JPH07278067A - エタノールアミン類緩衝液の安定化方法 - Google Patents
エタノールアミン類緩衝液の安定化方法Info
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- JPH07278067A JPH07278067A JP8569494A JP8569494A JPH07278067A JP H07278067 A JPH07278067 A JP H07278067A JP 8569494 A JP8569494 A JP 8569494A JP 8569494 A JP8569494 A JP 8569494A JP H07278067 A JPH07278067 A JP H07278067A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 エタノールアミン類緩衝液の安定化方法及び
その安定化エタノールアミン類緩衝液を含有する試薬溶
液を提供する。 【構成】 エタノールアミン類緩衝液にキレート剤又は
その塩を含有させる。 【効果】 エタノールアミン類緩衝液を用いる液状検出
系、例えばＬＤＨやＡＬＰの測定用液状試薬を、測定値
に実質的な影響を与えず、長期間安定に保存することが
できる。
その安定化エタノールアミン類緩衝液を含有する試薬溶
液を提供する。 【構成】 エタノールアミン類緩衝液にキレート剤又は
その塩を含有させる。 【効果】 エタノールアミン類緩衝液を用いる液状検出
系、例えばＬＤＨやＡＬＰの測定用液状試薬を、測定値
に実質的な影響を与えず、長期間安定に保存することが
できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、緩衝液として汎用され
ているエタノールアミン類緩衝液の安定化方法に関す
る。また、安定化されたエタノールアミン類緩衝液を使
用した試薬溶液にも関する。
ているエタノールアミン類緩衝液の安定化方法に関す
る。また、安定化されたエタノールアミン類緩衝液を使
用した試薬溶液にも関する。
【０００２】
【従来の技術】臨床検査の分野において、種々の疾病を
正確に判断するための指標として、生体液中に含まれる
各種の生理活性物質を測定することが行われており、測
定項目毎に多数の診断用試薬が市販されている。これら
の試薬は、生体液試料（例えば血清や血漿、尿など）を
試薬と混合するだけで試料中に含まれる目的物質由来の
信号を分光学的に容易に検出できるように構成されてい
る。特に、酵素反応が関与する場合など、所望する反応
系（例えば十分な酵素活性の発現や、発色反応の進行な
ど）が維持できるように構成成分や雰囲気（ｐＨ）が設
定されており、当然の如く各種緩衝液が用いられてい
る。
正確に判断するための指標として、生体液中に含まれる
各種の生理活性物質を測定することが行われており、測
定項目毎に多数の診断用試薬が市販されている。これら
の試薬は、生体液試料（例えば血清や血漿、尿など）を
試薬と混合するだけで試料中に含まれる目的物質由来の
信号を分光学的に容易に検出できるように構成されてい
る。特に、酵素反応が関与する場合など、所望する反応
系（例えば十分な酵素活性の発現や、発色反応の進行な
ど）が維持できるように構成成分や雰囲気（ｐＨ）が設
定されており、当然の如く各種緩衝液が用いられてい
る。
【０００３】例えば、乳酸脱水素酵素（以下ＬＤＨ）
は、心臓、肝、筋肉などに多く分布する酵素で、各種疾
患時に血中に遊出されることから、血液などの生体液中
のＬＤＨの測定は心疾患、肝疾患の診断や治療の経過観
察の指標として重要な項目の一つである。ＬＤＨの測定
法としては、乳酸を基質として、ＬＤＨによってピルビ
ン酸に変え、共存させておいた酸化型ニコチンアミドア
デニンジヌクレオチド（以下ＮＡＤ）が還元されて還元
型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（以下ＮＡＤ
Ｈ）となる変化量を、波長３４０ｎｍ付近で測定するこ
とによりＬＤＨを測定する方法が使用されており、日本
臨床化学会（以下ＪＳＣＣ）や国際臨床化学連合（以下
ＩＦＣＣ）からも勧告法として挙げられている〔臨床化
学，第１９巻第２号２２８ページ〜２４６ページ（１９
９０年６月）〕。一般的に乳酸を基質としたＬＤＨの測
定法はｐＨ８．０〜９．５付近のアルカリ性条件下で行
われ、その付近に緩衝能のある緩衝液としてエタノール
アミン類が汎用され、ＪＳＣＣ勧告法でもジエタノール
アミン緩衝液が使用されている。
は、心臓、肝、筋肉などに多く分布する酵素で、各種疾
患時に血中に遊出されることから、血液などの生体液中
のＬＤＨの測定は心疾患、肝疾患の診断や治療の経過観
察の指標として重要な項目の一つである。ＬＤＨの測定
法としては、乳酸を基質として、ＬＤＨによってピルビ
ン酸に変え、共存させておいた酸化型ニコチンアミドア
デニンジヌクレオチド（以下ＮＡＤ）が還元されて還元
型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（以下ＮＡＤ
Ｈ）となる変化量を、波長３４０ｎｍ付近で測定するこ
とによりＬＤＨを測定する方法が使用されており、日本
臨床化学会（以下ＪＳＣＣ）や国際臨床化学連合（以下
ＩＦＣＣ）からも勧告法として挙げられている〔臨床化
学，第１９巻第２号２２８ページ〜２４６ページ（１９
９０年６月）〕。一般的に乳酸を基質としたＬＤＨの測
定法はｐＨ８．０〜９．５付近のアルカリ性条件下で行
われ、その付近に緩衝能のある緩衝液としてエタノール
アミン類が汎用され、ＪＳＣＣ勧告法でもジエタノール
アミン緩衝液が使用されている。
【０００４】また、アルカリ性ホスファターゼ（以下Ａ
ＬＰ）は、骨、小腸、肝、腎、胆管などに多く分布する
酵素で、各種疾患時に血中に遊出されることから、血液
などの生体液中のＡＬＰの測定は肝疾患、骨疾患などの
診断や治療の経過観察の指標として重要な項目の一つで
ある。ＡＬＰの測定法としては、４−ニトロフェニル燐
酸（以下４ＮＰＰ）を基質として、ＡＬＰによって加水
分解され、遊離してくる４−ニトロフェノール（以下４
ＮＰ）の増加量を、波長４０５ｎｍ付近で測定すること
によりＡＬＰを測定する方法が汎用されており、この方
法がＪＳＣＣやドイツ臨床化学会（以下ＧＳＣＣ）から
も勧告法として示されている〔臨床化学，第１９巻第２
号２１３ページ〜２２７ページ（１９９０年６月）；ジ
ャーナルオブ クリニカルケミストリー クリニカルバ
イオケミストリー，第１０巻２８１ページ〜２９１ペー
ジ（１９７２年）〕。一般的に４ＮＰＰを基質としたＡ
ＬＰの測定法はｐＨ９．０〜１０．５付近のアルカリ性
条件下で行われ、その付近に緩衝能のある緩衝液として
エタノールアミン類が汎用され、ＪＳＣＣ勧告法でも２
−エチルアミノエタノール緩衝液が、またＧＳＣＣ勧告
法ではジエタノールアミン緩衝液が使用されている。
ＬＰ）は、骨、小腸、肝、腎、胆管などに多く分布する
酵素で、各種疾患時に血中に遊出されることから、血液
などの生体液中のＡＬＰの測定は肝疾患、骨疾患などの
診断や治療の経過観察の指標として重要な項目の一つで
ある。ＡＬＰの測定法としては、４−ニトロフェニル燐
酸（以下４ＮＰＰ）を基質として、ＡＬＰによって加水
分解され、遊離してくる４−ニトロフェノール（以下４
ＮＰ）の増加量を、波長４０５ｎｍ付近で測定すること
によりＡＬＰを測定する方法が汎用されており、この方
法がＪＳＣＣやドイツ臨床化学会（以下ＧＳＣＣ）から
も勧告法として示されている〔臨床化学，第１９巻第２
号２１３ページ〜２２７ページ（１９９０年６月）；ジ
ャーナルオブ クリニカルケミストリー クリニカルバ
イオケミストリー，第１０巻２８１ページ〜２９１ペー
ジ（１９７２年）〕。一般的に４ＮＰＰを基質としたＡ
ＬＰの測定法はｐＨ９．０〜１０．５付近のアルカリ性
条件下で行われ、その付近に緩衝能のある緩衝液として
エタノールアミン類が汎用され、ＪＳＣＣ勧告法でも２
−エチルアミノエタノール緩衝液が、またＧＳＣＣ勧告
法ではジエタノールアミン緩衝液が使用されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】近年、特に試薬形態を
供給時から液状とし、ユーザーの作業性を向上させるこ
とが求められている。そのため、多くの場合、自動分析
機にて使用されるために試薬構成を二試薬系とし、且つ
試薬組成物の安定性を長期間（例えば半年から１年間）
維持する必要がある。
供給時から液状とし、ユーザーの作業性を向上させるこ
とが求められている。そのため、多くの場合、自動分析
機にて使用されるために試薬構成を二試薬系とし、且つ
試薬組成物の安定性を長期間（例えば半年から１年間）
維持する必要がある。
【０００６】しかし、エタノールアミン類の緩衝液は、
アルカリ性条件下で酸化され経時的に溶液が黄褐色に変
色する。ＬＤＨやＡＬＰの測定は上記のように波長３４
０ｎｍ付近や４０５ｎｍ付近で目的物由来の信号を検出
することから、緩衝液自体の変色は試薬の初期吸光度を
上昇させＬＤＨやＡＬＰの測定精度を低下させる結果と
なり、溶液状態で長期間安定な性能を維持させるには不
都合であった。例えば、上記のＪＳＣＣの勧告法では、
ＬＤＨについて試薬調製日から１８日後までの安定性を
確認しているが、それ以上の長期間の安定性については
触れていない。
アルカリ性条件下で酸化され経時的に溶液が黄褐色に変
色する。ＬＤＨやＡＬＰの測定は上記のように波長３４
０ｎｍ付近や４０５ｎｍ付近で目的物由来の信号を検出
することから、緩衝液自体の変色は試薬の初期吸光度を
上昇させＬＤＨやＡＬＰの測定精度を低下させる結果と
なり、溶液状態で長期間安定な性能を維持させるには不
都合であった。例えば、上記のＪＳＣＣの勧告法では、
ＬＤＨについて試薬調製日から１８日後までの安定性を
確認しているが、それ以上の長期間の安定性については
触れていない。
【０００７】従って、本発明の目的は、エタノールアミ
ン類緩衝液を用いる液状検出系、例えばＬＤＨやＡＬＰ
の測定用液状試薬を、長期間安定に保存する手段を提供
することにある。
ン類緩衝液を用いる液状検出系、例えばＬＤＨやＡＬＰ
の測定用液状試薬を、長期間安定に保存する手段を提供
することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】前記の目的は、本発明に
よる、エタノールアミン類緩衝液にキレート剤又はその
塩を含有させることを特徴とする、エタノールアミン類
緩衝液の安定化方法によって達成することができる。ま
た、本発明は、上記の方法で安定化されたエタノールア
ミン類緩衝液を含む試薬溶液にも関する。
よる、エタノールアミン類緩衝液にキレート剤又はその
塩を含有させることを特徴とする、エタノールアミン類
緩衝液の安定化方法によって達成することができる。ま
た、本発明は、上記の方法で安定化されたエタノールア
ミン類緩衝液を含む試薬溶液にも関する。
【０００９】以下本発明を詳細に説明する。本発明にお
いては任意のエタノールアミン類を用いることができる
が、特には、下記一般式（１）で示される化合物が好ま
しい。
いては任意のエタノールアミン類を用いることができる
が、特には、下記一般式（１）で示される化合物が好ま
しい。
【００１０】
【化２】 ＲＨm Ｎ（ＣＨ2 ＣＨ2 ＯＨ）n （１） 式中、Ｒは水素原子又は炭素原子１〜４個のアルキル
基、好ましくはメチル基若しくはエチル基であり、ｍは
１〜２の整数であり、ｎは１〜３の整数である。
基、好ましくはメチル基若しくはエチル基であり、ｍは
１〜２の整数であり、ｎは１〜３の整数である。
【００１１】特に好ましいエタノールアミン類は、モノ
エタノールアミン（ＭＥＡ）、ジエタノールアミン（Ｄ
ＥＡ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、メチルアミ
ノエタノール（ＭＡＥ）、又はエチルアミノエタノール
（ＥＡＥ）である。これらのエタノールアミン類を単独
又は複数の組み合わせで公知の手段により所望の濃度
（例えば０．０１〜１Ｍ）に調製し、目的に応じてｐＨ
を調整する。
エタノールアミン（ＭＥＡ）、ジエタノールアミン（Ｄ
ＥＡ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、メチルアミ
ノエタノール（ＭＡＥ）、又はエチルアミノエタノール
（ＥＡＥ）である。これらのエタノールアミン類を単独
又は複数の組み合わせで公知の手段により所望の濃度
（例えば０．０１〜１Ｍ）に調製し、目的に応じてｐＨ
を調整する。
【００１２】本発明方法においては、前記エタノールア
ミン類の緩衝液を、必要により無機酸（例えば、塩酸又
は硫酸）及び／又は有機酸（例えば、酢酸又はコハク
酸）などで、反応系で設定されたｐＨ約８．０〜１１．
０に調整し、その中にキレート剤を添加する。酸を添加
する理由は、エタノールアミン類溶液のｐＨが１０以上
になるので、酸を添加して、使用するｐＨに調整するた
めである。
ミン類の緩衝液を、必要により無機酸（例えば、塩酸又
は硫酸）及び／又は有機酸（例えば、酢酸又はコハク
酸）などで、反応系で設定されたｐＨ約８．０〜１１．
０に調整し、その中にキレート剤を添加する。酸を添加
する理由は、エタノールアミン類溶液のｐＨが１０以上
になるので、酸を添加して、使用するｐＨに調整するた
めである。
【００１３】キレート剤としては、具体的には、トラン
ス−１，２−シクロヘキサンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，
Ｎ’−四酢酸（以下ＣｙＤＴＡ）、１，２−ジアミノプ
ロパン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（以下Ｍｅ−ＥＤ
ＴＡ）、１，３−ジアミノプロパン−２−オール−Ｎ，
Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（以下ＤＰＴＡ−ＯＨ）、ジエ
チレントリアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”−五酢酸
（以下ＤＴＰＡ）、Ｎ，Ｎ−ジヒドロキシエチルグリシ
ン（以下ＤＨＥＧ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二
酢酸（以下ＥＤＤＡ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，
Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（以下ＥＤＴＡ）、エチレンジアミ
ン−Ｎ，Ｎ’−二プロピオン酸（以下ＥＤＤＰ）、エチ
レンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（メチ
レンホスホン酸）（以下ＥＤＴＰＯ）、エチレンジアミ
ン−Ｎ，Ｎ’−ビス（メチレンホスホン酸）（以下ＥＤ
ＤＰＯ）、グリコールエーテルジアミン四酢酸（以下Ｇ
ＥＤＴＡ）、ヘキサメチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，
Ｎ’−四酢酸（以下ＨＤＴＡ）、Ｎ−ヒドロキシエチル
エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−三酢酸（以下ＥＤ
ＴＡ−ＯＨ）、ヒドロキシエチルイミノ二酢酸（以下Ｈ
ＩＤＡ）、イミノ二酢酸（以下ＩＤＡ）、ニトリロ三酢
酸（以下ＮＴＡ）、ニトリロトリス（メチレンホスホン
酸）（以下ＮＴＰＯ）、トリエチレンテトラミン−Ｎ，
Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”’，Ｎ”’−六酢酸（以下ＴＴＨ
Ａ）、ジヒドロキシエチルグリシン、ジアミノプロパン
四酢酸、ニトリロ三プロピオン酸、若しくはエチレンジ
アミン−Ｎ，Ｎ’−ビス（メチレンホスホン酸）など、
又はそのアルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリ
ウム塩、リチウム塩など）を用いることができる。前記
のキレート剤は単独で又は任意に組み合わせて添加する
ことができる。
ス−１，２−シクロヘキサンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，
Ｎ’−四酢酸（以下ＣｙＤＴＡ）、１，２−ジアミノプ
ロパン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（以下Ｍｅ−ＥＤ
ＴＡ）、１，３−ジアミノプロパン−２−オール−Ｎ，
Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（以下ＤＰＴＡ−ＯＨ）、ジエ
チレントリアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”−五酢酸
（以下ＤＴＰＡ）、Ｎ，Ｎ−ジヒドロキシエチルグリシ
ン（以下ＤＨＥＧ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二
酢酸（以下ＥＤＤＡ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，
Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（以下ＥＤＴＡ）、エチレンジアミ
ン−Ｎ，Ｎ’−二プロピオン酸（以下ＥＤＤＰ）、エチ
レンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（メチ
レンホスホン酸）（以下ＥＤＴＰＯ）、エチレンジアミ
ン−Ｎ，Ｎ’−ビス（メチレンホスホン酸）（以下ＥＤ
ＤＰＯ）、グリコールエーテルジアミン四酢酸（以下Ｇ
ＥＤＴＡ）、ヘキサメチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，
Ｎ’−四酢酸（以下ＨＤＴＡ）、Ｎ−ヒドロキシエチル
エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−三酢酸（以下ＥＤ
ＴＡ−ＯＨ）、ヒドロキシエチルイミノ二酢酸（以下Ｈ
ＩＤＡ）、イミノ二酢酸（以下ＩＤＡ）、ニトリロ三酢
酸（以下ＮＴＡ）、ニトリロトリス（メチレンホスホン
酸）（以下ＮＴＰＯ）、トリエチレンテトラミン−Ｎ，
Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”’，Ｎ”’−六酢酸（以下ＴＴＨ
Ａ）、ジヒドロキシエチルグリシン、ジアミノプロパン
四酢酸、ニトリロ三プロピオン酸、若しくはエチレンジ
アミン−Ｎ，Ｎ’−ビス（メチレンホスホン酸）など、
又はそのアルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリ
ウム塩、リチウム塩など）を用いることができる。前記
のキレート剤は単独で又は任意に組み合わせて添加する
ことができる。
【００１４】キレート剤として、好ましくは、ＣｙＤＴ
Ａ、Ｍｅ−ＥＤＴＡ、ＤＰＴＡ−ＯＨ、ＤＴＰＡ、ＤＨ
ＥＧ、ＥＤＤＡ、ＥＤＴＡ、ＥＤＤＰ、ＥＤＴＰＯ、Ｅ
ＤＤＰＯ、ＧＥＤＴＡ、ＨＤＴＡ、ＥＤＴＡ−ＯＨ、Ｈ
ＩＤＡ、ＩＤＡ、ＮＴＡ、ＮＴＰＯ、ＴＴＨＡ、又はそ
のアルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩
又はリチウム塩）を用いることができる。
Ａ、Ｍｅ−ＥＤＴＡ、ＤＰＴＡ−ＯＨ、ＤＴＰＡ、ＤＨ
ＥＧ、ＥＤＤＡ、ＥＤＴＡ、ＥＤＤＰ、ＥＤＴＰＯ、Ｅ
ＤＤＰＯ、ＧＥＤＴＡ、ＨＤＴＡ、ＥＤＴＡ−ＯＨ、Ｈ
ＩＤＡ、ＩＤＡ、ＮＴＡ、ＮＴＰＯ、ＴＴＨＡ、又はそ
のアルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩
又はリチウム塩）を用いることができる。
【００１５】添加するキレート剤又はそのアルカリ金属
塩の濃度は適宜選択することができるが、具体的には２
μｍｏｌ／リットル〜２５０ｍｍｏｌ／リットル、好ま
しくは５μｍｏｌ／リットル〜１２５ｍｍｏｌ／リット
ル、更に好ましくは１０μｍｏｌ／リットル〜５０ｍｍ
ｏｌ／リットルの濃度となるように添加すればよい。こ
うすることで、エタノールアミン類緩衝液の安定性（変
色の防止）を飛躍的に向上させることが可能となった。
キレート剤又はそのアルカリ金属塩の濃度が２μｍｏｌ
／リットル未満になると変色を充分に防止することがで
きず、２５０ｍｍｏｌ／リットルを越えると溶解性が不
十分となるために吸光度が最初から高くなる。５μｍｏ
ｌ／リットル以上になると変色をほぼ防止することがで
き、更に１０μｍｏｌ／リットル以上になるとキレート
剤の添加量の増加に関係なく変色を防止することがで
き、１２５ｍｍｏｌ／リットル以下になるとキレート剤
の濃度に応じた吸光度の変化がなくなり、更に５０ｍｍ
ｏｌ／リットル以下になるとキレート剤の濃度に関係な
く変色防止効果を得ることができる。
塩の濃度は適宜選択することができるが、具体的には２
μｍｏｌ／リットル〜２５０ｍｍｏｌ／リットル、好ま
しくは５μｍｏｌ／リットル〜１２５ｍｍｏｌ／リット
ル、更に好ましくは１０μｍｏｌ／リットル〜５０ｍｍ
ｏｌ／リットルの濃度となるように添加すればよい。こ
うすることで、エタノールアミン類緩衝液の安定性（変
色の防止）を飛躍的に向上させることが可能となった。
キレート剤又はそのアルカリ金属塩の濃度が２μｍｏｌ
／リットル未満になると変色を充分に防止することがで
きず、２５０ｍｍｏｌ／リットルを越えると溶解性が不
十分となるために吸光度が最初から高くなる。５μｍｏ
ｌ／リットル以上になると変色をほぼ防止することがで
き、更に１０μｍｏｌ／リットル以上になるとキレート
剤の添加量の増加に関係なく変色を防止することがで
き、１２５ｍｍｏｌ／リットル以下になるとキレート剤
の濃度に応じた吸光度の変化がなくなり、更に５０ｍｍ
ｏｌ／リットル以下になるとキレート剤の濃度に関係な
く変色防止効果を得ることができる。
【００１６】このように安定化されたエタノールアミン
類の緩衝液を用いることにより、長期間安定な試薬を提
供することができる。従って、本発明は、安定化された
エタノールアミン類緩衝液を含有する試薬溶液にも関す
る。前記の試薬溶液は、エタノールアミン類緩衝液を含
有する溶液であれば特に限定はされないが、例えば、生
化学実験用試薬溶液、又は好ましくは臨床検査用試薬溶
液である。特に、各種診断用試薬は正確な測定結果を求
められるので、本発明方法が好適に用いられる。臨床検
査で用いる各種診断用試薬溶液は、生物学的被検試料
（例えば、血液試料、特には血清又は血漿、尿、髄液、
唾液、膿又は細胞抽出液）中の生理活性物質（例えば、
酵素、ホルモン又は化学物質）の検出用試薬である。
類の緩衝液を用いることにより、長期間安定な試薬を提
供することができる。従って、本発明は、安定化された
エタノールアミン類緩衝液を含有する試薬溶液にも関す
る。前記の試薬溶液は、エタノールアミン類緩衝液を含
有する溶液であれば特に限定はされないが、例えば、生
化学実験用試薬溶液、又は好ましくは臨床検査用試薬溶
液である。特に、各種診断用試薬は正確な測定結果を求
められるので、本発明方法が好適に用いられる。臨床検
査で用いる各種診断用試薬溶液は、生物学的被検試料
（例えば、血液試料、特には血清又は血漿、尿、髄液、
唾液、膿又は細胞抽出液）中の生理活性物質（例えば、
酵素、ホルモン又は化学物質）の検出用試薬である。
【００１７】例えば、前記のＬＤＨ測定用試薬の場合に
は、上記キレート剤又はそのアルカリ金属塩を添加した
エタノールアミン類緩衝液（例えば、ジエタノールアミ
ン緩衝液）に基質としての乳酸を添加して第一試薬と
し、ＮＡＤを精製水や適当な緩衝液に溶解して第二試薬
とすることで、ＬＤＨ測定用試薬を構成することができ
る。
は、上記キレート剤又はそのアルカリ金属塩を添加した
エタノールアミン類緩衝液（例えば、ジエタノールアミ
ン緩衝液）に基質としての乳酸を添加して第一試薬と
し、ＮＡＤを精製水や適当な緩衝液に溶解して第二試薬
とすることで、ＬＤＨ測定用試薬を構成することができ
る。
【００１８】このように構成されたＬＤＨ測定用試薬を
用いて、検体（例えば、血清試料又は血漿試料）にＬＤ
Ｈの基質である乳酸と補酵素であるＮＡＤを作用させる
と、ＬＤＨの作用により乳酸がピルビン酸に変換され
る。この時共存させておいたＮＡＤは、共役的にＮＡＤ
Ｈとなる。この反応で還元されて生成されるＮＡＤＨに
由来する吸光度変化を、波長３４０ｎｍ付近にて測定す
ることで、検体中のＬＤＨ活性を求めることができる。
更に本発明の液状試薬は、長期間安定に保存することが
できるので、臨床検査の分野で有利に用いることができ
る。
用いて、検体（例えば、血清試料又は血漿試料）にＬＤ
Ｈの基質である乳酸と補酵素であるＮＡＤを作用させる
と、ＬＤＨの作用により乳酸がピルビン酸に変換され
る。この時共存させておいたＮＡＤは、共役的にＮＡＤ
Ｈとなる。この反応で還元されて生成されるＮＡＤＨに
由来する吸光度変化を、波長３４０ｎｍ付近にて測定す
ることで、検体中のＬＤＨ活性を求めることができる。
更に本発明の液状試薬は、長期間安定に保存することが
できるので、臨床検査の分野で有利に用いることができ
る。
【００１９】同様にＡＬＰ測定試薬の場合は、上記キレ
ート剤又はそのアルカリ金属塩を添加したエタノールア
ミン類緩衝液（例えば、ジエタノールアミン緩衝液）を
第一試薬とし、４ＮＰＰを精製水や適当な緩衝液に溶解
して第二試薬とすることで、ＡＬＰ測定用試薬を構成す
ることができる。このように構成されたＡＬＰ測定用試
薬によって、検体にＡＬＰの基質である４ＮＰＰを作用
させると４ＮＰが生成される。この生成された４ＮＰに
由来する吸光度変化を、波長４０５ｎｍ付近にて測定す
ることで、検体中のＡＬＰ活性を求めることができる。
更に本発明の液状試薬は、長期間保存可能なもので、臨
床検査の分野で有利に用いることができる。
ート剤又はそのアルカリ金属塩を添加したエタノールア
ミン類緩衝液（例えば、ジエタノールアミン緩衝液）を
第一試薬とし、４ＮＰＰを精製水や適当な緩衝液に溶解
して第二試薬とすることで、ＡＬＰ測定用試薬を構成す
ることができる。このように構成されたＡＬＰ測定用試
薬によって、検体にＡＬＰの基質である４ＮＰＰを作用
させると４ＮＰが生成される。この生成された４ＮＰに
由来する吸光度変化を、波長４０５ｎｍ付近にて測定す
ることで、検体中のＡＬＰ活性を求めることができる。
更に本発明の液状試薬は、長期間保存可能なもので、臨
床検査の分野で有利に用いることができる。
【００２０】
【作用】本発明の作用については以下の記載に限定する
ものではないが、キレート剤又はその塩を添加すること
で、広義には抗酸化作用が発現しているものと考えられ
る。即ち、アルカリ性のエタノールアミン類緩衝液中で
エタノールアミン類が種々の要因によって酸化されるこ
とに由来する緩衝液の変色を、本発明方法により効果的
に防止することができ、また、キレート剤又はその塩を
添加することで、エタノールアミン類の酸化反応に対し
て触媒的に作用し得る溶液中に混在する微量の金属（例
えば、鉄、銅、マグネシウム等）が隠蔽され、エタノー
ルアミン類の溶液状態での安定化にとって不都合な雰囲
気が抑制されているものと考えられる。従って、本発明
方法では、前記のメカニズムに基づく変色防止作用を示
すキレート剤をすべて用いることができる。
ものではないが、キレート剤又はその塩を添加すること
で、広義には抗酸化作用が発現しているものと考えられ
る。即ち、アルカリ性のエタノールアミン類緩衝液中で
エタノールアミン類が種々の要因によって酸化されるこ
とに由来する緩衝液の変色を、本発明方法により効果的
に防止することができ、また、キレート剤又はその塩を
添加することで、エタノールアミン類の酸化反応に対し
て触媒的に作用し得る溶液中に混在する微量の金属（例
えば、鉄、銅、マグネシウム等）が隠蔽され、エタノー
ルアミン類の溶液状態での安定化にとって不都合な雰囲
気が抑制されているものと考えられる。従って、本発明
方法では、前記のメカニズムに基づく変色防止作用を示
すキレート剤をすべて用いることができる。
【００２１】
【実施例】以下、実施例によって本発明を具体的に説明
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。実施例１ （１）試薬の調製 ＤＥＡ３７．４９ｇを精製水に溶解し、１Ｍ塩酸２２
２．１ｍｌを加えた。この溶液にＬ（＋）−乳酸リチウ
ム６．９１２ｇを加えて溶解した後、ｐＨを８．８（３
０℃）に調整し、全体を１リットルとして基質緩衝液と
した。この基質緩衝液１リットルに、ＣｙＤＴＡ、Ｍｅ
−ＥＤＴＡ、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−
四酢酸２Ｎａ（以下ＥＤＴＡ・２Ｎａ）、エチレンジア
ミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸２Ｋ（以下ＥＤＴＡ
・２Ｋ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四
酢酸２Ｌｉ（以下ＥＤＴＡ・２Ｌｉ）、ＧＥＤＴＡ、Ｅ
ＤＴＡ−ＯＨ、ＨＩＤＡ、ＮＴＡ、ニトリロ三酢酸３Ｎ
ａ（以下ＮＴＡ・３Ｎａ）、又はＴＴＨＡを２．５ｍｍ
ｏｌ／リットルになるよう添加し、ｐＨを８．８（３０
℃）として各キレート剤添加基質緩衝液を調製した。Ｎ
ＡＤ３．９８１ｇを精製水に溶解し、全体を１００ｍｌ
としてＮＡＤ溶液とした。
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。実施例１ （１）試薬の調製 ＤＥＡ３７．４９ｇを精製水に溶解し、１Ｍ塩酸２２
２．１ｍｌを加えた。この溶液にＬ（＋）−乳酸リチウ
ム６．９１２ｇを加えて溶解した後、ｐＨを８．８（３
０℃）に調整し、全体を１リットルとして基質緩衝液と
した。この基質緩衝液１リットルに、ＣｙＤＴＡ、Ｍｅ
−ＥＤＴＡ、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−
四酢酸２Ｎａ（以下ＥＤＴＡ・２Ｎａ）、エチレンジア
ミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸２Ｋ（以下ＥＤＴＡ
・２Ｋ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四
酢酸２Ｌｉ（以下ＥＤＴＡ・２Ｌｉ）、ＧＥＤＴＡ、Ｅ
ＤＴＡ−ＯＨ、ＨＩＤＡ、ＮＴＡ、ニトリロ三酢酸３Ｎ
ａ（以下ＮＴＡ・３Ｎａ）、又はＴＴＨＡを２．５ｍｍ
ｏｌ／リットルになるよう添加し、ｐＨを８．８（３０
℃）として各キレート剤添加基質緩衝液を調製した。Ｎ
ＡＤ３．９８１ｇを精製水に溶解し、全体を１００ｍｌ
としてＮＡＤ溶液とした。
【００２２】（２）初期吸光度の測定 各キレート剤添加基質緩衝液を３７℃にて保存し、保存
開始の当日、保存から１０日後、２２日後、３０日後及
び９０日後の安定性を、以下の初期吸光度を測定するこ
とにより確認した。キレート剤無添加の基質緩衝液も対
照用として同様に保存した。初期吸光度は、キレート剤
添加基質緩衝液２．５ｍｌとＮＡＤ溶液０．３ｍｌとを
混合して３４０ｎｍで吸光度を測定した。この結果を表
１に示す（表中の−−は測光不可を表す）。
開始の当日、保存から１０日後、２２日後、３０日後及
び９０日後の安定性を、以下の初期吸光度を測定するこ
とにより確認した。キレート剤無添加の基質緩衝液も対
照用として同様に保存した。初期吸光度は、キレート剤
添加基質緩衝液２．５ｍｌとＮＡＤ溶液０．３ｍｌとを
混合して３４０ｎｍで吸光度を測定した。この結果を表
１に示す（表中の−−は測光不可を表す）。
【００２３】
【表１】 キレート剤添加基質緩衝液の安定性 初期吸光度 ３４０ｎｍ ０日 １０日後 ２２日後 ３０日後 ９０日後 無添加 0.2312 0.4444 1.5083 2.1914 −− ＣｙＤＴＡ 0.2238 0.2242 0.2309 0.2369 0.2411 Ｍｅ−ＥＤＴＡ 0.2245 0.2234 0.2248 0.2240 0.2240 ＥＤＴＡ・２Ｎａ 0.2327 0.2319 0.2361 0.2324 0.2348 ＥＤＴＡ・２Ｋ 0.2360 0.2225 0.2260 0.2251 0.2255 ＥＤＴＡ・２Ｌｉ 0.2324 0.2223 0.2235 0.2251 0.2256 ＧＥＤＴＡ 0.2261 0.2200 0.2257 0.2230 0.2243 ＥＤＴＡ−ＯＨ 0.2247 0.2231 0.2255 0.2247 0.2257 ＨＩＤＡ 0.2281 0.2235 0.2268 0.2272 0.2294 ＮＴＡ 0.2283 0.2236 0.2275 0.2292 0.2319 ＮＴＡ・３Ｎａ 0.2302 0.2238 0.2309 0.2342 0.2360 ＴＴＨＡ 0.2264 0.2238 0.2237 0.2241 0.2239
【００２４】実施例２ （１）試薬の調製 ＤＥＡ３７．４９ｇを精製水に溶解し、１Ｍ塩酸２２
２．１ｍｌを加えた。この溶液にＬ（＋）−乳酸リチウ
ム６．９１２ｇを加えて溶解した後、ｐＨを８．８（３
０℃）に調整し、全体を１リットルとして基質緩衝液と
した。この基質緩衝液に、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，
Ｎ’，Ｎ’−四酢酸二ナトリウム塩（以下ＥＤＴＡ・２
Ｎａ）を１リットルあたり、０．０１ｇ、０．１ｇ、１
ｇ、又は１０ｇの量で添加し、ｐＨを８．８（３０℃）
としてＥＤＴＡ・２Ｎａ添加基質緩衝液を調製した。Ｎ
ＡＤ３．９８１ｇを精製水に溶解し、全体を１００ｍｌ
としてＮＡＤ溶液とした。
２．１ｍｌを加えた。この溶液にＬ（＋）−乳酸リチウ
ム６．９１２ｇを加えて溶解した後、ｐＨを８．８（３
０℃）に調整し、全体を１リットルとして基質緩衝液と
した。この基質緩衝液に、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，
Ｎ’，Ｎ’−四酢酸二ナトリウム塩（以下ＥＤＴＡ・２
Ｎａ）を１リットルあたり、０．０１ｇ、０．１ｇ、１
ｇ、又は１０ｇの量で添加し、ｐＨを８．８（３０℃）
としてＥＤＴＡ・２Ｎａ添加基質緩衝液を調製した。Ｎ
ＡＤ３．９８１ｇを精製水に溶解し、全体を１００ｍｌ
としてＮＡＤ溶液とした。
【００２５】（２）初期吸光度の測定 ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加基質緩衝液を３７℃にて保存し、
保存開始の当日、保存から６日後、１０日後、２２日
後、３０日後及び９０日後の安定性を、以下の初期吸光
度を測定することにより確認した。ＥＤＴＡ・２Ｎａ無
添加の基質緩衝液も対照用として同様に保存した。初期
吸光度は、ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加基質緩衝液２．５ｍｌ
とＮＡＤ溶液０．３ｍｌとを混合して３４０ｎｍで吸光
度を測定した。この結果を表２に示す（表中の−−は測
光不可を表す）。
保存開始の当日、保存から６日後、１０日後、２２日
後、３０日後及び９０日後の安定性を、以下の初期吸光
度を測定することにより確認した。ＥＤＴＡ・２Ｎａ無
添加の基質緩衝液も対照用として同様に保存した。初期
吸光度は、ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加基質緩衝液２．５ｍｌ
とＮＡＤ溶液０．３ｍｌとを混合して３４０ｎｍで吸光
度を測定した。この結果を表２に示す（表中の−−は測
光不可を表す）。
【００２６】
【表２】 ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加基質緩衝液の安定性 初期吸光度 ３４０ｎｍ ０日 ６日後 １０日後 ２２日後 ３０日後 ９０日後 無添加 0.2315 0.2440 0.4579 1.4740 2.1980 −− 0.001% 0.2281 0.2163 0.2230 0.2257 0.2284 0.2388 0.01% 0.2296 0.2167 0.2222 0.2256 0.2286 0.2316 0.1% 0.2327 0.2167 0.2245 0.2241 0.2274 0.2280 1.0% 0.2288 0.2169 0.2241 0.2272 0.2255 0.2259
【００２７】実施例３ （１）試薬の調製 ＥＡＥ１１２．５ｇを精製水に溶解し、２Ｍ塩酸３３０
ｍｌを加えた。この溶液に５０．５ｍＭ−ＭｇＣｌ2 １
１．２５ｍｌを加えて混合した後、ｐＨを９．９（３０
℃）に調整し、全体を１リットルとして緩衝液とした。
この緩衝液１リットルに、ＥＤＴＡ・２Ｎａ０．１ｇを
添加し、ｐＨを９．９（３０℃）として、ＥＤＴＡ・２
Ｎａ添加ＥＡＥ緩衝液を調製した。４ＮＰＰ２．８ｇを
精製水に溶解し、全体を１００ｍｌとして基質溶液とし
た。
ｍｌを加えた。この溶液に５０．５ｍＭ−ＭｇＣｌ2 １
１．２５ｍｌを加えて混合した後、ｐＨを９．９（３０
℃）に調整し、全体を１リットルとして緩衝液とした。
この緩衝液１リットルに、ＥＤＴＡ・２Ｎａ０．１ｇを
添加し、ｐＨを９．９（３０℃）として、ＥＤＴＡ・２
Ｎａ添加ＥＡＥ緩衝液を調製した。４ＮＰＰ２．８ｇを
精製水に溶解し、全体を１００ｍｌとして基質溶液とし
た。
【００２８】（２）初期吸光度の測定 ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加ＥＡＥ緩衝液を３７℃にて保存
し、保存開始の当日、保存から１０日後、２０日後、３
０日後及び９０日後の安定性を、以下の初期吸光度を測
定することにより確認した。ＥＤＴＡ・２Ｎａ無添加の
ＥＡＥ緩衝液も対照用として同様に保存した。初期吸光
度は、ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加ＥＡＥ緩衝液２．０ｍｌと
基質溶液０．５ｍｌを混合して４０５ｎｍで吸光度を測
定した。この結果を表３に示した。
し、保存開始の当日、保存から１０日後、２０日後、３
０日後及び９０日後の安定性を、以下の初期吸光度を測
定することにより確認した。ＥＤＴＡ・２Ｎａ無添加の
ＥＡＥ緩衝液も対照用として同様に保存した。初期吸光
度は、ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加ＥＡＥ緩衝液２．０ｍｌと
基質溶液０．５ｍｌを混合して４０５ｎｍで吸光度を測
定した。この結果を表３に示した。
【００２９】
【表３】 ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加ＥＡＥ緩衝液の安定性 初期吸光度 ４０５ｎｍ ０日 １０日後 ２０日後 ３０日後 ９０日後 無添加 0.4502 0.4614 0.4890 0.5667 1.3815 EDTA・2Na添加 0.4489 0.4492 0.4493 0.4490 0.4522
【００３０】実施例４ （１）試薬の調製 ＤＥＡ３７．４９ｇを精製水に溶解し、１Ｍ塩酸２２
２．１ｍｌを加えた。この溶液にＬ（＋）−乳酸リチウ
ム６．９１２ｇを加えて溶解した後、ｐＨを８．８（３
０℃）に調整し、全体を１リットルとして基質緩衝液と
した。この基質緩衝液１リットルに、ＥＤＴＡ・２Ｎａ
１ｇを添加しｐＨを８．８（３０℃）としてＥＤＴＡ・
２Ｎａ添加基質ＤＥＡ緩衝液を調製した。同様にモノエ
タノールアミン（以下ＭＥＡ）２１．７８ｇを精製水に
溶解し、１Ｍ塩酸２５０．１ｍｌを加えた。この溶液に
Ｌ（＋）−乳酸リチウム６．９１２ｇを加えて溶解した
後、ｐＨを８．８（３０℃）に調整し、全体を１リット
ルとして基質緩衝液とした。この基質緩衝液１リットル
に、ＥＤＴＡ・２Ｎａ１ｇを添加しｐＨを８．８（３０
℃）とてＥＤＴＡ・２Ｎａ添加基質ＭＥＡ緩衝液を調製
した。同じくトリエタノールアミン（以下ＴＥＡ）５
３．２０ｇを精製水に溶解し、１Ｍ塩酸２１０．６ｍｌ
を加えた。この溶液にＬ（＋）−乳酸リチウム６．９１
２ｇを加えて溶解した後、ｐＨを８．８（３０℃）に調
整し、全体を１リットルとして基質緩衝液とした。この
基質緩衝液１リットルに、ＥＤＴＡ・２Ｎａを１ｇ添加
しｐＨを８．８（３０℃）としてＥＤＴＡ・２Ｎａ添加
基質ＴＥＡ緩衝液を調製した。ＮＡＤ３．９８１ｇを精
製水に溶解し、全体を１００ｍｌとしてＮＡＤ溶液とし
た。
２．１ｍｌを加えた。この溶液にＬ（＋）−乳酸リチウ
ム６．９１２ｇを加えて溶解した後、ｐＨを８．８（３
０℃）に調整し、全体を１リットルとして基質緩衝液と
した。この基質緩衝液１リットルに、ＥＤＴＡ・２Ｎａ
１ｇを添加しｐＨを８．８（３０℃）としてＥＤＴＡ・
２Ｎａ添加基質ＤＥＡ緩衝液を調製した。同様にモノエ
タノールアミン（以下ＭＥＡ）２１．７８ｇを精製水に
溶解し、１Ｍ塩酸２５０．１ｍｌを加えた。この溶液に
Ｌ（＋）−乳酸リチウム６．９１２ｇを加えて溶解した
後、ｐＨを８．８（３０℃）に調整し、全体を１リット
ルとして基質緩衝液とした。この基質緩衝液１リットル
に、ＥＤＴＡ・２Ｎａ１ｇを添加しｐＨを８．８（３０
℃）とてＥＤＴＡ・２Ｎａ添加基質ＭＥＡ緩衝液を調製
した。同じくトリエタノールアミン（以下ＴＥＡ）５
３．２０ｇを精製水に溶解し、１Ｍ塩酸２１０．６ｍｌ
を加えた。この溶液にＬ（＋）−乳酸リチウム６．９１
２ｇを加えて溶解した後、ｐＨを８．８（３０℃）に調
整し、全体を１リットルとして基質緩衝液とした。この
基質緩衝液１リットルに、ＥＤＴＡ・２Ｎａを１ｇ添加
しｐＨを８．８（３０℃）としてＥＤＴＡ・２Ｎａ添加
基質ＴＥＡ緩衝液を調製した。ＮＡＤ３．９８１ｇを精
製水に溶解し、全体を１００ｍｌとしてＮＡＤ溶液とし
た。
【００３１】（２）初期吸光度の測定 ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加基質ＤＥＡ緩衝液、ＥＤＴＡ・２
Ｎａ添加基質ＭＥＡ緩衝液、ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加基質
ＴＥＡ緩衝液を３７℃にて保存し、保存開始の当日、保
存から１０日後、２０日後、３０日後及び９０日後の安
定性を、以下の初期吸光度を測定することにより確認し
た。ＥＤＴＡ・２Ｎａ無添加の基質ＤＥＡ緩衝液、基質
ＭＥＡ緩衝液、及び基質ＴＥＡ緩衝液も対照用として同
様に保存した。初期吸光度は、ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加基
質ＤＥＡ緩衝液２．５ｍｌとＮＡＤ溶液０．３ｍｌとを
混合して３４０ｎｍの吸光度を測定した。同様にＭＥＡ
緩衝液、ＴＥＡ緩衝液についても行った。この結果を表
４に示す（表中の−−は測光不可を表す）。
Ｎａ添加基質ＭＥＡ緩衝液、ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加基質
ＴＥＡ緩衝液を３７℃にて保存し、保存開始の当日、保
存から１０日後、２０日後、３０日後及び９０日後の安
定性を、以下の初期吸光度を測定することにより確認し
た。ＥＤＴＡ・２Ｎａ無添加の基質ＤＥＡ緩衝液、基質
ＭＥＡ緩衝液、及び基質ＴＥＡ緩衝液も対照用として同
様に保存した。初期吸光度は、ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加基
質ＤＥＡ緩衝液２．５ｍｌとＮＡＤ溶液０．３ｍｌとを
混合して３４０ｎｍの吸光度を測定した。同様にＭＥＡ
緩衝液、ＴＥＡ緩衝液についても行った。この結果を表
４に示す（表中の−−は測光不可を表す）。
【００３２】
【表４】ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加ＤＥＡ緩衝液、ＥＤＴＡ
・２Ｎａ添加ＭＥＡ緩衝液、ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加ＴＥ
Ａ緩衝液の安定性 初期吸光度 ３４０ｎｍ ０日 １０日後 ２０日後 ３０日後 ９０日後 無添加DEA 緩衝液 0.2315 0.4447 1.5087 2.1917 −− EDTA・2Na添加 0.2327 0.2245 0.2241 0.2274 0.2305 無添加MEA 緩衝液 0.2587 0.4969 1.6860 2.4493 −− EDTA・2Na添加 0.2588 0.2659 0.2799 0.2858 0.2881 無添加TEA 緩衝液 0.2248 0.4361 1.4875 2.0005 −− EDTA・2Na添加 0.2244 0.2190 0.2183 0.2161 0.2231
・２Ｎａ添加ＭＥＡ緩衝液、ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加ＴＥ
Ａ緩衝液の安定性 初期吸光度 ３４０ｎｍ ０日 １０日後 ２０日後 ３０日後 ９０日後 無添加DEA 緩衝液 0.2315 0.4447 1.5087 2.1917 −− EDTA・2Na添加 0.2327 0.2245 0.2241 0.2274 0.2305 無添加MEA 緩衝液 0.2587 0.4969 1.6860 2.4493 −− EDTA・2Na添加 0.2588 0.2659 0.2799 0.2858 0.2881 無添加TEA 緩衝液 0.2248 0.4361 1.4875 2.0005 −− EDTA・2Na添加 0.2244 0.2190 0.2183 0.2161 0.2231
【００３３】実施例５ （１）試薬の調製 ＤＥＡ３７．４９ｇを精製水に溶解し、１Ｍ塩酸２２
２．１ｍｌを加えた。この溶液にＬ（＋）−乳酸リチウ
ム６．９１２ｇを加えて溶解した後、ｐＨを８．８（３
０℃）に調整し、全体を１リットルとして基質緩衝液と
した。この基質緩衝液１リットルに、ＥＤＴＡ・２Ｎａ
１ｇを添加し、ｐＨを８．８（３０℃）としてＥＤＴＡ
・２Ｎａ添加基質緩衝液を調製した。ＮＡＤ３．９８１
ｇを精製水に溶解し、全体を１００ｍｌとしてＮＡＤ溶
液とした。ＥＤＴＡ・２Ｎａ無添加の基質緩衝液、又
は、ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加基質緩衝液を第一試薬とし、
ＮＡＤ溶液を第二試薬として以下の試験により、ＥＤＴ
Ａ・２Ｎａ添加による、ＬＤＨ活性の変化を確認した。 （２）ＬＤＨ活性の測定 管理血清８μｌに第一試薬２５０μｌを添加し、３７℃
で５分間、予加温した後、第二試薬３０μｌを混合し
て、１分半経過後から３４０ｎｍの吸光度の変化量を測
定した後、次式によりＬＤＨ活性を算出した。その結果
を図１に示した。ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加による、ＬＤＨ
活性の変化はなかった。
２．１ｍｌを加えた。この溶液にＬ（＋）−乳酸リチウ
ム６．９１２ｇを加えて溶解した後、ｐＨを８．８（３
０℃）に調整し、全体を１リットルとして基質緩衝液と
した。この基質緩衝液１リットルに、ＥＤＴＡ・２Ｎａ
１ｇを添加し、ｐＨを８．８（３０℃）としてＥＤＴＡ
・２Ｎａ添加基質緩衝液を調製した。ＮＡＤ３．９８１
ｇを精製水に溶解し、全体を１００ｍｌとしてＮＡＤ溶
液とした。ＥＤＴＡ・２Ｎａ無添加の基質緩衝液、又
は、ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加基質緩衝液を第一試薬とし、
ＮＡＤ溶液を第二試薬として以下の試験により、ＥＤＴ
Ａ・２Ｎａ添加による、ＬＤＨ活性の変化を確認した。 （２）ＬＤＨ活性の測定 管理血清８μｌに第一試薬２５０μｌを添加し、３７℃
で５分間、予加温した後、第二試薬３０μｌを混合し
て、１分半経過後から３４０ｎｍの吸光度の変化量を測
定した後、次式によりＬＤＨ活性を算出した。その結果
を図１に示した。ＥＤＴＡ・２Ｎａ添加による、ＬＤＨ
活性の変化はなかった。
【００３４】
【式１】 ΔＯＤ／ｍｉｎ ：１分間当たりの吸光度の変化量 ０．２８８ ：総液量（ｍｌ） １０００ ：リットル当たりへの換算 ６．３ ：ＮＡＤＨの分子吸光係数 ０．００８ ：血清量（ｍｌ）
【００３５】
【発明の効果】本発明方法によれば、エタノールアミン
類緩衝液を用いる液状検出系、例えばＬＤＨやＡＬＰの
測定用液状試薬を、測定値に実質的な影響を与えず、長
期間安定に保存することができる。
類緩衝液を用いる液状検出系、例えばＬＤＨやＡＬＰの
測定用液状試薬を、測定値に実質的な影響を与えず、長
期間安定に保存することができる。
【図１】実施例５で行った、キレート剤添加試薬とキレ
ート剤無添加試薬とを用いたＬＤＨ活性測定の相関関係
を示すグラフである。
ート剤無添加試薬とを用いたＬＤＨ活性測定の相関関係
を示すグラフである。
Claims (5)
- 【請求項１】 エタノールアミン類緩衝液にキレート剤
又はその塩を含有させることを特徴とする、エタノール
アミン類緩衝液の安定化方法。 - 【請求項２】 エタノールアミン類が、一般式（１）： 【化１】 ＲＨm Ｎ（ＣＨ2 ＣＨ2 ＯＨ）n （１） （式中、Ｒは水素原子又は炭素原子１〜４個のアルキル
基であり、ｍは１〜２の整数であり、ｎは１〜３の整数
である）で表される化合物である請求項１記載の安定化
方法。 - 【請求項３】 キレート剤又はその塩が、トランス−
１，２−シクロヘキサンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’
−四酢酸、１，２−ジアミノプロパン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，
Ｎ’−四酢酸、１，３−ジアミノプロパン−２−オール
−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸、ジエチレントリアミン
−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”−五酢酸、Ｎ，Ｎ−ジヒド
ロキシエチルグリシン、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−
二酢酸、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢
酸、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二プロピオン酸、エ
チレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（メ
チレンホスホン酸）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ビ
ス（メチレンホスホン酸）、グリコールエーテルジアミ
ン四酢酸、ヘキサメチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，
Ｎ’−四酢酸、Ｎ−ヒドロキシエチルエチレンジアミン
−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−三酢酸、ヒドロキシエチルイミノ二
酢酸、イミノ二酢酸、ニトリロ三酢酸、ニトリロトリス
（メチレンホスホン酸）、トリエチレンテトラミン−
Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”’，Ｎ”’−六酢酸、及びそ
れらのアルカリ金属塩からなる群から選択された１以上
の化合物である請求項１記載の安定化方法。 - 【請求項４】 請求項１記載の方法で安定化されたエタ
ノールアミン類緩衝液を含有する試薬溶液。 - 【請求項５】 試薬溶液が生物学的被検試料中の生理活
性物質検出用の液状試薬である請求項４記載の試薬溶
液。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6030802A (en) * | 1998-05-29 | 2000-02-29 | Roche Diagnostics Corporation | Liquid reagent set for L-lactate determination |
| WO2007097468A1 (ja) * | 2006-02-23 | 2007-08-30 | Shino-Test Corporation | 金属の比色測定方法及び測定試薬 |
| WO2018138913A1 (ja) * | 2017-01-30 | 2018-08-02 | 株式会社テクノスルガ・ラボ | 保存溶液およびその保存溶液を用いた検体の保存方法、特に、検体のｄｎａおよび有機酸やポリアミン類などの化学物質の保存溶液およびその保存溶液を用いた保存方法 |
-
1994
- 1994-03-31 JP JP8569494A patent/JP3598438B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (4)
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|---|---|---|---|---|
| US6030802A (en) * | 1998-05-29 | 2000-02-29 | Roche Diagnostics Corporation | Liquid reagent set for L-lactate determination |
| WO2007097468A1 (ja) * | 2006-02-23 | 2007-08-30 | Shino-Test Corporation | 金属の比色測定方法及び測定試薬 |
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