JPS6188895A - １‐アミノ‐アルキルホスホン酸又は１‐アミノ‐アルキルホスフイン酸の立体異性体の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、１−アミノアルキルホスホン戚又は１−アミ
ノアルキルホスフィン酸の立体異性体の製法に関する。

従来の技術 １−アミノアルキルホスホン酸又は１−アミノアルキル
ホスフィン酸のペプチド類縁ｔｆＪｇ導体はグラム陽性
−及びグラム陰性困に対して抗菌性作用を有しかつ抗生
物′Ｘ（例えばペニシリン、セファロスボリン及びＤ−
シクロセリン）の活性を強化する。Ｌ−アラニン及びＬ
−アミノエチルホスホン酸からのジペプチドであるアラ
フオスファリンが特に重要である。

一般に、純粋な立体脣異体形から酵導される１−アミノ
アルキルホスホン酸又＆工１−アミノアルキルホスフィ
ン酸の誘導体及び特にＬ形〔Ｒ形、命令法に関してはＰ
、カフアルスキ及びその他（Ｋａｆａｒｓｋｉ　Ｉｔ　
ａｌ　）共著、°カナディア・ン・ジャーナル・オシ・
ケミカル・エンジニアリング（Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｃｈｅ
ｍ、）　’、６１巻、２４２５（１９，８３年）参照〕
からの誘導体は大きな生物学的活性を呈する〔西ドイツ
国脣許第２６０２１９３号明＃ｌ−１ｉＦ、　Ｆ、Ｒ，
アーテルトン及びその他（Ａｔｈｅｒｔｏｎ　ｅｔ　ａ
ｌ　）共著、１アンチマイクロビアル・エーゾエンッ・
エンド・ケモテラピ（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉｅｌ　Ａ
ｇｅｎｔＳ　ａｎｄ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　）１
５巷、６７７貞（１９７９手５月ン参照〕。

１−アミノアルキルホスホンば及び−ホスフィン酸の光
写活性形を工化字的な２セミ体分割又は元手油性前段階
の不★合成により表遺することができる〔Ｐ、カフアル
スキ及びその他共者、１力方デイアン・シャーナル・オ
シ・ケミカル・エンジニアリング１６１巻、２４２５（
１９８３年）　；　Ｊ、Ｗ、フーバ（Ｈｕｂｅｒ　）及
びその他共者、１テトラヘドロン・レターズ（Ｔｓｔｒ
ａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ　）’、５５巻、３０４
９（１９７９年）；Ａ、バラセラ（Ｖａｓｅｌｌａ　）
及びＲ，ベフレイ（Ｖｅｆｆ−τａｙ）共著、゛ヘルベ
チカ・キミカ・アクタ（Ｈｅ１ｖｅｔｉｃａ　Ｃｈｌｍ
、　Ａｃｔａ　）−１６５巻、１９８３（１９８２年）
参照〕。

Ｊ、テレジ（Ｔｅｌｅｇｄｉ　）及びその他共著、”Ｉ
ｃｔ。

Ｃｕｎｆ、　　Ｃｈｅｍ、　　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｕｌ、
　　Ｂｉｏｌ、　　Ａｃｔ、　　Ｎａｔ。

Ｐｒｏｄ、（Ｐｒｏｃ、）、　１．Ｍｅｅｔ、’、Ｖｏ
ｌ−３（２）　、２２１〜２２５貞（１９８１年）によ
りラセミ体のＮ−アセチル−又はＮ−クロルアセチルア
ミノホスホン酸をアミノ戚アシシーゼにより元学拮抗体
に分割することが記載されている。しかしこの方法には
多量の酵素（＋！Ｐ素５０〜８０ダ／基負１ミリモル）
及び長い分割時間（６７〜４０゛０で数時間）を必要と
する。

発明が解決しようとする問題点 それ故、本発明の味題シエ、間単にかつ独断的に（広い
基Ｘ特異性、賜い光学活性度、酵素安定性及び立体性異
性、高い分割率、艮好な工業的な拠施可能性）高度な光
学的純度の異性体を生成する、１−アミノアルキルホス
ホン酸又は１−アミノアルキルホスフィン酸の立体異性
体の酵素的方法を開示することである。

問題点七解犬するための手段 この峰題は、１−アミノアルキルホスホン酸及び−ホス
フイン酸のラセミ体Ｎ−アシル誘導体の１＃索分割をペ
ニシリン−〇−アミダーゼ（ペニシリン−Ｇ−アシラー
ゼ）により実施して解決することができる。

一ホスフィン戚のＮ−アセチル騨導体、丈に他のＮ−ア
シル誘導体をペニシリン−〇−アミダーゼにより尚い分
割率及び高い光学的純度で立体選択的に分割し得ること
が判明した。分割率はＮ−アシル基の好適な選択により
圧右することができる。

それ故、本発明の目的は、１−アミノアルキルホスホン
酸又は１−アミノアルキルホスフィン酸の２セミ体Ｎ−
アシル誘導体を酵素分割し、次に脱アシルすることによ
りその立体異性体を製造する方法であり、これは酵素分
割をペニシリン−〇−アミダーゼにより実施することを
特徴とする。

技術水準から、ペニシリンアシラーゼを数αのＮ−アシ
ル誘導体の酵素分割に、つまりα−アミノ酸のＮ−アシ
ル肪導体及び第一アミンとアミノアルコールのＮ−フェ
ニルアセチル誘導体の分割にＣＤ、ロツシイ（Ｒｏｓｓ
ｉ）及びその他共着、′ジャーナル・オシ・オルガ−ニ
ック・ケタストＩＩ　（，１−ｎｒａ、　Ｃｈｏｍ　）
−Ａ　Ａ春−２Ｅ　Ａ　７頁（１９７８年）；Ｄ、ロツ
シイ者、′ジャーナル・オシ・オルガーニツタ・ケミス
トリ″４４巻、２２２２貝（１９７９年）：Ａ、ロメオ
（Ｒｏｍｅｕ　）及びその他共著、′テトラヘドロン・
レターズ”、２１巻、１７９９頁（１９７１年）参照〕
、ペプチド中に組み込まれたリジンのフェニルアセチル
保護基の脱離にＣＦ、プロトニック（Ｂｒｏｔｎｉｋ　
）及びその他共著、１コレクシヨン・オシ・チェコスロ
バク・ケミカル・コミュニケーションズ（Ｃｏ１１ｅｃ
ｔ、　Ｃｚｅｃｈｏｓｌｏｖａｋ、Ｃｈｅｍ。

ｃｏｍｍｕｎ　、　）″、４６巻、１９８６頁（１９８
１年）〕、〕抗生物買Ｎ−アシルチェナマイシの分割に
（ヨーロッパ特許００００９３１号）及びＬ−ホスフィ
ノトリシン（Ｌ−２−アミノ−４−メチルホスフィノ−
ＦＩ６［）のラセミ体の分割によるそれの製造に（ヨー
ロッパ特許出願用８１１１０４７４．４号）便用するこ
とは公卸である。従来、１−アミノアルキルホスホン酸
又は−ホスフイン酸ノＮ−アシル肪纏体の酵素分割にペ
ニシリン−アシラーゼを便用することは知られていなか
った。

しかし４買のアミノば部分の備かな変化かペニシリン−
〇−アミダーゼの酵素油性の著しい低下ｔもたらすこと
（１昶られている〔人、プラスキー（Ｐｌａｓｋｉｅ　
）及びその個共著、“ジャーナル・オシ・アンチビオテ
ィクス（Ｊ　、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）；６１巷、７
８６頁（１９７８年）〕。それ改、α−アミノ酸及び第
一アミンのＮ−アシル訪４体ヲ酵素分割することに関し
て仰られているペニシリンアシラーゼの使用からは、１
−アミノアルキルホスホン酸及び−ホスフイン酸のＮ−
アシルｄ導体もペニシリンアシラーゼに酵素分割によっ
て高い反応速度（分割率）及び尚い光学的純度で立体選
択的に分割し得るとは予測し得な゛かった。

本発明方法はＮ−プシルーＲ，５−１−アミノアルキル
ホスホン酸及び−ホスフインばに対して非常に広範な基
買特異性を有する。一般に分割活性は１−アミノホスホ
ン酸又は−ホスフィン酸の炭素数（連顕艮）の堀加に伴
なって低下し、臀に分割油性及び分割率は１−アミノ基
での置侠基の橿知、従ってアシル基の種類に左右される
。それ改、例えば１−アセタミノーエチルホスホン戚は
比活性０．５Ｕ／、ｆで反応し、これに対して１−フェ
ニルアセタミノーエチルホスホン酸は比活性３０００　
Ｕ／、？で反応する。

Ｎ−アシル基の好適な選択により、アミノアルキルホス
ホン酸又は−ホスフイン酸の高い炭素数により惹起され
る活性反の低下をｒＡ整することができる。

本発明で使用するペニシリン−〇−アミダーゼ（ペニシ
リン−Ｇ−アシラーゼ、ペニシリン−アミドヒト四ラー
ゼ）は、ペニシリンを６−７ミノペニシラン酸に分割し
得るような酵素である。それは原核生物、例えば特にエ
シェリキア−コリ（ＥｓｃＪｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　
）から生成しＣＭ。

コ−Ａ／　（ｅｏｌｅ　）及びその他共著、′メンッズ
・サ オブーｘンーｙ、＝ｒ、イモロジ（Ｍｅｔｈ、　Ｅｎｓ
ｙｍ＋）’。

４６巷、６９８頁（１９７５年）〕かつＥ、Ｃ。

査号３．５．１．１１で迫られている。本発明で丑に優
れているのはエシェリキア・ｊ　’）　（Ｅｓｃｈｅτ
１ｃｈｉａｃｏｌｉ　）Ｄ８Ｍ１９００　（ＡＴＣＣ１
１１０５）からのペニシリン−Ｇ−アミダーゼである。

本発明で使用するペニシリン−〇−アミダーゼは遊離の
水浴性Ｉ！ｌ酵素とし【、例えば凍結乾燥体として又は
水不溶形の固定化酵素として使用することができる。

一般に、基′Ｘ一度は０．１モル／Ｊ乃至水性反応媒体
か又は水性有機反応媒体中のＦｕｎ限界の間である。水
性有機反応性媒体としては、酵素反応に常用の水性有機
反応性媒体、特に水に加えて、妹に水と混合可能な又は
水中に良好に浴ける有機溶剤、時に例えばエタノールの
ような低級アルコールを含有するようなものを使用する
。殊に、水性反応性媒体を使用する。

反応温度は２０〜６０℃であると有利であり、温度６７
゛Ｃが特に優れている。特に、反応時間は＃１ｇ活性、
酵素及び、ｆｉ負の一度並びに反応温度に左右され、一
般に反応時間２〜１２０時間で作粟する。本発明で使用
する酵素はＰＨ約５．０〜８．５で十分に活性であり、
至適−値は７である。それ改６、林にｐｉ−１５，５〜
８．５、竹に−７で作業する。その瞳に、反応は緩衝剤
なしで又は例えばリン酸＠楓両液のような好適な緩衝剤
の存在において実施することができ、Ｆｋｉ値を目動滴
′＃：装！糸で制御すると有利である。

軸に、工菓的規俣の大量バッチの几め及び継断的理由（
酵素の繰返し使用、安定性）から、酵素を固定化形で使
用すると有利であり、それ故反応を固定化しｆｃ酵素に
好適な反応器〔例えばカラム式反応器又はバッチ式反応
器、例えばＨ，Ｄ、グレー７（Ｇｒｉｉｆ　）著、′フ
ァルマツィ・イン・ウンデシル・ツアイト（Ｐｈａｒｍ
ａｚｉｅ　１ｎｕｎｓｅｒｅ’ｒ　Ｚｅｉｔ　）″、６
巻、４３頁（１９７７年）・参照〕中で連続的に例えば
カラム式で又は非連続的に（バッチ式で）実施すること
ができる。

固定化酵素としては、例えば支持体結合のペニシリン−
〇−アミダーゼ〔ベーリンガー・、マンハイム有限会社
（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ　ＧｍｂＨ
））が好適である。ペニシリン−Ｇ−アミダーゼは反応
条件下に畝週間生物学的に又は機械的に安定であり、そ
れ故反応器中で味返し使用することがでさ、４０日後（
０，２モル／４貴浴液石、６７℃）に枯注度偵失く５％
であった。反応器としてを工例えば攪拌金式反応器のよ
うなバッチ式反応器が被れている。これらの反応器では
至適な一制御は簡単に１条的に実施することができる。

酵素分割を藺単に公知方法で分析的に追跡することがで
きる。妹に、Ｎ−アセチル誘導体の分割は非連続的な酵
素のアセテート測定により追跡し、他のＮ−アシル銹導
体、例えばクロルアセチル−又はフェニルアセチル誘導
体の分割は遊離アミノ基を測定するための公知のニンヒ
ドリン法により追跡すると肩オＵである。立体選択分割
は単離し７ｔ、Ｒ−ｉ−７ミノホスホン酸の旋光度測定
を介しかつ５０％の変換率省ＶＩＩ算を介して証明する
ことができる。工業用反応器は反応容液中の炭光匿変化
のｇ、測定により調節することができる。

＃累分割による反応混合吻（分割バッチ）の後処理は例
えば仄の２つの方法により行なうことができる： ｔ　酢酸で酸性にし友反応混合物を蒸発濃縮しかつ５−
１−アシルアミノ−フルキルホスホン酸及びアシル基の
酵素加水分解により遊離したカルボン戚勿エタノールで
抽出する。残漬として、エタノールに不溶のＲ−ｉ−ア
ミノアルキルホスホン酸が残留する。

２、分割バッチをＨ＋型の強酸性イオン交換体でクロマ
トグラフィ処理を行なう。その際に済離剤としての水に
より順次に５−１−アシルアミノ−アルキルホスホン酸
がアシル基のカルボン酸と一緒に、次いでＲ−ｉ−アミ
ノアルキルホスホン酸が純粋な形で浴寵する。アシル基
のカルボン酸を右壁浴剤による簡単な抽出により５−１
−アシルアミノアルキルホスホン酸から分離することが
できる。一般に、ホスホン酸は水相中に残留しかつ蒸発
濃縮により単離することができる。Ｎ−アシル化された
５−１−アミノアルキルホスホンを例えば６モル／！の
水性ＨＣｊと沸騰させることにより脱アシルする。

アミノホスホン１ｇは公知方法で、エタノール中のその
ヒドロクロリドの浴液をプロピレンオキシドで処理する
ことにより又はＨ＋［の強［１１イオン父換体を用いて
クロマトグラフィ処理することにより単離する。

１−アシルアミノ−アルキルホスフィン酸の分割バッチ
の後処理も同様にして実施することができる。

不発明方法により１−アミノアルキルホスホン酸及び１
−アミノアルキルホスフィン酸のＲ−及びＳ−異性体が
茜い光学的＃！（＞９５％）で得られる。

特に本発明方法は式： ％式％） 〔式中Ｒ２は場合により例えばハロゲン、ヒドロキシ、
炭素原子１〜６個のアルコキシ、フェニル及び／又はフ
ェノキシによりｔａＬ３Ｍされていてもよい炭素原子１
〜６個、荷に１〜４個を有する分枝鎖状か又は有利には
直鎖状のアルキル基を表わすか又【エフェニル基を表わ
す〕の１−アミノアルキルホスホン酸の立体異性体の製
造に好適である。４Ｒ２は例えばメチル、ヒドロキシメ
チル、エチル、プロピル、イソゾロビル、ブチル、イン
エチル、ｔ−ブチル、フェニル又はベンシルである。同
様の博成の１−アミノアルキルホスフィン酸に関しても
Ｒ２は同じものを表わしてよい。

本発明による酵素分割の出発物質として使われるラセミ
体の１−アシルアミノ−アルキルホスホン酸又は−ホス
フイン酸において、特にアシル基Ｒ１−Ｇｏ−は、Ｒコ
が炭素原子１〜６個を有する分枝鎖状か又は有利に直鎖
状のアルキル基ヲ表わすようなものであり、このアルキ
ル基は場合によりハロゲン、ヒドロキシ、炭素原子１〜
６個のアルコキシ、フェニル、フェノキシ及び／又はチ
ェニルにより置侠されていてもよく、その敵にフェニル
又はフェノキシも例えば炭素原子１〜６個のアルキル、
ヒドロキシ、ニトロ、アミノ、ハロゲン及び／又は炭素
原子１〜６１尚のアルコキシによりＩＪｔｍされていて
よい。基Ｒ１は例えばメチル、エチル、クロルメチル、
ベンジル、フェノキシメチル、２−　　メチルベンシル
、４−ニドーロペンシル、４−ヒドロキシベンジル、４
−７ミノペンゾル、チェニル−（２）−４−クロルペン
シル又は４−メトキシベンジルである。

出発物質として使用する１−７シルアミノーアルキ、ル
ホスホン戚は、ペプチド化学で公知の方法により相応す
る１−アミノアルキルホスホン酸を活性化されたカルボ
ン酸酵導体又はカルボン酸と、縮合剤の存在において反
応させることにより製造することができる。１−アシル
アミノ−アルキルホスフィン酸も同様にして得られる。

活性化されたカルボン酸鰐導体としては例えば酸塩化物
、対称無水物又は炭酸モノアルキルエステルとの混合無
水物、活性エステル、例；ｔ、−ハル−ニトロフェニル
エステル、２，４゜５−ト！Ｊクロルフェニルエステル
、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド又は１−Ｎ−ヒトμキ
シベンゾトリアゾールエステル−を使用することができ
る。主に、縮合剤としてはカルボジイミド、例えばジシ
クロへキシルカルボジイミド及びＮ。

Ｎ′−カルボニルジイミダゾールが該当する。

両性イオンの１−アミノアルキル−ホスホン酸のアミノ
基は、ホスホン酸基をアルカリ金属塩基、例えばＮａＯ
Ｈか又は第三アミン塩基、例えばトリエチルアミンで中
和して遊離すると有利である。アミノアルキルホスホン
酸をそのアルキルエステル又はトリアルキルシリルエス
テルの形で活性化カルボン酸でアシル化することもでき
る。アシル化反応後に、ホスホン酸アルキルエステルを
公知方法で氷酢酸中の臭化水素又はトリメチルヨードシ
ラン又はブロムシランもしくはトリメチルクロルシラン
／沃化ナトリウムと反応させることにより分割すること
ができる。トリアルキルシリルエステルは非常に簡単に
水によって加水分解される。

アシル化反応は反応成分の加水分解安定性に応じて水も
しくは水／アルコール混合物又は不活性有機浴剤、例え
ば塩化メチレン、アセトン、アセトニトリル、テトラヒ
ドロンラン、ジメチルホ４ルムアミド等中で芙施するこ
とかできる。

ホスフィン酸誘導体にも相当する。

ラセミ体の１−アミノアルキルホスホン戚及゛び一ホス
フィン咳は公知であるか又は公知方法により製造するこ
とができる〔例えば”シンチーシス（５ｙｎｔｈｊｓｉ
ｓ　）’、８８５　（１９７７年）、４７９（１９７８
年）　；　＠Ｐｏ１．　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、’、５２巻、
２２７１頁（１９７８年）参照〕。

実施例 次に本発明を実施例により詳説する。

１．１−アシルアミノ−アルキルホスホン酸の合成 例　　１ Ｒ、Ｓ　−１−７ミ／！チ＃；ｔ＝スホンｒＲ１ｏｇを
水６０ｒＩＬｔ中に溶かしかつ攪拌下にＰＨ５’−！で
でＮａＯＨ４モル／、、ｅ’ｆｒＪＪＤえる。その後、
水冷下にフェニル酢酸クロリド１２．３Ｉｉｈ１両加し
、その際にス応混合物の−をＮａＯＨ４モル／ぷの６加
により９に保持する。水浴ｔ−取り除き、かつ−１区が
ＮａＯＨを更に添加しないで９で停止するまで混合＠７
に嵐温で攪拌する。アルカリ性相をエーテルで抽出し、
最後に、水相を塩ばで酸性化する。白色微結晶が沈殿し
、これを吸引濾取しかつ乾燥させる。精製するためにイ
ンブチルメチルケトンから丹結晶させる。

躯点１４０〜１４６℃（分解）のＲ，５−１−フェニル
アセタミノーエチルホスホン＠　９．５、Ｖ（４９Ｌ）
が４られる。

次の表１に記載し几１−アシルアミノーアルキルホスホ
ン酸も例１と同様に製造し几。一部の化合物は酸性の水
相から酢酸エチルエステルで抽出することにより又を工
強酸性イオン交換体（Ｈ＋型）を介して濾過することに
より単離し几（表１の注参照）。

ａ）生成物を酢酸エチルエステルを用いて酸性水相から
抽出する。

ｂ）酸性化し友水相を強酸性イオン交換体（Ｄｏｉ５０
．Ｈ“型）を介して濾過しかつ生成物を水で溶離する。

例　　２ 例１と同様にしてＲ，８−１−アミノエチル−メチルホ
スフィン酸の使用下にＲ，８−１−フェニルアセタミノ
エチルーメチルホスフイン酸が得られ、これｔｍ性化し
ｔ水相を酢酸エチルエステルで抽出することにより単離
しかつエタノールから再結晶することにより精製する。

融点１７６〜１７５°０ 例　　６ α−アミノベンジルホスホン酸４．３ｇを氷酢酸１１．
５−及び無水酢酸４．７１１と共に攪拌下に１６０°０
に２時間加熱する。反応混合物を蒸発−縮し、水中に溶
かし、水浴上で２０分間加熱しかつ再度蒸発濃縮する。

残留するシーツブ状物をエタノール中に熱時に溶かしか
つ物質を多量のエーテルの添加により沈殿させる。冷却
後、吸引濾過する。粗製生成物をエタノール／エーテル
から再ｒｉ晶させる。融点２０５〜２０７−０のＲ，８
−α−７セタミノーペンジルホスホン酸４＆（７７％）
が得られる。

例　　４ Ｒ，８−ｉ−アミノ−２−メチル−プロピルホスホン酸
２．６１を水６〇−中に溶解する。

ＮａＯＨ４モル／Ｊ３の添加により溶液のｐ）Ｉ値を９
にしかつ続いて無水酢酸４．５１を滴加する。−ａをＮ
ａＯＨ４モに／Ｊｏ添加により９に保持する。反応ｍ液
を強酸性イオン交換体（ｐｏｗｇｘ■５０、Ｈ＋型）３
００＊ｔ−介Ｌ？＋１１４する（溶離剤水）。生成物含
有フラクションを蒸発濃縮しかつ残渣をエタノール／エ
ーテルから再結晶させる。融点１７８〜１８０℃のＲ，
Ｓ−１−７セタミノー２−メチル−プロピルホスホン酸
１．８．Ｆ（７３％）が得られる。

例　　５ ｐ−ヒドロキシフェニル６ｔＲ３，０４，Ｆ及びＮ−メ
チルモルホリン２．０２　ｇを塩化メチレン１０〇−及
びジメチルホルムアミド１０ｄから　１の晶金物甲に浴
かす。溶液を一１５°に冷却しかつクロル＠戚インブチ
ルエステル２．７３　！ｉを滴加する、反応混合物ｆｔ
、３０分間−１５°で攪拌しかつＲ，８−Ｎ−）リメチ
ルミリルアミノエチルーホスホン酸−ビストリメチルシ
リルエステルの溶液を滴加する。混合物ｔ−−１５°、
０°及び室温でそれぞれ１時間攪拌する。その彼、濃縮
乾固しかつ残渣を水中に取る。−値を少量の塩酸の添加
により２に調節し、エーテルで、引続いてｎ−エタノー
ルで抽出する。ブタノール相を濃縮しかつ残渣をイオン
交換体（Ｄｏｗｇｘ　５０”　Ｈ”　ｍ　）　Ｉ　ＪＪ
　中”Ｑ　水テｐ　ｏ　マ）　／”ラフイ処理する。生
成物を含有するフラクションを蒸発１縮しかつ材製のた
めにインプロパツール／リグロインから再結晶する。融
点１８５〜１８８°（分解）のＲ＊　Ｓ　−１−（ｐ−
ヒドロキシフェニルアセタミド）−エチルホスホン酸５
８ｇ（７３チ）が得られる。

使用したＮ−）リメチルシリルアミノエチルホスホン龍
ビストリメチルシリルエステルは、１−アミノエチルホ
ス、ホン［３＆’ｋ）！Ｊメチルクロルシラン９．４−
及びトリエチルアミン１０．５−と共に塩化メチレン１
００ｗｔ中で１５分間加熱することにより製造する。こ
の溶液を直接アシル化反応に使用する。

例　　６ ｐ−ニトロフェニル酢酸３．６２１１　及ヒＮ−ヒドロ
キシスクシンイミド２．４２．ｌｉ’をテトラヒドロフ
ラン２０ｍ及び塩化メチレン２０−からの混合物中に溶
かしかつ一１０°で塩化メチレン１０−中のシシクロヘ
キシルカルボゾイミド４．５４．９の浴０．を加える。

混合物を００で１時間及び室温で６時間攪拌する。析出
した沈殿を濾取し、熱い酢酸エチルエステルで浸出する
。濾液を蒸発濃縮し、残渣をエタノールと沸騰させかつ
溶液を冷却する。晶出した生成物を吸引濾取する。

ｐ−ニトロフェニル酢酸−Ｎ−ヒドロキシスクシ゛ンイ
ミドエステル３．７５．９が得られ、これ全ソメチルホ
ルムアミド５〇−中に溶解しかつ室温でＲ＋　Ｓ　−Ｎ
　−ト！Ｊメチルシリルアミノエチルーホスホン醒−ビ
ストリメチルシリルエステルの浴液を加える（　Ｒ＃　
８−１−アミノエチルホスホン［１，８８１！、）リメ
チルクロルシラン５．９　ｍｌ及びトリエチルアミン６
．５５−から製造、前記参照）。反応混合物を室温で４
時間攪拌し、蒸発濃縮しかつそれに厘炭酸ナトリウム溶
液及びエーテルを加える。エーテル相を分離しかつ水相
を更に２回酢酸エチルエステルで抽出する。

最後に、水相を（ｆｉＨｃｊで酸性にしかつ冷蔵庫に保
存する。析出した結晶を吸引濾取しかつ乾燥サセル。Ｒ
，８−１−（ｐ−ニトロフェニルアセタミド）−エチル
ホスホン［２，１，９（３６％）が得られ、更に［ｄす
るために、メタノール／エタノールと若干量のりグロイ
ンの混合物から再結晶させることができる。融点２１０
〜２１５℃（分解） 例　　７ 例６により得られたＲ＋５−ｉ−（ｐ−ニトロフェニル
アセタミド）−エチルホスホン酸６ｇを水１８〇−及び
エタノール６０−からの混合物中で触媒としてのＰｄ／
Ｃ’ｉ介して水素化する。氷菓化する際に、生成物が晶
出する。反応混合物に、白色反応生成物が溶解するまで
ＮａＨＣＯ３を加える。雁媒を濾別しかつ濾液をＨ己２
モル／−ｅの添加によりＳ５にａｎｗＪする。しばら＜
Ｌ７’Ｃ後で結晶した生成物を濾取する。融点が６００
”０を上畑っているＲ、Ｓ−１−（１）”アミノフェニ
ルアセタミド）−エチルホスホン酸１．２２ｇ（４５％
）が得られる。

２、攪拌歪式反応器中での調製分割 例　　８ Ｒ，８−ｉ−アセタミノーエタンホスホン酸の分割 凍結乾燥した支持体結合のペニシリン−〇−アミダーゼ
（ベーリンガー・マンノ・イム有限会社）８０ｙを弱く
緩衝させ九〇、１冫 基質溶液１！（Ｔ廚０．０２モル／Ｊ３，　ｐ）ｌ＝７
．０）中で反応時間の間６７℃で激しく攪拌しく諷攪拌
機）、引続いて吸引濾斗を介して濾過し、洗砂しかつ更
に使用するために凍結乾燥する。

添付図面の′ｔ７ｇ１図は非連続的な分割反応の変換率
／時間−曲線図である。濾液を取分分離のために公矧方
法（イオン交換体、抽出）で更に後処理する。更に長い
反応時間では微生物発生を回遊するために保存剤の添加
又は基′Ｘ浴液の滅Ａ譚過をするのが望ましい。

例　　９ Ｒ，５−１−フェニルアセタミノーエタンホスホン敵の
分割 例８と同様に行なうが、凍結乾燥されている支持体゛＼
結合のペニシリン−〇ーアミダーゼ５００Ｔｎ９／基負
ｍ′／ｙ．ぷを使う。

第２図は非連続的な分割反応の反応経過（変換率／時間
−曲線図）を表わす。

後処理“に当り、Ｒ，５−１−フェニルアセタミノーエ
タンホスホン［２５０ｇからの分割バッチ（分割率９８
．２チ）の浴液ｌ／３を氷酢酸１５０−で敵性にする。

混合物をエーテルで抽［有］ 出しかつ水相全強敵性イオン交換体（　ＤＯＷＥＸ’　
５ｏ、Ｈ”Ｗ）５１３を通す。水で浴寵する。第一フラ
クション（　２．２　−６　）は昨歌を含有する。

第二フラクション（約２Ｊ３）中には５−１−フ二二ル
アセタミノエチルホスホン戚カ存在する。

最後に、浴離各瀘約８！でＲ−１−アミノエチルホスホ
ンばか俗離する。この処理法を炊りの分割バツチガに関
して株返す。ニンヒドリン陽性のフラクションを合しか
つ蒸発濃縮させる。

粗製生成物をエタノール／水から！＋結晶させる。

融点２９２〜２９６°（分解）のＲ−１−アミンエチル
ホスホン［６０．１ｇ（８９％）が得られる。

〔α）！ｌ０＝−１　５．５°（Ｃ＝２．１モル／　Ｎ
ａＯＨ　ｌ　）光学的純度： ａ）旋光度から：Ｒーエナンチオマー９６％　、文献：
　〔α）”＝−１　６．９°［：Ｃ＝２．１モル／　Ｎ
ａＯＨ　ｌ　；′″Ａｎｔｉｍｉｃｒ．　Ａｇ．　Ｃｈ
ｅｍｏｔｈｅｒ．’、１５巻、６７７頁（１９７９年）
〕 ｂ）カスクロマトグラフィ：Ｒ−エナンチオマー９７．
５％Ｓ−エナンチオマー２．５％ エナンチオマーハ、トリフルオルアセトアンヒドリドで
トリフルオルアセチル化り、かつオル）１ｍエチルエス
テルと加熱することによりエステル化した後にキラル相
〔キラシル・パル（Ｃ！ｈｉｒａｓｉｌ−Ｖａｌ　））
を用いて分離した。

イオン父侠クロマトグラフィからの５−１−フェニルア
セタミノーエチルホスホンｘｉ−含ｗするフジクション
を合しかつ強（濃縮する。析出した結晶を吸引濾取する
。融点１５６〜１５７’Ｏの５−１−フェニルアセタミ
ノーエタンホスホン１Ｗ５８．２ｇ（４７％；ガスクロ
マトグラフィ試験によりＲ−エナンチオマー含有＄　０
．５　＝１％）が得られる。母液を濃塩酸と共に還流下
に１５時間沸騰させる。溶液を蒸発濃縮しかう残渣をエ
タノール中に溶解する。Ｐ）′１５〜６が達成されるま
でプロピレンオキシドを滴加し、冷却しかつ析出した結
晶を吸引濾取する。融点２８４〜２８５℃（分解）の５
−１−アミノエチルホスホンｒＲ２７，４ｇ　＜　４０
％）カ生じる。

Ｈ２０含有率１．６チ 〔α）”＝＋１５°（Ｃ＝２．１モル／　ＮａＯＨｌ　
）光字的純度： ａ）旋光度から：Ｓ−エナンチオマー９５％文ｖ　：　
　（α〕甘せ＋１６．８°（ｃ　＝　’ｌ　、　ｌ　モ
に／　Ｎａ０ＨＪ　）”Ａｎｔｉｍｉｃｒ、　Ａｇ、　
Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、”、１５巻、６７７頁（１９７９
年）〕 ｂ）　　ガスクロマトグラフィ：Ｓ−エナンチオマー９
６〜９７％ Ｒ−エナンチオマー６〜４％ （この場合トリフルオルアセチル化はＮ−メチル−ビス
−トリフルオルアセタミドで実施した。） 表２に例８及び９と同様にして得られｔ４々のＲ，８−
１−アシルアミノアルキルホスホン酸の分割率ｔ−酩括
し比。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明による１−アセタミノエチルーホスホン
酸の分割反応の変換″４／時間−曲線図、第２図は本発
明による１−フェニルアセタミノエチルーホスホンばの
分割反応の変換率／時間−曲線図である。 ｊＧｊ ■−アセタミノエチルーホスホン酸の分割酵素：固定化
ペニシリン−Ｇ−アミダーゼ基質濃度　０．１２モル 発明１者　　ヨゼフ・マイアー　　ドイツ連邦共和国ヴ
アセ１５ イルハイム・シュメトルシュトラー イルハイム・カルヴエンデルシュト 手続補正書（自発） 昭和６０年１０月２１日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、１−アミノ−アルキルホスホン酸又は１−アミノ−
   アルキルホスフイン酸のラセミ体Ｎ−アシル誘導体を酵
   素分割し、次いで脱アシルすることによりその立体異性
   体を製造する方法において、酵素分割をペニシリン−Ｇ
   −アミダーゼを用いて行なうことを特徴とする１−アミ
   ノ−アルキルホスホン酸又は１−アミノ−アルキルホス
   フイン酸の立体異性体の製法。 ２、エシエリキア・コリからのペニシリン−Ｇ−アミダ
   ーゼを使用する特許請求の範囲第１項記載の方法。 ６、エシエリキア・コリ（ＤＳＭ１９００＝ＡＴＣＣ１
   １１０５）からのペニシリン−Ｇ−アミダーゼを使用す
   る特許請求の範囲第１項又は第２項記載の方法。 ４、ペニシリン−Ｇ−アミダーゼを固定化形で使用する
   特許請求の範囲第１項から第３項までのいずれか１項記
   載の方法。 ５、酵素分割を撹拌釜反応器又はカラム反応器中で実施
   する特許請求の範囲第４項記載の方法。 ６、酵素分割を温度２０〜６０℃で実施する特許請求の
   範囲第１項から第５項までのいずれか１項記載の方法。 ７、酵素分割をｐＨ５．５〜８．５で実施する特許請求
   の範囲第１項から第６項までのいずれか１項記載の方法
   。