JP2004258025A - 試料中の総蛋白質測定試薬及び測定方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】アルカリ性の第1試薬、並びに銅イオン及び銅イオンにキレート能力を持つ物質を含有するpH10以下の第2試薬からなる測定試薬である。測定する方法は、a)該試料と、アルカリ性の第1試薬とを混合させる工程、b)前記試料と第1試薬との混合物に、銅イオン及び銅イオンにキレート能力を持つ物質を含有するpH10以下の第2試薬を混合し反応させ、試料中の蛋白質と銅イオンの錯体を形成させる工程、及びc)前記蛋白質と銅イオンの錯体を比色測定する工程よりなる、試料中の総蛋白質を測定する。
【選択図】なし
Description
本発明は、特に、化学、生命科学、分析化学及び臨床検査等の分野において有用なものである。
例えば、試料を銅イオンを含有する試薬(第1試薬)と反応させた後にアルカリ性の試薬(第2試薬)と反応させ、銅イオンと試料中の蛋白質との錯体を形成させ発色させる方法や(例えば、特許文献1参照。)、試料をアルカリ性の試薬(第1試薬)と混合した後に銅イオンを含有する試薬(第2試薬)と反応させ、銅イオンと試料中の蛋白質との錯体を形成させ発色させる方法等が提案されている(例えば、非特許文献1参照。)。
しかし、ビウレット法においては、アルカリ性下で銅イオンと試料中の蛋白質との錯体を形成させ発色させるため、このように銅イオンを含有する試薬を弱アルカリ性〜酸性とした場合には、もう一方の試薬をアルカリ性にすることが必要となる。
この正誤差が生じた場合の最終反応液を目視で確認すると、沈殿の生成が認められた。この沈殿は、銅イオンを含有する試薬がアルカリ性の試薬と混合された際に形成された、不溶性の銅水酸化物〔Cu(OH)2〕であることが分かった。
(1) アルカリ性の第1試薬、並びに銅イオン及び銅イオンにキレート能力を持つ物質を含有するpH10以下の第2試薬からなる、試料中の総蛋白質測定試薬。
a)該試料と、アルカリ性の第1試薬とを混合させる工程、
b)前記試料と第1試薬との混合物に、銅イオン及び銅イオンにキレート能力を持つ物質を含有するpH10以下の第2試薬を混合し反応させ、試料中の蛋白質と銅イオンの錯体を形成させる工程、及び
c)前記蛋白質と銅イオンの錯体を比色測定する工程よりなる、試料中の総蛋白質測定方法。
そして、これにより、疾患の診断等の場において、誤差を含まない、かつ正確な総蛋白質の測定値を提供することができるものである。
本発明は、アルカリ性の第1試薬、並びに銅イオン及び銅イオンにキレート能力を持つ物質を含有するpH10以下の第2試薬からなる、試料中の総蛋白質測定試薬である。
本発明の測定試薬の第1試薬は、アルカリ性の第1試薬である。なお、本発明の測定試薬は、アルカリ性下で銅イオンと試料中の蛋白質との錯体を形成させ発色させるビウレット反応を利用した測定試薬であり、本発明の測定試薬の第2試薬はpH10以下のものであるので、第1試薬のpHは、試料と第1試薬と第2試薬を混合させた最終反応液のpHが、ビウレット反応を起こすようなpH範囲にする必要がある。通常、ビウレット反応はpH13以上で起こるものであるので、本発明の試料中の総蛋白質測定試薬の第1試薬は、pH13以上とするのが好ましい。
ここで、塩基性物質としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化リチウム、水酸化カリウム等を挙げることができる。
本発明の測定試薬の第2試薬は、銅イオン及び銅イオンにキレート能力を持つ物質を含有するpH10以下のものである。
本発明において銅イオンとしては、Cu2+等を挙げることができる。本発明の測定試薬の第2試薬には、この銅イオンを含有させる。
この銅イオンを含有させることであるが、例えば、硫酸銅、塩化銅、硝酸銅、EDTA銅等の銅塩を含有させることにより達成できる。
この銅イオンの濃度は、第2試薬中において、4〜300mMの範囲にあることが好ましく、20〜150mMの範囲が特に好ましい。
また、この銅イオンの濃度は、試料、第1試薬及び第2試薬を混合した最終反応液中において、1〜80mMの範囲にあることが好ましく、5〜40mMの範囲が特に好ましい。
本発明において、銅イオンにキレート能力を持つ物質とは、銅イオンに配位する多座配位子であって、銅イオンへの配位により銅を含んだ環状構造(キレート環)を形成する物質をいう。
本発明の測定試薬の第2試薬には、銅イオンに加えて、この銅イオンにキレート能力を持つ物質をも含有させる。
ここで、オキシカルボン酸又はその塩としては、例えば、クエン酸、イソクエン酸、酒石酸、乳酸、若しくはリンゴ酸又はその塩等を挙げることができる。
また、ポリアミノカルボン酸又はその塩としては、例えば、ニトリロ三酢酸(NTA)、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、ジアミノプロパン四酢酸(Methyl−EDTA)、ジアミノシクロヘキサン四酢酸(CyDTA)、グリコールエーテルジアミン四酢酸(GEDTA)、ヒドロキシエチルイミノ二酢酸(HIDA)、ジヒドロキシエチルグリシン(DHEG)、ジアミノプロパノール四酢酸(DPTA−OH)、ジエチレン(トリアミン)五酢酸(DTPA)、エチレンジアミン二酢酸(EDDA)、エチレンジアミン二プロピオン酸(EDDP)、ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸(EDTA−OH)、ビス(ヒドロキシベンジル)エチレンジアミン二酢酸(HBED)、ヘキサメチレンジアミン四酢酸(HDTA)、ヒドロキシエチルイミノ二酢酸(HIDA)、イミノ二酢酸(IDA)、ニトリロ三プロピオン酸(NTP)、若しくはトリエチレンテトラミン六酢酸(TTHA)等及びその塩が挙げられる。
更に、エタノールアミンとしては、例えば、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、又はトリエタノールアミン等を挙げることができる。
従って、本発明の測定試薬の第2試薬に含有させる、銅イオンにキレート能力を持つ物質としては、このpH10以下において銅イオンと容易かつ充分にキレート形成できるものが好ましい。
それは、銅イオンにキレート能力を持つ物質が、充分に銅イオンに配位することにより、銅イオンが安定化し、これにより測定の際の第1試薬と第2試薬の混合時に沈殿が生じることを防ぐことができるからである。
このような理由により、銅イオンにキレート能力を持つ物質として、クエン酸、イソクエン酸、酒石酸、ニトリロ三酢酸(NTA)、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、ジアミノプロパン四酢酸(Methyl−EDTA)、ジアミノシクロヘキサン四酢酸(CyDTA)、グリコールエーテルジアミン四酢酸(GEDTA)、ヒドロキシエチルイミノ二酢酸(HIDA)、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、若しくはトリエタノールアミン又はその塩等が好適であり、特にクエン酸又はその塩が好適である。
例えば、銅イオンと銅イオンにキレート能力を持つ物質の比は、通常1:1、1:2又は1:3であるので、前記(1)に記載した銅イオン濃度に対する銅イオンにキレート能力を持つ物質の濃度としては、第2試薬中において、4〜900mMの範囲にあることが好ましく、20〜450mMの範囲が特に好ましい。
また、この銅イオンにキレート能力を持つ物質の濃度は、試料、第1試薬及び第2試薬を混合した最終反応液中において、1〜240mMの範囲にあることが好ましく、5〜120mMの範囲が特に好ましい。
a)第1試薬のpH
本発明の測定試薬の第1試薬は、最終反応液においてビウレット反応が起こるpH範囲にする必要があり、前述の通り第2試薬のpHとの関係でpH13以上であることが好ましい。より具体的には、試料、第1試薬及び第2試薬を混合した最終反応液のpHがpH13以上となるよう、第1試薬のpHを、第2試薬のpHに応じて適宜調整すればよい。
本発明の測定試薬の第2試薬のpHは10以下であり、この範囲のpHであれば、第2試薬中の銅イオンを長期間安定に保存することができる。また、同じ理由により、本発明の測定試薬の第2試薬は、pH3〜7の範囲にあることが好ましい
なお、この第2試薬のpHは、銅イオンにキレート能力を持つ物質が銅イオンと容易かつ充分にキレート形成できるpHとすることが好ましい。(前記「(2)銅イオンにキレート能力を持つ物質」の項で述べた理由と同じ理由による。)
また、前記のpH範囲となるように使用する緩衝剤としては、前記のpH範囲に緩衝能がある従来公知の緩衝剤を適宜使用することができる。
このような緩衝剤として第2試薬に使用できるものとしては、例えば、リン酸、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン、イミダゾール、グリシルグリシン、MES、Bis−Tris、ADA、ACES、Bis−Trisプロパン、PIPES、MOPSO、MOPS、BES、HEPES、TES、DIPSO、TAPSO、POPSO、HEPPS、HEPPSO、Tricine、Bicine、若しくはTAPS又はこれらの塩等の各緩衝剤を挙げることができる。
本発明の測定試薬は、アルカリ性下で銅イオンと試料中の蛋白質との錯体を形成させ発色させるビウレット反応を利用した測定試薬であり、この発色は通常pH13以上で起こるものであるため、試料、第1試薬及び第2試薬を混合した最終反応液のpHが13以上であることが必要となる。
本発明の第1試薬には、銅イオンにキレート能力を持つ物質を含有させてもよい。ここで、銅イオンにキレート能力を持つ物質は、第2試薬に含有させる物質と同じものであっても、異なるものであってもよい。
なお、アルカリ性下で銅イオンにキレート能力を持つ物質であれば、最終反応液中でも銅水酸化物が生じず安定的に測定が行えるので好適である。
ここで、アルカリ性下で銅イオンにキレート能力を持つ物質としては、例えば、酒石酸、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、ジアミノシクロヘキサン四酢酸(CyDTA)、ジヒドロキシエチルグリシン(DHEG)、エチレンジアミン二酢酸(EDDA)、グリコールエーテルジアミン四酢酸(GEDTA)、ヒドロキシエチルイミノ二酢酸(HIDA)、イミノ二酢酸(IDA)、ニトリロ三酢酸(NTA)、若しくはニトリロ三プロピオン酸(NTP)又はその塩等を挙げることができる。
本発明の測定試薬において、第1試薬及び/又は第2試薬には前記の成分の他に、公知の防腐剤、安定化剤、又は界面活性剤等を必要に応じて適宜使用することができる。
本発明において、試料とは、試料中の総蛋白質濃度の測定を行おうとするもののことであり、このようなものであれば特に限定されない。
このような試料としては、例えば、ヒト又は動物の血液、血清、血漿、尿、髄液、唾液、汗等の体液、ヒト若しくは動物の腎臓、心臓、肺、脳等の臓器等の抽出液;骨格筋、骨髄、皮膚、又は神経組織等の抽出液;毛髪等の抽出液、ヒト又は動物の糞便の抽出液又は懸濁液;細胞の抽出液等が挙げられる。
1. 試料中の総蛋白質測定
本発明の試料中の総蛋白質測定方法は、
a) 試料と、アルカリ性の第1試薬とを混合させる工程、
b) 前記試料と第1試薬との混合物に、銅イオン及び銅イオンにキレート能力を持つ物質を含有するpH10以下の第2試薬を混合し反応させ、試料中の蛋白質と銅イオンの錯体を形成させる工程、及び
c) 前記蛋白質と銅イオンの錯体を比色測定する工程よりなるものである。
本発明の試料中の総蛋白質測定試薬及び総蛋白質測定方法の測定の正確性を確かめた。
(1) 第1試薬の調製
下記の試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水に溶解し、pHを13.5(20℃)に調整し、総蛋白質測定試薬の第1試薬を調製した。
水酸化ナトリウム 75mM
酒石酸ナトリウムカリウム 42.5mM
エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩 11mM
界面活性剤
下記の試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水に溶解し、pHを5.8(20℃)に調整し、総蛋白質測定試薬の第2試薬(本発明・第2試薬)を調製した。
硫酸銅五水和物 100mM
クエン酸一水和物 300mM
前記(2)の本発明・第2試薬のクエン酸一水和物を含有させないこと以外は、前記(2)の試薬成分及び濃度の通りに第2試薬の調製を行った。(対照・第2試薬)
日立製作所社製7170S形自動分析装置にて測定を行った。生理食塩水5μLを試料とし、これに前記1の(1)で調製した第1試薬240μLを添加して、混和後37℃で5分間反応させた後、前記1の(2)で調製した本発明・第2試薬80μLを添加し、37℃で5分間反応させた。第2試薬添加直前と添加5分後の主波長546nm及び副波長700nmにおける吸光度を測定し、その差を求めた。この測定を連続して300回繰り返して行った。また、第2試薬を前記1の(3)で調製した対照・第2試薬に変えて同様に測定を行った。
生理食塩水を300回連続して測定した時の測定結果を図1及び図2に示した。なお、図1は第2試薬として本発明・第2試薬を用いたときのものであり、図2は第2試薬として対照・第2試薬を用いたときのものである。
そして、これらの図において、横軸は測定回数を表し、縦軸は測定値(吸光度差)を10,000倍した値を示した。
これに対し、第2試薬にクエン酸一水和物を含有させた本発明・第2試薬を用いた場合は、測定値(吸光度差)に正誤差は生じておらず、測定が正確に行われていることが分かる。
このことは、銅イオンを含有する第2試薬とアルカリ性でありかつ酒石酸ナトリウムカリウムを含有する第1試薬が混合された際に、瞬間的に(酒石酸イオンと銅イオンの錯体が形成されるよりも圧倒的に速く)、不溶性の銅水酸化物が形成されたであろうことを示しており、第1試薬に含有された酒石酸ナトリウムカリウムでは瞬間的な銅水酸化物の形成を防止できていないことが分かる。
これに対し、本発明の測定試薬及び測定方法では、第2試薬にクエン酸一水和物を含有させることで、銅イオンを含有する第2試薬とアルカリ性の第1試薬が混合された際に、不溶性の銅水酸化物が形成するのを防止できていることが分かる。
本発明の試料中の総蛋白質測定試薬及び総蛋白質測定方法により、試料中の総蛋白質濃度を測定した。
(1) 第1試薬の調製
実施例1の1の(1)で調製した第1試薬をそのまま使用した。
実施例1の1の(2)で調製した本発明・第2試薬をそのまま使用した。
実施例1の1の(3)で調製した対照・第2試薬をそのまま使用した。
(1) ヒト血清〔試料1〕
(2) 市販ヒト由来コントロール血清(アールトコントロール・レベル2H)〔試料2〕
前記2の2種類の試料中の総蛋白質濃度を、前記1で調製した第1試薬及び第2試薬にて測定した。
総蛋白質濃度の測定は、日立製作所社製7170S形自動分析装置にて行い、試料5μLに前記1の(1)で調製した第1試薬240μLを添加して、混和後37℃で5分間反応させた後、前記1の(2)で調製した本発明・第2試薬80μLを添加し、37℃で5分間反応させた。第2試薬添加直前と添加5分後の主波長546nm及び副波長700nmにおける吸光度を測定し、その差を求めた。この測定を連続して20回繰り返して行った。また、第2試薬を前記1の(3)で調製した対照・第2試薬に変えて同様に測定を行った。
試料を20回連続して測定した時の測定結果を表1及び表2に示した。なお、表1は試料1を使用した時の測定結果であり、表2は試料2を使用した時の測定結果である。また、表1及び表2に示した値は、測定で得られた吸光度差を10,000倍した値である。
これに対し、第2試薬にクエン酸一水和物を含有させた本発明・第2試薬を用いた場合の変動係数は、試料1を試料とした場合で1.22%、試料2を試料とした場合も、1.62%であり、総蛋白質測定値(吸光度差)のばらつきを示す変動係数が明らかに小さくなっている。
このように、第2試薬にクエン酸一水和物を含有させることで、測定値(吸光度差)に正誤差が生じることを防止し、再現性を向上させることができることが分かる。
本発明の試料中の総蛋白質測定試薬及び総蛋白質測定方法において、測定範囲を確かめた。
(1) 第1試薬の調製
実施例1の1の(1)で調製した第1試薬をそのまま使用した。
下記の試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水に溶解し、pHを2.0、3.0、4.0又は5.0(20℃)に各々調整し、5種類の総蛋白質測定試薬の第2試薬(本発明・第2試薬)を調製した。
硫酸銅五水和物 100mM
クエン酸一水和物 100mM
1試薬系総蛋白質測定試薬である和光純薬工業社製、HAテストワコー・総蛋白II−HAテストワコーを使用した。
生理食塩水にウシ血清アルブミン(BSA)を添加し、ウシ血清アルブミン(BSA)濃度11.7g/dLの高濃度蛋白溶液を調製した。これを生理食塩水で1/10、2/10、3/10、4/10、5/10、6/10、7/10、8/10、又は9/10となるように希釈した9種類の試料及び上記高濃度蛋白質溶液(10/10)を試料とした。
前記2の試料中の蛋白質濃度を、前記1で調製した第1試薬及び4種類のpHの本発明・第2試薬、並びに対照試薬の各々の試薬にて測定した。
試料の測定結果を表3及び図3に示した。なお、表3において、かっこ内の数値は、希釈倍率1/10の試料の測定値を100%とした時の各試料の測定値の相対比率(百分率)を求めたものである。
これに対し、第2試薬にクエン酸一水和物を含有させた本発明・第2試薬を用いた場合は、いずれのpHの試薬においても、試料中の総蛋白質濃度が高くなっても得られる総蛋白質測定値が低下することなく、高濃度域までの測定範囲が得られていることが分かる。
例えば、対照試薬を用いた場合、希釈倍率10/10試料の測定値は、理論値(1/10の試料の測定値の10倍の値)に対して、93.6%と6.4%低下している。
これに対し、本発明・第2試薬を用いた場合の希釈倍率10/10の試料の測定値は、理論値に対して、pH2で101.9%、pH3で99.5%、pH4で99.9%、pH5で97.1%であり、ほぼ理論値通りであり、ほとんど低下は見られず、グラフ(図3)においても直線性が得られており、高濃度域までの測定範囲が得られていることが分かる。
本発明の試料中の総蛋白質測定試薬及び総蛋白質測定方法において、第2試薬に銅イオンにキレート能力を持つ物質を含有させることによる、第1試薬と第2試薬混合時の沈殿生成防止効果を確かめた。
(1) 第1試薬の調製
実施例1の1の(1)で調製した第1試薬をそのまま使用した。
下記の試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水に溶解し、pHを5.9(20℃)に調整し、本発明・第2試薬Aを調製した。
硫酸銅五水和物 100mM
クエン酸一水和物 200mM
下記の試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水に溶解し、pHを9.4(20℃)に調整し、本発明・第2試薬Bを調製した。
硫酸銅五水和物 100mM
酒石酸ナトリウムカリウム 200mM
下記の試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水に溶解し、pHを8.3(20℃)に調整し、本発明・第2試薬Cを調製した。
硫酸銅五水和物 100mM
エチレンジアミン四酢酸二カリウム塩(EDTA) 200mM
下記の試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水に溶解し、pHを6.0(20℃)に調整し、本発明・第2試薬Dを調製した。
硫酸銅五水和物 100mM
トリエタノールアミン 200mM
下記の試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水に溶解し、pHを9.4(20℃)に調整し、本発明・第2試薬Eを調製した。
硫酸銅五水和物 50mM
ニトリロ三酢酸(NTA) 50mM
下記の試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水に溶解し、pHを9.0(20℃)に調整し、本発明・第2試薬Fを調製した。
硫酸銅五水和物 50mM
ジアミノプロパン四酢酸(Methyl−EDTA) 50mM
下記の試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水に溶解し、pHを3.6(20℃)に調整し、本発明・第2試薬Gを調製した。
硫酸銅五水和物 50mM
ジアミノシクロヘキサン四酢酸(CyDTA) 50mM
下記の試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水に溶解し、pHを4.7(20℃)に調整し、本発明・第2試薬Hを調製した。
硫酸銅五水和物 50mM
グリコールエーテルジアミン四酢酸(GEDTA) 50mM
下記の試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水に溶解し、pHを6.9(20℃)に調整し、本発明・第2試薬Iを調製した。
硫酸銅五水和物 50mM
ヒドロキシエチルイミノ二酢酸(HIDA) 50mM
前記(2)の本発明・第2試薬Aのクエン酸一水和物を含有させないこと以外は、前記(2)の試薬成分及び濃度の通りに第2試薬の調製を行った。(対照・第2試薬)
試験管に前記1の(1)で調製した第1試薬3600μLを分注し、ここに前記1の(2)で調製した本発明・第2試薬A1200μLを、急激な混合が起こらないように静かに滴下した。また、第2試薬を前記1の(3)〜(10)で調製した本発明・第2試薬B〜I及び前記1の(11)で調製した対照・第2試薬にそれぞれ変えて同様に実験を行い、試験管内の変化をみた。
前記2の第1試薬と第2試薬の混合液中に沈殿が生成しているか否かを目視で確認した。また、沈殿の生成状況を表4に示した。
これに対し、第2試薬に銅イオンにキレート能力を持つ物質を含有させた本発明・第2試薬を用いた場合は、いずれにおいても試験管内の第1試薬と第2試薬の混合液中に沈殿が生成していないことが確認された。
このことから、銅イオンを含有する第2試薬とアルカリ性でありかつ酒石酸ナトリウムカリウムを含有する第1試薬が混合された際に、瞬間的に(酒石酸イオンと銅イオンの錯体が形成されるよりも圧倒的に速く)、不溶性の銅水酸化物が形成されたであろうことを示しており、第1試薬に含有された銅イオンにキレート能力を持つ物質(酒石酸ナトリウムカリウム)では瞬間的な銅水酸化物の形成を防止できていないことが分かる。
これに対し、本発明の測定試薬及び測定方法では、第2試薬に銅イオンにキレート能力を持つ物質を含有させることで、銅イオンを含有する第2試薬とアルカリ性の第1試薬が混合された際に、不溶性の銅水酸化物が形成するのを防止できていることが分かる。
Claims (14)
- アルカリ性の第1試薬、並びに銅イオン及び銅イオンにキレート能力を持つ物質を含有するpH10以下の第2試薬からなる、試料中の総蛋白質測定試薬。
- 第2試薬のpHが3〜7である、請求項1記載の試料中の総蛋白質測定試薬。
- 銅イオンにキレート能力を持つ物質が、オキシカルボン酸、ポリアミノカルボン酸若しくはエタノールアミン又はその塩よりなる群から選択される物質であることを特徴とする、請求項1又は2記載の試料中の総蛋白質測定試薬。
- オキシカルボン酸又はその塩が、クエン酸又はその塩であることを特徴とする、請求項3記載の試料中の総蛋白質測定試薬。
- 第1試薬に銅イオンにキレート能力を持つ物質を含有させることを特徴とする、請求項1〜4のいずれか1項に記載の試料中の総蛋白質測定試薬。
- 銅イオン及び銅イオンにキレート能力を持つ物質を含有し、pH10以下である試料中の総蛋白質測定試薬の第2試薬。
- pHが3〜7である、請求項6記載の試料中の総蛋白質測定試薬の第2試薬。
- 銅イオンにキレート能力を持つ物質が、オキシカルボン酸、ポリアミノカルボン酸若しくはエタノールアミン又はその塩よりなる群から選択される物質であることを特徴とする、請求項6又は7記載の試料中の総蛋白質測定試薬の第2試薬。
- オキシカルボン酸又はその塩が、クエン酸又はその塩であることを特徴とする、請求項8記載の試料中の総蛋白質測定試薬の第2試薬。
- 試料中の総蛋白質を測定する方法であって、
a)該試料と、アルカリ性の第1試薬とを混合させる工程、
b)前記試料と第1試薬との混合物に、銅イオン及び銅イオンにキレート能力を持つ物質を含有するpH10以下の第2試薬を混合し反応させ、試料中の蛋白質と銅イオンの錯体を形成させる工程、及び
c)前記蛋白質と銅イオンの錯体を比色測定する工程よりなる、試料中の総蛋白質測定方法。 - 第2試薬のpHが3〜7である、請求項10記載の試料中の総蛋白質測定方法。
- 銅イオンにキレート能力を持つ物質が、オキシカルボン酸、ポリアミノカルボン酸若しくはエタノールアミン又はその塩よりなる群から選択される物質であることを特徴とする、請求項10又は11記載の試料中の総蛋白質測定方法。
- オキシカルボン酸又はその塩が、クエン酸又はその塩であることを特徴とする、請求項12記載の試料中の総蛋白質測定方法。
- 第1試薬に銅イオンにキレート能力を持つ物質を含有させることを特徴とする、請求項10〜13のいずれか1項に記載の試料中の総蛋白質測定方法。
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JP2007240337A (ja) * | 2006-03-09 | 2007-09-20 | Nitto Boseki Co Ltd | 総蛋白質の定量方法およびそれに用いる総蛋白質定量用キット |
JP2015163851A (ja) * | 2014-02-28 | 2015-09-10 | 関東化学株式会社 | 試料中の総タンパク質の定量方法および該方法に使用する試薬 |
CN106442352A (zh) * | 2016-09-24 | 2017-02-22 | 济南中安生物技术服务有限公司 | 一种抗干扰能力强的血清总蛋白检测试剂盒 |
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