RU2159442C1 - Набор реагентов для определения концентрации гемоглобина в крови - Google Patents
Набор реагентов для определения концентрации гемоглобина в крови Download PDFInfo
- Publication number
- RU2159442C1 RU2159442C1 RU99124689A RU99124689A RU2159442C1 RU 2159442 C1 RU2159442 C1 RU 2159442C1 RU 99124689 A RU99124689 A RU 99124689A RU 99124689 A RU99124689 A RU 99124689A RU 2159442 C1 RU2159442 C1 RU 2159442C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hemoglobin
- calibrator
- reagent
- water
- complexing agent
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и биохимии. Набор реагентов для определения концентрации гемоглобина в крови включает в себя реагент-комплексообразователь и калибратор. При этом реагент-комплексообразователь содержит следующие компоненты, мас.%: додецилсульфат натрия - 0,03-0,15; азид натрия 0,0003-0,001; вода - остальное. Калибратор, входящий в состав набора, содержит следующие компоненты, мас.%: гемоглобин 12,0-15,0; додецилсульфат натрия 0,03-0,15; этиленмеркуртиосалициловой кислоты натриевая соль 0,03-0,08; вода - остальное. Набор реагентов отличается повышенной стабильностью при хранении и простотой использования при допустимой ошибке определения концентрации гемоглобина 1-2%. 2 табл.
Description
Изобретение относится к области медицины и биохимии и может быть использовано для определения концентрации гемоглобина в крови.
Гемоглобин, относящийся к классу хромопротеидов, состоит из бесцветного белка, глобина, и связанной с ним простетической группы - окрашенного железопорфиринового комплекса гема. Именно гем, придающий гемоглобину характерный алый цвет, является важнейшим объектом спектрофотометрического анализа, который лежит в основе большинства методов количественного определения гемоглобина.
Для измерения гемоглобина в крови были разработаны различные способы, основанные на исследовании окрашенного железопорфиринового комплекса - гема: способ Сали, сапониновый способ, пиридин-гемохромогенный способ (Кушаковский М.С. Клинические формы повреждения гемоглобина. - 1968).
Основным недостатком способа Сали является недостаточная точность из-за влияния белков плазмы на реакцию между гемоглобином и соляной кислотой, а также из-за влияния билирубина, освещения, изменения со временем цвета стандартных растворов солянокислого гематина. Суммарная ошибка при использовании способа Сали доходит до 30%. При использовании сапонинового способа не растворяются тельца Гейнца, гемолизат остается мутным, а спектр раствора может изменяться. Пиридин-хромогенный способ дает заниженные результаты.
Наиболее распространенным и унифицированным для определения содержания гемоглобина в крови является гемиглобинцианидный способ, согласно которому содержащиеся в крови различные формы гемоглобина трансформируют к одному устойчивому продукту - гемиглобинцианиду, а концентрацию гемоглобина определяют по результатам измерения оптической плотности этого продукта (Drabkin D. L. Bibl. haemat., Basel, Fasc.21). В процессе измерения используют набор реагентов, включающий трансформирующий агент и калибратор. Трансформирующий реагент содержит железосинеродистый калий, цианид натрия и натрий углекислый кислый. Железосинеродистый калий окисляет все формы гемоглобина в метгемоглобин, который образует с цианидом натрия окрашенный в красно-коричневый цвет прозрачный раствор гемиглобинцианида. Калибратор содержит раствор гемиглобинцианида с точно установленной концентрацией. Недостатком известного набора является использование в нем токсичного компонента - цианида натрия.
Наиболее ближайшим к заявленному набору - прототипом, является набор реагентов для определения концентрации гемоглобина в крови (Патент РФ N 2044319, кл. C 01 N 33/48, опубл. 20.09.95, Бюл. N 26), включающий реагнт-комплексообразователь и калибратор. Реагент-комплексообразователь содержит, мас.%:
Додецилсульфат натрия - 0,03 - 0,15
Хлорид натрия - 0,9
Вода - Остальное
pH реагента - 7-7,5
Калибратор содержит известное количество гемоглобина, растворенного в реагенте-комплексообразователе, включающем додецилсульфат натрия. Способ измерения концентрации гемоглобина заключается в следующем: пробы крови обрабатывают реагентом-комплесообразователем, включающим додецилсульфат натрия, который трансформирует все формы гемоглобина в гемихром, имеющий в растворе красно-коричневый цвет, измеряют оптическую плотность раствора на двух различных длинах волн, значения которых находятся в области 550-595 нм, определяют значение содержания гемоглобина по результатам этих измерений. Допустимая ошибка определения гемоглобина при использовании известного набора реагентов составляет ± 2%.
Додецилсульфат натрия - 0,03 - 0,15
Хлорид натрия - 0,9
Вода - Остальное
pH реагента - 7-7,5
Калибратор содержит известное количество гемоглобина, растворенного в реагенте-комплексообразователе, включающем додецилсульфат натрия. Способ измерения концентрации гемоглобина заключается в следующем: пробы крови обрабатывают реагентом-комплесообразователем, включающим додецилсульфат натрия, который трансформирует все формы гемоглобина в гемихром, имеющий в растворе красно-коричневый цвет, измеряют оптическую плотность раствора на двух различных длинах волн, значения которых находятся в области 550-595 нм, определяют значение содержания гемоглобина по результатам этих измерений. Допустимая ошибка определения гемоглобина при использовании известного набора реагентов составляет ± 2%.
Недостатками известного набора реагентов является:
- недостаточная стабильность реагентов при хранении;
- необходимость проведения измерений оптической плотности раствора на двух различных длинах волн (550-595 нм).
- недостаточная стабильность реагентов при хранении;
- необходимость проведения измерений оптической плотности раствора на двух различных длинах волн (550-595 нм).
Технической задачей предлагаемого изобретения является повышение стабильности набора реагентов для определения содержания гемоглобина в крови при сохранении высокой точности определения последнего.
Поставленная задача достигается предлагаемым набором реагентов, включающим реагент-комплексообразователь и калибратор, при этом реагент-комплексообразователь дополнительно содержит азид натрия, а калибратор дополнительно содержит тимеросал, взятые в экспериментально подобранных оптимальных концентрациях.
Предлагаемый набор реагентов включает реагент-комплексообразователь, содержащий 0,03-0,15% додецилсульфата натрия (SDS), 0,0003-0,001% азида натрия и воду (остальное), pH реагента 7-8, и калибратор гемихрома, содержащий известное количество гемоглобина в реагенте-комплексообразователе, 0,03-0,08% тимеросала и воду(остальное), pH калибратора 7-8.
Допустимая ошибка определения концентрации гемоглобина с использованием заявляемого набора реагентов составляет 1-2%.
Включение в состав реагента-комплексообразователя нового компонента - азида натрия позволяет повысить стабильность реагента и продлить срок его годности до 2-х лет, а срок годности рабочего раствора реагента продлить до 8 месяцев. Использование азида натрия в количестве менее 0,0003% не позволяет добиться повышенной стабильности реагента-комплексообразователя, а использование азида натрия в количестве более 0,001% экономически нецелесообразно, так как не обеспечивает дальнейшего повышения стабильности реагента-комплексообразователя.
Включение в состав калибратора тимеросала (этиленмеркуртиосалициловой кислоты натриевая соль) позволяет стабилизировать комплекс гемихрома за счет содержащихся в препарате S-связей. Тимеросал в количестве 0,03-0,08% обеспечивает стабильность калибратора до 12 месяцев.
Значение водородного показателя (pH) реагента-комплексообразователя и калибратора находится в пределах 7-8, что и требуется для получения стабильного спектра конечного продукта (гемихрома).
Для приготовления раствора калибратора используют очищенную эритроцитарную массу, к которой добавляют рассчитанный объем воды и получают модельный образец крови. Затем к раствору гемоглобина добавляют додецилсульфат натрия и тимеросал и получают реагент-калибратор с pH 7-8.
В таблице 1 представлены данные зависимости стабильности рабочего раствора реагента от используемого количества азида натрия.
В табл. 2 представлены данные по влиянию концентраций тимеросала на стабильность калибратора.
Из таблиц 1 и 2 видно, что использование азида натрия и тимеросала в оптимальных концентрациях позволяет повысить стабильность реагента-комплексообразователя и калибратора.
Определение концентрации гемоглобина в крови осуществляют следующим образом: к пробе крови (20 мкл) добавляют 5 мл реагента-комплексообразователя и через 5 минут измеряют оптическую плотность раствора на длине волны 540 нм. Содержание гемоглобина в крови (C) в г/л определяют по формуле:
где A - оптическая плотность исследуемой пробы, ед.опт.пл.;
Cк - концентрация гемоглобина в калибраторе, г/л;
Aк - оптическая плотность калибратора, ед.опт.пл.
где A - оптическая плотность исследуемой пробы, ед.опт.пл.;
Cк - концентрация гемоглобина в калибраторе, г/л;
Aк - оптическая плотность калибратора, ед.опт.пл.
Определяющими существенными отличиями предлагаемого набора реагентов для определения концентрации гемоглобина в крови по сравнению с прототипом являются:
- реагент-комплексообразователь дополнительно содержит азид натрия в количестве 0,0003-0,001%, что позволяет повысить стабильность реагента и срок годности его рабочих растворов;
- калибратор дополнительно содержит тимеросал в количестве 0,03-0,08%, что позволяет повысить стабильность последнего при хранении.
- реагент-комплексообразователь дополнительно содержит азид натрия в количестве 0,0003-0,001%, что позволяет повысить стабильность реагента и срок годности его рабочих растворов;
- калибратор дополнительно содержит тимеросал в количестве 0,03-0,08%, что позволяет повысить стабильность последнего при хранении.
Поиск по источникам патентной и научно-технической литературе не выявил сведений о наборе реагентов для определения концентрации гемоглобина в крови, аналогичного заявляемому.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения.
Пример 1.
Предварительно готовят реагент-комплексообразователь и калибратор. Для приготовления реагента-комплесообразователя в мерную колбу вместимостью 1 литр вносят 0,6 г додецилсульфата натрия, затем на микроаналитических весах взвешивают 5 мг азида натрия и переносят туда же, приливают 500 мл дистиллированной воды и перемешивают. Объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.
Для приготовления калибратора взвешивают 0,6 г додецилсульфата натрия и 0,5 г тимеросала. Навески переносят в мерную колбу вместимостью 1 литр, приливают 3,10 мл эритроцитарной массы, добавляют 500 мл дистиллированной воды и перемешивают, после чего объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и вторично перемешивают.
В результате получают набор реагентов для определения гемоглобина в крови, который включает реагент-комплексообразователь, содержащий, мас.%:
Додецилсульфат натрия - 0,06
Азид натрия - 0,0005
Вода - Остальное
и калибратор, содержащий, мас.%:
Гемоглобин - 14,0
Додецилсульфат натрия - 0,06
Тимеросал - 0,05
Вода - Остальное
При этом значение pH реагента-комплексообразователя и калибратора составляет 7,3.
Додецилсульфат натрия - 0,06
Азид натрия - 0,0005
Вода - Остальное
и калибратор, содержащий, мас.%:
Гемоглобин - 14,0
Додецилсульфат натрия - 0,06
Тимеросал - 0,05
Вода - Остальное
При этом значение pH реагента-комплексообразователя и калибратора составляет 7,3.
Пример 2.
Приготовление реагента-комплексообразователя и калибратора осуществляют аналогично примеру 1.
Получают набор реагентов для определения гемоглобина в крови, который включает реагент-комплексообразователь, содержащий, мас.%:
Додецилсульфат натрия - 0,15
Азид натрия - 0,001
Вода - Остальное
и калибратор, содержащий, мас.%:
Гемоглобин - 15,0
Додецилсульфат натрия - 0,15
Тимеросал - 0,08
Вода - Остальное
При этом значение pH реагента и калибратора составляет 7,5.
Додецилсульфат натрия - 0,15
Азид натрия - 0,001
Вода - Остальное
и калибратор, содержащий, мас.%:
Гемоглобин - 15,0
Додецилсульфат натрия - 0,15
Тимеросал - 0,08
Вода - Остальное
При этом значение pH реагента и калибратора составляет 7,5.
Пример 2.
Приготовление реагента-комплексообразователя и калибратора осуществляют аналогично примеру 1.
Получают набор реагентов для определения гемоглобина в крови, который включает реагент-комплексообразователь, содержащий, мас.%:
Додецилсульфат натрия - 0,15
Азид натрия - 0,001
Вода - Остальное
и калибратор, содержащий, мас.%:
Гемоглобин - 15,0
Додецилсульфат натрия - 0,15
Тимеросал - 0,08
Вода - Остальное
При этом значение pH реагента и калибратора составляет 7,8.
Додецилсульфат натрия - 0,15
Азид натрия - 0,001
Вода - Остальное
и калибратор, содержащий, мас.%:
Гемоглобин - 15,0
Додецилсульфат натрия - 0,15
Тимеросал - 0,08
Вода - Остальное
При этом значение pH реагента и калибратора составляет 7,8.
Пример 3.
Приготовление реагента-комплексообразователя и калибратора осуществляют аналогично примеру 1.
Получают набор реагентов для определения гемоглобина в крови, который включает реагент-комплексообразователь, содержащий, мас.%:
Додецилсульфат натрия - 0,03
Азид натрия - 0,0003
Вода - Остальное
калибратор, содержащий, мас.%:
Гемоглобин - 12,0
Додецилсульфат натрия - 0,03
Тимеросал - 0,03
Вода - Остальное
При этом значение pH реагента и калибратора составляет 7,3.
Додецилсульфат натрия - 0,03
Азид натрия - 0,0003
Вода - Остальное
калибратор, содержащий, мас.%:
Гемоглобин - 12,0
Додецилсульфат натрия - 0,03
Тимеросал - 0,03
Вода - Остальное
При этом значение pH реагента и калибратора составляет 7,3.
Использование предлагаемого набора реагентов позволит по сравнению с прототипом:
- повысить стабильность набора при хранении путем обеспечения срока годности реагента-комплексообразователя до 2-х лет, а калибратора до 12 месяцев;
- повысить функциональность и универсальность набора за счет обеспечения возможности работы с ним в тех же условиях, что и для набора реагентов для определения концентрации гемоглобина гемиглобинцианидным способом (оптическую плотность растворов измеряют при длине волны 540 нм).
- повысить стабильность набора при хранении путем обеспечения срока годности реагента-комплексообразователя до 2-х лет, а калибратора до 12 месяцев;
- повысить функциональность и универсальность набора за счет обеспечения возможности работы с ним в тех же условиях, что и для набора реагентов для определения концентрации гемоглобина гемиглобинцианидным способом (оптическую плотность растворов измеряют при длине волны 540 нм).
Предлагаемый набор реагентов прошел клинические испытания и рекомендован к серийному выпуску Комитетом по новой медицинской технике Минздрава РФ. Предлагаемый набор реагентов доступен для любой клинико-диагностической и поликлинической лаборатории и позволяет получать точные, достоверные результаты анализа, соответствующие лучшим зарубежным стандартам.
Claims (1)
- Набор реагентов для определения концентрации гемоглобина в крови, включающий реагент-комплексообразователь на основе додецилсульфата натрия и воды при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Додецилсульфат натрия - 0,03 - 0,15
Вода - Остальное
и калибратор, содержащий заданное количество гемоглобина, растворенного в додецилсульфате натрия, и воду, отличающийся тем, что реагент-комплексообразователь дополнительно содержит азид натрия в количестве 0,0003 - 0,001 мас. %, а калибратор дополнительно содержит этиленмеркуртиосалициловой кислоты натриевую соль при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Гемоглобин - 12,0 - 15,0
Додецилсульфат натрия - 0,03 - 0,15
Этиленмеркуртиосалициловой кислоты натриевая соль - 0,03 - 0,08
Вода - Остальное
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99124689A RU2159442C1 (ru) | 1999-11-23 | 1999-11-23 | Набор реагентов для определения концентрации гемоглобина в крови |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99124689A RU2159442C1 (ru) | 1999-11-23 | 1999-11-23 | Набор реагентов для определения концентрации гемоглобина в крови |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2159442C1 true RU2159442C1 (ru) | 2000-11-20 |
Family
ID=20227313
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU99124689A RU2159442C1 (ru) | 1999-11-23 | 1999-11-23 | Набор реагентов для определения концентрации гемоглобина в крови |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2159442C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10210243A1 (de) * | 2002-03-08 | 2003-10-02 | Mueller Geraetebau Gmbh Dr | Reaktionslösung zur gleichzeitigen Bestimmung des Glukose- und Hämoglobingehalts |
-
1999
- 1999-11-23 RU RU99124689A patent/RU2159442C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Лабораторные методы исследования в клинике. Справочник под ред.Меньшикова В.В. - М.: Медицина, 1986, с.107-109. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10210243A1 (de) * | 2002-03-08 | 2003-10-02 | Mueller Geraetebau Gmbh Dr | Reaktionslösung zur gleichzeitigen Bestimmung des Glukose- und Hämoglobingehalts |
| DE10210243B4 (de) * | 2002-03-08 | 2004-03-11 | Dr. Müller Gerätebau GmbH | Verwendung einer Reaktionslösung zur gleichzeitigen Bestimmung des Glukose- und Hämoglobingehalts |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Robertson et al. | Calcium measurements in serum and plasma—total and ionized | |
| Iwata et al. | New micro-turbidimetric method for determination of protein in cerebrospinal fluid and urine. | |
| Macart et al. | An improvement of the Coomassie Blue dye binding method allowing an equal sensitivity to various proteins: application to cerebrospinal fluid | |
| CA2183558C (en) | Cyanide-free reagent and method for the determination of hemoglobin | |
| Moore et al. | A micromodification of the Drabkin hemoglobin assay for measuring plasma hemoglobin in the range of 5 to 2000 mg/dl | |
| CN101271072B (zh) | 一种四苯硼钠比浊法测定土壤中钾的方法及其掩蔽剂 | |
| ES2377232T3 (es) | Análisis fluorescente | |
| CN107870170B (zh) | 一种酶化学发光法测定糖化血清白蛋白的试剂盒 | |
| JP5389906B2 (ja) | ヘモグロビンベースのビリルビン参照材料 | |
| EP0097472B1 (en) | Method of determining calcium in a fluid sample | |
| US4393142A (en) | Assay method and reagent for the determination of chloride | |
| RU2159442C1 (ru) | Набор реагентов для определения концентрации гемоглобина в крови | |
| US4529708A (en) | Assay for the determination of creatinine | |
| US3558278A (en) | Determination of albumin | |
| JPH06103309B2 (ja) | 血中のヘモグロビン測定のための試薬および方法 | |
| Andreasen et al. | Effects of hemolysis on serum chemistry analytes in ratites | |
| Schlebusch et al. | Comparison of five routine methods with the candidate reference method for the determination of bilirubin in neonatal serum | |
| JP3220378B2 (ja) | 総蛋白質の定量方法および定量用試薬 | |
| US4454230A (en) | Assay method and reagent composition for the determination of magnesium | |
| JPH02122267A (ja) | ヘモグロビン定量試薬キット及びそれを用いるヘモグロビン定量方法 | |
| Itano et al. | The molar extinction coefficient of cyanmethemoglobin as determined by carbon analysis | |
| JP2001099826A (ja) | 錯体の発色方法および発色用試薬 | |
| Weissman et al. | Evaluation of the Corning 940 calcium titrator for use with serum and urine | |
| GB1586582A (en) | Quaternary ammonium solutions for use in blood serum analyses | |
| SU1314254A1 (ru) | Способ определени винной кислоты в образцах технических продуктов |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20071124 |