CN106290916A - 一种检测尿纤维连接蛋白浓度水平的试剂盒及方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种检测尿纤维连接蛋白（又称纤维结合蛋白FN）浓度水平的试剂盒，包括：磷酸氢二钠‑柠檬酸缓冲液、PEG800、抗人纤维连接蛋白抗体或包被于载体的抗人纤维连接蛋白抗体，PEG800的质量百分比浓度为10‑200g/L；抗人纤维连接蛋白抗体或包被于载体的抗人纤维连接蛋白抗体的体积浓度为0.1‑1000ml/L；还包括维连接蛋白标准品。本发明通过待测样本与试剂成分反应，测量反应初始产物与最终产物的透射光或散射光的强度差变化，得到纤维连接蛋白的浓度。本发明操作简单，快速；结果准确、稳定；适用于自动化批量检测。

Description

一种检测尿纤维连接蛋白浓度水平的试剂盒及方法
技术领域
本发明属于生物工程领域，涉及一种试剂盒，具体来说是一种检测尿纤维连接蛋白浓度水平的试剂盒及方法。
背景技术
现有技术中，对于人体尿液及组织中纤维连接蛋白(FN)水平的检测方法主要有两种，一种是酶联免疫吸附法(ELISA)，另一种是放射免疫扩散法。ELISA法检测时间长，操作步骤复杂；放射免疫扩散法虽检测时间短，但需有放射性保护。而且两种方法中单次可检测的样本量少，故两种检测方法都不能实现快速、准确地检测批量的尿纤维连接蛋白(FN)水平，不能满足临床的需求。
发明内容
针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种检测尿纤维连接蛋白(FN)浓度水平的试剂盒及方法，所述的这种检测尿纤维连接蛋白(FN)浓度水平的试剂盒及方法要解决现有技术中的检测尿纤维连接蛋白(FN)浓度水平的方法时间长、操作步骤复杂、单次检测样本量少的技术问题。
本发明提供了一种检测尿纤维连接蛋白(FN)浓度水平的试剂盒，包括：磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、PEG800、抗人纤维连接蛋白抗体或包被于载体的抗人纤维连接蛋白抗体，所述的PEG800的质量百分比浓度为10-800g/L；所述的抗人纤维连接蛋白抗体或包被于载体的抗人纤维连接蛋白抗体的体积浓度为0.1-1000ml/L；还包括尿维连接蛋白标准品。
进一步的，所述的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液和PEG800组成试剂Ⅰ；所述的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、PEG800和抗人纤维连接蛋白抗体组成试剂Ⅱ。
进一步的，包被抗人纤维连接蛋白抗体的载体为胶乳微粒或者乳胶微粒，也可以是其它可以包被蛋白的微粒载体。
进一步的，所述抗人纤维连接蛋白抗体来源于使用人纤维连接蛋白免疫羊、免、鼠、马、驴动物产生的抗血清；或者来源于单克隆抗人纤维连接蛋白抗体或抗纤维连接蛋白中A单抗、B单抗、C单抗、D单抗中的任意一种，单抗的效价为1:1-1024。
本发明还提供了采用上述的试剂盒检测尿纤维连接蛋白(FN)浓度水平的方法，向试剂Ⅰ中加入待测样本，37℃孵育5min，测量透射光强度A1；然后加入试剂II，37℃孵育5min，测量最终产物的透射光强度A2，向试剂Ⅰ中加入标准品，37℃孵育5min，测量透射光强度B1；然后加入试剂II，37℃孵育5min，测量最终产物的透射光强度B2，
进一步的，所述的检测方法包括但不限于免疫透射比浊法，免疫散射比浊法，免疫增强透射比浊法，免疫增强散射比浊法。
本发明还提供了另外一种采用上述的试剂盒(FN单试剂)检测尿纤维连接蛋白(FN)浓度水平的方法，向所述试剂Ⅰ中加入所述试剂II，混合，然后加入待测样本，反应至终点，测量最终产物的透射或者散射光强度值A，向所述试剂Ⅰ中加入所述试剂II，混合，然后加入标准品，反应至终点，测量最终产物的透射或者散射光强度值B，
具体的，所述尿纤维连接蛋白(FN)浓度水平适用任何一种自动化分析仪可以实现检测计算功能的装置。
具体的，所述试剂Ⅰ中PEG800的质量百分比浓度为0.1-800g/L，优选为60g/L。所述试剂Ⅱ中PEG800的质量百分比浓度为0.1-800g/L，优选为60g/L。所述抗人纤维连接蛋白(FN)抗体的体积浓度为0.1-1000ml/L，优选为600ml/L。
本发明采用抗原-抗体检测原理及测量散射光、透射光的测量方法，提供一种可以快速检测尿液或组织液或组织样本中纤维连接蛋白(FN)水平、并可同时检测大量样本、操作简单的方法。
本发明的检测原理是：待测尿样本与试剂成分反应，测量反应初始产物与最终产物的透射光或散射光的强度差变化。或测量试剂空白与反应最终产物的透射光或散射光的强度变化。具体的测量过程是将A2与A1的差值除以标准品的B2与B1的差值，乘以标准品尿纤维连接蛋白(FN)的已知浓度，得到待测样本中纤维连接蛋白(FN)的浓度值。或者将A除以标准品的B，乘以标准品纤维连接蛋白(FN)的已知浓度，得到待测样本中纤维连接蛋白(FN)的浓度值。
本发明的优点：
1、本发明提供的方法检测区间广，在10-200mg/l浓度范围内的尿纤维连接蛋白(FN)水平都可以检测，具有较好的临床应用价值。
2、本发明方法检测效率高，可以在10分钟内检测出一个样本的尿纤维连接蛋白(FN)的浓度。
3、本发明方法对尿液的保存条件要求低，保存温度在-20℃的尿液样本、保存长达60天的尿液样本、反复冻融过5次以内的尿液样本都可以进行检测，且检测结果不受影响。
4、本发明提供的方法操作简单，仅对待测样本和标准品前后的吸光度进行测定和计算，就可测定人体尿液中纤维连接蛋白(FN)的水平，因此检测成本低，普适性高。本发明快速，结果准确、稳定；适用于自动化批量检测。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。需要说明的是，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1尿纤维结合蛋白(FN)双试剂检测1：
试剂Ⅰ：磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液
PEG800 60g/L。
试剂Ⅱ：磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液
PEG800 60g/L
兔抗人纤维连接蛋白(FN)抗血清600ml/L。
操作方法：向试剂Ⅰ中加入待测样本，37℃孵育5min，测量透射光强度A1；然后加入试剂II，37℃孵育5min，测量最终产物的透射光强度A2。标准品与待测样本同样操作测量分别得到B1、B2。
计算结果：
实施例II尿纤维结合蛋白(FN)双试剂(胶乳增强)检测2：
试剂I：磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液
PEG分子量800 60g/L
试剂II：磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液
PEG分子量800 60g/L
兔抗人纤维连接蛋白(FN)抗体包被交联胶乳600ml/L
操作方法及计算结果同双试剂1。
实施例III尿纤维结合蛋白(FN)单试剂检测：
试剂：磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液
PEG分子量800 60g/L，
兔抗人FN抗体600ml/L。
操作方法：
测量试剂的透射光强度A1；然后加入待测样本，37℃孵育10min，测量透射光强度A2。标准品与待测样本同样操作测量分别得到B1、B2。
计算结果：

Claims (7)

1.一种检测尿纤维连接蛋白浓度水平的试剂盒，其特征在于包括：磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、PEG800、抗人纤维连接蛋白抗体或包被于载体的抗人纤维连接蛋白抗体，所述的PEG800的质量百分比浓度为10-800g/L；所述的抗人纤维连接蛋白抗体或包被于载体的抗人纤维连接蛋白抗体的体积浓度为0.1-1000ml/L；还包括维连接蛋白标准品。
2.如权利要求1所述一种检测尿纤维连接蛋白浓度水平的试剂盒，其特征在于，所述的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液和PEG800组成试剂Ⅰ；所述的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、PEG800和抗人纤维连接蛋白抗体组成试剂Ⅱ。
3.如权利要求1所述一种检测尿纤维连接蛋白浓度水平的试剂盒，其特征在于，包被抗人纤维连接蛋白抗体的载体为胶乳微粒或者乳胶微粒，也可以是其它可以包被蛋白的微粒载体。
4.如权利要求1所述一种检测尿纤维连接蛋白浓度水平的试剂盒，其特征在于，所述抗人纤维连接蛋白抗体来源于使用人纤维连接蛋白抗原免疫羊、免、鼠、马、驴动物产生的抗血清；或者来源于单克隆抗人纤维连接蛋白抗体或抗纤维连接蛋白中A单抗、B单抗、C单抗、D单抗中的任意一种，单抗的效价为1:1-1024。
5.采用权利要求1的试剂盒检测尿纤维连接蛋白浓度水平的方法，其特征在于：向试剂Ⅰ中加入待测样本，37℃孵育5min，测量透射光强度A1；然后加入试剂II，37℃孵育5min，测量最终产物的透射光强度A2，向试剂Ⅰ中加入标准品，37℃孵育5min，测量透射光强度B1；然后加入试剂II，37℃孵育5min，测量最终产物的透射光强度B2，
6.根据权利要求5所述的检测尿纤维连接蛋白浓度水平的方法，其特征在于：所述的检测方法包括但不限于免疫透射比浊法，免疫散射比浊法，免疫增强透射比浊法，免疫增强散射比浊法。
7.采用权利要求1的试剂盒检测尿纤维连接蛋白浓度水平的方法，其特征在于：向所述试剂Ⅰ中加入所述试剂II，混合，然后加入待测样本，反应至终点，测量最终产物的透射或者散射光强度值A，向所述试剂Ⅰ中加入所述试剂II，混合，然后加入标准品，反应至终点，测量最终产物的透射或者散射光强度值B，
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