JPS60248192A - 光学活性なスレオ−３−フエニルセリン誘導体の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は一般式［１３ （式中、Ｒ１およびＲ２は同一もしくは相異なっ・て水
素原子またはメチル基を意味するか、Ｒ１及びＲ２でメ
チレン基を意味する。２はベンジルオキシカルボニル基
を意味する。）で示される光学活性−スレオ−３−（置
換フェニル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセリンを
製造する新規な方法に関する。

更に詳しくは、一般式［１［） （式中、Ｒ１、Ｒ２およびＺは前記のとおりである。＆
は低級アルキル基を意味する。）で示されるラセミ−エ
ステル体を不斉加水分解することにより、上記式［１］
で示される光学活性−スレオ−８−（ｔａフェニル）−
Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセリンを製造する方法ニ
関する。

本発明方法により製造することができる光学活性なスレ
オ−８−（置換フェニル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボ
ニルセリンは、末梢性起立性低血圧症の治療剤（特開昭
５６−１０４８１５号公報）あるいは抗うつ剤（特開昭
５５−２０７４７号公報）として有用とされる光学活性
−スレオ−８−（８，４−ジヒドロキシフェニル）セリ
ンの重要な中間体である。

光学活性なスレオ−８−（置換フェニル）−Ｎ−ペンジ
ルオキシカルボニルセリンヲ製ｉｔこれらは光学活性な
アミンを光学分割剤として使用し、光学分割を行なう方
法であり、本発明にかかわる不斉加水分解を利用した製
造方法は全く知られていない。

本発明者らは光学活性なスレオ−３−（置換フェニル）
−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセリンを得る方法を鋭
意検討した結果、本発明方法である不斉加水分解を用い
る方法を見い出した。

本発明方法に於ける不斉加水分解とは、エステル加水分
解酵素あるいはエステル加水分解能を有する微生物の培
養液、菌体または菌体処理物を作用させ、一般式［Ｕで
示されるラセミ−エステル体の２種の光学異性体の内、
−万を選択的に加水分解し、式［Ｉ］で示される光学活
性なスレオ−８−（置換フェニル）−Ｎ−ベンジルオキ
シカルボニルセリンを得ることを意味する。

本発明方法に用いるエステル加水分解酵素としては、例
えばプロテアーゼ、リパーゼなどを挙げることができる
が、プロテアーゼが好適である。そのようなプロテアー
ゼとしては、例えば プロテアーゼ（アマノ＠））Ａ　：大野製薬■プロテア
ーゼ（アマノ■）Ｐ　：　〃 プロナーゼ■ＡＳ　：科研化学■ プロナーゼ■ｐ　”　／／ コクラーゼ■　：三　共　■ ビオプラーゼ■　：長潮生化学■ プロテアーゼＴｙｐｅ　■：　ＳＩＧＭＡ社アシラーゼ
（アマノ■）　二天野製薬■アルカリプロテアーゼ　：
東洋紡■ 等を挙げることができ、これらを用いて一般式［Ｉ［］
で示されるラセミ−エステル体のＲ８で示される基がメ
チル基である化合物を不斉加水分解すると、Ｌ体である
スレオ−３−（置換フェニル）−Ｎ−ベンジルオキシカ
ルボニルセリンを得ることができる。

本発明において、低級アルキル基としては、例えばメチ
ル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、イソ
プロピル基等の０１〜４のアルキル基を挙げることがで
きる。

以下に本発明方法をさらに具体的に説明する。

エステル加水分解酵素を用い本発明を実施する場合には
、一般式［１Ｎで示されるラセミ−エステル体をｐＨ２
〜１０、好ましくはｐＨ５〜８に調節した水溶液又は緩
衝だ液に懸濁するか溶解し、ラセミ−エステル体に対し
て酵素を好ましくはｏ、ｏｏｉ〜１．０重量比添加し、
０〜８０°Ｃ１好ましくは１０〜４０°Ｃで攪拌するこ
とにより反応を進行せしめる。反応は通常１時間〜数日
間で完了する。反応が完了するまでの間、反応液のｐＨ
を５〜８に保つことが好ましい。

エステル加水分解能を有する微生物の培養液を用い本発
明方法を実施する場合には、通常行なわれる微生物の培
養に繁用させる培地にエステル加水分解酵素生産菌を生
育せめ、その生育の当初からあるいは後に前記一般式〔
Ｉ［〕で示されるラセミ−エステル体を加え、培養を継
続し、加水分解を行なう方法が簡便である。この場合、
培養温度は菌の増殖が可能であれば特に制限はないが通
常２５〜８７℃で行なうのが好ましく、培養日数は通常
半日〜７日間が適当であり、基質濃度は０．１−１０％
程度が適当である。

菌体または菌体処理物を用い本発明を実施する場合には
、微生物の培養液を遠心分離等の操作により集ｉしその
微生物細胞すなわち菌体を用いて加水分解する方法、あ
るいは菌体を超音波処理、リゾチーム処理等により、酵
素を遊離させ、冷却下遠心分離、硫安分画、沈澱透析等
により、エステル加水分解酵素を得てこれを用いて加水
分解する方法により実施できる。これらの場合には、前
述のエステル加水分解酵素を用いる場合と同様にして、
加水分解酵素に代えて菌体または菌体処理物を用いるこ
とにより実施できる。

上述の水溶液としては硫酸、塩酸、リン酸等の鉱酸、酢
酸、クエン酸等の有機酸、水酸化ナトリウム、水酸化カ
リウム、炭酸ナトリウム等の無機塩基、トリエチルアミ
ン、ピリジン等の有機塩基、酢酸ナトリウム、塩化ナト
リウム等の塩を添加した水溶液を用いることができる。

緩衝溶液としてはリン酸二水素カリウム−水酸化ナトリ
ウム、リン酸二水素カリウム−リン酸二水素ナトリウム
、フタル酸水素カリウム−塩酸、グリシン−塩化ナトリ
ウム−水酸化ナトリウム等の一般的緩衝溶液が用いられ
るが、反応を防げるもの以外は特に制限はない。

又、本発明を実施する場合、必要に応じメタノール、エ
タノール、ｎ−プロパツール、イソプロパツール、ｎ−
ブタノール、ｔ−ブタノールの如きアルコール系溶媒、
エーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンの如きエー
テル系溶媒、ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素系
電媒、アセトン、メチルエチルケトン、ジエチルケトン
等のケトン系溶媒、トリエチルアミン、ピリジン等のア
ミン系溶媒、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキ
シド等の極性溶媒、又、ソルビタンモノパルミテート、
ソルビタンモノラウレート等の如き界面活性剤を添加す
ることもできる。

以下に実施例を挙げ本発明を具体的に説明するが本発明
はもとよりこれらに限定されるものではない。

参考例１ ラセミ−スレオ−８−（８，４−メチレンジオキシフェ
ニル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセリンメチルエ
ステルの合成 ラセミ−スレオ−８−（８，４−メチレンジオキシフェ
ニル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセリン’１．１
９ｆ、炭酸水素ナトリウム５．０４Ｆ、ジメチルホルム
アミド７０−からなる反応液にヨウ化メチル８．５２９
を加え、室温にて２０時間攪拌した。

この反応液を冷水５００−に注入し、酢酸エチル２００
−で抽出した。有機層を５％炭酸水素ナトリウム水２０
０ｍで洗浄、次いで水２００−で２回洗浄し、無水硫酸
マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。

！渣にエーテル５０ｍ１を加え、室温で１時間攪拌し、
析出した結晶をＰ取後減圧乾燥し、ラセミ−スレオ−８
−（８，４−メチレンジオキシフェニル）−Ｎ−ベンジ
ルオキシカルボニルセリンメチルエステル６．５８Ｆを
得た。

融点　７４−７５°Ｃ ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ）ν（、−１）　：　８Ｂ４０，１７
４５，１６７５゜１５４０、１４９０．１Ｂ４０゜ １２６０、１２８０．１１７０゜ １１２０、１０６０ 参考例２ ラセミ−スレオ−８−（８，４−ジヒドロキシフェニル
）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセリンメチルエステ
ルの合成 ラセミ−スレオ−８−（３，４−ジヒドロキシフェニル
）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセリン６．９５ｆ、
ジメチルホルムアミド７０−１炭酸水素ナトリウム１．
８５ｙからなる反応液にヨウ化メチル２．８４ダを加え
、室温にて１８時間撹拌した。

その後参考例１と同様に処理し、ラセＥ　−スレオ−８
−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−ヘーベンジルオ
キシヵルボニルセリンメチルエステル１．７４　ｙ　ヲ
得ｒ：。

融点　１４Ｂ−１４９°Ｃ ＩＮ（Ｎ町０１）ν（♂１）　：　８４８０，８８４０
，１７３０゜１６９０、１６０５．１５Ｂ０．１８５０
．１２８０゜１２６０、１２８０．１２１０．１１５０
．１１１０゜０５０ 実施例１ 参考例１で得たラセミ−スレオ−８−（８゜４−メチレ
ンジオキシフェニル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル
セリンメチルエステル２、ｏｏｙ、ｏ、ｘＭ−リン酸緩
衝液（ＰＨ７，５）４０ゴの懸濁ン夜（・こプロテアー
ゼＴｙｐｅ■（ＳＩＧＭＡ社、　５ｕｂｔｊｌｏｐｅｐ
ｔｉｄａｓｅ　Ａ　）　５００キを加え、ｌＮ−ＮａＯ
Ｈ水にてｐ　Ｈ７，５ニ調整しながら、室温にて２７時
ｒＩＩｊ攪拌した。

反応液に酢酸エチル１００−を加え、ＩＮ−ＨＣｔにて
ＰＨ２としたのち、セライト濾過し、分液した。

有機層を５％ＮａＨＣＯｓ水５ｏゴで抽出した。

抽出した水層を、ＩＮ−ＨＣｔにてＰＨ２とし、析出し
た油状物を酢酸エチル１ｏｏ−にて抽出した。

有機層を、水５ｏ−で洗浄し、無水硫酸マグネシウムに
て乾燥後、減圧濃縮し、Ｌ−スレオ−８−（８，４−メ
チレンジオキシフェニル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボ
ニルセリン０．９８Ｆ／を無定形粉末として得ｔこ。

［α雫　・−２５，０°（Ｃ−１，０，メタノール）Ｉ
Ｒ（Ｎｕｊｏｌ）ｙ（Ｌｙｎ　ｔ）：　８５００〜８２
５０（ブロード）、■７４０〜１６７０（ブロード）、 １８９０、１４４０．１０４０．９８０実施例２ 参考例１で得たラセミ−スレオ−８−（８゜４−メチレ
ンジオキシフェニル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル
セリンメチルエステル５００■、Ｑ、　ｌ　ＩＶＩ−リ
ン酸緩衝液５０ｍ１の懸濁液にプロナーゼ■Ａｓ（科研
化学＠）５００■を加え、室温にて２０時間攪拌した。

反応液に酢酸エチル５０−を加え、ｔＮ−ＨＣｔ−にて
ｐ　ｉ（２としたのちセライト濾過し分液した。

有機層を５％ＮａＨＣＯ３水２０−で抽出した。

■　抽出した水層をＩＮ−ＨＣｔでｐＨ２とし、析出し
た油状物を、酢酸エチルで抽出し、水で洗浄後、無水硫
酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した。

Ｌ−スレオ−８−（８，４−メチレンジオキシフェニル
）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセリン１６２ηを無
定形粉末として得た。

［α］Ｄ−２４，４°（Ｃ＝ｔ、Ｏ、メタノール）■　
一方、有機層は水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾
燥後減圧濃縮し、Ｄ−スレオ−８−（８，４−メチレン
ジオキシフェニル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセ
リンメチルエステル８８０〜を得り。

［α］、＋１．４．５°　（Ｃ＝１．０、メタノール）
−ジヒドロキシフェニル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボ
ニルセリンメチルエステル５００■、０．１　Ｍ−リン
酸緩衝液（ｐＨ７，０）２５−の懸濁液にアルカリプロ
テアーゼ（東洋紡■）　５００＃９を加え、室温にて１
７時間攪拌した。反応液に酢酸エチル５０−を加え、１
Ｎ−ＨＣｔにてＰＨ２としたのち、セライト濾過し、分
液した。

有機層を５％ＮａＨＣＯｓ水２０−で抽出した。

抽出した水層をＩＮ−ＨＣＬでＰＨ２とし、析出した油
状物を酢酸エチルで抽出し、水で洗浄後無水硫酸マグネ
シウムで乾燥し減圧濃縮した。

Ｌ−スレオ−８−（８，４−ジヒドロキシフェニル）−
Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセリン８７ηを無定形粉
末として得た。

〔α〕Ｄ　−２０，１０（Ｃ＝１．０．メタノール）Ｉ
Ｒ（Ｎｕｊｏｌ）ｙ（３１）　：　８６００〜８１００
（ブロード）、１６６０〜１７６０（ブロード）、 １６００、１５２０．１８４０゜ １２７０、１０５０ 一ジヒドロキシフェニル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボ
ニルセリンメチルエステル５００岬、０．　Ｉ　Ｍ−リ
ン酸緩衝液（ＰＨ７，０）２５−の懸濁液にビオフラー
ゼ■（長潮生化学■）５００ｒＩ９を加え室温にて２０
時間攪拌した。

その後実施例３と同様に処理し、Ｌ−スレ、ｌ’−８−
（８，４−ジヒドロキシフェニル）−Ｎ−ベンジルオキ
シカルボニルセリン５７〜を無定形粉末として得た。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （リ　一般式 （式中、Ｒ１およびＲ１は同一もしくは相異なって水素
   原子またはメチル基を意味するか、Ｒ１及びＲ１でメチ
   レン基を意味し、Ｒｓは低級アルキル基を意味する。２
   はベンジルオキシカルボニル基を意味する。） で示されるラセミ−スレオ−８−（置換フェニル）−Ｎ
   −ベンジルオキシカルボニルセリンエステル体を不斉加
   水分解する事を特徴とする一般式 （式中、Ｒ１、ＲｇおよびＺは前記のとおりである。） で示される光学活性−スレオ−８−（置換フェニル）−
   Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセリンの製造方法。 （２）不斉加水分解がエステル加水分解酵素を作用させ
   て加水分解する方法である特許請求の範囲第１項記載の
   方法。 （８）　エステル加水分解酵素がプロテアーゼである特
   許請求の範囲第２項記載の方法。