JP2666890B2 - 光学活性（＋）−４，４，４−トリフルオロ−３−（インドール−３−）酪酸の製造方法 - Google Patents
光学活性（＋）−４，４，４−トリフルオロ−３−（インドール−３−）酪酸の製造方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、光学活性（＋）−４，
４，４−トリフルオロ−３−（インドール−３−）酪酸
の製造方法に関するものである。更に詳細には、根の顕
著な伸長促進作用を有する光学活性（＋）−４，４，４
−トリフルオロ−３−（インドール−３−）酪酸を、ラ
セミ体である４，４，４−トリフルオロ−３−（インド
ール−３−）酪酸の２，２，２−トリフルオロエチルエ
ステルから酵素を用いた立体選択的加水分解によって製
造する方法に関するものである。
４，４−トリフルオロ−３−（インドール−３−）酪酸
の製造方法に関するものである。更に詳細には、根の顕
著な伸長促進作用を有する光学活性（＋）−４，４，４
−トリフルオロ−３−（インドール−３−）酪酸を、ラ
セミ体である４，４，４−トリフルオロ−３−（インド
ール−３−）酪酸の２，２，２−トリフルオロエチルエ
ステルから酵素を用いた立体選択的加水分解によって製
造する方法に関するものである。
【０００２】光学活性（＋）−４，４，４−トリフルオ
ロ−３−（インドール−３−）酪酸（以下「光学活性
（＋）−ＴＦＩＢＡ」という）は、含フッ素β−インド
ール酪酸類の化合物の一つであり、植物の根の伸長促進
作用等の植物成長調節活性を有している。
ロ−３−（インドール−３−）酪酸（以下「光学活性
（＋）−ＴＦＩＢＡ」という）は、含フッ素β−インド
ール酪酸類の化合物の一つであり、植物の根の伸長促進
作用等の植物成長調節活性を有している。
【０００３】このように、光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡ
は、植物成長調節物質としての作用を有する重要な化合
物であり、作物の増収、果樹栽培等の農業及び園芸への
幅広い応用が可能である。
は、植物成長調節物質としての作用を有する重要な化合
物であり、作物の増収、果樹栽培等の農業及び園芸への
幅広い応用が可能である。
【０００４】
【従来の技術】植物の生育を促進する作用物質、いわゆ
るオーキシンとしては、インドール−３−酢酸（ＩＡ
Ａ）及びその誘導体（インドール−３−酢酸メチル、イ
ンドール−３−アセトアミド等）が古くから知られてい
る。
るオーキシンとしては、インドール−３−酢酸（ＩＡ
Ａ）及びその誘導体（インドール−３−酢酸メチル、イ
ンドール−３−アセトアミド等）が古くから知られてい
る。
【０００５】また最近になって、含フッ素β−インドー
ル酪酸類の化合物が開発され、それらの化合物、即ち
４，４，４−トリフルオロ−３−（インドール−３−）
酪酸（以下「ＴＦＩＢＡ」という）、４，４，４−トリ
フルオロ−２−ヒドロキシ−３−（インドール−３−）
酪酸及び４，４，４−トリフルオロ−３−（インドール
−３−）ブチロニトリルに強い植物の根の伸長促進作用
があることが知られている（特開平５−２７９３３
１）。
ル酪酸類の化合物が開発され、それらの化合物、即ち
４，４，４−トリフルオロ−３−（インドール−３−）
酪酸（以下「ＴＦＩＢＡ」という）、４，４，４−トリ
フルオロ−２−ヒドロキシ−３−（インドール−３−）
酪酸及び４，４，４−トリフルオロ−３−（インドール
−３−）ブチロニトリルに強い植物の根の伸長促進作用
があることが知られている（特開平５−２７９３３
１）。
【０００６】更に、不斉炭素を有するラセミ体ＴＦＩＢ
Ａのエチルエステルに酵素を作用させて選択的に加水分
解することにより、光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡが得ら
れ、ラセミ体ＴＦＩＢＡに比べ強力な根の伸長促進作用
を有していることが知られている。この中で検討された
酵素の内、リパーゼＰＳ、リパーゼＡＫ、リパーゼＡ
Ｙ、プロテアーゼＭが光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡを生
成し、特にリパーゼＡＫを用いた場合に光学活性（＋）
−ＴＦＩＢＡが立体選択性、光学純度高く生成すること
が知られている（特開平６−５６７７４、J. Fermentat
ion and Bioengineering ７６：１７８（１９９
３））。
Ａのエチルエステルに酵素を作用させて選択的に加水分
解することにより、光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡが得ら
れ、ラセミ体ＴＦＩＢＡに比べ強力な根の伸長促進作用
を有していることが知られている。この中で検討された
酵素の内、リパーゼＰＳ、リパーゼＡＫ、リパーゼＡ
Ｙ、プロテアーゼＭが光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡを生
成し、特にリパーゼＡＫを用いた場合に光学活性（＋）
−ＴＦＩＢＡが立体選択性、光学純度高く生成すること
が知られている（特開平６−５６７７４、J. Fermentat
ion and Bioengineering ７６：１７８（１９９
３））。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】従来のラセミ体ＴＦＩ
ＢＡが、かなり強い植物の根の伸長促進作用を有してい
る。作物の増収等の実用的な用途に利用するためには、
より強い植物の根の伸長作用を有する物質が望まれ、酵
素で分割された光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡが更に強い
活性を有することが知られている。しかしながら、従来
の酵素による含フッ素光学活性体の分割法は、酵素と基
質との反応性が低いため、実用的な用途に光学活性体を
供するためには不十分で、より効率的な酵素分割法の確
立が望まれていた。
ＢＡが、かなり強い植物の根の伸長促進作用を有してい
る。作物の増収等の実用的な用途に利用するためには、
より強い植物の根の伸長作用を有する物質が望まれ、酵
素で分割された光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡが更に強い
活性を有することが知られている。しかしながら、従来
の酵素による含フッ素光学活性体の分割法は、酵素と基
質との反応性が低いため、実用的な用途に光学活性体を
供するためには不十分で、より効率的な酵素分割法の確
立が望まれていた。
【０００８】
【課題を解決するための手段】そこで 本発明者等は鋭
意研究した結果、下記の化４で示される
意研究した結果、下記の化４で示される
【０００９】
【化４】 式（ＩＩ）の化合物を合成し、酵素を用いて加水分解す
ることにより、光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡを選択性及
び収率高く、従来法よりも著しく迅速に高効率で分割取
得することに成功した。
ることにより、光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡを選択性及
び収率高く、従来法よりも著しく迅速に高効率で分割取
得することに成功した。
【００１０】即ち、先ずラセミ体ＴＦＩＢＡ（Ｉ）と
２，２，２−トリフルオロエタノールとを反応させ、ラ
セミ体ＴＦＩＢＡの２，２，２−トリフルオロエチルエ
ステル（ＩＩ）を合成し、次いでエステラーゼ活性を有
する酵素を作用させ、該エステルを不斉加水分解させた
ところ、光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡ（ＩＩＩ）を選択
性及び収率高く、従来法よりも著しく迅速に高効率で製
造でき、本発明を完成させた。
２，２，２−トリフルオロエタノールとを反応させ、ラ
セミ体ＴＦＩＢＡの２，２，２−トリフルオロエチルエ
ステル（ＩＩ）を合成し、次いでエステラーゼ活性を有
する酵素を作用させ、該エステルを不斉加水分解させた
ところ、光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡ（ＩＩＩ）を選択
性及び収率高く、従来法よりも著しく迅速に高効率で製
造でき、本発明を完成させた。
【００１１】本発明の光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡ（Ｉ
ＩＩ）を酵素により不斉加水分解して取得するに当た
り、出発原料のラセミ体ＴＦＩＢＡ（Ｉ）は、既知の方
法により製造される（特開平５−２７９３３１）。
ＩＩ）を酵素により不斉加水分解して取得するに当た
り、出発原料のラセミ体ＴＦＩＢＡ（Ｉ）は、既知の方
法により製造される（特開平５−２７９３３１）。
【００１２】そしてラセミ体ＴＦＩＢＡ（Ｉ）から光学
活性（＋）−ＴＦＩＢＡ（ＩＩＩ）を得るには、次のよ
うに酵素による加水分解により行う。即ち、ラセミ体Ｔ
ＦＩＢＡ（Ｉ）と２，２，２−トリフルオロエタノール
とを反応させてラセミ体ＴＦＩＢＡの２，２，２−トリ
フルオロエチルエステル（ＩＩ）を合成した後、エステ
ラーゼ活性を有する酵素を作用させ、該エステルを選択
的に加水分解することにより光学活性（＋）−ＴＦＩＢ
Ａ（ＩＩＩ）を得る。
活性（＋）−ＴＦＩＢＡ（ＩＩＩ）を得るには、次のよ
うに酵素による加水分解により行う。即ち、ラセミ体Ｔ
ＦＩＢＡ（Ｉ）と２，２，２−トリフルオロエタノール
とを反応させてラセミ体ＴＦＩＢＡの２，２，２−トリ
フルオロエチルエステル（ＩＩ）を合成した後、エステ
ラーゼ活性を有する酵素を作用させ、該エステルを選択
的に加水分解することにより光学活性（＋）−ＴＦＩＢ
Ａ（ＩＩＩ）を得る。
【００１３】上記のラセミ体ＴＦＩＢＡ（Ｉ）から光学
活性（＋）−ＴＦＩＢＡ（ＩＩＩ）を得るまでの化学反
応を、下記する化５に示す。
活性（＋）−ＴＦＩＢＡ（ＩＩＩ）を得るまでの化学反
応を、下記する化５に示す。
【００１４】
【化５】
【００１５】（なお、＊は不斉炭素を、Ｒは炭素数１か
らのアルキル基又はＣＨ2ＣＦ3を示す。）
らのアルキル基又はＣＨ2ＣＦ3を示す。）
【００１６】本発明に使用するエステラーゼ活性を有す
る酵素としては、リパーゼ及び／又はプロテアーゼが好
ましく用いられ、リパーゼとしては、特にシュードモナ
ス（Psudomonus）属の生産するリパーゼ、例えば、リパ
ーゼＰＳ（商品名：天野製薬製）、リパーゼＡＫ（商品
名：天野製薬製）やキャンディダ（Candida ）属の生産
するリパーゼ、例えばリパーゼＡＹ（商品名：天野製薬
製）がより好ましく用いられ、プロテアーゼとしては、
アスペルギルス（Aspergillus ）属の生産するプロテア
ーゼ、例えばプロテアーゼＭ（商品名：天野製薬製）が
より好ましく用いられる。用いる酵素は粗製品であって
も、精製されたものであってもよい。また、これらの酵
素を生産する菌体も利用できる。
る酵素としては、リパーゼ及び／又はプロテアーゼが好
ましく用いられ、リパーゼとしては、特にシュードモナ
ス（Psudomonus）属の生産するリパーゼ、例えば、リパ
ーゼＰＳ（商品名：天野製薬製）、リパーゼＡＫ（商品
名：天野製薬製）やキャンディダ（Candida ）属の生産
するリパーゼ、例えばリパーゼＡＹ（商品名：天野製薬
製）がより好ましく用いられ、プロテアーゼとしては、
アスペルギルス（Aspergillus ）属の生産するプロテア
ーゼ、例えばプロテアーゼＭ（商品名：天野製薬製）が
より好ましく用いられる。用いる酵素は粗製品であって
も、精製されたものであってもよい。また、これらの酵
素を生産する菌体も利用できる。
【００１７】エステラーゼ活性を有する酵素を用いる不
斉加水分解反応は、適当な緩衝液及び／又は有機溶液の
存在下で行うと有利である。この場合の緩衝液として
は、使用する酵素の作用ｐＨに適した緩衝液が用いら
れ、例えば、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、グリシン緩衝
液等が用いられる。
斉加水分解反応は、適当な緩衝液及び／又は有機溶液の
存在下で行うと有利である。この場合の緩衝液として
は、使用する酵素の作用ｐＨに適した緩衝液が用いら
れ、例えば、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、グリシン緩衝
液等が用いられる。
【００１８】また、有機溶媒としては、酵素反応を阻害
しなければ通常使用される有機溶媒を用いることが可能
であり、特にｔ−ブチルアルコール、ヘキサン、アセト
ン、ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）、テトラヒドロフ
ラン、ｔ−アミルアルコール等を好適に用いることが出
来る。なお、酵素反応において、緩衝液と共存下で使用
する有機溶媒の濃度は、緩衝液に対して０．２〜５０％
であり、好ましくは、０．５〜３０％である。
しなければ通常使用される有機溶媒を用いることが可能
であり、特にｔ−ブチルアルコール、ヘキサン、アセト
ン、ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）、テトラヒドロフ
ラン、ｔ−アミルアルコール等を好適に用いることが出
来る。なお、酵素反応において、緩衝液と共存下で使用
する有機溶媒の濃度は、緩衝液に対して０．２〜５０％
であり、好ましくは、０．５〜３０％である。
【００１９】酵素反応の条件としては、反応温度は０〜
７０℃であり、好ましくは、３０〜５０℃である。反応
の時間は０．２〜５００時間、好ましくは、１〜１０時
間である。
７０℃であり、好ましくは、３０〜５０℃である。反応
の時間は０．２〜５００時間、好ましくは、１〜１０時
間である。
【００２０】こうして得られた光学活性（＋）−ＴＦＩ
ＢＡ（ＩＩＩ）は、強力な根の伸長作用を有しており、
このものを植物生育調節剤として使用する場合、使用目
的に応じてそのまま使用するか、又はその効果を助長も
しくは安定化するために農薬で通常使用されている補助
剤と混合して、液剤、粉剤、粒剤、水和剤、フロアブル
剤又は乳剤のような製剤形態にして使用する。
ＢＡ（ＩＩＩ）は、強力な根の伸長作用を有しており、
このものを植物生育調節剤として使用する場合、使用目
的に応じてそのまま使用するか、又はその効果を助長も
しくは安定化するために農薬で通常使用されている補助
剤と混合して、液剤、粉剤、粒剤、水和剤、フロアブル
剤又は乳剤のような製剤形態にして使用する。
【００２１】これらの製剤は実際の使用においては直接
そのまま使用するか、又は水で所定の濃度に希釈して使
用することもできる。
そのまま使用するか、又は水で所定の濃度に希釈して使
用することもできる。
【００２２】式（ＩＩＩ）で示される化合物は通常１×
１／１０8〜１×１／１０2Ｍの濃度範囲で使用すること
が出来るが、この範囲に限定されるものではない。
１／１０8〜１×１／１０2Ｍの濃度範囲で使用すること
が出来るが、この範囲に限定されるものではない。
【００２３】以下、実施例、参考例により本発明をより
具体的に詳述するが、本発明はこれらに限定されるもの
ではない。
具体的に詳述するが、本発明はこれらに限定されるもの
ではない。
【００２４】
【００２５】実施例１
【００２６】ラセミ体ＴＦＩＢＡ−２，２，２−トリフ
ルオロエチルエステル（ＩＩ）の製造
ルオロエチルエステル（ＩＩ）の製造
【００２７】ラセミ体ＴＦＩＢＡ（Ｉ）（２ｇ，７．８
ｍｍｏｌ），２，２，２−トリフルオロエタノール
（２．３ｇ，２３．４ｍｍｏｌ），ＤＣＣ（ジシクロヘ
キシルカルボキシイミド）（２．４ｇ，１１．８ｍｍｏ
ｌ）とＤＭＰＡ（ジメチルアミノピリジン）（０．１２
ｇ，１．０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４０ｍｌ）
中、室温で３時間攪拌反応させた。反応後、濃縮してシ
リカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン）
で分離し、ジクロロメタン／ヘキサン（３／７）より再
結晶化して無色柱状晶のラセミ体ＴＦＩＢＡ−２，２，
２−トリフルオロエチルエステル（ＩＩ）（２．４７
ｇ、収率９３．６％）を得た。
ｍｍｏｌ），２，２，２−トリフルオロエタノール
（２．３ｇ，２３．４ｍｍｏｌ），ＤＣＣ（ジシクロヘ
キシルカルボキシイミド）（２．４ｇ，１１．８ｍｍｏ
ｌ）とＤＭＰＡ（ジメチルアミノピリジン）（０．１２
ｇ，１．０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４０ｍｌ）
中、室温で３時間攪拌反応させた。反応後、濃縮してシ
リカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン）
で分離し、ジクロロメタン／ヘキサン（３／７）より再
結晶化して無色柱状晶のラセミ体ＴＦＩＢＡ−２，２，
２−トリフルオロエチルエステル（ＩＩ）（２．４７
ｇ、収率９３．６％）を得た。
【００２８】このものの融点は４７．８〜４８．５℃で
あり、赤外線吸収スペクトル、マススペクトルの測定結
果は次の通りである。 ＩＲνmax KBr（ｃｍ-1）：３４００、１７６０、１４６
０、１３２０、１２８０、１１７０、１１２０、９８
０、９６０、７５０ ＭＳ（７０ｅＶ）：３３９（Ｍ＋、１０）、１９８（４
１）、６９（１００）
あり、赤外線吸収スペクトル、マススペクトルの測定結
果は次の通りである。 ＩＲνmax KBr（ｃｍ-1）：３４００、１７６０、１４６
０、１３２０、１２８０、１１７０、１１２０、９８
０、９６０、７５０ ＭＳ（７０ｅＶ）：３３９（Ｍ＋、１０）、１９８（４
１）、６９（１００）
【００２９】実施例２
【００３０】ラセミ体ＴＦＩＢＡエステル（Ｖ）のリパ
ーゼＡＫによる立体選択的加水分解
ーゼＡＫによる立体選択的加水分解
【００３１】実施例１で調製されたラセミ体ＴＦＩＢＡ
−２，２，２−トリフルオロエチルエステル（ＩＩ）又
は参考例１で調製されたラセミ体ＴＦＩＢＡの各種エス
テル（Ｖ）（３．０ｍｇ）に１０％のｔ−ブチルアルコ
ールを含有するリン酸緩衝液（ｐＨ７．０、３．０ｍ
ｌ）とリパーゼＡＫ（１００ｍｇ）を加え、得られた懸
濁液を３０℃で５〜３３０時間攪拌反応させた。反応後
懸濁液を１Ｎ−塩酸でｐＨ２に調整し、酢酸エチルで３
回抽出、硫酸ナトリウム上で乾燥後、濾過し、濾液を乾
固して液体クロマトグラフィー（ダイセル化学製カラム
CHIRALCEL OD 使用）により、光学活性（＋）−ＴＦＩ
ＢＡ（ＩＩＩ）の生成を調べた。その結果は、下記の表
１に示される。
−２，２，２−トリフルオロエチルエステル（ＩＩ）又
は参考例１で調製されたラセミ体ＴＦＩＢＡの各種エス
テル（Ｖ）（３．０ｍｇ）に１０％のｔ−ブチルアルコ
ールを含有するリン酸緩衝液（ｐＨ７．０、３．０ｍ
ｌ）とリパーゼＡＫ（１００ｍｇ）を加え、得られた懸
濁液を３０℃で５〜３３０時間攪拌反応させた。反応後
懸濁液を１Ｎ−塩酸でｐＨ２に調整し、酢酸エチルで３
回抽出、硫酸ナトリウム上で乾燥後、濾過し、濾液を乾
固して液体クロマトグラフィー（ダイセル化学製カラム
CHIRALCEL OD 使用）により、光学活性（＋）−ＴＦＩ
ＢＡ（ＩＩＩ）の生成を調べた。その結果は、下記の表
１に示される。
【００３２】
【表１】
【００３３】上記結果から明らかなように、エチルエス
テル（Ｖ、Ｒ＝ＣＨ2ＣＨ3）の光学分割活性の高い加水
分解酵素であるリパーゼＡＫを用い、最も反応条件の優
れた条件下で各種アルキル基の反応性を比較すると、
２，２，２−トリフルオロエチルエステル（ＩＩ）の場
合に反応速度が格段に大きくなることが判った。
テル（Ｖ、Ｒ＝ＣＨ2ＣＨ3）の光学分割活性の高い加水
分解酵素であるリパーゼＡＫを用い、最も反応条件の優
れた条件下で各種アルキル基の反応性を比較すると、
２，２，２−トリフルオロエチルエステル（ＩＩ）の場
合に反応速度が格段に大きくなることが判った。
【００３４】実施例３
【００３５】ラセミ体ＴＦＩＢＡ−２，２，２−トリフ
ルオロエチルエステル（ＩＩ）のリパーゼＡＫによる立
体選択的加水分解に及ぼす温度と有機溶媒の影響
ルオロエチルエステル（ＩＩ）のリパーゼＡＫによる立
体選択的加水分解に及ぼす温度と有機溶媒の影響
【００３６】実施例１で調製されたラセミ体ＴＦＩＢＡ
−２，２，２−トリフルオロエチルエステル（ＩＩ）
（３ｍｇ）に、１０％の各種有機溶媒を含有するリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０、３．０ｍｌ）とリパーゼＡＫ（１
０ｍｇ）を加え、得られた懸濁液を３０〜５０℃で１〜
１０時間攪拌反応させた。共存させた各種有機溶媒とし
て、ｔ−ブチルアルコール、ヘキサン、アセトン、ＤＭ
Ｆ、テトラヒドロフラン及びｔ−アミルアルコールの６
種類を使用し、反応後に生成した光学活性（＋）−ＴＦ
ＩＢＡ（ＩＩＩ）の生成を調べた。その結果は、表２に
示される。
−２，２，２−トリフルオロエチルエステル（ＩＩ）
（３ｍｇ）に、１０％の各種有機溶媒を含有するリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０、３．０ｍｌ）とリパーゼＡＫ（１
０ｍｇ）を加え、得られた懸濁液を３０〜５０℃で１〜
１０時間攪拌反応させた。共存させた各種有機溶媒とし
て、ｔ−ブチルアルコール、ヘキサン、アセトン、ＤＭ
Ｆ、テトラヒドロフラン及びｔ−アミルアルコールの６
種類を使用し、反応後に生成した光学活性（＋）−ＴＦ
ＩＢＡ（ＩＩＩ）の生成を調べた。その結果は、表２に
示される。
【００３７】
【表２】
【００３８】上記結果から明らかなように、いずれの溶
媒を用いてもリパーゼＡＫは光学活性（＋）−ＴＦＩＢ
Ａ（ＩＩＩ）を収率良く生成するが、ｔ−アミルアルコ
ールを溶媒として用いる場合、短時間で反応を終えるこ
とが出来るので有利である。
媒を用いてもリパーゼＡＫは光学活性（＋）−ＴＦＩＢ
Ａ（ＩＩＩ）を収率良く生成するが、ｔ−アミルアルコ
ールを溶媒として用いる場合、短時間で反応を終えるこ
とが出来るので有利である。
【００３９】実施例４
【００４０】固定化リパーゼＡＫの繰り返し使用による
立体選択的加水分解活性への影響
立体選択的加水分解活性への影響
【００４１】実施例１で調製されたラセミ体ＴＦＩＢＡ
−２，２，２−トリフルオロエチルエステル（ＩＩ）
（０．３０ｇ）に１０％のｔ−アミルアルコールを含有
するりん酸緩衝液（ｐＨ７．０、３００ｍｌ）とセライ
ト（４ｇ）に固定化したリパーゼＡＫ（１ｇ）を用い
て、４０℃で１時間反応させて光学活性（＋）−ＴＦＩ
ＢＡ（ＩＩＩ）の生成を調べた。次いで、反応液より濾
別した固定化リパーゼＡＫをそのまま使用して、新たな
ラセミ体ＴＦＩＢＡ−２，２，２−トリフルオロエチル
エステル（ＩＩ）に対して同様の反応を行い、光学活性
（＋）−ＴＦＩＢＡ（ＩＩＩ）の生成を調べた。更に再
度濾別した固定化リパーゼＡＫを使用して同様に繰り返
し生成量を調べ、繰り返し使用による固定化されたリパ
ーゼＡＫの立体選択的加水分解活性に及ぼす影響を調
べ、その結果は、表３に示される。
−２，２，２−トリフルオロエチルエステル（ＩＩ）
（０．３０ｇ）に１０％のｔ−アミルアルコールを含有
するりん酸緩衝液（ｐＨ７．０、３００ｍｌ）とセライ
ト（４ｇ）に固定化したリパーゼＡＫ（１ｇ）を用い
て、４０℃で１時間反応させて光学活性（＋）−ＴＦＩ
ＢＡ（ＩＩＩ）の生成を調べた。次いで、反応液より濾
別した固定化リパーゼＡＫをそのまま使用して、新たな
ラセミ体ＴＦＩＢＡ−２，２，２−トリフルオロエチル
エステル（ＩＩ）に対して同様の反応を行い、光学活性
（＋）−ＴＦＩＢＡ（ＩＩＩ）の生成を調べた。更に再
度濾別した固定化リパーゼＡＫを使用して同様に繰り返
し生成量を調べ、繰り返し使用による固定化されたリパ
ーゼＡＫの立体選択的加水分解活性に及ぼす影響を調
べ、その結果は、表３に示される。
【００４２】
【表３】
【００４３】上記結果から明らかなように、固定化され
たリパーゼＡＫの繰り返し使用により、わずかな反応性
の低下は認められるが、酵素は固定化することにより少
量の酵素量で繰り返し使用でき、立体選択活性高く高効
率で光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡ（ＩＩＩ）を生成出来
ることが判る。
たリパーゼＡＫの繰り返し使用により、わずかな反応性
の低下は認められるが、酵素は固定化することにより少
量の酵素量で繰り返し使用でき、立体選択活性高く高効
率で光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡ（ＩＩＩ）を生成出来
ることが判る。
【００４４】実施例５
【００４５】光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡ（ＩＩＩ）の
酢酸緩衝液中での製造
酢酸緩衝液中での製造
【００４６】酢酸緩衝液（ｐＨ４．０、４５０ｍｌ）、
ｔ−ブチルアルコール（５０ｍｌ）にリパーゼＡＫ（１
５ｇ）を入れ、３０℃で２０分間攪拌した。この懸濁液
に、ラセミ体ＴＦＩＢＡ−２，２，２−トリフルオロエ
チルエステル（ＩＩ）（０．５ｇ）を加え、３０℃で更
に６０時間攪拌した。反応後１Ｎ−塩酸水溶液でｐＨ
２．０に調整した後、酢酸エチル（５００ｍｌ）で３回
抽出した。抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を
留去した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーで精
製し、光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡ（ＩＩＩ）を収率９
２％で得た。光学純度９９％ee。 旋光度［α］D 20：＋
１０．７°（ｃ＝０．９，ＥｔＯＨ）。また同時に、光
学活性（−）−ＴＦＩＢＡ−２，２，２−トリフルオロ
エチルエステル（ＩＶ）を収率９３％で得た。光学純度
９９％ee。 旋光度［α］D 20：−１２．９°（ｃ＝１．
０，ＥｔＯＨ）。
ｔ−ブチルアルコール（５０ｍｌ）にリパーゼＡＫ（１
５ｇ）を入れ、３０℃で２０分間攪拌した。この懸濁液
に、ラセミ体ＴＦＩＢＡ−２，２，２−トリフルオロエ
チルエステル（ＩＩ）（０．５ｇ）を加え、３０℃で更
に６０時間攪拌した。反応後１Ｎ−塩酸水溶液でｐＨ
２．０に調整した後、酢酸エチル（５００ｍｌ）で３回
抽出した。抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を
留去した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーで精
製し、光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡ（ＩＩＩ）を収率９
２％で得た。光学純度９９％ee。 旋光度［α］D 20：＋
１０．７°（ｃ＝０．９，ＥｔＯＨ）。また同時に、光
学活性（−）−ＴＦＩＢＡ−２，２，２−トリフルオロ
エチルエステル（ＩＶ）を収率９３％で得た。光学純度
９９％ee。 旋光度［α］D 20：−１２．９°（ｃ＝１．
０，ＥｔＯＨ）。
【００４７】
【００４８】ラセミ体ＴＦＩＢＡ−各種エステル（Ｖ）
の合成
の合成
【００５０】ラセミ体ＴＦＩＢＡ（Ｉ）（５．１ｇ、２
０ｍｍｏｌ）をエタノール３００ｍｌに溶解し、塩酸ガ
スを飽和させる。一夜還流したのち、エタノールと塩酸
を留去、乾固し、得られる残留物をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィーで精製し、ヘキサンより再結晶化して
ラセミ体ＴＦＩＢＡ−エチルエステル（Ｖ、Ｒ＝ＣＨ2
ＣＨ3（５．５ｇ、収率９６％）を得た。
０ｍｍｏｌ）をエタノール３００ｍｌに溶解し、塩酸ガ
スを飽和させる。一夜還流したのち、エタノールと塩酸
を留去、乾固し、得られる残留物をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィーで精製し、ヘキサンより再結晶化して
ラセミ体ＴＦＩＢＡ−エチルエステル（Ｖ、Ｒ＝ＣＨ2
ＣＨ3（５．５ｇ、収率９６％）を得た。
【００５１】同様にして合成したＴＦＩＢＡのエステル
（Ｖ）の収率と融点は、下記の通りである。 Ｒ＝CH3：９８．５％、ｍｐ８７〜８８℃； Ｒ＝CH2C
H3：９６．０％、５７〜５８℃； Ｒ＝CH2CH2CH3：８
３．９％、ｍｐ５４〜５５℃； Ｒ＝CH(CH3)2：７７．
４％、４７〜４８℃。
（Ｖ）の収率と融点は、下記の通りである。 Ｒ＝CH3：９８．５％、ｍｐ８７〜８８℃； Ｒ＝CH2C
H3：９６．０％、５７〜５８℃； Ｒ＝CH2CH2CH3：８
３．９％、ｍｐ５４〜５５℃； Ｒ＝CH(CH3)2：７７．
４％、４７〜４８℃。
【００５２】
【発明の効果】本発明に従って、強力な根の伸長促進作
用を有し、作物栽培の収穫量増大等の実用分野で利用が
期待されているラセミ体ＴＦＩＢＡを２，２，２−トリ
フルオロエタノールと反応させてエステルに誘導後、酵
素を用いて不斉加水分解することにより、より強力な根
の伸長促進作用を有する光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡを
効率良く製造することに成功したものである。
用を有し、作物栽培の収穫量増大等の実用分野で利用が
期待されているラセミ体ＴＦＩＢＡを２，２，２−トリ
フルオロエタノールと反応させてエステルに誘導後、酵
素を用いて不斉加水分解することにより、より強力な根
の伸長促進作用を有する光学活性（＋）−ＴＦＩＢＡを
効率良く製造することに成功したものである。
Claims (3)
- 【請求項１】 下記の化１で示される。 【化１】 式（Ｉ）の化合物に２，２，２−トリフルオロエタノー
ルを作用させ、下記の化２で示される。 【化２】 式（ＩＩ）の化合物であるエステルを合成した後、該エ
ステルにエステラーゼ活性を有する酵素を作用させて下
記の化３で示される。 【化３】 （式中、＊は不斉炭素を示す）式（ＩＩＩ）の光学活性
（＋）−４，４，４−トリフルオロ−３−（インドール
−３−）酪酸を生成せしめ、これを採取することを特徴
とする光学活性（＋）−４，４，４−トリフルオロ−３
−（インドール−３−）酪酸の製造方法。 - 【請求項２】 酵素による不斉加水分解を有機溶媒及び
／又は緩衝液の存在下で行うことを特徴とする請求項１
に記載の製造方法。 - 【請求項３】 エステラーゼ活性を有する酵素として、
リパーゼ及び／又はプロテアーゼを使用することを特徴
とする請求項１又は請求項２に記載の製造方法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7164813A JP2666890B2 (ja) | 1995-06-07 | 1995-06-07 | 光学活性（＋）−４，４，４−トリフルオロ−３−（インドール−３−）酪酸の製造方法 |
| US08/616,462 US5654440A (en) | 1995-06-07 | 1996-03-15 | Method for production of optically active (+)-4,4,4-trifluoro-3-(indole-3-)butyric acid |
| EP96301837A EP0747487A3 (en) | 1995-06-07 | 1996-03-18 | Process for the preparation of butyric acid (+) - 4,4,4-trifluoro-3- (indole-3) optically active |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7164813A JP2666890B2 (ja) | 1995-06-07 | 1995-06-07 | 光学活性（＋）−４，４，４−トリフルオロ−３−（インドール−３−）酪酸の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08332096A JPH08332096A (ja) | 1996-12-17 |
| JP2666890B2 true JP2666890B2 (ja) | 1997-10-22 |
Family
ID=15800413
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7164813A Expired - Lifetime JP2666890B2 (ja) | 1995-06-07 | 1995-06-07 | 光学活性（＋）−４，４，４−トリフルオロ−３−（インドール−３−）酪酸の製造方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5654440A (ja) |
| EP (1) | EP0747487A3 (ja) |
| JP (1) | JP2666890B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2732679B1 (fr) * | 1995-04-07 | 1997-04-30 | Synthelabo | Procede de preparation enzymatique d'un intermediaire de synthese de la befloxatone |
| CN111398498B (zh) * | 2020-03-19 | 2023-01-03 | 中国农业科学院蜜蜂研究所 | 吲哚-3-乙酸甲酯在鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜中的应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2958434B2 (ja) * | 1991-03-19 | 1999-10-06 | 工業技術院長 | 含フッ素β−インドール酪酸類 |
| JP3131749B2 (ja) * | 1992-08-07 | 2001-02-05 | 工業技術院長 | 光学活性（＋）−４，４，４−トリフルオロ−３−（インド−ル−３−）酪酸およびその製造方法 |
| JPH07100691B2 (ja) * | 1993-11-09 | 1995-11-01 | 工業技術院長 | 置換含フッ素β‐インドール酪酸類及びそれを有効成分として含有する植物生長調節剤 |
| JP2560239B2 (ja) * | 1993-11-09 | 1996-12-04 | 工業技術院長 | 含フッ素インドール酪酸系果実増糖減酸剤 |
-
1995
- 1995-06-07 JP JP7164813A patent/JP2666890B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-03-15 US US08/616,462 patent/US5654440A/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-03-18 EP EP96301837A patent/EP0747487A3/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0747487A3 (en) | 1997-10-08 |
| JPH08332096A (ja) | 1996-12-17 |
| EP0747487A2 (en) | 1996-12-11 |
| US5654440A (en) | 1997-08-05 |
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