JPS6069557A - 不飽和鉄結合能の測定方法 - Google Patents
不飽和鉄結合能の測定方法Info
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- JPS6069557A JPS6069557A JP58177505A JP17750583A JPS6069557A JP S6069557 A JPS6069557 A JP S6069557A JP 58177505 A JP58177505 A JP 58177505A JP 17750583 A JP17750583 A JP 17750583A JP S6069557 A JPS6069557 A JP S6069557A
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/90—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving iron binding capacity of blood
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- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/91—Iron-binding capacity of blood
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、不飽和鉄結合能の測定方法に関する。
更に詳しくは、キレート発色剤を用いて不飽和鉄結合能
を測定するにあたり、特に鉄との配位結合力の弱い緩衝
剤で、なお且つ鉄と適度な結合性を有する緩衝剤乞用い
ることにより、不飽和鉄結合能を迅速且つ容易に測定で
きるよう改善された方法に関する。
を測定するにあたり、特に鉄との配位結合力の弱い緩衝
剤で、なお且つ鉄と適度な結合性を有する緩衝剤乞用い
ることにより、不飽和鉄結合能を迅速且つ容易に測定で
きるよう改善された方法に関する。
生体内に於て、鉄は約２Ａが赤血球内のヘモグロビンと
して存在し、残りの１／３はいわゆる貯蔵鉄として肝臓
、肺臓、骨髄その他に存在し、総量は約４ｇである。鉄
はほとんど尿より排泄されることなく１日１■程度が腸
粘膜の剥離、皮膚の脱落等で失なわれるにすぎず、毎日
の食物中より約１ ＋ｙの鉄を吸収することによりバラ
ンスを保っている。血清中の鉄は生理的には全てグロブ
リンの一種であるトランスフェリンと結合して移動して
いる。このトランスフェリンは分子量約９０，０００の
蛋白で２原子の鉄と結合する能力をもつ。通常血清中の
トランスフェリンは、その１．／３が鉄と結合した型で
存在して血清鉄と呼ばれ、残りの２／３は鉄と結合して
いないトランスフェリンとして存在し、その量は不飽和
鉄結合能として測定されている。
して存在し、残りの１／３はいわゆる貯蔵鉄として肝臓
、肺臓、骨髄その他に存在し、総量は約４ｇである。鉄
はほとんど尿より排泄されることなく１日１■程度が腸
粘膜の剥離、皮膚の脱落等で失なわれるにすぎず、毎日
の食物中より約１ ＋ｙの鉄を吸収することによりバラ
ンスを保っている。血清中の鉄は生理的には全てグロブ
リンの一種であるトランスフェリンと結合して移動して
いる。このトランスフェリンは分子量約９０，０００の
蛋白で２原子の鉄と結合する能力をもつ。通常血清中の
トランスフェリンは、その１．／３が鉄と結合した型で
存在して血清鉄と呼ばれ、残りの２／３は鉄と結合して
いないトランスフェリンとして存在し、その量は不飽和
鉄結合能として測定されている。
このような血清中の鉄及び不飽和鉄結合能は、ヘモグロ
ビンの代謝に関与しており、これらの測定は貧血疾患の
鑑別診断に不可欠なものである。
ビンの代謝に関与しており、これらの測定は貧血疾患の
鑑別診断に不可欠なものである。
このように臨床的に重要な意味を持つ不飽和鉄結合能の
測定のため、現在種々の方法が実用に供されている。例
えば、鉄−トランスフェリンがビ／り色に呈するのを・
利用し、極少量ずつ鉄を加え直接光電比色する方法（Ｒ
ａｔｈ ＆ Ｆｉｎｃｈ 法：Ｊ。
測定のため、現在種々の方法が実用に供されている。例
えば、鉄−トランスフェリンがビ／り色に呈するのを・
利用し、極少量ずつ鉄を加え直接光電比色する方法（Ｒ
ａｔｈ ＆ Ｆｉｎｃｈ 法：Ｊ。
Ｃｌ１ｎ、 Ｉｎｖｅｓｔ、２８．７９〜８５ （１９
４９））が利用されているが、この方法は、サンプル血
清量を多量に要する等の欠点がある。また、血清に過剰
量の鉄を加えた後炭酸マグネシウム粉末を加え、トラン
スフェリンに結合していない鉄を吸着させ、遠心分離操
作により炭酸マグネシウムを分離後上清中の鉄を測定す
る方法（几ａｎ１Ｓａｙ法： Ｃ１１ｎ、Ｃｈｉｍ。
４９））が利用されているが、この方法は、サンプル血
清量を多量に要する等の欠点がある。また、血清に過剰
量の鉄を加えた後炭酸マグネシウム粉末を加え、トラン
スフェリンに結合していない鉄を吸着させ、遠心分離操
作により炭酸マグネシウムを分離後上清中の鉄を測定す
る方法（几ａｎ１Ｓａｙ法： Ｃ１１ｎ、Ｃｈｉｍ。
１Ａｃｔａ、２．２２１−２２６ （１９５７乃がある
が、この方法は操作が繁雑である。また、血清に放射性
鉄１ｉ”ｅ”を用いろ方法もあるが、非密封のアイソト
ープを用いるため、その扱いは限定されてしまっている
。
が、この方法は操作が繁雑である。また、血清に放射性
鉄１ｉ”ｅ”を用いろ方法もあるが、非密封のアイソト
ープを用いるため、その扱いは限定されてしまっている
。
また、血清にアルカリ緩衝液を加え、更に鉄を加えてト
ランスフェリンと鉄火結合させ、残った鉄を比色定量し
不飽和鉄結合能とする方法がある。
ランスフェリンと鉄火結合させ、残った鉄を比色定量し
不飽和鉄結合能とする方法がある。
（５ｃｈａｄｅ 法 ： Ｐｒｏｃ、 Ｓｏｃ、Ｅｘｐ
、Ｂｉｏｌ 、 ＆、Ｍｅｄ 、。
、Ｂｉｏｌ 、 ＆、Ｍｅｄ 、。
８７．４４３ （１９５４））
この５ｃｈａｄｅｆ：、ｉ、更に詳しく述べると、１，
０ＭｐＨ＝ ８．１のトリス緩衝液 ２．０ ｍｌ Ｋ
、血清１、Ｏｍｌを加え５分放置し、３．５１ｍ９ ／
ｄｉの硫酸第１鉄ア′ンモニウム溶液（アスコルビン
酸０．５係含有） １．０ｍ１．加え、光電比色計にて
５３５ ｎ ｍの吸光度を測定し、しかる後に０．５％
バソフエナンスロリンスルホン酸ナトリウムを１滴加え
、１０分以上２５℃で放置し、再度５３５ ｎ ｍの吸
光度を測定するという方法である。
０ＭｐＨ＝ ８．１のトリス緩衝液 ２．０ ｍｌ Ｋ
、血清１、Ｏｍｌを加え５分放置し、３．５１ｍ９ ／
ｄｉの硫酸第１鉄ア′ンモニウム溶液（アスコルビン
酸０．５係含有） １．０ｍ１．加え、光電比色計にて
５３５ ｎ ｍの吸光度を測定し、しかる後に０．５％
バソフエナンスロリンスルホン酸ナトリウムを１滴加え
、１０分以上２５℃で放置し、再度５３５ ｎ ｍの吸
光度を測定するという方法である。
血清鉄は、ｐｌ−Ｉ ＝ ４．０以下でトランスフェリ
ンから解離すると言われているが、逆罠アルカリ性では
トランスフェリンとの結合は強く安定である。
ンから解離すると言われているが、逆罠アルカリ性では
トランスフェリンとの結合は強く安定である。
更に、バノフェナンスロリンのようなキレート発色剤が
入るとｐＩ４＝７．０以下程度からトランスフェリンと
鉄との解離が起こり始める。しかし、ｐＨ＝７５以上で
は、バソフェナンスロリンが共存してもトランスフェリ
ンと結合した鉄を解離することはない。従って、Ｓｃｈ
、ｚｃｌｅ法ではｐｌ−Ｉ ＝ ７．５以上の条件で測
定乞行なうことが必須条件となっていた。
入るとｐＩ４＝７．０以下程度からトランスフェリンと
鉄との解離が起こり始める。しかし、ｐＨ＝７５以上で
は、バソフェナンスロリンが共存してもトランスフェリ
ンと結合した鉄を解離することはない。従って、Ｓｃｈ
、ｚｃｌｅ法ではｐｌ−Ｉ ＝ ７．５以上の条件で測
定乞行なうことが必須条件となっていた。
ところで、発色反応速度とｐｉ−１との関係は、発色剤
がバソフェナンスロリンの場合ｐｌ−１＝ ５．０前後
が最も速（、ｐｌ−１がそれより低（なっても、高（な
っても、それに伴って発色速度が遅（なる。故に、この
発色剤Ｙ ５ｃｈａｄｃ法に用いる場合は、血清鉄の安
定性を考慮に入れると、必然的にｐｌ−１７，５〜８．
５ぐらいの液性で用いることになるわけであるが、現実
に、この範囲のｐＨ＝ ８．１ ’＆選択して行なった
場合で約１０分の反応時間を要する。
がバソフェナンスロリンの場合ｐｌ−１＝ ５．０前後
が最も速（、ｐｌ−１がそれより低（なっても、高（な
っても、それに伴って発色速度が遅（なる。故に、この
発色剤Ｙ ５ｃｈａｄｃ法に用いる場合は、血清鉄の安
定性を考慮に入れると、必然的にｐｌ−１７，５〜８．
５ぐらいの液性で用いることになるわけであるが、現実
に、この範囲のｐＨ＝ ８．１ ’＆選択して行なった
場合で約１０分の反応時間を要する。
このように、５ｃｈａｄｅ法は遠心分離や除蛋白を必要
とせず操作が゛非常に簡単な方法であるが、自動分析化
には発色反応に時間がかかりすぎるため、もっと短時間
に処理できることが強く要望されていた。
とせず操作が゛非常に簡単な方法であるが、自動分析化
には発色反応に時間がかかりすぎるため、もっと短時間
に処理できることが強く要望されていた。
本発明者らは、かかる要望に応えるべ（鋭意研究を行っ
た結果、発色に時間がかかる原因が緩衝剤にあるのでは
ないかと考え、従来用いられているトリスヒドロキシメ
チルアミノメタンよりも鉄とのキレート結合力が弱いも
ので、なお且つ鉄と適度な結合性のあるオキシカルボン
酸を緩衝剤として用いることにより、測定が迅速に百つ
容易に行えることを見出し、本発明を完成するに到った
。
た結果、発色に時間がかかる原因が緩衝剤にあるのでは
ないかと考え、従来用いられているトリスヒドロキシメ
チルアミノメタンよりも鉄とのキレート結合力が弱いも
ので、なお且つ鉄と適度な結合性のあるオキシカルボン
酸を緩衝剤として用いることにより、測定が迅速に百つ
容易に行えることを見出し、本発明を完成するに到った
。
即ち、一般的には、鉄の配位結合の強さは配位子の種類
によって異なり、Ｕ ） Ｎ （１１”ＣＩの場合）、
Ｏ−≧Ｎ （Ｉｉ’ｅＩの場合）といわれている（上野
景平他：「金属キレ−Ｆ Ｉ ｊ ｌ ｐ、２３ 南江
堂）。しかしながらこれらはその他の条件によっても左
右され、必ずしも一定なものではない。本発明者らは、
これら配位基をもつ緩衝剤について研究を重ねた結果、
本測定法に於ては、従来用いられているＮ配位子をもつ
トリスヒドロキシメチルアミノメタンよりもＯ配位子を
もつカルボン酸類の緩衝剤の方が、鉄とのキレート結合
力か弱いことを見出し、更に、その中でも特にオキシカ
ルボン酸が、他のカルボン酸類には無い特質即ち本測定
法の目的に適う適度な結合力を有することを見出し、本
発明に到達した。
によって異なり、Ｕ ） Ｎ （１１”ＣＩの場合）、
Ｏ−≧Ｎ （Ｉｉ’ｅＩの場合）といわれている（上野
景平他：「金属キレ−Ｆ Ｉ ｊ ｌ ｐ、２３ 南江
堂）。しかしながらこれらはその他の条件によっても左
右され、必ずしも一定なものではない。本発明者らは、
これら配位基をもつ緩衝剤について研究を重ねた結果、
本測定法に於ては、従来用いられているＮ配位子をもつ
トリスヒドロキシメチルアミノメタンよりもＯ配位子を
もつカルボン酸類の緩衝剤の方が、鉄とのキレート結合
力か弱いことを見出し、更に、その中でも特にオキシカ
ルボン酸が、他のカルボン酸類には無い特質即ち本測定
法の目的に適う適度な結合力を有することを見出し、本
発明に到達した。
本発明と５ｃｈａｄｅ法による発色反応時間のちがいを
第１図に示す。拳法により測定を行なうと、数十秒で発
色反応が完了することがわかる。一方３ ｃ ｈ ａ
ｄ ｅ法により測定を行なうと、発色反応完了までに１
０分以上もかかっていることがわかる。尚、この発色時
間が１０分以上という時間は、自動分析化に当っては致
命的ともいえる大きな欠点となる。
第１図に示す。拳法により測定を行なうと、数十秒で発
色反応が完了することがわかる。一方３ ｃ ｈ ａ
ｄ ｅ法により測定を行なうと、発色反応完了までに１
０分以上もかかっていることがわかる。尚、この発色時
間が１０分以上という時間は、自動分析化に当っては致
命的ともいえる大きな欠点となる。
また、血清に実施例１．に記載の緩衝液即ち酒石酸緩衝
液を加えたのち、０２５．０，５、ｌ、２．５．１０分
後に各々実施例１．に記載の発色試ｅ、ヲ添加し、吸光
度を測定すると、第２図に示すように、１５秒から１０
分後添加の間に全（吸光度の変化はな（、数秒間ですで
に不飽和トランスフェリンは飽和状態になっていること
が推定される。
液を加えたのち、０２５．０，５、ｌ、２．５．１０分
後に各々実施例１．に記載の発色試ｅ、ヲ添加し、吸光
度を測定すると、第２図に示すように、１５秒から１０
分後添加の間に全（吸光度の変化はな（、数秒間ですで
に不飽和トランスフェリンは飽和状態になっていること
が推定される。
このように、本発明の緩衝剤であるオキシカルホ゛／酸
を使用することにより、トランスフェリンと鉄との結合
も数秒で終了し、トランスフェリンと未結合の鉄は数秒
又は数十秒で発色し、数分もたたないうちに発色反応が
完結していることがわかる。
を使用することにより、トランスフェリンと鉄との結合
も数秒で終了し、トランスフェリンと未結合の鉄は数秒
又は数十秒で発色し、数分もたたないうちに発色反応が
完結していることがわかる。
グリコール酸、乳酸、α−オキシ酪酸、グリセリ定され
るものではな（、又これらの緩衝剤は単独で用いても、
また、２種以上の緩衝剤を併用して用いてもかまわない
。
るものではな（、又これらの緩衝剤は単独で用いても、
また、２種以上の緩衝剤を併用して用いてもかまわない
。
本発明の緩衝剤を用いて、測定を行なう場合の反応液の
ｐＨは、ｐＨ７，５〜９．５の範囲であれば問題ないが
、なかでもｐＨｓ、 Ｏ〜８．５の範囲が好ましい。ま
た、そのモル濃度も、０．０５〜０．４Ｍの範囲であれ
ば問題ないが、なかでも０．０８〜０．２ Ｍの範囲が
好ましい。
ｐＨは、ｐＨ７，５〜９．５の範囲であれば問題ないが
、なかでもｐＨｓ、 Ｏ〜８．５の範囲が好ましい。ま
た、そのモル濃度も、０．０５〜０．４Ｍの範囲であれ
ば問題ないが、なかでも０．０８〜０．２ Ｍの範囲が
好ましい。
本発明に用いる発色剤としては、必ずしもバソフェナン
スロリｙ （Ｂ Ｐ Ｔ ）に限られたものでな（、α
、α′−ジピリジル、０−フェナンスロリン、２．４．
６− ）ジピリジル−８−トリアジン（Ｔ Ｉ） ＴＺ
）、３−（２−ピリジル）−５，６ビス（４−スルボア
ｘ＝ル） １，２．４−ト’）’７ ） ７ （ＰＩ
）Ｔ Ｓ）及び２−ニトロン−５−（Ｎ−プロピルーＮ
−スルボプロピルアミノ）フェノールに代表されるニト
ロソフェノール誘導体等が挙げられる。
スロリｙ （Ｂ Ｐ Ｔ ）に限られたものでな（、α
、α′−ジピリジル、０−フェナンスロリン、２．４．
６− ）ジピリジル−８−トリアジン（Ｔ Ｉ） ＴＺ
）、３−（２−ピリジル）−５，６ビス（４−スルボア
ｘ＝ル） １，２．４−ト’）’７ ） ７ （ＰＩ
）Ｔ Ｓ）及び２−ニトロン−５−（Ｎ−プロピルーＮ
−スルボプロピルアミノ）フェノールに代表されるニト
ロソフェノール誘導体等が挙げられる。
近年、臨床検査の分野に、種々の自動分析機が導入され
ているが、従来の５Ｃｈａｄｅ法では測定時間がかかり
すぎるという大きな問題点を有していたために、本検査
項目の自動分析化はこれまで不可能と考えられていた。
ているが、従来の５Ｃｈａｄｅ法では測定時間がかかり
すぎるという大きな問題点を有していたために、本検査
項目の自動分析化はこれまで不可能と考えられていた。
本発明は、迅速且つ容易に行なえる不飽和鉄結合能の測
定法を提供するものであり、本発明と検体盲検のとれる
機種とを組合せることにより測定の自動化を可能とした
ものであって、斯業に貢献するところ甚だ犬なるものが
ある。
定法を提供するものであり、本発明と検体盲検のとれる
機種とを組合せることにより測定の自動化を可能とした
ものであって、斯業に貢献するところ甚だ犬なるものが
ある。
以下に実施例を示す。
実施例 １゜
〔緩衝液〕
４〃Ｌ９／１１の硫酸第一鉄アンモニウムと０５チアス
コルビン酸ヲ含む０．１ Ｍ 、 ｐＨ＝ ８．５ の
酒石酸緩衝液。
コルビン酸ヲ含む０．１ Ｍ 、 ｐＨ＝ ８．５ の
酒石酸緩衝液。
０．２％バソフェナンスロリンスルホン酸ナナトリウム
溶液 〔操作法〕 不飽和鉄結合能が８００μ９／ｄＬであるコントロール
血清を用意し、これを段階希釈することにより、不飽和
鉄結合能が各々２００．４００．６ｏｏμＩ／ｄ、Ｌテ
するコントロール血清をっ（る。（以下、コントロール
血清という。） 緩衝液 ３．５ ｍｌにコントロール血清 ０．２ ｍ
ｌ ｆ加え、混和後５３５ ｎ ｎｌの吸光度を測定す
る（吸光度 Ｅｓ・工）。しかる後に、発色試液 Ｑ、
５ ｍｌ ｆ加え混和し、室温に数分放置する。再度
５３５ ｎ ｍの吸光度を測定する（吸光度 Ｅｓ・２
）。
溶液 〔操作法〕 不飽和鉄結合能が８００μ９／ｄＬであるコントロール
血清を用意し、これを段階希釈することにより、不飽和
鉄結合能が各々２００．４００．６ｏｏμＩ／ｄ、Ｌテ
するコントロール血清をっ（る。（以下、コントロール
血清という。） 緩衝液 ３．５ ｍｌにコントロール血清 ０．２ ｍ
ｌ ｆ加え、混和後５３５ ｎ ｎｌの吸光度を測定す
る（吸光度 Ｅｓ・工）。しかる後に、発色試液 Ｑ、
５ ｍｌ ｆ加え混和し、室温に数分放置する。再度
５３５ ｎ ｍの吸光度を測定する（吸光度 Ｅｓ・２
）。
次に、コントロール血清の代りに、盲検用として水 ０
．２ ｍｆ −Ｊ だ、ｌ’ｅ ”＋ｙ ２００ ｔｔ
ｇ／ｄｌ 含ム鉄標準液 ０．２ ｍｌ ｙ各々加え、
上記同様の操作をして吸光度Ｅｎｉ・ｉ 、 Ｅｓｔ＋
＋＋、Ｅｌｌｊ ｅ ２及び請求める。
．２ ｍｆ −Ｊ だ、ｌ’ｅ ”＋ｙ ２００ ｔｔ
ｇ／ｄｌ 含ム鉄標準液 ０．２ ｍｌ ｙ各々加え、
上記同様の操作をして吸光度Ｅｎｉ・ｉ 、 Ｅｓｔ＋
＋＋、Ｅｌｌｊ ｅ ２及び請求める。
各コントロール血清の不飽和鉄結合能（μｇ／ｄＬ）に
対してプロットした吸光度差（ＥＢＪ・２−（ＥＳ・２
−０．８８ Ｅｓ・１））を結ぶ検量線は、第３図に示
されるように、原点を通る直線となり、検量線は良好な
定量性を示している。
対してプロットした吸光度差（ＥＢＪ・２−（ＥＳ・２
−０．８８ Ｅｓ・１））を結ぶ検量線は、第３図に示
されるように、原点を通る直線となり、検量線は良好な
定量性を示している。
実施例 ２
〔緩衝液〕
実施例 １． に同じ。
実施例 １ に同じ。
緩衝液 ３．５ ｍｌにサンプル血ｍ Ｏ，２ｍｌを加
え、混和後５３５ ｎ ｍの吸光度を測定する（吸光度
Ｅｓ・１）。しかる後に、発色試液 ０．５ ｍｅ Ｙ
加え混和し、室温に数分間放置する。再度５３５ ｎ
ｍの吸光度を測定する（吸光度 Ｅｓ・２）。
え、混和後５３５ ｎ ｍの吸光度を測定する（吸光度
Ｅｓ・１）。しかる後に、発色試液 ０．５ ｍｅ Ｙ
加え混和し、室温に数分間放置する。再度５３５ ｎ
ｍの吸光度を測定する（吸光度 Ｅｓ・２）。
次に、サンプル血清の代りに、盲検用として水０．２ｍ
ｌ、ｆ、た、Ｆｅ ２＋ｆ ２００１Ｌｊｉ／ｄｉ含む
鉄標準液Ｑ、 ２ ｍｌ ｆ各々加え、上記同様の操作
をして吸光度ＥＢＥＩＩＩ 、 Ｉｆｌｓｔ−＋ 、
ｌｉ；ＢＪ・ｚ 及ヒＥｓｔｅｚ 請求メル。
ｌ、ｆ、た、Ｆｅ ２＋ｆ ２００１Ｌｊｉ／ｄｉ含む
鉄標準液Ｑ、 ２ ｍｌ ｆ各々加え、上記同様の操作
をして吸光度ＥＢＥＩＩＩ 、 Ｉｆｌｓｔ−＋ 、
ｌｉ；ＢＪ・ｚ 及ヒＥｓｔｅｚ 請求メル。
上で得られた吸光度の値からＥＢｆ・２−（ＥＳ・２−
０．８８ Ｅｓ・１））をめ、実施例１の検量線よりサ
ンプル血清中の不飽和鉄結合能をめろことができる。又
、吸光度Ｅｓ＠ｔ、Ｅｓ ＠２ 、Ｅｎｊ １１２及び
Ｅｓｔ・２も不飽和鉄結合能をめることができる。
０．８８ Ｅｓ・１））をめ、実施例１の検量線よりサ
ンプル血清中の不飽和鉄結合能をめろことができる。又
、吸光度Ｅｓ＠ｔ、Ｅｓ ＠２ 、Ｅｎｊ １１２及び
Ｅｓｔ・２も不飽和鉄結合能をめることができる。
（但し、０８８は液量補正の為の係数）参考例 １．
炭酸マグネシウム沈澱法（従来法Ａ）す／グル血清 ０
．２ ｍｌに塩化第二鉄溶液（ＦｅＯ，５ｆｉ９／ｍｅ
） １ ｍｅ ｆ 加工、軽（振’） ａ セ’Ｍ
温ｉＣ約５分間放置する。これに炭酸マグネシウムＯ，
］、 ５゜ｑを加え混合し、更に蒸留水 Ｑ、 ５ ｍ
ｌ ’ｆ＜加え混合した後、室温で３０分放置する。遠
沈後上清０５ｍｅに緩衝液（５φラウリル硫酸ナトリウ
ム０．１Ｍ酢酸塩緩衝液 ｐＨ６，０） ２．０ ｍｌ
及びＬ−アスコルビン酸 １５ｍ９を加え混合し、０２
チ・くノフエナンスロリンスルホン酸ナトリウム溶ｉ’
ａ；１滴加え、室温で５分放置後５３５ ｎ川の吸光度
測定により総鉄結合能をめ、別に血苗鉄値を測定して差
し引き不飽和鉄結合能をめる。
炭酸マグネシウム沈澱法（従来法Ａ）す／グル血清 ０
．２ ｍｌに塩化第二鉄溶液（ＦｅＯ，５ｆｉ９／ｍｅ
） １ ｍｅ ｆ 加工、軽（振’） ａ セ’Ｍ
温ｉＣ約５分間放置する。これに炭酸マグネシウムＯ，
］、 ５゜ｑを加え混合し、更に蒸留水 Ｑ、 ５ ｍ
ｌ ’ｆ＜加え混合した後、室温で３０分放置する。遠
沈後上清０５ｍｅに緩衝液（５φラウリル硫酸ナトリウ
ム０．１Ｍ酢酸塩緩衝液 ｐＨ６，０） ２．０ ｍｌ
及びＬ−アスコルビン酸 １５ｍ９を加え混合し、０２
チ・くノフエナンスロリンスルホン酸ナトリウム溶ｉ’
ａ；１滴加え、室温で５分放置後５３５ ｎ川の吸光度
測定により総鉄結合能をめ、別に血苗鉄値を測定して差
し引き不飽和鉄結合能をめる。
第１表に示されるように、実施例 ２の値と、本参考例
の値とはよい相関を示し、その間に有意差は認められな
い。
の値とはよい相関を示し、その間に有意差は認められな
い。
第 １ 表
γ二０９９８
Ｙ二１．ｏｚＸ−６，０８
実施例 ３ （自動分析機による測定）〔緩衝液〕
４ｍノ／ｌの硫酸第一鉄アンモニウムと０．５％アスコ
ルビ／酸ヲ含む０．１１ＶＩ、 ｐ Ｈ８，０１Ｊンコ
゛酸緩衝′ｅ、。
ルビ／酸ヲ含む０．１１ＶＩ、 ｐ Ｈ８，０１Ｊンコ
゛酸緩衝′ｅ、。
実施例 １ に同じ０
日立７０５型自動分析機使用。
す／グル血清 ２０μ１１緩衝液 ３５０μβを加え、
３７℃で４分４０秒後５４６ ｎ ｔｎの吸光度を測定
する。その後２０秒後に発色試液 ５０μｌ’ｚｔ加え
、更に５分後に吸光度を測定する。
３７℃で４分４０秒後５４６ ｎ ｔｎの吸光度を測定
する。その後２０秒後に発色試液 ５０μｌ’ｚｔ加え
、更に５分後に吸光度を測定する。
本実施例に従って不飽和鉄結合能量なめ、従来法Ｂ（沈
澱助剤としてアン・く−ライ）ＣＧ−４００使用、ニト
ロンｌ） Ｓ Ａ Ｐ発色法）により用手法で測定した
値と比較した結果を第２表に示す。
澱助剤としてアン・く−ライ）ＣＧ−４００使用、ニト
ロンｌ） Ｓ Ａ Ｐ発色法）により用手法で測定した
値と比較した結果を第２表に示す。
第 ２ 表
γ ＝ Ｏ，’９ ９ ２
Ｙ＝ １．０ ０ ８ Ｘ”−７，６１第２表に示され
るように、実施例、３の値と従来法Ｂの値とはよい相関
を示している。
るように、実施例、３の値と従来法Ｂの値とはよい相関
を示している。
実施例 ４
ルピン酸を含む０．１ Ｍ 、 ｐＨ８，２のグリコー
ル酸緩衝液。
ル酸緩衝液。
０２％ ３−（２−ピリジル）−５，６ビス（４−スル
ホフェニル）−１，２，４−）リアジン（ＰＤＴＳ）。
ホフェニル）−１，２，４−）リアジン（ＰＤＴＳ）。
実施例２と同じサンプル血清を用い、実施倒木める。
測定結果は実施例２に準する。
実施例 ５．（自動分析機による測定）〔緩衝液〕
８ｍ９／ｌの硫酸第一鉄アンモニウムと０．５％アスコ
ルビン酸ナトリウム’！ｌ’ 含ム０．１２ Ｍ 、
ｐＨ３，２の乳酸緩衝液。
ルビン酸ナトリウム’！ｌ’ 含ム０．１２ Ｍ 、
ｐＨ３，２の乳酸緩衝液。
０１％２−ニトロソ−５−（Ｎ−プロピル−Ｎ−スルホ
フロピルアミノ）フェノールにトロソーＰＳＡＰ）溶液
。
フロピルアミノ）フェノールにトロソーＰＳＡＰ）溶液
。
日立７３６型自動分析機使用。
実施例 ３． と同じサンプル血清 ２０μｌ、緩衝液
３５０μｌ’ｌ加え、３７℃で２分５０秒後７０、Ｏ
ｎｍの吸光度を測定する。その後、１０秒後に発色試液
５０μｌを加え、更に４分３０秒後に吸光度な測定す
る。
３５０μｌ’ｌ加え、３７℃で２分５０秒後７０、Ｏ
ｎｍの吸光度を測定する。その後、１０秒後に発色試液
５０μｌを加え、更に４分３０秒後に吸光度な測定す
る。
以上の測定より、実施例 ３ と同様の不飽和鉄結合能
値が得られた。
値が得られた。
実施例 ６．（自動分析機による測定）コルビン酸ヲ含
む０．１ Ｍ、 ｐｎｓ、５のグリコール酸緩衝液。
む０．１ Ｍ、 ｐｎｓ、５のグリコール酸緩衝液。
０．１チ２．４．６−トリビリジルーＳ−トリアジン（
ＴＰＴＺ）溶液。
ＴＰＴＺ）溶液。
日本電子ｖｘ−ｉｏｏｏ型自動分析機使用。
実施例３．と同じサンプル血清３０μｔ、緩衝液４００
μｔを加え、３７℃で２分１２秒後６００ｎｍの吸光度
を測定する。その後、１２秒後に発色試液１００μｔｆ
ｒ加え、更に２分２４秒後に吸光度を測定する。
μｔを加え、３７℃で２分１２秒後６００ｎｍの吸光度
を測定する。その後、１２秒後に発色試液１００μｔｆ
ｒ加え、更に２分２４秒後に吸光度を測定する。
の範囲で用いられるが、本実施例のようにｐＨ８，０ぐ
らいの条件で用いても十分発色可能であった。
らいの条件で用いても十分発色可能であった。
第１図は、不法と３ｃｂａｄｅ 法との発色反応時間を
表わしたもので、（ａ）４庵氷上、（ｂ） Ｉ２５ｃｋ
ａ北が１示′す。 第２図は、不法に於ける鉄によるトランスフエリシの飽
和時間を表わしたものである。 第３図は、実施例１に於て得られた検量線を表λりし、
横軸は不飽和鉄結合能値（μＥｌ／ｄＬ）縦軸は吸光度
差（ｇｏｔ・２−（ＥＳ・２−０．８８ Ｅｓ・１））
を表わす０ − 特許出願人 和光純薬工業株式会社１ 図 １間 第２図
表わしたもので、（ａ）４庵氷上、（ｂ） Ｉ２５ｃｋ
ａ北が１示′す。 第２図は、不法に於ける鉄によるトランスフエリシの飽
和時間を表わしたものである。 第３図は、実施例１に於て得られた検量線を表λりし、
横軸は不飽和鉄結合能値（μＥｌ／ｄＬ）縦軸は吸光度
差（ｇｏｔ・２−（ＥＳ・２−０．８８ Ｅｓ・１））
を表わす０ − 特許出願人 和光純薬工業株式会社１ 図 １間 第２図
Claims (2)
- （１）キレート発色剤を用いて血清中の不飽和鉄結合能
な測定するにあたり、緩衝剤として１種又は２種以上の
オキシ酸又は／及びその塩を用いることを特徴とする、
血清中の不飽和鉄結合能の測定方法。 - （２）オキシ酸が、グリコール酸、乳酸、α−オキ項記
載の測定方法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58177505A JPS6069557A (ja) | 1983-09-26 | 1983-09-26 | 不飽和鉄結合能の測定方法 |
| AT84111420T ATE53128T1 (de) | 1983-09-26 | 1984-09-25 | Bestimmung der ungesaettigten eisenbindungskapazitaet. |
| DE8484111420T DE3482338D1 (de) | 1983-09-26 | 1984-09-25 | Bestimmung der ungesaettigten eisenbindungskapazitaet. |
| US06/654,292 US4588695A (en) | 1983-09-26 | 1984-09-25 | Determination of unsaturated iron-binding capacity |
| EP84111420A EP0137400B1 (en) | 1983-09-26 | 1984-09-25 | Determination of unsaturated iron-binding capacity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58177505A JPS6069557A (ja) | 1983-09-26 | 1983-09-26 | 不飽和鉄結合能の測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6069557A true JPS6069557A (ja) | 1985-04-20 |
| JPH0331391B2 JPH0331391B2 (ja) | 1991-05-02 |
Family
ID=16032076
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP58177505A Granted JPS6069557A (ja) | 1983-09-26 | 1983-09-26 | 不飽和鉄結合能の測定方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4588695A (ja) |
| EP (1) | EP0137400B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6069557A (ja) |
| AT (1) | ATE53128T1 (ja) |
| DE (1) | DE3482338D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5420008A (en) * | 1991-12-02 | 1995-05-30 | Oriental Yeast Co., Ltd. | Assay method and assay reagent for serum iron or unsaturated iron binding capacity |
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| IT1201512B (it) * | 1985-12-27 | 1989-02-02 | Chemical Lab Srl | Reattivo cromogeno per la determinazione del contenuto di ferro e della capacita' ferrolegante di liquidi biologici |
| IT1219848B (it) * | 1988-03-03 | 1990-05-24 | Miles Italiana | Composti indicatori,metodo per la loro preparazione e loro impiego in un sistema di saggio della sideremia |
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| CN111257549A (zh) * | 2018-12-03 | 2020-06-09 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 检测血清中的不饱和铁结合力的试剂盒及方法 |
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| JPS529160B2 (ja) * | 1972-04-12 | 1977-03-14 | ||
| US3925020A (en) * | 1973-03-05 | 1975-12-09 | Mallinckrodt Inc | Method for determining the total iron-binding capacity of blood serum |
| US4224034A (en) * | 1978-09-07 | 1980-09-23 | American Monitor Corporation | Assay of iron and iron binding protein reagents and methods |
| IT1100475B (it) * | 1978-11-08 | 1985-09-28 | R C O Ricerche Di Chimica Clin | Metodo e composizioni per la determinazione diretta del ferro mel stero ematico |
| IT1148745B (it) * | 1980-12-11 | 1986-12-03 | Sclavo Inst Sieroterapeut | Metodo per la determinazione della transferrina e composizione adatta allo scopo |
-
1983
- 1983-09-26 JP JP58177505A patent/JPS6069557A/ja active Granted
-
1984
- 1984-09-25 EP EP84111420A patent/EP0137400B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1984-09-25 AT AT84111420T patent/ATE53128T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-09-25 DE DE8484111420T patent/DE3482338D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1984-09-25 US US06/654,292 patent/US4588695A/en not_active Expired - Fee Related
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|---|---|---|---|---|
| US5420008A (en) * | 1991-12-02 | 1995-05-30 | Oriental Yeast Co., Ltd. | Assay method and assay reagent for serum iron or unsaturated iron binding capacity |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0331391B2 (ja) | 1991-05-02 |
| EP0137400A2 (en) | 1985-04-17 |
| ATE53128T1 (de) | 1990-06-15 |
| EP0137400B1 (en) | 1990-05-23 |
| EP0137400A3 (en) | 1986-05-28 |
| US4588695A (en) | 1986-05-13 |
| DE3482338D1 (de) | 1990-06-28 |
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