CN103076298A - 抗毒素/抗血清中铝含量的测定方法 - Google Patents

抗毒素/抗血清中铝含量的测定方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种抗毒素/抗血清中铝含量的测定方法，取四份等量的待测试样0.1～0.5ml，分别置四个试管中，第1试管不加标准铝溶液，作为待测试样，在第2、3、4试管中，分别加入0.4～4.5ml的标准铝溶液，再用体积浓度为0.1～1%的硝酸溶液稀释至总体积为2～5ml，混匀，即得到铝浓度X为0～30ng/ml的四份样品溶液；按常规石墨炉原子吸收分光光度法，分别测得四个不同的吸光度Y，根据X与Y的对应关系，得到一线性回归方程，并将Y=0代入该线性回归方程，计算得到X的绝对值即为第1试管的待测试样的铝浓度，乘于稀释倍数，即得到抗毒素、抗血清中铝的含量。改善、消除了基体影响，克服血清基体产生的高背景，操作简单，准确、快速。

Description

抗毒素/抗血清中铝含量的测定方法
技术领域
本发明涉及一种抗毒素/抗血清中铝含量的测定方法，属于生物技术领域。
背景技术
抗毒素/抗血清（Antitoxin/Antiserum）是指采用特定的抗原免疫动物后，再收集高效价免疫血清，并经过提取、纯化后，制备出含完整抗体（IgG）或抗体片段[F(ab’)2]的免疫球蛋白制品，以用于预防和治疗各相应疾病引起的感染。随着历史的发展，抗毒素/抗血清制品范围从早期的单纯治疗细菌外毒素疾病扩展至现在的抗病毒制品，如抗狂犬和天花血清。目前，马免疫球蛋白在难治病种（狂犬、天花，破伤风、肉毒中毒）、含多种致病成分（蛇毒）、防止生物恐怖和病原学研究不清的疾病等方面具有重要作用。随着历史及技术的发展，该制品也从最早的抗血清、抗毒素发展为现在安全性很高的纯化动物（马）特种免疫球蛋白，其活性成分也从血清发展到抗体，进而又发展为免疫球蛋白的F(ab’)2片段，产品的过敏反应显著降低。
随着纯化方法的改进，抗毒素/抗血清生产工艺中又有可能接触诸多的铝污染源，如：硫酸铝钾、水源、助滤物、滤材、滤器、瓶子及胶塞等，导致制品中铝含量超标。人体摄取过多的铝将直接破坏神经细胞内遗传物质脱氧核糖核酸的功能，不仅使老年人易患痴呆病，而且还会使人衰老，引发骨软化病、低血色素性贫血和慢性肾功能损害等病症。因此需测定抗毒素、抗血清制品中铝的含量，从而评价产品质量。
目前测定铝的方法主要有原子吸收分光光度法、电感耦合等离子体发射光谱法、电感耦合等离子体质谱法等，由于原子吸收分光光度法测定铝具有简单、快速的优点，因此它在测定痕量和微量铝方面获得了越来越广泛的应用。原子吸收分光光度法包括火焰原子吸收分光光度法和石墨炉原子吸收分光光度法。火焰原子吸收分光光度法灵敏度低，不适合于痕量分析，而石墨炉原子吸收分光光度法具灵敏度较高，是目前痕量铝分析的主要方法。抗血清/抗毒素制品中含有蛋白质及氯化钠等辅料，基体组份复杂，若采用石墨炉原子吸收分光光度法直接分析，基体组份的背景干扰严重；若按常规方法对样品进行消化处理，则样品用量多，且需多次转移，易受到污染。目前，抗血清/抗毒素中铝含量测定的相关方法未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗毒素/抗血清中铝含量的测定方法，该方法能准确地测定抗毒素/抗血清中铝含量，并且方法准简便、快速。
本发明通过下列技术方案实现：一种抗毒素/抗血清中铝含量的测定方法，其特征在于经过下列步骤：
1）取四份等量的抗毒素、抗血清待测试样0.1～0.5ml，分别置四个试管中，第1试管不加标准铝溶液，作为待测试样，在第2、3、4试管中，分别加入0.4～4.5ml的标准铝溶液，再用体积浓度为0.1～1%的硝酸溶液稀释至总体积为2～5ml，混匀，即得到铝浓度X为0～30ng/ml的四份样品溶液；
2）用常规原子吸收分光光度计的自动取样器分别吸取步骤1）的四个样品溶液，按常规石墨炉原子吸收分光光度法，分别测得四个不同的吸光度Y，根据X与Y的对应关系，得到一线性回归方程，并将Y = 0代入该线性回归方程，计算得到X的绝对值即为第1试管的待测试样的铝浓度，乘于稀释倍数，即得到抗毒素、抗血清中铝的含量。
所述标准铝溶液是：将铝标准溶液（1000μg/ml，国家标准物质）用硝酸溶液溶解稀释至浓度为25～100ng/ml的标准铝溶液。
所述石墨炉原子吸收分光光度法的参考测量条件见下表：
Figure 787594DEST_PATH_IMAGE002
本发明的优点和有益效果是：选用体积浓度为0.1%～1%的硝酸溶液作为稀释介质，将样品稀释，并采用标准加入法，在待测样品中加入标准铝溶液，稀释后直接进样分析，即可改善及消除基体影响，克服血清基体产生的高背景。本发明样品不需预先经过消化处理和多次转移等步骤，操作步骤少、简单，降低了样品处理过程中的污染和损失。本发明提供的测定抗毒素/抗血清中铝含量的方法，具有准确、快速、简便等特点。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明进行详细说明，但保护范围不仅限于实施例所述范围。
实施例1
破伤风抗毒素中铝含量的测定：
仪器：1、AAnalyst 800型原子吸收分光光度计，Perkin Elmer公司。
2、旋涡混合器：上海医科大学仪器厂。
试剂与试药：铝标准溶液（1000 μg/ml，GBW（E）080981，济南众标科技有限公司）；硝酸（ρ＝1.42 g/ml，西陇化工股份有限公司；批号：111017，优级纯）；实验用水为去离子水。
经过下列各步骤：
（1）将铝标准溶液用体积浓度为0.1%的硝酸溶液稀释至浓度为25 ng/ml；
（2）取破伤风抗毒素待测样品，分别置四个试管中，每个试管0.2 ml，第1试管不加标准铝溶液，以作为待测试样，分别向第2、3、4试管中加入步骤（1）的标准铝溶液0.5 ml、1.0 ml、1.5 ml，再分别用体积浓度为0.1%的硝酸溶液稀释至2.5ml，混匀，即得到四份样品溶液，该四份样品溶液中加入的铝浓度分别为X =0 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、15 ng/ml，其中，第1试管的稀释倍数为12.5倍；
（3）用原子吸收分光光度计的自动取样器分别吸取步骤（2）的四个样品溶液，按常规石墨炉原子吸收分光光度法进行测定，分别测得四个吸光度值如下：Y =0.0112、0.0217、0.0315、0.0392；根据X与Y的对应关系进行线性拟合，得到下列线性回归方程：Y = 0.00188 X + 0.0118，且r = 0.9977，并将Y = 0代入该线性回归方程，计算得到第1试管的待测试样的铝浓度是|X| =|-0.0118/ 0.00188| = 6.2765ng/ml，乘于稀释倍数12.5倍，即得到破伤风抗毒素中铝的含量为6.2765×12.5 = 78.46μg/L；其中，原子吸收分光光度计的条件为：波长：309.3 nm；狭缝：0.7 nm；背景校正：ON；氩气流量：250 ml/min；石墨炉升温程序见下表：
Figure 2013100189377100002DEST_PATH_IMAGE004
实施例2
抗狂犬病血清中铝含量的测定：
仪器：1、AAnalyst 800型原子吸收分光光度计，Perkin Elmer公司。
2、旋涡混合器：上海医科大学仪器厂。
试剂与试药：铝标准溶液（1000 μg/ml，GBW（E）080981，济南众标科技有限公司）；硝酸（ρ＝1.42 g/ml，西陇化工股份有限公司；批号：111017，优级纯）；实验用水为去离子水。
经过下列各步骤：
（1）将铝标准溶液用体积浓度为0.5%的硝酸溶液溶解稀释至浓度为50 ng/ml；
（2）取抗狂犬病血清待测样品，分别置四个试管中，每个试管0.4 ml，第1试管不加标准铝溶液，以作为待测试样，分别向第2、3、4份中加入步骤（1）的标准铝溶液0.5、1.0、1.5ml，再分别用体积浓度为0.5%的硝酸溶液稀释至5ml，混匀，即得到四份样品溶液，四份样品溶液中加入的铝浓度分别为X =0 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、15 ng/ml，其中，第1试管的稀释倍数为12.5倍；
（3）用原子吸收分光光度计的自动取样器分别吸取步骤（2）的样品溶液，按常规石墨炉原子吸收分光光度法进行测定，分别测得的四个吸光度值如下：Y =0.0205、0.0312、0.0409、0.0492；根据X与Y的对应关系进行线性拟合，得到下列线性回归方程：Y = 0.00192 X + 0.0211，且r = 0.9984，并将Y = 0代入该线性回归方程，计算得到第1试管的待测试样的铝浓度是|X| =|-0.0211/ 0.00192| = 10.9896ng/ml，乘于稀释倍数12.5倍，即得到破伤风抗毒素中铝的含量为10.9896×12.5 = 137.37μg/L；其中，原子吸收分光光度计的条件同实施例1。
实施例3
抗蛇毒血清中铝含量的测定：
仪器：1、AAnalyst 800型原子吸收分光光度计，Perkin Elmer公司。
2、旋涡混合器：上海医科大学仪器厂。
试剂与试药：铝标准溶液（1000 μg/ml，GBW（E）080981，济南众标科技有限公司）；硝酸（ρ＝1.42 g/ml，西陇化工股份有限公司；批号：111017，优级纯）；实验用水为新制备的去离子。
经过下列各步骤：
（1）铝标准溶液用体积浓度为1%的硝酸溶液溶解稀释至浓度为100 ng/ml；
（2）取抗蛇毒血清待测样品，分别置四个试管中，每个试管0.2 ml，第1试管不加标准铝溶液，以作为待测试样，分别向第2、3、4份中加入步骤（1）的标准铝溶液0.4、0.8、1.2ml，再分别用体积浓度为1%的硝酸溶液稀释至4ml，混匀，即得到4份样品溶液，4份样品溶液中加入的铝浓度分别为X =0 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml、30 ng/ml，其中，第1试管的稀释倍数为20倍；
（3）原子吸收分光光度计的自动取样器分别吸取步骤（2）的样品溶液，按常规石墨炉原子吸收分光光度法进行测定，测得的吸光度结果如下：Y =0.0219、0.0445、0.0633、0.0785；根据X与Y的对应关系进行线性拟合，得到下列线性回归方程：Y = 0.00189 X + 0.0238，且r = 0.9962，并将Y = 0代入该线性回归方程，计算得到第1试管的待测试样的铝浓度是|X| =|-0.0238/0.00189| = 12.59ng/ml，乘于稀释倍数12.5倍，即得到破伤风抗毒素中铝的含量为12.59×20 =251.8μg/L；其中，原子吸收分光光度计的条件同实施例1。

Claims (2)

1.一种抗毒素/抗血清中铝含量的测定方法，其特征在于经过下列步骤：
1）取四份等量的抗毒素、抗血清待测试样0.1～0.5ml，分别置四个试管中，第1试管不加标准铝溶液，作为待测试样，在第2、3、4试管中，分别加入0.4～4.5ml的标准铝溶液，再用体积浓度为0.1～1%的硝酸溶液稀释至总体积为2～5ml，混匀，即得到铝浓度X为0～30ng/ml的四份样品溶液；
2）用常规原子吸收分光光度计的自动取样器分别吸取步骤1）的四个样品溶液，按常规石墨炉原子吸收分光光度法，分别测得四个不同的吸光度Y，根据X与Y的对应关系，得到一线性回归方程，并将Y = 0代入该线性回归方程，计算得到X的绝对值即为第1试管的待测试样的铝浓度，乘于稀释倍数，即得到抗毒素、抗血清中铝的含量。
2.如权利要求1所述的抗毒素/抗血清中铝含量的测定方法，其特征在于所述标准铝溶液是：将铝标准溶液用硝酸溶液溶解稀释至浓度为25～100ng/ml的标准铝溶液。
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