ot (0,300 mól) mérünk a fenti (A) lépés szerinti termékből (1A), és hozzáadunk 1,0 liter reagens tisztaságú (reagens grade) etilacetátot. Ezt az elegyet argonatmoszférában lehűtjük 4 °C-ra, egy részletben hozzáadunk 50,2 ml (0,360 mól; Aldrich) trietil-amint. Ezután a csepegtetőtölcsérbe 37,0 ml (0,341 mól; Aldrich) acetoxi-acetilkloridot és 0,50 liter reagens tisztaságú etil-acetátot töltünk, és ezt az oldatot 1 óra alatt, keverés közben a reakcióelegyhez csepegtetjük. További 2 óra elteltével a keverést megszakítjuk, és a reakcióedényt Parafilm „M”®-mel lezárjuk, és további 15 órára hideg szobába (4 °C) helyezzük. Ezután a heterogén reakcióelegyet keverés közben körülbelül 1 óra alatt hagyjuk 22 °C-ra melegedni, majd átöntjük egy 4,0 literes választótölcsérbe, és mossuk 500 ml telített vizes ammóniumklorid-oldattal. Mindkét réteget átszűrjük Whatman mikroüvegrostos szűrőpapíron, hogy így eltávolítsuk a finom fekete szuszpenziót képező részecskéket, amelyeknek eltávolítása elősegíti a fázisok elválását. A szűrőlepényt átöblítjük 50 ml etil-acetáttal, és a szűrletet visszavisszük a választótölcsérbe, majd a vizes réteget (pH=6,3) eltávolítjuk. A szerves fázist ezután újból mossuk 250 ml telített vizes ammónium-klorid-oldattal (pH=5,9), 400 ml telített vizes nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal (pH=8,6) és 400 ml telített vizes nátrium-klorid-oldattal (pH=7,0). A szerves fázist átszűrjük Whatman mikroüvegrost szűrőpapíron, és két egyenlő, egyenként 750 ml-es részletre osztjuk. Ezeket az oldatokat közvetlenül felhasználjuk a következő lépésben.
(ii) A védőcsoport eltávolítása:
Egyenként 6,00-6,00 g aktív szénre lecsapott, 10% palládiumot (Aldrich) tartalmazó két 2,0 literes Parrlombikba argonáramban átvisszük a fenti (B) (i) lépés egy-egy 750 ml-es szervesréteg-termékét. Ezeket az elegyeket szobahőmérsékleten 4 χ 101,325 Pa (4 atm) nyomású hidrogéngázzal 1 napig hidrogénezzük. Ezután a katalizátort Celite®-rétegen át végzett szűréssel eltávolítjuk, és a szűrőpogácsát átmossuk 100 ml etil-acetáttal. A szűrletet átvisszük egy 4,0 literes választótölcsérbe, és mossuk 500 ml, majd 250 ml 1 M sósavoldattal (pH=0,76). A mosóvizeket egyesítjük, extraháljuk 500 ml etil-acetáttal, és az egyesített szerves fázisokat mossuk 400 ml telített vizes nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal (pH=8,34) és 400 ml telített vizes nátrium-klorid-oldattal (pH=7,5). A szerves fázist ezután körülbelül 100 g magnézium-szulfáton szárítjuk és 30 g aktivált színtelenítő csontszénnel (a BDH-tól) kezeljük. 15 perc elteltével az elegyet Celite®-rétegen át szűrjük, vákuumban 160 ml-re betöményítjük, egy éjszakán át 4 °C-on tartjuk, és az ekkor kivált anyagot Whatman No.l. szűrőpapíron végzett szűréssel izoláljuk. A szűrőlepényt átöblítjük 100 ml dietil-éterrel és 100 ml hexánnal. így vákuumban végzett szárítás után fehér tűk alakjában 35,98 g cím szerinti, (IBii) képletű (±)-cisz-3-acetoxi-4-(2-furil)-azetidin-2-on-t kapunk.
Kitermelés: 61,4%.
Olvadáspont: 118-119 °C.
A nagynyomású folyadékkromatográfiával (HPLC) végzett kvantitatív analízis az anyalúgban 8,10 g cím szerinti termék jelenlétét mutatja ki. A fenti hidroíuramidból ezért az összaktivitás kitermelése 75,3%.
2. példa (±)-cisz-3-Acetoxi-4-(2-furil)-azetidin-2-on (IBii) sztereoszelektív hidrolízise
Az ebben a példában felhasznált szubsztrátum az 1. példa során előállított 2 képletű cím szerinti termék. A jelen példában alkalmazott sztereoszelektív hidrolízis termékei a 2A képletű (±)-cisz-3-acetoxi-4-(2furil)-azetidin-2-on (3R) királis acetát és a 2B képletű (-)-cisz-3-hidroxi-4-(2-furil)-azetidin-2-on (3S) királis alkohol.
A sztereoszelektív hidrolízist az alábbiak szerint haj tűk végre:
liter 7,0 pH-jú 25 mM kálium-foszfát-pufferoldatban 10 g szubsztrátumot és Pseudomonas fajból származó 100 g Lipase PS-30-at (Amano International Co.) tartalmazó reakcióelegyet készítünk. A reakciót 30 °C hőmérsékleten, 150 fordulat/perc (RPM) keverés mellett végezzük. A reakció folyamán a reakcióelegy pH-ját 7,0 értéken tartjuk pH-sztat segítségével adagolt 5 M nátrium-hidroxid-oldattal. A hidrolizáló reakció lefolyását nagynyomású folyadékkromatográfiás (HPLC) vizsgálattal követjük úgy, hogy időnként 1 ml térfogatú mintákat veszünk a reakcióelegyből, és azokat 10 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos réteget elválasztjuk, szárazra pároljuk és
HU 217 790 Β a továbbiakban leírtak szerint HPLC-vel vizsgáljuk a szubsztrátum és a termék koncentrációjára és a termék optikai tisztaságára. Az eredményeket az 1. táblázat mutatja.
1. táblázat
Reakcióidő (órák) Konverzió % 2A termék Kitermelés % 2B termék A 2B termék optikai tisztasága %
4 18 82 -
8 34 66 -
12 46 54 -
16 51 49 99,4
Művelet közben végzett királis HPLC-vizsgálat:
A fent leírtak szerint a reakció folyamán időközönként 1 ml-es mintákat veszünk, és 50 ml-es csavarmenetes kupakú kémcsőben lévő 10 ml etil-acetáttal extra- 20 háljuk. Az etil-acetátos réteget elválasztjuk, és belőle 5 ml-t enyhe nitrogéngázban bepárolunk. A kapott maradékot oldjuk 2 ml mozgó fázisban [hexán: vízmentes etanol (95:5) elegy]. Ezt a mozgó fázisos oldatot átszűrjük egy 0,2 pm lyukméretű Lydex-szűrőn, és a szűrlet- 25 bői körülbelül 1 ml-t átviszünk egy ampullába HPLCanalízis céljára.
A HPLC-vizsgálat körülményei:
Hewlett-Packard 1090 kromatográf
Oszlop: Chiralcal AD 30
Mozgó fázis: hexán: vízmentes etanol (95:5) elegy
Oszlophőmérséklet: szobahőmérséklet
Áramlási sebesség: 1 ml/perc
Detektálás: 210 ml-nél
A racém acetát két enantiomerjének retenciós ide- 35 je 23,2 perc, illetve 28,9 perc. A racém alkohol két enantiomerjének retenciós ideje 63,9 perc, illetve 74,8 perc.
3. példa (±)-cisz-3-Acetoxi-4-(2-furil)-azetidin-2-on sztereo- 40 szelektív hidrolízise immobilizált Lipase PS-30 enzim alkalmazásával
Az alkalmazott szubsztrátum és a kapott termékek azonosak a fenti 2. példában leírtakkal.
Az enzim immobilizálása:
Három különböző hordozót - az XAD-7-et [Amberlite XAD-7 nemionos polimer adszorbens; 0,9 mm és 0,25 mm (20 és 60 mesh) közötti részecskeméretű poliakrilátgyanta], XAD-2-t [Amberlite XAD nemionos polimer adszorbens; 0,9 mm és 0,25 mm (20 és 60 mesh) közötti részecskeméretű polisztirolgyanta] és Accurel PP-t (200 pm és 400 pm közötti részecskeméretű polipropiléngyanta) használunk az immobilizációs eljáráshoz.
g nyers Amane PS-30 lipázt oldunk 25 ml desztillált vízben és 10 000 percenkénti fordulattal (RPM) 10 percig centrifugáljuk, hogy így éles felülúszót (szupematánst) kapjunk. Egy 25 ml-es üvegcsében 1,3 g hordozót ötször mosunk metanollal, majd egy lombikban lévő enzimoldathoz adjuk, és forgó rázógépen, szobahőmérsékleten enyhén keveijük. Az enzimnek a hordozón lévő adszorpcióját szubsztrátumként Sigma gyártmányú olívaolaj-emulziót használva, lipázra vizsgálva és a szűrletben maradt protein mérésével időnként ellenőrizzük. XAD-7, XAD-2 és Accurel gyanta használatával körülbelül 68%, 71%, illetve 98% adszorpciós hatékonyságot találunk. Teljes immobilizálás után (20-24 óra) a hordozóenzim-szuszpenziót Millipore szűrőn át szűrjük és körülbelül 300 ml desztillált vízzel mossuk. Ezután az immobilizált lipázt tartalmazó hordozót szobahőmérsékleten, vákuumszárítóban megszárítjuk.
Az immobilizált enzim alkalmazása:
A 2. példában leírt enzimatikus hidrolizáló reakcióhoz itt immobilizált enzimet használunk, A 2. példában leírtak szerint 30 ml 7,0 pH-jú 25 mM káliumfoszfát-pufferoldatban 300 mg szubsztrátumot tartalmazó reakcióoldatokhoz 300 mg fentiek szerint készült immobilizált Lipase PS-30-at adunk. A reakciót a 2. példában leírtak szerint hajtjuk végre. A kapott eredményeket a 2. táblázat mutatja.
2. táblázat
Immobilizált hordozó Reakcióidő (órák) Konverzió % 2A termék Kitermelés % 2B termék A 2B termék %-os optikai tisztasága
XAD-2 3 53 47 99,0
XAD-7 3 54 46 99,3
Accurel PP 3 51 49 99,5
4. példa (±)-cisz-3-Acetoxi-4-(2-furil)-azetidin-2-on szte- 55 reoszelektív hidrolízise
Az ebben a példában alkalmazott szubsztrátum és a kapott termékek azonosak a fenti 2. példában leírtakkal.
E példában számos reakciót futtatunk, amelyekben különböző forrásokból származó lipázokat alkalmazunk, θθ
Minden egyes ilyen reakcióban a reakcióelegy 20 ml 7,0 pH-jú 25 mM foszfát-pufferoldatban 1 g nyers lipázt és 200 mg szubsztrátumot tartalmaz. A reakciókat 25 °C hőmérsékleten, 7,0 pH-nál, pHsztatban hajtjuk végre. A kapott eredményeket a 3. táblázat mutatja.
HU 217 790 Β
3. táblázat
Enzim Gyártó cég Reakcióidő (órák)
Lipase PS-30 Pseudomonas sp. Amano Int. 16
Lipase AY-30 Candida sp. Amano Int. 8
Lipase AK Pseudomonas sp. Amano Int. 16
Pseudomonas fluorescens Biocatalyst Ltd. 16
Sertéspankreász lipáz Sigma 19
Észteráz 30,000 Gist-Brocades 24
Lipase OF Sepracor 8
KID Lipase Gist-Brocades 48
Lipase R. Rhizopus sp. Amano Int. 24
Konverzió % Kitermelés % A 2B termék
2A tennék 2B termék optikai tisztasága
52 48 <99,5
55 45 99,0
53 47 99,3
55 45 98,8
52 48 99,8
51 49 95
56 44 99,5
52 48 95
56 44 99,0
5. példa (±)-cisz-3-Hidroxi-4-(2-furil)-azetidin-2-on sztereoszelektív acetilezése (észterezése)
Az ebben a példában alkalmazott szubsztrátum a megfelelő racém acetátnak nátrium-karbonáttal végzett kémiai hidrolízisével előállított 5 képletű racemátkeverék. Az ebben a példában végrehajtott sztereoszelektív acetilezés termékei az 5a képletű (+)-cisz-3-hidroxi-4(2-furil)-azetidin-2-on és az 5b képletű (-)-cisz-3-acetoxi-(2-furil)-azetidin-2-on.
Ebben a példában különböző forrásokból származó lipázok alkalmazásával számos reakciót hajtunk végre a sztereoszelektív acetilezés elvégzésére. Minden egyes reakcióban a reakcióelegy 25 ml toluolban 1 g nyers lipázt, 100 mg szubsztrátumot, 800 mg izopropenil-acetátot és 0,05% vizet tartalmaz. A reakciókat 30 °C hőmérsékleten és 100 fordulat/perc (RPM) sebességű keverő alkalmazásával hajtjuk végre. A termékeket és a szubsztrátumot nagynyomású folyadékkromatográfiával (HPLC) analizáljuk. A kapott eredményeket a 4. táblázat mutatja.
4. táblázat
Enzim Gyártó cég Konverzió % 5 A termék Kitermelés % 5B termék Az 5B termék %-os optikai tisztasága
Lipase PS-30 Amano Int. 52 48 99,5
Lipase AY-30 Amano Int. 55 45 99,0
Lipase R Amano Int. 51 49 96,8
Pseudomonas fluorescens Biocatalyst Inc. 54 46 98,8
Lipase OF Sepracor 52 48 99,0
Sertéspankreász lipáz Sigma 54 46 98,0
6. példa
Sztereoszelektív hidrolízis: a különböző enzimek kiértékelése
Az alkalmazott szubsztrátum és a kapott termékek azonosak a fenti 2. példában leírtakkal. Minden egyes sztereoszelektív hidrolizáló reakcióban a reakcióelegy
20 ml 7,0 pH-jú 25 mM kálium-foszfát-pufferoldatban 200 mg szubsztrátumot és 1 g enzimet tartalmaz (az alkalmazott enzimeket lásd az 5. táblázatban). A reakciót 30 °C hőmérsékleten, 150 fordulat/perc (RPM) sebességű keveréssel hajtjuk végre. A reakció folyamán a reak60 cióelegy pH-ját pH-sztat által adagolt 1 M nátrium10
HU 217 790 Β hidroxid-oldattal 7,0 értéken tartjuk. A hidrolizáló reakció menetét nagynyomású folyadékkromatográfia (HPLC) segítségével ellenőrizzük. Időközönként 1 ml térfogatú mintát veszünk, és azt 4 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos réteget elválasztjuk, szárazra pároljuk, és HPLC segítségével analizáljuk a szubsztrátum és termék koncentrációjára és a termék optikai tisztaságára. A kapott eredményeket az 5. táblázat mutatja.
5. táblázat
Enzim Gyártó cég Reakcióidő (órák) Kitermelés % 2B termék A 2B termék %-os optikai tisztasága
Lipase PS-30 Amano Int. 16 48 <99,5
Lipase AY-30 Amano Int. 8 46 <99
Lipase AK Amano Int. 16 47 <99
Pseudomonas fluorescens Biocatalysts Ltd. 16 45 <99
Sertéspankreász lipáz Sigma 19 47 98,8
Észteráz 30 000 Gist/Brocades 24 35 99
Lipase OF Sepracor 8 44 99
KID Lipase Gist/Brocades 48 38 95
Lipase R Amano Int. 24 44 99
7. példa 25 (±)-cisz-3-Acetoxi-4-(2-furil)-azetidin-2-on immobilizált Lipase PS-30-cal végzett rezolválásának kinetikája
Az alkalmazott szubsztrátum és a kapott termékek azonosak a fenti 2. példában leírtakkal. 30
8,5 liter 7,0 pH-jú 25 mM kálium-foszfát-pufferoldatban 85 g szubsztrátumot és Pseudomonas fajból származó Accural polipropilénen immobilizált 85 g Lipase PS-30 (Amano International Co.) enzimet tartalmazó reakcióelegyet készítünk. A reakciót 30 °C hő- 35 mérsékleten 150 fordulat/perc sebességű keverés mellett hajtjuk végre. A reakció folyamán a reakcióelegy pH-ját pH-sztattal adagolt 5 M nátrium-hidroxid-oldattal 7,0 értéken tartjuk. A hidrolizáló reakció lefolyását nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálattal 40 követjük. Időközönként 1 ml-es mintákat veszünk, és azokat 4 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos réteget elválasztjuk, szárazra pároljuk, és HPLC-vel analizáljuk a szubsztrátum és a termék koncentrációjára és a termék optikai tisztaságára. A kapott eredménye- 45 két a 6. táblázat mutatja.
6. táblázat
Reakció- idő (órák) 5B képletű „A-acctát” mg/ml 2A képletű „B-acctát” mg/ml 2B képletű „A-alkohol” mg/ml
0 6,2 5,2 0
1 2,1 5,2 2,9
2 0,65 5,2 4,1
3 0,19 5,1 4,3
4 0,1 5 4,9
Reakció- idő (órák) 5B képletű „A-acetát” mg/ml 2A képletű „B-acctát” mg/ml 2B képletű „A-alkohol” mg/ml
5 nyom 4,95 4,9
6 nyom 4,9 4,9
Reakció- idő (órák 5A kcpletű „B-alkohol” mg/ml A 2A kcpletű „B-acetát” %-os optikai tisztasága A 2B képletű „A-alkohol” %-os optikai tisztasága
0 0 50 <99
1 0 72 <99
2 0 89,6 <99
3 nyom 98,5 <99
4 nyom 98,5 <99
5 0,13 <99 97
6 0,15 <99 97
8. példa (±)-cisz-3-Hidroxi-4-(2-furil)-azetidin-2-on sztereoszelektív észterezése
Az ebben a példában alkalmazott szubsztrátum és a kapott termékek azonosak az 5. példában leírtakkal. 10 ml etil-metil-ketonban 20 g szubsztrátumot, 1 g enzimet (lásd 7. táblázat) és acildonorként 0,4 ml izopropenil-acetátot tartalmazó reakcióelegyet készítünk. A reakciót 30 °C hőmérsékleten, 150 fordulat/perc keverés mellett hajtjuk végre. Az észterezési reakciót az alábbiakban leírt nagynyomású folyadékkromatográ11
HU 217 790 Β fiás vizsgálattal követjük a szubsztrátum és a termék koncentrációjának és a termék optikai tisztaságának meghatározására. A kapott eredményeket a 7. táblázat mutatja.
7. táblázat
Enzim Gyártó cég Reakcióidő (órák) A királis acetát %-os kitermelése
Lipase PS-30 Amano Int. 96 50,5
Lipas AY-30 Amano Int. 120 51
Lipase AK Amano Int. 120 49
Lipase OF Sepracor 96 49,5
Enzim Gyártó cég Az acetát %-os optikai tisztasága A királis alkohol %-os kitermelése Az alkohol %-os optikai tisztasága
Lipase PS-30 Amano Int. 99,5 49,5 99
Lipase AY-30 Amano Int. 99 49 99
Lipase AK Amano Int. 99,5 51 99
Lipase OF Sepracor 99,4 50,5 99
HPLC-módszer:
A fenti példában a szubsztrátumot és a termékeket a következő HPLC-módszerrel vizsgáljuk: 3,9χ 150 mm méretű, Nova Pák Cl8 fordított fázisú oszlopot használunk. A mozgó fázis 15% acetonitrilt tartalmazó víz; áramlási sebessége 1 ml/perc. A detektálás hullámhossza 227 nm. Az alkohol és az acetát retenciós ideje 2,7 perc, illetve 14,9 perc.
A királis acetát optikai tisztaságát királis HPLC-vel határozzuk meg. Erre a célra Chiralpak AS oszlopot használunk. A mozgó fázis hexán:etanol (96:4) elegyet tartalmaz; áramlási sebessége szobahőmérsékleten 1 ml/perc. A detektálás hullámhossza 210 nm. A racém acetát két enantiomerjének retenciós idői 23,7 perc, illetve 20,9 perc. A racém alkohol két enantiomerjének retenciós idői 63,9 perc, illetve 74,8 perc.

Claims (8)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Eljárás az (la) és (lb) általános képletű enantiomereket tartalmazó (I) elegy rezolválására - ahol R1 mind az (la), mind az (lb) általános képletben R2-re vonatkoztatva cisz-helyzetben van, vagy R1 mind az (la), mind az (lb) általános képletben R2-re vonatkoztatva transz-helyzetben van; és
    R* jelentése hidroxicsoport, halogénatom vagy
    -O-C(O)-R4 általános képletű csoport, amelyben
    R4 jelentése alkil-, alkenil-, alkinil-, aril-, cikloalkil-, cikloalkenil- vagy heterociklusos csoport;
    R2 jelentése heterociklusos vagy cikloalkilcsoport;
    R3 jelentése hidrogénatom, R4 csoport, -C(O)-OR4 vagy -C(O)-R4 általános képletű csoport, amelyben
    R4 jelentése egymástól függetlenül választható az R4-re fent megadott csoportok közül azzal jellemezve, hogy az (I) enantiomerelegyet egy mikrobiális vagy sertéspankreász eredetű lipázzal hozzuk érintkezésbe, és végrehajtjuk (la) és (lb) általános képletű vegyületek egyikének nem enantiomer formájába történő sztereoszelektív konverziót.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy sztereoszelektív konverzióként sztereoszelektív hidrolízist vagy sztereoszelektív észterezést hajtunk végre.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás [Ia( 1)] és [Ib(l)j általános képletű enantiomereket tartalmazó (I) elegy rezolválására [IIa(l)j és [Ilb(l)] általános képletű vegyületeket tartalmazó (II) eleggyé való sztereoszelektív átalakításon keresztül, azzal jellemezve, hogy az [Ia(l)] és [Ib( 1)] általános képletű enantiomereket tartalmazó (I) elegyet
    a) abban az esetben, ha
    R1 jelentése -O-C(O)-R4 általános képletű csoport, amelyben
    R4 jelentése egymástól függetlenül választható az R4-re az 1. igénypontban megadott csoportok közül; és ru és Rib közül egyikük jelentése azonos R'-ével, és Rla és Rlb közül a másik jelentése hidroxicsoport;
    az (I) enantiomerelegyet víz és/vagy egy alkohol jelenlétében egy mikrobiális vagy sertéspankreász eredetű lipázzal érintkezésbe hozva sztereoszelektíven (II) eleggyé hidrolizáljuk; vagy
    b) abban az esetben, ha
    R1 jelentése hidroxicsoport; és
    Rla és Rlb közül egyikük jelentése hidroxicsoport, és Ria és Rlb közül a másik jelentése R4-C(O)-O- általános képletű csoport, amelyben
    R4 jelentése az R4-re a fentiekben megadott csoportok közül egymástól függetlenül választható;
    az (I) elegyet egy (III) általános képletű vegyület - a képletben
    R4 jelentése azonos a fentiekben Rla-ra vagy Rlb-re megadottakkal, és
    HU 217 790 Β
    L jelentése kilépőcsoport jelenlétében egy mikrobiális vagy sertéspankreász eredetű lipázzal érintkezésbe hozva sztereoszelektíven (II) eleggyé észterezzük; vagy
    c) abban az esetben, ha
    Rl jelentése halogénatom; és
    Rla és Rlb közül egyikük jelentése halogénatom, és Rla és Rlb közül a másik jelentése hidroxicsoport;
    az (I) elegyet egy hidroxilion-donor jelenlétében egy mikrobiális vagy sertéspankreász eredetű lipázzal érintkezésbe hozva sztereoszelektíven (II) eleggyé dehalogénezzük; és a [Ila(l)] és [Ilb(l)] általános képletű sztereoizomereket ismert módon szétválasztjuk.
  4. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan [Ia( 1)] és [Ib(l)j általános képletű enantiomerekből álló (I) enantiomerelegyet rezolválunk, ahol R1 jelentése alkanoil-oxi- vagy hidroxicsoport;
    R2 jelentése furil- vagy tienilcsoport; és
    R3 jelentése hidrogénatom, fenil- vagy szubsztituált fenilcsoport.
  5. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy Pseudomonas, Candida, Rhizopus vagy sertés5 pankreász eredetű lipázt alkalmazunk.
  6. 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kapott nem enantiomer vegyületeket a továbbiakban egy ismert elválasztási művelettel szétválasztjuk.
    10
  7. 7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az ismert elválasztási művelet egy extrakciós, desztillációs, kristályosításos vagy oszlopkromatográfiás művelet.
  8. 8. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve,
    15 hogy C-13-helyzetben oldalláncot tartalmazó taxánszármazékok előállításánál a C-13-helyzetű oldallánc kialakítására alkalmazható (la) vagy (lb) általános képletű vegyületek legalább egy nem enantiomer formáját különítjük el.
HU9402096A 1993-07-14 1994-07-13 Enzimes eljárások taxánok előállításánál intermedierként használható vegyületek enantiomerkeverékeinek rezolválására HU217790B (hu)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US9217093A 1993-07-14 1993-07-14

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9402096D0 HU9402096D0 (en) 1994-09-28
HUT69958A HUT69958A (en) 1995-09-28
HU217790B true HU217790B (hu) 2000-04-28

Family

ID=22231980

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9402096A HU217790B (hu) 1993-07-14 1994-07-13 Enzimes eljárások taxánok előállításánál intermedierként használható vegyületek enantiomerkeverékeinek rezolválására

Country Status (12)

Country Link
US (2) US5879929A (hu)
EP (1) EP0634492A1 (hu)
JP (1) JPH0775595A (hu)
KR (1) KR960014352A (hu)
CN (1) CN1100144A (hu)
AU (1) AU688766B2 (hu)
CA (1) CA2127972A1 (hu)
FI (1) FI943326A (hu)
HU (1) HU217790B (hu)
IL (1) IL110278A (hu)
SG (1) SG54231A1 (hu)
TW (1) TW397866B (hu)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS60501995A (ja) * 1983-08-11 1985-11-21 キヤロル，ノエル 液体分離方法及び装置
US5602272A (en) * 1994-06-21 1997-02-11 Bristol-Myers Squibb Company Reduction and resolution methods for the preparation of compounds useful as intemediates for preparing taxanes
US5635531A (en) * 1996-07-08 1997-06-03 Bristol-Myers Squibb Company 3'-aminocarbonyloxy paclitaxels
DE69834276T2 (de) * 1997-01-24 2007-04-12 Sumitomo Chemical Co. Ltd. Verfahren zur Verbesserung der optischen Reinheit von Azetidin-2-carbonsäure
GB9714877D0 (en) * 1997-07-15 1997-09-17 Chiroscience Ltd Microorganism and its use
DE69914458T2 (de) 1998-02-17 2004-10-28 G.D. Searle & Co., Chicago Verfahren zur enzymatischen auflösung von laktamen
JP3757629B2 (ja) * 1998-07-17 2006-03-22 住友化学株式会社 光学活性ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸化合物の製造方法
US6617451B1 (en) 1999-07-23 2003-09-09 Eli Lilly And Company Enantioselective acylation of cis racemic azetidinones
AU775373B2 (en) 1999-10-01 2004-07-29 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
US6548293B1 (en) * 1999-10-18 2003-04-15 Fsu Research Foundation, Inc. Enzymatic process for the resolution of enantiomeric mixtures of β-lactams
JP2003522171A (ja) 2000-02-02 2003-07-22 フロリダ・ステイト・ユニバーシティ・リサーチ・ファウンデイション・インコーポレイテッド 抗腫瘍剤としてのｃ１０カーボネート置換タキサン
CN1362957A (zh) 2000-02-02 2002-08-07 佛罗里达州立大学研究基金有限公司 作为抗肿瘤剂的c7杂取代乙酸酯取代的紫杉烷
CN1362876A (zh) * 2000-02-02 2002-08-07 佛罗里达州立大学研究基金有限公司 C10杂取代的乙酸基紫衫烷抗肿瘤剂
US6649632B2 (en) * 2000-02-02 2003-11-18 Fsu Research Foundation, Inc. C10 ester substituted taxanes
JP2003522170A (ja) * 2000-02-02 2003-07-22 フロリダ・ステイト・ユニバーシティ・リサーチ・ファウンデイション・インコーポレイテッド 抗腫瘍剤としてのｃ７カーボネート置換タキサン
AR030188A1 (es) 2000-02-02 2003-08-13 Univ Florida State Res Found Compuestos de taxano sustituidos con esteres en el c7; composiciones farmaceuticas que los contienen y proceso para tratar un sujeto mamifero que sufre de una condicion que responde a los taxanos
NZ514407A (en) * 2000-02-02 2004-12-24 Univ Florida State Res Found C10 carbamoyloxy substituted taxanes as antitumor agents
PT1165549E (pt) * 2000-02-02 2008-06-20 Univ Florida State Res Found Taxanos substituídos em c7 por carbamoíloxi como agentes anti-tumorais
US20040058422A1 (en) * 2000-11-02 2004-03-25 Chaplin Jennifer Ann Process for preparing (-)- menthol and similar compounds
ATE407130T1 (de) * 2001-03-07 2008-09-15 Daiichi Sankyo Co Ltd Verfahren zur herstellung von 2- azetidinonderivaten
US7064980B2 (en) * 2003-09-17 2006-06-20 Sandisk Corporation Non-volatile memory and method with bit line coupled compensation
HN2005000054A (es) * 2004-02-13 2009-02-18 Florida State University Foundation Inc Taxanos sustituidos con esteres de ciclopentilo en c10
WO2005087222A1 (en) 2004-03-05 2005-09-22 Florida State University Research Foundation, Inc. C7 lactyloxy-substituted taxanes
AU2006214498A1 (en) * 2005-02-14 2006-08-24 Florida State University Research Foundation, Inc. C10 cyclopropyl ester substituted taxane compositions
JP2011517455A (ja) * 2008-03-31 2011-06-09 フロリダ・ステイト・ユニバーシティ・リサーチ・ファウンデイション・インコーポレイテッド Ｃ（１０）エチルエステルおよびｃ（１０）シクロプロピルエステル置換タキサン

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4492757A (en) * 1981-12-28 1985-01-08 Denki Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Process for preparing L-threonine
JPS60248192A (ja) * 1984-05-23 1985-12-07 Sumitomo Chem Co Ltd 光学活性なスレオ−３−フエニルセリン誘導体の製造方法
FR2629819B1 (fr) * 1988-04-06 1990-11-16 Rhone Poulenc Sante Procede de preparation de derives de la baccatine iii et de la desacetyl-10 baccatine iii
US4943528A (en) * 1988-11-22 1990-07-24 Nitto Chemical Industry Co., Ltd. Process for the production of optically active (R)-(-)-3-halo-1,2-propanediol
JPH02190195A (ja) 1989-01-19 1990-07-26 Rikagaku Kenkyusho 光学活性プロピオン酸エステル類化合物の製法
JPH02273196A (ja) 1989-03-08 1990-11-07 Wisconsin Alumni Res Found ラセミ化合物の生体触媒分割のエナンチオ選択性の改良法
EP0405104A1 (en) * 1989-05-15 1991-01-02 Schering Corporation Process for preparing antibacterial compounds and intermediates thereto
US5175315A (en) * 1989-05-31 1992-12-29 Florida State University Method for preparation of taxol using β-lactam
CA2019484A1 (en) * 1989-06-21 1990-12-21 Joseph E. Lynch Nitrogen deprotected 4-acyloxyazetidin-2-ones
AU6052090A (en) * 1989-07-07 1991-02-06 Schering Corporation Process for producing antibacterial intermediates via enzyme hydrolysis of racemic substrates
CA2023645C (fr) * 1989-08-23 2002-03-26 Jean-Noel Denis Procede pour la preparation enantioselective de derives de la phenylisoserine
US5241064A (en) * 1989-10-02 1993-08-31 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Enzymatic process for preparing optically active 3-substituted azetidinones
US5136060A (en) * 1989-11-14 1992-08-04 Florida State University Method for preparation of taxol using an oxazinone
US5015744A (en) * 1989-11-14 1991-05-14 Florida State University Method for preparation of taxol using an oxazinone
SG48774A1 (en) 1990-04-12 1998-05-18 Chisso Corp Optically active alkyl 3-aryl-3-hydroxypropionate and a method for producing thereof
JPH04258297A (ja) 1991-02-07 1992-09-14 Ajinomoto Co Inc 光学活性１−フェニル−１、３−プロパンジオールおよびその誘導体の製造法
US5346828A (en) 1991-03-27 1994-09-13 Celgene Corporation Stereoisomeric enrichment of 2-amino-3-hydroxy-3-phenylpropionic acids using d-threonine aldolase
CA2071160A1 (en) * 1991-07-31 1993-02-01 Vittorio Farina Asymmetric synthesis of taxol side chain
DE59205454D1 (de) * 1991-08-22 1996-04-04 Lonza Ag Verfahren zur Herstellung von optisch aktiven 4-Amino-3-hydroxycarbonsäuren
US5227400A (en) * 1991-09-23 1993-07-13 Florida State University Furyl and thienyl substituted taxanes and pharmaceutical compositions containing them
US5243045A (en) * 1991-09-23 1993-09-07 Florida State University Certain alkoxy substituted taxanes and pharmaceutical compositions containing them
US5250683A (en) * 1991-09-23 1993-10-05 Florida State University Certain substituted taxanes and pharmaceutical compositions containing them
DE69333675T2 (de) * 1992-01-15 2006-02-02 E.R. Squibb & Sons, Inc. Enzymatische Verfahren zur Trennung von Enantiomerengemischen von Verbindungen, die als Zwischenprodukte zur Herstellung von Taxanen nützlich sind
US5272171A (en) * 1992-02-13 1993-12-21 Bristol-Myers Squibb Company Phosphonooxy and carbonate derivatives of taxol
US5294737A (en) * 1992-02-27 1994-03-15 The Research Foundation State University Of New York Process for the production of chiral hydroxy-β-lactams and hydroxyamino acids derived therefrom
US5294637A (en) * 1992-07-01 1994-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Fluoro taxols
US5254580A (en) * 1993-01-19 1993-10-19 Bristol-Myers Squibb Company 7,8-cyclopropataxanes
EP0582469A2 (en) * 1992-08-06 1994-02-09 Wisconsin Alumni Research Foundation Process for preparing taxol-type compound from beta-lactam precursors
CA2111527C (en) * 1992-12-24 2000-07-18 Jerzy Golik Phosphonooxymethyl ethers of taxane derivatives

Also Published As

Publication number Publication date
US6541242B1 (en) 2003-04-01
IL110278A (en) 1998-06-15
FI943326A (fi) 1995-01-15
EP0634492A1 (en) 1995-01-18
TW397866B (en) 2000-07-11
SG54231A1 (en) 1998-11-16
FI943326A0 (fi) 1994-07-12
CA2127972A1 (en) 1995-01-15
HUT69958A (en) 1995-09-28
KR960014352A (ko) 1996-05-22
AU6743394A (en) 1995-01-27
US5879929A (en) 1999-03-09
HU9402096D0 (en) 1994-09-28
JPH0775595A (ja) 1995-03-20
AU688766B2 (en) 1998-03-19
IL110278A0 (en) 1994-10-21
CN1100144A (zh) 1995-03-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU217790B (hu) Enzimes eljárások taxánok előállításánál intermedierként használható vegyületek enantiomerkeverékeinek rezolválására
JP3184350B2 (ja) タキサン類の製造中間体として有用な化合物のエナンチオマー混合物の酵素分割法
JPH06172276A (ja) β−ラクタム前駆体からタキソール型化合物を製造する方法
JP2769194B2 (ja) 酵素分解方法
JP2000515371A (ja) Ｎ―アシルアゼチジン―２―カルボン酸の生物学的分割
Nicolosi et al. Lipase mediated desymmetrization of 1, 2-bis (hydroxymethyl) ferrocene in organic medium: Production of both enantiomers of 2-acetoxymethyl-1-hydroxymethylferrocene
EP0421636A1 (en) Enzymatic resolution process
US4922001A (en) Chiral synthesis units from prochiral glycerol
US5413935A (en) Process for selecting an enantiomer of a hydroxy lactone using pseudomonas lipase
JP3493043B2 (ja) 光学活性δ−ラクトンの製造法
JPH0533995B2 (hu)
JPS6078596A (ja) 固定化酵素による光学活性オキサゾリジン誘導体の製造法
JPH0616718B2 (ja) 固定化酵素もしくは固定化微生物による光学活性インドリン−２−カルボン酸の製造方法
US5420037A (en) Process for separation of enantiomeric 3-mercapto-2-substituted alkanoic acid using lipase P30 and synthesis of captopril type compounds
EP0869185B1 (en) Production of optically active sphingoid compound
JP3545442B2 (ja) 光学活性４−（２−ハロ−１−ヒドロキシエチル）−２−トリフルオロメチルチアゾールの製造方法
JPH0632633B2 (ja) 光学活性カルボン酸の製造法
JP2838527B2 (ja) 光学活性化合物の製造法
JP3741758B2 (ja) 光学活性グリセロール誘導体の製法
JP3007461B2 (ja) 光学活性２−シクロヘキセニル酢酸及びそのエステルの製造方法
JPH0573396B2 (hu)
JPS6363396A (ja) ｄ−２−（６−メトキシ−２−ナフチル）プロピオン酸の製造方法
WO2009118750A1 (en) Stereoselective hydrolysis for the resolution of racemic mixtures of (+/-) -cis-s-acetoxy-l- (4-methoxyphenyl) -4- (2-furyl) -2-azetidinone, (+/-) -cis-s-acetoxy-l- (4-methoxyphenyl) -4- (2-thienyl) -2-azetidinone, or
JPH07107994A (ja) 光学活性なα−トコフェロール化合物の製造法

Legal Events

Date Code Title Description
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee