JP3133186B2 - ヒト体液中のマグネシウムの定量方法及び試薬 - Google Patents
ヒト体液中のマグネシウムの定量方法及び試薬Info
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- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】一般に、マグネシウムは、動植物
の細胞内に広く存在し、成長と生命維持に不可欠なイオ
ンである。
の細胞内に広く存在し、成長と生命維持に不可欠なイオ
ンである。
【０００２】そして、生体内のマグネシウムはカルシウ
ムと拮抗的に変動し、中枢神経系や心臓の機能不全時に
あるいは腎不全、急性膵炎時などにその変動が観察され
ることからマグネシウムの定量は重要な検査項目の一つ
になりつつある。
ムと拮抗的に変動し、中枢神経系や心臓の機能不全時に
あるいは腎不全、急性膵炎時などにその変動が観察され
ることからマグネシウムの定量は重要な検査項目の一つ
になりつつある。
【０００３】本発明のマグネシウムの定量方法によれ
ば、ヒト血清中のマグネシウムが短時間に正確に定量で
きるので、臨床検査に大いに貢献するものである。
ば、ヒト血清中のマグネシウムが短時間に正確に定量で
きるので、臨床検査に大いに貢献するものである。
【０００４】
【従来の技術及び問題点】従来、マグネシウムの測定方
法としては、キシリジルブルーを用いてキレートを生成
させる比色法や、原子吸光法などが知られているが、こ
れらの方法のうち、前者は特異性の面で問題を有し、後
者については、特殊な装置を必要とするという欠点を持
っていた。
法としては、キシリジルブルーを用いてキレートを生成
させる比色法や、原子吸光法などが知られているが、こ
れらの方法のうち、前者は特異性の面で問題を有し、後
者については、特殊な装置を必要とするという欠点を持
っていた。
【０００５】また、イソクエン酸脱水素酵素（以下、ｉ
ＣＤＨという）、ＮＡＤＰ+及びイソサイトレートを含
む反応溶液を用い、次の表１に示される反応式（Ｉ）に
おけるＭｇ++を反応の起源として反応させ、生成するＮ
ＡＤＰＨの量を３４０ｎｍの吸光度で測定する方法が提
案されている。（ＵＳＰ ４，６５７，８５４）
ＣＤＨという）、ＮＡＤＰ+及びイソサイトレートを含
む反応溶液を用い、次の表１に示される反応式（Ｉ）に
おけるＭｇ++を反応の起源として反応させ、生成するＮ
ＡＤＰＨの量を３４０ｎｍの吸光度で測定する方法が提
案されている。（ＵＳＰ ４，６５７，８５４）
【０００６】
【表１】
【０００７】しかしながら、この方法によってヒト血清
中のＭｇ++を定量したところ、正確な値を得ることはで
きなかった。
中のＭｇ++を定量したところ、正確な値を得ることはで
きなかった。
【０００８】その理由として、Ｍｇ++はごく微量でも強
く反応して式（Ｉ）の反応を終結するために正確な検定
線が得られず、正しいＭｇ++含量を知ることはできなか
った。
く反応して式（Ｉ）の反応を終結するために正確な検定
線が得られず、正しいＭｇ++含量を知ることはできなか
った。
【０００９】そこで、本発明者らは、特開平２−１４５
１９６において、ｉＣＤＨ、ＮＡＤＰ+、インサイトレ
ート及びＭｇ++キレート剤を含む反応溶液をＭｇ++含有
液に添加してしばらく放置した後、ＮＡＤＰＨの増加量
を測定する方法を提案した。
１９６において、ｉＣＤＨ、ＮＡＤＰ+、インサイトレ
ート及びＭｇ++キレート剤を含む反応溶液をＭｇ++含有
液に添加してしばらく放置した後、ＮＡＤＰＨの増加量
を測定する方法を提案した。
【００１０】しかしながら、この方法においても、３４
０ｎｍの吸光度によるＮＡＤＰＨの増加量が直線では得
られず、正確なＭｇ++含量を測定することは困難であっ
た。
０ｎｍの吸光度によるＮＡＤＰＨの増加量が直線では得
られず、正確なＭｇ++含量を測定することは困難であっ
た。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、体液もしく
はその処理物中のＭｇ++含量を正確に定量するためにな
されたものである。
はその処理物中のＭｇ++含量を正確に定量するためにな
されたものである。
【００１２】
【課題を解決するための手段】本発明においては、定量
試薬１及び定量試薬２に分けて、定量試薬１はｉＣＤＨ
を含ませることなく、Ｍｇ++キレート剤を含有させ、そ
して定量試薬２にはｉＣＤＨ及びＮＡＤＰ+を含ませ
て、所定時間を設けて順次使用することによって、体液
もしくはその処理物中のＭｇ++含量を正確に定量するこ
とができたものである。
試薬１及び定量試薬２に分けて、定量試薬１はｉＣＤＨ
を含ませることなく、Ｍｇ++キレート剤を含有させ、そ
して定量試薬２にはｉＣＤＨ及びＮＡＤＰ+を含ませ
て、所定時間を設けて順次使用することによって、体液
もしくはその処理物中のＭｇ++含量を正確に定量するこ
とができたものである。
【００１３】即ち、体液もしくはその処理物中のほとん
どのＭｇ++を、ｉＣＤＨを含まないＭｇ++キレート剤含
有定量試薬１の添加によって、キレートし、所定時間経
過後はごく微量のＭｇ++が残っているだけであるが、こ
のごく微量のＭｇ++を、ｉＣＤＨ及びＮＡＤＰ+を含む
定量試薬２の添加で、Ｍｇ++によるｉＣＤＨの活性化と
それにともなうＮＡＤＰＨの増加を３４０ｎｍの吸光度
の増加によって、測定するものである。
どのＭｇ++を、ｉＣＤＨを含まないＭｇ++キレート剤含
有定量試薬１の添加によって、キレートし、所定時間経
過後はごく微量のＭｇ++が残っているだけであるが、こ
のごく微量のＭｇ++を、ｉＣＤＨ及びＮＡＤＰ+を含む
定量試薬２の添加で、Ｍｇ++によるｉＣＤＨの活性化と
それにともなうＮＡＤＰＨの増加を３４０ｎｍの吸光度
の増加によって、測定するものである。
【００１４】Ｍｇ++キレート剤、ｉＣＤＨ、ＮＡＤＰ+
のすべてを含んだ試薬を用い所定時間放置して測定する
特開平２−１４５１９６の方法よりは、本発明のｉＣＤ
Ｈを含まず、Ｍｇ++キレート剤を含む定量試薬１とｉＣ
ＤＨ及びＮＡＤＰ+を含む定量試薬２を分けて用いる方
法のほうが、体液中のＭｇ++の定量においてはよりすぐ
れたもので、本発明のＭｇ++の測定値はきわめて正確な
ものとなるのである。
のすべてを含んだ試薬を用い所定時間放置して測定する
特開平２−１４５１９６の方法よりは、本発明のｉＣＤ
Ｈを含まず、Ｍｇ++キレート剤を含む定量試薬１とｉＣ
ＤＨ及びＮＡＤＰ+を含む定量試薬２を分けて用いる方
法のほうが、体液中のＭｇ++の定量においてはよりすぐ
れたもので、本発明のＭｇ++の測定値はきわめて正確な
ものとなるのである。
【００１５】Ｍｇ++含量の定量対象としては、血清、尿
などがあり、希釈せず原液で測定される。
などがあり、希釈せず原液で測定される。
【００１６】定量試薬１はＭｇ++キレート剤、Ｍｎ++キ
レート剤及びイソクエン酸カリをトリス緩衝液に溶解し
て構成するのがよい。
レート剤及びイソクエン酸カリをトリス緩衝液に溶解し
て構成するのがよい。
【００１７】定量試薬２はｉＣＤＨ、ＮＡＤＰ+及び燐
酸カリを水に溶解して構成するのがよい。
酸カリを水に溶解して構成するのがよい。
【００１８】反応は加温状態がよい。定量試薬１を体液
もしくはその処理物に添加し、３７℃程度に加温し、５
分間程度Ｍｇ++をキレートさせる。この放置時間はほと
んどのＭｇ++をキレートさせる時間であって、Ｍｇ++含
量は試料によって異なるので、試料ごとに、あらかじめ
その後の反応でＭｇ++量に応じて正確な直線を構成する
放置時間を設定することが必要である。
もしくはその処理物に添加し、３７℃程度に加温し、５
分間程度Ｍｇ++をキレートさせる。この放置時間はほと
んどのＭｇ++をキレートさせる時間であって、Ｍｇ++含
量は試料によって異なるので、試料ごとに、あらかじめ
その後の反応でＭｇ++量に応じて正確な直線を構成する
放置時間を設定することが必要である。
【００１９】所定時間放置後、定量試薬２を添加し、３
７℃程度の加温状態で、添加後２分から３分までのＮＡ
ＤＰＨの増加量を、３４０ｎｍの吸光度の増加を測定
し、この値を標準線と合せると、もとの体液中のＭｇ++
含量を正確に知ることができるのである。
７℃程度の加温状態で、添加後２分から３分までのＮＡ
ＤＰＨの増加量を、３４０ｎｍの吸光度の増加を測定
し、この値を標準線と合せると、もとの体液中のＭｇ++
含量を正確に知ることができるのである。
【００２０】本発明に用いるＭｇ++キレート剤として
は、次の物質又はその塩が示される。ＥＤＴＡ，トラン
ス−１，２−シクロヘキサンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，
Ｎ’−四酢酸，Ｎ，Ｎ−ジ（ヒドロキシエチル）グリシ
ン，１，３−ジアミノプロパン−２−オール−Ｎ，Ｎ，
Ｎ’，Ｎ’−四酢酸，ジエチレントリアミン−Ｎ，Ｎ，
Ｎ’，Ｎ''，Ｎ'''−五酢酸，エチレンジアミン−Ｎ，
Ｎ’−二酢酸，エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−プロピオ
ン酸，Ｎ−ヒドロキシエチルエチレンジアミン−Ｎ，
Ｎ’，Ｎ’−三酢酸，エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，
Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（メチレンホスホン酸），グリ
コールエーテルジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸
ヘキサメチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢
酸，ヒドロキシエチルイミノ二酢酸，イミノ二酢酸，
１，２−ジアミノプロパン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢
酸，ニトリロ三酢酸，ニトリロ三プロピオン酸，ニトリ
ロトリス（メチレンホスホン酸），トリエチレンテトラ
ミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ''，Ｎ'''，Ｎ'''−六酢酸，エ
チレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ビス（メチレンホスホン
酸），エチレンジアミン ジ（Ｏ−ヒドロキシフェニル
酢酸），１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）エタン
ーＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸。
は、次の物質又はその塩が示される。ＥＤＴＡ，トラン
ス−１，２−シクロヘキサンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，
Ｎ’−四酢酸，Ｎ，Ｎ−ジ（ヒドロキシエチル）グリシ
ン，１，３−ジアミノプロパン−２−オール−Ｎ，Ｎ，
Ｎ’，Ｎ’−四酢酸，ジエチレントリアミン−Ｎ，Ｎ，
Ｎ’，Ｎ''，Ｎ'''−五酢酸，エチレンジアミン−Ｎ，
Ｎ’−二酢酸，エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−プロピオ
ン酸，Ｎ−ヒドロキシエチルエチレンジアミン−Ｎ，
Ｎ’，Ｎ’−三酢酸，エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，
Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（メチレンホスホン酸），グリ
コールエーテルジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸
ヘキサメチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢
酸，ヒドロキシエチルイミノ二酢酸，イミノ二酢酸，
１，２−ジアミノプロパン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢
酸，ニトリロ三酢酸，ニトリロ三プロピオン酸，ニトリ
ロトリス（メチレンホスホン酸），トリエチレンテトラ
ミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ''，Ｎ'''，Ｎ'''−六酢酸，エ
チレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ビス（メチレンホスホン
酸），エチレンジアミン ジ（Ｏ−ヒドロキシフェニル
酢酸），１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）エタン
ーＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸。
【００２１】また、ｉＣＤＨはマンガンイオンによって
も活性化されるが、これはマグネシウムイオンをトラッ
プせず、マンガンイオンを選択的にトラップするキレー
ト剤、例えば、ＧＥＤＴＡを反応溶媒に共存させること
によりマンガンイオンの影響を回避することができる。
も活性化されるが、これはマグネシウムイオンをトラッ
プせず、マンガンイオンを選択的にトラップするキレー
ト剤、例えば、ＧＥＤＴＡを反応溶媒に共存させること
によりマンガンイオンの影響を回避することができる。
【００２２】本発明においては、ｉＣＤＨを含まないＭ
ｇ++キレート剤でほとんどのＭｇ++は失活し、残存する
微量のＭｇ++によってｉＣＤＨの活性が正確に高まる性
質を利用し、特異的に短時間に感度よくマグネシウムを
定量するものである。
ｇ++キレート剤でほとんどのＭｇ++は失活し、残存する
微量のＭｇ++によってｉＣＤＨの活性が正確に高まる性
質を利用し、特異的に短時間に感度よくマグネシウムを
定量するものである。
【００２３】本発明の方法によれば、微量の検体を用い
てマグネシウムを正確に定量することができる。
てマグネシウムを正確に定量することができる。
【００２４】次に本発明の実施例を示す。
【００２５】
【実施例１】ＭｇＣｌ2 ６Ｈ2Ｏ ４２．３ｍｇを精製
水１０ｍｌに溶解し、Ｍｇ++として２５０ｍｇ／ｄｌの
標準液を調製した。さらに、この標準液を稀釈して０、
２、４、６、８、１０、２０、３０、４０、５０ｍｇ／
ｄｌの溶液を調製した。
水１０ｍｌに溶解し、Ｍｇ++として２５０ｍｇ／ｄｌの
標準液を調製した。さらに、この標準液を稀釈して０、
２、４、６、８、１０、２０、３０、４０、５０ｍｇ／
ｄｌの溶液を調製した。
【００２６】この標準液各５μｌに、表２に示す定量試
薬１ ２４０μｌを加え３７℃で５分間放置後、表３に
示す定量試薬２ ６０μｌを添加した。
薬１ ２４０μｌを加え３７℃で５分間放置後、表３に
示す定量試薬２ ６０μｌを添加した。
【００２７】
【表２】
【００２８】
【表３】
【００２９】定量試薬２の添加後２分乃至３分間の３４
０ｎｍにおける吸光度の変化をレートアッセイによって
測定した。結果は図１及び図２に示されるが、これらを
標準線とした。
０ｎｍにおける吸光度の変化をレートアッセイによって
測定した。結果は図１及び図２に示されるが、これらを
標準線とした。
【００３０】
【実施例２】健康人血液から血清を分離し、分離した血
清 ５μｌに実施例１の定量試薬１２４０μｌを加え、
３７℃で５分間放置し、次いで実施例１の定量試薬２６
０μｌを加え、３７℃で２分間放置し、２分〜３分間の
３４０ｎｍの吸光度の増加量を測定し、レートアッセイ
により確定し、Ｍｇ++ ２．５ｍｇ／血清１００ｍｌの
値を得た。
清 ５μｌに実施例１の定量試薬１２４０μｌを加え、
３７℃で５分間放置し、次いで実施例１の定量試薬２６
０μｌを加え、３７℃で２分間放置し、２分〜３分間の
３４０ｎｍの吸光度の増加量を測定し、レートアッセイ
により確定し、Ｍｇ++ ２．５ｍｇ／血清１００ｍｌの
値を得た。
【００３１】
【実施例３】健康人尿 ５μｌに実施例１の定量試薬１
２４０μｌを加え、３７℃で５分間放置し、次いで実
施例１の定量試薬２ ６０μｌを加え、３７℃で２分
間放置し、２分〜３分間の３４０ｎｍの吸光度の増加量
を測定し、レートアッセイにより確定し、Ｍｇ++ ８．
０ｍｇ／尿 １００ｍｌの値を得た。
２４０μｌを加え、３７℃で５分間放置し、次いで実
施例１の定量試薬２ ６０μｌを加え、３７℃で２分
間放置し、２分〜３分間の３４０ｎｍの吸光度の増加量
を測定し、レートアッセイにより確定し、Ｍｇ++ ８．
０ｍｇ／尿 １００ｍｌの値を得た。
図１は実施例１におけるＭｇ++０〜１０ｍｇ／ｄｌの定
量の標準値を示し、図２は実施例１におけるＭｇ++０〜
５０ｍｇ／ｄｌの定量の標準線を示す。
量の標準値を示し、図２は実施例１におけるＭｇ++０〜
５０ｍｇ／ｄｌの定量の標準線を示す。
Claims (3)
- 【請求項１】 イソクエン酸脱水素酵素を含まず、Ｍｇ
++キレート剤を含む定量試薬１を体液もしくはその処理
物に添加し、所定時間放置して、ほとんどのＭｇ++をＭ
ｇ++キレート剤と結合させ、しかる後、イソクエン酸脱
水素酵素及びＮＡＤＰ+を含む定量試薬２を添加し、残
ったＭｇ++によってＮＡＤＰ+からＮＡＤＰＨに変化さ
せ、ＮＡＤＰＨの増加量によって、ヒト体液中のＭｇ++
量を測定することを特徴とするヒト体液中のマグネシウ
ムの定量方法。 - 【請求項２】 請求項１におけるＮＡＤＰＨの増加量を
３４０ｎｍの吸光度の増加で測定することを特徴とする
ヒト体液中のマグネシウムの定量方法。 - 【請求項３】 イソクエン酸脱水素酵素を含まず、Ｍｇ
++キレート剤を含む定量試薬１と、イソクエン酸脱水素
酵素及びＮＡＤＰ+を含む定量試薬２、を組合せてなる
ヒト体液中のマグネシウムの定量試薬。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP05020837A JP3133186B2 (ja) | 1993-01-14 | 1993-01-14 | ヒト体液中のマグネシウムの定量方法及び試薬 |
| DE1994623796 DE69423796T2 (de) | 1993-01-14 | 1994-01-05 | Testverfahren und Reagenz für Magnesium in menschlichen Körperflüssigkeiten |
| EP19940400026 EP0607064B1 (en) | 1993-01-14 | 1994-01-05 | Assay method and reagent for magnesium in human body fluids |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP05020837A JP3133186B2 (ja) | 1993-01-14 | 1993-01-14 | ヒト体液中のマグネシウムの定量方法及び試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06209792A JPH06209792A (ja) | 1994-08-02 |
| JP3133186B2 true JP3133186B2 (ja) | 2001-02-05 |
Family
ID=12038188
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP05020837A Expired - Lifetime JP3133186B2 (ja) | 1993-01-14 | 1993-01-14 | ヒト体液中のマグネシウムの定量方法及び試薬 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0607064B1 (ja) |
| JP (1) | JP3133186B2 (ja) |
| DE (1) | DE69423796T2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100353608B1 (ko) * | 2000-05-06 | 2002-09-27 | 주식회사 소일테크 | 분광광도계를 이용한 토양 치환성 마그네슘 정량방법 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4657854A (en) * | 1983-05-05 | 1987-04-14 | Ivan Endre Modrovich | Assay systems based on magnesium-responsive enzymes |
| EP0207493B1 (en) * | 1985-07-02 | 1990-08-16 | Oriental Yeast Co., Ltd. | Method of terminating isocitrate dehydrogenase reaction |
| JP2748134B2 (ja) * | 1988-11-29 | 1998-05-06 | オリエンタル酵母工業株式会社 | マグネシウムの定量方法 |
-
1993
- 1993-01-14 JP JP05020837A patent/JP3133186B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-01-05 DE DE1994623796 patent/DE69423796T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-01-05 EP EP19940400026 patent/EP0607064B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0607064A1 (en) | 1994-07-20 |
| DE69423796D1 (de) | 2000-05-11 |
| JPH06209792A (ja) | 1994-08-02 |
| DE69423796T2 (de) | 2000-11-23 |
| EP0607064B1 (en) | 2000-04-05 |
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