CN106442352A - 一种抗干扰能力强的血清总蛋白检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种血清总蛋白检测试剂，在双缩脲测定法的基础上改善，使用氢氧化钾取代了氢氧化钠，消除了右旋糖酐对检测结果的干扰；使用聚氧乙烯月桂醚和吐温‑20两种非离子表面活性剂，增强了试剂的溶解性，更有利于反应进行。该试剂具有很好的准确度、重复性及良好的检测范围，有利于试剂在临床上推广应用。

Description

一种抗干扰能力强的血清总蛋白检测试剂盒
技术领域
本发明涉及血清总蛋白检测技术领域，特别涉及一种抗干扰能力强血清总蛋白检测试剂。
背景技术
血清总蛋白(TP)是血清中除水分外含量最多的一类大分子化合物，是血清中所含各种蛋白质的总称，TP中含有多种具有特殊功能的蛋白质，如酶、免疫球蛋白、干扰素、生长激素等。血清总蛋白可分为清蛋白（白蛋白）和球蛋白两大类。正常人白蛋白为38~48g/L，球蛋白为15~30g/L。血浆蛋白质具有维持血管内正常胶体渗透压和酸碱度、运输多种代谢物、调节被运输物质生理作用等多种功能，并与机体免疫功能有密切关系。慢性肾上腺皮质功能减退、多发性骨髓瘤患者等，血清总蛋白含量会出现增高现象；严重结核病、甲状腺功能亢进、恶性肿瘤、肾病综合征等可引起血清总蛋白含量降低。
目前临床上常用的尿总蛋白检测方法有BCA法、染料结合法、免疫比浊法和双缩脲法。BCA法灵敏度、准确度和重复性良好，受脂浊、溶血、胆红素干扰小，但显色慢，不适合与全自动生化分析仪配套使用；染料结合法使用简便、快速、重复性好，与双缩脲法具有良好的相关性，但易受脂血症、溶血和高胆红素血症的影响；免疫比浊法检测特异性强、准确度高、重复性好，受脂浊、溶血干扰小，适合与全自动生化分析仪配套使用，但抗体价格昂贵，国内并没有广泛采用；双缩脲法操作简便、准确度高、重复性好，试剂易得，价格低廉，为WHO和IFCC的推荐方法，但易受脂浊、溶血、右旋糖酐的干扰，高浓度的钙和镁离子也会对检测结果产生影响。
鉴于此，本发明在双缩脲法的基础上，优化反应体系，添加多种抗干扰物质和稳定剂，显著改善了试剂的抗干扰能力。
发明内容
针对于血清总蛋白检测，本发明提供了一种抗干扰能力强的血清总蛋白检测试剂盒，该试剂盒与常规试剂盒相比，抗干扰能力强，操作简单，具有很好的准确度、重复性及良好的检测范围，有利于试剂在临床上推广应用。
基本原理：
以双缩脲法为测定原理，当样本与试剂混合后，样本中的蛋白质分子的肽键(-CONH-)与碱性铜溶液作用，形成紫色复合物，使溶液产生浊度，在548nm波长下检测，该浊度的高低与样品中蛋白质含量成正比，通过与同样处理的校准液比较，计算未知样本中纤维结合蛋白的含量。
本发明是通过以下步骤得到的：
一种血清总蛋白检测试剂，包括试剂R。
试剂R组成：
五水硫酸铜 3g/L
碘化钾 5g/L
酒石酸钾钠 18g/L
氢氧化钾 8.0g/L
吐温-20 0.8%
聚氧乙烯月桂醚 5g/L
EDTA·Na2 6.7g/L
尿素 4.6g/L
曲拉通x-100 0.1%
所述试剂R在使用时的用量为R= 300μL。
本发明的有益效果是：
1.本发明使用尿素和曲拉通x-100作为脂溶剂，使试剂克服脂浊样本的干扰；
2.本发明使用了EDTA·Na2作为螯合剂，去除钙离子和镁离子干扰；
3.本发明使用氢氧化钾取代了氢氧化钠，消除了右旋糖酐对检测结果的干扰；
4.本发明使用了聚氧乙烯月桂醚和吐温-20两种非离子表面活性剂，增强了试剂的溶解性，更有利于反应进行。
附图说明
图1实施例1试剂与对照组的相关性曲线图；
图2实施例1试剂与对照组开瓶稳定性比较；
图3 实施例1试剂检测操作方法；
图4 实施例1试剂与对照组试剂抗干扰性能实验检测结果；
图5 实施例1试剂与对照组相关性实验检测结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明：
实施例1
试剂R组成：
五水硫酸铜 3g/L
碘化钾 5g/L
酒石酸钾钠 18g/L
氢氧化钾 8.0g/L
吐温-20 0.8%
聚氧乙烯月桂醚 5g/L
EDTA·Na2 6.7g/L
尿素 4.6g/L
曲拉通x-100 0.1%
实施例1试剂的使用方法：
本实施例描述的血清总蛋白检测试剂，在使用时采用全自动生化分析仪，如日立7180全自动分析仪等，利用一点终点法进行测定。将样本和试剂R的比例设定为6：300，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本，操作如图3。
尿总蛋白的含量（g/L）＝（∆A测定÷∆A标准）×C标准。
实施例2
干扰性试验：取新鲜混合尿液，分成2等份，然后将每等份再分成5等份，根据图4的浓度要求加入不同的干扰物质，然后分别用实施例1所得试剂，与市场常见并认可的尿总蛋白试剂同时对比测定尿总蛋白的含量,对照组测定结果与加入不同干扰物质后各组的测定结果见图4。相对偏差(%)=(干扰样本的测定均值－对照样本的测定均值)/对照样本的测定均值×100%。
由图4可以看出，实施例1试剂在葡聚糖≤100g/L、胆红素≤100mg/L、钙离子≤4mmol/L、镁离子≤5mmol/L、甘油三酯≤22.6mmol/L对测试结果没有明显干扰。与对照试剂检测结果一致，说明实施例1的试剂在准确度上达标，并且抗干扰能力明显提高。
实施例3
相关性实验：利用实施例1配方配制试剂，与市场常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的血清总蛋白试剂盒进行对照检测，同时检测了20个临床血清样本，检测结果如图5所示。并获得了两种试剂的相关性曲线（如图1所示），通过检测结果显示，两个试剂盒的相关系数为0.999，说明了两者有极大的相关性。
试验所用校准品和质控品分别为：
RANDOX938校准品：血清总蛋白的含量为63.0g/L；
RANDOX1005质控品：血清总蛋白的靶值为59.3g/L，靶值范围：47.5-71.1g/L。
实施例4
试剂稳定性验证试验的具体操作方法：
将本发明实施例1~3中所得检测试剂作为试验组，取一种市售血清总蛋白检测试剂盒作为对照组，试验组与对照组试剂每组各自取相同的两份，一份做15天开瓶稳定性试验，将试剂开瓶放置在仪器的2-8℃冷藏箱中（15天不取出），作为15天开瓶稳定性检测；另一份做37℃热稳定性检测试验，封闭放置在37℃恒温水浴锅中（每天仅在检测的时候取出，检测完毕后，依然封口放回37℃水浴锅中，连续7天），作为7天37℃热稳定性验证。将试剂同时在日立7180全自动生化分析仪器上，按照如下图3方法进行检测，并在仪器上建立标准曲线。取冻干粉质控品，溶解均匀后，平均分成15份，-20℃储存，每天质控一个，并且跟踪检测结果，其开瓶跟踪监测趋势如图2。

Claims (6)

1.一种抗干扰能力强的血清总蛋白检测试剂盒，其特征在于由单试剂R组成，试剂R包含3g/L的五水硫酸铜、5g/L的碘化钾、18g/L的酒石酸钾钠、8.0g/L的氢氧化钾、0.8%的吐温-20、5g/L的聚氧乙烯月桂醚、6.7g/L的EDTA·Na2、4.6g/L的尿素、0.1%的曲拉通x-100。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于试剂R的使用量为R= 300μL。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于使用尿素和曲拉通x-100作为脂溶剂，使试剂克服脂浊样本的干扰。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于使用EDTA·Na2作为螯合剂，去除钙离子和镁离子干扰。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于使用氢氧化钾取代氢氧化钠，消除了右旋糖酐对检测结果的干扰。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于使用聚氧乙烯月桂醚和吐温-20两种非离子表面活性剂，增强了试剂的溶解性，更有利于反应进行。
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