JPH06209792A - ヒト体液中のマグネシウムの定量方法 及び試薬 - Google Patents
ヒト体液中のマグネシウムの定量方法 及び試薬Info
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Abstract
定量試薬1によってほとんどのMg++をキレートし、残
ったわずかなMg++をiCDH及びNADP+を含む定
量試薬2で測定する。 【効果】 本発明の方法によって、体液中のMg++量を
正確に定量することができる。
Description
の細胞内に広く存在し、成長と生命維持に不可欠なイオ
ンである。
ムと拮抗的に変動し、中枢神経系や心臓の機能不全時に
あるいは腎不全、急性膵炎時などにその変動が観察され
ることからマグネシウムの定量は重要な検査項目の一つ
になりつつある。
ば、ヒト血清中のマグネシウムが短時間に正確に定量で
きるので、臨床検査に大いに貢献するものである。
法としては、キシリジルブルーを用いてキレートを生成
させる比色法や、原子吸光法などが知られているが、こ
れらの方法のうち、前者は特異性の面で問題を有し、後
者については、特殊な装置を必要とするという欠点を持
っていた。
CDHという)、NADP+及びイソサイトレートを含
む反応溶液を用い、次の表1に示される反応式(I)に
おけるMg++を反応の起源として反応させ、生成するN
ADPHの量を340nmの吸光度で測定する方法が提
案されている。(USP 4,657,854)
中のMg++を定量したところ、正確な値を得ることはで
きなかった。
く反応して式(I)の反応を終結するために正確な検定
線が得られず、正しいMg++含量を知ることはできなか
った。
196において、iCDH、NADP+、インサイトレ
ート及びMg++キレート剤を含む反応溶液をMg++含有
液に添加してしばらく放置した後、NADPHの増加量
を測定する方法を提案した。
0nmの吸光度によるNADPHの増加量が直線では得
られず、正確なMg++含量を測定することは困難であっ
た。
はその処理物中のMg++含量を正確に定量するためにな
されたものである。
試薬1及び定量試薬2に分けて、定量試薬1はiCDH
を含ませることなく、Mg++キレート剤を含有させ、そ
して定量試薬2にはiCDH及びNADP+を含ませ
て、所定時間を設けて順次使用することによって、体液
もしくはその処理物中のMg++含量を正確に定量するこ
とができたものである。
どのMg++を、iCDHを含まないMg++キレート剤含
有定量試薬1の添加によって、キレートし、所定時間経
過後はごく微量のMg++が残っているだけであるが、こ
のごく微量のMg++を、iCDH及びNADP+を含む
定量試薬2の添加で、Mg++によるiCDHの活性化と
それにともなうNADPHの増加を340nmの吸光度
の増加によって、測定するものである。
のすべてを含んだ試薬を用い所定時間放置して測定する
特開平2−145196の方法よりは、本発明のiCD
Hを含まず、Mg++キレート剤を含む定量試薬1とiC
DH及びNADP+を含む定量試薬2を分けて用いる方
法のほうが、体液中のMg++の定量においてはよりすぐ
れたもので、本発明のMg++の測定値はきわめて正確な
ものとなるのである。
などがあり、希釈せず原液で測定される。
レート剤及びイソクエン酸カリをトリス緩衝液に溶解し
て構成するのがよい。
酸カリを水に溶解して構成するのがよい。
もしくはその処理物に添加し、37℃程度に加温し、5
分間程度Mg++をキレートさせる。この放置時間はほと
んどのMg++をキレートさせる時間であって、Mg++含
量は試料によって異なるので、試料ごとに、あらかじめ
その後の反応でMg++量に応じて正確な直線を構成する
放置時間を設定することが必要である。
7℃程度の加温状態で、添加後2分から3分までのNA
DPHの増加量を、340nmの吸光度の増加を測定
し、この値を標準線と合せると、もとの体液中のMg++
含量を正確に知ることができるのである。
は、次の物質又はその塩が示される。EDTA,トラン
ス−1,2−シクロヘキサンジアミン−N,N,N’,
N’−四酢酸,N,N−ジ(ヒドロキシエチル)グリシ
ン,1,3−ジアミノプロパン−2−オール−N,N,
N’,N’−四酢酸,ジエチレントリアミン−N,N,
N’,N'',N'''−五酢酸,エチレンジアミン−N,
N’−二酢酸,エチレンジアミン−N,N’−プロピオ
ン酸,N−ヒドロキシエチルエチレンジアミン−N,
N’,N’−三酢酸,エチレンジアミン−N,N,
N’,N’−テトラキス(メチレンホスホン酸),グリ
コールエーテルジアミン−N,N,N’,N’−四酢酸
ヘキサメチレンジアミン−N,N,N’,N’−四酢
酸,ヒドロキシエチルイミノ二酢酸,イミノ二酢酸,
1,2−ジアミノプロパン−N,N,N’,N’−四酢
酸,ニトリロ三酢酸,ニトリロ三プロピオン酸,ニトリ
ロトリス(メチレンホスホン酸),トリエチレンテトラ
ミン−N,N,N’,N'',N''',N'''−六酢酸,エ
チレンジアミン−N,N’−ビス(メチレンホスホン
酸),エチレンジアミン ジ(O−ヒドロキシフェニル
酢酸),1,2−ビス(2−アミノフェノキシ)エタン
ーN,N,N’,N’−四酢酸。
も活性化されるが、これはマグネシウムイオンをトラッ
プせず、マンガンイオンを選択的にトラップするキレー
ト剤、例えば、GEDTAを反応溶媒に共存させること
によりマンガンイオンの影響を回避することができる。
g++キレート剤でほとんどのMg++は失活し、残存する
微量のMg++によってiCDHの活性が正確に高まる性
質を利用し、特異的に短時間に感度よくマグネシウムを
定量するものである。
てマグネシウムを正確に定量することができる。
水10mlに溶解し、Mg++として250mg/dlの
標準液を調製した。さらに、この標準液を稀釈して0、
2、4、6、8、10、20、30、40、50mg/
dlの溶液を調製した。
薬1 240μlを加え37℃で5分間放置後、表3に
示す定量試薬2 60μlを添加した。
0nmにおける吸光度の変化をレートアッセイによって
測定した。結果は図1及び図2に示されるが、これらを
標準線とした。
清 5μlに実施例1の定量試薬1240μlを加え、
37℃で5分間放置し、次いで実施例1の定量試薬26
0μlを加え、37℃で2分間放置し、2分〜3分間の
340nmの吸光度の増加量を測定し、レートアッセイ
により確定し、Mg++ 2.5mg/血清100mlの
値を得た。
240μlを加え、37℃で5分間放置し、次いで実
施例1の定量試薬2 60μlを加え、37℃で2分
間放置し、2分〜3分間の340nmの吸光度の増加量
を測定し、レートアッセイにより確定し、Mg++ 8.
0mg/尿 100mlの値を得た。
量の標準値を示し、図2は実施例1におけるMg++0〜
50mg/dlの定量の標準線を示す。
Claims (3)
- 【請求項1】 イソクエン酸脱水素酵素を含まず、Mg
++キレート剤を含む定量試薬1を体液もしくはその処理
物に添加し、所定時間放置して、ほとんどのMg++をM
g++キレート剤と結合させ、しかる後、イソクエン酸脱
水素酵素及びNADP+を含む定量試薬2を添加し、残
ったMg++によってNADP+からNADPHに変化さ
せ、NADPHの増加量によって、ヒト体液中のMg++
量を測定することを特徴とするヒト体液中のマグネシウ
ムの定量方法。 - 【請求項2】 請求項1におけるNADPHの増加量を
340nmの吸光度の増加で測定することを特徴とする
ヒト体液中のマグネシウムの定量方法。 - 【請求項3】 イソクエン酸脱水素酵素を含まず、Mg
++キレート剤を含む定量試薬1と、イソクエン酸脱水素
酵素及びNADP+を含む定量試薬2、を組合せてなる
ヒト体液中のマグネシウムの定量試薬。
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---|---|---|---|
JP05020837A JP3133186B2 (ja) | 1993-01-14 | 1993-01-14 | ヒト体液中のマグネシウムの定量方法及び試薬 |
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Applications Claiming Priority (1)
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Family
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Family Applications (1)
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Country | Link |
---|---|
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100353608B1 (ko) * | 2000-05-06 | 2002-09-27 | 주식회사 소일테크 | 분광광도계를 이용한 토양 치환성 마그네슘 정량방법 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4657854A (en) * | 1983-05-05 | 1987-04-14 | Ivan Endre Modrovich | Assay systems based on magnesium-responsive enzymes |
EP0207493B1 (en) * | 1985-07-02 | 1990-08-16 | Oriental Yeast Co., Ltd. | Method of terminating isocitrate dehydrogenase reaction |
JP2748134B2 (ja) * | 1988-11-29 | 1998-05-06 | オリエンタル酵母工業株式会社 | マグネシウムの定量方法 |
-
1993
- 1993-01-14 JP JP05020837A patent/JP3133186B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-01-05 EP EP19940400026 patent/EP0607064B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-01-05 DE DE1994623796 patent/DE69423796T2/de not_active Expired - Lifetime
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0607064A1 (en) | 1994-07-20 |
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DE69423796T2 (de) | 2000-11-23 |
EP0607064B1 (en) | 2000-04-05 |
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