JPS6227800B2 - - Google Patents

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JPS6227800B2
JPS6227800B2 JP60210368A JP21036885A JPS6227800B2 JP S6227800 B2 JPS6227800 B2 JP S6227800B2 JP 60210368 A JP60210368 A JP 60210368A JP 21036885 A JP21036885 A JP 21036885A JP S6227800 B2 JPS6227800 B2 JP S6227800B2
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acid
penicillin
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acids
amidase
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JP60210368A
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Tsuinmaaman Geruto
Maiaa Yozefu
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Boehringer Mannheim GmbH
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Publication date
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Publication of JPS6227800B2 publication Critical patent/JPS6227800B2/ja
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    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
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    • C12P41/007—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures by reactions involving acyl derivatives of racemic amines
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    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
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    • C07F9/301—Acyclic saturated acids which can have further substituents on alkyl
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    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
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    • C07F9/3804—Phosphonic acids [RP(=O)(OH)2]; Thiophosphonic acids ; [RP(=X1)(X2H)2(X1, X2 are each independently O, S or Se)] not used, see subgroups
    • C07F9/3808—Acyclic saturated acids which can have further substituents on alkyl
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Description

【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野 本発明は、１−アミノアルキルホスホン酸又は
１−アミノアルキルホスフイン酸の立体異性体の
製法に関する。 従来の技術 １−アミノアルキルホスホン酸又は１−アミノ
アルキルホスフイン酸のペプチド類縁誘導体はグ
ラム陽性菌及びグラム陰性菌に対して抗菌性作用
を有しかつ抗性物質（例えばペニシリン、セフア
ロスポリン及びＤ−シクロセリン）の活性を強化
する。Ｌ−アラニン及びＬ−アミノエチルホスホ
ン酸からのジペプチドであるアラフオスフアリン
が特に重要である。 一般に、純粋な立体特異形から誘導される１−
アミノアルキルホスホン酸又は１−アミノアルキ
ルホスフイン酸の誘導体及び特にＬ形〔Ｒ形、命
令法に関してはP.カフアルスキ及びその他
（Kdfarski et al）共著、“カナデイアン・ジヤー
ナル・オブ・ケミカル・エンジニアリング
（Can.J.Chem.）”、61巻、2425（1983年）参照〕
からの誘導体は大きな生物学的活性を呈する〔西
ドイツ国特許第2602193号明細書、F.R.アーテル
トン及びその他（Atherton et al）共著、“アン
チマイクロビアル・エージエンツ・エンド・ケモ
テラピ（Antimicrobiel Agents and
Chemotherapy）”、15巻、677頁（1979年５月）
参照〕。 １−アミノアルキルホスホン酸及び−ホスフイ
ン酸の光学活性形は化学的なラセミ体分割又は光
学活性前段階の不斉合成により製造することがで
きる〔P.カフアルスキ及びその他共著、“カナデ
イアン・ジヤーナル・オブ・ケミカル・エンジニ
アリング”61巻、2425（1983年）；J.W.フーバ
（Huber）及びその他共著、“テトラヘドロン・レ
ターズ（Tetrahedron Letters）”、33巻、3049
（1979年）；A.バツセラ（Vasella）及びR.ベフレ
イ〔Veffray）共著、“ヘルベチカ・キミカ・アク
タ（Helvetica Chim.Acta）”、65巻、1983（1982
年）参照〕。 J.テレジ（Telegdi）及びその他共著、“Int.
Conf.Chem.Biotechnol.Biol.Act.Nat.Prod.
（Proc.）、1.Meet.”、Vol.3(2)、221〜225頁（1981
年）によりラセミ体のＮ−アセチル−又はＮ−ク
ロルアセチルアミノホスホン酸をアミノ酸アシラ
ーゼにより光学拮抗体に分割することが記載され
ている。しかしこの方法には多量の酵素（酵素50
〜80mg／基質１ミリモル）及び長い分割時間（37
〜40℃で数時間）を必要とする。 発明が解決しようとする問題点 それ故、本発明の課題は、簡単にかつ経済的に
（広い基質特異性、高い光学活性度、酵素安定性
及び立体特異性、高い分割率、良好な工業的な実
施可能性）高度な光学的純度の異性体を生成す
る、１−アミノアルキルスホスホン酸又は１−ア
ミノアルキルホスフイン酸の立体異性体の酵素的
方法を開示することである。 問題点を解決するための手段 この課題は、１−アミノアルキルホスホン酸及
び−ホスフイン酸のラセミ体Ｎ−アシル誘導体の
酵素分割をペニシリン−Ｇ−アミダーゼ（ペニシ
リン−Ｇ−アシラーゼ）により実施して解決する
ことができる。 例えば、１−アミノアルキルホスホン酸及び−
ホスフイン酸のＮ−アセチル誘導体、更に他のＮ
−アシル誘導体をペニシリン−Ｇ−アミダーゼに
より高い分割率及び高い光学的純度で立体選択的
に分割し得ることが判明した。分割率はＮ−アシ
ル基の好適な選択により左右することができる。 それ故、本発明の目的は、１−アミノアルキル
ホスホン酸又は１−アミノアルキルホスフイン酸
のラセミ体Ｎ−アシル誘導体を酵素分割し、次に
脱アシルすることによりその立体異性体を製造す
る方法であり、これは酵素分割をペニシリン−Ｇ
−アミダーゼにより実施することを特徴とする。 技術水準から、ペニシリンアシラーゼを数種の
Ｎ−アシル誘導体の酵素分割に、つまりα−アミ
ノ酸のＮ−アシル誘導体及び第一アミンとアミノ
アルコールのＮ−フエニルアセチル誘導体の分割
に〔D.ロツシイ（Rossi）及びその他共著、“ジ
ヤーナル・オブ・オルガーニツク・ケミストリ
（J.Org.Chem）”、43巻、2567頁（1978年）；D.
ロツシイ著、“ジヤーナル・オブ・オルガーニツ
ク・ケミストリ”44巻、2222頁（1979年）；A.
ロメオ（Romeo）及びその他共著、“テトラヘド
ロン・レターズ”、21巻、1799頁（1971年）参
照〕、ペプチド中に組み込まれたリジンのフエニ
ルアセチル保護基の脱離に〔F.ブロトニツク
（Brotnik）及びその他共著、“コレクシヨン・オ
ブ・チエコスロバク・ケミカル・コミユニケーシ
ヨンズ（Collect.Czechoslovak.Chem.Commun.
）”、46巻、1983頁（1981年）〕、抗生物質Ｎ−アシ
ルチエナマイシンの分割に（ヨーロツパ特許
0000931号）及びＬ−ホスフイノトリシン（Ｌ−
２−アミノ−４−メチルホスフイノ−酪酸）のラ
セミ体の分割によるそれの製造に（ヨーロツパ特
許出願第81110474.4号）使用することは公知であ
る。従来、１−アミノアルキルホスホン酸又は−
ホスフイン酸のＮ−アシル誘導体の酵素分割にペ
ニシリン−アシラーゼを使用することは知られて
いなかつた。 しかし基質のアミノ酸部分の僅かな変化がペニ
シリン−Ｇ−アミダーゼの酵素活性の著しい低下
をもたらすことは知られている〔A.プラスキ
（Plaskie）及びその他共著、“ジヤーナル・オ
ブ・アンチビオテイクス（J.Antibiotics）、”31
巻、783頁（1978年）〕。それ故、α−アミノ酸及
び第一アミンのＮ−アシル誘導体を酵素分割する
ことに関して知られているペニシリンアシラーゼ
の使用からは、１−アミノアルキルホスホン酸及
び−ホスフイン酸のＮ−アシル誘導体もペニシリ
ンアシラーゼに酵素分割によつて高い反応速度
（分割率）及び高い光学的純度で立体選択的に分
割し得るとは予測し得なかつた。 本発明方法はＮ−アシル−Ｒ・Ｓ−１−アミノ
アルキルホスホン酸及び−ホスフイン酸に対して
非常に広範な基質特異性を有する。一般に分割活
性は１−アミノホスホン酸又は−ホスフイン酸の
炭素数（連鎖長）の増加に伴なつて低下し、特に
分割活性及び分割率は１−アミノ基での置換基の
種類、従つてアシル基の種類に左右される。それ
故、例えば１−アセタミノ−エチルホスホン酸は
比活性0.5U／ｇで反応し、これに対して１−フ
エニルアセタミノ−エチルホスホン酸は比活性
3000U／ｇで反応する。Ｎ−アシル基の好適な選
択により、アミノアルキルホスホン酸又は−ホス
フイン酸の高い炭素数により惹起される活性度の
低下を調整することができる。 本発明で使用するペニシリン−Ｇ−アミダーゼ
（ペニシリン−Ｇ−アシラーゼ、ペニシリン−ア
ミドヒドロラーゼ）は、ペニシリンを６−アミノ
ペニシラン酸に分割し得るような酵素である。そ
れは原核生物、例えば特にエシエリキア・コリ
（Eschorichia coli）から生成し〔M.コール
（Cole）及びその他共著、“メソツズ・オブ・エ
ンサイモロジ（Meth.Ensym.）”、43巻、698頁
（1975年）〕かつE.C.番号3.5.1.11で知られてい
る。本発明で特に優れているのはエシエリキア・
コリ（Escherichia coli）DSM1900
（ATCC11105）からのペニシリン−Ｇ−アミダー
ゼである。本発明で使用するペニシリン−Ｇ−ア
ミダーゼは遊離の水溶性酸素として、例えば凍結
乾燥体として又は水不溶形の固定化酵素として使
用することができる。 一般に、基質濃度は0.1モル／乃至水性反応
媒体か又は水性有機反応媒体中の溶解度限界の間
である。水性有機反応性媒体としては、酵素反応
に常用の水性有機反応性媒体、特に水に加えて、
殊に水と混合可能な又は水中に良好に溶ける有機
溶剤、特に例えばエタノールのような低級アルコ
ールを含有するようなものを使用する。殊に、水
性反応性媒体を使用する。 反応温度は20〜60℃であると有利であり、温度
37℃が特に優れている。特に、反応時間は酵素活
性、酵素及び基質の濃度並びに反応温度に左右さ
れ、一般に反応時間２〜120時間で作業する。本
発明で使用する酵素はPH約5.0〜8.5で十分に活性
であり、至適PH値は７である。それ故、殊にPH
5.5〜8.5、特PH７で作業する。その際に、反応は
緩衝剤なしで又は例えばリン酸塩緩衝液のような
好適な緩衝剤の存在において実施することがで
き、PH値を自動滴定装置系で制御すると有利であ
る。 特に、工業的規模の大量バツチのため及び経済
的理由（酵素の繰返し使用、安定性）から、酵素
を固定化形で使用すると有利であり、それ故反応
を固定化した酵素に好適な反応器〔例えばカラム
式反応器又はバツチ式反応器、例えばH.D.グレ
ーフ（Gra¨f）著、“フアルマツイ・イン・ウンゼ
レル・ツアイト（Pharmazie in unserer
Zeit）”、６巻、43頁（1977年）参照〕中で連続的
に例えばカラム式で又は非連続的に（バツチ式
で）実施することができる。固定化酵素として
は、例えば支持体結合のペニシリン−Ｇ−アミダ
ーゼ〔ベーリンガー・マンハイム有限会社
（Boehringer Mannheim Gmb Ｈ）〕が好適であ
る。ペニシリン−Ｇ−アミダーゼは反応条件下に
数週間生物学的に又は機械的に安定であり、それ
故反応器中で繰返し使用することができ、40日後
（0.2モル／基質溶液、37℃）に活性度損失＜５
％であつた。反応器としては例えば撹拌釜式反応
器のようなバツチ式反応器が優れている。これら
の反応器では至適なPH制御は簡単に工業的に実施
することができる。 酵素分割を簡単に公知方法で分析的に追跡する
ことができる。殊に、Ｎ−アセチル誘導体の分割
は非連続的な酵素のアセテート測定により追跡
し、他のＮ−アシル誘導体、例えばクロルアセチ
ル−又はフエニルアセチル誘導体の分割は遊離ア
ミノ基を測定するための公知のニンヒドリン法に
より追跡すると有利である。立体選択分割は単離
したＲ−１−アミノホスホン酸の旋光度測定を介
しかつ50％の変換率省略算を介して証明すること
ができる。工業用反応器は反応容液中の旋光度変
化の微測定により調節することができる。 酵素分割による反応混合物（分割バツチ）の後
処理は例えば次の２つの方法により行なうことが
できる： １ 酢酸で酸性にした反応混合物を蒸発濃縮しか
つＳ−１−アシルアミノ−アルキルホスホン酸
及びアシル基の酵素加水分解により遊離したカ
ルボン酸をエタノールで抽出する。残渣とし
て、エタノールに不溶のＲ−１−アミノアルキ
ルホスホン酸が残留する。 ２ 分割バツチをH+型の強酸性イオン交換体で
クロマトグラフイ処理を行なう。その際に溶離
剤としての水により順次にＳ−１−アシルアミ
ノ−アルキルホスホン酸がアシル基のカルボン
酸と一緒に、次いでＲ−１−アミノアルキルホ
スホン酸が純粋な形で溶離する。アシル基のカ
ルボン酸を有機溶剤による簡単な抽出によりＳ
−１−アシルアミノアルキルホスホン酸から分
離することができる。一般に、ホスホン酸は水
相中に残留しかつ蒸発濃度により単離すること
ができる。Ｎ−アシル化されたＳ−１−アミノ
アルキルホスホンを例えば６モル／の水性
HClと沸騰させることにより脱アシルする。ア
ミノホスホン酸は公知方法で、エタノール中の
そのヒドロクロリドの溶液をプロピレンオキシ
ドで処理することにより又はH+型の強酸性イ
オン交換体を用いてクロマトグラフイ処理する
ことにより単離する。 １−アシルアミノ−アルキルホスフイン酸の分
割バツチの後処理も同様にして実施することがで
きる。 本発明方法により１−アミノアルキルホスホン
酸及び１−アミノアルキルホスフイン酸のＲ−及
びＳ−異性体が高い光学的純度（＞95％）で得ら
れる。 特に本発明方法は式： 〔式中R2は場合により例えばハロゲン、ヒドロキ
シ、炭素原子１〜３個のアルコキシ、フエニル及
び／又はフエノキシにより置換されていてもよい
炭素原子１〜６個、特に１〜４個を有する分枝鎖
状か又は有利には直鎖状のアルキル基を表わすか
又はフエニル基を表わす〕の１−アミノアルキル
ホスホン酸の立体異性体の製造に好適である。基
R2は例えばメチル、ヒドロキシメチル、エチ
ル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチ
ル、ｔ−ブチル、フエニル又はベンジルである。
同様の構成の１−アミノアルキルホスフイン酸に
関してもR2は同じものを表わしてよい。 本発明による酵素分割の出発物質として使われ
るラセミ体の１−アシルアミノ−アルキルホスホ
ン酸又は−ホスフイン酸において、特にアシル基
R1−CO−は、R1が炭素原子１〜６個を有する分
枝鎖状か又は有利に直鎖状のアルキル基を表わす
ようなものであり、このアルキル基は場合により
ハロゲン、ヒドロキシ、炭素原子１〜３個のアル
コキシ、フエニル、フエノキシ及び／又はチエニ
ルにより置換されていてもよく、その際にフエニ
ル又はフエノキシも例えば炭素原子１〜３個のア
ルキル、ヒドロキシ、ニトロ、アミノ、ハロゲン
及び／又は炭素原子１〜３個のアルコキシにより
置換されていてもよい。基R1は例えばメチル、
ブチル、クロルメチル、ベンジル、フエノキシメ
チル、２−メチルベンジル、４−ニトロベンジ
ル、４−ヒドロキシベンジル、４−アミノベンジ
ル、チエニル−(2)−４−クロルベンジル又は４−
メトキシベンジルである。 出発物質として使用する１−アシルアミノ−ア
ルキルホスホン酸は、ペプチド化学で公知の方法
により相応する１−アミノアルキルホスホン酸を
活性化されたカルボン酸誘導体又はカルボン酸
と、縮合剤の存在において反応させることにより
製造することができる。１−アシルアミノ−アル
キルホスフイン酸も同様にして得られる。活性化
されたカルボン酸誘導体としては例えば酸塩化
物、対称無水物又は炭酸モノアルキルエステルと
の混合無水物、活性エステル、例えばｐ−ニトロ
フエニルエステル、２・４・５−トリクロルフエ
ニルエステル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド又
は１−Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステ
ルを使用することができる。主に、縮合剤として
はカルボジイミド、例えばジシクロヘキシルカル
ボジイミド及びＮ・N′−カルボニルジイミダゾ
ールが該当する。 両性イオンの１−アミノアルキル−ホスホン酸
のアミノ基は、ホスホン酸基をアルカリ金属塩
基、例えばNaOHか又は第三アミン塩基、例えば
トリエチルアミンで中和して遊離すると有利であ
る。アミノアルキルホスホン酸をそのアルキルエ
ステル又はトリアルキルシリルエステルの形で活
性化カルボン酸でアシル化することもできる。ア
シル化反応後に、ホスホン酸アルキルエステルを
公知方法で氷酢酸中の臭化水素又はトリメチルヨ
ードシラン又はブロムシランもしくはトリメチル
クロルシラン／沃化ナトリウムと反応させること
により分割することができる。トリアルキルシリ
ルエステルは非常に簡単に水によつて加水分解さ
れる。 アシル化反応は反応成分の加水分解安定性に応
じて水もしくは水／アルコール混合物又は不活性
有機溶剤、例えば塩化メチレン、アセトン、アセ
トニトリル、テトラヒドロフラン、ジメチルホル
ムアミド等中で実施することができる。ホスフイ
ン酸誘導体にも相当する。 ラセミ体の１−アミノアルキルホスホン酸及び
−ホスフイン酸は公知であるか又は公知方法によ
り製造することができる〔例えば“シンテーシス
（Synthesis）”、883（1977年）、479（1978年）；
pol.J.Chem.”、52巻、2271頁（1978年）参照〕。 実施例 次に本発明を実施例により詳説する。 １ １−アシルアミノ−アルキルホスホン酸の合
成 例 １ Ｒ・Ｓ−１−アミノエチルホスホン酸10ｇを水
60ml中に溶かしかつ撹拌下にPH９まででNaOH4
モル／を加える。その後、氷冷下にフエニル酢
酸クロリド12.3ｇを滴加し、その際に反応混合物
のPHをNaOH4モル／の添加により９に保持す
る。氷浴を取り除き、かつPH値がNaOHを更に添
加しないで９で停止するまで混合物を室温で撹拌
する。アルカリ性相をエーテルで抽出し、最後
に、水相を塩酸で酸性化する。白色微結晶が沈殿
し、これを吸引濾取しかつ乾燥させる。精製する
ためにイソブチルメチルケトンから再結晶させ
る。 融点140〜143℃（分解）のＲ・Ｓ−１−フエニ
ルアセタミノ−エチルホスホン酸9.5ｇ（49％）
が得られる。 次に表１に記載した１−アシルアミノ−アルキ
ルホスホン酸も例１と同様に製造した。一部の化
合物は酸性の水相から酢酸エチルエステルで抽出
することにより又は強酸性イオン交換体（H+
型）を介して濾過することにより単離した（表１
の注参照）。
【表】
【表】 例 ２ 例１と同様にしてＲ・Ｓ−１−アミノエチル−
メチルホスフイン酸の使用下にＲ・Ｓ−１−フエ
ニルアセタミノエチル−メチルホスフイン酸が得
られ、これを酸性化した水相を酢酸エチルエステ
ルで抽出することにより単離しかつエタノールか
ら再結晶することにより精製する。融点173〜175
℃ 例 ３ α−アミノベンジルホスホン酸4.3ｇを氷酢酸
11.5ml及び無水酢酸4.7ｇと共に撹拌下に130℃に
２時間加熱する。反応混合物を蒸発濃縮し、水中
に溶かし、水浴上で20分間加熱しかつ再度蒸発濃
縮する。残留するシロツプ状物をエタノール中に
熱時に溶かしかつ物質を多量のエーテルの添加に
より沈殿させる。冷却後、吸引濾過する。粗製生
成物をエタノール／エーテルから再結晶させる。
融点205〜207℃のＲ・Ｓ−α−アセタミノ−ベン
ジルホスホン酸４ｇ（77％）が得られる。 例 ４ Ｒ・Ｓ−１−アミノ−２−メチル−プロピルホ
スホン酸2.3ｇを水30ml中に溶解する。NaOH4モ
ル／の添加により溶液のPH値を９にしかつ続い
て無水酢酸4.5ｇを滴加する。PH値をNaOH4モ
ル／の添加により９に保持する。反応溶液を強
酸性イオン交換体（DOWEX50、H+型）300ml
を介して濾過する（溶離剤水）。生成物含有フラ
クシヨンを蒸発濃縮しかつ残渣をエタノール／エ
ーテルから再結晶させる。融点178〜180℃のＲ・
Ｓ−１−アセタミノ−２−メチル−プロピルホス
ホン酸1.8ｇ（73％）が得られる。 例 ５ ｐ−ヒドロキシフエニル酢酸3.04ｇ及びＮ−メ
チルモルホリン2.02ｇを塩化メチレン100ml及び
ジメチルホルムアミド10mlからの混合物中に溶か
す。溶液を−15゜に冷却しかつクロル蟻酸イソブ
チルエステル2.73ｇを滴加する、反応混合物を30
分間−15゜で撹拌しかつＲ・Ｓ−Ｎ−トリメチル
ミリルアミノエチル−ホスホン酸−ビストリメチ
ルシリルエステルの溶液を滴加する。混合物を−
15゜、０゜及び室温でそれぞれ１時間撹拌する。
その後、濃縮乾固しかつ残渣を水中に取る。PH値
を少量の塩酸の添加により２に調節し、エーテル
で、引続いてｎ−ブタノールで抽出する。ブタノ
ール相を濃縮しかつ残渣をイオン交換体
（DWEX50H+型）１中で水でクロマトグラフ
イ処理する。生成物を含有するフラクシヨンを蒸
発濃縮しかつ精製のためにイソプロパノール／リ
グロインから再結晶する。融点185〜188゜（分
解）のＲ・Ｓ−１−（ｐ−ヒドロキシフエニルア
セタミド）−エチルホスホン酸38ｇ（73％）が得
られる。 使用したＮ−トリメチルシリルアミノエチルホ
スホン酸ビストリメチルシリルエステルは、１−
アミノエチルホスホン酸３ｇをトリメチルクロル
シラン9.4ml及びトリエチルアミン10.5mlと共に
塩化メチレン100ml中で15分間加熱することによ
り製造する。この溶液を直接アシル化反応に使用
する。 例 ６ ｐ−ニトロフエニル酢酸3.62ｇ及びＮ−ヒドロ
キシスクシンイミド2.42ｇをテトラヒドロフラン
20ml及び塩化メチレン20mlからの混合物中に溶か
しかつ−10゜で塩化メチレン10ml中のジシクロヘ
キシルカルボジイミド4.54ｇの溶液を加える。混
合物を０゜で１時間及び室温で３時間撹拌する。
析出した沈殿を濾取し、熱い酢酸エチルエステル
で浸出する。濾液を蒸発濃縮し、残渣をエタノー
ルと沸騰させかつ溶液を冷却する。晶出した生成
物を吸引濾取する。ｐ−ニトロフエニル酢酸−Ｎ
−ヒドロキシスクシンイミドエステル3.75ｇが得
られ、これをジメチルホルムアミド50ml中に溶解
しかつ室温でＲ・Ｓ−Ｎ−トリメチルシリルアミ
ノエチル−ホスホン酸−ビストリメチルシリルエ
ステルの溶液を加える（Ｒ・Ｓ−１−アミノエチ
ルホスホン酸1.88ｇ、トリメチルクロルシラン
5.9mg及びトリエチルアミン6.55mlから製造、前
記参照）。反応混合物を室温で４時間撹拌し、蒸
発濃縮しかつそれに重炭酸ナトリウム溶液及びエ
ーテルを加える。エーテル相を分離しかつ水相を
更に２回酢酸エチルエステルで抽出する。最後
に、水相を濃HClで酸性にしかつ冷蔵庫に保存す
る。析出した結晶を吸引濾取しかつ乾燥させる。
Ｒ・Ｓ−１−（ｐ−ニトロフエニルアセタミド）−
エチルホスホン酸2.1ｇ（36％）が得られ、更に
精製するために、メタノール／エタノールと若干
量のリグロインの混合物から再結晶させることが
できる。融点210〜215℃（分解） 例 ７ 例６により得られたＲ・Ｓ−１−（ｐ−ニトロ
フエニルアセタミド）−エチルホスホン酸３ｇを
水180ml及びエタノール60mlからの混合物中で触
媒としてのPd／Ｃを介して水素化する。水素化
する際に、生成物が晶出する。反応混合物に、白
色反応生成物が溶解するまでNaHCO3を加える。
触媒を濾別しかつ濾液をHCl2モル／の添加に
よりPH５に調節する。しばらくした後で結晶した
生成物を濾取する。融点が300℃を上廻つている
Ｒ・Ｓ−１−（ｐ−アミノフエニルアセタミド）−
エチルホスホン酸1.22ｇ（45％）が得られる。 ２ 撹拌釜式反応器中での調製分割 例 ８ Ｒ・Ｓ−１−アセタミノ−エタンホスホン酸の
分割 凍結乾燥した支持体結合のペニシリン−Ｇ−ア
ミダーゼ（ベーリンガー・マンハイム有限会社）
80ｇを弱く緩衝させた0.12モル／−基質溶液１
（TRAP0.02モル／、PH＝7.0）中で反応時
間の間37℃で激しく撹拌し（翼撹拌機）、引続い
て吸引濾斗を介して濾過し、洗浄しかつ更に使用
するために凍結乾燥する。 添付図面の第１図は非連続的な分割反応の変換
率／時間−曲線図である。濾液を成分分離のため
に公知方法（イオン交換体、抽出）で更に後処理
する。更に長い反応時間では微生物発生を回避す
るために保存剤の添加又は基質溶液の滅菌濾過す
るのが望ましい。 例 ９ Ｒ・Ｓ−１−フエニルアセタミノ−エタンホス
ホン酸の分割 例８と同様に行なうが、凍結乾燥されている支
持体結合のペニシリン−Ｇ−アミダーゼ500mg／
基質溶液を使う。 第２図は非連続的な分割反応の反応経過（変換
率／時間−曲線図）を表わす。 後処理に当り、Ｒ・Ｓ−１−フエニルアセタミ
ノ−エタンホスホン酸250ｇからの分割バツチ
（分割率98.2％）の溶液1/3を氷酢酸150mlで酸性
にする。混合物をエーテルで抽出しかつ水相を強
酸性イオン交換体（DOWEX50、H+型）３
を通す。水で溶離する。第一フラクシヨン（2.2
）は酢酸を含有する。第二フラクシヨン（約２
）中にはＳ−１−フエニルアセタミノエチルホ
スホン酸が存在する。最後に、溶離容量約８で
Ｒ−１−アミノエチルホスホン残が溶離する。こ
の処理法を残りの分割バツチ2/3に関して繰返
す。ニンヒドリン陽性のフラクシヨンを合しかつ
蒸発濃縮させる。粗製生成物をエタノール／水か
ら再結晶させる。融点292〜293゜（分解）のＲ−
１−アミノエチルホスホン酸60.1ｇ（89％）が得
られる。 〔α〕２０ Ｄ＝−15.5゜（Ｃ＝2.1モル／NaOH） 光学的純度： (a) 旋光度から：Ｒ−エナンチオマー96％ 文献：〔α〕２０ Ｄ＝−16.9゜〔Ｃ＝2.1モル／
NaOH；“Antimicr.Ag.Chemother.”、15
巻、677頁（1979年）〕 (b) ガスクロマトグラフイ：Ｒ−エナンチオマー
97.5％ Ｓ−エナンチオマー2.5％ エナンンチオマーは、トリフルオルアセトアン
ヒドリドでトリフルオルアセチル化しかつオルト
蟻酸エチルエステルと加熱することによりエステ
ル化した後にキラル相〔キラシル・バル
（Chirasil−Val）〕を用いて分離した。 イオン交換クロマトグラフイからのＳ−１−フ
エニルアセタミノ−エチルホスホン酸を含有する
フラクシヨンを合しかつ強く濃縮する。析出した
結晶を吸引濾取する。融点156〜157℃のＳ−１−
フエニルアセタミノ−エタンホスホン酸58.2ｇ
（47％；ガスクロマトグラフイ試験によりＲ−エ
ナンチオマー含有率0.5〜１％）が得られる。母
液を濃塩酸と共に還流下に15時間沸騰させる。溶
液を蒸発濃縮しかつ残渣をエタノール中に溶解す
る。PH５〜６が達成されるまでプロピレンオキシ
ドを滴加し、冷却しかつ析出した結晶を吸引濾取
する。融点284〜285℃（分解）のＳ−１−アミノ
エチルホスホン酸27.4ｇ（40％）が生じる。
H2O含有率1.3％ 〔α〕２９ Ｄ＝＋15゜（Ｃ＝2.1モル／NaOH） 光学的純度： (a) 旋光度から：Ｓ−エナンテオマー95％ 文献：〔α〕２０ Ｄ＝＋16.8゜〔Ｃ＝2.1モル／
NaOH）；“Antimicr.Ag.Chemother.”、
15巻、377頁（1979年）〕 (b) ガスクロマトグラフイ：Ｓ−エナンチオマー
96〜97％ Ｒ−エナンチオマー３〜４％ （この場合トリフルオルアセチル化はＮ−メ
チル−ビス−トリフルオルアセタミドで実施し
た。） 表２に例８及び９と同様にして得られた種々の
Ｒ・Ｓ−１−アシルアミノアルキルホスホン酸の
分割率を総括した。
【表】
【表】 【図面の簡単な説明】
第１図は本発明による１−アセタミノエチル−
ホスホン酸の分割反応の変換率／時間−曲線図、
第２図は本発明による１−フエニルアセタミノエ
チル−ホスホン酸の分割反応の変換率／時間−曲
線図である。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ １−アミノ−アルキルホスホン酸又は１−ア
    ミノ−アルキルホスフイン酸のラセミ体Ｎ−アシ
    ル誘導体を酵素分割し、次いで脱アシルすること
    によりその立体異性体を製造する方法において、
    酵素分割をペニシリン−Ｇ−アミダーゼを用いて
    行なうことを特徴とする１−アミノ−アルキルホ
    スホン酸又は１−アミノ−アルキルホスフイン酸
    の立体異性体の製法。 ２ エシエリキア・コリからのペニシリン−Ｇ−
    アミダーゼを使用する特許請求の範囲第１項記載
    の方法。 ３ エシエリキア・コリ（DSM1900＝
    ATCC11105）からのペニシリン−Ｇ−アミダー
    ゼを使用する特許請求の範囲第１項又は第２項記
    載の方法。 ４ ペニシリン−Ｇ−アミダーゼを固定化形で使
    用する特許請求の範囲第１項から第３項までのい
    ずれか１項記載の方法。 ５ 酵素分割を撹拌釜反応器又はカラム反応器中
    で実施する特許請求の範囲第４項記載の方法。 ６ 酵素分割を温度20〜60℃で実施する特許請求
    の範囲第１項から第５項までのいずれか１項記載
    の方法。 ７ 酵素分割をPH5.5〜8.5で実施する特許請求の
    範囲第１項から第６項までのいずれか１項記載の
    方法。
JP60210368A 1984-09-25 1985-09-25 １‐アミノ‐アルキルホスホン酸又は１‐アミノ‐アルキルホスフイン酸の立体異性体の製法 Granted JPS6188895A (ja)

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