CN108445225A

CN108445225A - 一种准确度高的免疫比浊法纤维结合蛋白检测试剂

Info

Publication number: CN108445225A
Application number: CN201810164810.9A
Authority: CN
Inventors: 罗维晓; 胡晓飞; 王美丽
Original assignee: Ji'nan Bai Qi Biological Technology Co Ltd
Current assignee: Ji'nan Bai Qi Biological Technology Co Ltd
Priority date: 2018-02-27
Filing date: 2018-02-27
Publication date: 2018-08-24

Abstract

本发明涉及一种准确度高的免疫比浊法纤维结合蛋白检测试剂，属于临床体外检测技术领域。本发明的试剂为单试剂，试剂中主要包含缓冲液、聚乙二醇‑6000、掩蔽剂、离子平衡剂、防腐剂、蛋白稳定剂、表面活性剂、羊抗人纤维结合蛋白抗体等主要成分，本发明检测血液中纤维结合蛋白含量准确度高，并且试剂组成成分简单，能够很好的结合全自动生化分析仪器实现快速检测，非常有利于临床的应用和推广。

Description

一种准确度高的免疫比浊法纤维结合蛋白检测试剂

技术领域

本发明涉及一种准确度高的免疫比浊法纤维结合蛋白检测试剂，属于临床体外检测技术领域。

背景技术

纤维结合蛋白（Fn）是由两个几乎相同的亚单位以二硫键连接而成的具有非免疫性调理素作用及多种生物活性的一种高分子糖蛋白。脑血管病：血浆Fn测定有助于脑血栓与脑出血的鉴别诊断，动态观察脑血管疾病患者血浆Fn含量有助于检测病情恢复和疗效。肺部疾患：肺心病患者急性期血浆Fn明显下降，恶化期极度降低，缓解期逐步恢复；重度呼吸衰竭、肺部感染和酸碱失调者血浆Fn均明显降低。肝脏病：早期肝硬化、爆发性肝衰竭和失代偿期肝硬化血浆Fn则明显降低；急性肝炎和慢性迁延性肝炎血浆Fn正常或偏低。肾脏疾病：尿毒症和严重肾功能受损患者血浆Fn显著低于慢性肾盂肾炎，也显著低于肾功能尚正常的慢性肾炎。血浆Fn降低越明显，尿素氮和肌酐增高越显著，愈后越差。原发性血小板减少性紫癜：Fn增加而血小板不增加者出血也明显减轻，说明Fn在止血过程中起重要作用。

目前检测血纤维结合蛋白的方法主要为免疫法，其中包括单向免疫扩散法、免疫火箭电泳法、ELISA法、免疫比浊法等，其中单向免疫扩散法和免疫火箭电泳法操作相对较繁琐，在临床中应用不方便，随着酶免仪和全自动生化分析仪器的推广，ELISA法和免疫比浊法在临床中应用较多，而免疫比浊法相对与ELISA法在价格上又有非常大的优势，因此在普通的医院中免疫法更容易推广，但是由于免疫比浊法本身存在特异性差等问题，容易造成检测结果的不准确，因此发明一种准确度高的免疫比浊法纤维结合蛋白检测试剂有很大的意义，因此本人发明了一种准确度高的免疫比浊法Fn检测试剂。

免疫比浊法检测血FN的检测原理为：当样本与试剂混合后，样本中的Fn与羊抗人Fn抗体发生特异性结合，形成不溶性的抗原-抗体复合物，使溶液产生浊度，在340nm波长下检测，该浊度的高低在一定量抗体存在时与抗原的含量成正比。通过与同样处理的校准液比较，计算未知样本中Fn的含量。

发明内容

本发明涉及一种准确度高的免疫比浊法纤维结合蛋白检测试剂，所述试剂为单试剂，组成成分如下：

试剂（R）：

缓冲液 50mmol/L

聚乙二醇-6000 40g/L

掩蔽剂 10mmol/L-20mmol/L

离子平衡剂 9g/L-15g/L

防腐剂 0.5ml/L-1ml/L

蛋白稳定剂AEP-HBC 3g/L-5 g/L

表面活性剂1 0.3g/L-0.5g/L

表面活性剂2 3ml/L-5ml/L

羊抗人纤维结合蛋白抗体 5ml/L -10 ml/L 。

一种准确度高的免疫比浊法纤维结合蛋白检测试剂，所述试剂R中缓冲液为25℃，pH为7.4的50mmol/L的磷酸盐缓冲液。

一种准确度高的免疫比浊法纤维结合蛋白检测试剂，所述试剂R中防腐剂为PC-300。

一种准确度高的免疫比浊法纤维结合蛋白检测试剂，所述试剂R中所述掩蔽剂为硫酸羟胺。

一种准确度高的免疫比浊法纤维结合蛋白检测试剂，所述试剂R离子平衡剂为氯化钠。

一种准确度高的免疫比浊法纤维结合蛋白检测试剂，所述试剂R中所述蛋白稳定剂为蛋白稳定剂AEP-HBC（上海西宝）。

一种准确度高的免疫比浊法纤维结合蛋白检测试剂，所述试剂R中表面活性剂1为聚氧乙烯月桂醚（Brij-35）。

一种准确度高的免疫比浊法纤维结合蛋白检测试剂，所述试剂R中表面活性剂2为吐温-80。

一种准确度高的免疫比浊法纤维结合蛋白检测试剂，所述的纤维结合蛋白检测试剂来检测纤维结合蛋白的检测方法，使用全自动生化分析仪利用一点终点法进行测定，检测主波长为340nm。

本发明的有益效果：

1）本发明在试剂中优先选择了硫酸羟胺作为掩蔽剂，能有效掩蔽其他其蛋白对反应的干扰，从而提高试剂反应的特异性和准确性；

2）采用PC-300作为防腐剂，能有效的防止菌类生长、阻止试剂腐败，并且不会对试剂中抗原抗体的结合产生抑制作用；

3）在试剂中加入了蛋白稳定剂AEP-HBC，能较好的保护羊抗人纤维结合蛋白抗体，从而保证抗体效价的稳定；

4）为了提高抗体效价，在试剂中加入了聚氧乙烯月桂醚（Brij-35）和吐温-80两种表面活性剂。

附图说明

图1 实施例1试剂与对照组试剂的相关性图；

图2 实施例2试剂与对照组试剂的相关性图；

图3 实施例1试剂检测方法；

图4 实施例2试剂检测方法；

图5 实施例1、2试剂与对照组试剂对比检测结果。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明：

实施例1

本实施例描述的一种准确度高的Fn检测试剂的试剂组成成分如下：

试剂R:

磷酸盐缓冲液 50mmol/L

聚乙二醇-6000 40g/L

硫酸羟胺 10mmol/L

氯化钠 9g/L

PC-300 0.5ml/L

蛋白稳定剂AEP-HBC 3g/L

聚氧乙烯月桂醚 0.3g/L

吐温-80 1ml/L

羊抗人纤维结合蛋白抗体 5ml/L。

2）本实施例试剂的使用方法：

本实施例描述的Fn检测试剂，在使用时配合全自动生化分析仪，如日立7180全自动分析仪等，利用一点终点法进行测定，使用多点定标的方式建立标准曲线，将试剂R放置到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本，操作如图3。

实施例2

本实施例描述的一种关键原材料增加后的FN检测试剂的试剂组成成分：

磷酸盐缓冲液 50mmol/L

聚乙二醇-6000 40g/L

硫酸羟胺 20mmol/L

氯化钠 15g/L

PC-300 1ml/L

蛋白稳定剂AEP-HBC 5g/L

聚氧乙烯月桂醚 05g/L

吐温-80 5ml/L

羊抗人纤维结合蛋白抗体 10ml/L。

2）本实施例试剂的使用方法：

本实施例描述的Fn检测试剂，在使用时配合全自动生化分析仪，如日立7180全自动分析仪等，利用一点终点法进行测定，使用多点定标的方式建立标准曲线，将试剂R放置到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本，操作如图4。

实施例3

本施例描述的本发明的免疫比浊法检测血纤维结合蛋白与ELISA方法检测血纤维结合蛋白的比对

相关性实验：利用实施例1、2中的配制试剂作为实验组，选取市场上获得认可的一种ELISA法检测血清纤维结合蛋白的试剂作为对照组，进行对比试验，同时检测20个临床血清样本，检测结果如图5所示。并获得了两种试剂的相关性曲线（如图1和图2所示），通过检测结果显示，实施例1、2试剂与对照组试剂检测结果的相关性分别为0.9983和0.9990，说明具有极大的相关性。

Claims

1.一种准确度高的免疫比浊法纤维结合蛋白检测试剂，包含试剂R，为单试剂，组成成分如下：

试剂（R）：

缓冲液 50mmol/L

聚乙二醇-6000 40g/L

掩蔽剂 10mmol/L -20 mmol/L

离子平衡剂 9g/L -15 g/L

防腐剂 0.5ml/L-1 ml/L

蛋白稳定剂 3g/L-5 g/L

表面活性剂1 0.3g/L-0.5 g/L

表面活性剂2 3ml/L-5 ml/L

羊抗人纤维结合蛋白抗体 5ml/L -10 ml/L。

2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于试剂R中所述缓冲液为25℃、PH=7.4、浓度为50mmol/L的磷酸盐缓冲液缓冲液。

3.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于试剂R中所述掩蔽剂为硫酸羟胺。

4.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于试剂R中所述离子平衡剂为氯化钠。

5.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于试剂R中所述防腐剂为PC-300。

6.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于试剂R中所述蛋白稳定剂为AEP-HBC。

7.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于试剂R中所述表面活性剂1和表面活性剂2分别为聚氧乙烯月桂醚和吐温-80。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的检测试剂，其特征在于使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为340nm。