JPS6279797A - クレアチンの定量方法 - Google Patents
クレアチンの定量方法Info
- Publication number
- JPS6279797A JPS6279797A JP21801085A JP21801085A JPS6279797A JP S6279797 A JPS6279797 A JP S6279797A JP 21801085 A JP21801085 A JP 21801085A JP 21801085 A JP21801085 A JP 21801085A JP S6279797 A JPS6279797 A JP S6279797A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- creatine
- specimen
- creatinine
- ammonia
- added
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はクレアチンの定量方法に関するものである。
更に詳細には、本発明は、検体中にすでに存在するアン
モニアおよびクレアチニンをあらかじめ消費させ、クレ
アチンを正確に測定する方法に関するものである。
モニアおよびクレアチニンをあらかじめ消費させ、クレ
アチンを正確に測定する方法に関するものである。
クレアチンはグリシン、アルギニン、メチオニンの３種
のアミノ酸から主として肝で合成され。
のアミノ酸から主として肝で合成され。
血中に入り９８％は筋肉に一部は神経に分布している。
又クレアチンキナーゼの作用により高エネルギー化合物
であるクレアチンリン酸に合成されエネルギー源ともな
っている６ 原発性筋疾患、筋炎、筋・萎縮、甲状腺機能先進症など
でクレアチン尿をきたす。クレアチンは腎糸球体から濾
過されるが、尿細管で再吸収され、尿中に排泄されない
。しかし、血清クレアチンが増加するときはネガティブ
フィードバック機構が働き生合成が抑制されるため血中
増量は少く、尿中排泄量が著明に増加する。
であるクレアチンリン酸に合成されエネルギー源ともな
っている６ 原発性筋疾患、筋炎、筋・萎縮、甲状腺機能先進症など
でクレアチン尿をきたす。クレアチンは腎糸球体から濾
過されるが、尿細管で再吸収され、尿中に排泄されない
。しかし、血清クレアチンが増加するときはネガティブ
フィードバック機構が働き生合成が抑制されるため血中
増量は少く、尿中排泄量が著明に増加する。
尿中クレアチンの増加は、筋におけるクレアチン利用の
低下、筋の破壊、変性、萎縮、細胞膜の透過性の先進な
どが考えられるといわれている。
低下、筋の破壊、変性、萎縮、細胞膜の透過性の先進な
どが考えられるといわれている。
臨床検査の上で血液や尿中のクレアチンを測定すること
は疾病の診断において重要である。
は疾病の診断において重要である。
従来、生体に由来する血液、尿等の検体に存在するクレ
アチンの定量法には、検体を加熱脱水し、検体中のクレ
アチンをクレアチニンに変換後、クレアチニンをＪａｆ
ｆｉｑ法で測定し、もともと検体中に存在しているクレ
アチニンとの差でもってクレアチン量を求める方法、ま
たはクレアチン−ジアセチル−α−ナフトール反応を利
用する方法や酵素法などがあるが、現在、Ｊａｆｆ≦反
応を用いる方法が主として行なわれている。
アチンの定量法には、検体を加熱脱水し、検体中のクレ
アチンをクレアチニンに変換後、クレアチニンをＪａｆ
ｆｉｑ法で測定し、もともと検体中に存在しているクレ
アチニンとの差でもってクレアチン量を求める方法、ま
たはクレアチン−ジアセチル−α−ナフトール反応を利
用する方法や酵素法などがあるが、現在、Ｊａｆｆ≦反
応を用いる方法が主として行なわれている。
しかしながら、Ｊａｆｆｅ反応はクレアチニンに特有で
はないために、すでに検体中に存在するＪａｆｆＳ呈色
物質を、透析処理や樹脂による吸着処理をして除去しな
ければならないだけでなく、検体中のクレアチンを長時
間煮沸することによってクレアチニンに変換させねばな
らない等、操作上非常に煩雑であるという欠点もあって
好ましくない。
はないために、すでに検体中に存在するＪａｆｆＳ呈色
物質を、透析処理や樹脂による吸着処理をして除去しな
ければならないだけでなく、検体中のクレアチンを長時
間煮沸することによってクレアチニンに変換させねばな
らない等、操作上非常に煩雑であるという欠点もあって
好ましくない。
発明者らは、酵素法によるクレアチン測定法の確立を目
的に鋭意研究し、本発明を完成するに至った・ 本発明は検体にＧｌＤＨ、α−ＫＧ、 ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ
，イソクエン酸、マグネシウムイオンまたはマンガンイ
オンなどの金属イオン、クレアチニンディミナーゼおよ
びｉＣＤＨを添加混合し、検体中にすでに存在するアン
モニア及びクレアチニンを消費せしめ、次いで、ＡＴＰ
又は／及びキレート剤を添加し、ｉＣＤＨ反応を停止し
、これと同時もしくはしかる後クレアチニナーゼを添加
して、生成するアンモニアを測定することを特徴とする
クレアチンの定量方法である。
的に鋭意研究し、本発明を完成するに至った・ 本発明は検体にＧｌＤＨ、α−ＫＧ、 ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ
，イソクエン酸、マグネシウムイオンまたはマンガンイ
オンなどの金属イオン、クレアチニンディミナーゼおよ
びｉＣＤＨを添加混合し、検体中にすでに存在するアン
モニア及びクレアチニンを消費せしめ、次いで、ＡＴＰ
又は／及びキレート剤を添加し、ｉＣＤＨ反応を停止し
、これと同時もしくはしかる後クレアチニナーゼを添加
して、生成するアンモニアを測定することを特徴とする
クレアチンの定量方法である。
ここで、金属イオンとはマグネシウムイオン、マンガン
イオン、鉄イオン、銅イオン、亜鉛イオン、スズイオン
、カルシウムイオンなどを云うが、これらのイオン種に
制限されることはない。
イオン、鉄イオン、銅イオン、亜鉛イオン、スズイオン
、カルシウムイオンなどを云うが、これらのイオン種に
制限されることはない。
また、キレート剤とはＥＤＴＡおよびその塩、１，２−
ビス（０−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ、 Ｎ、 Ｎ
’。
ビス（０−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ、 Ｎ、 Ｎ
’。
Ｎ′−四酢酸およびその塩、トランス−１，２−シクロ
ヘキサンジアミン−Ｎ、 Ｎ、 Ｎ’、 Ｎ’−四酢酸
およびその塩、ジヒドロキシエチルグリシンおよびその
塩、１．３−ジアミノプロパノ−ルーＮ、 Ｎ、 Ｎ’
、 Ｎ’−四酢酸およびその塩、ジエチレントリアミン
五酢酸およびその塩、エチレンジアミンジオルトヒドロ
キシフェニル酢酸およびその塩、エチレンジアミン二酢
酸およびその塩、エチレンジアミンニプロピオン酸およ
びその塩、ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸お
よびその塩、エチレンアミンテトラキス（メチレンホス
ホン酸）およびその塩、グリコールエーテルジアミン四
酢酸およびその塩、ヒトロキシエチルイミノニ酢酸およ
びその塩、イミノニ酢酸およびその塩、ジアミノプロパ
ン四酢酸およびその塩、ニトリロ三酢酸およびその塩、
二１−リロ三プロピオン酸およびその塩、ニトリロトリ
ス（メチレンホスホン酸）およびその塩、トリエチレン
テトラミン六酢酸およびその塩などを云うが、これらの
キレート剤に制限されることはない。
ヘキサンジアミン−Ｎ、 Ｎ、 Ｎ’、 Ｎ’−四酢酸
およびその塩、ジヒドロキシエチルグリシンおよびその
塩、１．３−ジアミノプロパノ−ルーＮ、 Ｎ、 Ｎ’
、 Ｎ’−四酢酸およびその塩、ジエチレントリアミン
五酢酸およびその塩、エチレンジアミンジオルトヒドロ
キシフェニル酢酸およびその塩、エチレンジアミン二酢
酸およびその塩、エチレンジアミンニプロピオン酸およ
びその塩、ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸お
よびその塩、エチレンアミンテトラキス（メチレンホス
ホン酸）およびその塩、グリコールエーテルジアミン四
酢酸およびその塩、ヒトロキシエチルイミノニ酢酸およ
びその塩、イミノニ酢酸およびその塩、ジアミノプロパ
ン四酢酸およびその塩、ニトリロ三酢酸およびその塩、
二１−リロ三プロピオン酸およびその塩、ニトリロトリ
ス（メチレンホスホン酸）およびその塩、トリエチレン
テトラミン六酢酸およびその塩などを云うが、これらの
キレート剤に制限されることはない。
本発明はＡＴＰ又は／及びキレート剤の添加によって上
記式（１）→式（ＩＩ）への変化を行わせるものである
。即ち、検体中のアンモニア及びクレアチニンの完全消
費を式（１）で行わせ、完全消費ののち反応系にＡＴＰ
又は／及びキレート剤を添加し。
記式（１）→式（ＩＩ）への変化を行わせるものである
。即ち、検体中のアンモニア及びクレアチニンの完全消
費を式（１）で行わせ、完全消費ののち反応系にＡＴＰ
又は／及びキレート剤を添加し。
ＮＡＤ （Ｐ）π＾ＮＡＤ （Ｐ）Ｈの反応を停止させ
るものである。
るものである。
ｉＣＤＨの反応を停止させた後は、ＡＴＰ又は／及びキ
レート剤の添加と同時もしくはその後で検体中にクレア
チニナーゼを添加し、クレアチニンを経てアンモニアか
らグルタミン酸への共役反応としてＮＡＤ（Ｐ）Ｈ−＋
ＮＡＤ（Ｐ）＋の反応にともなう３４０ｎｍ吸光度の減
少によってクレアチンを定量するものである。
レート剤の添加と同時もしくはその後で検体中にクレア
チニナーゼを添加し、クレアチニンを経てアンモニアか
らグルタミン酸への共役反応としてＮＡＤ（Ｐ）Ｈ−＋
ＮＡＤ（Ｐ）＋の反応にともなう３４０ｎｍ吸光度の減
少によってクレアチンを定量するものである。
反応としては次の式（ｍ）が示される。
本発明においては、検体中のクレアチンを分解し、ＮＡ
Ｄ （Ｐ）Ｈ−＋ ＮＡＤ （Ｐ）“の反応によってＮ
ＡＤ （Ｐ）Ｈを消費して正確な被検物の定量を行うも
のである。
Ｄ （Ｐ）Ｈ−＋ ＮＡＤ （Ｐ）“の反応によってＮ
ＡＤ （Ｐ）Ｈを消費して正確な被検物の定量を行うも
のである。
本発明において用いる、ＡＴＰ又は／及びキレート剤に
よるｉＣＤＨ反応の停止は、反応を停止したそのままの
媒質でＮＡＤ （Ｐ）Ｈ−＋ ＮＡＤ （Ｐ）＋の反応
を用い各種反応が行える点できわめて有用である。
よるｉＣＤＨ反応の停止は、反応を停止したそのままの
媒質でＮＡＤ （Ｐ）Ｈ−＋ ＮＡＤ （Ｐ）＋の反応
を用い各種反応が行える点できわめて有用である。
反応系に対するＡＴＰの添加量は１５ｍＭ以上であれば
よい。
よい。
また、反応系に対するキレート剤、例えばＥＤＴＡの添
加量は１ｍＭ以上あればよい。
加量は１ｍＭ以上あればよい。
次に、本発明の実施例を示す。
実施例１
α−ＫＧ １０ ｍＭＮＡＤＨ
０，１６ｍＭ イソクエン酸 ５ ｍＭＡＤＰ
０．５ ｍＭＭｇＣＱ２０．５ ｍ
Ｍ ＧｆｌＤＨ５０ｕ／ｍｆｌ ｉＣＤＨ２ｕ／ｍＱ クレアチニンディミナーゼ ５ ｕ／ｍｆ１以上を含
有する０、１Ｍ）−リエタノールアミン塩酸（ｐＨ７，
５） ２．４ｍＱニ’） Ｌ／ ７チニ’／ （１００
ｎ＋ｇ／ ｄＱ） ８１００ｍＭアンモニアを含む様々
な濃度に調整したクレアチン含有検体（０〜２０ｍｇ／
ｄＱ） ３０μＱ添加した。それぞれ３７℃で５分間保
温したのちＡＴＰ、クレアチニナーゼ濃度がそれぞれ２
０鱈、ｌｕ／ｍｕになるようにＡＴＰ、クレアチニナー
ゼ混液を０．６ｍＭ加え分光光度計により３７℃での３
４０ｎｍの１分間における吸収の減少から検体中のクレ
アチンを測定した。その測定結果を下に示す。
０，１６ｍＭ イソクエン酸 ５ ｍＭＡＤＰ
０．５ ｍＭＭｇＣＱ２０．５ ｍ
Ｍ ＧｆｌＤＨ５０ｕ／ｍｆｌ ｉＣＤＨ２ｕ／ｍＱ クレアチニンディミナーゼ ５ ｕ／ｍｆ１以上を含
有する０、１Ｍ）−リエタノールアミン塩酸（ｐＨ７，
５） ２．４ｍＱニ’） Ｌ／ ７チニ’／ （１００
ｎ＋ｇ／ ｄＱ） ８１００ｍＭアンモニアを含む様々
な濃度に調整したクレアチン含有検体（０〜２０ｍｇ／
ｄＱ） ３０μＱ添加した。それぞれ３７℃で５分間保
温したのちＡＴＰ、クレアチニナーゼ濃度がそれぞれ２
０鱈、ｌｕ／ｍｕになるようにＡＴＰ、クレアチニナー
ゼ混液を０．６ｍＭ加え分光光度計により３７℃での３
４０ｎｍの１分間における吸収の減少から検体中のクレ
アチンを測定した。その測定結果を下に示す。
検体番号 １２ ３ ４ ５ ６７９１０１
１実施例２ α−ＫＧ １０ ｍＭＮＡＤＨ
０，２ｍＭ インクエン酸 ５ ｍＭＡＤＰ
０．５ ｍＭＭｇＣｆｌｚ
０．５ ｍＭ（ＪＤＩ（５０ｕ／ｍＱ ｉＣＤＨ２ｕ／ｎ＋Ｑ クレアチニンディミナーゼ ５ ｕ／ｍＡ以上を含有
する０、１Ｍトリエタノールアミン塩酸（ｐ）ｌ ７．
５） ２．４＋ｎＱにクレアチニン１００ｍｇ／ｄＱと
１００ｍＭアンモニアを含む様々な濃度に調整したクレ
アチン含有検体（Ｏ〜２０ｍｇ／ｄｆｌ） ３０μＱ添
加した。それぞれ３７℃で５分間保温したのちＥＤＴＡ
、クレアチニナーゼ濃度がそれぞれ５ｍＭ、 ｌｕ／ｍ
ＱになるようにＥＤＴＡ、クレアチニナーゼ混液を０．
６ｎｂＱ加え分光光度計により３７℃での３４０ｎｍの
１分間における吸収の減少から検体中のクレアチンを測
定した。その測定結果を下に示す。
１実施例２ α−ＫＧ １０ ｍＭＮＡＤＨ
０，２ｍＭ インクエン酸 ５ ｍＭＡＤＰ
０．５ ｍＭＭｇＣｆｌｚ
０．５ ｍＭ（ＪＤＩ（５０ｕ／ｍＱ ｉＣＤＨ２ｕ／ｎ＋Ｑ クレアチニンディミナーゼ ５ ｕ／ｍＡ以上を含有
する０、１Ｍトリエタノールアミン塩酸（ｐ）ｌ ７．
５） ２．４＋ｎＱにクレアチニン１００ｍｇ／ｄＱと
１００ｍＭアンモニアを含む様々な濃度に調整したクレ
アチン含有検体（Ｏ〜２０ｍｇ／ｄｆｌ） ３０μＱ添
加した。それぞれ３７℃で５分間保温したのちＥＤＴＡ
、クレアチニナーゼ濃度がそれぞれ５ｍＭ、 ｌｕ／ｍ
ＱになるようにＥＤＴＡ、クレアチニナーゼ混液を０．
６ｎｂＱ加え分光光度計により３７℃での３４０ｎｍの
１分間における吸収の減少から検体中のクレアチンを測
定した。その測定結果を下に示す。
検体番号 １ ２ ３ ４ ５ ６７９１
０１１実施例３ α−ＫＧ １０ ｍＭＮＡＤＰ
ＨＯ，２ｍＭ インクエン酸 １０ ｍＭＭｇＣＩ２．
０．５ ｍＭ（ＪＤ）Ｉ
２０ ｕ／ｍｎ１ＣＤ）Ｉ
２ ｕ／＋＋＋Ｑクレアチニンデ
ィミナーゼ ５ ｕ／ｍＱ以上を含有する０、１Ｍ
トリエタノールアミン塩酸（ｐＨ７，５） ２．４ｍＭ
にクレアチニンｌｏｏｍｇ／ｄＱと１００ｍＭアンモニ
アを含む様々な濃度に調整したクレアチン含有検体（０
〜１００ｍｇ／ ｄＱ） ３０μＱ添加した。それぞれ
３７°Ｃで５分間保温した後、ＥＤＴＡ、クレアチニナ
ーゼ濃度がそれぞれ５ｍＭ、 ０．５ｕ／ｍＱになるよ
うにＥＤＴＡ、クレアチニナーゼ混液を０．６＋ｎＱ加
え分光光度計により３７°Ｃでの３４０ｎｍの１分間に
おける吸収の減少から検体中のクレアチンを測定した。
０１１実施例３ α−ＫＧ １０ ｍＭＮＡＤＰ
ＨＯ，２ｍＭ インクエン酸 １０ ｍＭＭｇＣＩ２．
０．５ ｍＭ（ＪＤ）Ｉ
２０ ｕ／ｍｎ１ＣＤ）Ｉ
２ ｕ／＋＋＋Ｑクレアチニンデ
ィミナーゼ ５ ｕ／ｍＱ以上を含有する０、１Ｍ
トリエタノールアミン塩酸（ｐＨ７，５） ２．４ｍＭ
にクレアチニンｌｏｏｍｇ／ｄＱと１００ｍＭアンモニ
アを含む様々な濃度に調整したクレアチン含有検体（０
〜１００ｍｇ／ ｄＱ） ３０μＱ添加した。それぞれ
３７°Ｃで５分間保温した後、ＥＤＴＡ、クレアチニナ
ーゼ濃度がそれぞれ５ｍＭ、 ０．５ｕ／ｍＱになるよ
うにＥＤＴＡ、クレアチニナーゼ混液を０．６＋ｎＱ加
え分光光度計により３７°Ｃでの３４０ｎｍの１分間に
おける吸収の減少から検体中のクレアチンを測定した。
その測定結果を下に示す。
検体番号 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７
９ １０ １１検体中に存在している高濃度のアン
モニアやクレアチニンの影響を全くうけず被検液中のク
レアチンの定量が可能となった。
９ １０ １１検体中に存在している高濃度のアン
モニアやクレアチニンの影響を全くうけず被検液中のク
レアチンの定量が可能となった。
Claims (1)
- （１）検体にＧｌＤＨ、α−ＫＧ、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ、イ
ソクエン酸、マグネシウムイオンまたはマンガンイオン
などの金属イオン、クレアチニンディミナーゼおよびｉ
ＣＤＨを添加混合し、検体中にすでに存在するアンモニ
ア及びクレアチニンを消費せしめ、次いで、ＡＴＰ又は
／及びキレート剤を添加し、ｉＣＤＨ反応を停止し、こ
れと同時もしくはしかる後クレアチニナーゼを添加して
、生成するアンモニアを測定することを特徴とするクレ
アチンの定量方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21801085A JPS6279797A (ja) | 1985-10-02 | 1985-10-02 | クレアチンの定量方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21801085A JPS6279797A (ja) | 1985-10-02 | 1985-10-02 | クレアチンの定量方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6279797A true JPS6279797A (ja) | 1987-04-13 |
| JPH0588120B2 JPH0588120B2 (ja) | 1993-12-21 |
Family
ID=16713210
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21801085A Granted JPS6279797A (ja) | 1985-10-02 | 1985-10-02 | クレアチンの定量方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6279797A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5874078A (en) * | 1994-02-16 | 1999-02-23 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Reagent composition of glutamate dehydrogenase from pseudomonas |
-
1985
- 1985-10-02 JP JP21801085A patent/JPS6279797A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5874078A (en) * | 1994-02-16 | 1999-02-23 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Reagent composition of glutamate dehydrogenase from pseudomonas |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0588120B2 (ja) | 1993-12-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ishihara et al. | Enzymatic determination of ammonia in blood plasma | |
| JPH04278099A (ja) | アンモニア、α−アミノ酸類またはα−ケト酸の高感度定量法および高感度定量用組成物 | |
| EP0199363B1 (en) | Method of terminating isocitrate dehydrogenase reaction | |
| JPS6279797A (ja) | クレアチンの定量方法 | |
| JPS61247963A (ja) | アンモニアを反応生成物とする生体物質の定量方法 | |
| EP0207493B1 (en) | Method of terminating isocitrate dehydrogenase reaction | |
| CN106811505B (zh) | 一种稳定性强的单试剂液态血氨（amm）检测试剂 | |
| Okamura | A specific method for determination of total ascorbic acids in urine by the α, α-dipyridyl method | |
| US5258286A (en) | Method of terminating isocitrate dehydrogenase reaction | |
| JPH02255098A (ja) | グアニジノ酢酸の定量法 | |
| JPS6234061A (ja) | クレアチニンの定量方法 | |
| JP2000253898A (ja) | 物質または酵素の定量方法および定量試薬 | |
| JPS5931696A (ja) | クレアチニンの定量方法 | |
| JPS61247968A (ja) | ピルビン酸を反応生成物とする生体物質の定量方法 | |
| JP3674015B2 (ja) | 尿素窒素の測定方法およびその測定用キット | |
| US5108905A (en) | Method of assaying magnesium in human body fluid | |
| JPS626700A (ja) | アンモニアを反応生成物とする生体物質の定量法 | |
| JP3598438B2 (ja) | エタノールアミン類緩衝液の安定化方法 | |
| CN104374906B (zh) | 一种血清氨检测试剂 | |
| JPH05219992A (ja) | カルシウムの定量方法 | |
| JPS5931698A (ja) | クレアチニンの定量法 | |
| JPS6234060A (ja) | 尿素の定量方法 | |
| JPH0365160B2 (ja) | ||
| CN115896085A (zh) | 一种稳定性高、抗干扰力强的同型半胱氨酸水解酶添加剂 | |
| JPH06102040B2 (ja) | ドリグリセライドの定量方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |