JPH033911B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は鉄測定用試薬に関するものである。鉄
の測定法には種々あるが微量分析では原子吸光
法、比色分析法が主流であり、特に多数検体を処
理する臨床化学分析では比色分析法が有利であ
る。生体内の鉄は約2/3が赤血球内のヘモグロビ
ンとして存在し、残りの1/3はいわゆる貯蔵鉄と
して肝蔵、脾蔵、骨随その他に存在し総量は約４
ｇである。鉄は殆んど尿より排泄されることなく
１日１mg程度が腸粘膜の剥離、皮膚の脱落等で失
なわれるにすぎず毎日の食物中より約１mgの鉄を
吸収することによりバランスを保つている。血清
中の鉄は生理的には全てグロブリンの一種である
トランスフエリンと結合して移動している。この
トランスフエリンは分子量約90000の蛋白で２原
子の鉄と結合する能力をもつ。通常血清中のトラ
ンスフエリンはその1/3が鉄と結合した型で存在
して血清鉄と呼ばれ残り2/3は鉄と結合していな
いトランスフエリンとして存在しその量は不飽和
鉄結合能と呼ばれている。 血清鉄を測定する場合はこのトランスフエリン
と鉄のキレートをはずし遊離の鉄とする必要があ
る。この手段としては(1)塩酸を加えて加熱し除蛋
白する、(2)PH3.0以下でグロブリンとの結合をは
ずし低PHでキレートを形成する発色剤で比色す
る、(3)蛋白変性剤のラウリル硫酸ナトリウムや塩
酸グアニジンを使用してトランスフエリンを変質
させ鉄を遊離させる、などがある。一方、不飽和
鉄結合能の測定法としては、血清に過剰の鉄を添
加して全てのトランスフエリンと鉄を結合させ過
剰の鉄を炭素マグネシウム等の吸着剤で沈澱させ
上清中の鉄濃度を測定して血清鉄値を差し引いて
求めるか、又は、既知量の鉄を血清に加え、トラ
ンスフエリンと結合させた残りの鉄を測定して、
鉄の減少量から不飽和鉄結合能を求める二法が主
流でこれら血清鉄、及び不飽和鉄結合能の測定値
は鉄欠乏性貧血、再生不良性貧血、悪性貧血、慢
性出血性貧血、真性多血症、感染性貧血などの各
種貧血、急性肝炎、慢性肝炎、肝硬変などの肝疾
患の鑑別に重要な意味をもつものである。 現在、鉄の発色剤として一般に使われているも
のはチオシアン酸塩、α，α′ジピリジル、Ｏ−フ
エナンスロリン、バソフエナンスロリン（以下、
BPTと略称する。）、２，４，６トリピリジル−
Ｓ−トリアジン（以下、TPTZと略称する。）、３
−（２−ピリジル）−５，６ビス（４−スルホフエ
ニル）−１，２，４−トリアジン（以下、PDTS
と略称する。）及び近年開発された２−ニトロソ
−５−（Ｎ−プロピル−Ｎ−スルホプロピルアミ
ノ）フエノールに代表されるニトロソフエノール
誘導体等である。 これらの発色剤の内三価の鉄の発色剤はチオシ
アン酸塩のみで他は全て二価の鉄の発色剤で、使
用に当つては還元剤の併用を必要とする。三価の
鉄の還元剤として公知のものは下記（表）７種
類である。

【表】 これらの内、精密分析用に充分その還元力を発
揮するものはＬ−アスコルビン酸とチオグリコー
ル酸であるとされているが、この２つの還元剤に
も実用上極めて重大な欠陥がある。つまり、Ｌ−
アスコルビン酸は粉末での安定性は比較的良好で
あるが溶液状態では安定性が極めて悪く使用にあ
たつては１検体ずつ粉末を添加する必要があつ
た。又、チオグリコール酸は酸性側では溶液状態
でも比較的安定で且つ還元力も充分であるが中性
以上では安定性及び還元力も劣り呈色安定化まで
かなりの時間を要し又、メルカプト基特有の悪臭
も使用上好ましからざるものである。 本発明者らはこれらの欠点に鑑み、溶液状態で
安定で精密分析に相応しい充分な還元力を有する
還元剤につき鋭意研究の結果、メタ重亜硫酸の塩
類がそれらの条件を満たすものであることをつき
とめ本発明を完成させるに至つた。 本発明に使用出来るメタ重亜硫酸の塩類として
は、アルカリ金属塩、アンモニウム塩、アルカリ
土類金属塩の内必要量が溶解出来るものが通常挙
げられるが、ナトリウム塩、カリウム塩を使用す
るのが常識的である。表は、従来使用されてき
た代表的還元剤と本発明の還元剤の溶液状態での
安定性を示したものである。従来使用の還元剤は
特にアルカリ側で安定性に欠け、Ｌ−アスコルビ
ン酸は数分、チオグリコール酸で３日、塩酸ヒド
ロキシルアミンで３ケ月が使用に耐えうる最大期
間であるのに対し、メタ重亜硫酸塩は１ケ年を経
過しても３％の含量低下にすぎず、実用上の有効
期間は室温保存で有に２年を越えるものである。
さらに酸性側では安定性はさらに向上する。

【表】 表は、現在使用されている代表的４種類の発
色剤をPHを変えて各還元剤を使用して発色させた
結果を示したものである。各発色剤に共通に広い
PH範囲で発色するものは、Ｌ−アスコルビン酸、
チオグリコール酸、及び本発明の還元剤の３種類
である。メタ重亜硫酸の塩類の至適量は使用PH、
使用発色剤によつて異なりPHの上昇に伴つてその
必要量も増加するが通常0.01％〜5.0％の範囲の
使用が望ましい。

【表】

【表】 次に実施例を示す。 実施例 １ （血清鉄の測定） 緩衝液 ラウリル硫酸ナトリウム ５ｇ メタ重亜硫酸ナトリウム １ｇ 酢酸ナトリウム 4.15ｇ 上記のものを水90mlに溶解し塩酸でPHを6.0と
して水で全量100mlとする。 発色試液Ａ（BPT） バソフエナンスロリンスルホン酸ナトリウム
0.1ｇを水20mlに溶解する。 発色試液Ｂ（PDTS） PDTS0.1ｇを水20mlに溶解する。 発色試液Ｃ（NO−PSAP） NO−PSAP0.1ｇを水20mlに溶解する。 使用法 試料0.5mlに上記緩衝液2.0ml加え混和後、使用
する発色剤の極大吸収波長に於て検体盲検を測定
し、発色試液Ａ〜Ｃのいずれかを１滴加え混和
後、10分放置して再度極大吸収波長に於る吸光度
を測定し検体盲検を差し引いて血清鉄値を算出す
る。 本法の測定値を従来使用されてきた還元剤Ｌ−
アスコルビン酸、チオグリコール酸を使用したと
きの値と比較したものが表である。従来使用の
還元剤との間に有意の差を与えていない。 実施例 ２ （不飽和鉄結合能測定） 鉄含有緩衝液 トリスヒドロキシルアミン 1.21ｇ クエン酸 0.221ｇ メタ重亜硫酸カリウム 1.0ｇ 硫酸第一鉄アンモニウム
（Feとして100μｇ／dl） を水90mlに溶解し塩酸でPH8.5〜8.7に調整した後
水で全量100mlとする。 使用法 血清200μに上記鉄含有の緩衝液2.0mlを加え
室温に15分間放置した後750nｍの吸光度を測定
する。次に発色試液Ｃ（実施例１に記載。）１滴を
加え混和後、室温に15分放置

【表】

【表】 して再び750nｍの吸光度を測定し検体盲検を差
し引いて鉄の減少量を求め、不飽和鉄結合能を求
める。 本法での測定値、従来の炭酸マグネシラム沈澱
法及び実施例２に従つて還元剤のみＬ−アスコル
ビン酸を使用した場合の測定値を表に示す。

【表】

【表】

【表】

【表】 炭酸マグネシウム沈澱法、Ｌ−アスコルビン酸
還元法及び本法の間に測定値に有意の差を認めな
い。 このように、本発明の還元剤は液性に関わらず
溶液状態で極めて長期間安定であり従来使用のＬ
−アスコルビン酸、チオグリコール酸と測定値が
一致する充分な還元力を持つ一方悪臭もなく又環
境衛生上の問題もない極めて優れたもので斯業に
貢献するところ極めて大なるものがある。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 二価の鉄の発色試薬を用いて鉄の比色分析を
   行なうに当り三価の鉄の還元剤としてメタ重亜硫
   酸の塩類を使用することを特徴とする鉄測定用試
   薬。